Morris Water Maze Testi: Fare Gerilme ve Test Ortamı için Optimizasyon

Bu prosedürün amacı, 1 2 9 6 FBB arka plan suşu ile kullanılmak üzere uyarlanmış bir Morris Water labirent Protokolü kullanarak Alzheimer hastalığının bir fare modelindeki bilişsel eksiklikleri belirlemektir. Bu, önce farelerin strese bağlı performans açıklarını hafifletme görevine alıştırılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, görsel ve motorik işleyişi değerlendirmek için bir platformun su hattının bir inç üzerine kaldırıldığı görsel platform görevini kullanmaktır.

Daha sonra, platformun su yüzeyinin beş milimetre altına batırıldığı yerlerde gizli platform denemeleri yapılır. Son adım, uzamsal referans belleğini değerlendirmek ve kullanılan arama stratejisinin türünü belirlemek için platformun kaldırıldığı araştırma denemelerini kullanmaktır. Sonuç olarak, bu özel su MA prosedürü, Alzheimer hastalığının yaygın olarak kullanılan bir fare modelinde uzamsal öğrenme ve hafızanın değerlendirilmesine izin verir.

Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, fare hattının arka plan suşuna ve farelerin test edildiği ortama bağlı olarak kullanılan eğitim denemeleri ve probların sayısı gibi test prosedürlerini optimize etme gerekliliği nedeniyle mücadele edeceklerdir. Prosedürün bu kısmı, fareleri giriş ve çıkarma işlemlerini çekmeye alıştırır. İlk olarak, kutuyu rahat bir yüksekliğe kaldırılacak şekilde yerleştirin ve 21 santigrat derece sıcaklıkta ve yaklaşık bir santimetre seviyesine kadar iki litre su ile doldurun.

Fareleri test odasına getirdikten sonra, bir deneği kafesten çıkarın, denek kimliğini doğrulayın ve ardından prosedürden geçmemiş farelerden ayırt etmek için kuyruğu toksik olmayan kalıcı bir işaretleyici ile işaretleyin. Bir fareyi yaklaşık beş saniye boyunca transfer kabına yerleştirin. Ardından, fareyi beherden yavaşça ön işleme havuzuna dökün, fareyi havuzda 20 saniye bekletin.

Süre geçtikten sonra, fareyi açılandırmadan nazikçe önüne bir kepçe yerleştirin. Farenin kepçeye girmesine ve kepçeyi keşfetmesine izin verin Gerekirse, kepçeyi yavaşça kaldırırken farenin altına hafifçe kaydırarak fareyi kepçenin üzerine çıkmaya teşvik edin. Kepçe ile fareleri korkutmamaya dikkat edin.

Kafesteki her fare için bu prosedürleri 10 gün boyunca günde bir kez tekrarlayın. Her hayvandan sonra, kafesler arasında transfer kabı olan bir ağ kullanarak havuzdan dışkı boli ve yatak takımlarını alın. Her gün altı deneme ve her deneme arasında yaklaşık 10 dakika olacak şekilde birinci, ikinci ve üçüncü test günlerinde görünür eğitim gerçekleştirin.

İlk olarak, fare performans izleme yazılımını kurun ve protokolün metin bölümündeki talimatlara göre çalışma sayfalarını oluşturun. Yazılım yapılandırıldıktan sonra, herhangi bir uzamsal ipucunun gizlenmesi için önce perdeleri asarak odayı ayarlayın. Ardından, 21 santigrat derecede musluk suyuyla doldurarak küveti kurun.

Su sıcaklığının bu sıcaklığın bir derecesi içinde kalmasını sağlamak için bir termometre kullanın. Test boyunca. 13 santimetre yüksekliğe ulaşan ve 4,5 x 4,5 santimetre boyutlarında, üzerinde kabartmalı kalın S şeklinde bir karakter bulunan monte edilmiş bir bayrağa sahip olan platformu, küvetin önceden belirlenmiş ilk yerine, su yüzeyinden yaklaşık bir inç yükselecek şekilde yerleştirin.

Şimdi kafesten ilk fareyi alın. Konu kimliğini doğrulayın, doğru renkte kalıcı bir işaretleyici kullanarak kuyruğu işaretleyin ve bir transfer kabına yerleştirin. Fareyi yavaşça küvete yerleştirin.

Zamanlayıcıyı başlatın ve izleme yazılımının hayvanı takip ettiğinden emin olun. Farenin platformu bulması için iki dakikaya kadar bekleyin. Fare platformu bulduğunda, farenin platformda 20 saniye kalmasına izin verin.

Hayvan iki dakikalık süre içinde platformu bulamazsa, fareyi alın ve 20 saniye boyunca platformun üzerine yerleştirin. Platformda 20 saniye kaldıktan sonra, alıştırma eğitiminde olduğu gibi fareyi platformdan çıkarın ve kağıt havlularla kaplı ve bir ısıtma yastığı ve ısı lambası ile yaklaşık 31 santigrat dereceye kadar ısıtan ısıtılmış bir kafese 30 saniye boyunca yerleştirin. Ardından, fareyi yalnızca bir ısıtma yastığı ile tutma kafesine aktarın, ancak denemeler arasında toparlanmak için ısı lambası yok.

Enkaz küvetini bir ağ ile temizledikten sonra, gruptaki her fare için bu adımları tekrarlayın. Her fare tamamlandığında, ilk deneme, platformu önceden belirlenmiş ikinci konuma taşıyın. Perdeleri astıktan sonra dördüncü günden 10. güne kadar gizli platform eğitimi yapın.

Daha önce olduğu gibi, ipuçlarını stratejik olarak perdelerin üzerine yerleştirin. İpuçlarının büyük olduğundan ve daha iyi görünürlük için zıt renkler içerdiğinden ve küvetin içinden fareler tarafından görülebilecekleri mesafe ve yüksekliğe ayarlandığından emin olun. Yazılımı, protokolün yazılı bölümündeki talimatlara göre yapılandırın.

Ardından, küveti önce suyla doldurarak kurun, böylece platform su yüzeyinin yaklaşık beş milimetre altında olur. Platformu önceden belirlenmiş konuma yerleştirin. Platformun konumu, neredeyse tüm günler ve denemeler boyunca test edildiği için aynı kalacaktır.

It.It, hayvanların mekansal olmayan, hipokampal olmayan bir motorik strateji geliştirmemesi için başlangıç konumunu değiştirmek için gereklidir. Labirenti çözmek için, suyu opak hale getirmek için toksik olmayan beyaz ılıman boya kullanın. Bunu, yüzerken platformun üst kısmının hayvanın göz hizasından görünmemesini sağlamak için yapın.

Fareleri daha önce tanımladıktan ve işaretledikten sonra, fareyi yavaşça labirente dökün, böylece KBB duvara bakacak şekilde dökün. Her fare, benzersiz bir deneme için aynı başlangıç konumuna yerleştirilecektir. Farenin ilk serbest bırakılmasıyla, zamanlayıcıyı başlatın ve test cihazının fareler tarafından kolayca görülemeyeceği, bir alanda durun.

Hayvan platforma ulaştığında, oda içindeki uzamsal konumunu yönlendirmek için 15 saniye boyunca platformda kalmasına izin verin. Fare 60 saniye içinde platformu bulamazsa, fareyi yavaşça kaldırın ve platforma yerleştirin. Platformda 15 saniye geçirdikten sonra, fareyi labirentten çıkarın ve ısıtılmış kafese geri koyun.

Daha önce enkaz labirentini temizledikten sonra, gruptaki diğer fareler için bu prosedürleri tekrarlayın. Bu nedenle, dört ila dokuzuncu günleri test etmek için, her deneme arasında yaklaşık 20 dakika olacak şekilde günde dört gizli platform eğitimi denemesi yapın. Altıncı, yedinci ve sekizinci günlerde platform eğitiminden ve son sonda denemesinden önce sonda denemeleri gerçekleştirin.

10. günde, labirentte hiçbir platform olmaması dışında, sonda denemeleri gizli platform eğitimine benzer şekilde gerçekleştirin. Bir fareyi önceden belirlenmiş bir serbest bırakma noktasından serbest bırakın ve farenin labirentte yüzmesi için 60 saniye bekleyin 10. gündeki prob denemesinin ardından, prob denemeleri sırasında ek bir deneme yapılmamıştır. Hayvanın yol uzunluğunu, hayvanın labirentin her çeyreğinde geçirdiği sürenin yüzdesini ve bir hayvanın daha önce platformlanmış alanda kaç kez yüzdüğünü izlemek için hayvan izleme yazılımını kullanın.

Deneysel liste sekmesini açın ve veri analizi sekmesinden ve su labirenti sekmesinden ölçümleri alın. Doğrudan bir Excel elektronik tablosuna aktarın. Daha sonra verileri protokolün yazılı kısmındaki talimatlara göre analiz edin.

İnsan P 3 0 1 LTL genini içeren 41 TP 3 0 1 L fare ve 46 kontrol bu protokol kullanılarak yaklaşık 6.5 aylıkken test edildi. Bu, transgenikte Tau P 3 0 1 L ekspresyonunun üç ayını temsil eder. Her grup yaklaşık olarak eşit sayıda erkek ve dişi yol uzunluğu içeriyordu.

Görünmez platform eğitimi, kontroller ve TP 3 0 1 L fareler arasında farklılık göstermedi. Bu fark eksikliği, kontrol ve tau P 3 0 1 LM'nin görsel veya lokomotor kapasitede farklılık göstermediğini ve bu nedenle gizli deneme testindeki performans eksikliklerinin hafıza bozukluklarına atfedilebileceğini gösterir. Bununla birlikte, gizli platform eğitimi sırasında, TP 3 0 1 LM, tüm eğitim bloklarında önemli ölçüde daha uzun yol uzunlukları gösterdi.

Son olarak, dört prob denemesinde kontroller iyileştirildi. Tau P 3 0 1 L fareler kontrol etmedi, fareler görevi çözmek için mekansal bir strateji kullanabildiler ve platformu hedef bölgeye lokalize etmeyi daha iyi öğrendiler. Bu prosedürü diğer fare serileriyle kullanım için uyarlarken, kontrollerin öğrenme oranını değerlendirmek, gereken isabetli eğitim denemelerinin sayısını belirlemek ve ilk prob denemesinin ne zaman eklenmesi gerektiğini belirlemek önemlidir.