Name: Test Chick Kalp Invasion Testi Kanser hücrelerinin invazivliğini ve Potansiyel Anti-invaziv Bileşikler Etkinlik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Öğrenin, embriyonik tavuk kalp dokusu kullanarak üç boyutlu tümör hücre istilasını incelemek için bir organ kültürü yöntemi. Bu teknik, anti-invaziv ilaç adaylarının etkinliğini değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Video filmde tahlil tekniğini gösterdiği için Marleen De Meulemeester'e teşekkür ederiz. B. I. R., Araştırma Vakfı – Flanders'ın (FWO – Vlaanderen) Doktora Sonrası Araştırma Görevlisidir. L.M.M., Kansere Karşı Flaman Birliği'nden (Vlaamse Liga tegen Kanker) Emmanuel van der Schueren bursu aldı.

<ol><li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Van Roy, F. M., de Baetselier, P. Molecular mechanisms of cancer invasion. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMareel%2C+MM+%22Encyclopedia+of+Cancer%22">Encyclopedia of Cancer</a>. JR, B. ertino 2, Academic Press. San Diego. 1072-1083 (1997).</li>
<li>Mareel, M., Kint, J., Meyvisch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+study+of+the+invasion+of+malignant+C3H+mouse+fibroblasts+into+embryonic+chick+heart+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch.+B.+Cell+Pathol.+Incl.+Mol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Methods of study of the invasion of malignant C3H mouse fibroblasts into embryonic chick heart in vitro.</a> Virchows Arch. B. Cell Pathol. Incl. Mol. Pathol. 30 (1), 95-111 (1979).</li>
<li>Albini, A., Noonan, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%E2%80%98chemoinvasion%E2%80%99+assay%2C+25+years+and+still+going+strong%3A+the+use+of+reconstituted+basement+membranes+to+study+cell+invasion+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The ‘chemoinvasion’ assay, 25 years and still going strong: the use of reconstituted basement membranes to study cell invasion and angiogenesis.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 22 (5), 677-689 (2010).</li>
<li>De Wever, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+and+spheroid+collagen+type+I+invasion+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Single cell and spheroid collagen type I invasion assay.</a> Methods Mol. Biol. 1070, 12-35 (2014).</li>
<li>Wolff, E., Schneider, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((La+transplantation+prolong%C3%A9e+d%E2%80%99un+sarcome+de+souris+sur+des+organes+embryonnaires+de+poulet+cultiv%C3%A9s+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22C.R.+Seances+Soc.+Biol.+Fil%22%5BJournal%5D)">La transplantation prolongée d’un sarcome de souris sur des organes embryonnaires de poulet cultivés in vitro.</a> C.R. Seances Soc. Biol. Fil. 151 (7), 1291-1292 (1957).</li>
<li>Easty, G. C., Easty, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+organ+culture+system+for+the+examination+of+tumor+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An organ culture system for the examination of tumor invasion.</a> Nature. 199, 1104-1105 (1963).</li>
<li>Schleich, A. B., Frick, M., Mayer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+invasive+growth+in+vitro.+Human+decidua+graviditatis+confronted+with+established+human+cell+lines+and+primary+human+explants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Patterns of invasive growth in vitro. Human decidua graviditatis confronted with established human cell lines and primary human explants.</a> J. Natl. Cancer Inst. 56 (2), 221-237 (1976).</li>
<li>Sys, G. M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+In+ovo+CAM-assay+as+a+Xenograftodel+for+Sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The In ovo CAM-assay as a Xenograftodel for Sarcoma.</a> J. Vis. Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Bracke, M. E., Van Larebeke, N. A., Vyncke, B. M., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+modulates+both+invasion+and+plasma+membrane+ruffling+of+MCF-7+human+mammary+carcinoma+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid modulates both invasion and plasma membrane ruffling of MCF-7 human mammary carcinoma cells in vitro.</a> Br. J. Cancer. 63 (6), 867-872 (1991).</li>
<li>Vermeulen, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+the+noninvasive+to+the+invasive+phenotype+and+loss+of+alpha-catenin+in+human+colon+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Transition from the noninvasive to the invasive phenotype and loss of alpha-catenin in human colon cancer cells.</a> Cancer Res. 55 (20), 4722-4728 (1995).</li>
<li>Parmar, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-invasive+activity+of+3%2C7-dimethoxyflavone+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharma.+Sci%22%5BJournal%5D)">Anti-invasive activity of 3,7-dimethoxyflavone in vitro.</a> J. Pharma. Sci. 83 (9), 1217-1221 (1994).</li>
<li>Parmar, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-invasive+activity+of+alkaloids+and+polyphenolics+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Anti-invasive activity of alkaloids and polyphenolics in vitro.</a> Bioorg. Med. Chem. 5 (8), 1609-1619 (1997).</li>
<li>Gaillard, P. J. Organ culture technique using embryologic watch glasses. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGaillard%2C+PJ+%22Methods+in+Medical+Research%22">Methods in Medical Research</a>. MB, V. isser 2, Year Book Publishers. Chicago. 241-24 (1951).</li>
<li>Romeis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Das+mikrotom%5BTitle%5D)+AND+%22Mikroskopische+Technik.+15+Verb.+Aufl.+Kapitel%22%5BJournal%5D)">Das mikrotom.</a> Mikroskopische Technik. 15 Verb. Aufl. Kapitel. 7, München: Leibniz. 114-120 (1948).</li>
<li>Van Marck, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-cadherin+promotes+cell-cell+adhesion+and+counteracts+invasion+in+human+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">P-cadherin promotes cell-cell adhesion and counteracts invasion in human melanoma.</a> Cancer Res. 65 (19), 8774-8783 (2005).</li>
<li>Attia, M. A., Weiss, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+spontaneous+mammary+carcinomas+in+mice.+V.+Acquired+tumor+resistance+and+enhancement+in+strain+A+mice+infected+with+mammary+tumor+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Immunology of spontaneous mammary carcinomas in mice. V. Acquired tumor resistance and enhancement in strain A mice infected with mammary tumor virus.</a> Cancer Res. 26 (8), 1787-1800 (1966).</li>
<li>Katritzky, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QSAR+modeling+of+anti-invasive+activity+of+organic+compounds+using+structural+descriptors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">QSAR modeling of anti-invasive activity of organic compounds using structural descriptors.</a> Bioorg. Med. Chem. 14 (20), 6933-6939 (2006).</li>
<li>McKinnell, R. G., Bruyneel, E. A., Mareel, M. M., Seppanen, E. D., Mekala, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+in+vitro+by+explants+of+Lucke+renal+carcinoma+cocultered+with+normal+tissue+is+temperature+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Invasion in vitro by explants of Lucke renal carcinoma cocultered with normal tissue is temperature dependent.</a> Clin. Exp. Metastasis. 4 (4), 237-243 (1986).</li>
<li>Wanson, J. C., de Ridder, L., Mosselmans, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+hyperplastic+nodule+cells+from+diethylnitrosamine+treated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Invasion of hyperplastic nodule cells from diethylnitrosamine treated cells.</a> Cancer Res. 41 (12 Pt 1), 5162-5175 (1981).</li>
<li>Mareel, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+temperature+on+invasion+of+MO4+mouse+fibrosarcoma+cells+in+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Effect of temperature on invasion of MO4 mouse fibrosarcoma cells in organ culture.</a> Clin. Exp. Metastasis. 2 (2), 107-125 (1984).</li>
<li>Laerum, O. D., Steinsvag, S., Bjerkvig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+and+tissue+culture+of+the+central+nervous+system%3A+recent+developments+and+current+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Cell and tissue culture of the central nervous system: recent developments and current applications.</a> Acta Neurol. Scand. 72 (6), 529-549 (1985).</li>
<li>Schroyens, W., Mareel, M. M., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+invasiveness+of+human+bladder+cancer+from+cell+lines+and+biopsy+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vitro invasiveness of human bladder cancer from cell lines and biopsy specimens.</a> Clin. Exp. Metastasis. 1 (2), 153-162 (1983).</li>
<li>Mareel, M. M., De Bruyne, G. K., Vandesande, F., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+study+of+embryonic+chick+heart+invaded+by+malignant+cells+in+three+dimensional+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invasion+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical study of embryonic chick heart invaded by malignant cells in three dimensional culture.</a> Invasion Metastasis. 1 (3), 195-204 (1981).</li>
<li>Bjerkvig, R., Laerum, O. D., Mella, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioma+cell+interactions+with+fetal+rat+brain+aggregates+in+vitro+and+with+brain+tissue+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Glioma cell interactions with fetal rat brain aggregates in vitro and with brain tissue in vivo.</a> Cancer Res. 46 (8), 4071-4079 (1986).</li>
<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confrontation+of+an+invasive+%28MO4%29+and+a+non-invasive+%28MDCK%29+cell+line+with+embryonic+chick+heart+fragments+in+serum-free+culture+media%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Confrontation of an invasive (MO4) and a non-invasive (MDCK) cell line with embryonic chick heart fragments in serum-free culture media.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. 22 (9), 508-514 (1986).</li>
<li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Storme, G. A. Mechanisms of tumor spread: a brief overview. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMareel%2C+MM+%22Cancer+Campaign.+9%3A+The+Cancer+Patient%22">Cancer Campaign. 9: The Cancer Patient</a>. Grundmann, E. , Gustav Fisher Verlag. Stuttgart and New York. 59-64 (1985).</li>
<li>De Neve, W. J., Storme, G. A., De Bruyne, G. K., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+analysis+system+for+the+quantification+of+invasion+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metast%22%5BJournal%5D)">An image analysis system for the quantification of invasion in vitro.</a> Clin. Exp. Metast. 3 (2), 87-101 (1985).</li>
<li>Smolle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+melanoma+cell+invasion+in+three-dimensional+confrontation+cultures+in+vitro+using+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of melanoma cell invasion in three-dimensional confrontation cultures in vitro using automated image analysis.</a> J. Invest. Dermatol. 94 (1), 114-119 (1990).</li>
<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((flavonoid+effect+on+tumor+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Technol%22%5BJournal%5D)">flavonoid effect on tumor invasion and metastasis.</a> Food Technol. 48 (11), 121-124 (1994).</li>
<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+tangeretin+on+tamoxifen%E2%80%99s+therapeutic+benefit+in+mammary+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">The influence of tangeretin on tamoxifen’s therapeutic benefit in mammary cancer.</a> J. Natl. Cancer Inst. 91 (4), 354-359 (1999).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

PHF&#39;lerin hazırlanması sırasında, fragmanlar süspansiyon kalmak olmayabilir ama damar duvarına yapışır; Bu kültür ortamı hacmini arttırarak aşılabilir. PHF&#39;lerin sayısı çok düşük olduğu ve boyutu çok büyük ise, kültür ortamının düşürür. Bir araya test hücrelerinin hatası sıcaklığında veya mikrobik enfeksiyona dalgalanmalara bağlı olabilir. Alternatif olarak, agrega bir yetersizlik hücrelerinin özgü bir özelliktir olabilir. PHF için agrega bağlanması sırasında, kötü yapışma yarı katı agar ortamı üzerine kuluçka s...

Invasion kötü huylu tümörlerin özelliğidir. Bu aktivite, çevredeki dokuların tahrip olmasına yol açar, ama aynı zamanda metastaz oluşumunda rol oynadığı gösterilmiştir tesis edilir. Kanser hastalarının invazyon ve metastaz ve etkili anti-invaziv tedaviler ölmektedir beri hala tümör hücrelerinin işgali geliştirilmiştir taklit kıt, laboratuar deneyleri bulunmaktadır. Civciv, kalp deneyin amacı, üç boyutlu olarak tümör istilasını incelemek için ilgili bir organ kültür yöntemi sunmaktır. Tahlil invaziv ve non-invaziv hücreler arasında ayrım ve tümör işgali üzerine test bileşiklerinin etkilerini incelemek için izin verir. tahlilin kullanımı arkasındaki mantık tümörler neoplastik hücreler sürekli olarak stroma (ev sahibi hücreler ve hücre-dışı matris) etkileşim ekosistemlerin olduğu gerçek bir kavramdır ve bu moleküler interaksiyonlarda işgali ile bu ince ayarlanmış 1 olduğu. Yani, deneyde tümör hücreleri Livi ile karşı karşıya kalırlarTümör hücreleri tarafından işgali için alt-tabakalar olarak değil, aynı zamanda stroma hücreleri ve matris elemanlarının farklı bir kaynağı olarak da iş görür ng civciv embriyosu kalp fragmanları 2. Civciv, kalp miyositleri, fibroblastlar ve endotel hücreleri içerir ve hücre dışı matris laminin, fibronektin ve kollajen farklı oluşmaktadır. Bu şekilde, üç boyutlu bir organ kültürü tekniği, hasta tümör istilası karıştığı bir çok selüler ve moleküler etkileşimleri kapsar. civciv kalp testinin ana avantajı stromal etkilerin uygulamasıdır. Bu özellik, bazal membran 3 veya interstisyel matrisin 4 molekülleri oluşan cansız jeller halinde tümör hücrelerinin istilasını dayanmaktadır, in vitro olarak, diğer invazyon deneylerde daha tamamlanır. organ kültür deney bulunan tümör hücreleri ve normal yaşam konak doku arasındaki çatışma kavramı birkaç tarafından getirilmiştirAlmanya&#39;da 7 Wolff ve Schneider Fransa&#39;da 5, Birleşik Krallık 6 easty ve easty ve Schleich dahil yazarlar. Atıf yöntemler üzerinde civciv kalp işgali testinin iki teknik avantajları parçalarının hacmi kolaylıkla standardize olabilir ve organ kültürü sırasında fonksiyonel bütünlük izlenmesine olanak sağlar kasılma, kalmasıdır. Bunlar yumurta içindeki steril içeriğine kesilerek edilebilir, çünkü Ayrıca, kuş embriyolar, tercih edilir. tahlil tümör hücrelerine çevreleyen karmaşık stromal sunarak civciv chorioallantois membran tahlil 8 kavramsal benzerlik vardır. Deney başarılı şekilde 9 ve HCT-8 (Kolon), 10 hücre çizgisi ailesine MCF-7 (meme) ile aynı insan tümörlerinden invaziv ve invazif olmayan hücre varyantları arasında ayırt etmek için uygulanmıştır. teknik, hem de potansiyel olarak anti-invasif bileşikleri test etmek için kullanışlıdır <sup&gt; 11,12. Daha da açıklandığı üzere, küçük organik molekülleri yapı-aktivite ilişkileri kurulması için kullanılabilir. Deney Bununla birlikte, göz önüne kanser invazyonu immünolojik hücrelerin katkısını almaz. Bu tekniğin nedeniyle manipülasyonlar yüksek sayıda, tahlil çalışır sınırlı sayıda (en fazla 30 kültürler) ve uzun turn-around zaman (yaklaşık 1 ay) içinde, yüksek verimli bir analiz sistemi olarak kabul edilemez vurgulanmalıdır.

<table><tbody><tr><td>Ringer'ın tuz çözeltisi</td><td>Braun</td><td>CEO123</td><td></td></tr><tr><td>Bacto-agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Tris-(hidroksimetil)-aminometaan Analar</td><td>VWR</td><td>103157P</td><td></td></tr><tr><td>BSA: sığır serumundan albümin, cohn V fract.</td><td>Sigma</td><td>A4503-500G</td><td></td></tr><tr><td>MEM-Rega 3</td><td>Yaşam Teknolojileri&nbsp;</td><td></td><td></td>19993013</tr><tr><td>Gyrotory çalkalayıcılar</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>G10 ve G33</td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyer şişeleri 50 ml</td><td>Novolab</td><td>92717</td><td></td></tr><tr><td>Cam Petri kapları</td><td>Novolab</td><td>68516</td><td></td></tr><tr><td>İridektomi makası</td><td>Rumex</td><td>11-0625</td><td></td></tr><tr><td>Kalibre edilmiş oküler ızgaralı makroskop</td><td>Wild</td><td>157702</td><td></td></tr><tr><td>Parafin mumu</td><td>Uluslararası Tıbbi ürünler</td><td>8599956</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Sigma</td><td>230251-25g</td><td></td></tr><tr><td>Harris'in hematoksilen</td><td>Sigma</td><td>HHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>Lamel reçinesi (Tissue-Tek)</td><td>Sakura</td><td>4494</td><td></td></tr><tr><td>Parafin eritme aparatı</td><td>GFL</td><td>1052</td><td></td></tr><tr><td>Parafin kesitleme için mikrotom</td><td>Reichert</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gaz giriş ve çıkışlı Erlemeyer şişeleri için stppers</td><td>Novolab</td><td>2602421 ve 260243</td><td></td></tr><tr><td>Diaminobenzidin</td><td>Sigma</td><td>D8001</td><td></td></tr><tr><td>REAX sallanan masa</td><td>Heidolph</td><td>54131</td><td></td></tr><tr><td>24 oyuklu doku tabakları</td><td>VWR</td><td>NUNC142475</td><td></td></tr><tr><td>Oftalmolojik enükleasyon kaşığı</td><td>Rumex</td><td>16-060</td><td></td></tr><tr><td>Keskin forseps</td><td>Rumex</td><td>4-111T</td><td></td></tr><tr><td>Künt forseps</td><td>Nikel-Electro LTD</td><td>7112</td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyer şişeleri 5 ml</td><td>Novolab</td><td>211901</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları yıkanmış ve yağdan arındırılmış</td><td>Uluslararası Tıbbi ürünler</td><td>8613908</td><td></td></tr></tbody></table>

test chick kalp invasion testi kanser hücrelerinin invazivliğini ve potansiyel anti-invaziv bileşikler etkinlik

Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

Civciv, kalp deneyin amacı, üç boyutlu olarak tümör istilasını incelemek için ilgili bir organ kültür yöntemi sunmaktır. Deney invaziv ve invazif olmayan hücreler arasında ayrım ve tümör invazyonu üzerinde test bileşiklerinin etkileri etüdüne olanak sağlamıştır olabilir. Kanser hücreleri - ya agrega veya tek hücreleri gibi - embriyonik civciv kalp parçaları ile karşı karşıya kalırlar. Birkaç gün veya hafta içinde süspansiyon içinde organ kültürü sonra, karşı karşıya kültürler sabitlenmiş ve histolojik analiz için parafin içine gömülmüştür. kanser hücreleri ve normal doku arasında üç boyutlu etkileşimi, daha sonra hematoksilen-eozin ile ya da kalp dokusunda, epitoplar ya da karşı karşıya kanser hücreleri için immünohistokimyasal boyama sonrası lekelenmiş dizi bölgelerinin arasında yeniden yapılmıştır. Deney kanseri istilası kanser hücreleri ve komşu stromal ana elemanlarının (miyofibroblastlar, endoth arasındaki moleküler etkileşimlerin sonucu olduğu son kavramı ile tutarlıdırElial hücreler, hücre dışı matris bileşenleri, vs.). İşte, bu stromal ortamı yaşayan bir doku parçası olarak kanser hücrelerine sunulmaktadır. Testin alaka Destekleyici yönleri birden vardır. Ilerici işgal ve yedek zamanında ve ev sahibi dokusunun alanı ve invaziv ve karşı karşıya hücrelerin in vivo non-invaziv genel tahlilin sonucu ile ilişkilidir: tahlilde Invasion kanser işgali kriterlerine uygundur. Ayrıca, in vivo hücre istilası desen, patologlar tarafından tanımlanan deneyde histolojik görüntü yansıtılır. Çok sayıda potansiyel olarak anti-invasif organik konjener bileşiklerle elde edilen sonuçlar kantitatif yapı-aktivite ilişkisi (QSAR) analizi, klinikte kullanılan flavonoidler ve chalcone ve bilinen bir anti-metastatik ilaçlar için yapı-aktivite ilişkilerinin (örneğin, mikrotübül inhibitörleri çalışma izin ) ve deneyde istilasını inhibe eder. However, tahlil kanser işgali hesap immünolojik katkıları dikkate almaz.

Şekil 5&#39;de gösterildiği gibi, histolojik bölümler başarılı deneylerde, bir dizi sonucunu göstermektedir. kültürlerin ses histoloji canlı hücreleri belirtir ve tümör hücreleri ve normal doku arasındaki etkileşimi yorumlamak için izin verir. Bundan başka, normal doku ile ilgili hiç bir bağışıklık reaksiyonu immün red sisteminin oluşturulması önce, örneğin, kullanılan piliç embriyoları doğru yaş teyit olan gözlenebilir. Kültür döneminde (brüt) kontaminasyon yokluğunu gösterir görünür hiçbir bakteri vardır. Nih...

Burada, üç boyutta normal doku parçaları canlı olarak tümör hücrelerinin istilasını incelemek için bir protokol mevcut. Bu organ kültürü tekniği, özellikle in vitro koşullarında potansiyel anti-invasif ilaçlar test etmek için uygulanır.

Test Chick Kalp Invasion Testi Kanser hücrelerinin invazivliğini ve Potansiyel Anti-invaziv Bileşikler Etkinlik

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...

Bu prosedürün genel amacı, tümör invazyonunu üç boyutlu olarak incelemek için uygun bir organ kültürü yöntemi sunmaktır. Bu işlem, öncelikle embriyonik tavuk kalplerinden elde edilen normal doku fragmanlarının hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda ise süspansiyon içinde tümör hücresi agregatları hazırlanır.Ardından, tümör hücresi agregatları, süspansiyon kültüründe inkübasyon için yarı katı bir agar yatağında normal doku fragmanlarıyla tek tek karşı karşıya getirilir. Son aşamada, karşı karşıya getirilen kültürler parafin gömme ve histolojik kesit alma işlemleri için fikse edilir. Nihayetinde, tümör hücrelerinin doku fragmanlarına invazyonu, doku kesitlerinin seri mikroskobik analizi ile görselleştirilebilir.Bu tekniğin jel içeren invazyon deneyleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, tümör hücrelerinin üç boyutlu canlı doku fragmanlarıyla karşı karşıya getirilmesidir. Anti-invaziv ilaçlara yönelik karşılanmamış bir ihtiyaç olduğundan, bu tekniğin etkileri kanser tedavisine kadar uzanmaktadır. Genel olarak, bu yöntemi ilk kez deneyen kişiler zorluk yaşayacaktır; bunun nedeni, doku fragmanının ve tümör hücresi agregatlarının spesifik boyutlarını kullanmanın önemini göz ardı etmeleridir.Bu yöntem kanser invazyonu hakkında bilgi sağlayabilse de, diğer sistemlere de uygulanabilir. Örneğin, inflamatuar hücrelerin periferik dokulara invazyonu veya kök hücrelerin kardiyak dokuya entegrasyonu çalışılabilir. Kültür süreci, döllenmiş bir yumurtanın dokuz gün boyunca 37 °C'de inkübe edilmesiyle başlar.Dokuzuncu günde, kabuğu %70 ethanol ile dezenfekte edin. Ardından bir doku kültürü kabininde, kabuğu açmak için küt uçlu pens kullanın. Sonra bir enükleasyon kaşığını embriyonun boyun kısmının etrafına yerleştirin ve embriyoyu kabuktan dışarı çekin.Embriyoyu beş mililitre ringer tuz çözeltisi içeren beş santimetrelik cam bir Petri kabına yerleştirin. Ardından her iki elinizde sivri pensler tutarak ventral torasik deriyi yırtarak açın, sternumu çıkarın ve kalbi diseke edip ana kan damarlarını ayırmak için iridektomi makası kullanın.Kalbi, beş mililitre kültür medyumu içeren beş santimetrelik yeni bir cam Petri kabına aktarın. Kalibre edilmiş bir oküler ızgaraya sahip mikroskop altında, %5 fetal bovine serum ile destekleyin. Mikrodiseksiyon makasları kullanarak, atriyumları ve ilişkili damarları çıkarmak için kalbin üst kranial üçte birlik kısmını rezeke edin.Ardından, perikardiyumu ventriküllerden ayırmak için sivri pensler kullanın. Sonrasında, ventriküllerde sagital bir hemi kesi yapın ve kanı uzaklaştırın. Daha sonra ventrikülleri, beş mililitre taze kültür ortamı ve fetal bovin serum içeren başka bir beş santimetrelik Petri kabına aktarın ve dokuyu 0,4 milimetre çapında parçalar halinde kesin.Tüm ventriküller kesildikten sonra, tüm fragmanları kabın merkezine doğru yönlendirmek için kabı nazikçe döndürün. Ardından, tüm Cora Eliana parçalarını Petri kabının çevresine taşımak için paslanmaz çelik bir iğne kullanın. Şimdi, kalp fragmanlarını ince bir kültür filmi ile kaplanmış 50 mililitre Erlenmeyer balonuna aktarmak için cam bir pastör pipeti kullanın.Balonu %5 karbon dioksit ile gazlayın ve fragmanları 37 °C'de, dakikada 70 devirle bir gyratory çalkalayıcıda 24 saat boyunca inkübe edin. Ertesi gün fragmanları bir Petri kabına aktarın ve bir iğne kullanarak korpus eliana'yı, koyu renkli nekrotik fragmanları ve tüm doku konglomeralarını ayıklayın. Fragmanları, altı mililitre kültür ortamı içeren 50 mililitrelik bir erlenmeyer balonunda gyratory çalkalayıcıda 60 saat daha inkübe edin; iki buçuk gün sonra, mikroskop ve iğneler kullanarak ince, homojen bir fibroblastik hücre tabakası sergileyen ve 0,4 mm çapındaki steroidal fragmanları seçin.Ardından, ön kültürü yapılmış kalp fragmanlarını taze kültür ortamı içeren başka bir Petri kabına aktarın. Karşılıklı kültür başlangıcından üç gün önce, 50 mililitrelik bir erlenmeyer balonunda, uygun kültür ortamının altı mililitresinde mililitre başına 100.000 test hücresini süspanse edin. Daha sonra flaskı, uygun karbon dioksit yüzdesinde, 37 °C'de ve dakikada 70 devir hızındaki bir orbital çalkalayıcıda inkübe edin.72 saat sonra, agregatları mikroskop altında inceleyin ve 0,2 milimetre çapındaki steroid hücresi agregatlarını seçin. Ardından, minimal miktarda kültür ortamında süspanse edilmiş 0,4 milimetrelik ön kültürlenmiş kalp fragmanlarından sekiz tanesini, yarı katı agar ortamı içeren embriyolojik bir saat camına aktarın.Fragmanları bir daire içine taşıyın ve fazla medyumu aspire etmek için küçük bir filtre kağıdı parçası kullanın. 0,2 milimetrelik steroidal hücre agregatlarından 10 tanesini dairenin içine yerleştirin. Fazla medyumu uzaklaştırdıktan sonra, her bir agregatı, birbirleriyle temas kurana kadar önceden kültürlenmiş kalp fragmanlarının her birine doğru hareket ettirin.Şimdi, saat camının kapağını parafinle mühürleyin ve ko-kültürü, test hücrelerinin önceden kültüre edilmiş kalp fragmanlarına olan yapışma özelliklerine bağlı olarak 37 °C'de 4 ila 24 saat boyunca inkübe edin. İnkübasyon sonunda, karşıt çiftleri 37 °C'de ön ısıtılmış kültür ortamına daldırın ve her bir çifti, her biri 1,5 mL kültür ortamı içeren ayrı 5 mL'lik Erlenmeyer flasklarına aktarmak için bir pastör pipeti kullanın. Ardından flaskları, uygun yüzde karbon dioksit akışı altında, gyratory shaker üzerinde 37 °C'de ve dakikada 120 devirde inkübe edin. Karşıtlıkların histolojik analizi için 2 mL ringer tuz çözeltisi ile doldurulmuş iki adet ek 5 mL'lik erlenmeyer flaskı hazırlayın.İnkübasyon süresinin sonunda, serum proteinlerini uzaklaştırmak için kültürleri birkaç saniyeliğine ringer tuz çözeltisine aktarın. Ardından, armutları üç mililitre Bowen Holland çözeltisi içeren bireysel üç santimetrelik Petri kaplarına taşıyın. İki saat sonra, mümkün olduğunca çok fiksatif çözeltiyi uzaklaştırmak için kültürleri, musluk suyunda iki saat inkübe etmeden önce üç mililitrelikle üç kez demineralize su ile yıkayın.Son olarak, çiftleri her biri üç mililitre %70 ethanol içeren tüplere aktararak birkaç gün boyunca bekletin. Başarılı kültürlerin bu görüntülerinde, ne tümör ne de kalp dokusunda normal doku tarafından herhangi bir bağışıklık reaksiyonu gözlemlenmemektedir; bu durum, civciv embriyolarının bağışıklık reddi sistemi gelişmeden önce kullanıldığını onaylamaktadır. Ayrıca, kültür süresince belirgin bir kontaminasyon olmadığını gösteren herhangi bir bakteri görülmemektedir.Ayrıca, kesitlerin yuvarlak çevresi, kültürlerin erlenmayer duvarına herhangi bir geçici tutunma belirtisi göstermeksizin süspansiyon halinde bulunduğunu doğrulamaktadır. Birçok bileşik, bu civciv kalbi istila deneyi ile test edilmiştir. Yapısal olarak ilgili olanlar için, deney sonuçlarına dayalı bir nicel yapı-aktivite ilişkisi kurulmuş ve elde edilen veriler, öngörülen ve deneysel anti-invaziv aktiviteler arasında net bir korelasyon olduğunu göstermiştir.Aslında, bu konfüzyon matrisi, deneyin doğruluğu ve tekrarlanabilirliği hakkında kaba bir ifade sunarak assay'in zayıf ve güçlü yönlerini özetlemek için kullanılabilir. Bu yeni prosedürü uygularken, prosedürü takip eden doku parçalarının belirtilen boyutlarına kesinlikle sadık kalmak son derece önemlidir. Enflamatuar hücreler istila eder mi? gibi ek soruları yanıtlamak için kanserli olmayan hücrelerle karşılaştırma gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Bu videoyu izledikten sonra, invaziv ve non-invaziv tümör hücreleri arasındaki ayrımın nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız. Fiksatiflerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken hava havalandırması gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

chick-heart-invasion-assay-for-testing-invasiveness-cancer-cells

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video ile hücre işgali bir floresan tabanlı bir metodoloji kullanarak hücre kültürü ekler nasıl ölçüleceğini gösteriyor.

Bir In vitro FluoroBlok Tümör Invasion Testi

Kanser Hücreleri Endotel Hücre Tek tabakalı Invasion Tedbir Gerçek zamanlı Elektrik Empedans Tabanlı Tekniği

İnterstisyel sıvı akışı solid tümörler yüksek olan ve tümör hücre invazyonu modüle olabilir. Burada bir matris içinde gömülü hücrelere interstisyel sıvı akışı uygulayıp sonra hücre işgali üzerine etkilerini ölçmek için bir tekniği açıklar. Bu teknik, kolayca diğer sistemlerle çalışmaya adapte edilebilir.

Tümör Hücre Invasion üzerine İnterstisyel Akışkan Etkilerinin Ölçülmesi için üç boyutlu Hücre Kültürü Modeli

Bu videoda, elektrik empedansına dayalı üç odacıklı bir dizi kullanan bir istila testi açıklanmaktadır. Bu teknik, tümör mikro ortamlarında yerleşik stromal hücreler tarafından salgılanan çözünür faktörlerin etkisi altında kanser hücrelerinin istilacı potansiyelini ölçer.

Üç odacıklı dizi tabanlı empedans testi: elektrik empedansını ölçerek kanser hücrelerinin invaziv potansiyelini değerlendirmek için gerçek zamanlı bir analiz tekniği

Yaygın olarak kullanılan, in vitro olarak hücre göçü ve işgali incelenmesi için oldukça erişilebilir yöntemler tarif edilmiştir. Birinci yöntem, hücre motilitesini büyüklüğüne hücre yara kapatma deneyidir. İkinci yöntem kemotaktik ve hücrelerin invaziv kapasitesini değerlendirir transwell göç ve istila testtir.

Vitro Hücre Göç ve Invasion Tahliller

Bu video makalesinde, kanser hücresi istilasını yönlendirmede hormonların, sitokinlerin ve/veya büyüme faktörlerinin rolünü incelemek için modifiye edilmiş bir in vitro yöntem açıklanmaktadır.

Bir Modifiye<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion Deneyi Hormonlar, Açan Kanser Hücre Invasion Sitokinlerin ve / veya Büyüme Faktörleri Potansiyel Rolü belirlemek için

Bu yöntem, kanser hücresinin sferoidlerden çevredeki bir 3B matrise invazyonunu değerlendirir.  Sferoidler, asılı damla kültürü yöntemi ile üretilir ve daha sonra bazal membran malzemeleri ve tip I kollajenden oluşan bir matrise gömülür.  Spheroidlerin istilası daha sonra izlenir.

Bir Kanseri Hücre Sfero Testi 3D ortamda Invasion Değerlendirmek için

Bu iletişim kuralı hücreleri hücre microenvironment koruma sırasında bir üç boyutlu ortamda göç ve işgal yeteneklerini ölçmek için kullanılabilir bir ters dikey işgali tahlil açıklar. Bu tahlil nadir ve/veya hassas hücreler için uygundur.

Yukarı doğru hareket: Bir basit ve esnek Vitro üç boyutlu işgali tahlil iletişim kuralı

İn vitro hücre invazyonu assay, protein matrisini içeren hücre kültürü eklemlerini kullanarak invazyon ve göç için hücresel potansiyelin ölçülmesi ile kanser metastifinin potansiyelini ölçmek için kullanılır. Hücreler protein matrisinde ve gözenekli membrandan, bir kemoçekiciye doğru göç etmek ve sonra ışık mikroskobu ile ölçülebilir.

Onkojenik hücre davranışının bir ölçüsü olarak bir In vitro Invazif tahlil içinde Mouse mammary tümör hücrelerinin kullanımı

Bu, kanser metastazının baskılayıcılarını veya sürücülerini taramak için etkili bir yöntemdir. Bir ifade kütüphanesi ile transdüklenen hücreler, metastatik koloniler oluşturmak için tavuk chorioallantoic membran vaskülatürüne enjekte edilir. İnvazivliği azalmış veya artmış koloniler, fenotiplerini doğrulamak için ekscised, genişletilmiş, reenjected ve son olarak, yüksek verim sıralaması kullanılarak analiz edilir.

Hızlı ve Nicel Intravital Chick Chorioallantoic Membran Modeli Kullanılarak Metastatik Regülatörlerin Keşfi

İnvaziv hücre alt popülasyonlarını gerçek zamanlı olarak tespit etmek ve yakalamak için bir yaklaşım açıklıyoruz. Deneysel tasarım, hücrelerin elektrik empedansındaki değişiklikleri izleyerek Gerçek Zamanlı Hücresel Analiz kullanır. Kompleks dokulardaki invaziv kanser, immün, endotel veya stromal hücreler yakalanabilir ve ko-kültürlerin etkisi değerlendirilebilir.

Ko-kültürlerden İnvaziv Hücre Alt Popülasyonlarının Gerçek Zamanlı Tespiti ve Yakalanması

Öğrenin, embriyonik tavuk kalp dokusu kullanarak üç boyutlu tümör hücre istilasını incelemek için bir organ kültürü yöntemi. Bu teknik, anti-invaziv ilaç adaylarının etkinliğini değerlendirmeye yardımcı olur.

Test Chick Kalp Invasion Testi Kanser hücrelerinin invazivliğini ve Potansiyel Anti-invaziv Bileşikler Etkinlik

Daha fazla video keşfet