Name: İyon seçici Kendinden referans Mikroelektrod Tekniği Ekstraselüler Ion eriticiler Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Öğrenin iyon seçici kendinden referans mikroelektrot tekniği ile canlı hücre ve dokularda ekstraselüler iyon akışlarını invaziv olmayan şekilde ölçmeyi. Bu yöntem hücre fizyolojisi ve patoloji araştırmalarında kritik bilgiler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı hibesi MCB-0951199 ve kısmen NIH hibe EY01910, California Rejeneratif Tıp Enstitüsü hibeleri RB1-01417 ve Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT) hibesi SFRH/BD/87256/2012 tarafından desteklenmiştir.

1. İyon seçici Kendinden referans Mikroelektrod Hazırlık <ol><li> Iyon seçici mikroelektrot hazırlanması <ol><li> Isı, bir mikroelektrot çektirmenin kullanarak filamanın (1.5 mm dış çaplı, 1.12 mm iç çap) olmadan, ince duvarlı borosilikat kılcal çekin. Not: Bu, ipuçları çapı 3-4 mikron verir. Daha küçük ipuçları elektronik gürültüye Mikroelektronlar daha duyarlı hale getirir ve aynı zamanda iyon konsantrasyonunda bir değişikliğe daha yavaş bir tepki ile ilişkili yüksek dirence sahiptir. Faydalı bilgiler Smith ve ark., 26 tarafından yayınlanan yazıda bulunabilir. </li><li> Lipofilik iyonofor kokteyl tutulmasını yardımcı olmak için iç yüzeyini hidrofobik hale getirmek için elektrotlar Silanize. Bunları kurutmak için&gt; 100 ° C &#39;de, bir fırın içinde bir metal raf ve ısı O / N mikroelektrot yerleştirin. raf 2 mm çapında delikleri olan bir metal plaka ile yol parçası delinir. Ml gr delik elektrotlar 250 ile yukarı ucu yerleştirinbunların üzerine kız beher. </li><li> Sabah, fırın kapatın ve yalıtımlı eldiven giyerek, dikkatle yerine elektrotlar ve beher metal raf çıkarın. Isıyı korumak için fırın kapağını kapatın. </li><li> Lateks veya nitril eldiven, laboratuvar önlüğü ve koruyucu gözlük takın. Plastik Pasteur pipeti ile, her elektrodun dibinde silanizasyon çözeltisinin ben bir damla koyun (yerinde beher tutmak, pipet erişimi için dökme dudak kullanın). silanizasyon çözüm sıcak plaka ile buharlaşmış ve elektrotların içini silanizes edilir. Bu aşamada bir kimyasal çıkarıcı davlumbaz kullanın. Birkaç saat kalan silanizasyon çözümü buharlaşmasına izin sıcak fırında raf / beher / elektrotların geri yerleştirin. Not: Güvenlik nedeniyle, tekrar fırını açmayın. Zararlı ve yanıcı buhar içerebilir gibi açık olmamalıdır gösteren fırın bir etiket yerleştirin. </li><li> Soğutulduktan sonra, bir mikroelektrot kavanozlar insi mikroelektrot depolamakkurutucu 400 g cam bir desikatörde de. Mikroelektronlar haftalarca bu şekilde saklanabilir. Not: alternatif bir silanizasyon yöntemi Smith ve diğerleri tarafından tarif edilmektedir: 26. </li><li> Ölçülecek olan iyon, 100 mM ihtiva eden bir çözelti 50-100 ul (yaklaşık 1 cm uzunluğu) (bakınız Tablo 1 ve Şekil 1B) mikroelektrot geri-dolgu. Ince bir filamanın bir Bunsen beki çekti atılabilir plastik Pasteur pipeti ısı kullanın. Tıkanmayı önlemek için daha sonra DH 2 O pipet durulayın. Not: Alternatif olarak, dış solüsyon 27 iyon konsantrasyonunu maç dolgu çözeltisinin iyon konsantrasyonunu ayarlayın. </li><li> Hava kabarcıkları olmaması sağlamak için bir tahlil mikroskobu altında mikroelektrot dikkate alınmalıdır. <ol><li> Dikey elektrot tutarken kabarcıklar tırnağınızla hafifçe mikroelektrot mevcut musluk varsa (aşağı ucu) ve / veya kabarcık itinİğneyi yerine bir silikon tüp ile modifiye bir şırınga kullanarak geri basınç uygulayarak ucu dışarı s. </li></ol></li><li> Iyon spesifik iyonofor kokteyl 15 ila 20 nl (30-50 mikron uzunluğunda) ile mikroelektrot ucu doldurmak (bakınız Tablo 1). Bir mikroskop lamı kısa kenarında iyonofor kokteyl küçük bir damlacık yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu altında mikroelektrot ucu gözlemleyin ve mikroelektrod ucu sadece yaklaşık yarım saniye iyonofor kokteyl temas edene kadar mikroskop lamı doğru hareket ettirin. Kılcal basınç ile mikroelektrot içine iyonofor kokteyl çizin. Not: Bu elektronik parazit (gürültü) ile bu duyarlı yapabilirsiniz sondanın elektrik direncini artırır ve aynı zamanda yanıt süresini yavaşlatır olarak iyonofor kokteyl uzun bir sütun kaçının. </li><li> Altın, 1 mm erkek konektör ve AgCİ (Ag +), tel (Şekil 1B) düz bir mikroelektrot tutucu mikroelektrot monte edin. &lt;/ Li&gt; <li> Üç boyutlu bilgisayar kontrollü elektronik micropositioner (Şekil 1A) üzerine monte kafa aşamasına mikroelektrot yuvasını takın. </li><li> Örnek ölçülebilir için çözelti, uygun ölçme bölgesi mikroelektrot ucu yerleştirin (fizyolojik tuzlu su, kültür ortamı, vs.) mikroelektrot bir saat ya da iki ya da gece boyunca stabilize etmek için izin vermek. </li></ol></li><li> Referans elektrotunun hazırlanması <ol><li> Referans elektrot (Şekil 1C), yukarıdaki ile aynı kılcal bulunmaktadır. 5 cm uzunluklarda bir elmas kalemle kılcal kesin ve Bunsen alev 1-2 saniye boyunca her iki ucunda yangın cilalı. </li><li> NaCI, 3 M çözelti, ~ 200 ul, bu elektrotlar dolgu,% 2 agaroz ile CH3 CO2 K (potasyum asetat) ya da KCI. Iyon bağlı olarak çözelti, ölçülecek seç (referans elektrotu ölçülecek iyon içermemelidir; bakınız Tablo 1). Karıştırmakagaroz ve neredeyse bir mikrodalga kaynar çözümü ve ısı. Agaroz çözmek için karıştırın (çözelti berrak gider). </li><li> Bir plastik Pasteur pipeti referans elektrodu takın ve kılcal içine sıcak çözüm çizin. </li><li> Kullanmadan önce mühürlü tüplerde bu 3 M çözelti soğuk 3 M NaCI, CH 3 CO 2 K veya KCl çözeltisi ve mağaza içine elektrod bırakın. Hava kabarcıkları ile herhangi bir referans elektrotlar atın. </li><li> Düz bir mikroelektrot tutucu bir referans elektrot içindeki (önceden doldurulmuş 3 M çözelti) ile bir AgCI (Ag +) ile pelet ve altın 2 mm erkek konektör (Şekil 1C) monte edin ve bir manuel mikro konumlayıcı üzerine elektrotu ve tutucuyu manyetik bir stand üzerine monte edilmiş. </li></ol></li></ol> 2. İyon seçici Kendinden referans Mikroelektrod Kalibrasyon <ol><li> Referans çözelti olarak ilgi iyonu içeren kalibre çözümleri hazırlanması; Tablo 1 bakınız </str&gt; ong. Çözelti örnek olacak (örneğin kültür ortamı, serum fizyolojik) olan konsantrasyonu ayraç. Yani, bir kalibrasyon çözeltisi ölçüm çözeltisi içinde daha iyonunun daha düşük bir konsantrasyonda içerir ve daha yüksek bir zorunluluktur. <ol><li> Örneğin, K + 1 mM içeren tuzlu su kullanın. Bu konsantrasyon braketine, seri seyreltiler halinde 10, 1 ve 0.1 mM bir konsantrasyona kadar iyonu giderilmiş su içinde KCI toz çözülür. Bu kalibrasyon çözümlerini kullanın. Seçenek olarak ise, bu çözümlerin en az iki kullanın. </li></ol></li><li> Iyon seçici mikroelektrot ve her kalibrasyon çözeltisi içinde referans elektrot daldırın ve voltaj değeri özel bir yazılım kullanılarak ilgili gerilim kaydetmeden önce 1 dk 3 için stabilize izin (Tablo 1). </li><li> Yazılım bir txt dosyası olarak veri (amplifikatör çıkışı) olarak kaydeder, bir elektronik tablo dosyasına veri kopyalama. Logaritması karşı Mikroelektrot çıkışı (mV) Plotmol iyon konsantrasyonu (Şekil 2A). </li><li> Doğrusal regresyon uygulayın ve Nernst eğim, kesişme ve R2 değerini hesaplamak. Nernst eğim tek değerli iyonlar için 58 ± 11 mV / on ve iki değerlikli iyonlar için 29 ± 11 mV / on ise mikroelektrot Kabul (katyonlar için, Nernst eğim anyonlar için negatiftir, pozitiftir). Ayrıca, iyi Mikroelektronlar güçlü bir doğrusal ilişki (Şekil 2B R 2&gt; 0.9) olması gerekir. Not: Burada kullanılan amplifikatörün mV çıkış mV on kat kazanç okuma verir. Değerler on kat bölünmesi gerekir. </li><li> Gerçek iyon konsantrasyonu (Şekil 2B) içine mikroelektrot ham mV çıkış dönüştürmek için lineer regresyon formülü kullanın. </li></ol> İyon seçici Mikroelektrod Tekniği 3. Doğrulama <ol><li> Yapay kaynak hazırlanması <ol><li> Yapay kaynak kılcal aynı kılcal damarlar gibidirYukarıda. Isı adım 1.1.1 deki gibi bir mikroelektrot çektirmenin kullanarak kılcal çekin. </li><li> NaCI, KCI, 1 M çözelti, 200 ul, CaCI2 2H 2, O ya da pH 4 tamponu, bu kılcal Dolgu. Seçin iyon bağlı yapay kaynak çözüm (Tablo 1) ölçülecek. Not: Alternatif olarak, büyük uç çapı (~ 20 mm) ile elektrotlar çekin aynı çözümleri ile ucu doldurun ama% 0.5-1 agaroz içeren (agaroz çözüm herhangi bir toplu akışını önleyecektir). </li><li> Bir mikromanipülatör yapay kaynaklı kapiler monte edin ve örneklerde iyon akışını ölçmek için kullanılan çözelti içinde bırakın. Gradyan stabilizasyonunu sağlamak için 1 saat kadar 30 dakika boyunca çözelti içinde yapay kaynak bırakın. </li></ol></li><li> Iyon seçici mikroelektrot Doğrulama <ol><li> İki ölçme işlemi için kullanılan çözeltide yapay kaynaklı kılcal ila yaklaşık bir santimetre uzaklıkta iyon seçici mikroelektrot daldırınörnekler üzerinde iyon akı yeniden ve daha önce olduğu gibi referans elektrodu ile devreyi kapatın. Gerilim değeri 1 ila 2 dakika süreyle özel bir yazılım kullanılarak ilgili gerilim kaydetmeden önce 1 dk 3 için stabilize edelim. Bu değer, (aynı zamanda bir referans, arka plan veya boş değer olarak ifade literatürde) tamponu değerine karşılık gelir. </li><li> Yapay kaynaktan yaklaşık 5 um iyon seçici mikroelektrot getirin ve 1-2 dakika için bir yazılım kullanılarak ilgili gerilim kayıt işleminden önce voltaj değeri 1 dakika ila 3 için stabilize sağlar. </li><li> Yapay kaynak kılcal uzak 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640 ve 1280 mikron de iyon seçici mikroelektrot koyarak yukarıdaki işlemi tekrarlayın. </li><li> Bir txt dosyası olarak verileri ayıklayın ve bir elektronik tablo dosyasına değerleri kopyalayın. </li></ol></li><li> Kalibrasyon değerleri için olduğu gibi aynı şekilde mV değerlerine karşılık gelen iyon konsantrasyonu hesaplanır. Değeri çizilir. Hayırte: bir iyon akışı varsa, mikroelektrot iki konum (Şekil 3B) arasındaki iyon konsantrasyonu bir fark tespit eder. Yapay kaynaklı çözeltisi daha ölçülen türlerin daha fazla iyon içeriyorsa, konsantrasyon doğru (bu durumda, bir iyon akışının yönünü tespit etmek için iyon seçici mikroelektrot yeteneğini doğrulamak uzakta, daha kaynağına daha yakın olmalıdır akış; yapay lavabo için, orta ölçme daha düşük spesifik iyon konsantrasyonu ile bu) akını olması gerekir. <ol><li> Difüzyon Fick yasasını kullanarak iyon akışını hesaplayın: J = c μ c çözeltide iyon konsantrasyonunu (mol cm -3) ise, μ iyon hareketlilik olduğunu (DC / dx) (mol cm N -1 sn -1) ve DC mesafesi dx (cm) (Şekil 2C) üzerine konsantrasyonu farktır. İyon akı veriler genellikle pmol cm -2 s sunulmuştur-1 Veya nmol cm -2 sn -1. Not:.. Smith ve arkadaşları 26 tarafından tarif edilen iyon akışı hesaplama için alternatif bir yöntem de kullanılabilir. Ana farklılıklar difüzyon katsayısı kullanımı yerine iyon hareketlilik ve numune olmadan tuzlu su çözeltisi içinde iyon akışının ölçümü hesaplanan arka plan iyon akı (ayrıca sürüklenme veya düzeltme faktörü voltaj) çıkarma sayılabilir. </li><li> Kaynak (Şekil 2D) uzaklaştıkça karşı her bir aşama, iyon tozlar ortalamasını çizilir. Kaynağından uzaklaşan, iyon akı farklı büyüklüğünü algılamak için iyon seçici mikroelektrot yeteneğini doğrulama akı değeri üstel azalma gözlemlemek. </li><li> Büyük bir sinyal-n onun doğru yönü ve büyüklüğü ölçümleri doğrulamak için kaydedilen amaçlanan her bir spesifik iyon kez yapay kaynak doğrulama yapınOise oranı. Not: numune olmadan tampon iyon akışı ölçümü arka plan düzeyi veya gürültü gösterir. Tipik olarak, tampon ölçümü değişken yön gösterir çok küçük akı giden iyon konsantrasyonunun net dalgalanma gösterir. </li></ol></li></ol> Odası&#39;nı Ölçme 4. hazırlanması Not: deneyler öncesinde, örnek ölçülecek düşünün ve örnek nasıl monte edilir ve mikroelektrot ölçümleri için hareketsiz hale getirilecek. <ol><li> Xenopus oosit ölçümleri 800 um naylon örgü (Nitex örgü) içindeki bir 1 cm&#39;lik bir karenin kesilmiş ve plastik Petri kabı (Şekil 1E) içine tutkal laevis için. </li></ol> 5. iyon akışı ölçüm <ol><li> Kalibrasyon çözeltisi ile aynı şekilde örnek ölçümler yapmak için kullanılan tampon içinde mevcut iyon konsantrasyonu ölçümü. X. laevis oositleri Mark&#39;ın Modifiye Zil (MMR) gerektirir. D100 NaCl, 2 KCI, 2 CaCl, 1 MgCl ve 5 HEPES: issolve NaCI, KCI, CaC, MgCİ ve deiyonize su içine HEPES (mM) bir son konsantrasyon elde etmek. NaOH kullanılarak 7.5&#39;e tampon pH ayarlayın. </li><li> Ölçüm odasına örnek yerleştirin ve mikroelektrot (Şekil 3A) yakın konumunu tanımlamak için micropositioner kullanarak (yaklaşık 10 mikron uzaklıkta) numune yakın iyon seçici mikroelektrot getir. </li><li> Özel yazılımı kullanarak yakın pozisyonda ve uzak (uzak) örnek bir pozisyon arasında mikroelektrot düşük frekanslı (0.3 Hz) gezi (100 mikron) başlatın. Mikroelektrot hareketi örneğinin yüzeyine dik olduğundan emin olun. Not: mikroelektrot gezi yazılımına ayarlanabilir. Büyük gezi ölçüm süre boyunca küçük tozlar daha kolay bir algılama sağlayan okuma degrade örnekleme aralığı uzatır ve zamansal çözünürlüğe azalır artar. Görmek <stRong&gt; bir örnek için Şekil 3A. </li><li> Yazılımını kullanarak kayıt başlatın. mikroelektrot her pozisyonda duraklar ve mV elektrik potansiyeli bilgisayarda kaydedilir. Sinyal stabilizasyon sağlayan, en az 2 dakika süreyle ölçümleri elde edilir. Kısa zaman atlamalı deneyler, bütün zaman elbette ilgi pozisyonunda rekor potansiyel varyasyonlar için. </li><li> Bir txt dosyası olarak verileri ayıklayın ve bir elektronik tablo dosyasına değerleri kopyalayın. </li><li> Kalibrasyon değerleri için olduğu gibi aynı şekilde mV değerlerine karşılık gelen iyon konsantrasyonu hesaplanır. Değeri çizilir. Not: Bir iyon akışı varsa, mikroelektrot iki konum (Şekil 3B) arasındaki iyon konsantrasyonu bir fark tespit eder. </li><li> (Adım 3.3.1) daha önce olduğu gibi difüzyon Fick&#39;in yasasını kullanarak iyon akı hesaplayın. </li><li> Yeni bir örnek ölçümünden önce tampon ölçümü tekrarlayın ve her yeni için akı ölçüm ve hesaplama prosedürü tekrarlayınörneği. </li></ol> 6. İstatistiksel Analiz ve Veri Sunumu <ol><li> Ve / veya karışık etkileri 28 ile ANCOVA modelini kullanarak kontrol koşulu altında iyon akıları zaman konumunun bağımsız etkilerini test edin. Not: kovaryans analizi (ANCOVA) kategorik ve sürekli hem tedbirlerin bağımsız değişkenler olarak kullanılmasına izin düzenli ANOVA ve regresyon karıştırır genel lineer model. Buna ek olarak, bireysel ve nihai iç içe etkilerine göre tekrarlanan tedbirlerle uyarılan ilişkili hataların varlığında, karma etki modelleri hem sabit hem de rastgele etkilerin doğru tahminler modellemek için kullanılır. </li><li> Çoklu test 28 için Bonferroni düzeltmesi ile grup düzeyleri arasında Student t-testi kullanılarak ikili karşılaştırmalar hesaplayın. </li><li> Kutudiyagramlar pozisyonu ve zamana göre iyon akı ölçümlerini özetlemek oluşturun. Açıklanan ikili Öğrenci t p değerleri içerir(Şekil 3D), yukarıda ve aşağıda p değerleri anlamlılık düzeyini göstermektedir: *: p &lt;0.05; **: P &lt;0.01; ***: P &lt;0.001 29 </li></ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

in vivo olarak, hücre dışı, iyon akıları başarılı ölçümü için en kritik adımlar şunlardır: gürültüsünün azaltılması, iyon seçici Mikroelektronlar ve referans elektrotunun doğru imalatı, ve örnek ve her iki elektrot arasında konumlandırılması. Gürültüyü en aza indirmek için, kayıt sistemi, tercihen de topraklı bir metal tepesinde (titreşim izolasyon) tablosu ile topraklı (topraklı) Faraday kafesi olmalıdır. Buna ek olarak, mikroskop şasi de topraklanmalıdır. Elektrik gürültü kaynakla...

<html> Tüm hayvan hücreleri dış çevreden sitoplazma ayıran bir lipid iki katmanlı zar ile çevrelenmiştir. Hücre iyonlarının 1 aktif taşıma ile, içinde bir elektrik membran potansiyelini negatif tutar. membran potansiyeli hücre zarında 2 çeşitli moleküler cihazları çalıştırmak için kullanabileceği bir depolanmış enerji kaynağıdır. Nöronlar ve diğer heyecanlı hücrelerin büyük zar potansiyelleri var. Sodyum kanallarının hızlı açılış membran potansiyeli (depolarizasyon) çöker ve nöron 2 uzunluğu boyunca taşınır aksiyon potansiyeli oluşturur. Bunların yanı sıra hızlı elektrikli değişikliklerden birçok doku ve organları oluşturmak ve uzun vadede önemli elektrik potansiyellerini korumak. Örneğin, deri ve kornea epitel oluşturmak ve iyonların yönlü pompalama (özellikle, sodyum ve klorid) 3 trans-epitel potansiyelleri ve hücre dışı elektrik akımı muhafaza. endojen hücre dışı elektrik akımı ölçümleri titreşimli prob 4-6 ve hücre zarlarının ve epitel hücre katmanlarının elektrik parametrelerinin ölçümünü sağlayan mikroelektrod sistemini 7-10 kullanarak membran veya trans-epitel potansiyellerin ölçümleri kullanırken çadır &quot;&gt;, onlar vermek katılan iyon türlerinin göstergesi. Seçici iyonofor ile Mikroelektronlar çözelti içinde spesifik iyon konsantrasyonunu ölçebilirsiniz. İyon gradyanları ya da akışkan farklı konumlarda iki veya daha fazla elektrot ile ölçülebilir. Ancak, her sonda içsel gerilim sürüklenme, farklı olabilir yanlış ölçüm ya da mevcut olmayan bir degrade bile tespit sebep olacaktır. İki nokta arasındaki düşük frekansta hareket sayede &quot;self-referans&quot; modunda kullanılan tek bir elektrot bu sorunu çözer. Şimdi iyon akışı nispeten yavaş ve istikrarlı sinyal sürüklenme arka planı görülebilir (Şekil 3B). </p&gt; iyona duyarlı bir ölçüm sistemi doku veya tek hücre yakın iyonlarının küçük bir hücre-dışı akıları tespit etmek için iyon seçici kendinden referans Mikroelektronlar kullanır. Sistem mikroelektrot hareketini kontrol etmek mikroelektrot ve mikro step motor ve sürücü sinyali işleyen bir amplifikatör oluşur. devresini kapatmak iyon seçici mikroelektrot ve ayrıca referans elektrotu bir headstage pre-amplifikatör (Şekil 1A) ile amplifikatöre bağlanır. Bilgisayar yazılımı Mikroelektrot hareketi (frekans, mesafe) parametrelerini belirler ve ayrıca amplifikatör çıkışını kaydeder. adım motoru, üç boyutlu bir micropositioner ile mikroelektrot hareketini kontrol eder. Iyon seçici mikroelektrot titreşimli düşük frekanslı ilk belirli kalsiyum akı 11 ölçmek için 1990 yılında geliştirilmiştir. Yanı sıra kalsiyum gibi, ticari erişilebilir iyonofor kokteyller şimdi MICR yapmak için kullanılabiliroelectrodes sodyum, klorür, potasyum, hidrojen, magnezyum, nitrat, amonyum, florür, lityum ya da cıva duyarlı. Temel olarak, kendi kendine referans iyon seçici mikroelektrot tekniği, bir voltmetre ile ölçülebilir bir elektrik potansiyel bir çözelti içinde çözündürüldü, belirli bir iyon aktivitesini dönüştürür. iyonofor kokteyli karışmayan sıvı iyon-değişim özelliklerine sahip (organik, lipofilik) aşamasıdır. iyonofor seçici (bağlar) belirli bir iyonlar, tersine çevrilebilir şekilde ve mikroelektrot (elektrolit) içerdiği, sulu çözeltisi ve mikroelektrot daldırılmış olduğu bir sulu çözelti (Şekil 1D) arasındaki aktarma çalışmalarının kompleksleri. Bu, iyon aktarımı, bir elektro-kimyasal denge yol açar ve mikroelektrot ve referans elektrot arasında elektrik potansiyeli değişimi voltmetre ile ölçülür. Gerilim Nernst e göre özel iyonu aktivitesinin logaritması ile orantılı olduğuiyon konsantrasyonu (Şekil 2A ve B) hesaplanmasını sağlayan quation. Şu anda, birkaç sistemler benzer bir kavram ya da ilke kullanarak iyon akışının ölçümü sağlar. Örneğin, Newman ve Shabala 14-16 tarafından geliştirilen tarama İyon seçici elektrot Tekniği (SIET) 12,13 veya Mikroelektrod Ion Akı Tahmini (MIFE) tekniği piyasada mevcut ve yaygın belirli iyonu belirlemek amacıyla araştırma topluluğu tarafından kullanılmaktadır hayvan, bitki ve tek canlı hücre modelleri çeşitli genelinde hücre zarı ve doku meydana gelen akıları. İyon seçici Mikroelektronlar serebral arter farede 18 ve polen tüpleri 19, paten retina hücreleri 20 hidrojen akı, fare kemik 21, çeşitli iyon kalsiyum akışının hidrojen, potasyum ve kalsiyum akısını bitki köklerine 17 arasında, klorür akının ölçülmesi için kullanılmıştır mantar hif 22 ve r akılarıTek hücreli yara sırasında kornea 23 ve son olarak kalsiyum akı ile 12,24 şifa. Ayrıca iyon seçici kendinden referanslı Mikroelektronlar 25 hakkında detaylı bilgi için aşağıdaki gözden bakın. aşağıdaki makale hazırlamak ve tek hücre düzeyinde iyon seçici self-referencing mikroelektrod tekniği kullanılarak endojen hücre dışı iyon akıları ölçümünü nasıl gerçekleştirileceği detaylı olarak anlatılmaktadır.

<table><tbody><tr><td>İyon Amp&nbsp;</td><td>&nbsp; BioCurrents Araştırma Merkezi, Woods Hole, MA, ABD</td><td></td><td>BioCurrents Araştırma Merkezi, Woods Hole, MA, ABD tarafından oluşturulan amplifikatör yok; Benzer bir sistem şu adresten satın alınabilir: " XBL işlevi önemlidir" (http://www.xuyue.org/) veya " Daha Genç ABD" (http://www.youngerusa.com/) veya Uygulanabilir Elektronik (http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr> <tr><td>IonAmp32&nbsp;</td><td>&nbsp; BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, ABD BioCurrents</td><td></td><td>Research Center, Woods Hole, MA, ABD tarafından oluşturulan hiçbir yazılım; Benzer bir sistem şu adresten satın alınabilir: " XBL işlevi önemlidir" (http://www.xuyue.org/) veya " Daha Genç ABD" (http://www.youngerusa.com/) veya Uygulanabilir Elektronik (http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr> <tr><td>Headstage ön amplifikatörü</td><td>&nbsp; BioCurrents Araştırma Merkezi, Woods Hole, MA, ABD</td><td>INA116</td><td>BSR Voltaj İzleyici INA116, BioCurrents Araştırma Merkezi, Woods Hole, MA, ABD tarafından tasarlanmıştır; Benzer bir sistem şu adresten satın alınabilir: " XBL işlevi önemlidir" (http://www.xuyue.org/) veya " Daha Genç ABD" (http://www.youngerusa.com/) veya Uygulanabilir Elektronik (http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr><tr><td>MicroStep Driver</td><td>&nbsp; BioCurrents Araştırma Merkezi, Woods Hole, MA, ABD</td><td>X</td><td>, Y ve Z konumlandırma için üç MicroStep sürücüsü gerekmez; BioCurrents Araştırma Merkezi, Woods Hole, MA, ABD tarafından oluşturulmuştur; Benzer bir sistem şu adresten satın alınabilir: " XBL işlevi önemlidir" (http://www.xuyue.org/) veya " Daha Genç ABD" (http://www.youngerusa.com/) veya Uygulanabilir Elektronik (http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr> <tr><td>Manuel mikro konumlandırıcı ve nbsp; &nbsp;</td><td>Dünya Hassas Aletler&nbsp;</td><td>Model KITE-R</td><td>Benzer sistem şu adresten satın alınabilir: Uygulanabilir Elektronik (http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr> <tr><td>Manyetik stand&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>Model M10</td><td>Benzer sistem Uygulanabilir Elektronik(http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr><tr><td>Titreşim izolasyon tablosu&nbsp; &nbsp;</td><td>Newport Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Model VW-3036-OPT-023040</td><td>Benzer sistem Uygulanabilir Elektronikten satın alınabilir (http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr> <tr><td>Üç boyutlu mikro konumlandırıcının bir parçası: açılı braket, 90 derece;, oluklu yüzler</td><td>Newport Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Model 360-90</td><td>Üç farklı mikro konumlandırıcının montajı ayrıca X, Y, Z kontrolü için üç elektrikli döner motor, MCA-2 ayarlanabilir açılı direkli MPH-1 montaj kolu ve titreşim tablasına cıvatalamak için çeşitli Newport konektörleri ve vidaları gerektirir</td></tr><tr><td>Üç boyutlu mikro konumlandırıcının bir parçası: Peg Birleştirme Kırlangıç Kuyruğu Aşaması 0.5 inç X Travel</td><td>Newport Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>460PD-X</td><td>yok</td></tr><tr><td>Üç boyutlu mikro konumlandırıcının bir parçası: Hızlı Montajlı Doğrusal Aşama, 0,5 inç XY Travel</td><td>Newport Inc.</td><td>460A-XY</td><td>hiçbiri</td></tr><tr><td>Kwik-Fil ince duvarlı borosilikat cam kılcal damarlar filamentsiz&nbsp;</td><td>Dünya Hassas Aletler&nbsp;</td><td>TW150-4</td><td>yok</td></tr><tr><td>Elektrot çektirmesi&nbsp;</td><td>Narishige</td><td>&nbsp; PC-10</td><td>yok</td></tr><tr><td>Metal raf</td><td>Evde üretilmiştir</td><td>yok</td><td>10 cm'ye 15 cm'lik dikdörtgen çelik tabanda yarım santimetre aralıklı 2 mm genişliğinde delikler açılarak şirket içinde yapılan metal elektrot tutucu</td></tr><tr><td>Fırın</td><td>QL</td><td>Model 10 Lab Fırın</td><td>yok</td></tr><tr><td>Silanizasyon çözeltisi I&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85126</td><td>Tehlikeli, sağlayıcı tarafından tavsiye edildiği şekilde kullanın&nbsp;</td></tr><tr><td>Cam Petri kabı; Pyrex</td><td>Fisher Scientific</td><td>316060</td><td>yok Elektrot</td></tr><tr><td>/mikropipet saklama kavanozu</td><td>World Precision Instruments&nbsp;</td><td>E215</td><td>yok</td></tr><tr><td>Cam kurutucu</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-595E</td><td>Drierite kurutucu içerir (WA Hammond Drierite Co. Ltd, Xenia, OH, ABD). Hava geçirmez hale getirmek için vazelini contanın üzerine yerleştirin.</td></tr><tr><td>Plastik Pastör pipeti&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11597722</td><td>yok</td></tr><tr><td>Bunsen brülör</td><td>Fisher Scientific</td><td>S97329</td><td>yok</td></tr><tr><td>Mikroskop lamı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8902</td><td>yok</td></tr><tr><td>Düz mikroelektrot tutucu</td><td>Warner Instruments</td><td>QSW-A15P</td><td>, altın 1 mm erkek konnektör ve Ag/AgCl tel ile</td></tr><tr><td>Düz mikroelektrot tutucu&nbsp;</td><td>İçinde</td><td>AgCl (Ag + ) pelet bulunan World Precision Instruments MEH2S ve altın 2 mm erkek konektör&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>6 cm Petri kabı</td><td>VWR</td><td>60872-306</td><td>yok</td></tr><tr><td>Nitex örgü</td><td>Dinamik Aqua-Supply Ltd.</td><td>NTX750</td><td>yok</td></tr><tr><td>Tutkal; Loctite epoksi</td><td>VWR</td><td>500043-451</td><td>Tutkal ve sertleştiriciyi plastik bir tartı teknesinde eşit parçalar halinde karıştırın ve iyice karıştırın. Hızlı bir şekilde sertleşir, ancak tam kürlenme için 24 saat RT'de bırakılır</td></tr><tr><td>Deiyonize su&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>99053</td><td>yok</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td>yok</td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td>yok</td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td>yok</td></tr><tr><td>Magnezyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td>yok</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td>yok</td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8045</td><td>yok</td></tr><tr><td>Potasyum Asetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1190</td><td>yok</td></tr><tr><td>Agaroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9539</td><td>yok</td></tr></tbody></table>

İyon seçici kendinden referans mikroelektrod tekniği ekstraselüler ion eriticiler Ölçümü

Measurement of Extracellular Ion Fluxes Using the Ion-selective Self-referencing Microelectrode Technique

Hayvan, bitki ve tek hücre hücreler dışarıdan sitoplazma ayıran hücre zarı olarak adlandırılan bir bariyer ile kapatılmıştır. Örneğin epitelde gibi hücre tabakaları da dış ya da çok hücreli organizmaların farklı kompartmanların iç ayıran bir bariyer oluşturur. Bu engellerin önemli bir özelliği, hücre membranları veya hücre tabakaları iyonların ayırıcı dağılımıdır. İki özellikleri bu dağılımı sağlar: 1) membranlar ve epitel belirli iyonların seçici geçirgenliğini gösterir; 2) iyonları hücre zarları ve hücre katmanları arasında pompa aracılığıyla taşınmaktadır. Bu özellikler, doku fizyolojisini korunmasında önemli rol oynarlar ve tamir sırasında, hasar sonrası ipuçlarını sinyal olarak hareket ya da patolojik koşullarda. iyon seçici kendi kendine referans mikroelektrot bu tip bir tekli hücre ve doku seviyelerinde kalsiyum, potasyum veya sodyum gibi iyonların özel tozlar ölçümleri sağlar. mikroelektrot bir iyonofor kokteyl içerirBelirli bir iyon seçici olarak geçiren. İç dolgu çözüm ilgi iyon bir dizi konsantrasyonunu içerir. mikroelektrot elektrik potansiyeli iyonunun dışında konsantrasyonu ile belirlenir. Iyon konsantrasyonu değişir, mikroelektrot potansiyeli iyon aktivitesinin günlüğünün bir fonksiyonu olarak değişir. (Nedeniyle iyon akı bir konsantrasyon gradyanı yani) ileri ve geri iyonu kaynağı veya lavabonun yanında taşındığında mikroelektrod potansiyeli iyon akışı / degrade orantılı bir genlikte dalgalanır. amplifikatör mikroelektrot sinyalini güçlendirir ve çıkış bilgisayarda kaydedilir. iyon akışı daha sonra spesifik iyon hareketliliği olarak elektrot potansiyel dalgalanma, mikroelektrot gezi ve diğer parametreleri kullanarak difüzyon Fick&#39;in yasayla hesaplanabilir. Bu yazıda iyon seçici self-referencing mikroelektrod An kullanarak dışı iyon akıları ölçmek için metodoloji detaylı tarifbazı temsilcisi sonuçlarını sunmak d.

Biz daha önce kalsiyum akını tek hücre 24 yaralama sonra görünür olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, diğer iyon akıları tek hücre yaralama üzerine ortaya olup olmadığını sordu. Biz X&#39;i kullanılan oosit, tek bir hücre yara iyileşmesi 30-34 ve elektrofizyolojik kayıt 24,35-39 için köklü bir model laevis. İlginçtir, potasyum iyonları X içinde daha konsantre olan laevis oosit (yaklaşık 110 mM) (MMR 1x: 1 mM) kullanılan hücre dışı çözelti içinde 40<...

Hücre zarlarındaki taşıyıcılar, iyonların hücre zarları veya hücre katmanları boyunca diferansiyel ayrışmasına izin verir ve doku fizyolojisi, onarımı ve patolojisi sırasında çok önemli roller oynar. Tek hücrelerde ve dokularda spesifik iyon akışlarının in vivo olarak ölçülmesine izin veren iyon seçici kendinden referanslı mikroelektrotu açıklıyoruz.

İyon seçici Kendinden referans Mikroelektrod Tekniği Ekstraselüler Ion eriticiler Ölçümü

Cells from animals, plants and single cells are enclosed by a barrier called the cell membrane that separates the cytoplasm from the outside. Cell layers ...

Bu prosedürün genel amacı, iyon seçici kendi referanslı mikro elektrot tekniğini kullanarak in vivo hücre dışı iyon akılarını ölçmektir. Bu işlem, öncelikle iyon seçici ve referans mikro elektrotların monte edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise iyon seçici kendi referanslı mikro elektrotların kalibre edilmesi ve doğrulanmasıdır.Ardından, biyolojik örnek üzerinde iyon spesifik akış ölçümleri voltaj kayıtları şeklinde yapılır. Son olarak, voltaj kaydı iyon akışına dönüştürülür. Nihayetinde bu teknik, canlı hücrelerde veya dokularda spesifik hücre dışı iyon akışlarının invaziv olmayan şekilde doğru ölçülmesine olanak tanır.Bu yöntem, rejenerasyon veya patolojinin yanı sıra fizyoloji veya yaşlanma ile ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Örneğin bu yöntem, doku morfogenezi büyümesi veya diferansiyasyonu gibi biyolojik süreçleri kontrol eden spesifik iyon akışlarının tanımlanmasını sağlar. Bu prosedürü, doktora sonrası araştırmacı Dr. Gim Ardi ve Dr. Benjas laboratuvarı gerçekleştirecektir. Elektrot kalibrasyonundan önce, bir milimetrelik altın erkek konnektör ve gümüş klorür kaplı gümüş tele sahip bir mikro elektrot tutucuya önceden doldurulmuş bir iyon seçici elektrot yerleştirin.Ardından, mikro elektrot tutucusunu üç eksenli bilgisayar kontrollü elektronik bir mikro konumlandırıcıya takın. İyon seçici elektrodun kendisi, elektroliti ve ilgilenilen iyonlara yönelik iyonfor kokteyl çözeltisini önceden içermelidir. Montaj tamamlandıktan sonra elektrot, bir milimolar potasyum klorür içeren bir çözeltiye daldırılmalıdır.Ek olarak, agar içinde üç molar tuz çözeltisi, gümüş klorür kaplı bir gümüş pelet ve referans elektrot için iki milimetrelik altın erkek konnektör içeren düz bir mikro elektrot tutucuya referans elektrodu yerleştirin. Tuz çözeltisinin seçimi, ölçülecek iyon türüne bağlıdır. Referans elektrot hazırlandıktan sonra, elektrot tutucusunu manyetik bir stand üzerine önceden monte edilmiş manuel bir mikro konumlandırıcıya takın.Montaj tamamlandıktan sonra, elektrot bir millimolar potasyum klorür içeren bir çözeltiye daldırılmalıdır. Başlamadan önce, iyon seçici elektrot düzeneği için ilgilenilen iyonları içeren bir elektrolit kalibrasyon standartları dilüsyon serisi hazırlanmalıdır. Örneğin, potasyum katyonlarının yaklaşık bir millimolar düzeyindeki fizyolojik konsantrasyonda tespit edilmesi isteniyorsa; 10, 1 ve 0,1 millimolar değerlerinde üç logaritmik seriden oluşan potasyum klorür çözeltileri hazırlayın.Bu durum, analiz için gerekli olan tespit dinamik aralığını maksimize eder. İyon seçici elektrodu kalibre etmek için, hem iyon seçici hem de referans elektrotları, bu durumda 0.1 millimolar olan en düşük konsantrasyonlu kalibrasyon çözeltisine daldırarak başlayın. Oda sıcaklığında bir ila üç dakikalık kısa bir stabilizasyon süresinden sonra, kararlı durum voltajını ölçün ve kaydedin.Voltaj ölçümlerini geri kalan kalibrasyon standartları için tekrarlayın ve ölçülen voltajları molar iyon konsantrasyonlarının logaritmasına karşı grafiğe dökün. Her bir standart çözelti için, kalibrasyon eğrisinin N eğimi, kesim noktası ve kareli değerlerini belirlemek amacıyla doğrusal regresyon uygulayın. Nernst eğimini hesaplamak için, ölçülen voltajları voltaj amplifikatörünün toplam kazancına bölmeyi unutmayın.Ölçüm protokolünü göstermek için, perforize edilmiş bir kurbağa oositiyle potasyum iyon akısı, potasyum duyarlı bir mikroelektrot kullanılarak karakterize edilecektir. İyon seçici elektrot kurulumuna başlamadan önce, 800 mikronluk naylon bir ağdan bir santimetrelik bir parça kesin ve bunu plastik bir Petri kabına yapıştırın. Ayrıca, şu formülasyona sahip Mark modifiyeli Ringer çözeltisini önceden hazırlayın: 100 millimolar sodyum klorür, iki molar potasyum klorür, iki millimolar kalsiyum klorür, bir millimolar magnezyum klorür ve beş millimolar HEPES. Tamponun pH değerini sodyum hidroksit ile 7.5'e ayarlayın ve hazırlanan tampondan bir alikotu Petri kabına ekleyin.Kurbağa hücresini, iyon seçici elektrodu ve referans elektrodu dikkatlice Petri kabına yerleştirin. Ardından hücreyi perforaj yapın ve iyon seçici elektrot örneğe yaklaşık 10 mikron uzaklıkta olacak şekilde mikro konumlandırıcıyı çalıştırın. Terminoloji açısından, örnek ile elektrot arasındaki mevcut mesafe "yakın konum" olarak adlandırılacaktır.Ardından, iyon seçici elektrodun 10 mikronluk yakın konumdan 100 mikronluk daha uzak bir konuma periyodik olarak geçmesini ve ardından 0,3 hertz hızla, yani her 10 saniyede üç tam tur yapacak şekilde yakın konuma geri dönmesini sağlayacak şekilde mikro konumlandırıcıyı çalıştırın. Mikro konumlandırıcı aktivasyonu sırasında, elektrodun hareketinin hücrenin yaralı teğetsel yüzeyine gerçekten dik olduğunu doğrulayın ve voltaj ölçüm ve kayıt yazılımını etkinleştirin. Mikro konumlandırıcı, voltaj verileri toplanırken yakın ve uzak konumlarda kısa süreliğine duraklayacak şekilde programlanmıştır.Oosit yara iyileşmesi sırasında veriler sürekli olarak kaydedilir; bu işlem, opus iribaş kuyruk rejenerasyonu sırasındaki çok günlük süreçlerin gözlemlenmesi gibi daha uzun süreli deneylerde yaklaşık 15 dakika sürerken, ölçümler farklı zaman noktalarında iki dakika boyunca kaydedilir. Örneğin; 1, 3, 6, 12 ve 24. saatlerde. Deney tamamlandığında, voltaj verilerini bir metin dosyası olarak dışa aktarın ve değerleri bir hesap tablosuna kopyalayın.Ölçülen voltaj değerlerini karşılık gelen iyon konsantrasyonlarına dönüştürmek için önceden belirlenmiş kalibrasyon eğrisini kullanın. Ekstrapole edilen iyon konsantrasyonlarını, biyolojik örnekten olan uzaklığın bir fonksiyonu olarak grafiğe dökün. Son olarak, sabit difüzyon yasasını kullanarak iyon akısını hesaplayın.Burada C çözeltideki iyon konsantrasyonu, MU iyon mobilitesi ve DC DX ise dx mesafesindeki konsantrasyon farkıdır. Biyolojik deneylerden önce, NER eğim kesişim değeri ve iyon seçici elektrot için kalibrasyon eğrisinin tamamı, bir Petri kabına yerleştirilmiş bir molar iyon kaynağından üretilen yapay bir iyon gradyanı ile valide edilebilir. Potasyum iyonu konsantrasyonlarındaki değişimler, yara bölgesine yakın veya uzak bir mesafede grafiğe döküldüğünde.Veriler, hücresel yaralanmanın başlangıcında kitlesel bir potasyum akış olayının meydana geldiğini ve yara iyileşmesi ilerledikçe, potasyum akışının yaranın tamamen iyileştiği 15 dakika sonra kademeli olarak sükunet seviyelerine geri döndüğünü göstermektedir. Ayrıca, ölçülen potasyum iyon konsantrasyonları iyon akışına dönüştürüldüğünde, yaralanma sonrası potasyum akışındaki ani artış ve kademeli azalış, bozulmamış bir kontrol oosit ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı bir etki olarak görünmektedir. Bu prosedürün ardından, hücreler arası ve hücre altı iyon akışlarının özelliklerine ilişkin ek soruları yanıtlamak amacıyla floresan biyoelektrik etiketleme gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

measurement-extracellular-ion-fluxes-using-ion-selective-self

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, hücre dışı akı testi ile primer lösemik hücrelerin hücre dışı asitlenme oranını (ECAR) ve oksijen tüketim oranını (OCR) ölçmek için biyokimyasal bir yaklaşım sağlar. Bu hücrelerin metabolik profilinin değerlendirilmesi, taleplerinin karakterize edilmesine yardımcı olarak kişiselleştirilmiş tedaviye yol açar.

Hücre Dışı Akı Deneyi: Hücrelerin Metabolik Profilini Ölçmek İçin Bir Yöntem

Bu videoda, bir floresan raportör ile kaynaşmış ışığa bağımlı iyon kanalı proteinlerini ifade eden embriyonik böbrek hücresi kültürleri, ışığın iyon hareketi üzerindeki etkisini göstermektedir. Tüm hücre yama kelepçesi, iyonların hareketini izlemek için kullanılır.

Işığa Bağımlı İyon Kanallı Hücrelerin Optogenetik Elektrofizyoloji Kaydı

Bu video, elektrik sinyallerini ölçmek ve karşılaştırmak için iyon seçici ve iyontoforez mikroelektrotları kullanarak bir beyin dilimindeki hücre dışı boşluğun nasıl karakterize edileceğini gösterir. Bu işlem, boşluğun hacim fraksiyonunu ve bükülme derecesini belirlemeye yardımcı olur.

İyon Seçici ve İyontoforez Mikroelektrotları Kullanılarak Bir Beyin Dilimindeki Hücre Dışı Boşluğun Karakterize Edilmesi

Bu makalenin ilk bölümü, plazma zarlarında veziküler Na+/H+ değiştiricileri eksprese eden mutant hücre hatlarının nasıl seçileceğini gösterir. İkinci bölüm, bu değiştiricilerin iyon seçiciliğini ve kinetik parametrelerini belirlemek için kullanılan hücre içi pH ölçümlerine ve hızlı iyon alımına dayalı protokoller sağlar.

Na fonksiyonel karakterizasyonu<sup&gt; +</sup&gt; / H<sup&gt; +</sup&gt; Seçim Proton-öldürme Kullanma hücre içi Bölmeler ve Eşanjörleri Plazma Membran Them Express

Beyin dokusundaki iyon konsantrasyonlarının ölçümü için iki tip iyon seçici mikroelektrotun (çift namlulu ve eş merkezli) üretimini, kalibrasyonunu ve özelliklerini gösteriyoruz. Bunlar daha sonra uyarıcı aktivitenin hem hücre dışı potasyum hem de sodyum konsantrasyonlarını değiştirdiğini göstermek için fare hipokampal dilim hazırlığında kullanılır.

Beyin Dokusu Ölçme Ekstraselüler Ion Sinyalleri için Çift namlulu ve Konsantrik Mikroelektronlar

Bu protokol, Drosophila melanogaster izole Malpighian (renal) tübüllerin sıvı sekresyon oranları ölçmek için Ramsay tahlilinin kullanımı açıklanmaktadır. Buna ek olarak, belirli bir iyon elektrotların kullanımı transepitelyal iyon akışının hesaplanmasını sağlayan, salgılanan sıvının içinde sodyum ve potasyum konsantrasyonlarını ölçmek için, tarif edilmektedir.

Ramsay Testi Kullanımı sıvı salgılanması ve İyon Flux fiyatlar Tedbir<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Malpighi Tübül

Bu makale, channelrhodopsinin iyon seçiciliğinin, HEK293 hücreleri kullanılarak elektrofizyolojik tam hücre yama-klemp kayıtlarıyla nasıl belirlendiğini açıklamaktadır. Burada, anyon seçici bir channelrhodopsinin klorür seçiciliğini araştırmak için deneysel prosedür gösterilmiştir. Bununla birlikte, prosedür farklı seçiciliğe sahip diğer channelrhodopsinlere aktarılabilir.

Channelrhodopsins&#39;teki İyon Seçiciliğinin Elektrofizyolojik Olarak Belirlenmesi için Tam Hücreli Yama Kelepçesi Kayıtları

Bu el yazması proton taşıma sistemlerinin etkinliğini ölçmek için proton-seçici elektrot ve yöntemleri sıkma yama uygulamaları açıklar. Bu yöntemleri teknikleri proton taşıma etkinlik, ılımlı duyarlılık, zaman çözünürlüğü ve yetersiz hücre içi ortam denetimi gibi çalışma için yaygın olarak kullanılan bazı sınırlamalarının üstesinden gelir.

Elektrofizyoloji ölçüm uygulanması elektro-tarafsız taşıyıcılar etkinlik çalışması için

Potasyum iyonları hücre istirahat membran potansiyelini katkıda bulunmak ve ekstraselüler K+ konsantrasyon hücresel uyarılabilirlik çok önemli bir düzenleyicisidir. Biz nasıl yapmak, kalibre ve monopolar K+tarif-seçici microelectrodes. Böyle elektrotları kullanarak elektriksel olarak uyarılmış K+ konsantrasyon dynamics yetişkin Hipokampal dilimleri içinde ölçüm sağlar.

Yapma, test etme ve yetişkin beyin doku dilimler halinde potasyum iyon seçici Microelectrodes kullanma

Burada gösterdi (1) taze olduğu gibi beyin endotel "boru" ve endotel kalsiyum ve membran endotel kaynaklı hyperpolarization sırasında potansiyel (2) eşzamanlı ölçümler sorunlarının yalıtılması iletişim kurallarıdır. Ayrıca, bu yöntemler farmakolojik endotel hücre kalsiyum ve bireysel veya etkileşimli deneysel değişkenler olarak elektrik sinyali ayarlamak için izin verir.

Hücre içi kalsiyum ve taze izole ve olduğu gibi fare serebral endotel membran potansiyeli eşzamanlı ölçümler

Bu protokol, Ramsay tahlilinin arkasındaki metodolojileri, iyon seçici mikroelekrodları, Tarama İyon seçici Elektrot Tekniğini (SIET) ve in vitro kasılma testlerini özetlemektedir, Malpighian tübülleri ve arkalarından oluşan yetişkin sivrisinek boşaltım sistemini incelemek için uygulanan, iyon ve akışkan salgı oranlarını, kontinentil aktiviteyi ve transepithelial iyon taşımacılığını toplu olarak ölçmek için.

Yetişkin Sivrisinekte Nöropeptitlerin ve Boşaltım Sisteminin Diğer Düzenleyicilerinin Aktivitesinin Incelenmesi

Öğrenin iyon seçici kendinden referans mikroelektrot tekniği ile canlı hücre ve dokularda ekstraselüler iyon akışlarını invaziv olmayan şekilde ölçmeyi. Bu yöntem hücre fizyolojisi ve patoloji araştırmalarında kritik bilgiler sağlar.

İyon seçici Kendinden referans Mikroelektrod Tekniği Ekstraselüler Ion eriticiler Ölçümü

Daha fazla video keşfet