Name: Oksidatif Stres Direnci Ölçüm Caenorhabditis elegans 96 oyuklu mikrotiter plakalarında (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Öğrenin Caenorhabditis elegans'ta oksidatif stres direncini ölçme yöntemini. Sıvı faz 96 kuyucuklu plaka kullanarak nematodların hayatta kalma oranlarını değerlendirin ve hücresel dayanıklılık mekanizmalarını keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz C. Caenorhabditis Genetik Merkezi&#39;nden kabul elegans suşları. Finansman desteği Terry Fox Araştırma Enstitüsü tarafından sağlandı. Biz de Rolande ve Marcel Gosselin Lisans Bursu ve McGill Entegre Kanser Araştırma Eğitim Programı kanser araştırma FRN53888 içinde CIHR / FRSQ eğitim hibe EP verilen destek için minnettarım.

Reaktifler 1. Hazırlık <ol><li> C. medyanın hazırlanması (Bu durumda, vahşi tip hayvan ve FLCN-1 (ok975) mutant hayvanlarda) elegans büyümesi. <ol><li> Tris HCI ve 5.5 g Tris baz, 2.4 g, Bactopetone 31 g, NaCl 20 g ve kolesterol 0.08 g &#39;ını ihtiva Youngren tek Bacto-pepton (MYOB), kuru bir karışım Modifiye hazırlayın. Sallayarak iyice karıştırın. NOT: Bu karışım MYOB ortamı 10 L hazırlamak için yeterlidir. Not: normal büyüme ortamı (NGM) plakaları MYOB plakalar 27 yerine kullanılabilir. Bununla birlikte, plakaların aynı tip suşlar arasında bağımsız tekrarlar arasında geçerli bir karşılaştırması için kullanılmalıdır. Bu protokol, biz sadece MYOB plakaları kullanılır. </li><li> MYOB kuru karışımın 6 g, agar 17 g eklenerek MYOB ortamı 1 L hazırlayın ve 122 ° C &#39;de 45 dakika süre ile H2O ve otoklav ile 1 L&#39;ye tamamlanır. Plakaları dökün ve 2 gün boyunca oda sıcaklığında kurumaya bırakın. </li><li> Steril teknik kullanılarak, kültürlerdeki 100 ml&#39;sini aşılamakE. LB sıvı ortamında yeniden E. coli OP50 bakteri ve 37 ° C &#39;de O / N büyür. </li><li> E. Tohum MYOB plakaları E. coli OP50 bakterileri. 48 st için oda sıcaklığında büyümesi izin verin. </li></ol></li><li> RNAi kullanılarak gen baskılanması Hazırlık <ol><li> MYOB RNAi besleme tabak hazırlayın. Adımlar 1.1.1 ve 1.1.2 gibi devam edin. Otoklav sonra, ortam yaklaşık 55 ° C&#39;ye kadar soğutulur ve eklemek için izin 1 M izopropil β-D-1-tiogalaktopiranosid (IPTG) ve 100 mM ampisilin, 1 ml 1 mi. </li><li> Streak E. E. coli HT115 kontrol EV veya agar plakaları ampisilin üzerinde FLCN-1 spesifik RNAi (50 ug / ml) / tetrasiklin (15 ug / ml) ya da ifade eden bir plazmid ile transforme edilmiş bakteriler. 37 ° C&#39;de, kültür O / N büyütün. </li><li> Koloniler seçin ve E. aşılamak E. coli HT115 kontrol EV ya da belirli bir RNAi 1 FLCN ve ya 37 ve # LB / ampisilin (50 ug / ml), orta ve O / N kültürünün yetiştirilmesi eksprese eden bir plazmid ile transforme edilen bakteri176 ° C. </li><li> E. ile Tohum plakalar E. coli HT115 EV bakteri veya HT115 FLCN-1 RNAi bakteri. NOT: Kullanımdan önce oda sıcaklığında plakaları 48 saat tutun. Besleme RNAi demonte etkili ise, DS-RNA 28 teslim diğer yöntemleri kullanabilirsiniz. </li></ol></li><li> Parakuat (PQ) ile oksidatif stres oluşturma: <ol><li> PO 4 KH 2, 3 g karıştırılarak M9 tampon hazırlanması, Na 2 6 g HPO 4, 5 g NaCI ve MgSO 4 0.25 g · 7 H2O Damıtılmış su ile 1 L&#39;ye getirin. Oda sıcaklığında 122 ° C ve mağaza şişe 45 dakika süreyle otoklavlanmaktadır çözeltisi. </li><li> Analiz gününde, M9 / PQ-içeren solüsyon hazırlanır. (M9 4 ml tampon içinde eritildi PQ 0,1028 g oyuk başına M9 / PQ 40 ul ile bütün bir 96 gözlü plakalar doldurur) Bu protokol için, 100 mM PQ kullanın. DİKKAT: PQ tehlikeli ve son derece toksik bir bileşiktir. Uygun kurallarına göre işlemek. NOT: İlk yeni s çalışanTren veya yeni bir durum, bu 7-10 saat içinde hayvanları öldürmek için kullanılacak en iyi konsantrasyonunu belirlemek için PQ artan konsantrasyonları hayatta kalma tahlil için tavsiye edilir. </li></ol></li></ol> Yaş senkronize L4 Nüfus 2. Hazırlık <ol><li> E. ile seribaşı taze MYOB plaka Transferi 20 gebe yetişkin çift cinsiyetli E. coli OP50 bakterileri. Tahlil sırasında gerekli solucanlar sayısına dayalı birkaç tabak hazırlayın. </li><li> Onları 6 saat sonra anneleri kaldırmak platin tel solucan kıracağı kullanarak yumurtalarını bırakmak için izin verin. Bıraktıkları yumurta sayısını değerlendirmek için mikroskop altında plakaları kontrol edin. </li><li> Yumurtaların açılması ve 48 saat boyunca 20 ° C&#39;de büyümeye izin verin. Bu zamanda, hayvanlar, bir geç L4 / genç yetişkin aşamasındadır. Aynı sahne hayvanları seçin ve PQ çözüm içeren kuyulara aktarın. NOT: 48 saat inkübasyon, sadece yabani tipte hayvanlara benzer şekilde büyümeye mutantlar için geçerli olduğundan, bu gelişim takip etmek önemlidirYeni test mutantların oranı, vahşi tip gelişme hızına aksi halde, başka bir zaman çizgisi kullanılmalıdır uygun sağlamak. </li><li> Alternatif olarak, senkronizasyon tekniklerini kullanın. Hipoklorit çözeltisi kullanılarak L1 larvalarının solucanların senkronize popülasyonunu üretmek (25 ml su,% 5.25 sodyum hipoklorit 125 mi, 4 M NaOH, 50 ml, ışıktan izole etmek için alüminyum folyo ile bir şişe sarın). Yoğun bir ağartıcı tahlil sırasında hayvan davranışını etkiler olabilir Bununla birlikte, bu deney için, bu, tavsiye edilmez. DİKKAT: kurallarına göre hipoklorit solüsyonu tutun. Not: aşağı ilgilenilen geni düzenleyen özel RNAi bakteri ile ekim yapılmış RNAi plakalara annelerin transferi hariç olmak üzere, bölüm 2&#39;de tarif edildiği gibi çift cinsiyetli eşitlemeye RNAi kullanırken. RNAi ile demonte zayıf olduğunda, birden nesiller için beslenme tavsiye edilir. </li></ol> 3. Oksidatif Stres Direnci Deneyi &lt;Sahne/ P&gt; <ol><li> Pipet 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna (taze elde edilmiş) 100 mM PQ çözeltisi 40 ul. Her durumda (tedavi, mutant, vs.) replike olarak en az 12 kuyu kullanın. Bir platin tel solucan maşası kullanarak, her iyi başlangıç ​​ve bitiş zamanlarını gösteren 5-8 L4 larvaları hayvanları transfer. </li><li> Başka bir koşul başlatırken, başlangıç ​​ve bitiş zamanlarını not edin. Başlangıç ​​zamanından itibaren bir saat sonra ölü hayvanları solucanlar aktarılması ve puanlama arasındaki inkübasyon süresi içinde 20 ° C&#39;de plaka koyun. </li><li> Diseksiyon mikroskobu kullanarak, hayatta kalma her saat saymak. Yavaşça saymak başlamadan önce plakayı sallayın. Ölü hayvanlar gibi, hatta yüksek yoğunluklu ışık lekelenme sonra, hareket etmeyen solucanlar belirtiniz. Ayrıca canlı hayvanların sayısını göstermektedir. NOT: Yüksek büyütmede solucan şekli, kuyrukları ve baş hareketi baktığımızda, diri ölü solucanlar belirlemeye yardımcı olur. </li><li> En solucanlar ölene kadar bu adımı her saat tekrarlayın. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. Every Time Point Survival Yüzde Belirlenmesi <ol><li> Iyi her transfer hayvanların toplam sayısı ekleyerek durum başına toplam hayvan sayısını hesaplayın. Hasarlı veya transfer etmesi halinde öldürülen hayvan geçiyoruz. </li><li> Her zaman noktası için, (12 kuyuda ölü hayvanların toplamı) durumuna başına ölü hayvanların toplam sayısını hesaplamak. Her zaman noktası için, ve hayatta kalma (100 eksi yüzde ölümü) yüzdesi (ölü hayvanlar 100 ile hayvanların toplam sayısına bölünmesiyle ve çarpılır sayısı) ölüm yüzdesini hesaplar. </li><li> Bu deney en az 3 bağımsız kez tekrarlayın. </li></ol>

<ol><li>Schieber, M., Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROS+function+in+redox+signaling+and+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">ROS function in redox signaling and oxidative stress.</a> Curr Biol. 24, R453-R462 (2014).</li>
<li>Alfadda, A. A., Sallam, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species in health and disease.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 936486(2012).</li>
<li>Finkel, T., Holbrook, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidants%2C+oxidative+stress+and+the+biology+of+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing.</a> Nature. 408, 239-247 (2000).</li>
<li>Di Carlo, M., Giacomazza, D., Picone, P., Nuzzo, D., San Biagio, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+the+key+players+in+the+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Res%22%5BJournal%5D)">Are oxidative stress and mitochondrial dysfunction the key players in the neurodegenerative diseases.</a> Free Radic Res. 46, 1327-1338 (2012).</li>
<li>Gandhi, S., Abramov, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+oxidative+stress+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Mechanism of oxidative stress in neurodegeneration.</a> Oxid Med Cell Longev. 2012, 428010(2012).</li>
<li>Trushina, E., McMurray, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases.</a> Neuroscience. 145, 1233-1248 (2007).</li>
<li>Touyz, R. M., Briones, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+and+vascular+biology%3A+implications+in+human+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertens+Res%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species and vascular biology: implications in human hypertension.</a> Hypertens Res. 34, 5-14 (2011).</li>
<li>Gorrini, C., Harris, I. S., Mak, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+oxidative+stress+as+an+anticancer+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Modulation of oxidative stress as an anticancer strategy.</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 931-947 (2013).</li>
<li>Sosa, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+and+cancer%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+research+reviews%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress and cancer: an overview.</a> Ageing research reviews. 12, 376-390 (2013).</li>
<li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+Oxygen+Species+and+Aging+in+Caenorhabditis+elegans%3A+Causal+or+Casual+Relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship.</a> Antioxid Redox Signal. 13, 1911-1953 (2010).</li>
<li>Baumeister, R., Schaffitzel, E., Hertweck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans+controls+stress+response+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Endocrine signaling in Caenorhabditis elegans controls stress response and longevity.</a> J Endocrinol. 190, 191-202 (2006).</li>
<li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+diseases+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">Modeling human diseases in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol J. 5, 1261-1276 (2010).</li>
<li>Rodriguez, M., Snoek, L. B., De Bono, M., Kammenga, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worms+under+stress%3A+C.+elegans+stress+response+and+its+relevance+to+complex+human+disease+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Worms under stress: C. elegans stress response and its relevance to complex human disease and aging.</a> Trends Genet. 29, 367-374 (2013).</li>
<li>Hope, I. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHope%2C+IA+%22Practical+approach+series%22">Practical approach series</a>. , Oxford University Press. 282(1999).</li>
<li>C. elegans Sequencing Consortium. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans%3A+a+platform+for+investigating+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282, 2012-2018 (1998).</li>
<li>Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turn+to+the+worm%21%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+genetics+%26+development%22%5BJournal%5D)">Turn to the worm!</a> Current opinion in genetics & development. 7, 410-415 (1997).</li>
<li>Wheelan, S. J., Boguski, M. S., Duret, L., Makalowski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+nematode+orthologs--lessons+from+the+analysis+of+1800+human+genes+and+the+proteome+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Human and nematode orthologs--lessons from the analysis of 1800 human genes and the proteome of Caenorhabditis elegans.</a> Gene. 238, 163-170 (1999).</li>
<li>Culetto, E., Sattelle, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+Caenorhabditis+elegans+in+understanding+the+function+and+interactions+of+human+disease+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">A role for Caenorhabditis elegans in understanding the function and interactions of human disease genes.</a> Hum Mol Genet. 9, 869-877 (2000).</li>
<li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li>
<li>Lamitina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+approaches+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional genomic approaches in C. elegans.</a> Methods Mol Biol. 351, 127-138 (2006).</li>
<li>Poulin, G., Nandakumar, R., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+RNAi+screens+in+Caenorhabditis+elegans%3A+impact+on+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Genome-wide RNAi screens in Caenorhabditis elegans: impact on cancer research.</a> Oncogene. 23, 8340-8345 (2004).</li>
<li>Moreno-Arriola, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans%3A+A+Useful+Model+for+Studying+Metabolic+Disorders+in+Which+Oxidative+Stress+Is+a+Contributing+Factor%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans: A Useful Model for Studying Metabolic Disorders in Which Oxidative Stress Is a Contributing Factor.</a> Oxid Med Cell Longev. , 705253(2014).</li>
<li>Possik, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folliculin+regulates+ampk-dependent+autophagy+and+metabolic+stress+survival%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Folliculin regulates ampk-dependent autophagy and metabolic stress survival.</a> PLoS Genet. 10, e1004273(2014).</li>
<li>Fukushima, T., Tanaka, K., Lim, H., Moriyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+cytotoxicity+of+paraquat%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Prev+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanism of cytotoxicity of paraquat.</a> Environ Health Prev Med. 7, 89-94 (2002).</li>
<li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superoxide+dismutase+is+dispensable+for+normal+animal+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Superoxide dismutase is dispensable for normal animal lifespan.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 5785-5790 (2012).</li>
<li>Schulz, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+restriction+extends+Caenorhabditis+elegans+life+span+by+inducing+mitochondrial+respiration+and+increasing+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress.</a> Cell Metab. 6, 280-293 (2007).</li>
<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Timmons, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+methods+for+RNA+interference+in%5BTitle%5D)+AND+%22C.+elegans.+Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Delivery methods for RNA interference in.</a> C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 119-125 (2006).</li>
<li>Wang, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+Eyes+Absent+Ortholog+EYA-1+Is+Required+for+Stress+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry+%28Mosc%29%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans Eyes Absent Ortholog EYA-1 Is Required for Stress Resistance.</a> Biochemistry (Mosc). 79, 653-662 (2014).</li>
<li>Paz-Gomez, D., Villanueva-Chimal, E., Navarro, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DEAD+Box+RNA+helicase+VBH-1+is+a+new+player+in+the+stress+response+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The DEAD Box RNA helicase VBH-1 is a new player in the stress response in C. elegans.</a> PLoS One. 9, 97924(2014).</li>
<li>Ward, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defects+in+the+C.+elegans+acyl-CoA+synthase%2C+acs-3%2C+and+nuclear+hormone+receptor%2C+nhr-25%2C+cause+sensitivity+to+distinct%2C+but+overlapping+stresses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Defects in the C. elegans acyl-CoA synthase, acs-3, and nuclear hormone receptor, nhr-25, cause sensitivity to distinct, but overlapping stresses.</a> PLoS One. 9, 92552(2014).</li>
<li>Staab, T. A., Evgrafov, O., Knowles, J. A., Sieburth, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+synaptic+nlg-1%2Fneuroligin+abundance+by+the+skn-1%2FNrf+stress+response+pathway+protects+against+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Regulation of synaptic nlg-1/neuroligin abundance by the skn-1/Nrf stress response pathway protects against oxidative stress.</a> PLoS Genet. 10, e1004100(2014).</li>
<li>Greer, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+AMPK-FOXO+pathway+mediates+longevity+induced+by+a+novel+method+of+dietary+restriction+in%5BTitle%5D)+AND+%22C.+elegans.+Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in.</a> C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).</li>
<li>Allen, E., Walters, I. B., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brivanib%2C+a+dual+FGF%2FVEGF+inhibitor%2C+is+active+both+first+and+second+line+against+mouse+pancreatic+neuroendocrine+tumors+developing+adaptive%2Fevasive+resistance+to+VEGF+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Brivanib, a dual FGF/VEGF inhibitor, is active both first and second line against mouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance to VEGF inhibition.</a> Clin Cancer Res. 17, 5299-5310 (2011).</li>
<li>Apfeld, J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. S., Curtis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+AMP-activated+protein+kinase+AAK-2+links+energy+levels+and+insulin-like+signals+to+lifespan+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The AMP-activated protein kinase AAK-2 links energy levels and insulin-like signals to lifespan in C. elegans.</a> Genes Dev. 18, 3004-3009 (2004).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Caenorhabditis+elegans+AMP-activated+protein+kinase+AAK-2+is+phosphorylated+by+LKB1+and+is+required+for+resistance+to+oxidative+stress+and+for+normal+motility+and+foraging+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The Caenorhabditis elegans AMP-activated protein kinase AAK-2 is phosphorylated by LKB1 and is required for resistance to oxidative stress and for normal motility and foraging behavior.</a> J Biol Chem. 283, 14988-14993 (2008).</li>
<li>Honda, Y., Honda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+daf-2+gene+network+for+longevity+regulates+oxidative+stress+resistance+and+Mn-superoxide+dismutase+gene+expression+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">The daf-2 gene network for longevity regulates oxidative stress resistance and Mn-superoxide dismutase gene expression in Caenorhabditis elegans.</a> FASEB J. 13, 1385-1393 (1999).</li>
<li>Restif, C., Metaxas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+the+swimming+motions+of+C.+elegans+worms+with+applications+in+aging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Image+Comput+Comput+Assist+Interv%22%5BJournal%5D)">Tracking the swimming motions of C. elegans worms with applications in aging studies.</a> Med Image Comput Comput Assist Interv. 11, 35-42 (2008).</li>
<li>Buckingham, S. D., Sattelle, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast%2C+automated+measurement+of+nematode+swimming+%28thrashing%29+without+morphometry%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fast, automated measurement of nematode swimming (thrashing) without morphometry.</a> BMC Neurosci. 10, 84(2009).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

C. elegans kolaylıkla kültürlenebilir yana in vivo genetik olarak oksidatif stres direnci çalışma için çekici bir model organizma ve hızlı bir şekilde genetik olarak özdeş yavruların çok sayıda yol açar. Oksidatif stres direncini ölçmek için birden çok yöntem, daha önce tarif edilmiştir ve böyle PQ, rotenone, H2O 2 ve juglon 25,26,29-32 gibi çeşitli ROS kaynakları ile kültür levhaları takviyesi dayanmaktadır. Burada 100 mM PQ kullanılarak 96 yuvalı plakalar içinde sıvı oksidatif s...

A reference was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52746">Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates</a>. There was an error with reference 34 in the Citations section. It has been updated from:
Allen, E., Walters, I.B., Hanahan, D. Brivanib a dual FGF/VEGF inhibitor,is active both first and second line againstmouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance toVEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, (16) 5299-310 (2011).
to:
Allen, A. T., Maher, K. N., Wani, K. A., Betts, K. E., &#38; Chase, D. L. Coexpressed D1- and D2-like dopamine receptors antagonistically modulate acetylcholine release in Caenorhabditis elegans. Genetics. 188, 579-590 (2011).

Erratum: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Ökaryotlarda, mitokondri elektron taşıma zincirinde yer alan oksidatif fosforilasyon ATP şeklinde enerji üretimi temel sürücüdür. Reaktif oksijen türleri (ROS) Bu işlem doğal bir yan ürünü bulunmaktadır. Sinyal molekülleri olarak önemli bir rolü olmasına rağmen, aşırı ROS DNA hasarı protein karbonilasyonu ve lipid oksidasyonuna neden olabilir. ROS üretimi ve detoksifikasyon arasında bir dengesizlik enerji tükenmesi, hücresel hasara yol açan oksidatif strese neden olur ve hücre ölümünü 1,2 tetikler. Oksidatif stres, yaşlanma ve kanser, diyabet, kalp-damar ve nörodejeneratif hastalıklar 3-9 dahil olmak üzere birçok yaşamı tehdit eden hastalıkların gelişimine katkıda bulunur. Hücreler uygun ROS düzeylerini korumak için ve oksidatif hasara karşı 1,2 bileşenlerinin korumak için enzimatik ve non-enzimatik savunma stratejilerini geliştirmişlerdir. Süperoksit dismutaz (SOD) enzim conve ilk hareketDaha sonra, katalaz veya peroksidaz enzimleri tarafından suya dönüştürülür H2O 2, RT süperoksit. Sigara enzimatik savunma stratejilerinin daha çok temel hücresel bileşenleri korumak makromoleküllerle, karşılaştırıldığında ROS ile daha hızlı reaksiyona molekülleri içerir. ROS enzimler detoks koruyucu rolüne rağmen, bazı ROS molekülleri antioksidan savunma mekanizmalarını kaçış ve oksidatif hasara yol açar. Algılama, onarım ve hasarlı hücre bileşenlerinin bozulması oksidatif strese 1,2 sırasında gerekli savunma stratejileri vardır. Stres direnci ve özellikle oksidatif stres yer alan sinyal yolları çok evrimsel 10,11 muhafaza edilir. Organizma koşullar sadece kısmen çoğaltılmış hücre kültürü deneyleri, 12,13 büyük önem taşımaktadır model organizmaların oksidatif stresin çalışmanın aksine. C elegans cul kolay ve ucuz olabilir serbest yaşayan nematod olanAgar medya üzerinde bir bakteri çim tured. Küçük boyutta normal olarak (yaklaşık 1 mm uzunluğunda) ve genetik manipülasyonlar kolaylaştıran kendiliğinden gübre hermafrodit olarak büyür. Bu hızlı bir yaşam döngüsü ve yüksek üreme kapasitesine, nesilden başına yaklaşık 300 yavru üreten o büyük ölçekli genetik ekranlar 14 gerçekleştirmek için güçlü bir araç yapma vardır. C. C. elegans genomunun tam dizilenmiş ve genlerin% 40-50, insan hastalığı ile ilişkili genlerin 15-18 homologları olduğu tahmin edilmektedir. RNAi kullanılarak ilgi genlerinin yok etme, hızlı ve C kolay elegans. Gene aşağı düzenleme E. hayvan besleme ile elde edilebilir İlgi 19 mRNA hedef çift iplikçikli RNA eksprese eden bir plazmide E. coli bakterileri. Bu nedenle, büyük ölçekli RNAi ekranlarını kullanarak gen fonksiyonu belirlenmesi kanseri 20,21 dahil olmak üzere insan hastalıklarının anlaşılması üzerinde büyük etkisi vardır. O çalışmalarıC. xidative stres direnci elegans oksidatif stres 13,22 direnç muhafaza mekanizmaları tanımlanmasına yol açmıştır. Belirlenen bazı yollar hipoksi, ısı ve ozmotik stres gibi diğer stresler yanı gibi uzun ömürlü ve direnci modüle ortak yollar vardır. Bu yollar, insülin sinyalizasyon, TOR sinyalizasyon ve Otofaji sayılabilir. Diğer önemli yollar gibi, ya da hasar onarım gibi ısı şoku proteinleri ve şaperon 11,13,22 olarak süperoksit dismutaz enzim ve katalaz enzimleri olarak ROS detoksifikasyon içerir. Bu protokol C. oksidatif strese karşı direnci nasıl belirleneceği açıklanır sıvı içinde elegans. Daha önce C&#39;de kaybı ortaya FLCN-1 (ok975) oksidatif strese karşı artmış bir direnç göstermiştir beri protokol göstermek için FLCN-1 (ok975) ve vahşi tip hayvanlara kullanılan elegans 23. Ayrıca, bu daha iyi direnç gösterme bağlı olduğunu göstermiştirAMPK ve Otofaji hücresel biyoenerjitiklerinin artırır ve gerilme direnci 23 teşvik eden bir sinyal ekseninde. PQ reaktif oksijen türleri 24 üretmek için elektron taşıma zinciri engelleyen bir oksidatif stres olduğunu. Aynı deney, adapte edilebilir ve ROS kaynakları veya ROS üreten bileşikler, H2O 2 ve rotenone gibi kullanılabilir. Benzer deneyler, PQ düşük konsantrasyonlarda 25,26 kullanılan plakalar üzerinde geliştirilmiştir. Bu deneyde avantajı çok hızlı ve sonuçlar bir gün içinde elde edilebilir olmasıdır. Buna ek olarak, 96 gözlü plakalar içinde oksidatif stres direnci deneyi gerçekleştirmek için kullanılan sıvının toplam hacmi PQ-ihtiva eden plakalar hazırlamak için kullanılır hacmi ile karşılaştırıldığında düşüktür. Bu nedenle, kullanılan PQ miktarı sıvı analizde ise ucuz tahlil işler ve zehirli atıkların üretimini sınırlayan, düşük. Bununla birlikte, levha tahlilleri ile karşılaştırıldığında bu analizde sınırlamaları la bulunmaktadırSıvı deneyde gıda ve sıvı oksijen daha düşük bir konsantrasyonda CK hava ile karşılaştırıldığında. Bunlar bazı durumlarda, sonuçlar etkileyebilecek önemli faktörlerdir. Bu nedenle, bu tahlilde elde edilen sonuçlar desteklemek için tavsiye edilir, oksidatif stres direnci diğer yöntemlerle tekrarlanabilirlik teyit etmektedir.

<table><tbody><tr><td>Agar bakteriyolojik sınıf</td><td>Multicell</td><td>800-010-LG</td><td></td></tr><tr><td>Bakteriyolojik pepton</td><td>Oxoid</td><td>LP0037</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür biyoteknoloji sınıfı</td><td>Bioshop</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Kolesterol</td><td>Sigma</td><td>C8503-25G</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure tris hidroklorür</td><td>Invitrogen</td><td>15506-017</td><td></td></tr><tr><td>Tris aminometan</td><td>Bio Basic Canada Inc</td><td>77-86-1</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>sc-202185A</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>Bioshop</td><td>69-52-3</td><td></td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>8013-01-2</td><td></td></tr><tr><td>Metil violojen diklorür hidrat</td><td>Aldrich kimyası</td><td>856177-1G</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı 60 x15 mm</td><td>Fisher</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>Pipeti 10 ml</td><td>Fisher</td><td>1367520</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik</td><td>G-Biosciences</td><td>RC-084</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat heptahidrat</td><td>Sigma</td><td>M-5921</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik</td><td>Bioshop</td><td>7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Discovery v8 stereo zeiss mikroskobu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 iyi şeffaf mikrotitre plakası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>flcn-1 RNAi kaynağı</td><td>Ahringer Kütüphanesi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

oksidatif stres direnci Ölçüm<em&gt; caenorhabditis elegans</em&gt; 96 oyuklu mikrotiter plakalarında

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Üretim ve reaktif oksijen türlerinin detoksifikasyon arasındaki dengesizliğin sonucudur Oksidatif stres, kardiyovasküler ve nörodejeneratif hastalıklar, diyabet, yaşlanma ve kanser gibi kronik insan bozuklukları, büyük bir katkıda bulunuyor. Bu nedenle, hücre sistemlerinde değil, aynı zamanda bütün organizmalar kullanılarak sadece oksidatif stres çalışma için önemlidir. C. elegans yüksek evrimsel korunmuş olan oksidatif stres sinyal iletim yollarının, genetiğinin incelemek için cazip bir model organizmadır. Burada, biz C. oksidatif stres direnci ölçmek için bir protokol sağlamak sıvı içinde elegans. Bu tür paraquat (PQ) ve H2O 2 Kısaca, ROS-indükleyici reaktifler M9 tampon içinde çözülür ve çözeltiler 96 gözlü bir mikrotitre plakasının gözenekleri içinde bölünür. Senkronize L4 / genç yetişkin C. elegans hayvanlar oyuklara transfer edilir (5-8 hayvan / oyuk) ve hayatta kalma ölçülürher saat en fazla solucanlar ölene kadar. Verilerin yanlış yorumlanmasına yol açabilecek oksidatif stres üzerine hayvanların davranışlarını etkileyebilecek yaşlanma, plakalarda streslerinin düşük konsantrasyonu kullanılarak bir oksidatif stres direnci deneyi yaparken. Bununla birlikte, bu tarifnamede tarif edilen deneyde, bu sorun yalnızca L4 / genç yetişkin hayvanlar kullanılmaktadır çünkü pek mümkün değildir. Ayrıca, bu protokol, ucuz ve sonuçlar genetik ekranlar cazip bu teknik kılan bir gün içinde elde edilmektedir. Genel olarak, bu oksidatif stres ile ilişkili insan bozukluklarının daha iyi karakterizasyonu tercüme edilebilir oksidatif stres sinyal iletim yollarını, anlamanıza yardımcı olacaktır.

Karşılaştırılması vahşi tip C. elegans FLCN-1 (ok975) mutant hayvanlar Burada yabani tip C direncini belirlemek için 100 mM PQ kullanılan oksidatif stres, ısı ve anoksi 23 karşı gösterilmiştir FLCN-1 (ok975) ile karşılaştırıldığında elegans hayvanlar. Tedavi 4 saat, yabani tip% 48.3 sonra hayatta olarak FLCN-1 (ok975) hayvanlarda% 77.8 hayatta kalma ile karşılaştırıldığında. Beklendiği gibi, FLCN-1 (ok975) mutant hayvanlar yaba...

C. elegans, oksidatif stres direncinde yer alan sinyal iletim yolaklarını incelemek için çekici bir model organizmadır. Burada, 96 oyuklu plakada birkaç oksitleyici ajan kullanarak sıvı fazdaki C. elegans hayvanlarının oksidatif stres direncini ölçmek için bir protokol sunuyoruz.

Oksidatif Stres Direnci Ölçüm<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; 96 oyuklu mikrotiter plakalarında

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Bu prosedürün genel amacı, sıvı ortamdaki Caenorhabditis elegans nematodlarının oksidatif stres direncini ölçmektir. Bu işlem, öncelikle paraquat gibi ROS indükleyici ajanların M9 Tamponu içinde çözülmesi ve solüsyonun 96 kuyucuklu bir mikrotitrasyon plakasına alikotlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, her koşul için en az 12 kuyucuk kullanılarak, her bir kuyucuğa senkronize geç L4 evresindeki beş ila sekiz nematod aktarılır.Ardından, bir diseksiyon mikroskobu kullanılarak, hayvanların çoğu ölene kadar her saatte bir canlı ve ölü hayvan sayısı belirlenir. Son adım, oksidatif stres direnç testi uygulanmadan en az altı gün önce, her koşul için her zaman noktasında hayatta kalan hayvanların yüzdesini hesaplamaktır. MYOB besiyeri hazırlamak için modifiye edilmiş genç grins only bact PEPIN veya MYOB kuru karışımını hazırlayın ve çalkalayarak iyice karıştırın.Bir litre MYOB besiyeri hazırlamak için, altı gram MYOB kuru karışımını 17 gram agar ile birleştirin ve H2O ile bir litreye tamamlayıp 122 °C'de 45 dakika boyunca otoklavlayın. MYOB besiyerini steril teknikler kullanarak plakalara dökün ve plakaların oda sıcaklığında iki gün boyunca kurumasını sağlayın. 100 mililitre LB sıvı besiyerini e coli, OP 50 bakterileri ile inoküle edin ve ertesi güne kadar 37 °C'de gece boyunca büyütmeye bırakın.E coli OP 50 bakterileri ile MYOB plaklarını ekimleyin ve bakterilerin oda sıcaklığında 48 saat boyunca büyümesini sağlayın. Gen aşağı düzenlemesinin RNA interferans ile gerçekleştirileceği durumlarda, prosedüre M-Y-O-B-R-N-A-I besleme plaklarını hazırlayarak başlayın. Otoklavlamadan sonra, MYOB besiyerinin yaklaşık 55 °C'ye kadar soğumasını bekleyin.Ardından, MYOB besiyerine izopropil beta D-1-tiyogalaktozid veya IPTG ile ampicillin ekleyin. Plakları dökün ve oda sıcaklığında iki gün boyunca kurumaya bırakın; ampicillin ve tetracycline içeren agar plaklarına E coli HT115 bakterilerini ekim yapın.Bir suş, kontrol boş vektörünü veya ev'i eksprese eden bir plazmit ile transforme edilmiştir. Diğer bir suş ise FOLLIN'i hedefleyen çift zincirli RNA'yı eksprese eden bir plazmit ile transforme edilmiştir. Mr.NA, 37 °C'de gece boyunca inkübe edilerek ertesi güne bırakılır.Kolonileri seçin ve ampisilin içeren LB besiyerine ekim yapın. Kültürleri 37 °C'de gece boyunca büyütün. e coli HT one 15 EV bakterileri veya HT one 15 Collin one RNAi bakterileri içeren MYOB RNAi plaklarını inceleyin; plakları kullanmadan önce 48 saat boyunca oda sıcaklığında bekletin.Deney sırasında ihtiyaç duyulan solucan sayısına göre birkaç plaka hazırlayın ve solucanların 20 °C'de altı saat boyunca yumurtlamasına izin verin. Ardından, anneleri uzaklaştırmak için platin telli bir solucan toplama iğnesi kullanın. Yumurtlanan yumurta sayısını değerlendirmek için plakaları mikroskop altında kontrol edin.Yumurtaların çatlamasına ve solucanların 20 °C'de 48 saat boyunca büyümesine izin verin. 48 saat sonra, hayvanlar geç L4 veya genç yetişkin evresinde olmalıdır. 48 saatlik inkübasyon süresinin yalnızca yabani tip hayvanlarla benzer şekilde büyüyen mutantlar için geçerli olduğunu unutmayın.Yeni bir mutant test edilecekse, öncelikle gelişim hızının izlenmesi önemlidir. Bu gösterimde, paraquat kullanılarak oksidatif stres indüklenecektir. Eşlik eden protokol metninde açıklandığı şekilde, taze bir 100 millimolar paraquat çözeltisi hazırlayın.Paraquat tehlikeli ve oldukça toksik bir bileşiktir ve uygun kılavuzlara göre işlenmelidir. Bir platin tel solucan toplama çubuğu kullanarak, 96 kuyucuklu bir plakadaki her kuyucuğa 40 µL paraquat çözeltisi pipetleyin; test edilen her koşul için en az 12 kuyucuğu tekrar olarak kullanın.Her kuyucuğa beş ila sekiz adet L4 larv evresindeki hayvan aktarın; test edilen her koşul için başlangıç ve bitiş zamanını belirtin. 96 kuyucuklu plakayı 20 °C'de bekletin. Başlangıç zamanından bir saat sonra, bir diseksiyon mikroskobu kullanarak ölü ve canlı hayvanları skorlayın. Sayma işlemine başlamadan önce plakayı nazikçe sallayın. Yüksek yoğunluklu ışığa maruz kaldığında bile hareket etmeyen solucanlar ölü olarak skorlanır. Ölü solucanları canlı solucanlardan ayırt etmek için yüksek büyütmede solucan şekline, kuyruklara ve baş hareketlerine bakın.Çoğu solucan ölene kadar her saat başı sağkalımı skorlayın ve her zaman noktası için sağkalım yüzdesini belirlemek amacıyla bu deneyi en az üç bağımsız kez tekrarlayın. İlk olarak, her birine aktarılan toplam hayvan sayısını toplayarak koşul başına toplam hayvan sayısını hesaplayın. Aktarım sırasında hasar gören veya ölen hayvanları dikkate almayın.Her zaman noktası için bir sonrakine aktarın. Koşul başına toplam ölü hayvan sayısını hesaplayın. Bu çalışmadaki ölüm yüzdesini ve hayatta kalma yüzdesini hesaplayın.100 millimolar. Oksidatif strese, ısıya ve anoksiye dirençli olduğu gösterilen bir follin one mutantı ile karşılaştırıldığında, yabanı tip C elegance direncinin belirlenmesi için Paraquat kullanılmıştır. Dört saatlik uygulama sonrasında, mutant hayvanlarda %77,8 hayatta kalma oranına karşılık, yabanı tipin %48,3'ü hayatta kalmıştır.Kontrol, boş vektör veya follin ile beslenen yabanıl tip hayvanlar arasında yapılan karşılaştırmada benzer sonuçlar elde edilmiştir. RNAi bakterileri kullanılarak yapılan follin ekspresyonunun azaltılması, 100 millimolar paraquat direncini artırarak, RNAi ile gen fonksiyonunun azaltılmasının fonksiyon kaybı mutasyonlarını taklit ettiğini göstermiştir. Bu teknik bir kez kavrandıktan sonra, oksidatif stres direncini değiştiren genleri belirlemek için C. elegans üzerinde kolayca uygulanabilir. Son olarak, C. elegans üzerinde bu taramaların yapılması, oksidatif stresle bağlantılı insan hastalıklarının tedavisinde büyük bir değere ve potansiyele sahiptir.

measuring-oxidative-stress-resistance-caenorhabditis-elegans-96-well

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokolü biz ölçmek için bir yöntem mevcut.

Ölçme Caenorhabditis elegans 96 Şey microtiter Tabaklar Ömrü

Bu video, akut toksisite tedavisini test eden veya genetik bir suşu toksik bir duruma direnç açısından test eden kısa süreli bir sağkalım testini tanıtmaktadır. Örnek protokol, solucanların paraquat (PQ) tarafından indüklenen oksidatif strese direnme yetenekleri açısından test edildiği örnek bir hayatta kalma testini göstermektedir.

C. elegans Hayatta Kalma Testi: Kısa Süreli Bir Toksisite Testi

Bu video, bakteri suşlarının oksidatif stres tepkilerini değerlendirmek için özel olarak tasarlanmış bir spot plaka testini göstermektedir. Bazı suşlar, bir antioksidan pigment olan pyomelanin üretir. Tersine, bir test ajanı ile muamele edilen ve piyomelanin üretiminin azalmasına yol açan suşlar, oksidatif strese karşı artan duyarlılık sergiler ve bu da piyomelanin üreten suşlara kıyasla hücre canlılığının azalmasına neden olur.

Bakteri Suşlarında Oksidatif Stres Tepkilerini Değerlendirmek için Bir Spot Plaka Testi

Burada biz hızla nematodunun büyüme medya agar, yüzlerce Caenorhhabditis elegans tutarlı numaraları iyi başına 96-şey kültür plakaların üretimi için basit bir protokol tanımlamak. Bu kültürler tüm canlıların fenotipik tarama için yararlıdır. Yanlısı uzun ömürlü efektleri için ekran kimyasallara bu kültürler kullanarak üzerinde odaklanabilir.

Yüksek işlem hacmi Caenorhabditis Elegans kimyasal tarama için basit bir yöntem

Bu iletişim kuralı bir yöntem Caenorhabditis elegans büyük ölçekli ekimi için katı medyada açıklar. Sıvı kültür alternatif, bu protokol parametreleri farklı ölçeklerde plaka tabanlı ekilen almak sağlanır. Bu sonuçlar karşılaştırılabilir sıvı ve katı Medya kültürü arasındaki morfolojik ve metabolik farklar ihmal olarak artırır.

Large-scale tarımı plaka tabanlı Caenorhabditis elegans: diyabet metabolik değişiklikler çalışma için numune hazırlama

Mitokondrial solunum organizmalar hayatta kalmak için önemlidir; Bu nedenle, oksijen tüketim oranını mitokondrial sağlık mükemmel bir göstergesidir. Bu iletişim kuralı, Bazal ölçmek için piyasada bulunan bir respirometer nasıl kullanılacağını açıklar ve maksimal oksijen tüketimi oranlarında yaşa, sağlam ve serbestçe hareketli Caenorhabditis elegans.

Oksijen tüketimi oranlarında sağlam Caenorhabditis elegans ölçümü

Yuvarlak solucanlar Caenorhabditis elegans ana bilgisayar-patojen etkileşimleri incelemek için mükemmel bir modeldir. Burada açıklanan solucan mitis grubu streptokok üyeleri ile enfekte ve oksidatif stres tepkisi bu grup organizmalar tarafından üretilen H2O2 karşı aktivasyonu belirlemek için bir iletişim kuralıdır.

Oksidatif stres nedeniyle Mitis grubu streptokok Caenorhabditis elegans içinde eğitim

Burada, nematod C. elegans hücresel proteotoksik stres yanıtları floresan transkripsiyonel muhabirlerin aktivasyonunu ölçerek ve fizyolojik strese duyarlılık belirterek karakterize.

C. Eleganlarda Fizyolojik Stres Tepkilerinin Ölçüleri

Burada, moleküler düzeyde RT-qPCR kullanan Caenorhabditis elegans ısı şok tepkisi (HSR) indüksiyondeğerlendirmek için standart protokoller sunulmaktadır, hücresel düzeyde floresan muhabirler, ve organizma düzeyinde termokurtarma.

Caenorhabditis elegans Isı Şok Uyanımı İndüksiyon ölçme için Standart Yöntemler

Bağırsak mikropları, konakçılarının sağlığını spesifik veya korunmuş mekanizmalar yoluyla olumlu veya olumsuz yönde etkileyebilir. Caenorhabditis elegans , bu tür mikropları taramak için uygun bir platformdur. Mevcut protokol, solucan sağlığı için bir vekil olarak kullanılan nematod stres direnci üzerindeki etki için 48 bakteri izolatının yüksek verimli taramasını açıklamaktadır.

Caenorhabditis elegans Health Üzerinde Etkisi Olan Mikrobiyal İzolatların Yüksek Verimli Taraması

Caenorhabditis elegans, sağlık süresini, ömrünü ve strese karşı dayanıklılığı araştırmak için sağlam ve düşük maliyetli yöntemlerle mükemmel bir model sistem olarak hizmet eder.

Caenorhabditis elegans'ta Yaşam Süresini ve Sağlık Süresini Ölçmek için Düşük Maliyetli Yöntemlerin İncelenmesi

Öğrenin Caenorhabditis elegans'ta oksidatif stres direncini ölçme yöntemini. Sıvı faz 96 kuyucuklu plaka kullanarak nematodların hayatta kalma oranlarını değerlendirin ve hücresel dayanıklılık mekanizmalarını keşfedin.

Oksidatif Stres Direnci Ölçüm

Daha fazla video keşfet