Name: Konsantrik Jel Sistemi 3D Hücre Göç Matrix mikroçevresinin biyofiziksel Rolü Eğitim için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Öğrenin, hücre göçünü 3D fizyolojik ortamlarda konsantrik jel sistemi kullanarak nasıl inceleneceğini. Bu yöntem, ekstraselüler matrisin biyofiziksel özelliklerinin hücre davranışına etkisini kontrollü şekilde analiz etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar kritik tartışmalar W. Sun ve K. Jansen teşekkür ve Singapur Ulusal Üniversitesi Nano Biyomekanik Lab tarafından destek kabul. NAK Marie Curie IIF Bursu ile destek kabul eder.

1. Hücre Hasat <ol><li> 37 ° C,% 5 CO2 inkübatöründe MD-MBA-231 hücreleri elde edilir. % 0.5 Tripsin-EDTA çözeltisi kullanılarak doku kültürü hücreleri plakadan ayırın. Bir T25 şişesi içinde kültürlenmiş bir hücre için Tripsin-EDTA solüsyonu, 1 ml kullanın. </li><li> 4 dakika için 200 x g&#39;da santrifüjleme ile 15 ml konik bir tüp içinde Pelet hücreleri, süpernatanı havalandırın, ve tekrar süspansiyon hücreleri kültür ortamı, 5 ml. </li><li> Bir hemasitometre kullanarak, ρ, hücre yoğunluğu sayısı. Not: Hücre numaralı seribaşı iç jel hazırlamak için, hücre süspansiyonu daha sonra 10 × nihai hücre tohumlama yoğunluğu ulaşmak için seyreltilmiş edilecektir. Bu nedenle, 10 x konsantre hücre süspansiyonu gereklidir. </li><li> 10 x hücre konsantrasyonunu elde etmek için gerekli ortamın miktarı hesaplanır: <img alt="Denklem 1" fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/52735/52735eq1.jpg" width="175" /> Not: nihai hücre tohum yoğunluğu son C, yaklaşık 215; 10 6 hücre / ml MD-MBA-231 hücreleri için tavsiye edilir ve bu protokol kullanılır. Diğer tohumlama yoğunlukları da diğer hücre tipleri için keşfedilebilir. </li><li> Pelet hücreleri bir kez daha, 4 dakika için 200 x g&#39;da santrifüjleme ile 15 ml konik bir tüp içinde süresi ve süpernatan aspire. </li><li> Hücre topaklanma en aza indirmek için iyice serumsuz hücre kültür ortamının (adım 1.3 hesaplanan V ortam) gerekli miktarda tekrar süspansiyon hücreleri. Not: Fenol kırmızı otomatik floresan ve floresan / yansıma görüntüleme engelleyebilir. Fenol kırmızı içermeyen ortamda kullanılması en iyi görüntü kalitesini elde etmek için kabul edilebilir. </li></ol> Kollajen Çözümleri 2. Hazırlık <ol><li> Stok kolajen çözeltisi, 10 x PBS tampon, Milli-Q, H2, O, 0.1 M NaOH ve çeşitli mikrosantrifüj tüpleri elde edilir. Erken kollajen polimerizasyonu önlemek için buz üzerinde tüm tutun, ve steril durumunu korumak. </li><li> Steril cam-dengeye37 ° C inkübatör içinde ön ısıtmaya göre alt yemek. Not: Bu protokol tüm birimleri de 12 mm cam alt çanak için optimize edilmiştir. Diğer çanak tipi kullanılırsa, buna hacimleri ayarlayın. </li><li> Kollajen stok konsantrasyonuna bağlı olarak, iç jeli (çözelti l) 2.4 mg / ml kolajen çözeltisi 50 ul hazırlanması için ihtiyaç duyulan gerekli hacmi hesaplanır. Not: İç jeli diğer kollajen konsantrasyonları da kullanılabilir. </li><li> Steril bir ortamda (tipik olarak bir biyo-güvenlik kapağı) &#39;de yavaş yavaş hafif döndürme ile (adım 2.3 olarak hesaplanmıştır) kollajen stok çözeltisi gerekli miktarda 10 x PBS tamponu 5 ul ilave edin. Hava kabarcığı oluşumunu önlemek için dikkat edin. </li><li> Kalibre pH metre kullanılarak 0.1 M NaOH ile 7.4&#39;e karışımın pH ayarlayın. Bir kaba bir kılavuz olarak, (miktar stok konsantrasyonu ve pH değerine bağlı olarak değişir) 7.4 pH yakın getirmek için yaklaşık 5 ul kullanın. Not: hacimleri bu işin unutmayınadım standart bir pH metre kullanımı için çok küçüktür. Aşağıdaki hileler birini kullanın: <ol><li> Birden çok numune için kolajen solüsyonları hazırlayın. Standart pH metre kullanılarak toplu pH ayarlayın ve numuneler arasında kollajen çözümleri dağıtmak. </li><li> Seçenek olarak ise, daha büyük bir hacimde bir kolajen çözeltisi pH&#39;ın ayarlanması, (i. E., Standart bir pH metre kullanımına izin hacmi). Nihai pH, pH getirmek için gereken NaOH miktarını not edin. Hacimleri küçültün ve deney için NaOH uygun miktarda kullanın. Turnusol kağıdı kullanılarak pH değeri onaylayın. </li><li> Aksi takdirde, daha doğru bir şekilde az miktarda pH değerini ayarlamak için bir mikro pH elektrodu kullanın. </li></ol></li><li> O. H 2 kullanarak ul 45 bir hacme çözüm getir Erken kollajen polimerizasyonu önlemek için buz üzerinde tüm adımları uygulayın. </li></ol> Konsantrik Jel Kültür 3. Oluşumu <ol><li> Önceden ısıtılmış cam alt çanak alın th (adım 2.2 bakınız)E inkübatör. </li><li> Çözelti I yeniden askıya almak için (adım 1.5 hazırlandı) 10 x konsantre hücre süspansiyonu 5 ul iyice ekleyin. Hava kabarcığı oluşumunu önlemek için dikkat edin. Karışım, hemen 50 ul arasında değişen bir hacme sahip ve (nihai = 2 x 10 6 hücre / ml c) Nihai kollajen konsantrasyonu (2.4 mg / ml) ve hücre yoğunluğu içerir. </li><li> Bu kubbe şeklinde bir damla (Şekil 1A) oluşturan bu yüzden de merkezine yavaş hücre içeren bir çözeltinin 20 ul ekle. Bu aşamada kabarcık oluşumunu önlemek için dikkat edin. Bir kabarcık formları ise, dikkatli ama hızlı bir şekilde çalışın ya da kopma veya pipet kullanarak dışarı emmek. Yavaşça iç jel 45 dakika süreyle polimerize izin geri inkübatör çanak koyun. </li><li> (Dış, aselüler kollajen jel için) çözüm O bu inkübasyon adımı bitmeden yaklaşık 15 dakika hazırlayın. Not: dış jel durumu kollajen konsantrasyonu ve polimerizasyon pH koşullarını değişik olabilirFarklı mikroyapılanna 10 ile ağları edinin. 7.4 arasında bir pH değerinde polimerize 4.0 mg / ml kolajen jel - Bu protokolde, 1.5 odaklanır. <ol><li> Kollajen stok konsantrasyonuna dayalı olarak, nihai konsantrasyonda kolajen çözeltisi O 200 ul hazırlanması için ihtiyaç duyulan gerekli hacmi hesaplanır. </li></ol></li><li> 10 x PBS içinde 20 ul yumuşak döndürme ile (adım 3.4 olarak hesaplanmıştır) kollajen stok çözeltisi gerekli miktarda yavaş yavaş tampon ekleyin. Kalibre pH metre kullanımı ile, 0.1 M NaOH ile son pH karışımın pH ayarlayın. PH ayarlaması ile ilgili 2,5 adıma nota bakınız. </li><li> O H2 kullanılarak ul 200 ul son hacme çözüm getirmek Erken kollajen polimerizasyonu önlemek için buz üzerinde tüm adımları uygulayın. </li><li> İç jel 45 dakika polimerizasyondan sonra inkübatör çanak alın (adım 3.3). Çözelti tamamen iç kaplayacak şekilde yavaşça iç jelinin üzerine çözelti, O 180 uljel ve kuyu (Şekil 1B) doldurur. <ol><li> Dış jelde homojen olmayan bir lif yönelimleri yol açabilir çözeltisi, karıştırma olmadan dikkatlice adımı gerçekleştirir. Bir pipet ile iç jel dokunmaktan kaçınmak için özen ve kabarcıkları veya hava ceplerinin oluşumunu önlemek için. Bir kabarcık formları ise, dikkatli ama hızlı bir şekilde çalışın ya da kopma veya pipet kullanarak dışarı emmek. Yavaşça dış jel, polimerik maddelerin izin inkübatör çanak geri yerleştirin. </li></ol></li><li> Polimerizasyon 45 dakika sonra inkübatör çanak alın. yaklaşık olarak kullanıldığı takdirde yine alt yüzeyinden ayırmak, ancak jel zaten oldukça, bu noktada katılaşan olmalıdır. <ol><li> Yavaşça çanak (Şekil 1C) ısıtıldı hücre kültür ortamının 2 ml dökün. Jel tamamen ortamında batık emin olun. Kültür süresi boyunca 3 gün - her 2 orta yenileyin. </li></ol></li></ol> 4. Canlı hücre Görüntüleme <ol><li> Uzun vadeli canlı hücre görüntüleme yeteneği ile donatılmış bir ters konfokal mikroskop kullanılarak görüntüleme gerçekleştirin. Dahil dahili bir sıcaklığa (37 ° C) ve CO2 (% 5), kontrol ile inkübasyon odası. Mikroskop açın ve deneye başlamadan önce evre en az 1 saat ısıtın. Not: Uzun çalışma mesafesi ile kullanın objektif 3D jellerin hücrelerin gözlem ve lokalizasyonu optimize etmek. </li><li> 3D sistemindeki hücrelerin doğru belirlenmesine olanak tanımaktadır, 30 dakika için floresan hücre izleyici boya 5 ul ihtiva eden bir ortam içinde jel inkübe edin. Daha sonra, 1 x PBS ile yıkanarak üç kez bağlanmamış boya çıkarın. Daha sonra, çanak hücre kültür ortamı ilave edin. </li><li> Inkübatör çanak alın ve mikroskop aşamasında (Şekil 1D) üzerine yerleştirin. Not: Canlı hücre görüntüleme sağ dış jel polimerizasyon sonrası prensip olarak başlayabilirsiniz. Bununla birlikte bu noktada, hücreler in iç jel henüz yayılmış değil. Dış jel, canlı hücre görüntüleme kültürünün başlatılmasından sonra (hücre tipine göre) 24 saat başlayabilir işgal ilk hücrelerinin göçünü incelemek. Bir kaba bir kılavuz olarak, yaklaşık 12 - kültür 14 gün dış jel girmek iç jel hücrelerin çoğu için gereklidir. </li><li> İç jel çevreleyen dış jel bölgelerde Manzaralı (VoV en) Seç Birimleri. Kuluçkadan 24 saat, hücre popülasyonu, yayılmış olur sonra, iç ve dış jel arasındaki ara yüzü geçti ve dış jel işgal başladı. <ol><li> VoV en için, hemen yanındaki dış jel 7, olay yakın jel arayüzü, ara bölgeler ve bölgelere jel bölgelerini içerir. Mümkün olan kenar etkileri önlemek için, jel üst hem de daha yakın bir alt ve yan yüzeyler ile 50 um den bölge hariç. Her VoV tipik x (647 × 647 × 100 mm 3 ölçerZ -stack 5 um aralığında olan, sırasıyla, y ve z, tarifi). </li></ol></li><li> Emin olun görüntüleme modları, kanallar / filtreler, pozlama süreleri ve görüntü çözünürlükleri doğru seçilir. Kollajen ağının etiketi ücretsiz görüntüleme için, zaman atlamalı canlı hücre görüntüleme sırasında eş zamanlı olarak konfokal yansıma mikroskopi kullanın. </li><li> Örnek görüntüleri alın yoğunluk histogramlar arsa ve yeterli sinyal gözlemlemek ve histogram sıfır ve maksimum yoğunluğu arasında yatıyor sağlayarak doygunluk önlemek için kazanç ve uzaklıklar ayarlayın. Deney süresi boyunca bir daha bu ayarları değiştirmeyin. </li><li> 8 saat (veya gerekirse daha uzun) için 10 dakika, bir zaman aralığı, Δ t ile, seçilen VoV yılların zaman atlamalı görüntüleri çekin. </li></ol> 5. Hücre İzleme ve Veri Analizi <ol><li> ÖDENEK kullanarak z -stack görüntülerden kantitatif görüntü post-processing yürütmek<html> te görüntü işleme yazılımı. <ol><li> Segment time-lapse görüntüleri otomatik olarak (x, y, z, t) 3D hücre pozisyonları seçin. </li><li> Her çerçeve için, elle lokalizasyon doğruluğunu kontrol ve hücreler için yanılmış olabilir hücre artıkları ve hücresel çıkıntılar nedeniyle yanlış pozitif kaldırın. Farklı nesnelere analiz ve bölünmüş örtüşen veya bağlı hücreleri çoğalma hücreleri çıkarmak. </li></ol></li><li> Zaman dizisi her hücrenin yerini bağlayarak önceki aşamada elde edilen hücre koordinatları (x, y, z, t), 3D hızlandırılmış hücre parçaları üretir. </li><li> Bir eşik hat uzunluğu (genellikle 20 dk) daha kısa parçaları kaldırarak rastgele ve sistem gürültüsünü ortadan kaldırın. </li><li> Gerekirse parça gelen toplam net değiştirmeleri çıkarılarak örnek sürüklenme için düzeltin. </li><li> Hücre deplasman hesaplayın,iles / ftp_upload / 52.735 / 52735eq2.jpg &quot;width =&quot; 80 &quot;/&gt; ve hücre göçü mesafesi, <img alt="Denklem 3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52735/52735eq3.jpg" width="100" /> Gözlenen hücre yörüngeleri, burada zaman, bir hücrenin 3D konumunu temsil eden bir vektördür ve zaman noktalarının toplam sayısıdır. <ol><li> Δ t kare arasındaki zaman aralığı S d = / (n • Δ t) gibi hücre hızı, hesaplayın. P = Δd / d kullanarak hücre göçü yönlülük (veya sebat) hesaplayın. Sebat Bu basit önlem P = 0 net deplasman sıfır ve p = 1 için yörünge düz yönlü çizgi olduğunu ima eder. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Horwitz, R., Webb, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell migration.</a> Curr Biol. 13 (19), R756-R759 (2003).</li>
<li>Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+scratch+assay%3A+a+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nat. Protoc. 2 (2), 329-333 (2007).</li>
<li>Provenzano, P. P., Eliceiri, K. W., Inman, D. R., Keely, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+three-dimensional+collagen+matrices+to+provide+contact+guidance+during+3D+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Prot.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Engineering three-dimensional collagen matrices to provide contact guidance during 3D cell migration.</a> Curr. Prot. Cell Biol. 10, 10-17 (2010).</li>
<li>Friedl, P., Sahai, E., Weiss, S., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+dimensions+in+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">New dimensions in cell migration.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (11), 743-747 (2012).</li>
<li>Grinnell, F., Petroll, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+motility+and+mechanics+in+three-dimensional+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Cell.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell motility and mechanics in three-dimensional collagen matrices.</a> Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 26, 335-361 (2010).</li>
<li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physics+of+cancer%3A+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nat. Rev. Cancer. 11 (7), 512-522 (2011).</li>
<li>Sun, W., Kurniawan, N. A., Kumar, A. P., Rajagopalan, R., Lim, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+migrating+cell-induced+matrix+reorganization+on+3D+cancer+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Effects of migrating cell-induced matrix reorganization on 3D cancer cell migration.</a> Cell. Mol. Bioeng. 7 (2), 205-217 (2014).</li>
<li>Achilli, M., Mantovani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+mechanical+properties+of+collagen-based+scaffolds+for+vascular+tissue+engineering%3A+the+effects+of+pH%2C+temperature+and+ionic+strength+on+gelation%5BTitle%5D)+AND+%22Polymers%22%5BJournal%5D)">Tailoring mechanical properties of collagen-based scaffolds for vascular tissue engineering: the effects of pH, temperature and ionic strength on gelation.</a> Polymers. 2 (4), 664-680 (2010).</li>
<li>Kurniawan, N. A., Wong, L. H., Rajagopalan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+stiffening+and+softening+of+collagen%3A+interplay+of+deformation+mechanisms+in+biopolymer+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Early stiffening and softening of collagen: interplay of deformation mechanisms in biopolymer networks.</a> Biomacromolecules. 13 (3), 691-698 (2012).</li>
<li>Sun, W., Lim, C. T., Kurniawan, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+adaptability+of+cancer+cells+strongly+affects+anti-migratory+drug+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+R.+Soc.+Interface%22%5BJournal%5D)">Mechanistic adaptability of cancer cells strongly affects anti-migratory drug efficacy.</a> J. R. Soc. Interface. 11 (99), 20140638(2014).</li>
<li>Guzman, A., Ziperstein, M. J., Kaufman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fibrillar+matrix+architecture+on+tumor+cell+invasion+of+physically+challenging+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of fibrillar matrix architecture on tumor cell invasion of physically challenging environments.</a> Biomaterials. 35 (25), 6954-6963 (2014).</li>
<li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+limits+of+cell+migration%3A+control+by+ECM+space+and+nuclear+deformation+and+tuning+by+proteolysis+and+traction+force%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Physical limits of cell migration: control by ECM space and nuclear deformation and tuning by proteolysis and traction force.</a> J. Cell Biol. 201 (7), 1069-1084 (2013).</li>
<li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration+in+morphogenesis%2C+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10 (7), 445-457 (2009).</li>
<li>Vedula, S. R. K., Ravasio, A., Lim, C. T., Ladoux, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration%3A+a+mechanistic+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration: a mechanistic perspective.</a> Physiology. 28 (6), 370-379 (2013).</li>
<li>Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Random+versus+directionally+persistent+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Random versus directionally persistent cell migration.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10 (8), 538-549 (2009).</li>
<li>Miron-Mendoza, M., Seemann, J., Grinnell, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+differential+regulation+of+cell+motile+activity+through+matrix+stiffness+and+porosity+in+three+dimensional+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The differential regulation of cell motile activity through matrix stiffness and porosity in three dimensional collagen matrices.</a> Biomaterials. 31 (25), 6425-6435 (2010).</li>
<li>Mouw, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+mechanics+modulate+microRNA-dependent+PTEN+expression+to+regulate+malignant+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue mechanics modulate microRNA-dependent PTEN expression to regulate malignant progression.</a> Nat. Med. 20 (4), 360-367 (2014).</li>
<li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-based+cell+migration+models+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Collagen-based cell migration models in vitro and in vivo.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 20 (8), 931-941 (2009).</li>
<li>Wong, L. H., Kurniawan, N. A., Too, H. -P., Rajagopalan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+resolved+microrheology+of+heterogeneous+biopolymer+hydrogels+using+covalently+bound+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Biomech.+Model.+Mechanobiol%22%5BJournal%5D)">Spatially resolved microrheology of heterogeneous biopolymer hydrogels using covalently bound microspheres.</a> Biomech. Model. Mechanobiol. 13 (4), 839-849 (2014).</li>
<li>Gupton, S. L., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+feedback+between+actomyosin+and+focal-adhesion+systems+optimizes+rapid+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal feedback between actomyosin and focal-adhesion systems optimizes rapid cell migration.</a> Cell. 125 (7), 1361-1374 (2006).</li>
<li>Provenzano, P. P., Inman, D. R., Eliceiri, K. W., Trier, S. M., Keely, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+guidance+mediated+three-dimensional+cell+migration+is+regulated+by+Rho%2FROCK-dependent+matrix+reorganization%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Contact guidance mediated three-dimensional cell migration is regulated by Rho/ROCK-dependent matrix reorganization.</a> Biophys. J. 95 (11), 5374-5384 (2008).</li>
<li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-step+pericellular+proteolysis+controls+the+transition+from+individual+to+collective+cancer+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion.</a> Nat. Cell Biol. 9 (8), 893-904 (2007).</li>
<li>Jansen, K. A., Bacabac, R. G., Piechocka, I. K., Koenderink, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+actively+stiffen+fibrin+networks+by+generating+contractile+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Cells actively stiffen fibrin networks by generating contractile stress.</a> Biophys. J. 105 (10), 2240-2251 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu protokolde, in vivo olarak karşılaşılan ECM'lere topolojik olarak benzeyen matris ortamlarındaki hücrelerin 3D göç davranışını incelemek için bir in vitro tahlil açıklıyoruz. Şu anda mevcut olan diğer yöntemlere kıyasla bu testin üç ana gücü vardır. İlk olarak, bu tahlil, hücre göç mekanizmalarının hem popülasyon düzeyinde hem de bireysel hücre düzeyinde aynı anda incelenmesine izin verir. Bu, bugüne kadar büyük ölçüde 2D tahliller14 ile sınırlı olan toplu hücre göçünü13 incelem...

Hücrelerin göç embriyonik gelişme, hemostaz ve bağışıklık tepkisi gibi gibi vasküler hastalıklar, enflamasyon ve kanser 1 gibi patolojik süreçlerde çeşitli fizyolojik tepkiler içindeki önemli bir rol oynar. Hücre göçü temel biyokimyasal ve biyofiziksel faktörleri Kesme hücresel fonksiyonların temel ilkelerini anlamak için değil, aynı zamanda böyle bir doku mühendisliği anti-metastaz ve anti-enflamatuar ilaç geliştirme gibi çeşitli biyomedikal uygulamalar ilerletmek için, sadece bu nedenle temel olarak önemlidir. In vivo gözlem teknik açıdan zor olduğundan, çabalarının bir sürü hücre göçü in vitro recapitulation odaklanmıştır. Hücre göçü incelemek için in vitro yöntemler büyük ölçüde en önemlisi, iki boyutlu (2D) yüzeylerde deneyleri için çizik olarak tasarlanmış veya tahlil 2 yara iyileşmesi edilmiştir. Bu tür deneyler basit deney düzeneği sunuyoruz, kolay yaşanılırhücre görüntüleme ve hücre göçü yatan çeşitli biyokimyasal mekanizmaların yararlı açılımlar sağlamaktadır. Bununla birlikte, bu deneyler, in vivo göç anlaşılmasında kritik yönleri olan hücre dışı matris (ECM), mimari ve yeniden modellenmesi hesaba katmaz. Son zamanlarda, giderek artan bir şekilde 3B kültürü modeli, genellikle kolajen-esaslı matrisler 3, daha iyi in vivo durum benzer bir platform temin ettiği takdir edilecektir. Nitekim, hücreler nedeniyle özellikle çevre 4 farklı boyutluluk için, 2B yüzeylerde olanlardan farklıdır Göçmen dinamikleri sergilerler. Ayrıca, matris biyo-fiziksel ve mekanik özellikleri, hassas tümör hücre istilası 6 bağlamında da dahil olmak üzere, hücre göçünü 5 etkiler. Burada, biz hazırlık koşulları ile kolayca çeşitli olabilir biyofiziksel özellikleri ile ECM 3D hücre göçü davranışlarını incelemek için bir yöntem mevcut. hücrelerdirBir &quot;iç gel&quot; numaralı seribaşı ve içine kaçmak ve başlangıçta Aselüler &quot;dış jel&quot; işgal izin verilir. yöntem yakından hücre 7 mechanosensing bağlantılı dış jel, hücre-serbest bölgelere, göç hücrenin varlığını tanımak yeteneği ve eğilimine dayanır. Bu çalışmada, biz son derece invaziv meme kanseri hücrelerinin, MD-MBA-231 tarafından işgal ECMs olarak kollajen ağları kullanır. mekanik özellikler ve hem iç hem de dış jellerin mikro 8 olarak ayarlanmış ve fizyolojik olarak uygun koşulları elde etmek için 9 karakterize edilebilir. Hücre parça İmar ve analiz nüfus düzeyi ve bireysel hücre düzeyinde hem de uzaysal göç davranışının ayrıntılı nicel incelenmesine olanak. Önemlisi, konsantrik jel sistemi kurulumu ve böylece önemli anlayışlar sunarak, özellikle kanser hücrelerini istila, hücreler göç ile karşı karşıya in vivo doku topolojisini taklitHücre göçü ve metastaz fiziksel mekanizmaları.

<table><tbody><tr><td>Hücre kültürü inkübatörü</td><td>Fisher Scientific Pte Ltd</td><td>Model: 371, S / No 318854-6055</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td>Nikon A1R</td><td></td><td>İnkübatör odası ile donatılmış ters konfokal lazer tarama mikroskobu</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle's Medium (DMEM)</td> <td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> Yaşam <td>Teknolojileri</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>Floresan CellTracker boyası CMTMR</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>C2927</td><td></td></tr><tr><td>Cam tabanlı çanak</td><td>IWAKI Cell Biology</td><td>3931-035</td><td>12 mm çapında cam tabanlı kuyu ile 35 mm çapında çanak</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>iN CYTO</td><td>DHC-N01 (Neubauer Geliştirilmiş)</td><td></td></tr><tr><td>Mikroişlemci pH metre</td><td>Hanna Aletleri</td><td>pH 211</td><td></td></tr><tr><td>Nutragen Kollajen</td><td>Gelişmiş BioMatrix</td> <td># 5010-D</td><td>Asitte çözünmüş sığır kollajen tip I (stok pH ~ 2)</td></tr> <tr><td>Objektif lens</td><td>Nikon</td><td></td><td>CFI Super Plan Fluor ELWD ADM 20XC, WD 8.2-6.9mm, NA 0.45.</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>Sartorius</td><td>S/No 29153352</td><td>Temel pH Metre PB-11</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15400-054</td><td></td></tr></tbody></table>

konsantrik jel sistemi 3d hücre göç matrix mikroçevresinin biyofiziksel rolü eğitim için

Concentric Gel System to Study the Biophysical Role of Matrix Microenvironment on 3D Cell Migration

göç hücrelerin yeteneği tümör ve kanser metastazı embriyonik gelişim yaşamın ve yara iyileşmesi süresince hücre fonksiyonları geniş bir yelpazede çok önemlidir. Yoğun araştırma çabalarına rağmen, hücre göçü temel biyokimyasal ve biyofiziksel prensipler hala tam özellikle fizyolojik ilgili üç boyutlu (3D) mikroçevrelerde, anlaşılmış değildir. Burada, 3B hücre göçü davranışları kantitatif olarak incelenmesini sağlamak için tasarlanmış bir in vitro testi. yöntemi daha önce boş hücre dışı matriks (ECM) göç etmek hücrenin mechanosensing yeteneği ve eğilimi patlatır. Bir model sistem olarak kollajen jel oldukça invazif göğüs kanseri hücrelerinin invazyonu, MDA-MB-231 kullanımı. kültür hafta boyunca hücre popülasyonunun yayılması ve tek tek hücrelerin göç dinamikleri canlı hücre görüntüleme kullanılarak izlenir ve spatiotemporally çözülmüş verilerin çıkarılması için analiz edilebilir. AyrıcaYöntem böylece hücre göçü üzerinde mikroçevresinin biyofiziksel faktörlerin rolünü araştırmak için basit ama güçlü bir şekilde sunan, çeşitli hücre dışı matrisler için kolayca uyarlanabilir.

Burada yer alan eş-merkezli jel tahlili, yüksek oranda istilacı meme kanseri hücreleri kullanılarak gerçekleştirildi, MDA-MB-231, 2.4 mg / ml&#39;lik bir iç kollajen jel ve bir örnek olarak = 2 x 10 6 hücre / ml&#39;lik bir hücre tohumlama yoğunluğuna sahip. Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi, tipik olarak kültür birkaç gün sonra, hücreler, iç-dış jel arayüzü ihlal ve dış jel işgal başladı. hücre popülasyonu radyal olarak dışarı doğru ağırlıklı olarak yayıldı. Dış j...

Mekanik özellikler ve hücre dışı matris mikro güçlü hücre 3D göç etkiler. In vitro bir yöntem, nüfus ve tek tek hücre düzeylerde biyofiziksel değişken ortamlarda uzaysal hücre göçü davranışı incelemek için, tarif edilmektedir.

Konsantrik Jel Sistemi 3D Hücre Göç Matrix mikroçevresinin biyofiziksel Rolü Eğitim için

The ability of cells to migrate is crucial in a wide variety of cell functions throughout life&#160;from embryonic development and wound healing&#160;to ...

Bu prosedürün genel amacı, hücrelerin 3D fizyolojik olarak ilgili ortamlardaki migrasyon özelliklerini incelemektir. Bu işlem, önce hücrelerin iç bir kolajen jele ekilmesi ve ardından bu yapının istenen matriks özelliklerine sahip, hücre içermeyen dış bir kolajen jel ile çevrelemesiyle gerçekleştirilir. Sonrasında, hücrelerin dış jele invaze olmasına ve migrasyon yapmasına izin verilir; bu süreç boyunca hücreler izlenebilir ve kantitatif olarak analiz edilebilir.Nihayetinde, bu konsantrik jel analizi, hücre göç davranışının hücre dışı matrisin biyofiziksel özelliklerinden nasıl etkilendiğini göstermek için kullanılır. Bu tekniğin, transfer analizi veya çizik analizi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, hücre göçünün; yapısal ve biyofiziksel özelliklerinin kontrol edilmesinin çok kolay olduğu, fizyolojik olarak ilgili bir tedavi ortamında gerçekleşmesidir. Konsantrik iç-dış jel sisteminin oluşumu oldukça hassas bir işlem olduğundan, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi oldukça önemlidir.Uygun bir jel arayüzü, elde edilmesi bazen biraz zor olabilen ve bu deneyin başarısı için çok önemli olan bir unsurdur. %80 konfluens düzeyindeki T 25 flasklardan hasat edilmeye hazır MD MBA 2 31 hücre kültürü ile başlayın. İlk olarak, flask başına bir mililitre solüsyon kullanarak hücreleri tripsiniz edin.Ardından, hücreleri 200 G kuvvetle dört dakika boyunca santrifüj ederek pelet haline getirin, süpernatantı uzaklaştırın ve hücreleri beş mililitre kültür medyumu içinde yeniden süspande edin. Şimdi, bir hemositometre kullanarak hücre yoğunluğunu ölçün ve mililitre başına 100 milyon hücre için gereken hacmi belirleyin. Daha sonra hücreleri 200 G'de dört dakika boyunca çöktürün.Süpernatanı uzaklaştırın ve peleti gerekli hacimdeki serumsuz kültür ortamı içerisinde tamamen resüspande edin. Bu süspansiyon, nihai ekim konsantrasyonunun 10 katı yoğunluktadır. Başlamak için gerekli stok çözeltileri bir buz kovasında toplayın; bunlar 10 XPBS, milq su ve 0,1 molar sodyum hidroksittir.Ayrıca, steril tekniği koruyarak bir çeker ocuk altında birkaç mikro santrifüj tüpünü soğutun; 50 µL 2,4 mg/mL iç jel çözeltisi için gereken miktarda kolajeni alikotlayın. Ardından, ölçülen kolajene yavaşça 5 µL 10X PBS ekleyin. PBS eklenirken tüpü dairesel hareketlerle sallayın ancak kabarcık oluşumundan kaçının.Ardından, karışımın pH değerini baz çözeltisi ile 7.4'e ayarlayın. Genellikle beş µL yeterli olacaktır. Metin protokolünde bir sorun giderme kılavuzu sunulmuştur.Son olarak, 10 x hücre süspansiyonu için yer bırakarak, hacmi serumsuz kültür ortamı ile 45 microliters değerine tamamlayın. Başlamak için, kollajen çözeltisine beş microliters 10 x hücre süspansiyonu ekleyin ve hava kabarcığı oluşturmadan hücreleri çözelti içinde iyice resüspande edin. Şimdi, önceden ısıtılmış cam tabanlı bir plakadaki merkeze, süspansiyondan 20 microliters ekleyin.Kubbe şeklinde bir damlacık oluşturun; eğer bir kabarcık oluşursa, etrafı kirletmeden hızlıca patlatın veya geri çekin. Jeli doğru şekilde dökme işlemi, özellikle kollajen gibi çok viskoz çözeltilerle çalışırken oldukça zorlayıcı olabilir. Mümkün olduğunca kabarcık oluşumundan kaçınmaya çalışın ve çözelti polimerize olmaya hazır olduğunda onu döndürmeyin, çünkü şişme işlemi yapay fiber hizalanmasına neden olabilir.Şimdi, iç tabakanın polimerize olması için tabağı 45 dakika boyunca inkübatöre geri yerleştirin; inkübasyonun bitimine 15 dakika kala, buz üzerinde 200 µL dış kolajen jel çözeltisi hazırlayın. İlk olarak, stok kolajenden gerekli hacmi alıkote edin.İkinci olarak, hafifçe çalkalayarak 20 µL 10 XPBS ekleyin. Ardından pH değerini daha önce olduğu gibi 7,4'e ayarlayın ve solüsyonun hacmini Milli Q su ile 200 µL'ye tamamlayın. Şimdi kabı inkübatörden çıkarın ve iç jel kubbesinin üzerine yavaşça 180 µL dış jel solüsyonu ekleyin.Bu işlem iç çözeltiyi tamamen kaplamalı ve kuyucuğu doldurmalıdır. Çözeltiyi karıştırmayın ve iç jel çözeltisine dokunmaktan kaçının. Dış çözeltiyi enjekte ederken bir kabarcık oluşursa, hızlıca patlatın veya pipete geri çekin.Bir diğer önemli adım, uygun bir jel arayüzünün elde edildiğinden emin olmaktır. Bu adımın püf noktası, dış jel solüsyonunu eklemektir. İç jel henüz sertleşmeden önce.Jelleşme kinetiği polimerizasyon koşullarına göre değişiklik gösterebilir ve bu koşulların önceden optimize edilmesi esastır. Dış jelin polimerize olması için kabı 45 dakika boyunca inkübatöre geri yerleştirin. 45 dakika sonra jel oldukça katılaşmış olmalıdır, ancak yine de yerinden oynatılabilir; jeli tamamen batırmak için dikkatlice iki mililitre ılık besiyeri ekleyin. Her iki ila üç günde bir taze besiyeri sağlayarak konsantrik jel kültürü işlemini tamamlayın.Birkaç gün içinde hücreler dış matrise göç etmeye başlayacaktır; göçlerini gözlemlemek için hücreleri floresan bir izleyici ile boyayın. İki mililitre besiyerini, beş mikrolitre boya içeren taze besiyeri ile değiştirin ve 30 dakika boyunca inkübe edin. İnkübasyon süresinin ardından, kültürü her yıkama için iki ila üç dakika süreyle 3 kez bir mililitre PBS kullanarak yıkayın. Yıkama işlemlerinden sonra, kabı normal besiyeri ile tekrar doldurun.Ardından kabı çevre kontrollü bir mikroskoba yerleştirin. Şimdi, jel ara yüzeyinin yanındaki dış jel bölgelerini taramak için bir hacim ayarı kullanın. Genellikle, ZS yığınında 5 µm aralıklar kullanarak, 100 µm kalınlığında 647 µm kare alanlarda tarama yapın.Ardından ara bölgeleri ve son olarak jelin dış kısımlarını tarayın. Kenar etkisinden etkilenmiş olabilecek hücrelerden kaçınmak için alt, üst veya yan yüzeylerin 50 mikron yakınındaki bölgeleri hariç tutun. Toplanan verilerden hücrelerin hareketini analiz etmek için öncelikle görüntü dosyalarını imas gibi bir veri analiz yazılımında açın.surpass komutunu ve ardından surface komutunu seçerek başlayın. Bu işlem, yüzeyleri izleme seçeneğini açar. Zaman akışı içerisinde, veri setindeki ilgili bölgeyi, yani Kartezyen koordinatları ve zaman dilimini seçin.Ardından, ilgi bölgesinden arka planı çıkarın. Arka plan eliminasyonu sırasında bir hücrenin kaybını önlemek için, nesneye sığan en büyük küreyi seçin. Şimdi, tohum noktası çapını seçerek bağlantılı nesneleri ayırın ve tüm tohum noktalarını sınıflandırma işlemine geçin.Bir sonraki adım, yüzeyi artık manuel olarak sınıflandırmaktır. Aynı nesneye işaret eden tohum noktalarını gruplandırın. Bunu, ilgi alanındaki tüm zaman noktaları arasında gerçekleştirin.Son olarak, izleme tamamlandığında nesneleri takip edin, nesne izlerini sınıflandırın ve ardından analiz etmek üzere nicel veri setini bir hesap tablosuna aktarın. Birkaç günlük konsantrik jel kültürlerinin ardından, hücreler iç ve dış jel arayüzünü geçerek dış jeli istila etmeye başladı. Hücre popülasyonu ağırlıklı olarak radyal yönde dışarıya doğru yayıldı.Çeşitli kolajen yoğunluklarına sahip dış jeldeki hücrelerin hareketi karşılaştırıldı. Görüntüleme sekiz saatlik bir süre boyunca gerçekleştirildi ve her örnekten yaklaşık 200 hücre yörüngesi hesaplandı. En ince matris içindeki hücreler en az mesafeyi kat etti.Bu hesaplama, sadece radyal olarak dışa doğru göç eden hücreleri değil, tüm hücreleri dikkate almıştır. Tüm durumlarda, katedilen toplam mesafe, net yer değiştirmeden daha büyüktü. Beklendiği üzere kalıcılık, yer değiştirme ile mesafe arasındaki bir oran olarak hesaplanmıştır.0,4'lük persistans değeri, bu hücrelerin doğası gereği zayıf bir yönelimli göç sergilediğini göstermektedir. Ortalama hız hesaplamaları, kolajen yoğunluğunun hücre hızı üzerinde etkili olmadığını ortaya koymuştur. Birbiriyle ters orantılı olan matriks gözenek boyutu ve kolajen yoğunluğunun, göç hızı üzerinde zıt etkiler yaratarak birbirlerini dengelemiş olması mümkündür.Bu videoyu izledikten sonra, eş merkezli bir jel sisteminin nasıl kurulacağı ve hücrelerin 3B ortamdaki bu migrasyonunun nasıl inceleneceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız. Bu prosedürü izleyerek, hücre ekstraksiyonu ve migrasyonun farklı zaman noktalarında belirli proteinlerin ne kadar eksprese olduğu gibi ek soruları yanıtlamaya çalışabileceğiniz mikroarray analizi gibi birçok başka işlem gerçekleştirebilirsiniz.I.

concentric-gel-system-to-study-biophysical-role-matrix

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Hücre göçü gibi hücresel süreçleri, geleneksel iki boyutlu, sert plastik yüzeyler üzerinde çalışılmıştır. Bu rapor doğrudan protein lokalizasyon görselleştirme ve daha fizyolojik ilgili üç boyutlu bir matris içinde göç eden hücrelerin protein dinamiklerini analiz etmek için bir teknik anlatılmaktadır.

Üç boyutlu Matrix floresan etiketli Proteinler ifade Geçiş Hücreler Canlı hücre Görüntüleme

Canlı hücre göç çalışmaları için bir mikroskop odasında yapıştırıcı ve çözünür degradelerin montajı için bir yöntem tarif edilmiştir. Mühendislik ortamı çözümü degradelerle antifouling yüzeyleri ve yapıştırıcı parçaları birleştirir ve bu nedenle bir rehberlik ipuçları göreli önemini belirlemek için izin verir.

Floresan Mikroskobu ile Görüntüleme Hücre Göç Yapıştırıcı ve Çözünür Degradeler oluşturma

Bu makalede, floresan daha düzeltme ve 3D-hücre kültürleri canlı görüntüleme için kullanılabilir kollajen etiketlemek için bir yöntem sunar. Ayrıca 3D ortamlarda kültür hücrelerinin endojen iskelet proteinleri görselleştirmek için optimize edilmiş bir protokol sağlar.

3D İnvaziv Kanser Hücrelerinin Sitoskeletal Örgütü ortaya

Tek boyutlu bir kapalı mikro hücrelerin spontan göç incelemek için nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, mikrofabrike kanalları yararlanır ve tek bir deneyde, farklı koşullar altında hücrelerin büyük sayıda göçünü incelemek için kullanılabilir.

Microfabricated Kanallar Hücre Göç Çalışması

Hücre göçü, bir kanser gibi yara iyileşmesi ve bağışıklık tepkilerinin ve patofizyolojik süreçler gibi, fizyolojik bir bolluk dahil bir biyolojik bir olgudur. 3D-kollajen matris göç deneyi 3D fizyolojik gibi bir ortamda içinde farklı hücre tipleri göç özelliklerini analiz etmek için çok yönlü bir araçtır.

Bir Üç boyutlu Kollajen Matrix içindeki Hücre Göç Analizi

Hücre göçü, insan gelişiminin ve yaşamının önemli bir parçasıdır. Hücre göçünü değiştirebilecek mekanizmaları anlamak için, mevcut tahlillerin modern difüzyon odası sınırlamalarının üstesinden gelmeye izin veren bir 3D kollajen matrisinde kemotaksisi araştırmak için düzlemsel bir gradyan difüzyon sistemi sunuyoruz.

Planar Gradient Difüzyon Sistemi 3D Kollajen Matrix Kemotaksis Araştırma

Aşağıdaki protokol, iki boyutlu (2B) ve üç boyutlu (3B) hücresel ortamlar arasında bir ara aşama olarak kullanılacak sandviç benzeri kültürleri bir araya getirme prosedürünü açıklar. Tasarlanmış sistemler mikroskopi, biyomekanik, biyokimya ve hücre biyolojisi tahlillerinde uygulamalara sahip olabilir.

Sandviç gibi mikroçevrelerde Hücre / Malzeme Etkileşimleri Harness

Kolajen ECM temel bir bileşenidir ve göç farklılaşma ve çoğalması kadar çeşitli hücresel süreçler için gerekli ipuçları sağlar. 3D kolajen hidrojellerin içinde hücreleri gömmek için bir protokol ve PDMS mikrokanallar kullanılarak randomize veya hizalanmış kollajen matrisleri oluşturmak için daha gelişmiş bir teknik burada sağlanmıştır.

3D Etkileşimleri Çalışmaları 3D Kollajen jeller ve Mikrokanallarda Hazırlanması<em&gt; İn Vivo</em

Bu iletişim kuralı yanlısı ve anti migratory faktörlerin etkisi hücre geçiş bir üç boyutlu fibrin matris içinde değerlendirmek için hedeftir.

İçinde üç boyutlu Vitro hücre göç karakterize ortamlar yara

Granül hidrojellerin arayüzü içinde ve içine 3D hücre göçünün kantitatif değerlendirmesi için bir protokol burada sunulmaktadır.

Granül Hidrojel Biyomalzemeler İçinde ve İçine Üç Boyutlu Hücre Migrasyonunun Ölçülmesi

Öğrenin, hücre göçünü 3D fizyolojik ortamlarda konsantrik jel sistemi kullanarak nasıl inceleneceğini. Bu yöntem, ekstraselüler matrisin biyofiziksel özelliklerinin hücre davranışına etkisini kontrollü şekilde analiz etmeyi sağlar.

Konsantrik Jel Sistemi 3D Hücre Göç Matrix mikroçevresinin biyofiziksel Rolü Eğitim için

Daha fazla video keşfet