Name: Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Öğrenin, yetişkin sıçan ve insan omuriliğinden nöral kök/progenitör hücrelerin periventriküler bölgeden izolasyonunu. Laminektomi, enzimatik dissosiasyon ve yoğunluk gradyanı santrifüjasyonu ile nörosfer oluşumunu değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Spinal Cord Injury Ontario, Ontario-Çin Araştırma ve İnovasyon Fonu, Toronto General and Western Hospital Foundation ve Physicians' Services Incorporated Foundation'dan destek almak istiyor. Yazarlar, insan omuriliği NSPC kültüründe uzman tavsiyesi için Dr. Tasneem Zahir'e ve sıçan omuriliği NSPC izolasyonu konusundaki uzman tavsiyeleri için Dr. Cindi Morshead ve Iris Kulbatski'ye teşekkür eder.

Bütün hayvan prosedürleri Hayvan Bakımı Kanada Konseyi tarafından hazırlanan Deney Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Kılavuzu kurulan politikalarına uygun olarak, ON Canada Hayvan Bakım Üniversitesi Sağlık Ağı Komitesi, Toronto tarafından onaylanmıştır. İnsan omurilik dokusu hasat için onay Üniversitesi Sağlık Ağı Araştırma Etik Kurulu ve Ontario, Kanada&#39;da organ bağışı denetleyen Hayat Vakfı Trillium-Hediyelik elde edilmiştir. Diseksiyon Tamponlar ve Kültür Medya 1. Hazırlık <ol><li> Sıçan omur iliği izolasyonu için, 100 mi diseksiyon tamponu (1 x PBS +% 0.6 glikoz + 2,% penisilin-streptomisin) ile buzdolabında hazırlar. Insan omurilik için 100 mi diseksiyon tamponu (1 x HBSS +% 0.6 glikoz + 2,% penisilin-streptomisin) ile buzdolabında hazırlar. </li><li> 37 ° C&#39;de 100 mi, serum-içermeyen ortam (SFM) ve sıcak hazırlayın. SFM hazırlamak için, 2 mM L-glutamin ilave, 100 ug / mNeurobasal-A ortama l streptomisin penisilin,% 2 B27, ve% 10 hormonu karışımı. Hormon karışımı hazırlamak için, 1 olmak:% 0.6 glikoz ihtiva eden 1 DMEM / F12 ortamı, 3 mM NaHCO 3, 5 mM HEPES, 25 ng / ml insülin, 100 ug / ml apo-transferin, 10 uM putresin, 30 nM selenyum, ve 20 nM progesteron. </li><li> EFH büyüme faktörü bakımından zenginleştirilmiş kaplama ortamı hazırlanması 37 ° C de ve sıcak (SFM 20 ng / ml, EGF, 20 ng / ml bFGF, 2 ug / ml heparin ekleme). İnsan EFH insan rekombinant büyüme faktörleri (Malzeme Tabloya bakınız) içerdiğinden emin olun. </li></ol> 2. Hasat ve Yetişkin Rat Periventriküler Omurilik Doku diseksiyonu <ol><li> Etanol diseksiyon aletleri sterilize ve önceden steril tuzlu su veya otoklav aletleri durulayın. Sıçan ver - Kişinin kuruma göre (6 8 haftalık) sodyum pentobarbital (65 mg / ml 1 cc) ya da anestezi (yani,% 4 isofluorane) doz aşımı ölümcül enjeksiyon hayvan protokolü onayladı. D% 70 etanol ile sıçan arka OUSE ve geniş diseksiyon makas ile dorsal yüzeyinde deri kaldırmak. </li><li> Dorsal yüzeyine dik makas Holding, enine arka ayaklarında üstünde vertebra sütun kesti. Uzunlamasına spinöz süreçleri ortaya çıkarmak için bir Rostral yönde vertebra sütun örten dorsal kas kesmek için küçük makas kullanın. </li><li> Maruz kuyruk ucunda başlayarak, omurilik ve omurga arasındaki boşlukta spinal kanal lateral içine ekstradural rongeurs ya da küçük bir künt kemik kesme aleti takın. Lamina içine küçük kesikler (sol kemik kemerler ve omurları her tarafında spinöz proses hakkı) yapın ve dikkatlice omuriliği (Şekil 1A-D) maruz lamina uzakta soyun. Kanatlarının açısı sığ olduğundan emin olun ve altta yatan omurilik hasarlı olup böylece kordon paralel. </li><li> Tanitima rostralinde yönde laminektomi Devamtorakal ve servikal omurilik e. </li><li> Yavaşça dikkatle kabloyu serbest bırakmak için kökleri koparmaya künt doku forseps ve kullanım microscissors omurga gelen omurilik tüketim. (1,1 yukarıda tarif edilen), 4 ° C, steril sıçan diseksiyon tampon içeren bir Petri kabındaki eksize omurilik yerleştirin. Taze hazırlanmış, 4 ° C kesme tamponu içerisinde doku durulayın kullanarak makas 1 cm uzunluğundaki parçalara (Şekil 1E) içine enine omurilik kesti. </li><li> Doku her segment için, ince forseps ile doku tutmak için bir elinizi kullanın. Diğer elinizle, özenle diseksiyon kapsamı yardımıyla örten meninksler, beyaz cevher ve gri maddenin en kaldırmak için Microscissors kullanın. Alternatif olarak, ependima ve gri madde (Şekil 1F-H) çevreleyen küçük bir miktar içeren omurilik sadece periventriküler bölgeyi terk, beyaz ve gri maddenin en uzak soymak ince forseps (4 Dumont #) kullanın.</li><li> Soğuk sıçan diseksiyonu tampon içeren bir 10 cm steril Petri kabı içine disseke periventriküler doku Havuz. </li></ol> 3. Hasat ve Yetişkin İnsan Periventriküler Omurilik Doku diseksiyonu Not: diğer organlar organ nakli için kaldırılmıştır sonra İnsan omurilik dokusu yetişkin organ nakli vericilerden hasat edilir (donörler yaş 2 ile 60 yaşları arasında değişiyordu). Hayat Programı Trillium-Hediyelik hastanın ailesi araştırma amaçlı dokusunun çıkarılması için onay alır ve biz aortik kros-klemp 2 saat içinde halatlar hasat mümkün olmuştur, öyle ki zamanında bizim hasat ekibi bildirir. Erkek ve kadın yetişkin serolojisi negatif olan donörler ve hiçbir enfeksiyon kabul edilir. <ol><li> Aynı anterior poz kullanarak anterior yaklaşımla ameliyathanede steril bir şekilde Hasat doku zaten Organ Şeffaf tarafından organ için dissekelant hasat ekibi. </li><li> Büyük kaburga serpme ve büyük kan damarları dahil geri kalan doku ve organların büyük kürek Retraktörler ile geri çekilmesi yoluyla ön omuriliğe Açığa. </li><li> Rezeke edilecek omurganın istenilen uzunlukta rostral ve kaudal ucunda intervertebral diskler yoluyla kesmek için uzun bir bıçak ile monte edilmiş bir sternum testeresi kullanın. Açı testere yaklaşık 45 ° medial spinal kanal sadece kısa durdurma omurların yan kısmından üçgen çukur kesmek için. </li><li> En blok dura ile kesme önlemek için özen kavisli keskisi ve çekiç yardımı ile istenen kesimlerin vertebralarda medial yönlerini çıkarın. Sonra yavaşça dişli forseps ile dura kaplı omurilik kaldırın ve keskin kordon rostral ve kaudal uçları insizyon. Bilateral bireysel kökleri transect uzun makas ve forseps kullanın. </li><li> 4 ° spinal kord eksize segmenti yerleştirinC, steril tampon maddesi (1x HBSS +% 0.6 glikoz + 2,% penisilin-streptomisin) doku kültürü oda taşınması için büyük bir test tüpü içinde. </li> <li> Not: Genellikle, 3 - Üst torasik spinal kord 6 cm kısmın ve / veya orta-düşük torasik seviyesi mümkün olduğu kadar çabuk dolaşımda kesilmesinden sonra steril koşullar altında ameliyathanede çıkarıldı ve soğuk steril tampon yerleştirilir . dolaşımın kesilmesi ve omurilik çıkarılması arasında geçen süre bağışı için hedeflenen organlarını toplamak için gereken zamanla değişir ve 45 dakika ile 2 saat arasında değişmektedir. Kalp ve akciğerler de kaldırıldı varsa, diseksiyon yanı sıra alt servikal kord bir kısmını hasat için çok rostrally alınabilir. </li><li> 3 saat içinde genellikle hasattan sonra en kısa sürede insan omurilik dokusu parçalara ayır. Forseps ile dura ve diğer meninksler çıkarın. Taze yapılmış 4 ° C diseksiyon tamponunda omurilik dokusu durulayın ve1 cm&#39;lik bölümler halinde enine kesilmiş. </li><li> Diseksiyon kapsamı yardımıyla, her doku kesimi için doku forseps, ince forseps ve microscissors kullanarak gri maddenin en örten meninksler, beyaz cevher tüketim ve. Soğuk insan diseksiyon tampon içeren 10 cm&#39;lik bir steril Petri kabı içine ependima ve çevresindeki gri madde küçük bir miktar içerir parçalara periventriküler doku, havuz. </li></ol> 4. İzolasyon ve Kültürleme Yetişkin Rat ve İnsan Omurilik NSPCs arasında <ol><li> Laminer akış kaputu aseptik aşağıdaki adımları uygulayın. <ol><li> Microscissors 1 mm 3 parçaya disseke sıçan ya da insan periventriküler doku kıyma. </li><li> Enzimatik malzemeler / reaktiflerin tabloda gösterildiği gibi papain ayrışma kiti kullanılarak proteolitik enzimlerle kıyılmış doku ayırmak. Not: Reaktif bileşenler 4 flakon içerir; Flakon 1: Earle Dengeli Tuz Çözeltisi (EBSS) Flakon 2: Papain containing L-sistein ve EDTA, Flakon 3: Deoksiribonükleaz I (DNase) Flakon 4: Sığır serum albümini (BSA) ile ovomukoid proteaz inhibitörü. Not: Not: Papain protein yüzeyler için geniş özgüllüğe sahip bir sülfhidril proteazdır. papain Burada Carica papaya bitkisinden elde edilen lateks ve çok protein alt tabakaları daha kapsamlı daha pankreas proteazlar parçalayan bir. Ayrışma işlemi sırasında viskozitesini arttırır ve zor bir pipetleme yapacak ayrışma ortamı içinde serbest bazı hücre hasarının neden DNA bulunmaktadır. Bu nedenle, DNaz sağlam hücrelere zarar vermeden DNA sindirimi hücre izolasyon prosedürü dahil edilir. Ovomukaidler ayrışma aşamasından sonra papain aktivitesini inhibe etmek için kullanılan proteaz inhibitörleri glikoprotein edilir. </li></ol></li><li> İlk kullanımda, EBSS&#39;ye (şişe 1) 32 ml &#39;si ile, albümin ovomukoid inhibitörü karışımı (şişe 4) tekrar oluşturmak ve daha sonra 4 ° C de saklamak ve daha sonra izolasyonların için kullanımı.Not: Bu ovomukoid inhibitörü 10 mg, ml başına albümin 10 mg etkin bir konsantrasyonda bir çözelti elde edilir. </li><li> 0.5 mM EDTA, 1 mM L-sistein papain / ml 20 birim bir çözelti elde edildi, Papain şişe (şişe 2) ila EBSS&#39;ye (şişe 1) 5 ml ilave edilir. Papain tam enzimin tam aktivite sağlamak için eritilir gelinceye kadar on dakika için 37 ° C su banyosu içinde şişe yerleştirin tamamen çözündüğünde papain çözelti berrak görünen kontrol edin. </li><li> (3 şişe), bir DNase flakon EBSS&#39;ye (flakon 1) 500 ul ekleyin ve DNaz denatürasyonunu kesme duyarlı olarak hafifçe karıştırın. Yaklaşık 20 birim / ml papain ve% 0.005 DNase bir nihai konsantrasyonu elde papain ihtiva eden şişeye DNaz çözeltisi 250 ul ekle. Daha sonra kullanmak üzere DNaz flakonun dengesini kaydedin. </li><li> Yukarıda adım 4.4 gibi hazırlanan papain çözeltisi içinde kıyılmış sıçan veya insan dokusu yerleştirin. Insan dokusu izolasyonu için, ikisi arasında eşit olarak kıyılmış doku bölmekpapain küçük şişeler (yaklaşık 0.2 g / şişe). </li><li> Aktif papain çözeltisi içinde doku ayırmak ve bir rocker platformunda sabit bir ajitasyon ile 37 ° C&#39;de inkübe edilir. 0.4 gr, sırasıyla - yaklaşık 0.2 kıyılmış doku miktarına bağlı olarak 1-2 st için 45 1 saat dakikadır ve insan doku için, sıçan dokusu inkübe edin. </li><li> Bulanık bir hücre süspansiyonu elde etmek üzere geri kalan doku parçaları ayırmak için 10 ml&#39;lik bir pipet ile karışım toz haline getirin. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 300 x g&#39;de bir steril 15 ml konik tüp ve santrifüj içine hücre süspansiyonu (çözünmemiş dokusunun herhangi parçaları dahil değildir) aktarın. </li><li> Orta içeren ovomukoid bir papain inhibitörü pelet hücreleri tekrar süspansiyon. <ol><li> 15 ml konik bir tüp içinde yeniden albümin ovomukoid inhibitör çözeltisi (şişe 4) 300 | il 2.7 mi EBSS (şişe 1) karıştırılarak ovomukoid çözeltisi hazırlayın. Yukarıdaki adım 4.4 olarak kaydedildi (3 şişe) DNaz çözeltisi 150 ul ekleyin. </li><li> Süpernatant atıntanelenmiş hücreler hemen seyreltildi DNaz albümin inhibitör karışımı içinde hücre pelletini. </li></ol></li><li> Tek bir adım kesintili yoğunluk gradyan boyunca santrifüj hücre zarlarından ayrı sağlam hücreler. <ol><li> En yavaşça, 15 ml bir tüp (4 şişe), albümin-inhibitör çözeltisi 5 ml eklenmesi ve 5 ml&#39;lik bir pipet kullanılarak, aralıklı yoğunluk gradyan hazırlamak ve yavaş hücre süspansiyonu tabaka (adım 4.8 olarak yukarıda tarif edildiği gibi hazırlanmıştır), albümin inhibitör çözeltisi. </li><li> Oda sıcaklığında 6 dakika için 70 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Not: Bu sınır en az bir karıştırma sonucu etkilemeyecektir gradyanın iki tabaka arasındaki ara yüz, açıkça görülmelidir. Membran fragmanları, ara yüzeyde kalır ve ayrışmış hücrelerinin, tüpün alt pelet. </li></ol></li><li> Fare hücreleri için, süpernatan atılır ve sıçan EFH ortamı, 1 ml hücre pelletini (37 ° C&#39;de önceden ısıtılmış).Bir haemositometre ile canlı hücre yoğunluğunu sayın ve EFH bölgesindeki / ul 10 hücre yoğunluğunda bir T25 kültür şişesi içine hücreleri plaka. Sıçan dokudan hücrelerin tipik verim / ml den az 10 hücre yoğunluğunda arzu edilir yaklaşık% 80 viability.If klonal kültürleri, tohum hücreleri ile yaklaşık 2 x 10 6 hücre olup. % 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de şişeler inkübe ve 1 hafta kürelerin bir araya toplanmasının engellenmesi için kültürler rahatsız büyümeye izin verir. </li><li> İnsan hücreleri için, süpernatan atılır ve insan EFH ortamı 10 ml hücre pelletini (37 ° C&#39;de önceden ısıtılmış). 40 mikron naylon hücre süzgecinden hücre süspansiyonu filtre miyelin ve hücre zarı parçalarını almak için EFH 30 ml izledi. 5 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüj ve EFH ortamı, 1 ml hücre pelletini. </li><li> Bir haemositometre ile canlı hücre yoğunluğunu sayın ve toplam hacim içinde / oyuk 10 5 hücre yoğunluğunda 6 oyuklu kültür plakaları, insan hücreleri plaka5 ml EFH / oyuk. İnsan dokusundan gelen hücrelerin tipik bir verimi, yaklaşık% 70 canlılık ile yaklaşık 1 x 10 6 hücre olup. Böyle Matrigel gibi yapışık alt tabaka ile Ön-ceket kuyuları (aşağıya Not bakınız). 1 mi SFM: 40 ul Matrigel bir oranda seyreltilir. </li><li> Not: Alternatif olarak, poli-D-lisin / laminin, fibronektin ya da kollajen gibi diğer yapışık alt tabakalar kullanılabilir. </li><li> % 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de inkübe edin ve kültürler 1 hafta için rahatsız büyümeye izin verir. </li></ol> Yetişkin sıçan ve insan omurilik NSPCs 5. Pasajlanması <ol><li> Sıçan NSPCs küçük neurospheres ilk tohumlama 1 hafta içinde çapı yaklaşık 70 mikron oluşturacaktır; , hücre süspansiyonu toplamak 5 dakika boyunca 300 xg&#39;de santrifüj ve mekanik neurospheres ayırmak için hücre pelet öğütülerek haftalık geçiş sıçan NSPCs. </li><li> Taze sıçan EFH ortamı içeren T25 şişeler içine ayrışmış hücreleri Tohum. Seçenek olarak ise,Pasajlanması% 50 şartına sıçan orta kullanın. Pasajlanması de sıçan NSPCs tipik verim geçişi numarası ile katlanarak artar yaklaşık 5 x 10 6 hücre olduğunu. </li><li> İnsan kültürler, bir hafta sonra ilk kaplama, hücreler, alt-tabakaya yapışma sağlamak için haftada iki kez, taze EFH kültür ortamının yarısı değiştirin. Genel olarak, 1-2 hafta sonra hücreler, alt-tabakaya bağlanmış olan, bir kez taze EFH ile haftada iki kez kültür ortamının tüm hacmi değiştirin. </li><li> - 8 hafta 4 ila izdiham ulaşmadan Alt kültür hücreleri. <ol><li> De 37 ° C &#39;de yaklaşık olarak 10 dakika süre ile inkübe başına enzimatik substrat hücreleri ayırarak Alt kültür hücreleri, enzim 2 ml (Malzeme Tablo). 5 dakika boyunca 300 x g&#39;de hücre süspansiyonu, santrifüj toplamak ve yavaşça taze yapılmış EFH ortamı, 1 ml hücre pelletini. </li><li> Bir haemositometre ile canlı hücre sayımı ve 6 oyuklu kültür plakaları içine hücreleri plaka (ön-koYukarıdaki adım 4.12), 10 5 hücre yoğunluğunda / kuyuda / oyuk 5 mi EFH bir toplam hacimde konsantre edilir. Pasajlanması insan NSPCs tipik verim yaklaşık 2 x 10 6 hücre ve genellikle bu pasajda ile iki katına çıkacak. Pasajlanması arasında haftada 3 kez - Genellikle% 50 şartına EFH orta 2 kültürleri korumak. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mammalian neural stem cells.</a> Science. 287, 1433-1438 (2000).</li>
<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li>
<li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+stem+cells+from+the+adult+mouse+brain+proliferate+and+self-renew+in+response+to+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multipotential stem cells from the adult mouse brain proliferate and self-renew in response to basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 16, 1091-1100 (1996).</li>
<li>Morshead, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain%3A+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li>
<li>Weiss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+CNS+stem+cells+are+present+in+the+adult+mammalian+spinal+cord+and+ventricular+neuroaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multipotent CNS stem cells are present in the adult mammalian spinal cord and ventricular neuroaxis.</a> J Neurosci. 16, 7599-7609 (1996).</li>
<li>Martens, D. J., Seaberg, R. M., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infusions+of+exogenous+growth+factors+into+the+fourth+ventricle+of+the+adult+mouse+brain+increase+the+proliferation+of+neural+progenitors+around+the+fourth+ventricle+and+the+central+canal+of+the+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo infusions of exogenous growth factors into the fourth ventricle of the adult mouse brain increase the proliferation of neural progenitors around the fourth ventricle and the central canal of the spinal cord.</a> Eur J Neurosci. 16, 1045-1057 (2002).</li>
<li>Kulbatski, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocytes+and+radial+glia+derived+from+adult+rat+spinal+cord+progenitors%3A+morphological+and+immunocytochemical+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocytes and radial glia derived from adult rat spinal cord progenitors: morphological and immunocytochemical characterization.</a> J Histochem Cytochem. 55, 209-222 (2007).</li>
<li>Akesson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+culture+and+neuronal+survival+after+intraspinal+transplantation+of+human+spinal+cord-derived+neurospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Long-term culture and neuronal survival after intraspinal transplantation of human spinal cord-derived neurospheres.</a> Physiol Behav. 92, 60-66 (2007).</li>
<li>Dromard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+spinal+cord+harbors+neural+precursor+cells+that+generate+neurons+and+glial+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Adult human spinal cord harbors neural precursor cells that generate neurons and glial cells in vitro.</a> J Neurosci Res. 86, 1916-1926 (2008).</li>
<li>Mothe, A. J., Zahir, T., Santaguida, C., Cook, D., Tator, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem%2Fprogenitor+cells+from+the+adult+human+spinal+cord+are+multipotent+and+self-renewing+and+differentiate+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Neural stem/progenitor cells from the adult human spinal cord are multipotent and self-renewing and differentiate after transplantation.</a> PLoS One. 6, e27079(2011).</li>
<li>Huettner, J. E., Baughman, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+identified+neurons+from+the+visual+cortex+of+postnatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Primary culture of identified neurons from the visual cortex of postnatal rats.</a> J Neurosci. 6, 3044-3060 (1986).</li>
<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+expansion+of+the+adult+mouse+neural+stem+cells+using+the+neurosphere+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and expansion of the adult mouse neural stem cells using the neurosphere assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li>
<li>Singec, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+actual+sensitivity+and+specificity+of+the+neurosphere+assay+in+stem+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Defining the actual sensitivity and specificity of the neurosphere assay in stem cell biology.</a> Nat Methods. 3, 801-806 (2006).</li>
<li>Louis, S. A., Azari, H., Sharififar, S., Vedam-Mai, V., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural-colony+forming+cell+assay%3A+an+assay+to+discriminate+bona+fide+neural+stem+cells+from+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Neural-colony forming cell assay: an assay to discriminate bona fide neural stem cells from neural progenitor cells.</a> J Vis Exp. , (2011).</li>
<li>Louis, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li>
<li>Conti, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche-independent+symmetrical+self-renewal+of+a+mammalian+tissue+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Niche-independent symmetrical self-renewal of a mammalian tissue stem cell.</a> PLoS Biol. 3, e10(2005).</li>
<li>Pollard, S. M., Conti, L., Sun, Y., Goffredo, D., Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adherent+neural+stem+%28NS%29+cells+from+fetal+and+adult+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Adherent neural stem (NS) cells from fetal and adult forebrain.</a> Cereb Cortex. 16, Suppl 1. i112-i120 (2006).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Sıçan omurilik dokusu bakım diseksiyonu sırasında laminektomi yaparken omurilik zarar vermemek için dikkat edilmelidir. Bu omurilik segmentleri sağlam olduğunda periventriküler doku izole etmek daha kolaydır. Doku parçaları tam olarak tahlil tamponuna daldırılmalıdır ve örten zarları ve beyaz madde microscissors boyuna şeritler gibi kesilebilir. Alternatif olarak, ince doku forseps uzakta beyaz cevher soymak için kullanılabilir. NSPCs için izolasyon prosedürü için, sıçan ve insan omurilik do...

NSPCs kendini yenilemek ve kolayca in vitro genişletebilirsiniz sinir soyu taahhüt multipotent hücrelerdir. Onlar kendini sürekli yenileyen multipotent kök hücreleri ve daha kısıtlı atalarıdır özelliklerini görüntülemek beri nöral kök / progenitör hücrelerin karışık bir nüfus olarak bu hücrelerin bakın. NSPCs fetus ve erişkin beyin ve omurilik 1,2 hem de bulunabilir. Yetişkin olarak, NSPCs normalde sakin ve yan ventriküller 2-4 astar subventriküler bölge ve spinal kord 5,6 merkez kanal çevreleyen periventriküler bölge de dahil olmak üzere belirli niş içinde bulunur. Tipik haliyle, NSPCs EGF ve bFGF ile takviye edilmiş serumsuz ortam içinde serbest yüzen neurospheres ya da yapışık mono tabakaları, kök / progenitör hücre popülasyonları için seçin Mitojenler gibi kültürlenmiştir. Başlangıçta Reynolds ve Weiss 2 tarafından geliştirilen neurosphere deneyi, en yaygın olarak kültürlemek için kullanılan vesinir kök hücreleri genişletin. Bunlar büyüme faktörü içermeyen ortam serum içeren kaplama olduğunda NSPCs nöronlar, astrositler ve oligodendrosit ayırma yöntemi, multipotency göstermektedir. Kültürlü doku, merkezi kanal 6,7 bölgeleri içerdiğinde Multipotent, kendini yenileyen NSPCs yetişkin kemirgenden omurilik izole edilmiş ve kültürlenmiş edilebilir. Diğer bölgelerden gelen hücrelerin üretilmesi aksine yetişkin omurilikten kaynaklanan NSPCs kullanarak potansiyel avantajı, bu dokuya spesifik hücrelerin en yakın yaralanma ya da hastalık şu kayıp ya da hasarlı olan omurilik hücreleri benzer olmasıdır. Önceki çalışma yetişkin insan omurilik türetilmiş neurospheres uzun vadeli yayılır veya hücre 8,9 yeterli sayıda üretmek için geçişli olamazdı gösterdi. Ancak, kültür koşullarında değişikliklerle, biz göstererek, yetişkin insan omurilik kökenli NSPCs genişletilmesi ve nakli bildirdi kendini sürekli yenileyenve multipotent NSPCs, organ nakli donörlerinin 10 yetişkin insan omurilik izole edilebilir. Öncelikle, büyüme faktörü açısından zenginleştirilmiş bir ortam içinde bir alt-tabaka üzerine yapışık diseksiyon ve bu hücrelerin kültür içinde beyaz bir maddenin en çıkarılması, yetişkin insan omurilik NSPCs çoğalan için seçildi. Bu protokolde, yetişkin sıçan ve insan organ nakli donör, periventriküler doku diseksiyonu ve NSPCs izolasyonu, kültür ve genişlemesi omurilik hasat açıklar.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 10010023</td><td>Diseksiyon tamponu</td></tr><tr><td>1x HBSS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 14175095</td><td>Diseksiyon tamponu</td></tr><tr><td>D-glikoz</td><td>Sigma</td> <td># G-6152</td><td>Diseksiyon tamponu ve hormon karışımı için% 30 glikoz stok çözeltisi hazırlayın</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 15140-148</td><td>Diseksiyon tamponu ve kültür ortamı</td></tr><tr><td>Nörobazal-A&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 10888-022</td><td>Kültür ortamı</td></tr><tr><td>L-glutamin, 200 mM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 25030-081</td><td>Kültür ortamı</td></tr><tr><td>B27</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 12587010</td><td>Kültür ortamı</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 11885084</td><td>Hormon karışımı</td></tr><tr><td>F12</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td># 21700-075</td><td>Hormon karışımı</td></tr><tr><td>NaHCO 3</td><td>Sigma</td><td># S-5761</td><td>Hormon karışımı için %7,5 NaHCO3 stok solüsyonu hazırlayın</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>#H9136</td> Hormon <td>karışımı için 1M HEPES stok çözeltisi hazırlayın</td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma</td><td>#I-5500</td><td>Hormon karışımı</td></tr><tr><td>Apo-transferrin</td><td>Sigma</td><td>#T-2252</td><td>Hormon karışımı</td></tr><tr><td>Putrescine</td><td>Sigma</td> <td># P7505</td><td>Hormonu </td></tr><tr><td>Selenyum</td><td>Sigma</td> <td>#S-9133</td><td>Hormon karışımı</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td> <td>#P-6149</td><td>Hormon karışımı</td></tr><tr><td>EGF, fare</td><td>Sigma</td> <td>#E4127</td><td>100 & hazırlayın; B27 ve alikot cinsinden g/ml stokları; EFH orta</td></tr><tr><td>EGF, insan rekombinant</td><td>Sigma</td><td>#E9644</td><td>100 &mu hazırlayın; B27 ve alikot cinsinden g/ml stokları; EFH orta</td></tr><tr><td>bFGF, insan rekombinant</td><td>Sigma</td><td>#F0291</td><td>100 &mu hazırlayın; B27 ve alikot cinsinden g/ml stokları; EFH orta&nbsp;</td></tr><tr><td>Heparin, 10.000 U</td><td>Sigma</td><td>#H3149</td><td>Hormon karışımı ve alikotta 27.3 mg / ml stokları hazırlayın; EFH ortamı</td></tr><tr><td>Papain ayrışma kiti</td><td>Worthington Biochemicals</td><td>#LK003150</td> BSA Sodyum Pentobarbital Bimeda <td>ile EBSS, papain, DNaz, ovomucoid proteaz inhibitörü içerir</td></tr><tr><td></td><td>; MTC Hayvan Sağlığı A.Ş.</td><td>DIN 00141704</td><td></td></tr><tr><td>Doku Forsepsleri: Addisons</td><td>Güzel Bilim Araçları</td> <td># 11006-12 & nbsp;</td><td>Tırtıklı standart uç; mikro uç da mevcuttur</td></tr><tr><td>İnce Forseps: Dumont #4</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>#11241-30</td><td></td></tr><tr><td>Mikromakas</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>#15024-10</td><td>Yuvarlak saplı Vannas</td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>Bausch & Lomb</td><td>N1430</td><td></td></tr><tr><td>10 mm Petri kapları&nbsp;</td><td>Nunc</td><td>1501</td><td></td></tr><tr><td>T25 Kültür şişeleri</td><td>Nunc</td><td>156367</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; m naylon hücre süzgeci</td><td>VWR</td><td>CA21008-949</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu plakalar</td><td>Nunc</td><td>CA73520-906</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel, büyüme faktörü azaltılmış (100x)</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>Talimatlara göre çözdürün ve alikotları dondurun; 40 & mu oranında seyreltilmiş kullanın; l Matrigel: 1 ml SFM</td></tr></tbody></table>

periventriküler yetişkin rat bölgesinde ve İnsan omurilik gelen nöral kök / progenitör hücreler izolasyonu

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Yetişkin sıçan ve büyüme faktörü bakımından zenginleştirilmiş bir ortam içinde kültürlenmiş insan omurilik sinir kök / progenitör hücreleri (NSPCs) kendini yenileyen ve genişletilebilir nöral kök hücre multipotent çoğalması için izin verir. Serum koşullarda, bu multipotent NSPCs nöronlar, astrositler ve oligodendrositleri üreten, ayırt edecektir. Hasat doku bFGF (enzimatik olarak papain EDTA çözeltisi içinde çözülmüş ve daha sonra mekanik olarak, epidermal büyüme faktörü (EGF) ile desteklenmiş Neurobasal orta, temel fibroblast büyüme faktörü olduğu için kaplama, tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için ayrılmış ve kesintili bir yoğunluk gradyanı ile ayrıştırılır ) ve heparin. Yetişkin sıçan omurilik NSPCs yapışkan kültürler olarak büyütülür serbest yüzen neurospheres ve yetişkin insan omurilik NSPCs olarak kültürlenir. Bu koşullar altında, yetişkin omurilik NSPCs ön-madde hücreleri ifade belirteçleri, çoğalırlar ve sürekli geçmesi üzerine genişletilebilir. Bu hücreler olabilir bE, çeşitli uyaranlara karşı yanıt olarak, in vitro incelenmiştir ve dış faktörlerin nöral kök hücre farklılaşması incelemek için soy kısıtlama teşvik etmek için kullanılabilir. Multipotent NSPCs veya onların soyu rejeneratif onarım değerlendirmek için çeşitli hayvan modellerinde transplante edilebilir.

EFH ortam içinde süspansiyon kültürü içinde çoğaltıldığında Yetişkin sıçan omurilik hücreleri ilk kaplama 1 hafta içinde, küçük neurospheres (farklılaşmamış hücrelerin koloni) oluşturacaktır. Birincil kültürde kaplama, hücrelerin en ölür ve büyüme faktöre cevap veren bir kök hücreleri çoğalır ve EFH ortamında seçilir. Geçit 3 ile, bir çok serbest yüzen neurospheres yaklaşık 100 mikron çapında (Şekil 2A) &#39;de olacaktır. Neurospheres yuvarlak ve faz parlak, yüksek büyütme altında, sil gibi microspikes ...

Yetişkin memeli omuriliği, kültürde izole edilebilen ve genişletilebilen nöral kök/progenitör hücreler (NSPC'ler) içerir. Bu protokol, erişkin omuriliğinin periventriküler bölgesinden sıçandan ve insan organ nakli donörlerinden üretilen NSPC'lerin toplanmasını, izolasyonunu, kültürünü ve geçişini açıklar.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Bu prosedürün genel amacı, yetişkin sıçan veya insan omuriliğinin paraventriküler bölgesinden nöral kök hücreleri izole etmektir. Bu işlem, öncelikle laminektomi yoluyla omuriliğin hasat edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, omurilik enine bir santimetrelik segmentlere kesilir ve her bir omurilik segmentinden paraventriküler bölge diseke edilir.Ardından, kıyılmış doku bir milimetrelik parçalara ayrılır ve ardından enzimatik olarak dissosiye edilir. Son adım, süreksiz bir yoğunluk gradyanı boyunca santrifüjasyon ile sağlam hücrelerin ayrılması ve hücre süspansiyonunun plaklara ekilmesidir. Nihayetinde, nörosfer oluşumu ve nöral kök hücrelerin büyümesi immunofloresan mikroskopi kullanılarak değerlendirilebilir.Bugün, yetişkin sıçan omuriliğinin paraventriküler bölgesinden nöral kök hücrelerin nasıl izole edileceğini göstereceğim. Bu hücreler daha sonra, hangi eksojen faktörlerin soy kısıtlamasını teşvik ettiği veya bu hücrelerin çeşitli uyarılara veya strese nasıl tepki verdiği gibi nöral kök hücre alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olmak için kullanılabilir. Başlamak için, beraberindeki metin protokolünde açıklandığı şekilde kültür, besiyeri ve diseksiyon tamponlarını hazırlayın.Ardından, anestezi doz aşımının ardından sıçanın cildini sterilize edin ve vertebral kolonu açığa çıkarmak için dorsal yüzeyi geniş diseksiyon makasıyla kaldırın. Diseksiyon makasını dorsal yüzeye dik ve transvers şekilde tutun. Vertebral kolonu arka ekstremitelerin üzerinden kesin.Ardından, açık olan caudal uçtan başlayarak spinöz çıkıntıları açığa çıkarmak için vertebral kolonun üzerindeki dorsal kası rostral yönde boylamasına kesmek için daha küçük makaslar kullanın. Spinal kord ile vertebral kolon arasındaki boşlukta, spinal kanalın lateral kısmına ekstraoral olarak küçük, küt uçlu bir kemik kesme aleti yerleştirin. Bıçağı korda paralel ve sığ bir şekilde konumlandırın.Ardından lamina üzerinde küçük kesikler yapın ve omuriliği açığa çıkarmak için laminayı dikkatlice soyun. Bu açı, alttaki omuriliğin zarar görmesini önler. Laminayı rostral yönde çıkarmaya devam edin.Küt doku pensleri kullanarak torasik ve servikal omuriliği açığa çıkarmak için, omuriliği omurgadan nazikçe kaldırın ve kökleri mikro makasla kesin. Omuriliği serbest bırakmak için, çıkarılan omuriliği buz gibi soğuk, steril sıçan diseksiyon tamponu içeren bir Petri kabına yerleştirin. Dokuyu buz gibi soğuk diseksiyon tamponu ile durulayın ve omuriliği enine bir santimetrelik segmentler halinde kesmek için makas kullanın. Her bir doku segmenti için, bir elinizle ince pens kullanarak dokuyu tutun ve diğer elinizle mikro makas kullanarak, omuriliğin sadece periventriküler bölgesini bırakacak şekilde beyaz maddeyi ve gri maddenin büyük bir kısmını dikkatlice temizleyin.Diseke edilmiş periventriküler dokuyu, buz gibi soğuk sıçan diseksiyon tamponu içeren 10 santimetrelik steril bir Petri kabına alın. Sıçan nöral kök hücrelerinin izolasyonuna başlamak için, mikro makas kullanarak diseke edilmiş periventriküler dokuyu bir kübik milimetrelik parçalar halinde kıyın. Ardından, önce bir papain disosiyasyon kitinden alınan bir papain flakonuna beş mililitre Earl dengeli tuz çözeltisi ekleyerek enzimatik disosiyasyon tamponunu hazırlayın.Papainin tamamen çözünmesi ve solüsyonun berrak görünmesi için flakonu 10 dakika boyunca 37 °C'de bekletin. Ardından, disosiasyon kitinden gelen DNA flakonuna 500 µL Earl dengeli tuz çözeltisi ekleyin. Nazikçe karıştırın, ardından papain içeren flakona 250 µL DNA solüsyonu ekleyin ve nazikçe karıştırın.Ardından, yaklaşık 0.2 gram kıyılmış dokuyu viyale ekleyin ve viyali 37 °C'de 45 dakika ile bir saat arasında bir sallayıcı platforma yerleştirin. İnkübasyon sonrası, kalan doku parçalarını ayrıştırmak ve bulanık bir hücre süspansiyonu elde etmek için karışımı 10 ml'lik bir pipetle trite edin. Hücre süspansiyonunu steril 15 ml'lik konik bir tüpe aktarın ve 300 G'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.Santrifüj sırasında oda sıcaklığında, 2,7 mililitre Earl dengeli tuz çözeltisini 300 mikrolitre rekonstitüe albümin OVO MOID inhibitör çözeltisi ile karıştırarak OVO moid çözeltisini hazırlayın. 15 mililitrelik konik bir tüpe, daha önce hazırlanmış DNA çözeltisinden 150 mikrolitre oval moid çözeltisine ekleyin ve tüpü ters çevirerek karıştırın, peletlenmiş hücrelerin üzerindeki süpernatantı atın ve hücre peletini hemen seyreltilmiş DNA albümin inhibitör karışımı içinde yeniden süspanse edin. Ardından, 15 mililitrelik bir tüpe beş mililitre albümin inhibitör çözeltisi ekleyerek süreksiz bir yoğunluk gradyanı hazırlayın ve beş mililitrelik bir pipet kullanarak hücre süspansiyonunu albümin inhibitör çözeltisinin üzerine nazikçe ve yavaşça katmanlayın.Numuneyi oda sıcaklığında altı dakika boyunca 70 ×g'de santrifüjleyin. İşlem tamamlandığında, süpernatanı atın ve hücre peletini, beraberindeki metin protokolünde açıklandığı şekilde hazırlanan bir mililitre ön ısıtmalı sıçan EFH besiyerinde yeniden süspande edin. Canlı hücre yoğunluğunu bir hemositometre ile sayın ve hücreleri, EFH içinde mikrolitre başına 10 hücre yoğunluğunda bir T 25 kültür flaskına ekleyin.Sferlerin kümelenmesini önlemek için flaskları 37 °C'de, %5 karbondioksit ortamında inkübe edin ve kültürlerin bir hafta boyunca rahatsız edilmeden büyümesine izin verin. Burada, beyaz ve gri cevher sınırlarını göstermek için hematoksilin ve eozinle birlikte luxal fast blue ile boyanmış sıçan spinal kordunun bir enine kesiti gösterilmiştir. Noktalı dış hat, bu protokolde bu bölgeden izole edilen diseke edilmiş kalan periventriküler dokuyu belirtmektedir.Burada gösterilenlere benzer nörosferler, yüksek büyütmede süspansiyon kültüründe serbest yüzen halde büyüyecektir. Nörosferlerden dışarı doğru uzanan mikro dikenler görülebilir; nörosferlerin disosiye edilip matrigel kaplı kuyucuklara ekildiği durumda, KI 67 pozitif boyama ile gösterildiği üzere nörosferler prolifere olur. Ayrıca, öncelikle nöral öncül hücrelerin bir belirteci olan nestin eksprese edeceklerdir.Bu prosedürün ardından, farklılaşmayı teşvik etmek için kültüre edilen hücrelere ekzojen faktörler eklenebilir. Erişkin nöral kök hücreler veya onların progenitörleri, rejeneratif onarım yeteneklerini değerlendirmek amacıyla çeşitli hayvan modellerine de nakledilebilir. Bu videoyu faydalı bulmanızı umuyor, deneylerinizde başarılar diliyorum.

isolation-neural-stemprogenitor-cells-from-periventricular-region

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video, yetişkin sıçanlarda omuriliğin periventriküler dokusundan nöral kök/progenitör hücreleri izole etmek için bir yöntem sunar. Teknik, hücre dışı matrisi bozmak ve hücreleri serbest bırakmak için doku parçalarının proteolitik enzimler içeren bir çözelti içinde inkübe edilmesini içerir. Daha sonra, salınan hücreler, nöral kök / progenitör proliferasyonunu artıran ve üç boyutlu nörosferlere agregasyonu teşvik eden spesifik büyüme faktörleri içeren bir ortamda kaplanır.

Erişkin Bir Sıçanın Omurilik Periventriküler Bölgesinden Nöral Kök Progenitör Hücrelerin İzolasyonu

Büyüme faktörlerini içeren fibrin matrisi tam omurilik kesisi sitelerine aşılı nöral kök hücrelerini korumak için kullanılmıştır. Aşılı hücreler tamamen lezyon boşluğu doldurdu ve uzun mesafelerde konak omuriliğe aksonlarını uzatıldı nöronlar da dahil olmak üzere birden fazla nöral hücre tipleri, ayrışmıştır.

Şiddetli Spinal Kord Yaralanması sonra fibrin ve Büyüme Faktörü kokteyller ile Nöral Kök Hücre Survival ve Farklılaşma Tanıtım

Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Bu protokol, tek bir hücre süspansiyonu için ayrışma olmadan küresel nöral kök ve projenitör hücre agrega genişlemesini sağlayan bir yeni mekanik bir kesme yöntemi tarif etmektedir. Hücre / hücre teması sürdürmek üzerinde 40 geçişleri için hızlı ve istikrarlı bir büyüme sağlar.

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

Burada subventricular bölgesi ve bireysel yetişkin farelerin kıvrımlarının gelen yapışkan tek katman veya neurospheres ya gibi, sinir öncü hücre kültürlerinin eş zamanlı üretimi için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler&#39;den Kök Hücre

Omurilik yaralanması ciddi morbidite ve mortalitesi yüksek bir neden travmatik bir durumdur. Bu çalışmada detaylı olarak nöral kök hücrelerin bir nakli ardından farelerde omurilik yaralanması bir kontüzyon modelini tarif.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Erişkin nöral kök hücrelerin (aNSC'ler) genişletilmesi için kültür sistemlerinin kurulması, aNSC'lerin tedavi için incelenmesine ve uygulanmasına olanak sağlar. Subkallozal bölge (SCZ) son zamanlarda yetişkin farelerde yeni bir nöroblast oluşturan bölge olarak kabul edilmiştir. Burada, SCZ-aNSC'lerin izolasyonu, genişletilmesi ve farklılaştırılması için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Subcallosal Zone İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kök Hücre Kültürü

Sinirsel potansiyeli olan ilik stromal hücreleri (MSC'ler) kemik iliğinde mevcuttur. Protokolümüz hipoksik ön koşullandırma yoluyla bu hücre popülasyonunu zenginleştirir ve bundan sonra onları olgun Schwann hücreleri haline getirir.

Olgun Schwann Hücrelerinin Üretimi İçin Bir Kaynak Olarak Kemik İçi Türe Göre Progenitör Hücrelerin Hipoksik Ön Koşullandırma

Burada, biz orta kanal niş konut endojen sinir kök hücreleri (NSCs) yedek bir yetişkin fare en az omurilik yaralanma modelinde performansını göstermek. Neurosphere tahlil harekete geçirmek ve yaralanma takip kesin ve ilkel NSCs geçirilmesi ölçmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Endojen nöral kök hücre etkinleştirme en az Medulla Spinalis Yaralanmalarında, fare modeli değerlendirmek için bir Neurosphere tahlil

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Canlı sıçanların beyinlerinden nöral kök hücrelerin ve oligodendrosit progenitör hücrelerinin izolasyonu için bir yöntem burada deneysel olarak ayrıntılı olarak sunulmaktadır. Refahlarından ödün vermeden bu hücrelerin aynı hayvanlardan birden fazla toplanmasına izin verir.

Canlı Sıçanlardan Nöral Kök Hücrelerin ve Oligodendrosit Progenitör Hücrelerin İzolasyonuna Yönelik "Beyin Sağım" Yöntemi

Öğrenin, yetişkin sıçan ve insan omuriliğinden nöral kök/progenitör hücrelerin periventriküler bölgeden izolasyonunu. Laminektomi, enzimatik dissosiasyon ve yoğunluk gradyanı santrifüjasyonu ile nörosfer oluşumunu değerlendirin.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Daha fazla video keşfet