Name: Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Keşfedin atçılık tendinopatisinde kemik iliği mezenkimal kök hücrelerin teknesyum-99m ile etiketlenmesi ve gamma sintigrafi ile canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik hücre dağılımını ve sağkalımını invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Horserace Betting Levy Board U.K. (hibe numarası 721) ve VetCell BioScience Ltd, Birleşik Krallık ve Consejerìa de Innovaciòn, Ciencia y Empresa, Junta de Andalucìa, İspanya'dan sağlanan finansmanı kabul etmek istiyor.

Burada tarif edilen vakalar Colegio de Veterinarios de Malaga, İspanya Hayvan Etik ve Sosyal Komitesi ve Kraliyet Veteriner Koleji, Kuzey Mymms, İngiltere atlara kullanılan prosedürler tarafından verilen Etik izni aşağıdaki yapıldı vardır onaylı protokoller dayanmaktadır implantasyon sonrası sedasyon, kemik iliği aspirasyonu, intra-tendinöz enjeksiyon, bölgesel perfüzyon, intravenöz enjeksiyon, işlem sonrası tedavi ve ağrı yönetimi ve izleme içerir kök hücre bazlı terapiler alan atlara klinikte kullanılan. 1. Temel Düzenlemeler Advance Yapılacak <ol><li> Kurumsal etik ve hayvan refahı onayı Seek ve çalışmaya başlamadan önce yerel yasal gereklere uygun. </li><li> Personelin uygun koruma düzeyi ve çevre ve bulaşm bertarafı dahil olmak üzere yerel ve yasal düzenlemeler emrettiği gibi iyonlaştırıcı radyasyon ile çalışmak için kurumsal onayını alıniyice kirlerden atık. </li><li> Aşağıdaki dahil edilme kriterlerine kullanın: ön ayakları ve tendon içindeki bir arıza ve kusur sonucu lezyonların yüzeyel fleksör tendon dijital olmayan bir travmatik yaralanma aşırı yorgunluk (tendinopati veya desmopathy) ile mevcut atları sağlam tendon ve / veya paratenon çevrilidir . Not: Bu tür yaralanmalar ve hücre implantasyonu için atların klinik hazırlanması için muayene ve tanı başka 6,15 detaylı edilmiştir. Not: At kemik iliğinden türetilen BMMSC kültüründe izolasyonu ve genişleme önce 6,16 ayrıntılı edilmiştir. Atı MFDS yaralanmaları BMMSC enjekte geçerli protokol otolog kemik iliği süpernatant (BMS) 16 ml 4 başına 10 milyon hücreleri kullanır. </li><li> Yüksek geçiş numarası c ile ilişkili potansiyel hücre fenotipi genetik değişiklikleri önlemek için in vivo implantasyonu için en fazla 4 pasajlar geçirmiş hücreler kullanarakarşın. </li><li> BMS hücrelerin gerekli sayıda sunun (4 bir ürperti kutusuna 24 saat içinde - 8 o C) hücre implantasyonu yapılacak olan veteriner kliniğine. Not: Kemik iliği süpernatanda mezenkimal kök hücrelerin klinik kullanım yetkisi gerektirebilir ReCellerate Inc (ABD) ve kullanımı aittir patentli bir işlemdir. Not: Tc-99m, nispeten kısa bir yarı ömre sahip bir gamma yayıcı (140 keV) &#39;nin (6,0058 saat, bu nedenle de yaklaşık% 94, 24 saat 99 Tc istikrarlı formuna dönüşür). Gama enerjisi at ve hayvan taşıma personeli hem çok sınırlı radyasyona maruz kalma zamanında gama kameralar (sintigrafi) ve kısa yarılanma ömrü sonuçları tespiti için uygundur. Bu protokol [HMPAO (sodyum perteknetat gibi) Tc-99m ile işaretli] Tc-99m-HMPAO kullanarak hücrelerin bünyesinde etiketleme anlatır. </li><li> Hücrelerin zekâ etiketlemek için teslim ve kullanılan şekilde tedarikçiden taze Tc-99m SiparişTc-99m jeneratör elüsyon 2 saat hin. Tc-99m, 1 ml çözelti (tedarikçinin standart tamponu) 1 GBq olarak verilir emin olun. </li><li> RT&#39;de tüm tamponları kullanın. Etiketleme prosedürü uygulayın, alkol ile temizlenmelidir tüm ekipmanları ile bir izotop muhafaza odasında hücreleri ve görüntüleme (gama sintigrafi) implantasyonu Çalışmaya başlamadan önce, mendil. </li></ol> Ön ayakları Tendon Horse and Ultrasonografinin 2. Hazırlık <ol><li> Zaman noktasında daha sonra ilk (kemik iliği aspire edilir) yaralanma için başvuru ve Tutanak ultrason taramaları radyoaktif işaretli hücreler enjekte edildiğinde. </li><li> Atı ahır eşit ağırlık taşıyan ve (yerine genel anestezi yerine) sedasyon ayakta altında ultrasonografi ve hücre implantasyonu gerçekleştirin. 0,01 0,02 mg / kg IV detomidine HCI ve butorfanol tartrat karışımı, her biri kullanılarak sedasyon uygulayın. Not: Kurtarma hızlı ve ameliyat sonrası bir tedavi gerektirir hayırözel durumlar. </li><li> Perinöral anestezi etkilenen ekstremite (adım 2.6) uygulandıktan sonra, tedavi sırasında at hareketini azaltmak için sedasyon altında istasyonunda atı tutmak. Görme indirilmiş baş pozisyonu ve at tavır ve at hücre enjeksiyonu ve sintigrafik görüntüleri alımı sırasında gama kamera hareketleri sırasında rahat olduğunu karar sedasyon uygun seviyesini kontrol edin. Not: Çünkü sedasyon yanıp sönen altında gözlerin (kuruluğunu önlemek için) üzerine veteriner merhem uygulamak etkilenmez gerekli değildir ve at gözlerin hidrasyon koruyabiliyor. Hücrelerin implantasyon sonrası izlenmesi non-invaziv (ultrason ve gama sintigrafisi) &#39;dir. </li><li> Klip yakından (at kılı kesme makineleri ile) tendonuna örten saç sonra nihayet alkol klorheksidin cerrahi fırçalayın kombinasyonunu kullanarak kırpılmış alanı temizlemek. </li><li> Alan akustik bağlantı jel uygulayın veSeri on-insidansı enine ve boyuna görüntüler elde etmek için bir lineer transdüser (12 MHz veya benzeri) ile, 7 17 - tam palmar metakarp bölge taramaları, sırayla etiketli seviyelere 1 kayıt yöntemli tarayın. Kesit alanı ve maksimal yaralanma yeri 4 görüntü analizi yazılımı yardımı ile elde edilebilir ve böylece dijital görüntü saklayın. </li><li> Tendon ve yüzeyel fleksör tendon dijital örten derinin tam duyarsızlaştırma sağlamak için lokal anestezik aseptik enjeksiyon için carpus hemen distalinde palmar sinirleri örten alanı hazırlayın. Mepivicaine 2 mL deri altına ve (bunların alt fasyal konumda) palmar sinirlerin bitişik fleksor tendonları ile kolun her iki yanında el bileğinin hemen distal kasık bağı hem enjekte edilir. </li><li> Ön tarama klorheksidin cerrahi s alanı ovma yoluyla implantasyon sitesi hazırlamak gerçekleştirildikten sonracrub en az 5 dakika boyunca çözeltisi ve son olarak alkol emdirilmiş gazlı bezle. Aseptik moda sonraki tüm adımları uygulayın. </li></ol> Atçılık Mezenkimal Kök Hücre 3. Tc-99m-etiketleme Not: Hücre etiketleme adımlar tendon içine hücre etiketleme ve işaretli hücrelerin implantasyonu arasındaki bu minimize edecek izotop çürüme olarak ön ayakları ultrasonografi sırasında yapılabilir. <ol><li> O izotopun alımı engel olarak hücreleri BMS çıkarın. Bunu yapmak için, soğutma kutusundan BMMSC şişesini (BMS 1 ml 10.000.000 hücre) almak ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 350 x g&#39;de bir mikrosantrifüj pelet hücreleri. Dikkatle hücre tabanda yardım etmek için bir tüp içinde, küçük bir damla (≤0.1 mi) bırakarak, bir 18G ya da (2 mi şınngaya bağlanmış) 19G iğnesi ile supernatant çıkarın. Steril bir mikrosantrifüj tüp içinde süpernatant (BMS) kaydedebilir ve daha sonra yeniden kullanım için buz üzerinde tutmak. </li><li> Fl süpernatanttan kalıntı damlacık hücrelerin tekrar(yerine girdap dışında) parmaklarınızla hafifçe tüp Icking ve oda sıcaklığında bir rafa tüp bırakın. Hücreler tamamen yeniden süspanse ve hiçbir görünür hücre kümeleri olmadığından emin olun. </li><li> Aşağıdaki gibi Tc-99m hazırlayın. Teknetyum devri 1 ml 1 ml şırınga ve iğneyi kullanarak HMPAO bir şişe içerisine perteknetat. Yavaşça ama iyice karıştırın ve kurşun koruyucu arkasında 5 dakika bekletin. Not: Hücreler adım 2.1 iplik ise bu adım yapılabilir. </li><li> Hücrelere 1 ml&#39;lik şırınga ve bir iğne kullanılarak Tc-99m-HMPAO karışımın tümü ekleyin ve yavaşça karıştırın. Talebi koruyucu örtünün arkasına oda sıcaklığında 30 dakika süreyle inkübe edilir. </li><li> Bir sonraki adımlar için, izotop (eldivenli) başparmak kirlenmesini ve daha sonra diğer donanımları en aza indirmek için mikrosantrifüj tüp kapağını açmak için forseps (ya da doku kağıt parçası) kullanın. Eklemek veya yıkama tamponu çıkarmak için 2 ml şırınga ve 21 G iğne kullanın. Not: Bir alan izotop monitörün kullanım yüzeylerinin ve ekipmanların kirlenmesini izlemek için teşvik edilmektedir. </li&gt; <li> , Kapağı kapatın hafifçe karıştırın ve sıkma adımında 3.1 olarak pelet hücreleri, Tc-99m-HMPAO hücre karışımına 1 ml PBS ekleyin. </li><li> Dikkatle yeni bir tüp (W1 olarak kurşun koruma ve etiket arkasında bu tasarruf) için PBS kaldırmak. Taze PBS 1 ml hücre pelletini. Tüp Santrifüj ve (W2 olarak bu ve etiketi kaydetmek) yukarıdaki gibi süpernatant kaldırmak. </li><li> W1 ve W2 tüplerinde karıştırıldı ve hücre peleti içerisindeki sayımları ölçülerek etiketleme verimi olarak hesaplanır. Bir Şey izotop doz kalibratör enstrüman her tüpleri yerleştirerek ve dakika (CPM) başına sayım olarak radyoaktivite kaydederek bunu yapın. (Hücre CPM olarak Radyoaktivite) olarak etiketleme verimliliği hesaplayın / (Radyoaktivite hücrelerinin + süpernatant) x 100. </li><li> BMS adım 3.1 kurtulmuş ekleyin kalıntı PBS iyice hücreleri tekrar süspansiyon ve. Hücreler lezyon içi implantasyon için hazırız. </li></ol> Tc-99m-HMPAO etiketli Hücre 4. implantasyonu <ol><li> İntralezyoner implantasyonultrason eşliğinde tendon içine <ol><li> Yavaş yavaş iğne ile paralel olarak 1,5 ya da 2 inç (50 mm) bir steril örtü kaplı ultrason transdüktörü ile uzunlamasına yönde lezyon maksimum yaralanma bölgesine 20 G iğne tanıtmak iğne uzunluğu olabilir ve böylece İğne doğru lezyonun merkezinde ise ultrasonografik teşhis ve ucu olabilir. </li><li> 2 ml şırınga içine hücreleri toplamak, uygun zırhlama kullanarak 20 G iğne kullanılarak (Luer kilidi dış kontaminasyon riskini ve kurşun-korumalı şırınga kapak aza indirmek için). Herhangi bir sıvıyı kaybetmemek için dikkatli olmak iğne atın. Şimdi iğne tendon önceden bulunan üzerine işaretli hücrelerin şırınga takmak. </li><li> Dokuda iğne yolu açıkça görülebilir şekilde iğnenin altında ultrason probu yerleştirin. Lezyon içine yavaş ama istikrarlı bir hızda hücreleri enjekte edilir. Enjeksiyona direnç olmadığından emin olun. Bu karşılaştıdikkatle ultrason eşliğinde iğne yerleştirin. Lezyon içine sıvı fırlatma hiperekojen hava kabarcıkları içeren anekoik sıvı gibi ultrason görüntüsünde görünür olduğundan emin olun. </li><li> İğneyi geri çek ve hemen enjekte edilen hücrelerin kaybını önlemek ve bacak dış yüzeyi üzerinde izotop yayılmasını en aza indirmek için iğne deliği üzerinde baskı yerleştirin. Hemen autoadhesive bandaj bir tabaka ile uzuv elbise. At şimdi gama sintigrafisi için hazırdır. Hemen bu gerçekleştirin. Not: tendon içine hücreler enjekte sonra şırınga içinde kalabilir hücrelerin olası doğrudan kaybını değerlendirmek için boş şırınga ve iğne sayısını kazanır. </li></ol></li><li> Tc-99m-HMPAO-işaretli hücrelerin Bölgesel perfüzyon <ol><li> Adımı 2.4 izleyin. </li><li> Medial ve lateral konumlandırılmış iki adet 100 mm&#39;lik pamuk rulo gazlı bez bandaj ile proksimal metacarpus&#39;un üzerinde 100 mm lastik turnike bandaj uygulayın. </li><li> Aseptik th hazırlamakEn az 5 dakika boyunca bir klorheksidin cerrahi fırçalayın çözeltisi ile bölgeyi ovma ve nihayet alkole batırılmış gazlı bez ile yanal Proksimal susam kemik seviyesinde yatay palmar dijital ven üzerinden e cilt. Aseptik moda sonraki tüm adımları uygulayın. </li><li> Heparinize steril serum fizyolojik ile doldurularak venipunktür için 21 G x ¾ &quot;(0.8 x 19 mm) kelebek iğne ile ayarlanmış bir 100 mm uzantısı hazırlayın ve daha sonra yan palmar dijital ven içine iğne tanıtmak. Damar girildikten sonra kan kısmen uzatma seti dolduracaktır. Luer lock konnektörü etiketli hücrelerin sonraki enjeksiyon kolaylaştırmak için bir Luer kilit lastik kapağı takın. </li><li> PBS ile önceden yüklenmiş bir 20 ml şırınga içinde hücrelerin toplanması ile PBS 19 ml MKH&#39;lerin seyreltilir. (- 40 sn 30) 18 G (1.2 x 40 mm) yavaş ama düzenli bir hızda derialtı iğne kullanılarak lastik fincan yoluyla hücrelere uygulayın. Bir Syring önceden yüklenmiş 1 ml PBS ile kateter yıkayıne. </li><li> Beş 4 x 4 pamuklu gazlı bezlerin tabakası ile iğne deliğinin üzerine deri baskı uygulamaktan derhal iğneyi çıkarın ve. Daha sonra Proksimal susam alanı üzerinde elastik yapışkan ile hafif bir bandaj yerleştirin ve enjeksiyondan sonra 30 dakika boyunca bir yerde turnike bırakın. </li><li> 30 dakika sonra turnike bırakın. At şimdi gama sintigrafisi için hazırdır. Not: hücrelerini enjekte ettikten sonra, şırınga içinde kalabilir hücrelerin olası doğrudan kaybını değerlendirmek için boş şırınga ve iğne sayısını kazanır. </li></ol></li></ol> 5. Gamma Sintigrafi <ol><li> Sintigrafi görüntüler <ol><li> Düşük enerji, paralel delik kolimatör ile donatılmış (% 20 simetrik penceresini kullanarak 140 KeV fotoelektrik zirvede ayarlanır) bir gama kamera ile düzlemsel sintigrafisi görüntüler elde. <ol><li> Adım 2.2 olarak sedasyon atları duran zaman 0 sonra tüm görüntüleri edinin. Zaman 0 sintigrafisine sonra, implantasyon si üzerinde ışık bandaj yerineBir yastıklı bandaj ile te. Her sintigrafi sınav öncesinde bu bandaj çıkarın. </li><li> &quot;Çalışma seçimi&quot; - - &quot;edinilen&quot; ile işleme yazılımı kullanarak 60 saniye, her (256 256 matris) statik görüntü elde &quot;kemik statik&quot; seçenekleri. Statik mod seçeneği hareketinin düzeltilmesi için bir modül olmadığından at görüntü elde etme dönemi boyunca hareket etmez esastır. </li><li> Intralezyonel enjeksiyon için, uzak ekstremiteye carpus gelen lezyon alanından yanal görüntüler elde kontralateral bacak, sol akciğer alanında ve sol tiroid eşdeğer alanı. Ön ayakları görüntülerin elde edilmesi sırasında, bacak Kontrlateral görüntülenmesinde önlemek için bacaklarının arasına bir kurşun ekrana yerleştirin. Enjeksiyonu (saat 0) 5 dakika sonra da görüntüler elde, ve daha sonra 1, 3, 6, 12, 24, 36 ve 48 saat sonra. </li><li> Bölgesel perfüzyon için, 5.1.1.3 gibi yanal ve dorsal gama görüntüleri elde edebilir. Görüntüleri 5 dk af edininter turnike bırakma. Bu hemen serbest bırakılmasını turnike öncesinde sayıları değerlendirmek için hücreler enjekte sonra bu uzuv görüntü için yararlı olabilir zaman 0. olacaktır. Hücrelerin verilmesinden sonra 1, 3, 6, 12, 24, 36 ve 48 saat sonra gama görüntüleri elde edilir. </li></ol></li><li> Görüntüleri elde edildikten sonra, süreç el &quot;Sokoloff&quot; renk ve &quot;Invert&quot; renk seçenekleri ile seçilen yazılımın &quot;işlem&quot; seçeneğini kullanarak görüntüleri. Bu lezyon alana seçim maske ve hareketin yeniden şekillendirilmesi izin verdiği Sonraki &quot;ilgi bölgesi&quot; (ROI) ve &quot;elips&quot; seçeneğini seçin. &quot;İstatistiklere ekle&quot; seçeneğini seçerek ROI üzerinde sayıları edinin. İlgi alanına (ROI) bu denk boyutlandırılmış bölgeleri, farklı zaman noktalarında her bir hayvan için kaydedildi emin olun. </li><li> Daha sonra, her bir zaman noktasında teknetyum tahmin edilen bozunma için sayıları düzeltin. Çürüme düzeltmek için aşağıdaki denklemi kullanın:A = A e o - (0.693t / T 1/2) çürüme sıfır zamanında radyoaktiviteyi düzeltilmiş bir o izotopun ilk faaliyettir, A, T geçen zaman ve T 1/2 yarısı izotopun -Hayat. Daha sonra aşağıdaki formül kullanılarak, kalan hücrelerin yüzdesini atlatmanın 0 zamanında ROI bir yüzdesi olarak her zaman bir noktada düzeltilmiş sayar ifade: </li></ol></li></ol> % hücreler geriye kalan (t) = 100 - {[(tahmin edilen bozunma (±) - bozunma (t)) / çürüme tahmin (t)]} x 100 bozunumu (t) = ROI (t) / ROI (0) x 100.

<ol><li>Becerra, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+injected+technetium%2899m%29-labeled+mesenchymal+stem+cells+in+horses+with+naturally+occurring+tendinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Distribution of injected technetium(99m)-labeled mesenchymal stem cells in horses with naturally occurring tendinopathy.</a> Journal of Orthopaedic Research. 31, 1096-1102 (2013).</li>
<li>Nixon, A. J., Dahlgren, L. A., Haupt, J. L., Yeager, A. E., Ward, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+adipose-derived+nucleated+cell+fractions+on+tendon+repair+in+horses+with+collagenase-induced+tendinitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of adipose-derived nucleated cell fractions on tendon repair in horses with collagenase-induced tendinitis.</a> American Journal of Veterinary Research. 69, 928-937 (2008).</li>
<li>Schnabel, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+and+insulin-like+growth+factor-I+gene-enhanced+mesenchymal+stem+cells+improve+structural+aspects+of+healing+in+equine+flexor+digitorum+superficialis+tendons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells and insulin-like growth factor-I gene-enhanced mesenchymal stem cells improve structural aspects of healing in equine flexor digitorum superficialis tendons.</a> Journal of Orthopaedic Research. 27, 1392-1398 (2009).</li>
<li>Smith, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+naturally+occurring+tendinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells in naturally occurring tendinopathy.</a> PloS one. 8, e75697(2013).</li>
<li>Sole, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+persistence+of+technetium-99+hexamethyl+propylene+amine+oxime-labelled+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+experimentally+induced+tendon+lesions+after+intratendinous+injection+and+regional+perfusion+of+the+equine+distal+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Distribution and persistence of technetium-99 hexamethyl propylene amine oxime-labelled bone marrow-derived mesenchymal stem cells in experimentally induced tendon lesions after intratendinous injection and regional perfusion of the equine distal limb.</a> Equine Veterinary Journal. 45, 726-731 (2013).</li>
<li>Godwin, E. E., Young, N. J., Dudhia, J., Beamish, I. C., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+demonstrates+improved+outcome+in+horses+with+overstrain+injury+of+the+superficial+digital+flexor+tendon%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Implantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells demonstrates improved outcome in horses with overstrain injury of the superficial digital flexor tendon.</a> Equine Veterinary Journal. 44, 25-32 (2012).</li>
<li>Crevier-Denoix, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+pathological+equine+superficial+digital+flexor+tendons%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of pathological equine superficial digital flexor tendons.</a> Equine Veterinary Journal. 29, Suppl S23. 23-26 (1997).</li>
<li>O'Meara, B., Bladon, B., Parkin, T. D., Fraser, B., Lischer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+the+relationship+between+race+performance+and+superficial+digital+flexor+tendonitis+in+the+Thoroughbred+racehorse%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">An investigation of the relationship between race performance and superficial digital flexor tendonitis in the Thoroughbred racehorse.</a> Equine Veterinary Journal. 42, 322-326 (2010).</li>
<li>Alexander, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy-saving+mechanisms+in+walking+and+running%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Energy-saving mechanisms in walking and running.</a> The Journal of Experimental Biology. 160, 55-69 (1991).</li>
<li>Guest, D. J., Smith, M. R., Allen, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+fate+of+autologous+and+allogeneic+mesenchymal+progenitor+cells+injected+into+the+superficial+digital+flexor+tendon+of+horses%3A+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Monitoring the fate of autologous and allogeneic mesenchymal progenitor cells injected into the superficial digital flexor tendon of horses: preliminary study.</a> Equine Veterinary Journal. 40, 178-181 (2008).</li>
<li>Guest, D. J., Smith, M. R., Allen, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+embryonic+stem-like+cells+and+mesenchymal+stromal+cells+have+different+survival+rates+and+migration+patterns+following+their+injection+into+damaged+superficial+digital+flexor+tendon%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Equine embryonic stem-like cells and mesenchymal stromal cells have different survival rates and migration patterns following their injection into damaged superficial digital flexor tendon.</a> Equine Veterinary Journal. 42, 636-642 (2010).</li>
<li>Sole, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scintigraphic+evaluation+of+intra-arterial+and+intravenous+regional+limb+perfusion+of+allogeneic+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+the+normal+equine+distal+limb+using+%2899m%29+Tc-HMPAO%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Scintigraphic evaluation of intra-arterial and intravenous regional limb perfusion of allogeneic bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the normal equine distal limb using (99m) Tc-HMPAO.</a> Equine Veterinary Journal. 44, 594-599 (2012).</li>
<li>Carvalho, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+mesenchymal+stem+cell+migration+after+equine+tendonitis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Evaluation of mesenchymal stem cell migration after equine tendonitis therapy.</a> Equine Veterinary Journal. 46, 635-638 (2014).</li>
<li>Welling, M. M., Duijvestein, M., Signore, A., van der Weerd, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+biodistribution+of+stem+cells+using+molecular+nuclear+medicine+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo biodistribution of stem cells using molecular nuclear medicine imaging.</a> Journal of Cellular Physiology. 226, 1444-1452 (2011).</li>
<li>Dowling, B. A., Dart, A. J., Hodgson, D. R., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superficial+digital+flexor+tendonitis+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Superficial digital flexor tendonitis in the horse.</a> Equine Veterinary Journal. 32, 369-378 (2000).</li>
<li>Kasashima, Y., Ueno, T., Tomita, A., Goodship, A. E., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimisation+of+bone+marrow+aspiration+from+the+equine+sternum+for+the+safe+recovery+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Optimisation of bone marrow aspiration from the equine sternum for the safe recovery of mesenchymal stem cells.</a> Equine Veterinary Journal. 43, 288-294 (2011).</li>
<li>Avella, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonographic+assessment+of+the+superficial+digital+flexor+tendons+of+National+Hunt+racehorses+in+training+over+two+racing+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Ultrasonographic assessment of the superficial digital flexor tendons of National Hunt racehorses in training over two racing seasons.</a> Equine Veterinary Journal. 41, 449-454 (2009).</li>
<li>de Vries, E. F., Roca, M., Jamar, F., Israel, O., Signore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+labelling+of+leucocytes+with+%2899m%29Tc-HMPAO.+Inflammation%2FInfection+Taskgroup+of+the+European+Association+of+Nuclear+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the labelling of leucocytes with (99m)Tc-HMPAO. Inflammation/Infection Taskgroup of the European Association of Nuclear Medicine.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 37, 842-848 (2010).</li>
<li>Trela, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scintigraphic+comparison+of+intra-arterial+injection+and+distal+intravenous+regional+limb+perfusion+for+administration+of+mesenchymal+stem+cells+to+the+equine+foot%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Scintigraphic comparison of intra-arterial injection and distal intravenous regional limb perfusion for administration of mesenchymal stem cells to the equine foot.</a> Equine Veterinary Journal. 46, 479-483 (2014).</li>
<li>Barbash, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+to+the+infarcted+myocardium%3A+feasibility%2C+cell+migration%2C+and+body+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells to the infarcted myocardium: feasibility, cell migration, and body distribution.</a> Circulation. 108, 863-868 (2003).</li>
<li>Heckl, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+contrast+agents+for+molecular+imaging+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Future contrast agents for molecular imaging in stroke.</a> Current Medicinal Chemistry. 14, 1713-1728 (2007).</li>
</ol>

JD ve RKS, ReCellerate Inc.'in Bilimsel Danışma Kurulu üyeleridir.

Kemik iliğine ek olarak, yağ dokusu gibi kaynaklardan izole edilmiş kök hücrelerin bu protokol ile etiketlenmesi için uygundur. Bundan başka, bir donmuş durumdan hücreler canlandırıldı ve markalama çalışmaları 12 için arzu edilen numaralara kültürde genişletilebilir. BMMSC etiketleme etkinliğini belirleyen önemli bir faktör radyofarmasötiklerin molibdenyum jeneratöründen Tc-99m elüsyonu arasındaki zaman, Tc-99m-HMPAO hazırlanması ve klinikte radyofarmasötiğin kullanılmasıdır. Bu d...

Hastalıklı ya da zarar görmüş dokuların onarımı için Rejeneratif stratejiler etkilenen bölgeye doku çeşitli türetilir ve implante multipotent kök hücreleri dayanmaktadır. Atlarda tendon ve bağ yaralanmalarının tedavisinde otolog BMMSC uygulamasında son gelişmeler hem deneysel 1-5 iyileştirmiştir önlemleri ve klinik çalışmalar 6 göstermiştir. At o yaşta muzdarip ve distal ön ayakları tendon yaralanmaları ile ilgili aşırı yorgunluk, bir atletik hayvan olduğu için tedaviler ile ilgili kök hücre etkinliğini değerlendirmek için özellikle çekici bir model olduğunu ve büyük bir kolaylaştırıcı kemik iliği kurtarma ve Doğru implantasyon. Tendon yaralanmaları fibrozis ile doğal iyileşir ama iyileşmiş tendon 7 işlevsel aşağı ve yeniden yaralanma 8 yüksek risk taşır. Bir elastik enerji olarak hareket etmek gelişti gibi yüzeysel dijital fleksör tendon (MFDS) en sık etkilenenmağaza ve deneyimler yüksek yükleme enerjisini verimli ve yüksek hızda lokomosyon elde vurguluyor. Yaralanma sonrası işlevini geri nedenle önemlidir. Bu yaralanmalar benzer bir işlevi 9 gerçekleştirir insanlarda Aşil tendonu etkileyen benzemektedir. Bu nedenle hücre tabanlı rejeneratif stratejiler sonuçlarını iyileştirmek için ve yeniden yaralanmaları azaltmak için cazip bir fırsat sunuyoruz, tedavi ya da yaralanmalar için iyi onarımını sağlamak iyi bir tedavi seçeneği vardır. Çalışmaların çoğunda 5-20.000.000 otolog BMMSC genellikle bu nedenle hücreler için bir kap gibi davranır tendon vücudun çekirdek içinde meydana lezyon içine doğrudan enjekte edilir. Bir kez enjekte edilen hücrelerin kaderi hücreleri son zamanlarda tarif edilmiştir izlemek için açık ve farklı hücre etiketleme yöntemleri değildir. Bir floresan etiket ile etiketlenmiş hücreler, sadece nispeten az sayıda (&lt;% 10) 10,11 hayatta gösterilmiştir. Floresan etiketleri gerektirenzaman alıcıdır ve değildir, histolojik analiz için doku çıkarma ve kesit hali hazırda büyük bir hayvan modelinde veya klinik vakalarda geçici analiz kolaylaştırır. Daha yeni çalışmada, hücreleri etiketlemek ve gama sintigrafisi 1 kendi kaderini takip radyoizotop 99m Tc kullandık. Bu yöntem, hızlı karşılaştırmalar intra-arteriyel 12 veya intravenöz enjeksiyon yoluyla 1,12 juguler ven 1 veya bölgesel perfüzyon yoluyla intravenöz lezyon içine dahil olmak üzere hücre teslim farklı yolları, arasında yapılacak sağlar. Hücrelerin sebat ve dağıtımı daha sonra çeşitli organlarda gama sintigrafisi ile görüntülenebilir. Bu hücrelerin sadece% 24 intralezyonel 24 saat 1 ile lezyonun kaldı enjekte ve deneysel oluşturulan lezyonlar kullanarak ve aynı radyoetiket 5 kullanarak bir başka çalışmada tarafından desteklenen olduğunu göstermiştir. Ayrıca, hücreler delivere tendon lezyonları içine eve sınırlı yeteneğini göstermekintravenöz bölgesel perfüzyon veya tarafından d ama ikincisi yolları 4 ile akciğerlere dağılır. Demir nanopartiküller ile etiketlenmiş BMMSC ön ayakları tendonların 13 implante hücreleri izlemek için alternatif bir yöntemdir. Demir nanopartikül etiketli hücreler MRI ile in vivo olarak, hücre izlenmesine izin birlikte, büyük bir hayvanda zamansal çalışmalar, anestezi MRG gerçekleştirmek için her bir zaman noktasında tatbik edilebilir kaç kez ile sınırlıdır. Ayrıca, demir nanopartiküller tendon vücuda işaretli hücrelerin göç hakkında bilgi sınırlar MR hipointens bulunmaktadır. Kullanılabilen diğer radyoizotoplar İndiyum-111 bulunur, ancak bu Tc-99m daha uzun bir yarı-ömür dezavantajına (2,8 gün vs 6,0 saat) ve daha yüksek bir gama ışını emisyonu enerji uğrar. İndiyum-111 14 ile etiketlenmiş Buna ek olarak, hücre canlılığı, azaltılabilir bildirilmiştir. Tc-99m, diğer taraftan, rutin olarak iki, at ve insan nükleer kullanılantıp periferik kan mononükleer hücreleri etiketlemek ve sintigrafi ile in vivo dağıtımını takip etmek. Bu nispeten kolay hücrelere, Tc-99m-HMPAO olarak, teknesyum bağlamak için bir bağlayıcı molekül olarak HMPAO ile hücreler tarafından alınabilir. Tc-99m-HMPAO BMMSC iyi canlılığı göstermek ve in vitro 4 çoğalırlar yapabilirsiniz etiketli. Bu protokol ön ayakları MFDS doğal olarak oluşan lezyonlar içine implante etiketleme ve at otolog BMMSC izleme ayrıntıları. Bu protokol sadece amaçlanan bir araştırma aracı olarak kullanılmak üzere dikkat etmek önemlidir. Klinik tedavi yöntemi olarak kullanımı tam olarak açıklığa kavuşturulamamıştır hücresel fenotip üzerindeki radyoaktif etkisi olarak tavsiye edilmez.

<table><tbody><tr><td>Teknesyum99m&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Lütfen yasal gerekliliklere uygun olarak yerel iyonizasyon radyasyon tedarikçisi ile görüşün. İzotop, molibden-99 jeneratörü</td></tr><tr><td>Ceretec - Heksametilpropileamin oksim (HMPAO)&nbsp;</td><td>GE HealthCare</td><td></td><td>Lütfen doğrudan GE HealthCare</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfuge, Minispin/Minispin Plus</td><td>Ependorf</td><td>ile</td> iletişime geçin 22620100 <td></td></tr><tr><td>18 G ve 19 G İğneler</td><td>Terumo Medical</td><td>NN-1838R (18 G); &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; NN1938R (19 g)</td><td></td></tr><tr><td>Şırıngalar 1 ml ve 2 ml</td><td>Scientific Laboratory Supplies Ltd</td><td>SYR6200 (1 ml); SYR6003 (2 ml)</td><td></td></tr> <tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri 1.5 ml</td><td>Greiner Bio-One Ltd</td><td>616201</td><td></td></tr><tr><td>PBS - Fosfat Tamponlu Salin</td><td>LifeTechnologies</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Steril Gazlı Bez Swabları</td><td>Shermond Ltd</td><td>UNG602</td><td></td></tr><tr><td>CoflexVet kendinden yapışkanlı bandaj</td><td>Andover Healthcare, Inc.</td><td>3540RB-018</td><td></td></tr><tr><td>Ultrason görüntüleme yazılımı</td><td>Scion Image, Scion Corporation, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MicasXplus Scintigram işleme yazılımı</td><td>Bartec Technologies Ltd</td><td></td><td>http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html</td></tr><tr><td>İzotop izlemek için alan izotop sayacı</td><td>John Caunt İngiltere</td><td>GMS1800a</td><td></td></tr> <tr><td>http://www.johncaunt.com/ İzotop ölçümleri için kuyu sayacı, doz kalibratörü</td><td>Capintec Southern Scientific</td><td>CRC-25R</td><td></td></tr></tbody></table>

atçılık tendinopatisinde kemik İliği mezenkimal kök hücreler etiketli teknesyum- 99m vivo görüntüleme ve takip

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

At tendon ve bağ yaralanmalarının tedavisinde kemik iliği mezenkimal kök hücrelerin (BMMSC) uygulanması son gelişmeler deneysel ve klinik çalışmalarda hem de sonuç önlemleri geliştirilmiş öneririz. BMMSC sayıda tendon lezyon içine implante edilir, ancak (genellikle 10-20.000.000 hücre), sadece nispeten az sayıda hayatta (&lt;% 10), bu implantasyondan sonra 5 aya kadar devam edebilir rağmen. Bu BMMSC diğer dokulara implante edilmiş diğer türler ortak bir gözlem gibi görünüyor ve bu kayıp birçok ilk implantasyon sürecinin hayatta nasıl ve hücreler diğer organlara temizlenmiş olup olmadığını, ortaya çıktığında bunu anlamak önemlidir. Hücrelerin kaderini Takip hücrenin konumu ve hücre sayıları miktarının in vivo görüntüleme invazif olmayan implantasyon BMMSC önce radyo-etiketleme ile elde edilebilir. Bu protokol, bir hücre labeli tarifAtlarda yaralanan fleksör tendon içine Teknesyum-99m (Tc-99m) ve implantasyon izleyen bu hücrelerin izleme kullanan ng prosedürü. Tc-99m gama ışınları yayar ve lipofilik bileşik hexamethylpropyleneamine oksim (HMPAO) varlığında hücreler tarafından içselleştirilebilir kısa süreli (t 1/2 6,01 hr) izotoptur. Bu özellikler çok farklı hastalıkların tanısında nükleer tıp kliniklerinde kullanılmak için idealdir. Etiketli hücrelerin kaderini akciğer, tiroid ve diğer organlarda Lezyonun ve hücrelerin dağılımı birikmiş hücre sayısı hem de ölçmek için, gama parıldaması ile kısa süreli (en fazla 36 saat için) &#39;de izlenebilir. Bu teknik, kan lökositlerinin etiketleme uyarlanmıştır ve diğer organlarda BMMSC implante görüntüye yararlanılabilir.

BMMSs içine Tc-99m-HMPAO birleşme olumsuz doku kültürü plastik uymak için kendi yeteneğini etkilemez ve onlar (Şekil 1) tek tabakaları oluşturmak için çoğalma yeteneğini göstermek ederken çoğalma oranları veya diğer hücresel fenotipleri etkilenir olsun tam kararlı değil. Bunların morfoloji tipik iğ şekilli etiketlenmemiş hücrelerden benzer. Hücresel markalama etkinlik (yani. Etiketin, soğurulma) tipik olarak yaklaşık% 1.5 ila% 25 arasında değişir. Düşük etiketleme verimliliği için temel nedeni ...

Bu protokol, gama sintigrafisi kullanarak hücre sağkalımını ve doku dağılımını belirlemek için at mezenkimal kök hücrelerinin radyo-etiketlenmesini ve bunların attaki tendon yaralanmalarına implantasyonunu açıklar.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

Bu protokolün genel amacı, etiketlenmiş kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin enjeksiyon sonrası dağılımlarını ve akıbetlerini gama sintigrafisi ile non-invaziv olarak takip etmektir. Kök hücrelerin enjeksiyon sonrası akıbeti henüz yeterince anlaşılamamıştır. Bu tekniğin temel avantajları, kök hücrelerin uygulama sonrası birden fazla organda non-invaziv olarak izlenebilmesine olanak tanıması ve A osteo'nun kısa yarı ömrünün 48 saat içinde temizlenmesini sağlamasıdır.Bu durum, doğal olarak ortaya çıkan tendinopatilerin tedavisinde kök hücre kullanımına dair içgörü sağlamış olsa da, aynı zamanda kemik ve kalp hastalığı tedavilerinin araştırılması için de kullanılabilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler için temel zorluklar hücrelerin koordinasyonu, etiketleme seti ve hastanın hazırlanmasıdır. Hücrelerin anında uygulaması için, önce sabitlenmiş uzva akustik kuplaj jeli uygulayarak başlayın ve maksimum yaralanma bölgesini belirlemek amacıyla seri transvers ve longitudinal görüntüler elde etmek için lineer bir transduser kullanarak tüm palmar metakarpal bölgeyi sistematik olarak tarayın.Lokal anestezik uygulamasının ardından, implantasyon bölgesini en az beş dakika boyunca klorheksidin cerrahi yıkama solüsyonu ile temizleyin ve ardından etanolle ıslatılmış bir gazlı bezle silin. Hayvan hazırlandığında bir çift eldiven giyin; kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin 1x10⁷ hücrelik alikotunu, 1 mL kemik iliği süpernatantı içinde santrifüjle peletleyin. Ardından, tüpte yaklaşık 100 µL solüsyon bırakacak şekilde, 18 veya 19 gauge iğne takılmış 2 mL'lik bir şırınga ile süpernatantı aspire edin.Süpernatanı buz üzerinde bir mikro santrifüj tüpüne aktarın ve ardından hücreleri kalan 100 microliters süpernatan içinde yeniden süspanse etmek için tüpü hafifçe vurun. Hücrelerin tamamen süspanse olduğundan ve görünür doku kümeleri kalmadığından emin olun. Ardından hücreleri oda sıcaklığına getirin.Şimdi bir mililitre teknesyum perteknotat'ı bir H-M-P-A-O flakonuna karıştırın. Beş dakika sonra, bir mililitrelik şırınga ve iğne kullanarak mezenkimal kök hücreleri TECHNETIUM 99 M-H-M-P-A-O'nun tüm alikotuyla işleme tabi tutun. Ardından tüpün kapağını kapatın, hücreleri hafifçe tıklatarak karıştırın ve tüpü oda sıcaklığında bir kurşun zırh arkasına yerleştirin.30 dakika sonra, tüpü bir pens ile açın ve hücrelere 1 mL PBS eklemek için 21 gauge iğne takılmış bir mililitrelik tüp şırıngası kullanın. Tüpün kapağını kapatın ve hücreleri karıştırın. Ardından, hücreleri santrifüjleyin ve iki mililitrelik şırıngayı kullanarak süpernatanı "yıkama bir" olarak etiketlenmiş korumalı bir tüpe dikkatlice aktarın.Ardından, az önce gösterildiği gibi peleti bir mililitre daha PBS ile yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, ikinci yıkama sıvısını W2 olarak etiketlenmiş korumalı tüpe aktarın. Hücreleri kalan PBS içinde iyice resüspande edin ve transdüseri iğneye paralel tutarak buz gibi soğuk kemik iliği süpernatandan bir alikot ekleyin.1,5 veya iki inçlik 20 gauge bir iğneyi, lezyonun merkezindeki maksimum hasar bölgesine boylamsal yönde yavaşça yerleştirin. Ardından, uygun koruma kullanarak hücreleri 20 gauge bir iğne ile donatılmış iki mililitrelik Luer-lock şırıngaya aspire edin ve herhangi bir sıvı kaybı olmamasına dikkat ederek iğneyi atın. Şırıngayı tendon içerisine önceden yerleştirilen iğneye bağladıktan sonra, dokudaki iğne yolu net bir şekilde görülebilecek şekilde ultrason probunu iğnenin altına konumlandırın ve hücreleri lezyona yavaş ama sabit bir hızda enjekte edin.Tüm hücreler uygulandıktan sonra, lezyona püskürtülen sıvının ultrason görüntüsünde hiperekojenik hava kabarcıkları içeren ekoik sıvı şeklinde göründüğünü doğrulayın ve iğneyi geri çekin. Her biri 60 saniye boyunca statik görüntüler elde etmek için işlemleme yazılımındaki çalışma seçimi ve kemik statik seçeneklerini kullanın. Ardından, belirtilen zamanlarda lezyon bölgesinden, karpustan distal ekstremiteye kadar, karşı ekstremitenin eşdeğer bölgesinden, sol akciğer alanından ve sol tiroidden lateral görüntüler alın.Ardından, ilgi alanı ve elips araçlarını seçerek seçim maskesini lezyon alanı üzerine uygun şekilde yeniden şekillendirin. Son olarak, ilgi alanı üzerindeki sayımları elde etmek için iki istatistik ekle seçeneğini belirleyin. Farklı zaman noktalarında her hayvan için aynı boyuttaki ilgi alanlarının kaydedildiğinden emin olun.Lezyon içi uygulamadan sonra hücreler, zamanla çevre tendon dokusuna sınırlı bir yayılım gösteren odaklanmış bir sinyal alanı olarak gözlemlenecektir. Buna karşın, hücreler dijital Palmer ven yoluyla bölgesel perfüzyonla uygulandığında, enjeksiyon bölgesinde sinyalin kademeli bir azalması gözlemlenir. Zamanla, lezyon içi enjeksiyondan sonra akciğer alanları genellikle negatif çıkar, ancak erken zaman noktalarında bazen zamanla daha yaygın hale gelen çok odaklanmış bir sinyal tespit edilebilir.Bu uygulama yoluyla tiroid yine negatif kalmaktadır. Bölgesel perfüzyon, akciğerlerde zamanla daha yaygın hale gelen fokal bir sinyal göstermektedir; ancak bu sinyal, lezyon içi uygulama yoluyla gözlemlenene kıyasla belirgin şekilde daha yoğundur. Tiroidin de sıklıkla fokal bir sinyal sergilemesiyle birlikte, enjeksiyon öncesi sıfırıncı zamandaki hücrelerin toplam başlangıç radyoizotop sayımı ve ilgi bölgesindeki başlangıç gama gramından elde edilen sayımlar.Enjeksiyon sonrası sıfırıncı zaman noktası, enjeksiyondan sonraki her zaman noktasındaki sayımlardaki yüzde azalmayı hesaplamak ve böylece başlangıç sayımlarından itibaren TC 99 M'nin öngörülen bozunmasını belirlemek için kullanılabilir. Ardından, enjeksiyondan sonraki her zaman diliminde enjeksiyon bölgesinde kalan hücrelerin kalıcılığı da hesaplanabilir. Bu prosedürün ardından, mezenkimal kök hücrelerin gelişimi sonrası homing yeteneği hakkındaki ek soruları yanıtlamak için diğer hücre verme yolları uygulanabilir.Bu teknik, bölgesel tıp alanındaki araştırmacıların tendon yaralanmalarında hücre tutulumunu artırma yöntemlerini keşfetmesinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, hücrelerin nasıl işaretleneceği ve farklı organ sistemlerindeki dağılımları ile konsantrasyonlarının nasıl kaydedileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız. İyonlaştırıcı radyasyonla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini; kişisel koruyucu donanım, radyasyon monitörleri ve kurşun zırhlama gibi önlemlerin yanı sıra kontamine atıkların uygun şekilde bertaraf edilmesinin bu prosedürü gerçekleştirirken temel gereklilikler olduğunu unutmayın.

in-vivo-imaging-tracking-technetium-99m-labeled-bone-marrow

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Küçük Hayvan Kas Aşı dinamiği ile Takip In Vivo Floresan Görüntüleme

Kemik metastazı deneysel bir fare modeli lusiferaz meme tümör hücreleri ifade intrakardiyak teslim edildikten sonra kurulmuştur. Biyoparlaklık ve mikro BT görüntüleme ile tümör gelişimi ve osteolitik lezyon sonuçlandı boyuna takip edildi.

Biyoparlaklık ve Micro CT Görüntüleme Tümör Metastazlari ve osteolitik Lezyonlar İzleme

Kırık iyileşmesi kemik progenitör fonksiyonunun kantitatif ölçümü yüksek çözünürlüklü seri görüntüleme teknolojisini gerektirir. Burada, protokoller görseli sırayla ve kemik kırığı tamir sürecinde endojen osteojenik kök / progenitör hücrelerin hareketi, çoğalması ve farklılaşması ölçmek için intravital mikroskopisi ve osteo-dizi izleme kullanarak verilmiştir.

Ardışık<em&gt; In vivo</em&gt; Kırık Onarım sırasında Osteojenik Kök / Progenitör Hücrelerinin Görüntüleme

Hematopoietik kök ve projenitör hücreler (HSPCs) ve kemik iliği niş arasındaki etkileşimin doğası tam olarak anlaşılamamıştır. Özel donanım modifikasyonları ve çok adımlı bir satın alma protokolü ex vivo görüntünün kemik iliği alanları içinde bağlantılı etiketli HSPCs, izleme etkileşimleri ve hareket için iki-foton ve konfokal mikroskopi kullanımına izin verir.

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Monositler, doğuştan gelen bağışıklığın anahtar düzenleyicileridir ve periferik mononükleer fagositik sistemin yenilenmesinde ve iltihaplanma durumunda kritik bir rol oynarlar. Bu el yazması, monosit mobilizasyon mekanizmasını incelemek için fare kalvaria kemik iliğinin gerçek zamanlı görüntüleme prosedürünü açıklamaktadır.

Fare Kemik İliği monositlerin Takip<em&gt; İn Vivo</em

Protokol, femoral kemik iliğindeki hücrelerin hareketini in vivo olarak izlemek için kullanılabilecek yeni bir murin femur pencere odası modelini tanımlar. İntravital multifoton floresan mikroskobu, zaman içinde femur kemik iliğinin üç bileşenini (vaskülatür, kollajen matrisi ve nötrofiller) görüntülemek için kullanılır.

için Femur Pencere Odası Modeli<em&gt; İn Vivo</emFare Kemik İliği içinde&gt; Hücre Takibi

Bu iletişim kuralı tarafından far-red floresan intra artiküler (IA) enjeksiyon yoluyla bir sıçan diz osteoartrit (KOA) modelinde etiketleme hücre sebat ve biodistribution insan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin (haMSCs) izlemek için etkili bir yöntem açıklanır.

Vivo İnsan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde floresan lipofilik membran boya ile izleme

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Burada sunulan non-invaziv mezenkimal kök hücre için bir protokol (MSC) teslim ve travmatik beyin hasarı bir fare modeli nde izleme. Süperparamanyetik demir oksit nano partikülleri, msc etiketlemesi için manyetik rezonans görüntüleme (MRG) prob ve gerçek zamanlı MRG kullanılarak intranazal doğumdan sonra invaziv in vivo izleme için non-invaziv in vivo izleme olarak kullanılır.

Travmatik Beyin Hasarı Murine Modelinde İntranazal Doğum sonrası MRG kullanarak Süperparamanyetik Demir Oksit etiketli Mezenkimal Kök Hücrelerin Takibi

Bu protokol, canlı hayvan intravital mikroskopisi kullanılarak CCL5 aracılı periosteal iskelet kök hücre göçünün gerçek zamanlı olarak saptanmasıdır.

Farelerde Periosteal İskelet Kök Hücrelerinin CCL5 Kaynaklı Göçünün Gerçek Zamanlı Görüntülenmesi

Mitokondriyal boya terminali olan Schwann hücre mitokondrilerinin in vivo konfokal mikroskopi için yerel enjeksiyonları. Bu yöntem, sağlıklı veya hasta kaslı farelerin iskelet kas dokularında gösterilen kavram kanıtını kullanarak yüksek çözünürlüklü mitokondriyal görselleştirme sağlar.

Farelerin Kas ve Terminal Schwann Hücrelerinde Mitokondriyal Morfolojinin Yerinde Niceletilmesi Yöntemleri

Keşfedin atçılık tendinopatisinde kemik iliği mezenkimal kök hücrelerin teknesyum-99m ile etiketlenmesi ve gamma sintigrafi ile canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik hücre dağılımını ve sağkalımını invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Daha fazla video keşfet