Name: Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz In Vivo: Tek Gemi İnme Bir Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Öğrenin, fare somatosensory korteksinde Rose Bengal fototromboz ile inme modeli oluşturmayı. Konfokal optik görüntüleme sayesinde hücresel yanıtları gerçek zamanlı gözlemleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmanın finansmanı AG007218 ve NIH F32 AG031606 tarafından sağlandı.
Görüntüler, UTHSCSA, NIH-NCI P30 CA54174 (UTHSCSA'da CTRC) ve NIH-NIA P01AG19316 tarafından desteklenen Çekirdek Optik Görüntüleme Tesisinde oluşturulmuştur.

Not: Tüm hayvan prosedürleri Teksas Sağlık Bilim Merkezi San Antonio Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve GELİYORUM kurallar ile uyumlu idi. 1. Kortikal Hazırlama anestezi <ol><li> Anestezi ikna etmek için oksijen ile karıştırılır% 2-3 isofluorane bir indüksiyon odasında fare yerleştirin. Fare kaynaklı olarak solunum hızı azalma gözlemleyin. Fare burun konisi taşınmaya hazır olup olmadığını belirlemek için fare pençe sıkıştırın. Not: Anestezi seviyesi herhangi in vivo hazırlanmasında önemli bir adımdır ve bakım küresel iskemi neden olacak bir düzeye ikna etmek değil alınmalıdır. </li><li> Fare yeterince uyuşturulduktan sonra, cerrahi / görüntüleme platformu hayvan transferi ve burun konisi farenin burnunu yerleştirin ve bir anestezi durumunu korumak için 1-1.2% isofluorane uygulayın. Fare sıcaklık co yatarken olduğundan emin olunntrolled ısıtma yastığı kalan prosedürlerin boyunca vücut ısısını (37 ° C +/- 0.5 ° C) muhafaza etmek. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri üzerine veteriner merhem yerleştirin. </li><li> Sistemiyle birlikte sağlanan kuyruk veya ayak klibi kullanarak bir pulse oksimetre sistemini kullanarak fare fizyolojisini izleyin. Solunum hızı 50-65 nefesler / dk arasında muhafaza olup olmadığını kontrol edin. Hayvanın uzun vadeli hayatta kalmasını sağlamak için 97-98% arasında muhafaza edilir bpm ve oksijen doygunluğu 300-450 arasında kalp hızı kalmasını kontrol ediniz. </li><li> Fare yeterince uyuşturulduktan sonra, elektrikli makası kullanarak kafatası üzerinde saç tıraş etanol bez ardından kalan saç ve betadin temiz, kaldırın. Steril cerrahi ortamı sağlamak için üç kez bu prosedürü tekrarlayın. </li></ol> 2. Cerrahi Prosedür <ol><li> Tamamen temizlenmiş ve traşlı kafa derisi ile kranial fissu ortaya çıkarmak için fare kafa derisi 5 mm kesi yapmakres ve bregma bulmak için. </li><li> Kafatası örten kalan fasya kaldırmak için steril bir pamuk aplikatör kullanın. </li><li> Bregmadan stereotaksik koordinatlarını kullanarak parietal korteks örten kemik doku yapıştırıcı ile bir özel yapılmış paslanmaz çelik yüzük (Şekil 1) Tutkal: yanal -1 -3 mm ve: 2-4 mm. Not: tutkal, genellikle kemik üzerine halka yerleştirilmesinden sonra 2 dakika içinde ayarlar. </li><li> Fareyi stabilize etmek ve görüntüleme sırasında hareket etmesini önlemek için bir stereotaksik tutucu (Şekil 2) halkayı yapıştırın. </li><li> Cerrahi dereceli mikroskop altında yavaş yavaş bir hız kontrollü dremel benzeri aracını (Meisinger 3.9 mm matkap ucu) o delinmiş gibi alan seviyede tutmak için emin olun kullanarak kafatası içinde 1-2 mm&#39;lik bölümü matkap. Zigzag deseni kullanarak bunu başarmak. Isı önlemek için inşa, düşüğe matkap hızını ayarlamak ve sık sık ara verin. </li><li> Kranial kafatası görünüm tırmanmak olduğunda, inceltme devaminceltilmiş yüzey seviyede tutmak için aynı zig zag deseni kullanan bir neşter bıçak kullanarak kafatası kafatası ince tabakalar düzgün çıkarılmasını kolaylaştırmak için. Bir seferde kemik ince tabakalar kaldırmak için hafif bir baskı ile küçük doğrusal vuruş yapmak neşter bıçak ucunu kullanarak. Damar açıkça mikroskop aracılığıyla görülebilir oluncaya kadar bu devam edin. </li><li> Deneyci ile deler veya inceltme işlemi sırasında kafatası kırarsan, altta yatan korteks olası hasar hayvan euthanize. Not: Fare kafatası yaklaşık 300 um kalınlığında ve iki ince, kompakt kemik tabakaları (dış ve bir iç tabakası) ve kompakt kemik iki tabaka arasına sıkıştırılmış süngersi kemik tabakası oluşur. dış yoğun kemik tabakası ve süngersi kemiğin en geriye kalan küçük kemik yaklaşık 50 um tabaka içinde elde edilen 5 mm delik alanı içinde çıkarılır (Şekil 2B). Visualizdamarsal tirme son bozulmamış inceltilmiş kafatası yaklaşık 50 mikron kalınlığında olmasını sağlayacaktır. Bu kalınlığa inceltilerek zaman kafatası hala nedenle mevcut. </li></ol> 3. Mikroskop Set-up <ol><li> Objektif İnverter sahip bir ters mikroskop sistemi (konvansiyonel, konfokal veya iki foton sistemleri) kullanın. Not: Bu standart dik mikroskop kullanılması da mümkündür. sınırlayıcı faktör evre ve hedefleri arasındaki boşluk olacak. Sahneye Değişiklikler bu kurulum gerçekleştirmek için gerekli olabilir. </li><li> Kenara mikroskop tabanını bulunan bir ölçüye sahneye cerrahi / görüntüleme platformu sabitleyin. Not: Platform hedefi altında, cerrahi / görüntüleme platformu dikey hareketini sağlamak için bir laboratuvar jack kullanılarak yapılır. laboratuar jakı dört silindirik kutup yapıştırılmış bir plakaya monte edilir. (Bakınız Şekil 2). </li><li> 20x içeren objektif İnverter yerleştirinkranial pencere üzerinde objektif. Mikroskop okülerlerinde bakarak kranial pencere bulmak ve görüntüleme alanındaki hedefi konumlandırmak için harici bir ışık kaynağı kullanın. Not: Görüntüleme alanı damarsal varlığı ile ifade edilecektir. </li><li> Su bazlı hedefleri için, yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) kullanan orta vadesi potansiyeli (; 30 mM KCI; 130 mM NaCl 200 mM NaHCO 3,,, 30 mM HEPES ve 100 mM glukoz KH 2 PO 4 12 mM) görüntüleme sırasında kafatası boşluğuna kaçağı (Şekil 3). </li></ol> 4. Rose Bengal Boya hazırlanması, Yönetim ve İnme İndüksiyon <ol><li> Yapay beyin omurilik sıvısı (CSF), Rose Bengal, bir taze 20 mg / ml solüsyon hazırlamak; filtre ve uygulamadan önce sterilize edin. Yeniden ya da karışık edildikten sonra Gül Bengal tutmayın. Her bir deney için taze bir çözüm olun. </li><li> Rose Bengal s ise bir 0.1 mi kuyruk damarı enjeksiyonuBir 561 nm lazer ile kranial pencere konserve çözümün yeterli enjeksiyonu sağlamak. Not: Rose Bengal, beyin damar sisteminde, enjeksiyondan sonra 5 saniye içinde görselleştirilecektir. Tüm gemi Gül Bengal ile doldurulmalıdır. </li><li> Rose Bengal boya yeterli enjeksiyonunu takiben, belirli bir lezyon hacminin yeniden üretilebilirlik sağlamak için damar çapı (40-80 um) göre tromboz için uygun bir kap seçin. Kan akış yönü bakarak arterler ve venler arasında ayrım: arterler küçük çaplı damarları büyük çaplı hareket edecek, damarlar büyük çaplı damarları daha küçük hareket. Rose Bengal enjekte edildiğinde bu, kolayca görselleştirme ile gerçekleştirilir. </li><li> Aşağıdaki gibi mikroskop ayarını değiştirin: <ol><li> Bekleme süresini artırın. Not: Bu kullanılmaktadır mikroskop sistemine bağlı olarak değişir. </li><li> % 100 lazer gücünü artırın. </li><li> Kullanarak 1 kare / sn zaman dizisi görüntüleri toplayınMaksimum tarama hızı. </li></ol></li><li> Istikrarlı bir pıhtı damar içinde oluşana dek fareyi tarayın. Not: Bu genellikle sürekli tarama 5 dakika içinde ulaşılır (Bakınız Şekil 4). </li><li> Gül Bengal kullanarak pıhtı oluşumu indüksiyon sonrasında, geri mikroskop Görüntüleme alanından fareyi çıkarın. Dikkatle kranial kafatası paslanmaz çelik halkasını çıkartın. Herhangi bir kanama kranial pencereyi inceleyin. Kanama oluşursa, deney sonlandırın. </li><li> Kafatası üzerinde insizyon kapatmak için 6.0 monofilament sütür kullanın. Enfeksiyonu önlemek için dikiş hattı boyunca antibiyotik merhem yerleştirin. Buprenex (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için üç gün boyunca deri altından her 12 saatte enjekte edilir. </li><li> Tamamen uyanık ve serbestçe hareket kadar anestezi çıkarıldıktan sonra bir kurtarma odasına fare dönün. </li><li> Daha sonra daha fazla araştırma için temiz bir kafes fare dönün. </li></ol> 5. Daha sonraki Günlerinde Boyuna Görüntüleme <ol><li> Sonraki gün sonrası Fototromboz boyuna görüntüleme gerçekleştirmek için aşağıdaki yöntemleri kullanır. <ol><li> Yöntemlerin Bölüm 1&#39;de açıklandığı gibi fare anestezisi. </li><li> Yeterli anestezi sırasında önceden delinmiş görüntüleme alanını örten cilt yeniden açmak için herhangi bir kalıntı sütür kaldırarak saç derisini yeniden açın. </li><li> Kafatası örten kalan fasya kaldırmak için steril bir pamuk aplikatör kullanın. </li><li> Önceki görüntüleme alanını örten kemik doku yapıştırıcı ile bir özel yapılmış paslanmaz çelik yüzük (Şekil 1) Tutkal. </li><li> Fareyi stabilize etmek ve görüntüleme sırasında hareket etmesini önlemek için bir stereotaksik tutucu (Şekil 2) halkayı yapıştırın. </li><li> Daha önce inceltilmiş kafatası altında yatan damar bulun. Daha önce neden pıhtı varlığını doğrulamak için, FITC-dekstran kuyruk damarı enjeksiyonu kullanın. </li><li> In kapatmak için 6.0 monofilament sütür kullanınKafatasının üzerinde eksizyondur. Enfeksiyonu önlemek için dikiş hattı boyunca antibiyotik merhem yerleştirin. Buprenex (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için üç gün boyunca deri altından her 12 saat enjekte edilir. </li><li> Tamamen uyanık ve serbestçe hareket kadar anestezi çıkarıldıktan sonra bir kurtarma odasına fare dönün. </li></ol></li></ol> İnme indüksiyon 6. Doğrulama (Post-mortem) <ol><li> Bir çalışmanın bitiminde, Şekil 5&#39;te gösterildiği gibi 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC) boyama kullanarak strok hacmini doğrulayın. Tam bir yöntem 12&#39;de bulunabilir. </li></ol>

<ol><li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).</li>
<li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation%3A+effect+of+aspirin+and+other+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circulation Research. 40, 320-328 (1977).</li>
<li>Owens, A. P. 3rd, Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sources+of+tissue+factor+that+contribute+to+thrombosis+after+rupture+of+an+atherosclerotic+plaque%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Sources of tissue factor that contribute to thrombosis after rupture of an atherosclerotic plaque.</a> Thrombosis Research. 129, Suppl 2. S30-S33 (2012).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx+%3A+the+journal+of+the+American+Society+for+Experimental+NeuroTherapeutics%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx : the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2, 396-409 (2005).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Manual+of+stroke+models+in+rats%22">Manual of stroke models in rats</a>. , 332 CRC Press. (2009).</li>
<li>Herz, R. C., Kasbergen, C. M., Hillen, B., Versteeg, D. H., de Wildt, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+middle+cerebral+artery+occlusion+by+an+intraluminal+thread+compromises+collateral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Rat middle cerebral artery occlusion by an intraluminal thread compromises collateral blood flow.</a> Brain Research. 791, 223-228 (1998).</li>
<li>Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+brain+ischemia+in+the+rat%3A+methods+for+reproducible+neocortical+infarction+using+tandem+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+and+ipsilateral+common+carotid+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism+%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism : Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 8, 474-485 (1988).</li>
<li>Zheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purinergic+receptor+stimulation+reduces+cytotoxic+edema+and+brain+infarcts+in+mouse+induced+by+photothrombosis+by+energizing+glial+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Purinergic receptor stimulation reduces cytotoxic edema and brain infarcts in mouse induced by photothrombosis by energizing glial mitochondria.</a> PloS One. 5, e14401(2010).</li>
<li>Zheng, D. M., Wewer, J., Lechleiter, J. P. 2Y. 1R. -initiated <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IP3R-dependent+stimulation+of+astrocyte+mitochondrial+metabolism+reduces+and+partially+reverses+ischemic+neuronal+damage+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">IP3R-dependent stimulation of astrocyte mitochondrial metabolism reduces and partially reverses ischemic neuronal damage in mouse.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 33, 600-611 (2013).</li>
<li>Witte, O. W., Stoll, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+and+remote+effects+of+focal+cortical+infarctions%3A+secondary+damage+and+reactive+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Delayed and remote effects of focal cortical infarctions: secondary damage and reactive plasticity.</a> Advances in Neurology. 73, 207-227 (1997).</li>
<li>Hagemann, G., Redecker, C., Neumann-Haefelin, T., Freund, H. J., Witte, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+long-term+potentiation+in+the+surround+of+experimentally+induced+focal+cortical+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Increased long-term potentiation in the surround of experimentally induced focal cortical infarction.</a> Annals of Neurology. 44, 255-258 (1998).</li>
<li>Kramer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTC+staining+of+damaged+brain+areas+after+MCA+occlusion+in+the+rat+does+not+constrict+quantitative+gene+and+protein+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses.</a> Journal of Neuroscience Methods. 187, 84-89 (2010).</li>
<li>Blinder, P., Shih, A. Y., Rafie, C., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topological+basis+for+the+robust+distribution+of+blood+to+rodent+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Topological basis for the robust distribution of blood to rodent neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 12670-12675 (2010).</li>
<li>Nishimura, N., Rosidi, N. L., Iadecola, C., Schaffer, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+collateral+flow+after+occlusion+of+a+single+cortical+penetrating+arteriole%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Limitations of collateral flow after occlusion of a single cortical penetrating arteriole.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 30, 1914-1927 (2010).</li>
<li>Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetrating+arterioles+are+a+bottleneck+in+the+perfusion+of+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 365(2007).</li>
<li>Blum, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+after+silent+stroke%3A+Hippocampus+and+infarcts+both+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Memory after silent stroke: Hippocampus and infarcts both matter.</a> Neurology. 78, 38-46 (2012).</li>
<li>Heinsius, T., Bogousslavsky, J., Van Melle, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+infarcts+in+the+middle+cerebral+artery+territory+Etiology+and+outcome+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Large infarcts in the middle cerebral artery territory Etiology and outcome patterns.</a> Neurology. 50, 341-350 (1998).</li>
<li>Wardlaw, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+causes+lacunar+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery+%26+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">What causes lacunar stroke.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry. 76, 617-619 (2005).</li>
<li>Inoue, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+stroke+under+anticoagulant+therapy%5D.+Rinsho+shinkeigaku%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Ischemic stroke under anticoagulant therapy]. Rinsho shinkeigaku.</a> Clinical Neurology. 50, 455-460 (2010).</li>
<li>Tiannan Wang, W. C., Xie, Y., Zhang, W., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+the+Volume+of+the+Focal+Cerebral+Ischemic+Lesion+through+Photothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Biomedical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Controlling the Volume of the Focal Cerebral Ischemic Lesion through Photothrombosis.</a> American Journal of Biomedical Sciences. 2, 33-42 (2009).</li>
<li>Head, B. P., Patel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetics+and+brain+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Anaesthesiology%22%5BJournal%5D)">Anesthetics and brain protection.</a> Current Opinion in Anaesthesiology. 20, 395-399 (2007).</li>
<li>Kirsch, J. R., Traystman, R. J., Hurn, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetics+and+cerebroprotection%3A+experimental+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22International+Anesthesiology+Clinics%22%5BJournal%5D)">Anesthetics and cerebroprotection: experimental aspects.</a> International Anesthesiology Clinics. 34, 73-93 (1996).</li>
<li>Koerner, I. P., Brambrink, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+protection+by+anesthetic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Anaesthesiology%22%5BJournal%5D)">Brain protection by anesthetic agents.</a> Current Opinion in Anaesthesiology. 19, 481-486 (2006).</li>
<li>Gelb, A. W., Bayona, N. A., Wilson, J. X., Cechetto, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propofol+anesthesia+compared+to+awake+reduces+infarct+size+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Propofol anesthesia compared to awake reduces infarct size in rats.</a> Anesthesiology. 96, 1183-1190 (2002).</li>
<li>Bhardwaj, A., Castro, I. A., Alkayed, N. J., Hurn, P. D., Kirsch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetic+choice+of+halothane+versus+propofol%3A+impact+on+experimental+perioperative+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+A+Journal+Of+Cerebral+Circulation%22%5BJournal%5D)">Anesthetic choice of halothane versus propofol: impact on experimental perioperative stroke.</a> Stroke; A Journal Of Cerebral Circulation. 32, 1920-1925 (2001).</li>
<li>Barretto, R. P., Messerschmidt, B., Schnitzer, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+fluorescence+imaging+with+high-resolution+microlenses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">In vivo fluorescence imaging with high-resolution microlenses.</a> Nature Methods. 6, 511-512 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

İnsan uygulamaya hayvandan deneysel inme patofizyoloji çevirmek için yetenek yetersizliği ile rahatsız olmuştur. Ancak, bu tür fototromboz modeli olarak hayvan modellerinde, kullanımı gelişmiş inme patofizyolojisi anlayış ve inme sonrası nöro sağlamak için yeni tedavi yaklaşımları keşif için izin verir. Küçük kortikal vuruş ve Fototrombotik modeli tarafından üretilen microinfarctions yüksek oranda görüldüğü ve Amerika Birleşik Devletleri nüfusunun (yaklaşık 11 milyon kişi) her yıl 16 yaklaşık yüzde 4 etkileye...

Hemen Gül Bengal indüksiyon aşağıdaki vivo hücresel yanıtları tekniği tarif izin görselleştirme sağlam bir fare Fototromboz. Rose Bengal (4,5,6,7-tetrakloro-2 &#39;, 4&#39;, 5 &#39;, 7&#39;-tetraiodofluorescein) hayvan modellerinde, iskemik inme (fare ve sıçan) ikna etmek için kullanılan ışığa boyadır. Bir 564 nm lazer ışığı ile inceltilmiş kafatası yoluyla kuyruk damarından ve daha sonra aydınlatma aracılığıyla RB bir bolus enjeksiyonunu takiben, trombüs fizyolojik inme 1 neden indüklenir. yöntem aslen 1977 yılında Rosenblum ve El-Sabban&#39;ın tarafından tarif edilmiştir ve daha sonra orta 1980&#39;ler 1,2 Watson tarafından uyarlanmıştır. Kısaca, Rose Bengal, daha sonra, doku faktörü, pıhtılaşma kaskadının bir başlatıcı aktive reaktif oksijen türlerinin üretimi üretir yeşil uyarma ışık (bizim örneğimizde 561 nm lazer) ile ışınlanır. koagülasyon kaskad indüksiyon les iskemik üretirKlinik inme 3 patolojik alakalı iyon. İnme nöronlar, glia, endotel ve bağışıklık sistemi de dahil olmak üzere birçok farklı hücre tiplerinin etkileşimi nedeniyle karmaşık bir patofizyolojisi vardır. En iyi tekniği seçimi, belirli bir hücresel süreç birden hususlar gerektirir incelemek. Deneysel teknikler üç kategoriden birine genel olarak düşmek: in vitro, her biri avantaj ve dezavantajları ile in vivo ve siliko in vitro çalışmalar, doğal ortamdan hücrelerin çıkarılması birincil dezavantajı vardır ve bu nedenle sağlam bir görülen etkileri yeniden olmayabilir. hayvan yaşam. in vivo teknikler artmış öteleme öneme sahip hastalık durumlarının geliştirilmiş deneysel çoğaltma sağlamak. silico olarak genellikle bir hastalık veya hücresel sürecin bilgisayar modelleme anlamına gelir ve giderek sınava potansiyel ilaç etkileşimleri incelemek için kullanılan süreple, toplanan herhangi bir bilgi hala hücreleri veya canlı doku test edilmelidir. laboratuar ortamında inme ideal bir model insan popülasyonunda görülen benzer patolojik özellikleri göstermelidir. Insan nüfusunun inme ortak fizyolojik özellikleri varken, deneyimli yaralanma türüne bağlı olarak pek çok farklılıklar vardır. Insan nüfusunun İnme çeşitli enfarktüs hacimleri yanı sıra her patoloji ile ilgili mekanizmalar farklılıklara neden olarak küçük veya büyük damar oklüzyonlarını, hemorajik lezyonlar ve arter veya kardiyo-embolisine arter-oluşur. Hayvan inme modelleri kullanan avantajı, insan inme özelliklerini taklit eden tekrarlanabilir infarktlar üretilmesidir. orta serebral arter tıkanıklığı (emboli veya endovasküler filament yöntemleri) hangi modeller uzak MCAO ve fototromboz modeli: En yaygın hayvan inme modelleri kullanarak arter tıkanıklığı sayılabilir. Avantajları BirHer modelin d dezavantajları (4 ve 5) başka bir yerde gözden geçirilmiştir. Küresel iskemik modelleri (MCAO), gerçekleştirmek için nispeten kolay odak inme modelleri daha insan inme daha az alakalı iken. Buna ek olarak, bu yöntemler, yeniden üretilebilir, beyin enfarktüsü lezyonlara neden olan oldukça değişkendir. deneyci MCAO modeller üzerinde açık bir avantaj sağlayarak, onların deneylerini kontrol olarak fototromboz modeli uzun gibi son derece tekrarlanabilir. Bununla birlikte, mikrovasküler hasara modeli asgari penumbra, hücre 6,7 kurtarılabilen olduğu düşünülmektedir alan görüntülemek için tarif edilmiştir. Buna ek olarak, vazojenik ödem ve sitotoksik ödem oluşumu, aynı zamanda görüntüleme alanında aşağıdaki ışınlama indüklenebilir. Bu kısıtlamalara rağmen tekniği inme 8, 9, 10, 11 aşağıdaki birçok fizyolojik süreçlere yeni bir bakış açısı sağlamıştır.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reaktifler</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Sigma</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran Anestezik</td><td>MWI Veteriner Malzemeleri</td><td>088-076</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond</td><td>1469SB</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>aCSF&nbsp;</td><td>126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM glikoz ve 26 mM NaHCO3 (pH 7.4).</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Ekipman</td></tr><tr><td>Diseksiyon Makası</td><td>Biyoendüstriyel Ürünler</td><td>500-410</td><td></td></tr><tr><td>Ameliyat makası 14 cm</td><td>Biyoendüstriyel Ürünler</td><td>12-055</td><td></td></tr><tr><td>Forseps Dumont High Tech #5 stil, düz</td><td>Biyoendüstriyel Ürünler</td><td>TWZ-301.22</td><td></td></tr><tr><td>LabJack 132X80</td><td>Optosigma Co</td><td>123-6670</td><td></td></tr><tr><td>Labjack 8X 8</td><td>Optosigma Co</td> için Platform <td>145-1110</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaksik kurulumdan kulak çubuğu tutucusu</td><td>Stoelting/Cyborg</td><td>51654</td><td></td></tr><tr><td>Dispomed Labvent Kemirgen anestezi makinesi</td><td>DRE, Inc.</td><td>15001</td><td></td></tr><tr><td>Tech IV İzofluran buharlaştırıcı</td><td>DRE, Inc.</td><td>34001</td><td></td></tr><tr><td>F Hava Kabı</td><td>DRE, Inc</td><td>80120</td><td></td></tr><tr><td>Bain devresi solunum tüpü</td><td>DRE, Inc</td><td>86111B</td><td></td></tr><tr><td>Balin tüpü için kemirgen adaptörü</td><td>DRE, Inc</td><td>891000</td><td></td></tr><tr><td>O2 oksijen tankları için regülatör</td><td>DRE, Inc</td><td>CE001E</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen indüksiyon odası</td><td>DRE, Inc</td><td>15004C</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon İpek 6-0; P-3 iğneli 18 inç</td><td>Sütür Express</td><td>1639G</td><td></td></tr><tr><td>Objektif invertör Optik Adaptör</td><td>LSM teknolojileri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foredom matkap Çift voltaj 110/120</td><td>Foredom</td><td>134.53</td><td></td></tr><tr><td>Meisinger 3,9 mm matkap ucu</td><td>Meisinger</td><td></td><td>(Ref#310 104 001 001 009)</td></tr></tbody></table>

konfokal optik görüntüleme ile rose bengal fototromboz<em&gt; in vivo</em&gt;: tek gemi İnme bir model

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

Görüntüleme boyaları ve optik teknolojilerdeki son gelişmeler nedeniyle in vivo görüntüleme tekniklerinin kullanımı artmış ve bozulmamış bir hayvanda hücresel olayları görüntüleme yeteneğine olanak sağlamıştır. Ek olarak, in vivo inme gibi fizyolojik hastalık durumlarını indükleme yeteneği, faydasını arttırır. Burada açıklanan teknik, bir inme sonrasında CNS içindeki hücresel yanıtların fizyolojik değerlendirmesine izin verir ve incelenen diğer patolojik durumlar için uyarlanabilir. Sunulan teknik, tek bir kan damarında fokal iskemik bir olayı indüklemek için ışığa duyarlı boya Rose Bengal'in in vivo lazer uyarımını kullanır. 
Video protokolü, bir Rose Bengal fototrombotik olayının indüksiyonu için bir farede somatosensoriyel korteks üzerinde ince kafalı bir kraniyal pencerenin hazırlanmasını ve altta yatan dura maddesi ve beyin hasarını minimumda tuttuğunu göstermektedir. Cerrahi hazırlık başlangıçta özel yapım bir cerrahi/görüntüleme platformu ile diseksiyon mikroskobu altında gerçekleştirilir ve daha sonra ters objektif adaptör ile donatılmış bir konfokal mikroskoba aktarılır. Bu protokol kullanılarak elde edilen temsili görüntülerin yanı sıra hızlandırılmış strok indüksiyon dizileri sunulmaktadır. Bu teknik, aynı alanın sonraki günlerde tekrar tekrar görüntülenebilmesi ve inme sonrası patolojik süreçlerin uzunlamasına in vivo çalışmalarını kolaylaştırması açısından güçlüdür.

Bu yöntemin amacı, bir 561 nm lazer ışığı ile inceltilerek kafatası kuyruk damarından ve daha sonra aydınlatma aracılığıyla RB bir bolus enjeksiyonu takiben hayvan modellerinde, bir iskemik inme (fare ve sıçan) neden oldu. Şekil 4 &#39;de resim olarak 0, 1, 1.5 ve 2 dk&#39;da alanının ışınlanması sonra tek bir tekne içinde pıhtı oluşumunun ilerlemesini göstermektedir. Pıhtı oluşumu öncesinde, tüm geminin Rose Bengal serbest akan nedeniyle beyazdır. Kabın ışınlama indüksiyonu şu var kabın kısımlar halind...

Burada, in vivo olarak bir farenin somatosensoriyel korteksinde bir Rose Bengal fototrombotik pıhtısının indüksiyonu için yarı invaziv bir optik mikroskopi yaklaşımını açıklıyoruz. Görüntüleme prosedürünün teknik yönleri, fototrombotik bir olayın indüksiyonundan uygulama ve veri toplamaya kadar açıklanmaktadır.

Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz<em&gt; In Vivo</em&gt;: Tek Gemi İnme Bir Model

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

Bu prosedürün genel amacı, bir farenin somatosensör korteksinde rose bengalle foto-trombotik bir pıhtı oluşturmak için yarı invaziv bir optik mikroskopi yaklaşımı kullanmaktır. Bu işlem, farenin anestezi altına alınması ve görüntüleme için ince bir kafatası kranyal penceresinin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, rose bengal enjekte edilir ve bir foto-tromboz oluşturmak için lazer kullanılır.Nihayetinde, rose Bengal fototrombosu ile oluşturulan pıhtının etkileri, anesteziden çıkıştan hemen sonra analiz edilebilir. Bu tekniğin temel avantajı, rose Bengal fototrombosu indüklemesinin hemen ardından in vivo hücresel yanıtların görülmesine olanak tanımasıdır. Bu tekniği ilk kez kullanan kişiler, zor ve zaman alıcı olduğu için ince kafatası kraniyal penceresini oluşturmakta güçlük çekebilirler.Başlamak için fareyi, oksijen ile karıştırılmış %2 ila 3 isofloran ile anestezi edin. Fare indüklenirken solunumun azaldığını gözlemleyin. Ardından farenin patisini sıkın.Anestezi durumunu doğrulamak için, işlem boyunca vücut sıcaklığını 37 Celsius'nin yarım derece yakınında tutmak amacıyla bir ısıtıcı ped ve sıcaklık probu kullanın. Ardından, hayvanın yaşamsal bulgularını izlemek için ofta

rose-bengal-photothrombosis-confocal-optical-imaging-vivo-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Talley Watts, L.,  et al. İn Vivo Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototrombozu: Tek Damar İnme Modeli. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, bir fare beyninde kan pıhtısı oluşumunu indüklemek için bir tekniği göstermektedir. Kraniyal bir pencereye ve inceltilmiş bir kafatasına sahip anestezi uygulanmış bir fare, yüksek yoğunluklu ışık kullanılarak ışığa duyarlı bir boyanın aktivasyonu yoluyla fototromboza uğrar. Bu süreç, damar duvarlarına zarar veren ve pıhtı oluşumunu tetikleyen ve...

 Işığa duyarlı bir boya kullanarak fare beyninde kan pıhtısı oluşumuna neden olmak

Fototromboz son derece tekrarlanabilir bir şekilde ilgi alanları küçük ve iyi ayrılmış enfarktüsü uyaran için hızlı, minimal invaziv bir tekniktir. Bu transgenik farelerde beyin plastisitesi oluşturan hücresel ve moleküler okuyan cevapları için özellikle uygundur.

Photothrombotic İskemi: Fare İnme Araştırmalar bir Minimal İnvaziv ve tekrarlanabilir fotokimyasal Kortikal Lezyon Model

Bu protokol serebral emboli görselleştirmek için kombine yakın kızılötesi floresan (NIRF) görüntüleme ve mikro-bilgisayarlı tomografi (mikroBT) uygulanmasını açıklar. Bu teknik trombüs yükü ve evrim ölçümü sağlar. MikroBT'lerin tekniği altın nanopartiküller kullanarak canlı hayvan içinde trombüs görüntüler ise NIRF görüntüleme tekniği floresan, eksize beyinde trombüs etiketli görselleştirir.

Doğrudan Serebral emboli görselleştirme için Kombine Yakın kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro bilgisayarlı Tomografi

Geleneksel fototrombotik inme (PTS) modelleri esas olarak doku plazminojen aktivatörü (tPA) litik tedavisine karşı yüksek dirençli yoğun trombosit agregatlarını indükler. Burada, fotoaktivasyon için trombin ve ışığa duyarlı boyanın birlikte enjekte edilmesiyle modifiye edilmiş bir murin PTS modeli tanıtıldı. Trombin ile zenginleştirilmiş PTS modeli, karışık trombosit:fibrin pıhtıları üretir ve tPA-trombolizine karşı oldukça hassastır.

Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı fototrombotik inme modeli

Burada açıklanan fototrombotik inme modeli, bir inmenin, ışığa duyarlı bir boyanın kullanılmasından sonra lazer aydınlatma kullanılarak kalıcı mikrovasküler tıkanıklık indüklenerek sağlam kafatasından üretildiği yerdir.

Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar

Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Bu çalışma, iskemik inmenin noninvaziv görüntülenmesi için multimodal ultrason tabanlı bir görüntüleme platformunun kullanımını göstermektedir. Bu sistem, fotoakustik görüntüleme yoluyla kan oksijenasyonunun ölçülmesine ve akustik anjiyografi ile beyindeki bozulmuş perfüzyonun ölçülmesine izin verir.

İskemik İnmenin Nonİnvaziv Tüm Beyin Görüntülemesi için Entegre Fotoakustik, Ultrason ve Anjiyografik Tomografi (PAUSAT)

Bu protokol, floresan polistiren mikrosferler kullanılarak in vivo iki foton mikroskopi görüntüleme için optimize edilmiş kronik kraniyal pencere ve mikrovasküler embolizm fare fare modeli için adım adım yaklaşımın ayrıntılı bir açıklamasını içerir.

Floresan Polistiren Mikrosferleri Kullanarak In Vivo İki Foton Mikroskopi İçin Mikrovasküler Embolizm Fare Modeli

Tamamen optik bir yaklaşım kullanılarak, uyanık, davranan bir farenin ortaya çıkan inme çekirdeğinde ortaya çıkan bir floresan biyosensör kullanılarak nöronalCa2+ aktivitesi aynı anda kaydedilirken iskemik inme indüklenir.

Davranan farelerde iskemik inmeyi indüklemek ve izlemek için eşzamanlı fototromboz ve lif fotometrisi

Bu protokol, viral teslimat, optrod implantasyonu, fototrombotik indüksiyon, astrosit ve nöron aktivitesinin eşzamanlı kaydı ve astrositlerin optogenetik uyarılmasını içeren entegre bir yöntem sağlar. Bu entegre yöntem, iskemik incinin akut ve kronik evreleri arasında astrosit-nöron ilişkisinin eşzamanlı incelenmesini sağlamayı amaçlamaktadır.

Fototrombotik İnme Modelleme ve Davranış Eden Farelerde Nöronal ve Astrositik Aktivitenin In Vivo Optrode Kaydı İçin Entegre Bir Yöntem

Öğrenin, fare somatosensory korteksinde Rose Bengal fototromboz ile inme modeli oluşturmayı. Konfokal optik görüntüleme sayesinde hücresel yanıtları gerçek zamanlı gözlemleyin.

Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz

Daha fazla video keşfet