Name: Murin Böbrek nakli Tekniği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Öğrenin, farelerde böbrek nakli için modifiye arter anastomoz tekniğini. Topuk ve parmak ucu manşeti oluşturarak tromboz riskini azaltın ve nakil başarısını artırın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma 1R03DK096151 tarafından kısmen desteklenmiştir.

Tüm fareler Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) satın alındı ​​ve NIH Rehberi ve Colorado Denver IACUC Üniversitesi onayıyla Colorado Denver, Barbara Davis Merkezi Hayvan Tesis Üniversitesi ile patojensiz şartlar altında muhafaza edildi. 1. Donör Böbrek Hasat <ol><li> Tüm aletler sterilize işlem boyunca steril eldiven giyin ve steril bir alan sağlamak. Bir ameliyat mikroskobu kullanımı ile tüm ameliyatları gerçekleştirmek. </li><li> Cerrahi pentobarbital ile anestezi uygulanmış (60 mg / kg IP) vericilerden fare verici böbrek çıkarın. Ayak-tutam anestezi derinliği tespit ve solunum hızını gözlemlemek. </li><li> Daha sonra 4-yollu sınırlamalar ile fare hareketsiz kürk Klip. Povidon-iyot ile cildi hazırlayın ve steril bir şekilde fare asmak. </li><li> 2 cm orta hat vertikal karın kesi yapın ve karın boşluğuna girin. Superior barsak geri çekin ve dışagöğüs üzerinde. Prosedür boyunca steril gazlı bez nemli sarılmış bağırsak tutun. </li><li> Büyük karın damarları tespit ve bunları harekete, herhangi bir lomber dalları tanımlamak ve dağlamak veya 10/0 naylon sütür ile lige ya. </li><li> Hemen sol renal damarlara uzak yaklaşık 2mm üzerinde künt diseksiyon ile inferior vena kava (IVC) ve ayrı abdominal aorta (AA) kızdırmak. 10/0 naylon ile bağlanır ve böbrek damarlarının küçük arteriyel ve venöz dalları bölün. </li><li> Şimdi bu yapıların künt diseksiyon ile dikkatlice renal arterden renal ven ayırın. Bu alıcıya IVC bir uç-yan anastamozu oluşturulması için kullanılacak renal ven proksimal ucunda bir Carrel yama doğru oluşturulması için izin verir. </li><li> Tanımlayın, ligatı ve sol adrenal damarları bölün. Bu böbreküstü aorta erişime izin ve 6-0 ipek sütür ligasyon için hazırlık aort etrafına yerleştirilen, ancak şu anda bağlı değildir. </li&gt; <li> Çevredeki facia gelen böbrek, üreter ve damarları harekete geçmek. Sağ ve Arter böbrek döndürün / herhangi posterior dalları bölün. Sonra sola böbrek dönün. </li><li> Şimdi üreter dikkat yönlendirir. Böbrek hilum üreter damarları korumak için çevredeki facia alarak bakımdan üreteri özgür bozmadan. Duktus deferens düzeyinde üreter bölün. Böbrek hemen geri kazanılması için hazırdır. </li><li> Yavaş yavaş, böylece donör heparinizing distal IVC içine heparin 300 birimlerini enjekte edilir. Böbreküstü AA etrafına yerleştirilen 6-0 ipek sütür aşağı kravat ve heparin tuzlu su çözeltisi (100 U / ml) 0.8ml distal abdominal aortun yoluyla sol böbrek serpmek. </li><li> Perfüzyon venöz Carrel yama oluşturmak kesildi kez hemen böbrek içine akmasını önlemek için. AA ve altındaki böbrek arteri açığa böbrek doğru renal ven çekin. </li><li> Renal arter bitişik aorta bir topuk ve yaratma DivideŞekil 1&#39;de gösterildiği gibi e manşet. donörden böbrek, üreter ve damarları çıkartın. </li><li> Implantasyonu kadar önceden hazırlanmış alıcı (0 dakika soğuk işemiya süresi) ya da önceden belirlenmiş bir süre için tercih edilen bir çözelti içinde 4 o C&#39;de saklanabilir doğrudan böbrek çıkarın. Exsanguanation ve servikal dislokasyon ile vericilerden Ötenazi. Donör böbreği kurtarmak için Toplam süresi yaklaşık. 15-20 dk. </li></ol> 2. Böbrek İmplant Tekniği <ol><li> Pentobarbital alıcı fare anestezi (60 mg / kg IP başlangıç ​​dozu, 25 mg / kg IP ek doz gerekli ise). Ayak-tutam anestezi derinliği tespit ve solunum hızını gözlemlemek. Kürk sonra 4-yollu sınırlamalar ile fare hareketsiz ve gözleri oftalmik merhem uygulayın Clip. Povidon-iyot ile cildi hazırlayın ve steril bir şekilde fare asmak. </li><li> 2 cm orta hat vertikal karın kesi yapın ve karın boşluğuna girin. Bağırsak geri çekinsuperior ve göğüs üzerinde dışa. Prosedür boyunca steril gazlı bez nemli sarılmış bağırsak tutun. </li><li> Şu anda sağ nefrektomi gerçekleştirin. 6-0 ipek dikişlerle renal arter ve ven Arter. Dikişlerle böbrek distalinden tüketim. Böbrek proksimal bölmek, sonra 6-0 ipek ile üreter bağlanır ve. </li><li> Böbrek damarlarının altında abdominal aorta ve inferior vena kava (IVC) izole edin. Anastomoz sitesine 4-0 pamuk aort etrafında bağları ve IVC üstün sonra aşağı yerleştirin. 10-0 naylon sütür ile alanında herhangi bir lomber gemileri tespit etmek ve bağlamak. </li><li> Üstün ardından ilk alt, pamuk bağları düğüm. Bu şekilde bazı kan aortatomi yapımında kolay aort tutulur. </li><li> Aort lümeni girmek için bir 30G iğne ile aortatomi Form. Yaklaşık 2mm uzunluğunda ince mikro makas ile kesi uzatın. </li><li> Donör aort topuk-ve-ayak manşet yan anastomoz son yapınAşağıdaki şekilde alıcı aorta. Donör aorta ve alıcı aort ve kravat kesinin alt açı bir 10-0 naylon dikiş kalmak dikiş yerleştirin. </li><li> Donör aort ilk ve abdominal aorta ve kravat kesi üstün köşesinde karşısında ikinci 10-0 naylon yerleştirin. Aortun yan duvarında aşağı üstün bir çalışan sütür hattını yapın ve daha önce yerleştirilen kalmak dikiş karşı kravat. Sonra çalışan moda ve kravat medial duvar dikin. </li><li> Aşağıdaki şekilde alıcıya IVC donör renal venin yan anastomoz son yapın. Bir 30G iğne ile IVC delinme ve ince mikro makasla kesi uzatmak. 10-0 naylon IVC içinde kesi alt köşesine donör renal ven kravat. Renal ven ile İVK ve kravat arasına çalışan sütür hattını olun. NOT: Bu tam kalınlıkta vasküler adventit dahil dikiş iğnesinin geçtiği de hayati önem taşımaktadıria ve intima elde edilir. Kenarların Eversion de sızdırmazlık ve anastomuzuna yardımcıları intima-to-intima temas var olmasını sağlar. Hemostatik pıhtılaşma ajan kaçağının azaltılmasında yararlı olabilir, biz bir cerrah yerine iyi bir teknik güveniyor öneririz. </li><li> Anastomozlar &quot;temiz&quot; olduğundan emin olun. Yani dikiş yerleştirirken karşıt duvarları yakalanmış değil olmasıdır. Bu başarısız bir greft ve arka bacak felç aşırı durumlarda neden olacağı akışına karşı ciddi bir daralma neden olur. NOT: Başka bir hayati önemli faktör anastomoz sütür hatlarının gerilim optimal olmasını sağlamak olduğunu. Çok gevşek ve geri dönüşümsüz sızıntı, çok sıkı ve neden olacaktır akış darlık olacaktır. Arteriyel tarafta bu greft zayıf perfüzyon neden olacaksa, venöz tarafında kalabalık böbrek neden olacaktır eğer. </li><li> Distal 4-0 pamuk kravat yeniden kurulması venöz akış bırakın. Veno ve hemostaz kezBize anastomoz proksimal 4-0 pamuk kravat gevşetin ve hemostaz için arteriyel anastomoz gözlemlemek giderek gözlenmiştir. </li><li> Her iki anastomoz güvenli kabul edilir bir kez fare pamuk bağlarını çıkarın. Pierce iki delik yaratarak bir 20 G iğne ile mesane. </li><li> Deliklerden kavisli bir forseps ipuçları Pass ve iki 10-0 naylon sütür ile mesane duvarına tutturulmuş olan üreter proksimal ucu ile forseps ile mesane yoluyla donör üreter çekin. Üreter mesane içinde geri ve iki 10-0 naylon sütür ile deliği kapatmak için izin ikinci delikten çıkan üreter aşırı uzunluğunu kesin. </li><li> Karın barsak dönün. Çalışan bir moda 5-0 İpek sütür kullanarak iki kat karın duvarı kapatın. </li><li> Kapanış üzerine sıvı resüsitasyon olarak karın içine steril sıcak normal serum fizyolojik 1.0 ml bolus yönetmek ve serum fizyolojik subkutan operasyon sonrası bir 0.8 ml enjekte edilir. Başka bir destek olacakziyaretinde önlemler ameliyat sırasında gerekmektedir. </li><li> Bir ısınma battaniye hayvan kurtarın. Toplam implant süresi yaklaşık. 35-45 dk. Böyle buprenorfın, 0.05 mg / kg, SC, prosedürün başlangıcında ve 72 saat sonrası op her 6-12 saatte 0.1-0.2 ml olarak analjezikler yönetin. </li></ol> 3. Kontralateral Nefrektomi <ol><li> Protokol şartlarına bağlı olarak, birkaç gün implant işleminden sonra, izofluran anestezisi altında bir kontralateral nefrektomi (indüksiyon için% 5 inhale izofluran, bakım için 1.5-2.0%) gerçekleştirin. </li><li> Karın boşluğu girin ve yavaşça hayvanın sağa barsak geri çekin. Çevre fasya sol böbreği ve künt incelemek Açığa. </li><li> 6-0 ipek dikişlerle renal arter, ven ve üreter bağlanır ve sonra dikişler üzerinde böbrek tüketim ve böbrek çıkarın. Toplam ameliyat süresi yaklaşık. 10 dk. </li></ol> 4. Graft Değerlendirmesi <ol><li> Tedbir serum creatialkali pikrat yöntemi (Jaffe reaksiyonu) ile dokuz. </li></ol>

<ol><li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).</li>
<li>Kalina, S. L., Mottram, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microsurgical+technique+for+renal+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Aust+N+Z+J+Surg%22%5BJournal%5D)">A microsurgical technique for renal transplantation in mice.</a> Aust N Z J Surg. 63 (3), 213-216 (1993).</li>
<li>Han, W. R., Murray-Segal, L. J., Mottram, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+technique+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Modified technique for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 19 (6), 272-274 (1999).</li>
<li>Ge, F., Gong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+successfully+establishing+a+kidney+transplant+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">Strategies for successfully establishing a kidney transplant in a mouse model.</a> Exp Clin Transplant. 9 (5), 287-294 (2011).</li>
<li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+curve%2C+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Zhang, Z. Kidney Transplantation in Mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+Z+%22Experimental+Organ+Transplantation%22">Experimental Organ Transplantation</a>. Chen, H., Qian, S. , Nova Science Publishers. 45-64 (2013).</li>
<li>Zhang, L., Moskovitz, M., Piscatelli, S., Longaker, M. T., Siebert, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+study+of+different+angled+end-to-side+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic study of different angled end-to-side anastomoses.</a> Microsurgery. 16 (2), 114-117 (1995).</li>
<li>Liu, Q., Mirc, D., Fu, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+mechanisms+of+thrombosis+in+intact+bent+microvessels+of+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Mechanical mechanisms of thrombosis in intact bent microvessels of rat mesentery.</a> J Biomech. 41 (12), 2726-2734 (2008).</li>
<li>Chesnutt, J. K., Han, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tortuosity+triggers+platelet+activation+and+thrombus+formation+in+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech+Eng%22%5BJournal%5D)">Tortuosity triggers platelet activation and thrombus formation in microvessels.</a> J Biomech Eng. 133 (12), 121004(2011).</li>
<li>Han, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+vessel+buckling+within+soft+surrounding+tissue+generates+tortuosity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Blood vessel buckling within soft surrounding tissue generates tortuosity.</a> J Biomech. 42 (16), 2797-2801 (2009).</li>
<li>Gutierrez-Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraluminal+thrombus+and+neointimal+hyperplasia+after+microvascular+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Neurol%22%5BJournal%5D)">Intraluminal thrombus and neointimal hyperplasia after microvascular surgery.</a> Surg Neurol. 24 (2), 153-159 (1985).</li>
<li>Khouri, R. K., Cooley, B. C., Kenna, D. M., Edstrom, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombosis+of+microvascular+anastomoses+in+traumatized+vessels%3A+fibrin+versus+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Thrombosis of microvascular anastomoses in traumatized vessels: fibrin versus platelets.</a> Plast Reconstr Surg. 86 (1), 110-117 (1990).</li>
<li>Johnson, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+platelet+deposition+at+the+human+microvascular+anastomosis%3A+effect+on+downstream+platelet+deposition+to+intact+and+injured+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Initial platelet deposition at the human microvascular anastomosis: effect on downstream platelet deposition to intact and injured vessels.</a> Plast Reconstr Surg. 90 (4), 650-658 (1992).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu nakli tekniği Mastering zordur, ancak başarılı kez çok güçlü bir araştırma aracı. Hasta cerrah / araştırmacı detay ve küçük hayvan modellerinde daha çok herhangi bir cerrahi işlem mastering için anahtar olduğunu tekniğin, tutarlılık dikkat tarafından ödüllendirilir. Fare böbrek nakli mastering teknik zorluklar birçok kıvrımlar vardır ve diğer küçük hayvan nakli modellerinde deneyimi bu yordamı mücadelede önce kazanılan gerektiğini kuvvetle muhtemeldir. Bir patent lümen korumak için dikiş ...

1973 yılından bu yana farelerde böbrek nakli modeli değerli bir araştırma aracı olmuştur, ama teknik sorunlar yaygın kullanımını engellemiştir. Yıllar boyunca birçok kağıtları yayınlanan bu prosedüre iyileştirmeler / iyileştirmeler ayrıntılarıyla oylandı. Öncelikle vaskülarize solid organ transplantasyonu bir model olarak bu prosedür sadece, aynı zamanda 1973 6 Russell laboratuvar tarafından icat edildi heterotopik kalp nakli modeli muhtemelen ikinci. Her iki model de allojenik ret yanıtları, gecikmiş greft fonksiyonu gelişimi içine araştırma kendilerini ödünç ve iskemi reperfüzyon hasarı. Böbrek nakli ile rapor edilecek en yaygın konulardan biri de laboratuvarda yaşanan arteriyel tromboz 4,5,7 nispeten yüksek insidansı. Bu nedenle trombüs oluşumunun bir literatür taraması gerçekleştirmek ve muhtemelen bu teknik sorunun nedenini bulmak için yola ve aynı zamanda hazırlamak içinolası çözüm. Tromboz en muhtemel nedeni kan bağışı renal artere daha sonra donör böbrek aorta içine alıcı aortadan alır biraz dolambaçlı yoldur. Bu yol, trombosit aktivasyonu ve trombus oluşumuna neden olabilir renal arter türbülans neden olur. Son gözlemler ve literatür 8-14 bir arama dayanarak% 0 tromboz azalttı yeni bir teknik ile geldi. Burada açıklanan teknik imkanları kan akışını geliştirilmiş bir arteriyel topuk-ve-ayak manşet oluşumunda önceden bildirilen teknikler arasında değişir ve anlamlı trombüs oluşumunu azaltır. Manşon az 45 ° aort (Şekil 1A ve 1B) uzunlamasına eksenine belirli bir açıda renal arter ostiyum yüzeyi boyunca alt böbrek aort bölünmesi ile meydana getirilir. Bu uzunluğu yaklaşık 2mm bir manşet ile sonuçlanır. Bir venöz Carrel yama r bölücü oluşturulmuşturIVC içine enal ven böylece manşet çapı artar. Kızıl-böbrek verici abdominal aorta topuk-and-toe manşet uç-yan alıcı abdominal aort ve donör renal venin anastomoz olduğunu / IVC yama (IVC) uç-yan alıcı karın inferior vena kava anastomoz olduğunu . Üreter sonra içine ve Han ve ark 3 tarafından açıklandığı gibi mesane bağlanır. Bu çalışmada sadece sıcak iskemi süresi ile tedavi edilmemiş nakli için (yani., Soğuk iskemi) karşılaştırılır. Bu durumda sıcak iskemi verici böbrek yoluyla kan akımının kesilmesinden zaman anlamına gelir (aşağıda 1.11 adıma) ve alıcı (aşağıda adım 2.11) &#39;de greft reperfüzyon. Soğuk iskemi böbrek perfüze değildir ve implant prosedürünün başına kadar soğuk hava depolarında muhafaza edilir zaman anlamına gelir.

<table><tbody><tr><td>Enstrüman</td><td>Roboz #</td><td>Güzel Bilim Araçları #</td><td>Arocerrahi #</td></tr><tr><td>Düz mikro diseksiyon forsep #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli mikro diseksiyon forsepsi #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli tırtıklı forsep</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas mikro diseksiyon makası, kısa</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon makası, düz, keskin, uzun</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>Mikro yaylı iğne tutucu</td><td></td><td></td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>Düz sivrisinek forsep</td><td></td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon makası, düz, künt</td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon makası, kavisli, künt</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikro ekartör</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alet tepsisi, 10" x 6 &frac12; &rdquo; X & Frac34; "</td> dedi.<td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İpek sütür, 5/0, 22.5m makara</td><td></td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>Sütür</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10/0 naylon</td><td></td><td></td><td>T4A10Q07</td></tr><tr><td>5/0 ipek</td><td></td><td></td><td>E19A05N</td></tr><tr><td>Eldiven Perdeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medex'ten Biogel Supply</td><td></td><td>Precept, #64-9012-9</td><td></td></tr><tr><td>Şırıngalar</td><td></td><td>Pamuk aplikatörleri</td><td></td></tr><tr><td>BD 1cc insülin, # 329424</td><td></td><td>Fisher marka, # 23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Povidon-İyot çubukları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDI, #B40600</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4/0 Pamuk bağları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aletlerle</td><td></td><td></td><td></td> otoklavlanmış yerli pamuk</tr></tbody></table>

murin böbrek nakli tekniği

Murine Kidney Transplant Technique

İlk fare böbrek nakli tekniği 1973'teRussell laboratuvarı tarafından yayınlandı 1. Diğer laboratuvarların bu teknikte uzmanlaşması ve kullanması birkaç yıl alsa da, şu anda dünya çapında birçok laboratuvar tarafından yaygın olarak kullanılmaktadır. Renal arter yerine arteriyel anastomozu oluşturmak için donör aortu kullanan orijinal teknikte önemli bir iyileştirme 1993 yılında Kalina ve Mottram 2 tarafından geliştirilmiş ve rapor edilmiştir, 1999 yılında aynı laboratuvardan daha fazla ilerleme sağlanmıştır 3. Bu modelde yetkin olunabilse de, literatürün araştırılması, birçok laboratuvarın arteriyel tromboza bağlı olarak hala yüksek oranda greft kaybı yaşadığını ortaya koymaktadır. Burada, laboratuvarımızda geliştirilen ve başkaları tarafından bildirilen arteriyel trombüsü büyük ölçüde azaltan bir tekniği açıklıyoruz 4,5. Bu, daha büyük bir anastomozu ve böbreğe daha düz kan akışını kolaylaştıran donör infra-renal aortun bir topuk ve ayak parmağı manşeti oluşturularak elde edilir.

Bu cerrahi teknik, basit greft sağkalım / ret çalışmaları, ya da oldukça karmaşık deneysel protokollerin biri için izin verir. Rakamlar biz bu gelişmiş arter anastomoz tekniği kullanılarak avantajlarını göstermek aşağıda. Biz önemli ölçüde% 0, böylece artan verimlilik% 35 den arteriyel tromboz insidansını azaltmıştır bu tekniği kullanarak. Biz tutulan Aynı% 0 tromboz sonucu bir yıldan bu tekniği kullandık. 1, bu yeni tekniğin temeli olan arteriyel topuk-ve-ayak manşet oluşumu için yöntem açıklanır <stro...

Bu makalenin amacı, arteriyel anastomozun ayrıntılarına özellikle dikkat ederek, bir farede böbrek nakli gerçekleştirmek için gereken adımları tanımlamaktır.

Murin Böbrek nakli Tekniği

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerde böbrek nakli için modifiye edilmiş bir arteriyel anastomoz tekniğini göstermektir. Bu işlem, öncelikle donördeki ilgili damarların dikkatlice diseke edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, donör abdominal aortasının renal artere yakın kısmında bir topuk ve parmak manşeti (heel and toe cuff) oluşturmaktır.Ardından, bu topuk ve parmak ucu manşeti (heel and toe cuff), alıcıda arteriyel anastomoz oluşturmak için kullanılır. Nihayetinde, bu tekniğin arteriyel tromboz vakalarının çok düşük olmasıyla sonuçlanması beklenir. Bu video, ağızda böbrek nakillerini kolaylaştırmak için arteriyel topuk ve parmak ucu manşetinin nasıl oluşturulacağını gösterecektir.Bu direnç yönteminin temel avantajı, alıcı aortadan donör renal artere giden kan akış yolunun düzleştirilmesi, böylece trombosit aktivasyonunun ve tromboz oluşumunun azaltılmasıdır. Bir ameliyat mikroskobu altında steril teknik kullanarak donör böbreği uygun şekilde çıkarın. Çıkarma işlemi 15 ila 20 dakika sürecektir. Tüyleri temizleyin ve ardından hayvanı sabitleyin.Cildi povidone iyot ile yıkayarak cerrahi alanı hazırlayın, fareyi örtün ve iki santimetrelik orta hat abdominal insizyon ile cerrahiye başlayın. Bağırsakları göğüs bölgesine çekin ve nemli gazla sarın. İşlem boyunca gazın nemli kalmasını sağlayın.Şimdi, büyük abdominal damarları bulun ve bunları mobilize edin. Tüm lomber dallar ya koterize edilmeli ya da 10 sıfır naylon sütür ile bağlanmalıdır. Ardından, sol renal damarların distalinde, inferior vena cava ve aortanın iki milimetrelik bir bölümünü künt diseksiyonla ayırın.Ardından, renal damara bağlanan tüm küçük arteriyel ve venöz dalları ligatize edin ve kesin. Renal veni renal arterden ayırmak için künt diseksiyona devam edin; böylece renal venin proksimal ucunda, venöz anastomozun oluşturulmasında kullanılacak bir Carroll yaması açılmasına olanak tanınır. Daha sonra, supra renal aortaya erişmek için sol adrenal damarları ligatize edin ve kesin.Erişim sağlandıktan sonra, altı sıfır ipek döngü geçirin. Daha sonra kullanmak üzere supra renal aortanın çevresini sütüre edin. Şimdi böbrek damarlarını ve üreteri çevre fasya üzerinden mobilize edin.Böbreği posterior tarafta sağa doğru döndürün, üreteye odaklanarak tüm vasküler dalları bağlayın ve kesin. Üreteri çevreleyen fasyadan dikkatlice ayırın. Renal hiluma müdahale etmeyin ve üreterik damarları koruyun.Ardından, üreteri ductus deferens seviyesinden kesin. Böbrek artık çıkarılabilir. İlk olarak, donörü heparinize etmek için distal IVC'ye yavaşça 300 ünite heparin enjekte edin.İkinci olarak, supra renal aa. çevresine altı sıfır sütür bağlayın. Ardından, abdominal aortadan sol böbreği, mililitre başına 100 ünite olacak şekilde 0,8 mililitre heparinli salin solüsyonu enjekte ederek perfüze edin. Perfüzyondan hemen sonra, böbreğe geri akışı önlemek için venöz karyl yamayı oluşturun.AA ve renal arteri ortaya çıkarmak için renal veni böbreğe doğru geri çekin. Şimdi aortayı renal arterin bitişiğinden kesin. Bir topuk ve manşet oluşturun.Ardından, eğer sıfır dakikalık soğuk iskemi gerekiyorsa, geri kazanılan böbreği hazırlanmış bir alıcıya aktarın. Alternatif olarak, organları dört derece Celsius'luk bir saklama bölmesine aktarın ve ardından donörleri metin protokolünde belirtildiği şekilde ötenaziye tabi tutun. Bu prosedür, donör anestezi işlemesinde olduğu gibi 35 ila 45 dakika sürecektir.Alıcıya gerekirse başlangıç bolusuna ek doz uygulanır. Alıcıya oftalmik krem sürün. Ardından hayvana buprenorfini enjekte edin ve işlem sonrası uygulamaya devam edin; başlangıç insizyonu yapılıp bağırsağın donörde olduğu gibi yerinden oynatılmasının ardından sağ nefrektomiye geçin, renal arter ve veni altı sıfır sütür ile bağlayın ve üreteri böbreğin proksimalinden altı sıfır sütür ile kesin.Ardından, böbreği vasküler sütürün distalinden eksize edin. Şimdi renal damarların altında, AA ve IVC'yi anastomoz bölgesinin üst kısmından izole edin. Aorta ve IVC etrafına dört sıfır pamuklu bağ koyun; aynı işlemi bölgenin inferiorunda da gerçekleştirin.Bölgede bulunan tüm lomber damarlar ya koterize edilmeli ya da 10 zero naylon sütür ile bağlanmalıdır; önce alt taraftaki sütür sıkıca düğümlenmeli, ardından üst taraftaki sütür sıkıca düğümlenmelidir. Bu işlem, aorta içerisinde bir miktar kan kalmasını sağlayarak AOR ototomisini kolaylaştıracaktır. Ototomi işlemi 30 gauge bir iğne ile gerçekleştirilmeli, ardından insizyon ince mikro makaslar kullanılarak yaklaşık iki milimetre uzunluğa getirilmelidir.Sıradaki adım, donör topuk ve parmak manşetlerinden alıcının aortasına endo anastomoz yapmaktır. İlk olarak, donör aortanın topuk kısmına 10 zero sütür ile bir tutturma dikişi atın. Buna alıcının aortasındaki insizyonun alt ucundan devam edin ve düğümleyerek bağlayın.İkinci olarak, aort insizyonunun üst ucuna 10 sıfır sütur yerleştirin, bunu donör manşetinin uç kısmına kadar sürdürün ve düğümleyin. Üçüncü olarak, üst uçtan başlayarak aortanın lateral duvarına sürekli sütur atın ve daha önce yerleştirilen alt sabitleme dikişine karşı düğümleyin. Ardından böbreği ters çevirin, medial duvar boyunca sürekli sütura devam edin ve üst sabitleme dikişine karşı düğümleyin.İğne ile IVC'yi delerek ve ardından insizyonu ince mikro makaslarla genişleterek venöz anastomozu tamamlayın. 10 sıfır naylon kullanarak, donör renal veni IVC'nin alt köşesine bağlayın. IVC ve donör venin üst ucuna başka bir 10 sıfır sütür yerleştirin ve her iki taraf boyunca sürekli sütür atın.Arteriyel anastomezde olduğu gibi, doku kenarlarının ters çevrilmesi sızdırmazlığa ve iyileşmeye yardımcı olur. Şimdi, çalışmanızı kontrol edin. Karşıt duvarlar dikişlere yakalanmamış olmalıdır, aksi takdirde kan akışı çok fazla kısıtlanacaktır.Anastomotik sütür hattının gerginliğinin optimize edilmesini sağlayan bir diğer hayati önem taşıen faktördür; çok gevşek olması geri dönüşü olmayan sızıntılara, çok sıkı olması ise akışta darlığa yol açacaktır. Arteriyel tarafta bu durum greftin yetersiz perfüzyonuyla sonuçlanır. Venöz tarafta ise konjesyon gelişmiş bir böbrek ortaya çıkacaktır.Anastomozlar tamamlandığında, venöz akışı sağlamak için distal pamuklu bağı çözün. Ardından proksimal bağı kademeli olarak gevşetin ve arteriyel anastomozda hemostaz için yıkama yapın. Her iki anastomozun da güvenli olduğu onaylandığında, alıcının mesanesine 20 gauge bir iğne ile iki delik açın, deliklerden pensleri geçirin ve donör üreteri mesanenin içinden çekin.Ardından, üreterin proksimal ucunu 2 adet 10 0 sütür ile mesane duvarına sabitleyin. Mesane içine çekilmesi için dışarıda kalan fazla üreter uzunluğunu kesin. Daha sonra, mesanedeki diğer deliği 10 zero sütür ile kapatın.Bağırsakları yerine yerleştirerek, karnı iki kat halinde sürekli beş sıfır ipek sütür ile kapatarak ve kapatmadan önce karın içine bir mikrolitre salin enjekte ederek cerrahi işlemi tamamlayın. Karnı kapattıktan sonra deri altına 0,8 mililitre daha salin enjekte edin ve hayvanı sıcak bir battaniye üzerinde nekrose edin. Bir yıllık veri toplama sürecinde, bu teknik arteriyel tromboz insidansını %35'ten %0'a önemli ölçüde düşürmüştür ve %0 tromboz oranı, transplant edilmemiş bir böbrek ve transplant edilmiş bir böbrek üzerinde immünohistokimya gerçekleştirildiğinden beri korunmuştur. Tanımlanan teknik kullanılarak yapılan periyodik asit Schiff boyaması, kontrol ve donörde normal proksimal tübül hücrelerini ortaya koymuştur.Her iki ok için de hücreler, berrak bir sitoplazmaya ve hücrenin ortasında yuvarlak, açık renkli bir çekirdeğe sahip kübik yapılıdır. Hafif fırçamsı kenar hasarına dair kanıtları belirtin, ancak fırçamsı kenarların çoğunluğu düzenli ve iyi korunmuştur. Bu videoyu izledikten sonra, trombroz vakalarını azaltacak ve daha başarılı böbrek nakillerini sağlayacak olan arteriyel topuk ve parmak ucu anastomizinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Farelerde böbrek transplantasyonu, başarı için dikkatli post-operatif bakım ve tedavi gerektiren bir teknik olarak oldukça zor bir işlemdir.

Murin Böbrek Nakli Prosedürü

Belirli hücrelerin içine hESC Yönetmen farklılaşma, rejeneratif tıp alanında büyük ilgi yarattı. Biz belirlemek için bir özlü, adım-adım...

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Izole adacık transplantasyonu tip 1 şeker hastalığı için potansiyel bir tedavi olarak öne sürülmüştür. Burada, fare pancreata adacıkları izole, ve böbrek subkapsüler alan nakli için bir yöntem açıklanmaktadır.

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Bu videoda, farenin retroperitoneal boşluğundan böbrek çıkarma prosedürünü açıklıyoruz. Çıkarılan böbrek, böbrek kapsülü ve çevresindeki yağ tabakası olmadan sağlam bir böbrek elde etmek için ayrıca mikrodiseke edilebilir.

Fareden Sağlam Böbreğin Çıkarılması: Murin Modellerinden Böbrek Kapsülü Olmadan Böbrek Elde Etme Tekniği

Bu videoda, bir domuz modelinde ortotopik böbrek ototransplantasyonu açıklanmaktadır. Bu cerrahi prosedür, bir hayvanın böbrek greftinin orijinal anatomik konumuna nakledilmesini içerir. Model, insanlarda son dönem böbrek hastalıkları için yeni tedavileri araştırmak için kullanılır.

Ortotopik Domuz Böbreği Nakli: Domuz Modelinde Greft Böbrek Nakli İçin Bir Teknik

Burada, reddetme immünolojisini incelemek için bir protokol sunuyoruz. Sunulan cerrahi model, kısa bir ameliyat süresi ve özlü bir teknik rapor etti. Donör-alıcı suş kombinasyonuna bağlı olarak, nakledilen böbrek, interstisyel fibroz ve tübüler atrofi ile tanımlanan akut hücresel rejeksiyon veya kronik allogreft hasarı geliştirebilir.

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

Bu rapor, immün yetmezliği olan fare alıcılarının böbrek kapsülü altına farklı yaştaki donör farelerden murin timi naklinin ayrıntılı bir tanımını sağlar. Bu yaklaşımın amacı, T hücresi gelişimi ve timik seçim olaylarını in vivo olarak modellemektir.

İzolasyon ve Farklı Yaşlı Fare Timik Greft Nakli.

Bu yazının ve protokolün amacı, farelerde ortootopik böbrek transplantasyonunun cerrahi prosedürünü ayrıntılı olarak açıklamak ve göstermek. Bu yöntem, donör böbreğin doğru perfüzyon elde etmek ve venöz ve üreteral manşet anastomoz tekniği kullanarak reperfüzyon süresini kısaltmak için basitleştirilmiştir.

Ortootopik Rat böbrek nakli: bir roman ve Basitleştirilmiş cerrahi yaklaşım

Biz transplantasyon için basit ve verimli bir yöntem sağlamak 2 '-deoxyguanosine bir çıplak fare renal kapsül içine e 18.5 timus tedavi. Bu yöntem, hem timik epitelyal hücreler fonksiyon ve T hücrelerinin olgunlaşma çalışmada Yardımcısı olmalıdır.

Çıplak farelerde 2 '-Deoxyguanosine tedavi Murine embriyonik Thymus renal subkapsüler nakli

Bu protokol, modifiye arteriyel anastomoz stratejisine odaklanan fare böbrek transplantasyonunun yeni bir cerrahi tekniğini sunmaktadır. Basit ve daha güvenli bir üreter-mesane anastomoz yöntemini içeren bir vasküler sütür tekniği de sunulmaktadır. Bu modifikasyonlar ameliyat süresini kısaltır ve fare böbrek nakli işleminin başarı oranını artırır.

Farelerde Böbrek Nakli için Modifiye Bir Cerrahi Teknik

Sıçan ortotopik renal transplantasyon modeli, renal allogreft reddinin mekanizmasının araştırılmasına katkıda bulunur. Mevcut model, böbrek implantasyonunun uçtan uca anastomozu ve üreter-mesane anastomozunun uçtan uca "tünel" yöntemini kullanarak kan akımına ve alt vücudun venöz reflüsüne müdahale etmeden alıcıların sağkalımını arttırmaktadır.

Renal Allogreft Rejeksiyonu için Sıçan Ortotopik Böbrek Transplantasyonu Modeli

Öğrenin, farelerde böbrek nakli için modifiye arter anastomoz tekniğini. Topuk ve parmak ucu manşeti oluşturarak tromboz riskini azaltın ve nakil başarısını artırın.

Murin Böbrek nakli Tekniği

Daha fazla video keşfet