Name: Donör karaciğerleri Ex Situ Normotermik Makinesi Perfüzyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 13 s
Description: Öğrenin, donör karaciğerlerde oksijenli normotermik makine perfüzyonu protokolünü uygulamayı. Bu yöntem, iskemi ve soğuk hasarını azaltarak greft canlılığını değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma çalışması, tamamı Hollanda'da bulunan Innovatief Actieprogramma Groningen (IAG-3), Jan Kornelis de Cock Stichting ve Tekke Huizingafonds tarafından sağlanan hibelerle finansal olarak desteklenmiştir. Potansiyel olarak atılan karaciğerleri belirledikleri ve bilgilendirilmiş onam aldıkları için tüm Hollandalı organ nakli koordinatörlerine minnettarız.

Bu protokol, Hollanda'daki Groningen Üniversite Tıp Merkezi'nin Tıbbi Etik Kurulu (Medisch Ethische Toetsingscommissie) tarafından onaylanmıştır.
1. Perfüzyon Sıvısının Hazırlanması
Not: Bu protokole göre normotermik makine perfüzyonu için hazırlanan perfüzyon sıvısının toplam hacmi 2,233 ml ve perfüzyon sıvısının hedeflenen osmolaritesi 302 mOsmol/L'dir.
<ol>
	<li>Tablo 1'de açıklanan perfüzyon sıvısı bileşenlerinden; insan konsantre eritrositlerini, taze donmuş plazmayı ve insan albüminini ayrı tutun. Diğer bileşenleri steril bir şekilde karıştırın ve çözeltiyi ameliyathaneye (OR) taşımak için steril bir torbada saklayın. Bu işlemi steril bir ortamda (ideali İyi Üretim Uygulamaları tesisi) veya bir kültür odasındaki laminer akışlı kabinde gerçekleştirin.</li>
</ol>
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody >
		<tr >
			<td >Bileşenler</td>
			<td fo:width="2in" style="width:80px">Miktar</td>
		</tr >
		<tr >
			<td >Paketlenmiş eritrosit süspansiyonu (Hematokrit %60)</td >
			<td style="text-align:right">840 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >Taze donmuş plazma</td >
			<td style="text-align:right">930 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >İnsan albümin 200 g/L (Albuman, Sanquin)</td >
			<td style="text-align:right">100 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >Modifiye parenteral beslenme (Clinimix N17G35E, Baxter International Inc.)</td >
			<td style="text-align:right">7.35 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >İnfüzyon için multivitamini (Cernevit, Baxter international Inc.)</td >
			<td style="text-align:right">7 μl</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >İnfüzyon için konsantre eser elementler (Nutritrace , B. Braun Melsungen AG)</td >
			<td style="text-align:right">7.35 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >i.v. uygulama için Metronidazol (5 mg/ml) (Flagyl, Sanofi-Aventis)</td >
			<td style="text-align:right">40 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >i.v. uygulama için Cefazolin 1,000 mg flakon 5 ml toz (Servazolin, Sandoz)</td >
			<td style="text-align:right">2 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >Hızlı etkili insülin (100 IU/ml) (Actrapid®, Novo Nordisk)</td >
			<td style="text-align:right">20 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >Kalsiyum glukobionat, intravenöz solüsyon %10, 137.5 mg/ml (Sandoz)</td >
			<td style="text-align:right">40 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >Steril H2O</td >
			<td style="text-align:right">51.3 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >NaCl %0.9 solüsyonu</td >
			<td style="text-align:right">160 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >Sodyum bikarbonat %8.4 solüsyonu</td >
			<td style="text-align:right">31 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >i.v. uygulama için Heparin 5,000 IE/ml</td >
			<td style="text-align:right">4 ml</td >
		</tr >
		<tr >
			<td >Toplam</td >
			<td style="text-align:right">2,233 ml</td >
		</tr >
	</tbody >
</table>


Tablo 1: Perfüzyon sıvısının bileşenleri16.
<ol start="2">
	<li>İnsan paketlemiş eritrositleri (840 ml), taze donmuş plazmayı (930 ml), insan albümini 200 g/L (100 ml) ve adım 1.1'de hazırlanan çözeltiyi, perfüzyon cihazına uygulanmak üzere ameliyathaneye transfer edin.</li>
</ol>


2. Perfüzyon Cihazının Hazırlanması
<ol>
	<li>İnsan paketle kırmızı kan hücreleri, taze donmuş plazma, insan albümini ve adım 1.1'de hazırlanan çözelti dahil olmak üzere perfüzyon sıvısının bileşenlerini, oksijenatörlerin üstündeki konnektör aracılığıyla makineye ekleyin ve tüplerdeki tüm hava kabarcıklarını giderin.</li>
	<li>Venöz pompayı çalıştırın ve ekrandaki üretici talimatlarını izleyin. Ardından arteriyel pompayı açın ve ekrandaki üretici talimatlarını takip edin.</li>
	<li>Ekrandaki talimatları izleyerek basınç ölçerleri atmosferik basınca göre sıfırlayın. Bu, perfüzyon sırasında ölçülen basıncın, portal ven ve hepatik arter seviyesindeki gerçek basınç olmasını sağlar.</li>
	<li>Karbogen (95% O2 + 5% CO2) kullanarak 4 L/min akış hızında oksijenasyona başlayın. Hava akışı iki oksijenatör arasında bölünecek (oksijenatör başına 2 L/min) ve bu, perfüzyon sıvısında yaklaşık 60 kPa (veya 450 mmHg) pO2 ile sonuçlanmalıdır. Daha uzun perfüzyonlar için, oksijen ve karbondioksitin ayrı kaynaklardan kullanılması önerilir. Bu durum, perfüzyon sıvısının pH ve pCO2 değerlerini ayarlamak için kullanılabilecek O2/CO2 oranında küçük düzenlemeler yapılmasına olanak tanır.</li>
	<li>Cihaz hazırlandıktan 15-20 dk sonra kan gazı ölçümü için bir perfüzyon örneği alın ve pH ile elektrolitleri buna göre izleyin. 
	NOT: Örnekleri almadan önce yaklaşık 3 ml perfüzyon sıvısını atmayı unutmayın; çünkü bu sıvı periferik tüplerdedir ve sistemdeki perfüzyon sıvısını temsil etmez. Tamponlama kapasitesi için, fizyolojik pH (7.35-7.45) değerini hedefleyerek %8.4'lük sodyum bikarbonat çözeltisi ekleyin. Örneğin, 25-35 ml %8.4'lük sodyum bikarbonat çözeltisi ekleyin ve düzenli aralıklarla kan gazı ölçümü için örnekler alarak perfüzyon sıvısındaki pH ve bikarbonat seviyelerini kontrol edin.</li>
</ol>
3. Donör Karaciğerlerin Temini ve Hazırlanması
Not: Organı standart in situ soğutma tekniğini kullanarak temin edin ve soğuk koruma sıvısı (0-4 °C) ile yıkayın19. Arterin kanülasyonunu kolaylaştırmak için supratrunkal aortanın bir segmentini hepatik artere bağlı bırakın (Şekil 2A).
<ol>
	<li>Safra kanallarını koruma sıvısıyla (örneğin, University of Wisconsin solüsyonu) yıkayın. Sistik kanalı cerrahi sütür ile ligat edin.</li>
	<li>Organı, MP merkezine nakledilmek üzere standart steril bir donör organ torbasına yerleştirip buzla birlikte kutuda saklayın.</li>
	<li>Donör karaciğer ameliyathaneye ulaştığında back table prosedürüne hemen başlayın.
	<ol>
		<li>Mikrobiyolojik testler için koruma sıvısından en az 10 ml örnek alın.</li>
		<li>Karaciğerin çıplak alanındaki diyafragmatik bağlantıları ve vena cava'nın üst manşetinde kalan kalp kaslarını cerrahi makasla temizleyin.</li>
		<li>Arteri ve portal veni diseksiyon makasları kullanarak disseke edin ve yan dalları cerrahi sütürler veya hemoklipler kullanarak ligat edin.</li>
		<li>Supratrunkal aorta segmentinin distal ucunu emilmeyen monofilaman bir sütürle (örneğin, 3-0 Prolene) kapatın. Arteriyel kanülü supratrunkal aortanın proksimal ucuna yerleştirin ve sütürlerle sabitleyin (Şekil 2A). Perfüzyon cihazı üreticisi tarafından sağlanan tek kullanımlık paket içerisindeki kanülü kullanın.</li>
		<li>Venöz kanülü portal vene yerleştirin ve sütürlerle sabitleyin. Tek kullanımlık paketle birlikte gelen kanülü kullanın. Hepatik ven kanülsüz bırakılır.</li>
		<li>Safra kanalını koruma solüsyonu ile yıkayın. Safra kanalına silikon bir kateter yerleştirin ve sütürlerle sabitleyin. 
		NOT: Kateteri safra kanalına çok derin yerleştirmeyin, çünkü bu durum biliyer epitelyumda hasara yol açabilir.</li>
		<li>Karaciğeri, portal ven kanülü aracılığıyla şu şekilde 0.9% NaCl solüsyonu ile yıkayın:
		<ol>
			<li>Graft, koruma solüsyonu olarak University of Wisconsin solüsyonunda saklanmışsa, karaciğeri 2.000 ml soğuk (0-4 °C) 0.9% NaCl solüsyonu ve ardından 500 ml ılık (37 °C) 0.9% NaCl solüsyonu ile yıkayın.</li>
			<li>Graft, koruma solüsyonu olarak Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate solüsyonunda saklanmışsa, karaciğeri 1.000 ml soğuk (0-4 °C) 0.9% NaCl solüsyonu ve ardından 500 ml ılık (37 °C) 0.9% NaCl solüsyonu ile yıkayın. Ilık yıkamanın amacı, perfüzyon sıvısının sıcaklığındaki belirgin bir düşüşü önlemektir.</li>
			<li>Ilık yıkamayı, karaciğeri perfüzyon cihazına bağlamadan hemen önce gerçekleştirin. 
			NOT: Ilık yıkama ile NMP başlangıcı arasındaki süreyi her zaman 1-2 dk altında tutun.</li>
		</ol>
		</ol>
	</li>
</ol>
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Donör özellikleri (N = 12)</td>
			<td>Sayı (%) veya Medyan (IQR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yaş (yıl)</td>
			<td>61 (50-64)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cinsiyet (erkek)</td>
			<td>8 (67%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donör tipi 
			DCD, Maastricht tip III 
			DBD</td>
			<td>  
			10 (83%) 
			2 (17%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vücut kitle indeksi (VKİ)</td>
			<td>27 (25-35)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reddetme nedeni 
			DCD+ yaşı &gt;60 yıl 
			DCD+ yüksek VKİ 
			DCD+ çeşitli nedenler* 
			Şiddetli steatoz</td>
			<td>  
			5 (41%) 
			3 (25%) 
			2 (17%) 
			2 (17%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Koruma solüsyonu 
			  UW solüsyonu 
			  HTK solüsyonu</td>
			<td>  
			6 (50%) 
			6 (50%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DCD'de donör sıcak iskemi süresi (dk)</td>
			<td>14 (17 - 20)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soğuk iskemi süresi (dk)</td>
			<td>389 (458-585)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donör risk indeksi (DRI)</td>
			<td>2.35 (2.01-2.54)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 2: Donör özellikleri. * bir greft için donörün intravenöz ilaç kötüye kullanım öyküsü ve bir diğer greft için yaşam desteği çekildikten sonra donörde sO2 &lt;30% şeklinde seyreden uzamış hipoksi. Kısaltmalar: DCD, dolaşım sonrası donasyon; DBD, beyin ölümü sonrası donasyon; UW, University of Wisconsin; HTK, Histidin-triptofan-ketoglutarat
<img alt="Portal ven, safra kanalı ve supratrunkal aortayı gösteren karaciğer transplantasyon prosedürü sırası." src="/files/ftp_upload/52688/52688fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Şekil 2"> 
Şekil 2: (A) Hazırlık masasında hazırlanmış bir insan donör greftinin resimleri ve (B-D) ardından normotermik olarak perfüze edilmiş hali. (A) Arteriyel kanül supratrunkal aortaya ve venöz kanül portal vene yerleştirilmiştir. Safra kanalı silikon bir biliyer kateterle kanüle edilmiştir. (B) Karaciğer, anterior yüzeyi aşağı bakacak şekilde organ haznesine yerleştirilmiş ve kanüller perfüzyon cihazının hortumlarına bağlanmıştır. (C) Normotermik makine perfüzyonunun başlangıcından 30 dk sonrası. (D) Normotermik makine perfüzyonunun başlangıcından 6 sa sonrası. Operasyon sırasında, karaciğer için steril ve nemli bir ortam sağlamak amacıyla organ haznesi şeffaf bir kapakla örtülmüştür (bu resimlerde gösterilmemiştir). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52688/52688fig2large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
4. Normotermik Makine Perfüzyonu
<ol>
	<li>Karaciğeri, ön yüzeyi aşağı bakacak şekilde organ haznesine yerleştirin. Karaciğeri, portal ven kanülünü perfüzyon cihazının portal giriş tüpüne ve arter kanülünü cihazın arter giriş tüpüne bağlayarak önceden hazırlanmış perfüzyon cihazına derhal bağlayın.</li>
	<li>Ekrandaki üretici talimatlarını izleyerek hem portal hem de arter tarafında perfüzyonu başlatın. Ortalama arter basıncını 70 mmHg ve ortalama portal ven basıncını 11 mmHg olarak ayarlayın.</li>
	<li>Kan gazı parametrelerinin (pO2, pCO2, sO2, HCO2- ve pH) ve biyokimyasal parametrelerin (glikoz, kalsiyum, laktat, potasyum ve sodyum) konvansiyonel bir kan gazı analizörü kullanılarak anlık analizi için her 30 dk'da bir perfüzyon sıvısı örnekleri alın. Örnekleri almadan önce yaklaşık 3 ml perfüzyon sıvısını boşalttığınızdan emin olun, çünkü bu sıvı periferik tüplerde bulunur ve sistemdeki perfüzyon sıvısını temsil etmez.
	<ol>
		<li>Bu örnekleri almak için, perfüzyon cihazının tek kullanımlık tüp setinin bir parçası olan örnekleme konnektörlerinden 1 ml'lik bir şırınga ile perfüzyon sıvısını aspire edin. Her örnek için yeni bir şırınga kullanın ve perfüzyon sıvısı aspirasyonunun ardından şırıngadaki hava kabarcıklarını derhal giderin. Ardından şırıngayı kan gazı analizörüne yerleştirin ve analizörün kılavuzunda verilen üretici talimatlarını izleyin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Alkalen fosfataz (AlkP), gama-glutamil transferaz (gamma-GT), alanin aminotransferaz (ALT), üre ve toplam bilirubin tayini için perfüzyon sıvısından plazma toplayın, dondurun ve -80 °C'de saklayın. Plazmayı, perfüzyon sıvısının 1.500 x g ve 4 °C'de 5 dk santrifüj edilmesinin ardından toplayın.</li>
</ol>

<ol><li>Plaats, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+machine+preservation+in+liver+transplantation+revisited%3A+Concepts+and+criteria+in+the+new+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Hypothermic machine preservation in liver transplantation revisited: Concepts and criteria in the new millennium.</a> Ann. Biomed. Eng. 32 (4), 623-631 (2004).</li>
<li>op den Dries, S., Sutton, M. E., Lisman, Y., Porte, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+bile+ducts+in+liver+transplantation%3A+Looking+beyond+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Protection of bile ducts in liver transplantation: Looking beyond ischemia.</a> Transplantation. 92 (4), 373-379 (2011).</li>
<li>Seehofer, D., Eurich, D., Veltzke-Schlieker, W., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+complications+after+liver+transplantation%3A+Old+problems+and+new+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Biliary complications after liver transplantation: Old problems and new challenges.</a> Am. J. Transplant. 13 (2), 253-265 (2013).</li>
<li>Buis, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonanastomotic+biliary+strictures+after+liver+transplantation%2C+part+1%3A+Radiological+features+and+risk+factors+for+early+vs.+late+presentation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver.+Transpl%22%5BJournal%5D)">Nonanastomotic biliary strictures after liver transplantation, part 1: Radiological features and risk factors for early vs. late presentation.</a> Liver. Transpl. 13 (5), 708-718 (2007).</li>
<li>Karimian, N., op den Dries, S., Porte, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+biliary+strictures+after+liver+transplantation%3A+Is+it+the+amount+of+epithelial+injury+or+insufficient+regeneration+that+counts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">The origin of biliary strictures after liver transplantation: Is it the amount of epithelial injury or insufficient regeneration that counts.</a> J. Hepatol. 58 (6), 1065-1067 (2013).</li>
<li>Gastaca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+complications+after+orthotopic+liver+transplantation%3A+A+review+of+incidence+and+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Biliary complications after orthotopic liver transplantation: A review of incidence and risk factors.</a> Transplant. Proc. 44 (6), 1545-1549 (2012).</li>
<li>Sanchez-Urdazpal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic-type+biliary+complications+after+orthotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Ischemic-type biliary complications after orthotopic liver transplantation.</a> Hepatology. 16 (1), 49-53 (1992).</li>
<li>Dubbeld, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+liver+transplantation+survival+with+selected+cardiac+death+donors+and+brain+death+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Similar liver transplantation survival with selected cardiac death donors and brain death donors.</a> Br. J. Surg. 97 (5), 744-753 (2010).</li>
<li>Guarrera, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+machine+preservation+in+human+liver+transplantation%3A+The+first+clinical+series%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hypothermic machine preservation in human liver transplantation: The first clinical series.</a> Am. J. Transplant. 10 (2), 372-381 (2010).</li>
<li>Henry, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+machine+preservation+reduces+molecular+markers+of+ischemia%2Freperfusion+injury+in+human+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hypothermic machine preservation reduces molecular markers of ischemia/reperfusion injury in human liver transplantation.</a> Am. J. Transplant. 12 (9), 2477-2486 (2012).</li>
<li>Schlegel, A., Rougemont, O., Graf, R., Clavien, P. A., Dutkowski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+mechanisms+of+end-ischemic+cold+machine+perfusion+in+DCD+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Protective mechanisms of end-ischemic cold machine perfusion in DCD liver grafts.</a> J. Hepatol. 58 (2), 278-286 (2013).</li>
<li>op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+oxygenated+machine+perfusion+prevents+arteriolonecrosis+of+the+peribiliary+plexus+in+pig+livers+donated+after+circulatory+death%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+One%22%5BJournal%5D)">Hypothermic oxygenated machine perfusion prevents arteriolonecrosis of the peribiliary plexus in pig livers donated after circulatory death.</a> PLoS. One. 9 (2), e88521(2014).</li>
<li>Tolboom, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subnormothermic+machine+perfusion+at+both+20+degrees+C+and+30+degrees+C+recovers+ischemic+rat+livers+for+successful+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Subnormothermic machine perfusion at both 20 degrees C and 30 degrees C recovers ischemic rat livers for successful transplantation.</a> J. Surg. Res. 175 (1), 149-156 (2012).</li>
<li>Gringeri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subnormothermic+machine+perfusion+for+non-heart-beating+donor+liver+grafts+preservation+in+a+swine+model%3A+A+new+strategy+to+increase+the+donor+pool%3F+Transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Subnormothermic machine perfusion for non-heart-beating donor liver grafts preservation in a swine model: A new strategy to increase the donor pool? Transplant.</a> Proc. 44 (7), 2026-2028 (2012).</li>
<li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subnormothermic+machine+perfusion+for+ex+vivo+preservation+and+recovery+of+the+human+liver+for+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Subnormothermic machine perfusion for ex vivo preservation and recovery of the human liver for transplantation.</a> Am. J. Transplant. 14 (6), 1400-1409 (2014).</li>
<li>op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am. J. Transplant. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li>
<li>Sutton, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Criteria+for+viability+assessment+of+discarded+human+donor+livers+during+ex+vivo+normothermic+machine+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+One%22%5BJournal%5D)">Criteria for viability assessment of discarded human donor livers during ex vivo normothermic machine perfusion.</a> PLoS. One. 9 (11), (2014).</li>
<li>Minor, T., Efferz, P., Fox, M., Wohlschlaeger, J., Luer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+oxygenated+rewarming+of+cold+stored+liver+grafts+by+thermally+graduated+machine+perfusion+prior+to+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Controlled oxygenated rewarming of cold stored liver grafts by thermally graduated machine perfusion prior to reperfusion.</a> Am. J. Transplant. 13 (6), 1450-1460 (2013).</li>
<li>Makowka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+technique+of+orthotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterol.+Clin.+North.+Am%22%5BJournal%5D)">Surgical technique of orthotopic liver transplantation.</a> Gastroenterol. Clin. North. Am. 17 (1), 33-51 (1988).</li>
<li>Hansen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+examination+and+evaluation+of+donor+bile+ducts+received+during+orthotopic+liver+transplantation--a+morphological+clue+to+ischemic-type+biliary+lesion%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch%22%5BJournal%5D)">Histological examination and evaluation of donor bile ducts received during orthotopic liver transplantation--a morphological clue to ischemic-type biliary lesion?</a> Virchows Arch. 461 (1), 41-48 (2012).</li>
<li>Monbaliu, D., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+perfusion+of+the+liver%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Organ.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Machine perfusion of the liver: Past, present and future.</a> Curr. Opin. Organ. Transplant. 15 (2), 160-166 (2010).</li>
<li>Oldani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-retrieval+reperfusion+decreases+cancer+recurrence+after+rat+ischemic+liver+graft+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Pre-retrieval reperfusion decreases cancer recurrence after rat ischemic liver graft transplantation.</a> J. Hepatol. 61 (2), 278-285 (2014).</li>
<li>Tromans, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+and+pressure+dependent+solubility+of+oxygen+in+water%3A+A+thermodynamic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrometallurgy%22%5BJournal%5D)">Temperature and pressure dependent solubility of oxygen in water: A thermodynamic analysis.</a> Hydrometallurgy. 48 (3), 327-342 (1998).</li>
</ol>

Bu makalenin yazarlarının ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu video, hepatik arter ve portal ven yoluyla basınç kontrollü ikili perfüzyon sağlayan bir cihaz kullanarak insan donör karaciğerlerinin normotermik makine perfüzyonu için adım adım bir protokol sağlar. Bu protokol izlenirken perfüzyon makinesinde teknik arızalar meydana gelmedi ve tüm greftler iyi perfüze edildi ve iyi oksijenlendi. Ex situ perfüze karaciğerler stabil hemodinamiğe sahipti ve safra üretimi16,17 ile tanımlandığı gibi metabolik olarak aktifti.
Bu, insan donö...

Karaciğer naklinde mevcut organ koruma yöntemi, donör karaciğerlerin soğuk (0-4 °C) koruma sıvısı (University of Wisconsin solüsyonu veya Histidin-Triptofan-Ketoglutarat solüsyonu gibi) ile yıkanması ve ardından saklanmasıdır. Bu yöntem statik soğuk saklama (SCS) olarak adlandırılır. 0-4 °C'deki karaciğerlerin metabolik hızı çok düşük olsa da, hala 0.27 µmol oksijen/dak/g karaciğer dokusu miktarına ihtiyaç duyulmaktadır ve bu miktar SCS sırasında karşılanamamaktadır1. Bu nedenle, geleneksel SCS yöntemi, donör karaciğerlerde bir dereceye kadar (ek) hasara yol açar. Koruma hasarının bu miktarı yüksek kaliteli donör karaciğerlerde bir sorun teşkil etmese de, donörde halihazırda bir dereceye kadar hasar görmüş suboptimal karaciğerlerde kritik ve sınırlayıcı bir faktör haline gelebilir. Bu nedenle, suboptimal kalitedeki karaciğerler veya sözde genişletilmiş kriter donörü (ECD) karaciğerleri, erken greft yetmezliği riskinin çok yüksek olduğu düşünüldüğü için sıklıkla nakil için reddedilir. Dolaşım sonrası ölümden sonra bağışlanan (DCD) karaciğerleri, yaşlı donörleri veya steatotik greft alan alıcılarıyla ilgili olarak yüksek oranlarda gecikmiş greft fonksiyonu, primer fonksiyon kaybı ve non-anastomotik biliyer striktürler (NAS) tanımlanmıştır2. NAS, karaciğer nakli sonrası morbidite ve mortalitenin ana nedenlerinden biridir. NAS, donörün hem ekstrahepatik hem de intrahepatik safra kanallarında meydana gelebilir ve kanal içi biliyer çamur ve kalıp oluşumu ile birlikte seyredebilir3,4. NAS etiyolojisinin multifaktöriyel olduğu düşünülse de, greft koruma ve transplantasyon sırasında safra kanallarının iskemi/reperfüzyon hasarı, temel bir mekanizma olarak tanımlanmıştır2,5. DCD greft transplantasyonu, NAS gelişimi için en güçlü risk faktörlerinden biri olarak belirlenmiştir. DCD donörde bir sıcak iskemi dönemi, organ koruma sırasında soğuk iskemi ve ardından alıcıda reperfüzyon hasarının kombinasyonunun, safra kanallarında geri dönüşümsüz hasardan sorumlu olduğu ve safra kanallarının zayıf rejeneratif kapasitesi ile birleştiğinde karaciğer nakli sonrası fibrotik skarlara ve safra kanallarının daralmasına yol açtığı düşünülmektedir2,5. DCD karaciğer alan hastaların %30'ına kadarında NAS rapor edilmiştir6-8. Nakil için karaciğer greftlerinin mevcut SCS yönteminin, DCD donörlerden gelenler gibi önceden hasarlı ECD karaciğerler için yetersiz olduğu açıkça görülmüştür. ECD karaciğerlerin transplantasyonda kullanımını artırmak ve optimize etmek için alternatif yöntemlere ihtiyaç vardır.
Makine perfüzyonu (MP), SCS ile karşılaştırıldığında donör organların daha iyi korunmasını sağlayabilen bir organ koruma yöntemidir. MP, özellikle ECD greftlerin korunması için uygun olabilir. MP'nin önemli bir avantajı, koruma süresince grefte oksijen sağlama imkanıdır. MP; hipotermik (0-10 °C), subnormotermik (10-36 °C) ve normotermik (36-37 °C) MP (NMP) olarak sınıflandırılan çeşitli sıcaklıklarda gerçekleştirilebilir. MP için kullanılan sıcaklığa bağlı olarak perfüzyon sıvısının türü ayarlanmalıdır ve sıcaklık arttıkça daha fazla oksijen sağlanmalıdır. İnsan karaciğer naklinde MP'nin ilk klinik uygulaması, perfüzyon sıvısının aktif oksijenasyonu olmadan hipotermik perfüzyona dayanmaktaydı9,10. Hayvan modellerinde, hipotermik oksijenli MP'nin (0-10 °C), karaciğer greftlerinin iskemi/reperfüzyon hasarına karşı koruyucu etkileri olduğu11 ve safra kanallarının peribiliyer vasküler pleksusunun daha iyi korunmasını sağladığı gösterilmiştir12. 20 °C veya 30 °C'de subnormotermik oksijenli MP de hayvan modellerinde çalışılmış ve SCS ile karşılaştırıldığında, DCD karaciğerlerin greft fonksiyonlarının daha erken toparlanmasını sağladığı gösterilmiştir13,14. İnsan karaciğerlerinde subnormotermik oksijenli MP'nin fizibilitesi yakın zamanda yedi adet reddedilmiş insan donör karaciğer serisinde rapor edilmiştir15. NMP (37 °C), transplantasyon öncesinde greft canlılığının ve fonksiyonelliğinin değerlendirilmesine olanak tanır16,17. Ayrıca MP, karaciğer greftinin transplantasyon öncesinde kademeli olarak yeniden ısınmasını sağlar; bunun greftin toparlanmasını ve canlandırılmasını kolaylaştırdığı kanıtlanmıştır18.
Mevcut protokolde hepatik makine perfüzyonu için kullanılan perfüzyon cihazı, sürekli portal akış ve pulsatif arteriyel akış sağlayan iki santrifüj pompa aracılığıyla çift perfüzyona (portal ven ve hepatik arter yoluyla) olanak tanır. Sistem basınç kontrollüdür ve intrahepatik dirence bağlı olarak karaciğer boyunca akışın otoregülasyonuna izin verir. İki içi boş fiber membran oksijenatör, karaciğer greftinin oksijenlenmesinin yanı sıra CO2 uzaklaştırılmasını sağlar. Sıcaklık, hedeflenen MP tipine göre ayarlanabilir (minimum sıcaklık 10 °C). Akış, basınç ve sıcaklık, perfüzyon sürecinin sürekli kontrolünü sağlayacak şekilde cihaz üzerinde gerçek zamanlı olarak görüntülenir. Her greftin perfüzyonu için yeni, steril, tek kullanımlık bir tüp seti, rezervuar ve oksijenatör grubu mevcuttur (Şekil 1).
Bu video makalesinin amacı, yeni geliştirilen bu karaciğer perfüzyon makinesi kullanılarak insan donör karaciğerlerinin ex situ normotermik makine perfüzyonu için adım adım bir protokol sunmaktır.
<img alt="Karaciğer perfüzyon sistemi diyagramı: döner pompa düzeneği, oksijenasyon işlemi, esnek karaciğer tutucu." src="/files/ftp_upload/52688/52688fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Şekil 1"> 
Şekil 1: (A) şematik bir çizim, (B) perfüzyon makinesinin bir fotoğrafı, (C) oksijenatörün yakından görünümü ve (D) insan donör karaciğerlerinin normotermik perfüzyonu için kullanılan santrifüj pompa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52688/52688fig1large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>Karaciğer Yardımı</td>, <td>Organ Yardımcısı</td><td>, OA. Li.Li.140</td><td>Perfüzyon cihazı</td></tr><tr><td>Karaciğer Yardımı tek kullanımlık paket</td><td>Organ Yardımı OA</td><td>. Li.DP.540</td><td>Tek kullanımlık set ve kanüller</td></tr><tr><td>Meredith No.8</td><td>Vygon Nederlands BV</td><td>1362082</td><td>Safra kanalı kanülü</td></tr><tr><td>İnsan albümini 200 g/L / ALBUMAN</td><td>Sanquin</td><td>15522598</td><td>100 ml</td></tr><tr><td>Modifiye parenteral nütrisyon</td><td>Baxter Nederland B.V.</td><td>N14G30E</td><td>7.35 ml</td></tr><tr><td>İnfüzyon için Multivitaminler / CERNEVIT</td><td>Baxter International Inc.</td><td>9800927</td><td>7 &mu; l</td></tr><tr><td>İnfüzyon için konsantre eser elementler / NUTRITRACE</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>14811332</td><td>7.35 ml</td></tr><tr><td>Metronidazol 5 mg/ml</td><td>Baxter Nederland B.V.</td><td>98181882</td><td>40 ml</td></tr><tr><td>Cefazoline / SERVAZOLIN</td><td>Sandoz B.V.</td><td>15611337</td><td>2 ml</td></tr><tr><td>Hızlı etkili insülin</td><td>çeşitli satıcılar</td><td></td><td>20 ml</td></tr><tr><td>Kalsiyum glubiyonat, intravenöz çözelti %10, 137.5 mg/ml</td><td>Sandoz</td><td>97038695</td><td>40 ml</td></tr><tr><td>Steril H2O</td><td>Fresenius Kabi Nederland B.V.</td><td>98084453</td><td>51.3 ml</td></tr><tr><td>NaCl %0.9</td> <td>Baxter Nederland B.V.</td><td>15262510</td><td>160 ml</td></tr><tr><td>Heparin 5.000 IE/ml i.v. uygulaması için</td><td>LEO Pharma B.V.</td><td>98026178</td><td>4 ml</td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat %8,4</td> <td>B. Braun Melsungen AG</td><td>97973874</td><td>Miktar pH'a bağlıdır</td></tr><tr><td>Paketlenmiş kırmızı kan hücresi (SAGM'de)</td> <td>Kan bankası (Sanquin)</td> <td>N0012000</td><td>750 ml</td></tr><tr><td>Taze donmuş plazma</td><td>Kan bankası (Sanquin)</td><td>N04030A0/N04030B0</td><td>900 ml</td></tr></tbody></table>

donör karaciğerleri ex situ normotermik makinesi perfüzyonu

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Konvansiyonel statik soğuk korumanın (0-4 °C) aksine, ex situ makine perfüzyonu donör karaciğerlerinin daha iyi korunmasını sağlayabilir. Organların sürekli perfüzyonu, organ kalitesini iyileştirme fırsatı sağlar ve transplantasyondan önce donör karaciğerlerinin ex situ canlılık değerlendirmesine izin verir. Bu video makale, hepatik arterin basınç ve sıcaklık kontrollü pulsatil perfüzyonunu ve portal venin sürekli perfüzyonunu sağlayan bir cihaz kullanılarak insan donör karaciğerlerinin ex situ normotermik makine perfüzyonu (37 °C) için adım adım bir protokol sağlar. Perfüzyon sıvısı, iki içi boş fiber membran oksijenatör tarafından oksijenlenir ve sıcaklık 10 °C ile 37 °C arasında ayarlanabilir. Perfüzyon sırasında, karaciğerin metabolik aktivitesi ve yaralanma derecesi, perfüzyon sıvısından alınan örneklerin biyokimyasal analizi ile değerlendirilebilir. Makine perfüzyonu, transplantasyon için uygun karaciğer sayısını artırmak için çok umut verici bir araçtır.

Çeşitli nedenlerle transplantasyon için uygun görülmeyen 12 insan karaciğeri, donör ailelerinden araştırma için bilgilendirilmiş onam alındıktan sonra kullanılmıştır. Donör özellikleri Tablo 2'de açıklanmıştır. İnsan donör karaciğerleri, bu makalede açıklanan protokol kullanılarak 6 saat boyunca normotermik olarak perfüze edilmiştir. Karaciğer greftlerinin kalitesi, karaciğer perfüzyonunun makroskobik homojenliği izlenerek değerlendirilmiştir (Şekil 2A-D...

Burada, donör karaciğer greftlerinin oksijenli ex situ makine perfüzyonunu tanımlayan bir protokol sunuyoruz. Bu makale, makine perfüzyonu için karaciğer greftini temin etmek ve hazırlamak, perfüzyon sıvısını hazırlamak, perfüzyon makinesini hazırlamak ve karaciğer greftinin oksijenli normotermik makine perfüzyonunu gerçekleştirmek için adım adım bir protokol içermektedir.

Donör karaciğerleri Ex Situ Normotermik Makinesi Perfüzyonu

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Bu prosedürün genel amacı, makine perfüzyonu kullanarak insan donör karaciğer greftlerini vücut sıcaklığında perfüze etmektir. Bu işlem, öncelikle gerekli perfüzyon sıvısının hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, perfüzyon sıvısının farklı bileşenlerinin makineye eklenmesiyle perfüzyon cihazının hazır hale getirilmesidir.Eş zamanlı olarak, temin edilen karaciğer grefti, perfüzyon cihazına bağlanmak üzere arka masada hazırlanır. Son adım, karaciğerin perfüzyon cihazına bağlanması ve normotermik perfüzyonun başlatılmasıdır. Son olarak, ekranlarda görüntülenen arteriyel ve portal akım değişiklikleri karaciğerin hemodinamisini değerlendirmek için kullanılır ve arteriyel perfüzyon sıvısından alınan örneklerin kan gazı analizi, perfüzyon sıvısının pH ve oksijenasyonunu izlemek için kullanılır.Bu tekniğin geleneksel statik saklama yöntemine göre temel avantajı, karaciğeri insan vücudu dışında normal sıcaklıkta canlı tutabilmenizdir. Grefte oksijen ve besin sağlayarak metabolik olarak aktif kalmasını sağlarsınız. Bu durum, iskemi ve reperfüzyonu ve soğuğun neden olduğu hasarı azaltmaya yardımcı olur.Karaciğer 37 derecede metabolik olarak aktif olduğundan, greftin canlılığını transplantasyon öncesinde değerlendirebilirsiniz. İnsan karaciğer greftinin normtermik makine perfüzyonu prosedürü, laboratuvarımda çalışan doktora öğrencisi Alex Mehan tarafından adım adım gösterilecektir. Bu prosedüre başlamak için, perfüzyon sıvısının bileşenlerini oksijenatörün üstündeki konnektör aracılığıyla makineye ekleyin.Perfüzyon sıvısı; insan paketle kırmızı kan hücreleri, taze donmuş plazma, insan albumini ve diğer bileşenlerden oluşur. Venöz ve arteriyel pompaları açın. Her iki taraftaki pompa çıkışını artırmak için ekrandaki üretici talimatlarını izleyin.Kapalı sistemdeki tüm hava kabarcıklarını sistematik bir şekilde uzaklaştırın. Ekrandaki talimatları izleyerek basınç ölçerini atmosferik basınca göre sıfırlayın. Bu işlem, perfüzyon sırasındaki basınç ölçümünün portal ven seviyesindeki gerçek basınç olduğunu sağlar.Cihazın portal tarafındaki set sıcaklığını 37 °C'ye ayarlayın. Ortalama portal venöz basıncı 11 mmHg olarak belirleyin. Cihazın arteriyel tarafında basınç sıfırlama işlemini tekrarlayın.Sıcaklığı 37 °C'ye ve ortalama arteriyel basıncı 70 mmHg'ye ayarlayın. Dakikada dört litrelik bir akış hızıyla karbogen kullanarak oksijenasyonu başlatın. Hava akışı iki oksijenatör arasında bölünecektir ve bu durum perfüzyon sıvısında yaklaşık 60 kPa'lık bir oksijen basıncı ile sonuçlanmalıdır.Daha uzun süreli perfüzyonlar için oksijen ve karbondioksitin ayrı kaynaklardan kullanılması önerilir. Bu durum, perfüzyon sıvısının pH değerini ve karbondioksit basıncını ayarlamak için kullanılabilecek olan oksijen-karbondioksit oranunda küçük ayarlamalar yapılmasına olanak tanır.Kan gazı analizi yaparak perfüzyon sıvısının pH değerini kontrol edin. Örnek almadan önce yaklaşık üç mililitre perfüzyon sıvısını attığınızdan emin olun. Bu sıvı periferik tüplerde bulunduğu için sistemdeki perfüzyon sıvısını temsil etmez, bu nedenle kan gazı örneğindeki tüm hava kabarcıklarını giderin.Fizyolojik pH değerini hedefleyerek tamponlama kapasitesi için %8,4'lük sodyum bikarbonat çözeltisi ekleyin. Genellikle 15 ila 30 mililitre %8,4'lük sodyum bikarbonat çözeltisi eklenir. Bu aşamada, donör karaciğer, donör hastanesinde standart in situ soğutma tekniği kullanılarak temin edilir ve arter kanülasyonunu kolaylaştırmak için soğuk koruma sıvısı ile yıkanır.Donör karaciğer makine perfüzyon merkezinin ameliyathanesine ulaştığında, supra truncal aortanın bir segmenti hepatik artere bağlı bırakılmalı ve arka masa prosedürüne başlanmalıdır. Mikrobiyolojik testler için koruma sıvısından en az 10 mililitre örnek alın. Donör hastanedeki organ alımı sırasında karaciğerin sistik kanalı cerrahi makasla ligat edilmiştir; karaciğerin çıplak alanındaki diyafragmatik bağlantıların yanı sıra vena cava üst manşonundaki kalan tüm kalp kaslarını temizleyin.Diseksiyon makası kullanarak arteri ve portal veni diseke edin. Yan dalları bağlamak için cerrahi sütürler veya hemostatik klipsler kullanın. Supra truncal aorta segmentinin distal ucunu, 3.0 proline gibi emilmeyen bir monofilaman sütür kullanarak kapatın.Arteryal kanülü supra truncal aortanın proksimal ucuna yerleştirin ve sütürlerle sabitleyin. Ardından, venöz kanülü portal vene yerleştirin ve sütürlerle sabitleyin. Hepatik ven kanüle edilmeden bırakılmalıdır.Safra kanalını koruma solüsyonu ile yıkayın. Safra kanalına silikon bir kateter yerleştirin ve sütürlerle sabitleyin. Kateteri safra kanalına çok derin yerleştirmeyin, çünkü bu durum safra epitelinin zarar görmesine neden olabilir.Son olarak, portal ven kanülü aracılığıyla karaciğeri %0,9'luk salin solüsyonu ile yıkayın. Eğer greft University of Wisconsin solüsyonunda korunmuşsa, iki litre soğuk salin solüsyonu ve ardından yarım litre sıcak salin solüsyonu ile yıkayın. Eğer greft HTK solüsyonunda korunmuşsa, makine perfüzyonuna hazırlık için karaciğeri bir litre soğuk salin solüsyonu ve ardından yarım litre sıcak salin solüsyonu ile yıkayın.Öncelikle karaciğeri, ön yüzü aşağı bakacak şekilde organ haznesine yerleştirin. Karaciğeri; portal ven kanülünü cihazın portal giriş tüpüne, arteriyel kanülü ise cihazın arteriyel giriş tüpüne bağlayarak hemen hazırlanmış perfüzyon cihazına bağlayın. Bu protokolün en kritik noktası, portal ven ve hepatik arter kanüllerinin perfüzyon cihazına bağlanmasıdır.Hemen ardından yeterli perfüzyon başlamalıdır. Ekrandaki üretici talimatlarını izleyerek hem portal hem de arteriyel taraflarda perfüzyonu başlatın. Tüplerin kıvrılması ve/veya yüksek intrahepatik direnç durumunda basınç alarmı oluşabilir.Ortalama arteriyel basıncı ve ortalama portal venöz basıncı kontrol edin ve gerekirse bunları yeniden ayarlayın. Normal termik makine perfüzyonu sırasında metabolik olarak aktif greftin safra üretimini ve hepatik arterin pulsasyonunu not edin. Perfüzyon sırasında, organ haznesini farklı zaman noktalarında beraberinde verilen steril örtü ile kapatın.Kan, gaz ve biyokimyasal parametrelerin hemen analiz edilmesi için yeni bir bir mililitrelik şırınga kullanarak perfüzyon sıvısı örnekleri toplayın. Her örnek için, perfüzyon cihazının tek kullanımlık hortum setinin bir parçası olan örnekleme konnektörlerinden perfüzyon sıvısını aspire edin. Tekrar, örnekleri almadan önce birkaç mililitre perfüzyon sıvısını attığınızdan emin olun.Şırıngadaki tüm hava kabarcıklarını derhal uzaklaştırın. Bir mililitrelik şırıngayı kan gazı analizörüne yerleştirin ve kan gazı ile biyokimyasal parametrelerin analizi için üretici talimatlarını izleyin. Daha sonraki analizler için perfüzyon sıvısı örnekleri alın.Bunları kan toplama tüplerine aktarın ve eriyen buz üzerinde saklayın. Örnekleri 1400 ×g hızda ve dört °C'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Perfüzyon sıvısından plazmayı toplayın ve perfüzyon sırasında karaciğer kalitesini değerlendirmek amacıyla greft hasarının miktarını belirleyecek sonraki biyokimyasal analizler için plazmayı -80 °C'de dondurarak saklayın.Karaciğerin makroskobik homojenliğini izleyin. Burada; perfüzyon öncesinde, normal termik makine perfüzyonunun başlangıcından 30 dakika sonra ve altı saat sonraki karaciğer görünümü gösterilmektedir. Karaciğerlerin hemodinamiği, normal termik makine perfüzyonu sırasında arteriyel ve portal akımlardaki değişiklikler izlenerek değerlendirilmiştir.Akımların başlangıçtaki artışı ve ardından gelen stabilizasyonu, füzyon sırasında karaciğerlerin hemodinamiklerinin stabil olduğunu göstermektedir. Perfüzyon sıvısının oksijenasyonu ve karbondioksit ekstraksiyonunun izlenmesi için kan gazı analizi kullanılmıştır. Dakikada dört litre akış hızında karbogen ile yapılan oksijenasyon, %100 oranında sürekli bir oksijen saturasyonu ile sonuçlanmıştır. Karaciğer fonksiyonunun bir göstergesi olarak safra üretimi kullanılmıştır.Toplam bilirubin ve bikarbonat konsantrasyonundaki artış, üretilen safranın kalitesindeki iyileşmeyi temsil etmiştir. Zaman içerisinde safra renginin kademeli olarak koyulaştığı gözlemlenmiştir.Perfüzyon sıvısındaki LT alkalin fosfataz, gamma gt ve potasyum gibi hepatik hasar belirteçlerinin stabil konsantrasyonları, greftlerin minimal düzeyde hasar gördüğünü yansıtmıştır. Ayrıca, karaciğer dokusunun ve ekstrahepatik safra kanalının distal ucunun histolojik incelemeleri, normal termik makine perfüzyonu sırasında greftlerde herhangi bir ek hasar saptanmadığını göstermiştir. Peribilyer bezler ve vaskülarite belirtilmiştir.Bu videoyu izledikten sonra, bir insan karaciğer greftinin normotermik makine perfüzyonunun nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu teknik, transplantasyon öncesinde greft canlılığını değerlendirme ve iyileştirme potansiyeli sunar.

ex-situ-normothermic-machine-perfusion-of-donor-livers

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu tür yağlı karaciğerleri, yaşlı donörden greft veya kardiyak ölüm (DCD) sonra alınan karaciğerinin Marjinal greftler, sadece kötü konvansiyonel, soğuk statik depolama tahammül. Biz transplantasyon öncesinde marjinal karaciğer greft korunması, değerlendirilmesi, ve onarımı için subnormothermic ex vivo karaciğer perfüzyon yeni bir model geliştirdi.

Subnormothermic Tekniği<em&gt; Ex vivo</em&gt; Karaciğer Depolama, Değerlendirme Perfüzyon ve Marjinal Karaciğer Greft Onarımı

Bu subnormothermic sıcaklığında (21 ° C), insan karaciğer greft ex vivo makine perfüzyon için bir yöntem tarif eder.

Subnormothermic Makine Perfüzyon Yoluyla Fonksiyonel İnsan Karaciğer Koruma ve Kurtarma

Şiddetli organ yetersizliği nakli için marjinal böbrek greft artan kullanımı sonuçlandı. Marjinal greftler, özellikle kötü soğuk depolama tahammül çünkü bu, alternatif depolama yöntemleri ilgi tetikledi. Normotermik ex vivo böbrek perfüzyon tekniği (NEVKP) transplantasyon öncesinde böbrek greft için yeni bir koruma yöntemi temsil eder.

Normotermik<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Böbrek Koruma Böbrek Nakli Perfüzyon önce greftler

Önemli karaciğer donör kan olmadığını ve karaciğer bağış için ölçüt genişletilmiştir. Normothermic ex vivo karaciğer perfüzyon (NEVLP) değerlendirmek ve organ işlevini değiştirmek için geliştirilmiştir. Bu çalışma NEVLP bir fare modeli gösterir ve karaciğer koruma yaralanma azaltmak için pegile-katalaz, yeteneğini sınar.

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

Burada, sıçan modelinde normotermik ex situ koruma sonrası heterotopik olarak implante edilen bir kalbin değerlendirme protokolünü sunuyoruz.

Normotermik Ex-Situ Perfüze Heterotopik Kalp Transplantasyonunun Sıçan Modeli

Burada açıklanan karaciğer normotermik makine perfüzyonunun (NMP) domuz modeli, NMP'yi bir koruma stratejisi, canlılık değerlendirmesi için bir araç ve organ onarımı için bir platform olarak incelemek için başarıyla kullanılabilir. Yüksek bir çeviri değerine sahiptir, ancak teknik olarak zorlu ve emek yoğundur.

Domuz Normomik İzole Karaciğer Perfüzyonu

Fare karaciğerleri için normotermik ex vivo karaciğer perfüzyonu (NEVLP) sistemi oluşturuldu. Bu sistem mikrocerrahide deneyim gerektirir ancak tekrarlanabilir perfüzyon sonuçlarına izin verir. Fare karaciğerlerini kullanma yeteneği, yeni perfüzyon katkı maddelerini tanımlamak için moleküler yolakların araştırılmasını kolaylaştırır ve organ onarımına odaklanan deneylerin yürütülmesini sağlar.

Normothermic Ex Vivo Karaciğer Makinesi Farede Perfüzyon

Bu protokol, donör karaciğerin korunması için değişken sıcaklık kontrollü Makine Perfüzyonu (MP) ve ardından ortotopik karaciğer nakli (OLTx) kullanan bir domuz modeli oluşturma metodolojisini ana hatlarıyla belirtir. Dolaşım ölümü (DCD) karaciğerinden sonra donör bağışı kullanarak OLTx'in başarı oranını teşvik etmeyi ve istikrarlı bir model oluşturmayı amaçlamaktadır.

Dolaşım Ölümü (DCD) Karaciğeri Sonrası Domuz Donunun Perfüzyon ve Ortotopik Karaciğer Nakli ile Korunması

Bu protokol, alıcı bir fareye daha sonra transfer edilmek üzere fare böbreğinin ex vivo normotermik makine perfüzyonu ile uygulanmasını tanımlar.

Nakil için Fare Böbreklerinin Normothermic Makine Perfüzyonu

Burada, klinik öncesi biyomedikal araştırmalarda daha erişilebilir, uygun maliyetli ve yinelemeli kullanım sağlayan, mevcut platformların yüksek maliyetinin ve sınırlı esnekliğinin üstesinden gelmek için tasarlanmış açık kaynaklı, değiştirilebilir bir normotermik ex vivo perfüzyon sistemi için bir protokol sunuyoruz.

Araştırmacı bilim adamları için tasarlanmış açık kaynaklı bir Normothermic perfüzyon sistemi

Öğrenin, donör karaciğerlerde oksijenli normotermik makine perfüzyonu protokolünü uygulamayı. Bu yöntem, iskemi ve soğuk hasarını azaltarak greft canlılığını değerlendirmeye yardımcı olur.

Donör karaciğerleri Ex Situ Normotermik Makinesi Perfüzyonu

Daha fazla video keşfet