Name: EAE Ratlarda Merkez Sinir Sistemi Mononükleer Hücreleri İzolasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Öğrenin, EAE sıçanlarında merkez sinir sistemi mononükleer hücre izolasyonunu. Kalp perfüzyonu ve Percoll gradyanı kullanarak kan kontaminasyonunu önleyin ve akış sitometrisi için canlı hücreler elde edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Derinden sıçanlarda uyutmak. % 70 etanol ile Sprey ve kan damarları hücreleri (sol ventrikül ile sağ kulakçıklar ve serpmek kesim) kaldırmak için 10 dakika süreyle PBS ile kardiyak perfüzyon. </li><li> Buz gibi soğuk PBS içeren 50 ml&#39;lik bir tüp içinde beyin ve omurilik ve yer çıkarın. Buz gibi soğuk PBS 10 ml içeren bir 10 cm petri yerleştirilen 70 mm hücre süzgeç beyin ve omurilik kesin. 1 ml steril bir şırınga pistonu geri kullanarak hücre süzgecinden her organın parçası basın. 50 ml tüp içine buz üzerinde bir tek hücre süspansiyonu toplayın. Hücre süzgeç PBS ile yıkayın ve çözüm netleşene kadar tüp eklemek. </li><li> G. 390 8-10 dakika santrifüj </li><li> 10 ml PBS + 70% Percoll üzerine 20 ml PBS +% 30 Percoll ve bindirme hücrelerin tekrar </li><li> 390 g oda sıcaklığında 20 dakika santrifüjleyin. </li><li> Tüpün üstüne yağ çıkarın. Arayüzü hücreleri toplamak ve PBS ile iki kez yıkayın. Sayın. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Bu prosedür, canlı hayvanlar ile ilgili tüm prosedürler, kurumun hayvan kullanımı ve bakımı komitesi tarafından onaylanmış olması gerekir. Biz bir veteriner hekim veya bir veteriner teknisyeni, hayvan öncesi ve işlem sırasında verilen anestezi yeterli bir düzeyde sağlamak için ilk kalp perfüzyonları yaparken mevcut olması ve hayvanların gereksiz yere acı veya sıkıntı tabi olmadığını tavsiye ederiz.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, steril</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci, 70 um</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

eae ratlarda merkez sinir sistemi mononükleer hücreleri İzolasyon

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE, 1), ya da bir enfeksiyon, çocuk felci, Lyme neuroborreliosis, ya da nörosifiliz olarak MSS, bağışıklık yanıtı gibi merkezi sinir sistemi (MSS) yönelik bir otoimmün hastalık eğitim olsun, genellikle MSS-infiltre bağışıklık hücrelerini izole etmek için gerekli. Bu video protokol EAE ile sıçan CNS (ÇUŞ) mononükleer hücreleri izole etmek için nasıl göstermektedir. Bu prosedürün ilk adımı MSS sulama kan damarlarının kan kalmasını sağlamak için tuzlu su çözeltisi ile kemirgen kardiyak perfüzyon gerektirir. Herhangi bir kan kontaminasyon yapay görünür MSS-infiltre ÇUŞ sayısı artacak ve bağışıklık sızmak görünür kompozisyonu değiştirebilir. Daha sonra, tek bir hücre süspansiyonu hazırlamak için sonraki dilaceration sıçan beyin ve omurilik nasıl çıkarılacağını göstermektedir. Bu süspansiyon ÇUŞ izole etmek için bir iki katmanlı Percoll degrade ayrılır. Yıkadıktan sonra, bu hücreler daha sonra gerekli tüm prosedür geçmesi hazırız. Bu yordamı kullanarak izole edilen mononükleer hücreler canlı ve elektrofizyoloji, flow sitometri (FACS), ya da biyokimya için kullanılabilir. Tekniği steril koşullar altında yapılır (bir doku kültürü kaputu steril alet kullanarak) hücreleri de doku kültürü ortamında yetiştirilen olabilir. Belli bir hücre popülasyonu daha fazla manyetik ayırma işlemleri ya da bir FACS kullanılarak temizlenmiş olabilir.

Bu video sıçanlarda deneysel otoimmün ensefalomyelit ile merkezi sinir sistemi mononükleer hücreleri izole etmek için nasıl göstermektedir.

EAE Ratlarda Merkez Sinir Sistemi Mononükleer Hücreleri İzolasyon

İster deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE, 1) gibi merkezi sinir sistemine (MSS) yönelik bir otoimmün hastalık, ister...

Merhaba, ben Christine Beaton. California Üniversitesi Irvine'deki Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde, George Chen'in laboratuvarında araştırma görevlisiyim. Bugün size sıçanların merkezi sinir sisteminden mononükleer hücrelerin nasıl izole edileceğini göstereceğim.Bu prosedür, merkezi sinir sisteminde herhangi bir kan kontaminasyonu kalmaması için kardiyak perfüzyon gerçekleştirmek amacıyla sıçanın derin şekilde anesteziye alınmasını içerir. Ardından beyin ve omuriliği çıkaracağız; bir hücre süzgeci kullanarak tek hücre süspansiyonu hazırlayacağız ve ardından çift katmanlı percoll gradyanı kullanarak mononükleer hücreleri izole edeceğiz. Öyleyse başlayalım.Şimdi kardiyak perfüzyon yapmaya hazırım, bu yüzden bunun için ihtiyacım olan tüm malzemeleri göstereceğim. İlk olarak bir Bell kavanozuna ihtiyacımız var ve altına uçucu anestezikle ıslatılmış kağıt havlular yerleştirdik. Halotan veya izofluran kullanabilirsiniz.Sırada, sıçanı sabitleyecek bir düzenek ve kanı toplayacak bir kaba ihtiyacımız var. Sıçanlara perfüzyon uygulamak için bu geçici düzeneği hazırladık. 21 gauge bir iğne kullanacağız ve bir IV perfüzyon sistemi aracılığıyla yer çekimi ile beslenen bir salin çözeltisi perfüze edeceğiz.Bu sistemlerden birine erişiminiz yoksa, birkaç şırıngayı salinle doldurup manuel olarak perfüzyon da yapabilirsiniz. Ancak bu yöntem çok daha kolaydır. Ayrıca, içine Kim wipes yerleştirdiğimiz 10 ml'lik bir şırınga gövdesine de ihtiyacımız var.Ardından, işlem sırasında sıçanın derin anestezi altında kaldığından emin olmak için burnuna uygulamak üzere bir miktar anestezik ekleyeceğim. Tabii ki, ardından enstrümanlara ihtiyacınız olacak. Bugün hücreleri kültüre almayacağım için steril bir işlem uygulamayacağım.Kullandığım tüm enstrümanlar steril değildir. Ancak hücrelerinizi kültüre etmek isterseniz, steril enstrümanlar kullanmak isteyebilirsiniz. Bu videonun amaçları doğrultusunda, ölmüş bir sıçan kullanacağım.Prosedürü size adım adım gösterebilmek için yavaşça uygulayacağım. Elbette, gerçek bir prosedürde sıçanın derin anestezi altında olması ancak ölmemiş olması gerekir. Kalbin hâlâ atıyor olmasını istersiniz.Öyleyse bu sıçanla başlayalım. Sıçanı sırtı bana bakmayacak şekilde yerleştirdim ve ıslatılmış anestezi mendillerini burnunun üzerine koydum. Ardından yapacağım ilk şey, sıçanın derinlemesine anestezi altında olduğunu kontrol etmek olacak.Bu nedenle, her bir işlemden önce bunu yapmanız gerekir. Cımbızla sıçanı sıkıştırıyorum ve hiçbir tepki oluşmuyor. Eğer herhangi bir tepki olursa, sıçanın derin anestezide olduğundan emin olmak için onu tekrar belger'e yerleştirmeniz gerekir.Ardından, sıçanın üst yarısını ıslatmak için %70 etanol kullanacağım. Sonrasında göğüs boşluğunu açacağım. Bu yüzden önce deriyi keseceğim ve yan taraftan açacağım.Ardından boşluğun kendisini açacağım. Buradaki kütle kalptir. Burada sağ atriumu görebilirsiniz.Kanın dışarı akmasını sağlamak için burayı keseceğim. Ardından tüm vücuda perfüzyon yapmak için iğnemi sol ventriküle yerleştirmem gerekiyor. Bu yüzden iğnemi tam olarak buraya yerleştireceğim.İğne yerleştirildikten sonra, salinin akışını sağlamak için IV tüpünü açacağım ve bunu beş ila 10 dakika boyunca bekleteceğim. Eğer perfüzyon iyiyse, kanın sıçan vücudundan ayrıldığını gösteren kırmızı nabzın, kırmızı burnun ve elbette sıçan gözlerinin renginin solduğunu göreceksiniz. Bu da perfüzyonun iyi olması gerektiği anlamına gelir.Kardiyak perfüzyon sonrası fare buradadır. Gördüğünüz üzere, bu farenin burnu, kulakları ve gözleri artık pembe veya kırmızı değildir. Tamamen beyazdırlar, bu da perfüzyonun başarılı olduğunu göstermektedir.Kanın tamamı veya çoğu sıçanın vücudundan çıkmıştır. Sıçan kardiyak perfüzyon işleminden geçtiğine göre, şimdi başını kesmem gerekiyor. Sıçanı dekapite etmeliyim.Bunun için standart laboratuvar ekipmanlarını kullanacağım. Şimdi sıçanın beynini çıkaracağım. Tüylerin her yere dağılmasını önlemek için tüm kürkü %70 ethanol ile ıslatacağım.Ardından öncelikle deriyi çıkaracağım. Beyni histoloji için kullanmayacağım ve küçük parçalara ayıracağım için, çıkarma işlemini çok temiz bir şekilde yapmaya aşırı özen göstermiyorum. Tek parça halinde, makasımı beynin omuriliğe bağlandığı şu noktada, kafatasının tabanına yerleştireceğim.Kemikleri her iki taraftan keseceğim ve ardından üst kısmı çıkaracağım. Bunu tekrar tekrar yapacağım. İşte beynin tamamen açığa çıkmış hali.Gördüğünüz gibi, beyin tamamen berrak olduğu için perfüzyon iyi çalıştı. Perfüzyon yapılmamış bir hayvanda, beynin üst tabakasının tamamen kırmızı kılcal damarlarla, yani kırmızı kan kılcal damarlarıyla kaplı olduğunu görürdünüz; burada bunları hiç görmüyorsunuz, bu da perfüzyonun başarılı olduğu anlamına geliyor. Şimdi, olfaktör bulbu geride bırakmadığımdan emin olarak beyni çıkaracağım ve buzlu PBS içeren bir tüpe yerleştireceğim.Şimdi, bütünlüğünü korumak için çok fazla dikkat etmeden beyni PBS tüpüne yerleştiriyorum; optik sinirleri keseceğim ve ardından bir spatula kullanarak beyni oldukça kolay bir şekilde çıkaracağım. Şimdi aynı sıcandan omuriliği çıkaracağım. Burada da, omuriliği küçük parçalara ayıracağımız için, tamamını çıkardığım sürece çok temiz bir şekilde çıkarmaya aşırı dikkat etmeyeceğim.Öncelikle deri boyunca omurga hattı üzerinden kesi yapıyorum ve omurga burada görünür hale geliyor. Ardından, omurganın tamamı açığa çıkana kadar buradaki etleri temizleyeceğim. Ve tam burada omuriliği görebilirsiniz.Böylece bir farede, her iki ucu kesip şırıngayla PBS püskürtebilirsiniz ve omurilik neredeyse tek parça halinde çıkacaktır. Ancak sıçanlarda bu kadar kolay değildir. Omurilik kanalını kesip açmam ve omuriliği dışarı çıkarmam gerekir.Şimdi her iki taraftan da kesiyorum ve beyinde yaptığım gibi, omuriliği açığa çıkarmak için kemiği kesip çıkarıyorum. Beyinde olduğu gibi, omuriliğin tamamen beyaz olması kardiyak perfüzyonun başarılı olduğunu göstermektedir. Bu işlemi tüm omurga boyunca gerçekleştireceğim.Sağ kalça hizasına, yani tam buraya kadar iniyorum. Ardından cımbızları kullanarak, görüntü pek estetik olmayacak ancak spinal kordu çekip çıkaracağım ve beynin bulunduğu tüpe yerleştireceğim. Böylece tüpümde sıçanın hem beyni hem de spinal kordu bulunuyor ve artık tek hücre süspansiyonunu hazırlamaya hazırım.Şimdi merkezi sinir sistemimden tek hücre süspansiyonu hazırlamaya hazırım. Bunun için ihtiyacım olanlar; içine 70 mikronluk hücre süzgeci yerleştireceğim 10 santimetrelik bir petri kabı, bir mililitrelik şırınga pistonu, cımbız ve makastır.Numunemi hücre süzgecine yerleştireceğim ve tüpte hiçbir şey kalmadığından emin olacağım. Ardından, hem beyni hem de omuriliği karışık şekilde küçük parçalara ayıracağım. Her şey tamamen kıyıldığında, O'Neill şırıngasının pistonunu kullanarak numuneyi süzgeçten geçireceğim.Tek tek hücreler geçtikçe, hücre ayıklayıcının dışındaki PBS'nin giderek daha bulanık hale geldiğini göreceksiniz. Hücre süspansiyonumu karıştırmak isteseydim, bunu elbette bir doku kültürü kabininde yapardım ve içine parmaklarımı sokmazdım. PBS bulanıklaştığına göre, onu ilk kez toplayacağım ve 50 ml'lik bir tüpe koyacağım.Ancak gözlemlemeye devam edeceğim ve hücre süzgecine biraz daha PBS ekleyip üzerinden bastıracağım. MSS çok fazla yağ içerdiğinden, bu tekniği kullanarak hücre süspansiyonu hazırlamanın en zor olduğu organlardan biridir. Bu nedenle tüm MSS dokusunu hücre süzgecinin üzerinden defalarca geçirdim ve tüm tek hücreli süspansiyonu topladım.Ve işte sağ taraftaki MSS'den hazırladığım tek hücre süspansiyonunu içeren, 50 ml'ye kadar PBS ile doldurduğum tüp. Şimdi, gradyan hazırlığı için bu tüpü santrifüj edeceğim; hücrelerin dönme işlemi tamamlandı. Şu an bir peletimiz var, bu nedenle süpernatantı uzaklaştıracağım ve hücrelerimi PBS içindeki %30'luk Percoll'ün 20 mililitresinde yeniden süspande edeceğim.Ardından, migrasyonu sağlamak için bunu PBS içindeki %70'lik perkolün 10 ml'si üzerine ekleyeceğim. Bu yüzden süpernatantı atıyorum. Hücrelerin pelet halinde topaklanmadığından ve tek hücre süspansiyonu şeklinde olduğundan emin olmak için peleti parçalıyorum.Şu anda tek hücre süspansiyonu halindeki MSS hücreleri süspansiyonuna sahibim. Bu hücreleri PBS içinde %30'luk Percoll'ün 20 ml'sine süspanse edeceğim ve bu 20 ml'yi PBS içinde %70'lik Percoll'ün 10 ml'si üzerine ekleyeceğim. Ardından santrifüj edeceğim.Şimdi, 20 ml'lik CNS süspansiyonunu alacağım ve işlemi kolaylaştırmak için bunu %70 Percoll katmanının üzerine yavaşça ekleyeceğim. Katmanlardan birine fenol kırmızı gibi bir boya da ekleyebilirsiniz, ancak bunun hücreler üzerinde herhangi bir etkisi olup olmadığı konusunda emin değilim. Bu nedenle bundan kaçınmaya çalışıyorum.İki katmanın birbirine karışmaması için yeterince yavaş ilerlemelisiniz, bu nedenle alt katmanınızda büyük bir türbülans oluşmasını istemezsiniz. Üst katman kalınlaştıkça hızınızı artırabilirsiniz. Böylece hücrelerimi gradyana eklemiş oldum.Yani buradaki şeffaf katman %70'lik Percoll katmanı, üstteki bulanık katman ise tek hücre süspansiyonumu içeren %30'luk Percoll katmanıdır. Şimdi bu tüpü 20 dakika boyunca santrifüje koyacağım ve eğer işlem başarılı olduysa mononükleer hücre katmanını gözlemleyebileceğim. Böylece gradyan santrifüjleme işlemini tamamlamış olduk.Bu yüzden her zamanki gibi, gradyanı santrifüj edin; çok hızlı yavaşlayıp gradyanı bozmaması için freni kapatmaya çok dikkat edin. Böylece katmanlarımızı elde etmiş olduk. Gradyanın üzerinde, hücre süspansiyonumu kontamine etmekten kaçınmak için kaldıracağım bir yağ tabakası bulunuyor.Percoll'ün %30 ve %70'lik iki katmanı arasındaki ara yüzeyde, ara yüzeyin keskin değil, bulanık olduğunu ve hücrelerin burada yer aldığını görebilirsiniz. Hücreleri aldıktan sonra, ara yüzeyin çok daha keskin hale geldiğini göreceksiniz. Bu nedenle, üst katmandaki yağın büyük bir kısmını uzaklaştırıp atık kabına koyacağım.Tamamını uzaklaştırmama gerek yok, ancak mononükleer hücreleri almak için aşağı indiğimde pipetimi tamamen kaplamayacağı kadarını uzaklaştırmak istiyorum. Şimdi yapacağım şey, başka bir transfer pipeti kullanarak arayüz seviyesine inmek ve hücrelerimi toplamak olacak. Böylece arayüzden birkaç mililitre toplamış oldum.Böylece muhtemelen elde edebileceğim tüm hücreleri oraya aktarmış oldum. O MSS'deki mononükleer hücre sayısı gerçekten çok azdı. Artık mononükleer hücrelerim tüpte bulunuyor.Tüpü 50 ml PBS ile dolduracağım ve hücreleri pelletlemek için santrifüj edeceğim; bu işlem perle'yi yıkayıp uzaklaştıracaktır. Tüm perle'den kurtulduğunuzdan emin olmak için hücreleri tam bir tüp PBS ile en az birkaç kez yıkamanızı öneririm. Bundan sonra hücreler, onlarla gerçekleştirmek istediğiniz herhangi bir prosedür için hazır olacaktır.Bugün size, sıçanların merkezi sinir sisteminden mononükleer hücrelerin nasıl izole edileceğini gösterdim. Elbette, bu mononükleer hücreleri elde ettikten sonra, örneğin popülasyon içerisinden T lenfositlerini izole etmek için onları daha da saflaştırabilirsiniz. Bu hücrelerle yapacağım işlem, beynimdeki hücre popülasyonlarını tespit etmek için akış sitometrisi analizi gerçekleştirmek olacaktır.Hücre izolasyonunuzda başarılar dileriz.

isolation-mononuclear-cells-from-central-nervous-system-rats-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Mevcut makalede, verimli, etkin bir şekilde akışını sitometrik analizler için kullanılabilir beyin ve omurilik dokularında mononükleer hücreleri izole etmek için hızlı bir protokol tanımlamaktadır.

Beyin ve Omurilik Mononükleer Hücreleri İzolasyon Percoll Degradeler

Bu videoda, yoğunluk gradyanlı santrifüjleme kullanarak bir farenin beyninden mononükleer hücrelerin izolasyonunu gerçekleştiriyoruz. İzole edilmiş mononükleer hücre süspansiyonu, daha fazla aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Fare Beyninden Mononükleer Hücre İzolasyonu: Beyinde Yerleşik Mononükleer Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yoğunluk Gradyanlı Santrifüj Tekniği

Bu makale, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modelinin indüksiyon ve skorlama yöntemlerini, çeşitli hastalık evrelerinde sırasıyla akış sitometrisi ve kantitatif PCR kullanılarak lenf düğümleri, dalak, kan ve omurilikteki immün hücre dağılımı ve mRNA sitokin seviyelerinin değerlendirilmesi ile birlikte açıklamaktadır.

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Ayrıntılı olarak mikroglial işlevini anlamak için çaba olgun vivo içinde microglia özelliklerini özetlemek mikroglial kültür modellerin eksikliği tarafından engel. Bu iletişim kuralı sağlam çok ramified olgun sıçan microglia tanımlanan-orta koşullar altında yaşama korumak için tasarlanmış bir yalıtım ve kültür yaklaşım anlatılmaktadır.

Yalıtım ve dinamik bir teşvik etmek kemirgen Microglia kültürünü Morfoloji Serum-Alerjik orta Ramified

Bu protokolün amacı lissencephalic ve gyrencephalic omurgalıların merkezi sinir sisteminin birden fazla bölgesinden mikrodamarları izole etmektir.

Beş Omurgalı Grubu Arasında Merkezi Sinir Sistemi Mikrodamarlarının Güvenilir İzolasyon

Biz yetişkin bir fare beyin yarımkürenin farklı parçalanmış bölgelerinden mikroglia izolasyoniçin bir protokol sağlamak, tam uzunlukta transkripsiyon derin tek hücreli RNA sıralama için yarı otomatik kütüphane hazırlık izledi. Bu yöntem, sağlık ve hastalık mikroglia fonksiyonel heterojenite açıklığa kavuşturmak için yardımcı olacaktır.

Derin Tek Hücreli RNA Sıralamaiçin Bir Yetişkin Fare Beyin Yarımküre'den Bölgeye Özgü MikrogliaNın İzolasyon

Bu el yazması farelerde aktif deneysel deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) indüklemek için bir protokol sunar. Merkezi sinir sisteminde (CNS) infiltrasyon lenfositlerin izolasyon ve karakterizasyonu için bir yöntem de lenfositler CNS otoimmün hastalığın gelişiminde nasıl rol olduğunu göstermek için sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Merkezi Sinir Sisteminde Lenfosit Infiltrasyonunun Akış Sitometrik Analizi

Bu makale, beyin, omurilik ve meninksler dahil olmak üzere merkezi sinir sistemi içindeki yerleşik ve periferik olarak türetilmiş bağışıklık hücrelerini incelemek için optimize edilmiş iki protokol sunmaktadır. Bu protokollerin her biri, kararlı durum ve enflamatuar koşullar altında bu bölmeleri işgal eden hücrelerin işlevini ve bileşimini belirlemeye yardımcı olur.

İmmün hücrelerin Aşağı Akış Analizi için Merkezi Sinir Sistemi Dokularının ve İlişkili Meninkslerin İzole Edilmesi

Canlı sıçanların beyinlerinden nöral kök hücrelerin ve oligodendrosit progenitör hücrelerinin izolasyonu için bir yöntem burada deneysel olarak ayrıntılı olarak sunulmaktadır. Refahlarından ödün vermeden bu hücrelerin aynı hayvanlardan birden fazla toplanmasına izin verir.

Canlı Sıçanlardan Nöral Kök Hücrelerin ve Oligodendrosit Progenitör Hücrelerin İzolasyonuna Yönelik "Beyin Sağım" Yöntemi

Bu araştırma, sıçan kemik iliğinden bol miktarda nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) izole etmek için iki tekniği özetlemektedir. Bir yöntem, ticari bir nötrofil izolasyon kitini yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile birleştirirken, diğeri yalnızca yoğunluk gradyanlı santrifüjlemeyi kullanır. Her iki yaklaşım da periferik kan nötrofillerinden daha iyi fonksiyonel NET'ler verir.

Karşılaştırılabilir Kapasiteye Sahip Sıçan Kemik İliği Nötrofillerini İzole Etmek için Benzersiz Yaklaşım

Bugüne kadar, tüm ana merkezi sinir sisteminde yerleşik hücre tiplerinin aynı fareden eşzamanlı izolasyonu için protokoller karşılanmamış bir taleptir. Protokol, nöroinflamasyon sırasında karmaşık hücresel ağları araştırmak ve aynı anda gerekli fare sayılarını azaltmak için naif ve deneysel otoimmün ensefalomiyelit farelerinde uygulanabilir bir prosedürü göstermektedir.

Yetişkin Otoimmün Ensefalomiyelit Farelerinden Başlıca Merkezi Sinir Sisteminde Yerleşik Hücre Tiplerinin Eşzamanlı İzolasyonu

Öğrenin, EAE sıçanlarında merkez sinir sistemi mononükleer hücre izolasyonunu. Kalp perfüzyonu ve Percoll gradyanı kullanarak kan kontaminasyonunu önleyin ve akış sitometrisi için canlı hücreler elde edin.

EAE Ratlarda Merkez Sinir Sistemi Mononükleer Hücreleri İzolasyon

Daha fazla video keşfet