Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Bu protokolün genel amacı, etiketlenmiş kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin enjeksiyon sonrası dağılımlarını ve akıbetlerini gama sintigrafisi ile non-invaziv olarak takip etmektir. Kök hücrelerin enjeksiyon sonrası akıbeti henüz yeterince anlaşılamamıştır. Bu tekniğin temel avantajları, kök hücrelerin uygulama sonrası birden fazla organda non-invaziv olarak izlenebilmesine olanak tanıması ve A osteo'nun kısa yarı ömrünün 48 saat içinde temizlenmesini sağlamasıdır.

Bu durum, doğal olarak ortaya çıkan tendinopatilerin tedavisinde kök hücre kullanımına dair içgörü sağlamış olsa da, aynı zamanda kemik ve kalp hastalığı tedavilerinin araştırılması için de kullanılabilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler için temel zorluklar hücrelerin koordinasyonu, etiketleme seti ve hastanın hazırlanmasıdır. Hücrelerin anında uygulaması için, önce sabitlenmiş uzva akustik kuplaj jeli uygulayarak başlayın ve maksimum yaralanma bölgesini belirlemek amacıyla seri transvers ve longitudinal görüntüler elde etmek için lineer bir transduser kullanarak tüm palmar metakarpal bölgeyi sistematik olarak tarayın.

Lokal anestezik uygulamasının ardından, implantasyon bölgesini en az beş dakika boyunca klorheksidin cerrahi yıkama solüsyonu ile temizleyin ve ardından etanolle ıslatılmış bir gazlı bezle silin. Hayvan hazırlandığında bir çift eldiven giyin; kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin 1x10⁷ hücrelik alikotunu, 1 mL kemik iliği süpernatantı içinde santrifüjle peletleyin. Ardından, tüpte yaklaşık 100 µL solüsyon bırakacak şekilde, 18 veya 19 gauge iğne takılmış 2 mL'lik bir şırınga ile süpernatantı aspire edin.

Süpernatanı buz üzerinde bir mikro santrifüj tüpüne aktarın ve ardından hücreleri kalan 100 microliters süpernatan içinde yeniden süspanse etmek için tüpü hafifçe vurun. Hücrelerin tamamen süspanse olduğundan ve görünür doku kümeleri kalmadığından emin olun. Ardından hücreleri oda sıcaklığına getirin.

Şimdi bir mililitre teknesyum perteknotat'ı bir H-M-P-A-O flakonuna karıştırın. Beş dakika sonra, bir mililitrelik şırınga ve iğne kullanarak mezenkimal kök hücreleri TECHNETIUM 99 M-H-M-P-A-O'nun tüm alikotuyla işleme tabi tutun. Ardından tüpün kapağını kapatın, hücreleri hafifçe tıklatarak karıştırın ve tüpü oda sıcaklığında bir kurşun zırh arkasına yerleştirin.

30 dakika sonra, tüpü bir pens ile açın ve hücrelere 1 mL PBS eklemek için 21 gauge iğne takılmış bir mililitrelik tüp şırıngası kullanın. Tüpün kapağını kapatın ve hücreleri karıştırın. Ardından, hücreleri santrifüjleyin ve iki mililitrelik şırıngayı kullanarak süpernatanı "yıkama bir" olarak etiketlenmiş korumalı bir tüpe dikkatlice aktarın.

Ardından, az önce gösterildiği gibi peleti bir mililitre daha PBS ile yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, ikinci yıkama sıvısını W2 olarak etiketlenmiş korumalı tüpe aktarın. Hücreleri kalan PBS içinde iyice resüspande edin ve transdüseri iğneye paralel tutarak buz gibi soğuk kemik iliği süpernatandan bir alikot ekleyin.

1,5 veya iki inçlik 20 gauge bir iğneyi, lezyonun merkezindeki maksimum hasar bölgesine boylamsal yönde yavaşça yerleştirin. Ardından, uygun koruma kullanarak hücreleri 20 gauge bir iğne ile donatılmış iki mililitrelik Luer-lock şırıngaya aspire edin ve herhangi bir sıvı kaybı olmamasına dikkat ederek iğneyi atın. Şırıngayı tendon içerisine önceden yerleştirilen iğneye bağladıktan sonra, dokudaki iğne yolu net bir şekilde görülebilecek şekilde ultrason probunu iğnenin altına konumlandırın ve hücreleri lezyona yavaş ama sabit bir hızda enjekte edin.

Tüm hücreler uygulandıktan sonra, lezyona püskürtülen sıvının ultrason görüntüsünde hiperekojenik hava kabarcıkları içeren ekoik sıvı şeklinde göründüğünü doğrulayın ve iğneyi geri çekin. Her biri 60 saniye boyunca statik görüntüler elde etmek için işlemleme yazılımındaki çalışma seçimi ve kemik statik seçeneklerini kullanın. Ardından, belirtilen zamanlarda lezyon bölgesinden, karpustan distal ekstremiteye kadar, karşı ekstremitenin eşdeğer bölgesinden, sol akciğer alanından ve sol tiroidden lateral görüntüler alın.

Ardından, ilgi alanı ve elips araçlarını seçerek seçim maskesini lezyon alanı üzerine uygun şekilde yeniden şekillendirin. Son olarak, ilgi alanı üzerindeki sayımları elde etmek için iki istatistik ekle seçeneğini belirleyin. Farklı zaman noktalarında her hayvan için aynı boyuttaki ilgi alanlarının kaydedildiğinden emin olun.

Lezyon içi uygulamadan sonra hücreler, zamanla çevre tendon dokusuna sınırlı bir yayılım gösteren odaklanmış bir sinyal alanı olarak gözlemlenecektir. Buna karşın, hücreler dijital Palmer ven yoluyla bölgesel perfüzyonla uygulandığında, enjeksiyon bölgesinde sinyalin kademeli bir azalması gözlemlenir. Zamanla, lezyon içi enjeksiyondan sonra akciğer alanları genellikle negatif çıkar, ancak erken zaman noktalarında bazen zamanla daha yaygın hale gelen çok odaklanmış bir sinyal tespit edilebilir.

Bu uygulama yoluyla tiroid yine negatif kalmaktadır. Bölgesel perfüzyon, akciğerlerde zamanla daha yaygın hale gelen fokal bir sinyal göstermektedir; ancak bu sinyal, lezyon içi uygulama yoluyla gözlemlenene kıyasla belirgin şekilde daha yoğundur. Tiroidin de sıklıkla fokal bir sinyal sergilemesiyle birlikte, enjeksiyon öncesi sıfırıncı zamandaki hücrelerin toplam başlangıç radyoizotop sayımı ve ilgi bölgesindeki başlangıç gama gramından elde edilen sayımlar.

Enjeksiyon sonrası sıfırıncı zaman noktası, enjeksiyondan sonraki her zaman noktasındaki sayımlardaki yüzde azalmayı hesaplamak ve böylece başlangıç sayımlarından itibaren TC 99 M'nin öngörülen bozunmasını belirlemek için kullanılabilir. Ardından, enjeksiyondan sonraki her zaman diliminde enjeksiyon bölgesinde kalan hücrelerin kalıcılığı da hesaplanabilir. Bu prosedürün ardından, mezenkimal kök hücrelerin gelişimi sonrası homing yeteneği hakkındaki ek soruları yanıtlamak için diğer hücre verme yolları uygulanabilir.

Bu teknik, bölgesel tıp alanındaki araştırmacıların tendon yaralanmalarında hücre tutulumunu artırma yöntemlerini keşfetmesinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, hücrelerin nasıl işaretleneceği ve farklı organ sistemlerindeki dağılımları ile konsantrasyonlarının nasıl kaydedileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız. İyonlaştırıcı radyasyonla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini; kişisel koruyucu donanım, radyasyon monitörleri ve kurşun zırhlama gibi önlemlerin yanı sıra kontamine atıkların uygun şekilde bertaraf edilmesinin bu prosedürü gerçekleştirirken temel gereklilikler olduğunu unutmayın.