Name: EAE Ratlarda Merkez Sinir Sistemi Mononükleer Hücreleri İzolasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Öğrenin, EAE sıçanlarında merkez sinir sistemi mononükleer hücre izolasyonunu. Kalp perfüzyonu ve Percoll gradyanı kullanarak kan kontaminasyonunu önleyin ve akış sitometrisi için canlı hücreler elde edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Derinden sıçanlarda uyutmak. % 70 etanol ile Sprey ve kan damarları hücreleri (sol ventrikül ile sağ kulakçıklar ve serpmek kesim) kaldırmak için 10 dakika süreyle PBS ile kardiyak perfüzyon. </li><li> Buz gibi soğuk PBS içeren 50 ml&#39;lik bir tüp içinde beyin ve omurilik ve yer çıkarın. Buz gibi soğuk PBS 10 ml içeren bir 10 cm petri yerleştirilen 70 mm hücre süzgeç beyin ve omurilik kesin. 1 ml steril bir şırınga pistonu geri kullanarak hücre süzgecinden her organın parçası basın. 50 ml tüp içine buz üzerinde bir tek hücre süspansiyonu toplayın. Hücre süzgeç PBS ile yıkayın ve çözüm netleşene kadar tüp eklemek. </li><li> G. 390 8-10 dakika santrifüj </li><li> 10 ml PBS + 70% Percoll üzerine 20 ml PBS +% 30 Percoll ve bindirme hücrelerin tekrar </li><li> 390 g oda sıcaklığında 20 dakika santrifüjleyin. </li><li> Tüpün üstüne yağ çıkarın. Arayüzü hücreleri toplamak ve PBS ile iki kez yıkayın. Sayın. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Bu prosedür, canlı hayvanlar ile ilgili tüm prosedürler, kurumun hayvan kullanımı ve bakımı komitesi tarafından onaylanmış olması gerekir. Biz bir veteriner hekim veya bir veteriner teknisyeni, hayvan öncesi ve işlem sırasında verilen anestezi yeterli bir düzeyde sağlamak için ilk kalp perfüzyonları yaparken mevcut olması ve hayvanların gereksiz yere acı veya sıkıntı tabi olmadığını tavsiye ederiz.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, steril</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci, 70 um</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

eae ratlarda merkez sinir sistemi mononükleer hücreleri İzolasyon

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE, 1), ya da bir enfeksiyon, çocuk felci, Lyme neuroborreliosis, ya da nörosifiliz olarak MSS, bağışıklık yanıtı gibi merkezi sinir sistemi (MSS) yönelik bir otoimmün hastalık eğitim olsun, genellikle MSS-infiltre bağışıklık hücrelerini izole etmek için gerekli. Bu video protokol EAE ile sıçan CNS (ÇUŞ) mononükleer hücreleri izole etmek için nasıl göstermektedir. Bu prosedürün ilk adımı MSS sulama kan damarlarının kan kalmasını sağlamak için tuzlu su çözeltisi ile kemirgen kardiyak perfüzyon gerektirir. Herhangi bir kan kontaminasyon yapay görünür MSS-infiltre ÇUŞ sayısı artacak ve bağışıklık sızmak görünür kompozisyonu değiştirebilir. Daha sonra, tek bir hücre süspansiyonu hazırlamak için sonraki dilaceration sıçan beyin ve omurilik nasıl çıkarılacağını göstermektedir. Bu süspansiyon ÇUŞ izole etmek için bir iki katmanlı Percoll degrade ayrılır. Yıkadıktan sonra, bu hücreler daha sonra gerekli tüm prosedür geçmesi hazırız. Bu yordamı kullanarak izole edilen mononükleer hücreler canlı ve elektrofizyoloji, flow sitometri (FACS), ya da biyokimya için kullanılabilir. Tekniği steril koşullar altında yapılır (bir doku kültürü kaputu steril alet kullanarak) hücreleri de doku kültürü ortamında yetiştirilen olabilir. Belli bir hücre popülasyonu daha fazla manyetik ayırma işlemleri ya da bir FACS kullanılarak temizlenmiş olabilir.

Bu video sıçanlarda deneysel otoimmün ensefalomyelit ile merkezi sinir sistemi mononükleer hücreleri izole etmek için nasıl göstermektedir.

EAE Ratlarda Merkez Sinir Sistemi Mononükleer Hücreleri İzolasyon

İster deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE, 1) gibi merkezi sinir sistemine (MSS) yönelik bir otoimmün hastalık, ister...

Merhaba, ben Christine Beaton. California Üniversitesi Irvine'deki Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde, George Chen'in laboratuvarında araştırma görevlisiyim. Bugün size sıçanların merkezi sinir sisteminden mononükleer hücrelerin nasıl izole edileceğini göstereceğim.Bu prosedür, merkezi sinir sisteminde herhangi bir kan kontaminasyonu kalmaması için kardiyak perfüzyon gerçekleştirmek amacıyla sıçanın derin şekilde anesteziye alınmasını içerir. Ardından beyin ve omuriliği çıkaracağız; bir hücre süzgeci kullanarak tek hücre süspansiyonu hazırlayacağız ve ardından çift katmanlı percoll gradyanı kullanarak mononükleer hücreleri izole edeceğiz. Öyleyse başlayalım.Şimdi kardiyak perfüzyon yapmaya hazırım, bu yüzden bunun için ihtiyacım olan tüm malzemeleri göstereceğim. İlk olarak bir Bell kavanozuna ihtiyacımız var ve altına uçucu anestezikle ıslatılmış kağıt havlular yerleştirdik. Halotan veya izofluran kullanabilirsiniz.Sırada, sıçanı sabitleyecek bir düzenek ve kanı toplayacak bir kaba ihtiyacımız var. Sıçanlara perfüzyon uygulamak için bu geçici düzeneği hazırladık. 21 gauge bir iğne kullanacağız ve bir IV perfüzyon sistemi aracılığıyla yer çekimi ile beslenen bir salin çözeltisi perf

isolation-mononuclear-cells-from-central-nervous-system-rats-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Mevcut makalede, verimli, etkin bir şekilde akışını sitometrik analizler için kullanılabilir beyin ve omurilik dokularında mononükleer hücreleri izole etmek için hızlı bir protokol tanımlamaktadır.

Beyin ve Omurilik Mononükleer Hücreleri İzolasyon Percoll Degradeler

Bu videoda, yoğunluk gradyanlı santrifüjleme kullanarak bir farenin beyninden mononükleer hücrelerin izolasyonunu gerçekleştiriyoruz. İzole edilmiş mononükleer hücre süspansiyonu, daha fazla aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Fare Beyninden Mononükleer Hücre İzolasyonu: Beyinde Yerleşik Mononükleer Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yoğunluk Gradyanlı Santrifüj Tekniği

Bu video, ötenazi uygulanmış sıçanlardan beyin mikro damarlarını izole etme sürecini göstermektedir. Beynin diseksiyonunu, dokunun temizlenmesini ve mekanik sindirimi ve ardından mikro damarların saf fraksiyonunu izole etmek için tekrarlanan santrifüjlemeyi içerir.

Sıçan Beyninden Nörovasküler Ünitelerin İzolasyonuna Yönelik Bir Yöntem

Bu makale, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modelinin indüksiyon ve skorlama yöntemlerini, çeşitli hastalık evrelerinde sırasıyla akış sitometrisi ve kantitatif PCR kullanılarak lenf düğümleri, dalak, kan ve omurilikteki immün hücre dağılımı ve mRNA sitokin seviyelerinin değerlendirilmesi ile birlikte açıklamaktadır.

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Ayrıntılı olarak mikroglial işlevini anlamak için çaba olgun vivo içinde microglia özelliklerini özetlemek mikroglial kültür modellerin eksikliği tarafından engel. Bu iletişim kuralı sağlam çok ramified olgun sıçan microglia tanımlanan-orta koşullar altında yaşama korumak için tasarlanmış bir yalıtım ve kültür yaklaşım anlatılmaktadır.

Yalıtım ve dinamik bir teşvik etmek kemirgen Microglia kültürünü Morfoloji Serum-Alerjik orta Ramified

Bu protokolün amacı lissencephalic ve gyrencephalic omurgalıların merkezi sinir sisteminin birden fazla bölgesinden mikrodamarları izole etmektir.

Beş Omurgalı Grubu Arasında Merkezi Sinir Sistemi Mikrodamarlarının Güvenilir İzolasyon

Biz yetişkin bir fare beyin yarımkürenin farklı parçalanmış bölgelerinden mikroglia izolasyoniçin bir protokol sağlamak, tam uzunlukta transkripsiyon derin tek hücreli RNA sıralama için yarı otomatik kütüphane hazırlık izledi. Bu yöntem, sağlık ve hastalık mikroglia fonksiyonel heterojenite açıklığa kavuşturmak için yardımcı olacaktır.

Derin Tek Hücreli RNA Sıralamaiçin Bir Yetişkin Fare Beyin Yarımküre'den Bölgeye Özgü MikrogliaNın İzolasyon

Bu el yazması farelerde aktif deneysel deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) indüklemek için bir protokol sunar. Merkezi sinir sisteminde (CNS) infiltrasyon lenfositlerin izolasyon ve karakterizasyonu için bir yöntem de lenfositler CNS otoimmün hastalığın gelişiminde nasıl rol olduğunu göstermek için sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Merkezi Sinir Sisteminde Lenfosit Infiltrasyonunun Akış Sitometrik Analizi

Canlı sıçanların beyinlerinden nöral kök hücrelerin ve oligodendrosit progenitör hücrelerinin izolasyonu için bir yöntem burada deneysel olarak ayrıntılı olarak sunulmaktadır. Refahlarından ödün vermeden bu hücrelerin aynı hayvanlardan birden fazla toplanmasına izin verir.

Canlı Sıçanlardan Nöral Kök Hücrelerin ve Oligodendrosit Progenitör Hücrelerin İzolasyonuna Yönelik "Beyin Sağım" Yöntemi

Bu araştırma, sıçan kemik iliğinden bol miktarda nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) izole etmek için iki tekniği özetlemektedir. Bir yöntem, ticari bir nötrofil izolasyon kitini yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile birleştirirken, diğeri yalnızca yoğunluk gradyanlı santrifüjlemeyi kullanır. Her iki yaklaşım da periferik kan nötrofillerinden daha iyi fonksiyonel NET'ler verir.

Karşılaştırılabilir Kapasiteye Sahip Sıçan Kemik İliği Nötrofillerini İzole Etmek için Benzersiz Yaklaşım

Bugüne kadar, tüm ana merkezi sinir sisteminde yerleşik hücre tiplerinin aynı fareden eşzamanlı izolasyonu için protokoller karşılanmamış bir taleptir. Protokol, nöroinflamasyon sırasında karmaşık hücresel ağları araştırmak ve aynı anda gerekli fare sayılarını azaltmak için naif ve deneysel otoimmün ensefalomiyelit farelerinde uygulanabilir bir prosedürü göstermektedir.

Yetişkin Otoimmün Ensefalomiyelit Farelerinden Başlıca Merkezi Sinir Sisteminde Yerleşik Hücre Tiplerinin Eşzamanlı İzolasyonu

Öğrenin, EAE sıçanlarında merkez sinir sistemi mononükleer hücre izolasyonunu. Kalp perfüzyonu ve Percoll gradyanı kullanarak kan kontaminasyonunu önleyin ve akış sitometrisi için canlı hücreler elde edin.

EAE Ratlarda Merkez Sinir Sistemi Mononükleer Hücreleri İzolasyon

Daha fazla video keşfet