Name: Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Öğrenin, riboflavin ve UV ışığı kullanarak trombosit ürünlerindeki bakteriyel kontaminasyonu nasıl azaltırsınız. Bu yöntem, kan güvenliğini artırır ve patojenleri etkisiz hale getirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların teşekkür hakkı yok.

1. Bakteriler Süspansiyon hazırlanması: <ol><li> Bir çizgili kültür plakasına kaynaktan, aseptik olarak steril bir aşılama döngüsü yoluyla uygun bir büyüme ortamı (Tablo 1), 100 ml içeren 250 ml&#39;lik bir steril şişeye tek bir koloni inoküle. </li><li> Düzenli büyüme kontrol 1-2 gün için uygun koşullar altında (Tablo 1) yörüngesel çalkalamalı bir enkübatörde şişeyi yerleştirin. 140 RPM çalkalama hızını ayarlayın. </li><li> Aseptik, 23 ° C&#39;de 20 dakika boyunca 3000 x g&#39;de iki steril 50 ml konik tüp ve santrifüj tüpleri içine bakteri süspansiyonu aktarın. </li><li> Süpernatant aspire ve steril pepton, 15 ml su ile birlikte her bir bakteri pelletini. Vortex gerekli. Bir boru / kap içine süspanse bakteri kültürü birleştirin. </li><li> Stok kültür titresi belirlemek için bölüm 4 başına üç nüsha olarak stok kültürü titre. </li><li> Buzdolabında 2 haftaya kadar 4 at için77; 2 ° C kadar gerekli. Yeniden titreye kullanım sırasında kültür, adım 4.8. </li></ol> 2. Trombosit Ürün Hazırlığı: <ol><li> Akredite bir kan bankasından bir standart aferez trombosit insan ürünü toplayın. Trombosit ürün aşağıdaki toplama şartlara uygun olmalıdır: 90-360 ml hacmi ve 0.8 -3.8 x 10 6 plateletler / ul konsantrasyon. <ol><li> Trombosit ürünü patojen azaltılması için işlemden önce 2 saat en az dinlenmiş emin olun. Bu 2 saat boyunca çalkalama olmaksızın, bir trombosit inkübatörde 22 ± 2 ° C &#39;de ürünler saklayın. İki saat sonra trombosit ürün trombosit kuluçka makinesi içinde 22 ± 2 ° C&#39;de çalkalandı olduğundan emin olun. Kadar 22 saat sonrası toplama ürünü kullanın. </li></ol></li><li> 3 ml&#39;lik bir enjektör 2 ml lik bir numuneyi çıkarın kullanarak trombosit ürününün pH değeri 22C ölçmek için uygulanır. Ürün sağlamak için bir kan gazı analizörü kullanın pH&gt; 6.6 vardır. Bir hematolojik analizör kullanarak trombosit ürünün trombosit konsantrasyonunu ölçmek için aynı örneği kullanın. Ürün 0,80-3,8 x 10 6 plateletler / ul toplama konsantrasyon gereksinimini karşılar olun. </li><li> Görme trombosit ürünün girdap değerlendirir. Ürün sahip bir &quot;0&quot; ürün atılır girdap. </li><li> Direkt beyaz ışık kaynağı altında trombosit çantasını tutun ve kısaca trombosit çanta sıkın. Görme trombosit numunenin dönen desen gözlemlemek. Aşağıdaki ölçeğini kullanarak ürünü Puan. NOT: 2 - Pozitif Girdap: Güçlü kontrast ile tüm torbaya boyunca görünür homojen olmayan Swirling. 1 - Intermediate Girdap: Bazı homojensizlik görünür, ama sadece birkaç yerde ve kötü kontrast. 0 - Negatif Girdap: öncesi ve trombosit çanta sıkma sonra kalan Bulanık homojenlik </li></ol> 3. Riboflavin ve UV Süreci: <ol><li> Transteril bir tüp yerleştirme aygıtı kullanılarak bir riboflavin ve UV ışığı aydınlatma ve saklama torbasına trombosit ürünü Sfer. Transferden sonra bir boru macunu kullanarak boş trombosit ünitesi toplama torbası kaldırma ve biyolojik tehlikeli atık olarak boş çanta atın. </li><li> Hafif koruyucu dış şal gelen stok solüsyonu riboflavin, 500 mcM 35 ml&#39;lik kese çıkarın. Steril dok işleme ve saklama torbasına giriş hattı üzerine riboflavin kiti. Içindekiler trombosit ünitesine boşalmasına izin verin. </li><li> Riboflavin kesesinden set riboflavin çantası / arıtma ve depolama çanta asmak ve yavaşça işleme ve depolama çanta dışarı ve riboflavin torbaya kalan havayı ifade eder. Trombosit ürünün küçük bir miktar sağlamak, aynı zamanda trombosit ürüne herhangi bir kalıntı riboflavin durulama riboflavin torba içine eksprese edilir. Riboflavin ve trombosit çözüm işleme ve saklama torbasına geri drenaj izin ver ve sonra giriş hattını kelepçe. Boş riboflavin çanta bize kaldırBir tüp mühürleyen ing ve biyolojik tehlikeli atık olarak boş çanta atın. </li><li> Steril dok aydınlatma ve saklama torbasına giriş hattı üzerine dişi şırınga konnektörü ile 6 &quot;boru hattı. Kadın şırınga konnektörü üzerine 10 ml şırınga varil (pistonu çıkartın) takın. </li><li> Aseptik bir pipet aracılığıyla şırınga içine stok bakterilerin 5 ml ekleyin. Giriş hattı kelepçeyi açın ve bakteriler trombosit ürüne içine boşaltın. Bazı trombosit ürün, 10 ml şırınga ağzına geri akmasına izin verilerek bir şırınga gövdesi içinde durulayın. 10 ml şırınga gövdesi çıkarın. </li><li> Aseptik 30 ml şırınga takmak ve trombosit ürünün içine karıştırılır stok bakteri sağlamak için giriş bağlantı noktası iki kez en az yıkayın. Ürün iyice karıştıktan sonra, temiz bir 5-10 ml&#39;lik bir şırınga kullanın ve 2 ml ön-muamele numuneyi çıkar. Aşılama aşamasından tanıttı havayı sağlamak, yeni bir şırınga kullanılması veya adım örnekleme kaldırılır. <ol><li> Bölüm 4 başına tedavi öncesi örneği titre. </li></ol></li><li> Arıtma ve depolama çantasından giriş satırını kaldırın ve ürünü tartın. </li><li> Aydınlatıcı içine Ürünü yerleştirin ve standart bir trombosit tedaviye başlamak için ekrandaki komutları izleyin. <ol><li> Operatör ID girin. </li><li> Güvenli ve Aydınlatıcı plakaya çanta monte edin. </li><li> Barkod okuyucu veya manuel giriş tuş takımını kullanarak Aydınlatıcı içine Numune Kimliği girin. </li><li> Tarama ürün tipi. </li><li> Kuvars kelepçesini kapatın. </li><li> Aydınlatma cihazı otomatik olarak enerji 6.24 J / ml teslim edecek. Tipik tedavi süresi 5-10 dakika sürer. </li></ol></li><li> Tedavi ve saklama torbasına örnek ampul hattı üzerine dişi şırınga konnektörü ile 6 &quot;boru hattı tedavisi steril rıhtım ardından. Ürün, teknikte iyi karıştırılır sağlanması ve daha sonra bir 5 ml şırınga takın ve 2 ml&#39;lik bir tedavi sonrası numuneyi çıkar. <ol><li> Post-tedavi sam titrebölüm 4 başına ple. </li></ol></li></ol> 4. Bakteriyel Titre <ol><li> Tedavi öncesi ve sonrası numune titresi tahmin ve her bir numunenin bir bitiş noktası seri seyreltme gerçekleştirmek için gerekli 5 mi seyreltme borulannın uygun bir şekilde hazırlayabilecektir. Aseptik pepton su 1.8 ml gerekli tüpleri doldurun. </li><li> Titre, bir 10-misli seri seyreltme şeması kullanılarak her numune. Aseptik ilk seyreltme tüpü (10 -1) için sulandırılmamış numuneden 0.2 ml aktarın. Vortex bu seyreltme tüpü ve transfer sonraki seyreltme tüp 0.2 ml. Dilüsyonları gerekli numara ile seri seyreltme devam edin. <ol><li> Aseptik aktarımı, her seyreltme oranından 100 ul uygun bir agar plaka (Tablo 1) kaplanacak. </li></ol></li><li> Steril bir hücre serpme kullanarak, eşit, her agar plaka üzerine numuneyi dağıtmak. </li><li> (Ters çevirin ve uygun şartlarda plakalar inkübe <strong&gt; düzenli büyüme kontrol 1-2 gün Tablo 1). </li><li> 30-300 koloniler ile plakaları sayın. Daha fazla, 300 koloni içeren plaklar (TNTC) saymak için çok sayıda kabul edilir. En az 30 koloni içeren levhalar niceleme limitinin (LOQ) altında olduğu kabul edilir. </li><li> Her test numunesinin titresi hesaplayın ve CFU / ml olarak sonuçları kaydedin. <ol><li> CFU / ml hesaplamak için aşağıdaki denklemi kullanın: <img alt="Denklem 1" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li> Düşük seyreltme plaka üzerinde koloniler varsa, Saptama (LOD) Limiti&#39;ni hesaplamak için aşağıdaki denklem kullanın: <img alt="Denklem 2" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> ve <img alt="Denklem 3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> Nerede: N p parçacıklar (CFU) en az sayıda =güvenle tespit edilebilir Ü. Bir mikroorganizma tespit edilmemiş olacağını p = olasılık; bir mikroorganizmanın tespit etmek için bir% 95 güven, p, 05 =. Ml V = toplam ürün hacmi plaka v = hacim kaplama (ml) x seyreltme seviyesi </li></ol></li><li> Negatif Kontrol, iki agar plakaları her birine seri seyreltmeleri kullanılır pepton su 0.5 ml plaka. Test edilecek aynı levha tipinde kullanın. Ters çevirin ve 1-2 gün aralıklarla büyüme kontrol etmek için uygun koşullarda plaka kuluçkaya yatmaktadır. <ol><li> Büyüme ya agar plaka üzerinde görülürse, kullanılan pepton şişe su atılmalıdır; Çalışmanın sonuçları da geçersiz olur. </li></ol></li><li> Pozitif Kontrol, yeniden titresi kullanılan bakterilerin stok kültür için. Ters çevirin ve 1-2 gün aralıklarla büyüme kontrol etmek için uygun koşullar plakalar inkübe. Titre kaydının CFU / ml log 1.0 ± olmalıdırÇalışma için ed stok titre (bölüm 1.5 bakınız) geçerli kabul edilecek. </li></ol>

<ol><li>Brecher, M. E., Hay, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contamination+of+blood+components%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Bacterial contamination of blood components.</a> Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).</li>
<li>Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+bacteria+in+inoculated+platelets%3A+implications+for+bacteria+detection+and+the+extension+of+platelet+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage.</a> Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).</li>
<li>Cardo, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+inactivation+of+Leishmania+donovani+infantum+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).</li>
<li>Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+inactivation+of+Trypanosoma+cruzi+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Apher.+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).</li>
<li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+viral+risks+of+blood+and+blood+products%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Med%22%5BJournal%5D)">Current viral risks of blood and blood products.</a> Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).</li>
<li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contamination+and+transfusion+safety%3A+experience+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Clin.+Biol%22%5BJournal%5D)">Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States.</a> Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).</li>
<li>Dumont, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+single-donor+apheresis+platelets+for+bacterial+contamination%3A+the+PASSPORT+study+results%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results.</a> Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).</li>
<li>Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+laboratory+comparison+of+pathogen+reduction+technology+treatment+and+culture+of+platelet+products+for+addressing+bacterial+contamination+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns.</a> Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).</li>
<li>Greco-Stewart, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serratia+marcescens+strains+implicated+in+adverse+transfusion+reactions+form+biofilms+in+platelet+concentrates+and+demonstrate+reduced+detection+by+automated+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture.</a> Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).</li>
<li>Keil, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+Plasmodium+spp.+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).</li>
<li>Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+associated+with+transfusion+of+cellular+blood+components+in+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada.</a> Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).</li>
<li>Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six+years%27+experience+of+using+the+BacT%2FALERT+system+to+screen+all+platelet+concentrates%2C+and+additional+testing+of+outdated+platelet+concentrates+to+estimate+the+frequency+of+false-negative+results%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results.</a> Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).</li>
<li>Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+Biological+Mechanisms+of+Pathogen+Reduction+Technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem.+Photobiol%22%5BJournal%5D)">Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies.</a> Photochem. Photobiol. , (2014).</li>
<li>Murphy, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+platelet+concentrates+for+bacterial+contamination%3A+low+numbers+of+bacteria+and+slow+growth+in+contaminated+units+mandate+an+alternative+approach+to+product+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety.</a> Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).</li>
<li>Brien, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+incidence+and+residual+risk+of+HIV%2C+HBV+and+HCV+at+Canadian+Blood+Services%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services.</a> Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).</li>
<li>Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+platelets+for+bacterial+contamination+at+the+Welsh+Blood+Service%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med%22%5BJournal%5D)">Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service.</a> Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).</li>
<li>Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+universal+point-of-issue+assay+for+bacterial+detection+in+buffy+coat+platelet+components%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components.</a> Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).</li>
<li>Reddy, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+testing+of+a+novel+riboflavin-based+technology+for+pathogen+reduction+and+white+blood+cell+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Rev%22%5BJournal%5D)">Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).</li>
<li>Ruane, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+inactivation+of+selected+viruses+and+bacteria+in+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light.</a> Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).</li>
<li>Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system+against+Babesia+microti+in+apheresis+platelets+and+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma.</a> Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).</li>
<li>Vanlandingham, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+inactivation+of+chikungunya+virus+in+plasma+and+platelets+using+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system.</a> Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).</li>
<li>Walther-Wenke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+bacterial+contamination+of+blood+components+in+Germany%3A+effect+of+contamination+reduction+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures.</a> Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).</li>
</ol>

Bu yazının tüm yazarlar halen Terumo MKC, Mirasol PRT sisteminin geliştirici ve üreticisi tarafından istihdam edilmektedir. Bu video-makale için Yayın ücretleri Terumo MKC tarafından ödenen oylandı.

Bakteriyel tarama kan bankacılığı kurumlarında yaygın bir uygulama haline geldi ve birçok yerde için bakteri bulaşmış trombositlerin transfüzyonu önlemek için birincil yöntem olarak hizmet vermektedir. Bakteriyel tarama genellikle S. gibi hızlı büyüyen Gram negatif bakterilerin çoğunluğu yasaklamakta rağmen marcescens, E. E. coli, E. cloacae, bu S. gibi yavaş büyüyen Gram pozitif bakteriler tespit için mücadele aureus, Streptococcus spp., ve S. epidermidis 8. Ne yazık ki, bu üç Gram pozitif bakteriler, hasta mortalite 1 yol açmıştır Kirlenmiş trombosit birimleri ve bu üç organizmalar içeren trombosit ürünleri transfüzyonu% 50 yukarı sorumlu tutulmaktadır. En az bir organizma, tipik 4-8 ​​mi tarama numunesi içinde bulunan ve böylece bakteriyel tarama kadar yeterince yüksek olması için trombosit ürün bakteriyel titresi dayanır. Bir bakteri 4-8 ml&#39;lik numune hacminde çekilecek için bakteriyel titre yeterince yüksek değilse, cihaz yanlış negatif olarak işaretlenmesi ve transfüzyon için serbest bırakılır. Bakteriyel tarama için alternatif bir yaklaşım, tüm trombosit birimler yapılabilir ve bu işlevsel olmayan olarak kirlenmesine neden olan organizmaları hale getirebilir proaktif bir süreç istihdam olabilir. Bu çalışmada, bakterilerin yüksek titerleri bilerek riboflavin ve UV ışığı patojen indirgeme işleminin toplam redüksiyon kapasitesini test etmek için trombosit birimlere ilave edildi. Bakteriyel yükleri, bu çalışmada test edilen, ancak çok normal bağış esnasında kan ürünlerinde bulunan edilen miktarlardan, bu çalışma riboflavin ve UV ışığı işlemi önemli bir kontamine trombosit biriminde canlı bakteri titresi azaltmak mümkün olduğunu göstermeye yarar 5.4 log (bakteri kontamine 99,7-99,9996% azalma) (Şekil 2) 2.6. Bir sahih edinmek içinte log azalma değeri, bakteri titre adımları yaparken operatör hassas pipetleme becerileri ile birlikte iyi aseptik teknik olması çok önemlidir. Seri seyreltmeler performans Imprecise pipetleme hataların birikmesi, böylece doğru titre ölçümüne neden olabilir. Bu çalışmada toplanan veriler düşük seviyede, klinik olarak anlamlı bakteriyemi (&lt;20 CFU / birim) karşı sistemi meydan riboflavin ve UV ışınlarına, önceki çalışmaları destekler. Bir önceki çalışmada gerçek bir klinik kirlenme olayı taklit etmek için tasarlanmış ve sonuçlar riboflavin gösterdi ve UV ışığı 7 günlük trombosit saklama süresi boyunca bakteri gelişimini önlemede etkili oldu. Önceki çalışmada elde edilen verilere dayanarak Modelleme trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon mevcut risk tahminleri mevcut seviyeleri 8&#39;den kadar 98 kadar% azalma olabileceğini düşündürmektedir. Riboflavin ve UV ışığı süreci bakteriyel ekrana olumlu karşılaştırırSadece klinik olarak anlamlı bakteri yükü 8 ile meydan okuduğunda trombosit birimlerinde bakteriyel kirleticileri tespit etmek için bir% 66 etkinliğini göstermiştir ing. Bütün teknolojiler gibi, trombosit ürünleri PRT tedavisi bakteri bulaşmış trombosit birimleriyle kendi sınırlamaları vardır ilişkili komplikasyonları önlemek için. PRT sistemleri bakteri sporlarına karşı etkili değildir ve PRT sistemi kalan endotoksin hala alıcı septik çarpmasına neden olabilir Gram negatif bakterilerin yüksek titreleri inaktive olabilir böylece bile endotoksin inaktive yok. Bakteriler yüksek titreleri yaymak için önce PRT iyi depolama sırasında erken yapılır. Bu iki çalışmanın kombinasyonu ile gösterildiği gibi, sonuç olarak, riboflavin ve UV ışığı işlemi hem Gram negatif ve Gram pozitif organizmaların bakteri yüklerini azaltan, ve bakteriyel tarama için uygun bir alternatif sunar. Rutin davranıyorriboflavin ve UV ışığı ile g trombosit ürünleri de virüsler ve parazitler gibi diğer kan yoluyla bulaşan ajanların potansiyel iletimini azaltarak yararı vardır.

Trombositlerin transfüzyonu, plazma, eritrositler paketlenmiş ve tam kan ürünleri, modern tıpta önemli bir rol oynamaktadır ve çeşitli tıbbi durumların tedavisinde hayati sıvıyı yerine ve sonuçta hayatlarını kurtarmak için kullanılabilir. Trombositler, ya tam kandan izole ve toplanmış bir transfusable doz halinde veya trombosit aferez sürecinde toplanan Hücresel bir ürünüdür. Vücutta trombositlerin ana rolü yara yerlerinde kanamayı durdurmak ve hemostaz korumaya yardımcı olmaktır. Düşük trombosit hücre sayımı (trombositopeni) muzdarip hastalar spontan kanama olaylarına duyarlı ve trombosit hücresi normal aralıkta geri sayım getirmek için trombositler ile transfüzyon. Toplanan trombosit 5-7 günlük bir süre için saklanabilir ve sabit bir ajitasyon altında iken 22 ± 2 ° C&#39;de saklanır. Trombosit transfüzyonu özelliklerini hayat kurtarıcı orada nedeniyle co transfüzyon alıcıya hafif bir risk olmaya devam rağmenparazitler, bakteriler ve virüsler 11 ile bu ürünlerin ntamination. Viral nükleik asit testleri uygulanması (NAT), hepatit C virüsü (HCV), Hepatit B virüsü (HBV), insan immüno-ve eksikliği virüsü (HIV) gibi büyük kan yoluyla bulaşan maddeler, viral bulaşma riskini anlamlı derecede düşme 5. Bu ajanlar HIV 1000000 8 uyarınca bağış, HCV için 1.000.000 6.7 başına bağış ve HBV 15 1000000 1,7 başına bağış olmak için Kanada Kan Hizmetleri&#39;nden yeni bir yayın kalıntı riski tahmin ediyor. Trombosit ürünleri her yıl milyonlarca transfüzyon çünkü birçok alıcı potansiyel olarak yaşamı tehdit eden komplikasyonlara maruz 1000 7 ve: bakteri genellikle kamuoyuna daha az dikkat toplamak rağmen, trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon sıklığı yüksek 1 olarak tahmin edilmiştir Sepsis 6 gibi. Araştırma zamanda bu bakteri yükü göstermektedirkirlenme düşük bölgesinin &lt;100 koloni oluşturan birim (CFU) / ürün 2,16, ancak besin açısından zengin ortam ve oda sıcaklığında depolama öncesinde transfüzyon tehlikeli yüksek titreleri için çoğalırlar bakterilerin kirletici sağlar. Şu anda, trombosit alıcı ulaşmasını bakteri bulaşmış ürünlerin önlemek için yalnızca onaylanmış yöntemler kültür tabanlı sistemler ve bakım testi hızlı noktası kullanımı geçer. Kısaca, kültür tabanlı sistemler için trombosit ürünleri 4-8 ml örnek bir şişe içine trombosit üründen çıkarılır ve inoküle edilir, bunun üzerine bakterilerin ürün olarak çoğalma izin 12-24 saat için 22 ° C&#39;da bir çalkalayıcı üzerinde saklanır besleyici ortamı ihtiva etmektedir. Şişe bakteri üremesi için şişe izleyen bir alet yerleştirilir. Gösterge şişe bakteri üremesini tespit ederse bayraklı ve karşılık gelen trombosit ünitesi atılır. Bu süreç hızlı gro tespit etmede oldukça başarılı ikenkanat organizmalar, yavaş büyüyen türlerin birçoğu böylece transfüzyonu 7,12,14,16,22 için çıkacak yanlış negatif birimler için potansiyel yaratıyor, tespit için yeterince yüksek bir titreye büyümek yok. Bakteriyel yükü önemli ölçüde artmıştır zaman kültür tabanlı algılama sistemlerinin aksine, bakım testi hızlı noktası genellikle trombosit saklama dönemi daha sonra yapılır. Yüksek titreleri bakım testlerinin noktası kültürü temelli sistemlere göre daha az duyarlı olduğu için gerekli ve onlar bir titreye ≥1 x 10 3 CFU / ml 17 ulaştıktan sonra sadece güvenilir bakteri tespit edilmiştir. Ancak bu tür testler örnekleme 1 saat içinde sonuçlar sağlayabilir. Bu testlerin performansı değişkenlik alıcı 9 ölümcül septik reaksiyona neden yalancı negatif ürünün salınımına yol açmıştır. Trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon sorununu mücadele için alternatif bir yol patojen azaltma proc rutin kullanımı yoluylakirletici bakterilerin inaktive yerine onları tespit deneyebilirsiniz ess. UV ışığı ile bir arada, bir photosensitizer olarak riboflavin kullanarak, bakteri 3,4,8,10,19-21 riboflavin ve UV .bir kullanımı dahil olmak üzere patojenik kan yoluyla bulaşan kirletici maddelerin geniş bir enfeksiyon oluşturma azaltmak için gösterilmiştir Patojen azaltılması için hafif toksik olmayan mutajenik ve riboflavin ve UV ışığı ile muamele edilmiş bileşenler transfüzyon alıcı hem de kan ürünleri 18 taşıma olanlar için güvenli olduğu gösterilmiştir. Kısaca, riboflavin moleküller, bakteri, parazit, virüs ve herhangi bir çekirdekli hücre (örneğin, beyaz kan hücreleri) nükleik asitleri (DNA ve RNA) ile ilişkilendirebilir. UV ışığına maruz kalma ve böylece nükleik asitlerin replikasyonu ve / veya transkripsiyon önlenmesi ve 13 inaktive organizmanın bırakarak, nükleik asitler (öncelikle guanin bazlar) fonksiyonel gruplarının bir kimyasal değişimini neden riboflavin etkinleştirir. Plaka gibi çekirdeklerini kaybetmiş hücrelersağlar ve kırmızı kan hücreleri, bağlı nükleik asidin eksikliği riboflavin kimyası ile etkilenmez. Riboflavin ve UV ışığı teknolojisi ile önceki çalışma klinik olarak anlamlı bakteri yükü (&lt;20 CFU / ürün) 8 kontamine trombosit ürünü taklit etmek amaçlanan bir deney tasarımı kullanılarak bakterilerin seçilmiş bir grup değerlendirdi. Bu çalışmanın amacı, yüksek titre bakteriyel kirlenmeye karşı riboflavin ve UV ışığı sürecini değerlendirmektir (&gt; 1.0 x 10 5 CFU / ml) sistemin toplam bakteri azaltma kapasitesini ölçmek amacıyla plazmada tedavi trombosit ürünleri. Hemovigilance çalışmaları 1 ile toplanan verilere dayalı olarak, genel olarak ortaya çıkan gram negatif ve gram pozitif organizmaların panel bu çalışmada değerlendirme için seçilir ve aşağıdaki türler dahil: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, Streptococcus pyogenes, Serratia marcescens, Yersinia enterocolitica ,Brucella neotomae, B.cereus (vejetatif formu), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Klebsiella pneumoniae. B. dışındaki tüm canlılar, cereus, ATCC&#39;den elde edilmiştir ve öncelik kan bileşenlerinden izole edildiğini tespit edilmiş bakteri türleri elde üzerine yerleştirilmiştir. B. cereus bu çalışmada test kontamine trombosit ürününden içten izole klinik türdür.

<table><tbody><tr><td>Mirasol aydınlatıcı</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mirasol Tedavi/Saklama Çantası</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hematoloji Analiz</td> Cihazı <td>Beckman-Coulter</td><td>Ac & bull; T fark&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kan Gazı Analiz Cihazı</td><td>Siemens</td><td>RapidLab 1265&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Steril Yerleştirme Cihazı</td><td>Terumo BCT</td><td>TSCD</td><td></td></tr><tr><td>Trombosit İnkübatörü</td><td>Helmer</td><td>PC2200</td><td></td></tr><tr><td>Orbital İnkübatör Çalkalayıcı</td><td>Lab-Line</td><td>4628</td><td></td></tr><tr><td>Kuru İnkübatör</td><td>Fisher</td><td>Iso-temp</td><td></td></tr><tr><td>Sınıf II A/B3 Biyogüvenlik Kabini</td><td>Termo-forma</td><td>1286</td><td></td></tr><tr><td>Boru Mühürleyen</td><td>Sebra</td><td>Akıllı Mühürleyen II</td><td></td></tr><tr><td>Masa Üstü Santrifüj</td><td>IEC</td><td>Centra GP8R</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>30 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309650</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Seyreltme Tüpü</td><td>VWR</td><td>211-0058</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Konik Tüp</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet</td><td>Gilson</td><td>P-200</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet</td><td>Rainin</td><td>R-200</td><td></td></tr><tr><td>Tekrar Pipeti</td><td>Eppendorf</td><td>4780</td><td></td></tr><tr><td>1-200 & mikro; l Filtre Ucu</td><td>Costar</td><td>4810</td><td></td></tr><tr><td>25 ml Tek Kullanımlık Serrolojik Pipet</td><td>Costar</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Tek Kullanımlık Serrolojik Pipet</td><td>Costar</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>35 ml 500 & mikro; M Riboflavin</td><td>Terumo BCT</td><td>35 mL 500 & mikro; M&nbsp;</td><td></td></tr><tr>% 5 At Kanı <td>BBL</td><td>221547</td><td></td>Beyin Kalp <td>İnfüzyonu ile Brucella Agar</td></tr><tr><td></td><td>Teknova</td><td>B9993</td><td></td></tr><tr><td>Pepton Suyu</td><td>BD</td><td>257087</td><td></td></tr><tr><td>Triptikaz Soya Suyu</td><td>BD</td><td>299113</td><td></td></tr><tr><td>Triptikaz Soya</td><td>Agar Remel</td><td>R01917</td><td></td></tr><tr><td>Isı İnaktive At Serumu</td><td>Gibco</td><td>26050</td><td></td></tr></tbody></table>

riboflavin ile trombosit Ürünleri ve uv işık tedavisi: yüksek titre bakteriyel kontaminasyon karşı etkinliği

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

Bakteriler tarafından trombosit birimlerinin kirlenmesi uzun nedeniyle sonrası bağış depolama koşulları önemli bir transfüzyon riski olarak kabul edilmiştir. Ürünler, rutin bir ajite çalkalayıcı üzerinde 22 ° C&#39;de bakteri büyümesini teşvik edebilen bir durum saklanır. Trombosit ürün içine inanılan bakteri sayısı çok düşük olduğu halde, bu bakteriler, ciddi yan etkilere yol, çok yüksek bir titre önce transfüzyon çoğalabilir. Bu çalışmanın amacı, trombosit ürünlerinin ortak kirleticiler olarak tespit edilmiştir bakteri panele karşı riboflavin tabanlı patojen azaltma süreci değerlendirmektir. Bu panel aşağıdaki organizmaları dahil: S. epidermidis, S. aureus, S. mitis, S. pyogenes, S. marcescens, Y. enterocolitica, B. neotomae, B. cereus, E. coli, P. aeruginosa, ve K. pneumoniae. Her trombosit ünite yüksek bakteri yükü ile aşılandı ve numuneler b çıkarıldıtedavi öncesi ve sonrasında oth. Bir koloni deneyi oluşturan bir uç noktası sulandırması şeması kullanılarak ön-işleme ve tedavi sonrası bakteri titrelerini belirlemek için kullanılmıştır. Log azalma tedavi öncesi titresi gelen tedavi sonrası titresi çıkarılarak hesaplandı. Aşağıdaki günlük indirim gözlendi: S. epidermidis 4.7 log (99,998%), S. aureus 4.8 log (99,998%), S. 3.7 log (99.98%) Mitis, S. pyogenes 2.6 log (% 99.7), S. marcescens 4,0 log (% 99,99), Y. enterocolitica 3.3 log (% 99,95), B. neotomae 5.4 log (99,9996%), B. cereus 2.6 log (% 99.7), E.coli ≥5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4.7 log (99,998%) ve K . pneumoniae 2.8 log (% 99.8). Bu çalışmanın sonuçları süreci bakteriyel kontaminasyon ile ilişkili ciddi yan transfüzyon olay riskini azaltmak için yardımcı olabilir öneririz.

On bir farklı bakteri türlerinin azaltılması riboflavin ve UV ışığı göre PRT işlemi kullanılarak değerlendirildi. Bu ajanlar trombosit ürünleri daha yaygın kirletici bazılarını temsil ve pozitif beş Gram ve altı Gram negatif organizmalar bulunur. En az altı trombosit ürünler organizma başına değerlendirilmiş ve her bir ürünün trombosit ürünü bakteri&gt; 1.0 x 10 5 CFU / ml son titresi elde etmek için yeterli bakteri ile aşılandı. Önceki tedavi etmek için örnek bir trombosit ürünü hemen riboflavin ve UV işlemi ile muamele edildi ve bundan sonra, tedavi öncesi titresi belirlemek için uzaklaştırılmıştır. Aşağıdaki günlük azalmalar gözlenmiştir trombosit ürünleri tedavi sonrasında: S. epidermidis 4.7 log (99,998%), S. aureus 4.8 log (99,998%), S. 3.7 log (99.98%) Mitis, S. pyogenes 2.6 log (% 99.7), S. marcescens 4,0 log (% 99,99), Y. enterocolitica 3.3 log (% 99,95), B.neotomae 5.4 log (99,9996%), B. cereus 2.6 log (% 99.7), E. coli ≥ 5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4.7 log (99,998%) ve K. pneumoniae 2.8 log (% 99.8) (Şekil 2). Riboflavin ve UV işlem için yukarıda belirtildiği gibi tüm birimler sistem özellikleri bir araya geldi. Ek redüksiyon testi S. ile gerçekleştirildi buffy coat türetilmiş tabakalar kullanılarak pyogenes. Anlamlı bir fark S. azaltılması gözlendi aferez trombositler karşı ince beyaz tabaka elde edilen trombositler içinde pyogenes (veriler gösterilmemiştir). <img alt="Tablo 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> Tablo 1: riboflavin ve UV ışığı kullanılarak değerlendirildi bakteriyel tür için büyüme koşulları. Trombosit ürünleri kirletebilir gösterilmiştir hem Gram negatif ve Gram pozitif bakterilere oluşan bir panel, bu çalışma için seçilmiştir. Büyüme yaymak için kullanılan koşulları (sıcaklık ve ortam türü) ve titer organizmalar gösterilir. <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> Şekil 1: Riboflavin ve UV ışığı patojen azaltma süreci. Riboflavin 500 uM nominal konsantrasyonda% 0.9 tuzlu su içinde çözülmüştür. Çözüm, her trombosit ürünün içine bağlanmış ve süzülmüş steril oldu. Bakteriler, her trombosit birimine aseptik eklenmiş ve daha sonra UV enerji (yaklaşık 6-10 dakika) 6.2 J / ml ile muamele edilmiştir. Bu in vitro tedavi sonrası trombosit ünitesi nihai bakteri titresi belirlemek için numune alındı ​​çalışma. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> Şekil 2:., Riboflavin ve UV ışığı Riboflavin ile muamele edilmiş ve UV ışığı trombosit ürünleri yaygın bakteriyel kirletici bakteri yüklerini azaltmak için kullanılan, farklı bakteri türlerinin indirgenmesi. Günlük 10 indirim farkıOrtalama tedavi öncesi titresi ve ortalama tedavi sonrası titresi arasında. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Trombosit ürünlerinin saklama koşulları, bakteriyel kontaminantların tehlikeli seviyelere çoğalması için ideal bir ortam yaratır. Bu çalışmanın amacı, insan trombosit ürünlerinde yüksek titreli bakteriyel kontaminasyona karşı riboflavin bazlı bir patojen azaltma sürecini değerlendirmek için bir koloni oluşturma testi kullanmaktı.

Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

Bu prosedürün genel amacı, riboflavin ve UV tabanlı bir patojen azaltma işlemi kullanarak trombosit ürünlerindeki yaygın bakteriyel kontaminasyonun azalmasını değerlendirmektir. Bu işlem, öncelikle yüksek titreli bir bakteri stok hazırlayarak gerçekleştirilir. İkinci adımda ise bir insan trombosit ürünü temin edilir ve ünitenin hücre kalitesi değerlendirilir.Ardından, trombosit ünitesine riboflavin dozajı uygulanır ve bilinen konsantrasyonda bakteri ile inoküle edilir. Son aşama, ünitenin UV ışığı ile tedavi edilmesidir. Nihayetinde, bakteriyel azalma, tedavi öncesi ve sonrası örneklerin, bir uç nokta dilüsyon plaklama analizi ile ölçülen canlı bakteri miktarları karşılaştırılarak belirlenir.Bu tekniğin bakteriyel tarama gibi mevcut yöntemlere karşı temel avantajı, riboflavin ve UV ışığının H-I-V-H-C-V, sıtma ve Babesia gibi diğer patojenleri etkisiz hale getirebilmesidir. Bu teknolojinin etkileri kan yoluyla bulaşan patojenlerin ötesine uzanmaktadır; çünkü teknoloji aynı zamanda beyaz kan hücrelerini ve bağışlanan kan ürünlerini de etkisiz hale getirme kapasitesine sahiptir. Bunlar, transfüzyonla ilişkili graft versus host hastalığı gibi advers transfüzyon olaylarıyla ilişkilendirilmiştir.Bu yöntemi kandaki patojenleri inaktive etmek için kullanma fikri ilk olarak, fotokimyasal bileşiklerin nükleik asitlerle etkileşimi üzerine yaptığım çalışmalar sırasında ortaya çıktı. Teknik; kırmızı kan hücrelerinin, trombositlerin ve plazma proteinlerinin aksine, patojenlerin replikasyon ve hastalığın bulaşması için temel teşkil eden genomik nükleik asitler içerdiği gerçeğinden yararlanır. Böylece, mevcut kan ürünleri ortamındaki nükleik asit kimyasını hedefleyerek, eritrosit, trombosit ve plazma protein bileşenlerinin kalitesini korurken patojenleri daha seçici bir şekilde inaktive edebiliriz. Prosedürün gösterimi.Bugün bizimle laboratuvar bilimcisi Nick HOA ve laboratuvar teknisyeni Denise Gilmore olacaklar. İlk olarak, ilgili bakteriye özgü 100 mililitre büyüme ortamı içeren steril 250 mililitrelik bir şişe hazırlayın. Steril bir ekim özesi kullanarak, çizgi kültür plağından tek bir bakteri kolonisini ortama ekleyin.Ardından, şişeyi orbital çalkalamalı inkübatöre yerleştirin. Çalkalayıcı hızını 140 RPM olarak ayarlayın ve kültürü bir ila iki gün boyunca inkübe edin. Bakteriyel büyümeyi kontrol etmek için kültürü periyodik olarak inceleyin.İnkübasyondan sonra, bakteri süspansiyonunu iki adet steril 15 mililitrelik konik tüpe aktarın. Tüpleri 23 °C'de 20 dakika boyunca 3000 ×g hızda santrifüjleyin. Ardından, süpernatanı aspire edin ve bakteri peletini 15 mililitre steril peptitli su ile yeniden süspanse edin.Süspansiyona yardımcı olmak için tüpleri vorteksleyin ve ardından stok kültürü yoğunlaştırmak için resüspande edilen bakteri kültürlerini birleştirin. Beş mililitrelik dilüsyon tüplerinin her birini 1,8 ml peptitli su ile doldurun. Seyreltilmemiş numuneden 200 µl'yi ilk tüpe aktarın, tüpü vorteksleyin ve ardından 200 µl'yi bir sonraki tüpe aktarın.Uygun seyreltme oranına ulaşana kadar tekrarlayın. Her seyreltmeden 100 µL'yi uygun bir agar plakasına aktarın. Steril bir hücre yayma çubuğu kullanarak örneği plaka yüzeyine eşit şekilde yayın. Negatif kontrol plakası için örneği AER üzerine dağıtın.İki agar plak üzerine 500 µL peptit suyu ekleyin. Steril bir hücre yayıcı kullanarak örneği agar üzerine eşit şekilde dağıtın, tüm plakları ters çevirin ve uygun sıcaklıkta bir ila iki gün inkübe edin. Negatif kontrol plaklarının herhangi birinde üreme gözlemlenirse, peptit suyu kontamine olmuştur ve titrasyon geçersizdir.Negatif kontrol plakları negatifse, 30 ila 300 koloni içeren tüm plakalardaki kolonileri sayın. Ardından her bir test örneğinin titresini hesaplayın ve sonuçları mililitre başına düşen sayı olarak kaydedin. Bakteriyel kültürleri dört derece santigrat sıcaklıkta iki haftaya kadar soğutun.Doğruluğu sağlamak için, kullanımı öncesinde kültürün titresi yeniden belirlenmelidir. Mikrolitre başına 0,80 ila 3,8 milyon trombosit konsantrasyonuna sahip, 90 ila 360 mililitre hacminde standart bir aferez insan trombosit ürünü temin edin. Torbanın 22 °C'deki bir trombosit inkübatöründe en az iki saat dinlenmesine izin verin ve ardından kullanıma kadar 60 RPM'de nazikçe çalkalayın.Trombosit ürününden iki mililitrelik bir örnek alın ve pH değerinin 6.6'nın üzerinde olduğundan emin olmak için 22 °C'de bir kan gazı analizörü kullanın. Aynı örneği kullanarak, trombosit konsantrasyonunun istenen aralıkta olduğunu doğrulamak için hematolojik analizör ile ölçüm yapın. Ardından, trombosit torbasını doğrudan beyaz bir ışık kaynağı altında tutarak görsel olarak inceleyin.Torbayı kısa süreliğine sıkın ve örneğin girdap desenini gözlemleyin. Torbayı sıkmadan önce ve sıktıktan sonra bulanık bir homojenlik devam ediyorsa, trombositleri tüp kenetleme cihazı ile kullanmayın. Trombositleri, riboflavin ve UV ışık aydınlatmalı saklama torbasına aktarın.Boş trombosit torbasını bir tüp kapatıcı kullanarak çıkarın ve biyotehlikeli atık olarak atın. Ardından, 500 mikromolar riboflavin stok çözeltisinin steril ışık korumalı dış ambalajını çıkarın. Riboflavin kesesini tedavi ve depolama torbasının giriş hattına yerleştirin ve içeriği trombosit ünitesine boşaltın.Ardından, pouch ve tedavi torbası setini riboflavin pouch'una asın. Tedavi torbasındaki kalıntı havayı nazikçe bastırarak riboflavin torbasına itin. Kalan riboflavini, az miktarda trombosit ürünü kullanarak trombosit pouch'una durulayın.Riboflavin ve trombosit solüsyonunun tedavi torbasına geri süzülmesini bekleyin. Ardından giriş hattını klemp ile kapatın. Boş riboflavin torbasını tüp kapatıcı ile çıkarın ve boş torbayı uygun şekilde atın.Steril.Dişi şırınga konnektörlü altı inçlik bir tüp hattını, aydınlatma ve depolama torbasının giriş hattına sabitleyin. Tüp hattına 10 mililitrelik bir şırınga gövdesi takın. Ardından, şırınga gövdesine beş mililitre bakteriyel sap süspansiyonu ekleyin.Ardından giriş hattı klempsini açın ve bakterilerin trombosit ürününe boşalmasını sağlayın. Bir miktar trombosit ürününün geri akmasına izin vererek şırınga gövdesini durulayın. Durulama işleminden sonra şırınga gövdesini çıkarın.30 mililitrelik bir şırınga takın ve ürün iyice karıştırıldıktan sonra giriş portunu en az iki kez yıkayın. Temiz bir beş mililitrelik şırınga kullanarak iki mililitrelik bir ön işlem örneği alın. Torbaya giren havayı tahliye etmek için yeni bir şırınga kullanın.Ardından, giriş hattını işlem torbasından çıkarın ve trombosit solüsyonunu tartın. Operatör kimliğini girerek trombosit işlemine başlayın ve ardından torbayı aydınlatma plakasına yerleştirin. Son olarak, bir barkod okuyucu kullanarak numune kimliğini girin.Ürün tipini ve ağırlığını yazılıma girin. Ardından, mililitre başına 6,24 joule ultraviyole enerjisinin otomatik olarak verilmesi için kuvars kelepçesini kapatın. Tipik işlem süresi beş ila 10 dakika arasındadır.Bu sırada, UV işlemi sonrası ön işlem örneğini titre edin, bakteriyel sağkalımı değerlendirmek için işlem sonrası bir örneği titre edin ve ardından pozitif kontrol olarak stok bakteri kültürünü titre edin. Stok kültür titresi, kayıtlı titresinin mililitredeki CFU değerinin bir log ünitesi dahilinde olmalıdır. 11 farklı bakteri türünün azalması, riboflavin ve UV ışığı tabanlı bir patojen azaltma teknolojisi işlemi kullanılarak değerlendirilmiştir.Organizma başına en az altı trombosit ürünü değerlendirildi ve her biri inoküle edildi. Yeterli bakteri konsantrasyonu ile, mililitre başına 10.000 CFU'dan daha büyük bir nihai titre ile tedavi öncesinde ve riboflavin ile UV tedavisinin hemen ardından, tedavi öncesi solüsyonlarla karşılaştırılmak üzere numuneler alındı. Riboflavin ve UV ışığı ile yapılan tedavi sonucunda tüm bakteriyel yükler en az 2,6 log birim, yaklaşık 400 kat azaltıldı.Yüksek titreli bakterilerle yapılan bu çalışmaların ardından, klinik olarak daha anlamlı spike titreleri kullanılarak ek çalışmalar gerçekleştirilebilir. Bunlar aslında, bağış anında ürünlerde bulunabilecek bakteri seviyelerini temsil etmektedir. Düşük titreli spike işlemleriyle yapılan bu çalışmaların amacı; yöntemin bakteri büyümesini önleme ve bakterilerin oda sıcaklığındaki saklama süreleri boyunca, hatta uzun süreli saklama dönemlerinde bile kültür negatif kalmasını sağlama kapasitesini değerlendirmektir.Bu teknolojinin tanıtılmasının ardından, araştırmacıların ve tıbbi profesyonellerin geniş bir patojen yelpazesini inaktive etme yeteneğini değerlendirmelerine ve nakil yoluyla bulaşan hastalıkların yayılmasını önlemek için bu teknolojiyi kullanmalarına olanak sağlanmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, riboflavin ve UV ışığı ile işlem görmüş, yüksek derecede kontamine bir trombosit ürünündeki bakterilerin log azalmasının nasıl ölçüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

treatment-platelet-products-with-riboflavin-uv-light-effectiveness

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu makalede, tam kan bağışlarından hazırlanmıştır ve patojen inaktivasyonu için INTERCEPT Kan Sistemi ile tedavi çift doz buffy coat trombosit konsantreleri üretmek için Örebro Üniversitesi Hastanesi tarafından kullanılan işlem açıklanmaktadır.

INTERCEPT Kan Sistemi kullanılarak hazırlanması ve Çift Doz Buffy Coat Trombosit Ürünleri Patojen inaktivasyon

Kaynak: Cheng, C., ve diğerleri. riboflavin-5′-fosfatın görünür ışık fotolizi yoluyla patojenlerin inaktivasyonu. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, flavin mononükleotidinin (FMN) patojenik bakteriler üzerindeki fototoksik etkilerini değerlendirmek için bir yöntem göstermektedir. Bakteri kültürleri, artan FMN konsantrasyonlarına maruz bırakılır ve hücresel bileşenlere zarar veren reaktif oksijen türleri (ROS) üretmek için görünür ışıkla aydınlatılır. Hayatta kalan bakteriler daha sonra canlılıktaki...

Işıkla Aktive Olan Flavin Mononükleotid Kullanılarak Bakterilerin İnaktivasyonu

Kaynak: Cheng, C., ve diğerleri. riboflavin-5′-fosfatın görünür ışık fotolizi yoluyla patojenlerin inaktivasyonu. J. Vis. Uzm. (2022).Bu videoda, L-metiyonin, nitro mavi tetrazolyum (NBT) ve flavin mononükleotidi (FMN) içeren tamponlu bir reaksiyon karışımı, reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimini indüklemek için mor ışıkla ışınlanır. Bu, bakteriyel inaktivasyona ve spektrometrik olarak saptanabilir formazan oluşumuna yol açar.

Reaktif Oksijen Türlerinin Üretimi Yoluyla Işık Kaynaklı Bakteriyel İnaktivasyonun Miktarının Belirlenmesi

Kaynak: Zhao, K. ve diğerleri. 5-aminolevulinik asit aracılı fotodinamik tedavinin Staphylococcus aureus biyofilmi üzerindeki etkisini incelemek için in vitro model. J. Vis. Exp. (2018)Video, Gram-pozitif bakteriyel biyofilmler üzerindeki antibakteriyel etkileri değerlendirmek için fotodinamik bir tedavi protokolünü gösteriyor. Biyofilmler dört gruba ayrılır: ikisi fotosensitator öncül alır, ikisi ise bir tampon alır. Hepsi karanlıkta kuluçka yapılır, ardından bir öncül işlenmiş gruba ve bir...

Fotosensitator öncüsü kullanılarak bakteriyel biyofilmlerin ışıkla aktif tedavisi

Bu video, insan trombosit ürünlerinde yüksek titreli bakteriyel kontaminasyona karşı riboflavin ve UV ışık bazlı patojen azaltma sürecini göstermektedir. Bu işlem, bakteriyel kontaminasyon ile ilişkili ciddi advers transfüzyon olayları riskini azaltmaya yardımcı olabilir.

Bakterileri ortadan kaldırmak için trombosit ürünlerinin riboflavin ve UV ışığı tedavisi

İmplant ile ilişkili enfeksiyonu önemli bir klinik komplikasyondur. Bu çalışma, implant ile ilişkili enfeksiyonların önlenmesi için trombosit açısından zengin plazma (PRP) kullanarak bir yaklaşım açıklar, sabit trombosit konsantrasyonu ile PRP hazırlama protokolü sunar ve PRP yeni tespit antimikrobiyal özellikleri ve bu antimikrobiyal özelliklerinin incelenmesi için ilgili protokoller...

Hazırlama ve: Enfeksiyon Önleme Yeni Bir Yaklaşım olarak PRP<em&gt; In vitro</emPRP&gt; Antimikrobiyal Özellikleri

Burada, Candida albicans biyofilm büyüme üzerine kırmızı ışık uygulama sonucu değerlendirmek için bir protokol mevcut. 635 nm dalga boyu ve enerji yoğunluğu 87.6 J·cm-2 , tutarlı olmayan kırmızı ışık aygıtla Candida albicans biyofilmler 48 h için büyüme boyunca uygulandı.

Kırmızı ışık düzenlemek Candida albicans biyofilm büyüme ile günlük fototerapi

Burada, düşük yoğunluklu mavi ve mor ışık ışınlaması altında flavin mononükleotidin (FMN) fotolizi sırasında üretilen reaktif oksijen türleri ile patojenik bakterileri inaktive etmek için bir protokol sunuyoruz. FMN fotolizinin sıhhi işlemler için basit ve güvenli bir yöntem olduğu gösterilmiştir.

Riboflavin-5′- Fosfatın Görünür Işık Fotolizi ile Patojenlerin İnaktivasyonu

Prokoagülan trombosit oluşumu, artmış tromboz riski ile ilişkilendirilmiştir. Burada, prokoagülan trombositlerin ayırt edici özellikleri olan fosfatidilserin ve mikrovezikül salınımının maruziyetini ölçmeyi amaçlayan, yıkanmış trombositleri insan kanından izole etmek için kesin bir protokol sunulmaktadır.

İnsan Saflaştırılmış Trombositlerinden Fosfatidilserin Maruziyeti ve Mikrovezikül Salınımının Ölçülmesiyle Prokoagülan Trombosit Karakterizasyonu

Bu protokol, bir LED panel ışık kaynağı ile birleştirilmiş 96 oyuklu bir plaka formatı kullanarak, antibakteriyel fotodinamik inaktivasyonda (aPDI) potansiyel ışığa duyarlılaştırıcıların etkinliğini değerlendirmek için basit ve ekonomik bir yöntemi açıklar. Bu yaklaşım, farklı konsantrasyonlar, bileşikler ve bakteri suşları dahil olmak üzere birden fazla deneysel koşulun aynı anda test edilmesini sağlar.

Bakteriyel Fotodinamik İnaktivasyonda Fotoaktif Moleküllerin Değerlendirilmesi için LED Tabanlı İn Vitro Tarama

Öğrenin, riboflavin ve UV ışığı kullanarak trombosit ürünlerindeki bakteriyel kontaminasyonu nasıl azaltırsınız. Bu yöntem, kan güvenliğini artırır ve patojenleri etkisiz hale getirir.

Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği

Daha fazla video keşfet