Aloimmün kaynaklı Vasküler Reddi ve Nakli arterioskleroz Fare Modeli

Farelerde aort interpozisyon greftlemesi için bir protokol açıklıyoruz. Protokolün amacı, arterlerdeki alloimmün reaksiyonlar ve organ nakli başarısızlığına katkıda bulunan ortaya çıkan arteriyel değişikliklerle ilgili patolojik süreçleri ve terapötik stratejileri incelemek için bir model sağlamaktır.

Bu prosedürün genel amacı, vasküler rejeksiyon ve transplant arteriyosklerozu incelemek için farelerde uçtan uca aort interpozisyon greftlemesi yapmaktır. Bu, önce donör fareden abdominal aortun bir segmentinin toplanmasıyla gerçekleştirilir. Segment daha sonra donörden genetik olarak farklı olan allojenik bir alıcının intrarenal aortuna ortotopik olarak greftlenir.

Son adımda, nakledilen damar segmenti eksize edilir ve nakil arteriyoskleroz gelişimi için analiz edilir. Sonuçta, transplant arterioskleroz ve immün aracılı allogreftin kapsamı. Vasküler rejeksiyon, intimal kalınlaşma ve luminal daralmanın ölçümü ile ve ayrıca immün hücrelerin birikimi için dokunun immünohistokimyasal analizi ile değerlendirilebilir.

Genel olarak, bu prosedüre yeni başlayan bireylerin, yüksek düzeyde el becerisi gerektirdiğinden ve ustayı pratik yapmasından dolayı mikrocerrahi tekniğe alışmak için zamana ihtiyaçları vardır. Bununla birlikte, yöntem, hastalarda uygulama titizliği olan çoğu araştırmacı için ulaşılabilir olmalıdır. Bu nedenle, Bayan Winnie ile prosedürü göstermek, yetenekli bir beyin cerrahı ve laboratuvarımda yetenekli bir doktora öğrencisi olan Adam Roso'yu bitiriyor Donör fareyi, ameliyat mikroskobu altında sekiz 30 x büyütmede steril bir örtüye sarılmış temiz, ince bir pleksiglas levha üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirerek başlayın.

Ayak parmağınızı kıstırarak yeterli cerrahi anesteziyi onayladıktan sonra, kasıktan ZipID işlemine tek bir orta hat kesisi yapmak için steril makas kullanın. Ardından, karın boşluğunu açığa çıkaran karın duvarlarını açmak için küçük bir ekartör kullanın. Ardından, bağırsakları hayvanın soluna doğru nazikçe geri çekmek için steril pamuk uçlu aplikatörler kullanın.

Dokuyu tuzlu su ile nemlendirilmiş gazlı bezle örtün ve infrarenal aortu ve inferior vena kava veya IVC'yi bulmak için üreme organlarını aşağıya doğru hareket ettirin. Şimdi aortu bifurkasyonun yakınındaki sol renal arterdeki IVC'den ayırmak için beş numaralı tıbbi forseps kullanın. Daha sonra aort yakınındaki küçük dalları bağlamak için 10 adet sıfır poliamid monofilament sütür kullanın.

Donör aort ve IVC ayrıldığında, damarı tuzlu su ile doyurun, açıkta kalan boşluğu nemli gazlı bezle örtün ve vericiyi steril bir alanda bir kenara koyun. Şimdi, alıcı fareyi mikroskobun altına yerleştirin ve alıcı aortu IVC'den ayırın sadece gösterilmiştir. Ardından, yaklaşık beş milimetre aralıkla, ilgilenilen segmente proksimal ve distal olmak üzere iki adet dört milimetre mikrovasküler kelepçe yerleştirin.

Daha sonra, vanöz tüp motorlu mikro makas kullanarak tek bir yatay aort otomisi yapın ve donör aort greftini yerleştirmek için abdominal aortun 0,5 milimetreden fazla rezeke etmeyin. Donörü mikroskoba geri koyun ve az önce gösterildiği gibi üç ila dört milimetrelik bir greft segmentini kesin. Ardından, eksize edilmiş aortu heparinize salin ile yıkamak için 25 gauge beş sekiz iğne kullanın.

İğnenin ucunun damar ile temas etmemesine dikkat edin ve kabı buz üzerinde heparin, buz, tuzlu su dolu bir kaba koyun. Eksizyondan sonraki 30 dakika içinde, donör aort greftini, ilgili greft anatomik oryantasyonunu alıcınınkiyle eşleştirerek alıcıdaki ortotopik pozisyona yerleştirin. Daha sonra kabın tunika dışını nazikçe kavrayın ve hafifçe önlemek için beş numaralı forsepsleri kullanın.

Şimdi, sürekli dikişlerin yerleştirilmesi için donör aort greftini alıcının rezeke edilen damarına sabitlemek için 10 sıfır poliamid monofilament sütürüne bağlı bir iğneyi damar duvarının tam kalınlığı boyunca sürmek için forsepsleri kullanın. Konum. Greftin hem üst hem de alt uçlarında dikişleri saat dokuzda tutun. Daha sonra greftin üst ucundan başlayarak saat üç anastomozundan itibaren.

Rezeke edilen iki koşu sütürü ile sona erer ve sütürü kalan sütüre sabitler. Daha sonra grefti ters çevirin ve damarın dorsal kısmına doğru akan sütişe devam edin. Kökenle tanışmak.

Sütür kal. Damara fazla baskı uygulamadan dikişi sabitleyin ve alt anastomoz için dikiş işlemini tekrarlayın. Anastomoz tamamlandıktan sonra.

Damardan retrograd kan akışına izin vermek için distal mikrovasküler kelepçeyi serbest bırakın. Kanama gözlenmezse, proksimal kelepçeyi serbest bırakın. Herhangi bir kan tıkanıklığı gözlenmezse, kalan dikişlerin bir ucunu nazikçe kavramak için bir çift forseps kullanın ve damarın arka duvarını incelemek için damarı hafifçe çekin.

Hem verici hem de alıcı damarlarda kuvvetli bir nabız paterni gözlenirse büzülme gözlenmemelidir, bağırsakları karın boşluğuna geri döndürmek için pamuk uçlu aplikatörler kullanın. Son olarak, karın duvarını beş sıfır polipropilen sütür ve sürekli dikişle kapatmak için bir iğne tutucu ve grof forseps kullanın. Subkütiküler bir kapatma kullanarak, cilt tabakasını aynı dikişlerle kapatın.

Ameliyatın başarısını değerlendirmek için arka bacakların motor fonksiyonu gözlemlenebilir. İmmün aracılı allogreft vasküler hasarının miktarı incelenir ve 30. günde greftli aort segmentlerinde intimal kalınlaşma ve luminal daralma ölçülür. Transplantasyon sonrası.

Nitekim gözlendiği gibi, allogreft arter segmentlerinde belirgin intimal kalınlaşma ve luminal oklüzyon gelişirken, ISO greft kontrol arter segmentlerinde herhangi bir değişiklik gözlenmemiştir. Ayrıca, lökositlerin allogreft artere alımı, CD dört ve CD sekiz pozitif T hücrelerinin ve makrofajların birikiminin immünohistokimya ile incelenmesi ile değerlendirilebilir. Beklendiği gibi, her üç tip bağışıklık hücresi de gelişimden sonra donör arter dokularının intiması içinde tespit edildi.

Bu teknik, ulaşım alanındaki araştırmacıların alloimmün aracılı vasküler redüksiyon ve transplant arteriyel sklerozu keşfetmelerinin yolunu açtı.