Name: Bir Hasta gibi Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: Öğrenin hepatoselüler karsinom metastazını araştırmak için ortotopik singenik fare modeli kurma yöntemini. Bu teknik immün yanıtın tümör davranışındaki rolünü inceleyerek kanser araştırmalarında yüksek tekrarlanabilirlik sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Makaleyi düzelttiği için Pascal DuBois'ya teşekkür ederiz. Yazarlar ayrıca New York Şehir Üniversitesi Hunter Koleji'ndeki Hayvan Tesisi personeline de teşekkür eder. Bu çalışma, Hunter College'a bir NIH RCMI hibesi ile desteklenmiştir.

Etik Beyanı Tüm hayvan çalışmaları New York Şehir Üniversitesi Hunter College Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Not: Sekiz BALB / c fareleri, bu deneysel prosedür kullanılmıştır. Beş BALB / c fareleri, primer tümör üretmek için 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare hepatoselüler karsinoma hücreleri ile implante edildi. Herhangi bir nakil Üç BALB / c fareleri, kontroller olarak kullanılmıştır. BNL 1ME A.7R.1 sıçangil olmayan tümörijenik hepatosit hücre çizgisi BNL CL.2 kimyasal dönüştürme ile elde edilen bir murin hepatosellüler karsinom hücre hattıdır. BNL 1ME A.7R.1 Amerikan Tip Kültür Koleksiyonu (ATCC) elde edilmiştir. 1. Ön cerrahi <ol><li> Tüm yaşam ameliyatları sağlıklı için fareler olun. Fareler sağlıklı olduğundan emin olmak için, cilt tenting ile dehidratasyon belirtileri kontrol edin. Hastalık ya da d herhangi bir kanıt ile fareler kullanmayınBu deneylerde istress. </li><li> Onlar kilolu olmayan sağlamak için farelerin tartılır. Ağırlığı en az 16-20 gram olduğundan emin olun. </li><li> Fare başına implantasyon için 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücreleri hazırla: <ol><li> BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin% 70 birleşen hücre kültürü çanak - 10 ml&#39;lik% 60 aspire medya. 5 ml PBS ile iki kez yıkanır. Çanak tripsin 2 ml ilave edilir ve 5 dakika boyunca hava ve% 5 CO2 ile nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Daha sonra, bir pipet 10 ul 10X büyütmede mikroskop altında hücre sayımı için manuel bir hemasitometre içine hücreleri tripsinize. Dört büyük köşe meydanlarda bulunan hücrelerin toplam sayısını ve toplam hücre sayısına göre seyreltme faktörünü çarpın. Ardından, (ml başına hücreleri) sayılan kareler sayısına göre bölmek ve hücre konsantrasyonu 10 6 ile çarpın. </li><li> Hesaplama kullanarak, steril fare başına 5 milyon hücreleri toplamak1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri. 1.5 ml mikrosantrifüj tüpler etiketleyin. </li></ol></li><li> Fosfat tamponlu tuzlu su, 100 ul (PBS) içinde 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin yeniden süspanse edin. Cerrahi implantasyon kadar buz üzerinde bu hücreleri tutun. </li><li> Böyle anestezi indüksiyon ve saç kirlenmesini önlemek için steril ekipman ve materyallerden uzak kırpma olarak ameliyata farelerin hazırlanması için gerekli aktiviteleri yapın. </li><li> Ve dakika başına 1 L (yakl.% 2.1) sabit bir konsantrasyonu, bir akış oranında oksijenle birlikte izofluran buharlaştırıcı kullanılarak izofluran teneffüs ettirilerek farelerde, genel anestezi neden. Not: Sistem kendi kendine yeten ve hassas bir buharlaştırıcı, bir oksijen kaynağı ve gaz / anestezik atma için gerekli bir solunum devresine bağlı olan bir aktif karbon filtresi içerir. </li><li> Anestezi, ameliyat sırasında ağrı geçiyor gelen hayvan önlemek için yeterli olduğundan emin olun. Ayak-tutam gerçekleştirin ve non-sorumluluk gibi için hayvan gözlemlemekcilik anestezi onaylayın. </li><li> O zaman, burun konisi vana hattı, mühür kutusuna açık geçiş yapın. </li><li> En kısa sürede fare anestezi olarak, kurutma ve hasardan koruyucu bir önlem olarak kornealara bir göz merhemi küçük bir miktar uygulayın. </li><li> Daha sonra, burun konisi düzgün (bakım anestezi için) yerleştirilir ve bağlı olan, hazırlık alanı hayvan taşımak. Bu hazırlık alanında Depilasyon tarafından ameliyat için cerrahi kesi yeri hazırlayın. </li><li> Cerrahi alan diğer tüm aktivite ücretsiz bir yerde olduğundan emin olun. </li><li> Çalışma yüzeyi sağlam ve uygun dezenfekte, unsoiled ve dağınıklıktan arınmış ameliyattan önce olduğundan emin olun. Keten ya da üzerinde cerrahi tepsi steril parça yerleştirin. </li><li> Operatif alan ameliyatı yapan yalnızca kişilerin mevcut olduğundan emin olun. Cerrahi oda uygun bir dezenfeksiyon ile temizlenmeli ve uygun bir temizleyici ile süpürüldü ve püskürtülür emin olunctant. </li><li> O da uzak kapılar ve hava akımlarından olarak windows konumlandırılmış sitenin kirlenme giden toz yayılabilir emin olun. </li><li> Steril aletler ile hayatta kalma ameliyat gerçekleştirin. Ya üreticinin tavsiyesine veya otoklav göre dezenfektan aletleri ıslatın. Kullanıma hazır olan temel steril malzemeleri kullanın. </li><li> Ayrı araçlar işlevlerine göre steril alanlara bulaşmasını önlemeye yardımcı olur. </li><li> Hayvanın karaciğeri erişmek için kesi (orta hat insizyonu) sitesinde etrafında yaklaşık 1 inç tıraş. Ameliyat bölgesinde uzak hayvandan saç çıkarın. </li><li> Tıraştan sonra sabunlu dezenfektan (betadin cerrahi fırçalayın) alanı fırçalayın ve steril PBS solüsyonu ile aşırı dezenfektan silsin. Yaklaşık 5 dakika süren tüm bodur süreci ile, bu birkaç kez yapın. Çıkarın ve kullanılan eldivenler atılır. </li><li> Daha sonra, bu tür Surgic olarak koruyucu giysi değiştirmekal elbisesi, bodur üst ve yüz maskesi. Sonraki cerrahi eldiven takmadan önce doğru fırçalayın solüsyonu ile eller dezenfekte. Not: Bu dökülme ve potansiyel kirleticiler ile cerrahi siteyi kirlenmesine önlemek için gerekli bir adımdır. </li></ol> 2. Cerrahi <ol><li> Anestezi tüm süre boyunca sıcaklık için bir dış ısı kaynağı sağlar. Anestezi termoregülasyonun bozuklukları neden olduğundan hayvan bazı hipotermi karşılaşabilirsiniz; Bu nedenle, vücut ısısını muhafaza. </li><li> Ameliyat boyunca sırtında fare yerleştirin. </li><li> Cerrahi bantlar parçaları ile ameliyat masasına ön bacaklarda, arka bacaklarda ve fare kuyruğu sabitleyin. </li><li> Xyphisternum düz bir çizgi kesi hemen aşağı olun. </li><li> Karaciğeri maruz steril kendini istinat cerrahi retraktörü kullanın. </li><li> Bir şırınga yavaş ve dikkatli bir 20G iğne sahip olan 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 içeren PBS 100 ul enjekteKaraciğerin sağ lobunun içine fare HCC hücreleri. </li><li> İğneyi çıkardıktan sonra, bağlı karaciğer yüksek vaskülarite için herhangi bir potansiyel kanamayı durdurmak için en az 1 dakika süreyle steril bir pamuklu çubuk uygulayın. </li><li> Cerrahi klipleri kullanarak cilt kapatılması ve ardından bir emilebilir sütür ile cilt altı dokusu kapatın. Daha sonra, betadin fırçalayın ile bir kez daha yara temizleyin. Not: Bu cerrahi yaranın kapanmasını sağlayacaktır. </li><li> Subkutan serum fizyolojik 100 ul verir. </li></ol> 3. Post-cerrahi <ol><li> Ameliyattan hemen sonra, fare durumun bakıcıları bildirmek için bir ameliyat sonrası kimlik kartı ile temiz bir kafes fare aktarın. Su ve yiyecek sağlamak. Not: Bizim tecrübelerimize göre, ilk 24 saatlik süre sonrası ameliyat için ıslak yiyecek ve su ile tek başına ev sahipliği eğer sadece en iyi ücret olacak ameliyat geçirmiş bir fare. </li><li> 38 ºC aşarak değil ısı üreten bir ısı lambası ile hayvan sıcak tutun. UFare tamamen iyileşti kadar sıcaklığını ölçmek için bir termometre se. </li><li> Tercihen kağıt yatak ile bir kafes içinde Evi hayvan konfor sağlamak için. </li><li> İlk kurtarma sonra, rahatsızlık, kanama, ağrı ve sıkıntı belirtileri için hayvan izleyin. Ağrı gidermek için buprenorfini (0.05 -0.1 mg / kg) verin. Yakından yaklaşık 2 saat boyunca aktivitesi, davranış ve görünüm, hem de su ve gıda tüketimi izler. Ayaktan ise, farelerin normal, normal konut için geri alan hayvan taşımak ve 24 saat sonrası ameliyat için 6-12 saat aralıklarla izlemeye devam. İsterseniz bir ağırlık kontrolü yapın. </li><li> Hayvan sorunları iyileşirken sahip Ancak, eğer uygun destekleyici bakım eylemleri. Fareler kurtarmak için yapamıyorsanız, insancıl CO 2 boğulma ve servikal dislokasyon yoluyla fareler euthanize. Ötenazi için onaylanan kurumsal yönergeleri izleyin. </li><li> Post-cerrahi, genellikle observab olan HCC klinik kanıt kontrolvücut kondisyon skoru le olarak anlamlı bir azalma. Not: Bu noktada, bir primer tümör olasılıkla karaciğerde gelişmiş ve metastatik yatakları olasılıkla akciğer gelişmiştir. </li><li> Bu noktada, insani ötenazi deneyde yer alan (deney ve kontrol) tüm fareler kurban. Karbon dioksit ile boğularak fareler Konu: çok yavaş 5 -10 dakikalık bir süre boyunca bölme içine karbon dioksitin bırakın. Bu solunum durmasına neden olur. </li></ol>

<ol><li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capture%2C+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+and+prognostic+importance+of+epithelial-mesenchymal+transition+in+liver+cancers%3A+insights+from+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+upregulation+of+HGF+and+c-Met+drives+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> PloS One. 8, e63765(2013).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+growth+factor+upregulation+promotes+carcinogenesis+and+epithelial-mesenchymal+transition+in+hepatocellular+carcinoma+via+Akt+and+COX-2+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).</li>
<li>Fujiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+animal+model+for+in+vivo+study+of+liver+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology+%3A+WJG%22%5BJournal%5D)">A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis.</a> World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).</li>
<li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physics+of+cancer%3A+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).</li>
<li>Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+mouse+model+of+metastatic+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid+Official+Journal+of+the+American+Thyroid+Association%22%5BJournal%5D)">An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer.</a> Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).</li>
<li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Wang, T., Zhang, L., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclooxygenase-2+and+Akt+mediate+multiple+growth-factor-induced+epithelial-mesenchymal+transition+in+human+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Cyclooxygenase-2 and Akt mediate multiple growth-factor-induced epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 27, 566-578 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hallmarks+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The hallmarks of cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li>
<li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nature Reviews Cancer. 2, 563-572 (2002).</li>
<li>Kim, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+self-seeding+by+circulating+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor self-seeding by circulating cancer cells.</a> Cell. 139, 1315-1326 (2009).</li>
<li>Stolpe, A., Pantel, K., Sleijfer, S., Terstappen, L. W., den Toonder, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation+and+diagnostics%3A+toward+routine+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use.</a> Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).</li>
<li>Saad, F., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+current+role+of+circulating+tumor+cells+in+the+diagnosis+and+management+of+bone+metastases+in+advanced+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer.</a> Future Oncology. 8, 321-331 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bu yazıda yöntemin derinlemesine bir açıklama (Şekil 2) son zamanlarda Ogunwobi ve HCC metastazı ortotopik singeneik fare modeli başarılı kuruluş arkadaşları tarafından rapor edildi verilir 3. Bu prosedür için tümörlerin alım oranı yüksektir. Biz daha önce% 100 3 tümör almak oranı gözlemledik. Ancak, take oranı araştırmacının yetkinlik bağlı değişken olabilir. Eğitim altında yeni bir yüksek lisans öğrencisi tarafından gerçekleştirilen son deneyde, tümör almak oranı% 40 gibi düşük o...

Hepatosellüler karsinom (HCC), kötü prognozu ve düşük yaşam beklentisi ile en ölümcül kanserlerden biridir. Kansere bağlı ölümlerin neredeyse tamamı, hastalığın kaynak organdan ek uzak organlara metastatik yayılımına bağlıdır2-6. HCC ilerlemesi karmaşık bir süreçtir. Bu nedenle, metastatik HCC'de doğal olarak bulunan tümör mikroçevresini hayvan modellerinde modelleyebilmek, insanlarda ilgili mekanizmaları ortaya çıkarmanın başarılı ve yararlı bir yolu olabilir. 7Ne yazık ki, kanser metastazı mekanizmaları hala büyük ölçüde belirsizdir. Bu nedenle, HCC3,5 gibi kanserlerin metastazlarının altında yatan moleküler mekanizmaları aydınlatmamızı sağlayacak hayvan modellerinin oluşturulmasına ihtiyaç vardır.
Fare model sistemleri, metastatik insan kanserlerinin tedavisi için mekanizmaları tanımlamak ve yeni stratejileri değerlendirmek için çok yararlı bir yaklaşımdır5,8. Şu anda var olan çeşitli fare model sistemleri, araştırmacıların hastalığın karmaşıklığını doğru bir şekilde tasvir etme çabalarının bir kanıtıdır5,8,9.
Ogunwobi ve meslektaşları yakın zamanda HCC3'te metastaz çalışması için yeni bir ortotopik sinjeneik fare modelinin kurulduğunu göstermek için bir sağkalım cerrahi yaklaşımı kullandılar. Çalışmaları, agresif ve metastatik HCC'lerin özelliklerini özetleyen "hasta benzeri" bir fare modeli oluşturdu3. Ayrıca, bu fare model sisteminin dolaşımdaki tümör hücrelerinin biyolojisini incelemek için kullanılabileceğini ve bunun kanser metastazı3 mekanizmaları hakkında yeni bilgiler edinme potansiyeline sahip olduğunu gösterdiler.
Bu makalenin amacı, HCC metastazı3'ün bu "hasta benzeri" ortotopik sinjeneik fare modelini oluştururken kullanılan metodolojiyi ayrıntılı olarak açıklamaktır. BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin, hayatta kalma cerrahisi kullanılarak kendi içinde yetiştirilmiş vahşi tip bağışıklık yetkin laboratuvar faresi türü olan BALB/c3'ün doğrudan karaciğerine (orijin organı) nasıl implante edileceğine ilişkin metodoloji açıklanacaktır. İnsan tümör hücrelerinin bağışıklık yetmezliği olan farelere implante edildiği diğer fare ksenogreft tümör modellerinin aksine, bu sistem sinjenektir ve bu nedenle tümör metastazında bağışıklık sisteminin rolünü incelemek için uygundur3,5,8. Bu yaklaşım, katı organ kanserlerinde metastaz mekanizmalarını incelemek için yaygın bir kullanım kazanacaktır.

<table><tbody><tr><td>Mikro Diseksiyon Cımbız&nbsp;</td><td>Roboz</td> <td>(RS-5040)</td> <td>Uç 0.20 x 0.12 mm</td></tr><tr><td>Graefe Mikro Diseksiyon Forseps, tırtıklı kavisli uç</td><td>Roboz</td> <td>(RS-5111)</td> <td>1 X 2 diş, kavisli uç genişliği 0.6 mm</td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Retraktörü-Agricola (3 x 3 uçlu)</td><td>Roboz</td> <td>(RS-6501)</td> <td>Kör 3 X 3 uç, derinlik 4 mm, yayılmış 25 mm</td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Retraktörü-Goldstein (3 x 3 uçlu)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6503)</td><td>Künt, 3 X 3 çatal, derinlik 4 mm, yayılmış 19 mm</td></tr><tr><td>Jameson Kaliper (Tümörleri ölçer)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6466)</td><td>80 mm/3 inç ölçekli, krom kaplama&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Makası, büyük halka sisörler, düz ve keskin</td><td>Roboz</td> <td>(RS-5852)</td> <td>23 mm bıçaklar, uzunluk 4 inç, düz saplar ve büyük halkalar</td></tr><tr><td>Hassas diseksiyon prosedürleri için bıçaklı neşter</td><td>Roboz</td> <td>(RS-9861-36)</td><td></td></tr> <tr><td>Neşter sapı &nbsp;</td><td>Roboz</td> <td>(RS-9884)</td> <td>Katı</td></tr><tr><td>Littauer Dikiş Sissorları</td><td>Roboz</td> <td>(RS-7074)</td> <td>Uzunluk 4.5 inç</td></tr><tr><td>Kahverengi iğne tutucu, kolay dikiş bağlama için</td><td>Roboz</td> <td>(RS-7960)</td> <td>Dışbükey çene, ince tırtıklar</td></tr><tr><td>Refleks 7MM yara klipsleri refleks 7 klipsli aplikatör</td><td>Roboz</td> <td>(RS-9262)</td> <td>güvenli, güvenli alternatif yara kapatma yöntemi</td></tr><tr><td>Alet tepsisi ve kapağı</td><td>Roboz</td><td>RT-1350S</td><td></td></tr><tr><td>Çıkarılabilir bıçaklı mini kesme makinesi</td><td>Roboz</td><td>(RS-5903)</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 (Mikrop Sonlandırıcı) Kuru Sterilizatör</td><td>Roboz</td><td>Ds-400, Ds-401, DS-501</td><td>Mikro diseksiyon aletlerinin hızlı dekontaminasyonu için. &nbsp; Aletler 15 saniye içinde dekontamine olur.</td></tr><tr><td>Mikroenjeksiyon iğneleri</td><td>VWR</td><td>BD305125</td><td>25G İğne</td></tr></tbody></table>

bir &quot;hasta gibi&quot; ortotopik singenik fare modeli hepatoselüler karsinomu metastazı

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

Kansere bağlı ölümlerin büyük çoğunluğu primer tümörün kendisinden ziyade kanserin metastazı sonucu oluşur. Yine de, kanser metastazının altında yatan mekanizmalar hala belirsizdir. Hayvan modelleri, metastatik kanserlerin tedavisinde mekanizmaların aydınlatılması ve yeni stratejilerin değerlendirilmesi için gereklidir. Burada, katı organ tümörlerinin metastaz mekanizmalarını araştırmak için "hasta benzeri" bir ortotopik sinjeneik fare modelinin derinlemesine bir açıklaması sağlanmaktadır. BNL 1ME A.7R.1 fare hepatosellüler karsinom hücrelerinin, kendi içinde yetiştirilmiş vahşi tip immün yetkin laboratuvar faresi türü BALB/c'nin doğrudan karaciğerine (orijin organı) sağkalım cerrahi implantasyonu tarif edilmiştir. Bu metodolojinin başarısı ve tekrarlanabilirliği, katı organ kanseri metastazının biyolojik mekanizmalarının aydınlatılmasında yaygın olarak kullanılmasını önermektedir.

Balb / c fare karaciğerleri 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinde implante edildi. HCC gelişme Klinik kanıtlar 63 gün ameliyat sonrası gözlemlenebilir oldu. Sonuç olarak, fare insanca kurban edilmiştir. Otopsi Öldürülen farelerin üstünde gerçekleştirilmiştir. Akciğerler ve karaciğer, resekte edilen ve dikkatli bir brüt incelenmesi makroskopik tümörlerin belirlenmesi için gerçekleştirilmiştir. Bir farede, yüzeysel tümör karın duvarı (Şekil 1A) bazı bağlantı ile karaciğerin yüzeyi üzeri...

Kanserin metastaz kansere bağlı ölümlerin önemli bir nedenidir. Biz solid organ tümörlerinin metastaz mekanizmaları çalışmak için bir &quot;hasta&quot; gibi ortotopik singenik fare modeli sistemi kurulması için hayatta kalma cerrahi yönteminin derinlemesine bir açıklama sağlar.

Bir &quot;Hasta gibi&quot; Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Bu prosedürün genel amacı, hepatoselüler karsinomdaki metastaz mekanizmalarını incelemek için hastaya benzer bir Ortotopik Sinyeneik fare model sistemi kurmaktır. Bu işlem, öncelikle implantasyon için fare hepatoselüler karsinom hücrelerinin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, alıcı sinyeneik hayvanın abdomen bölgesi açılır ve hücreler karaciğerin sağ lobuna dikkatlice enjekte edilir.Nihayetinde, bu metodolojinin başarısı ve tekrarlanabilirliği, hepatosellüler karsinom metastazının biyolojik mekanizmalarının aydınlatılmasında yaygın kullanımı için önerilmektedir. Bu tekniğin, fare ksenogreft tümör modelleri gibi mevcut tekniklere göre temel avantajı, senjenik tümör model sistemimizin tümör metastazında immün yanıtın rolünün araştırılmasına olanak tanımasıdır. Bu prosedürü laboratuvarımızdan lisans öğrencisi Michelle Nadu ile birlikte göstereceğiz. Hücreleri implantasyon için hazırlamak adına, %60 ila %70 konfluens düzeyindeki hepatosellüler karsinom hücresi kültürünü beş mililitre PBS ile iki kez yıkayarak başlayın.Hücre kültürünü iki mililitre tripsin ile 37 °C'de inkübe edin. Beş dakika sonra hücreleri sayın ve PBS içerisinde 5 × 10⁵ hücre/mL olacak şekilde dilüe edin. Ardından, her fare için steril 1,5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpüne 100 µL'lik hücre alikotları aktarın ve hücreleri buz üzerinde bekletin.Cerrahi prosedüre başlamadan önce, ayak parmağı aracılığıyla anestezinin uygun seviyede olduğunu doğrulayın. 16 ila 20 gram ağırlığındaki sağlıklı yetişkin bir bsy faresinin ayak parmağını sıkıştırın, gözlerine merhem uygulayın ve hayvanın karnının orta hattı boyunca yaklaşık bir inçlik alanı tıraş edin. Ardından bir çift lateks eldiven giyin ve açığa çıkan cildi sabunlu bir dezenfektan fırçasıyla birkaç kez yıkayın, ardından yaklaşık beş dakika boyunca steril PBS ile durulayın.Cilt hazırlandığında, eldivenleri atın ve uygun kişisel koruyucu ekipmanı giyin. İşlem sırasında anestezik hipotermiyi önlemek için harici bir ısı kaynağı sağlayın ve ardından fareyi sırtüstü pozisyonda sabitlemek için hayvanın uzuvlarına ve kuyruğuna cerrahi bant yapıştırın. Sonrasında, xiphos sternumun hemen altına düz bir insizyon yapın ve karnı açmak için steril, kendi kendine tutunan bir cerrahi retraktör kullanın.Karaciğer görünür olduğunda, 20 gauge iğne takılı bir mililitrelik bir şırıngaya bir alikot hücre aspire edin ve 100 microliter hepatosellüler karsinom hücresinin tamamını karaciğerin sağ lobuna yavaşça ve dikkatlice enjekte edin. İğneyi çıkardıktan sonra, kanamayı durdurmak için en az bir dakika boyunca steril bir pamuklu çubuk uygulayın. Ardından, deri kapatılmadan önce cilt altı dokusunu kapatmak için emilebilir bir suter kullanın.Surgical kliplerle, yarayı başka bir dezenfektan scrub ile temizleyin ve deri altına 100 µL normal salin uygulayın. Ardından ameliyattan hemen sonra, fareyi en az 24 saat boyunca yanına başka fare konulmamış, kağıt altlıklı temiz bir kafese aktarın. Bu BSY fare karaciğerlerine, az önce gösterildiği gibi beş x 10⁶ ME.A fare hepatosellüler karsinom hücresi implante edilmiştir.Bir farede, okla belirtildiği üzere 63 gün sonra hepatosellüler karsinom gelişiminin klinik kanıtları gözlemlenmiştir. Karaciğer yüzeyinde, karın duvarına kısmen yapışık yüzeysel bir tümör saptanmıştır. Bu fareden alınan akciğerler, görünür kanamalı nekroz alanları sergileyerek anormal bir morfoloji göstermiştir.İkinci bir farede, karaciğer makroskobik olarak anormal görünmüş ve bu anormallik, beklenen kontrolle çok güçlü bir benzerlik gösteren yüzeyel bir tümörü andırmıştır. İmplantasyon yapılmayan farelerde ise ne karaciğerde ne de akciğerlerde tümör gelişmemiştir. Uzmanlaşıldığında, bu ortotopik sinjenik fare modeli, metastazın ve hepatosellüler karsinomun biyolojik mekanizmalarının aydınlatılması için iyi bir platform sağlayabilir.

a-patient-like-orthotopic-syngeneic-mouse-model-hepatocellular

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Çekum üzerine bir kanser hücre süspansiyonu çekal duvar subkutan tümörün bir parçasının veya transplantasyon içine enjeksiyon: İki teknikleri bu modeli kurmak için kullanılan olabilir. Bu model, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.

Kolorektal Kanser Ortotopik Fare Modeli

Immünyetmezligi farelerde insan tümör ksenogratflardır kanser biyolojisi okumak için değerli araçlardır. Insan hepatoselüler karsinoma hücreleri ya da tümör fragmanlarından deri altı ve intrahepatik ksenograftları oluşturmak için özel protokolleri açıklanmıştır. Alıcı farede hepatektomiden tarafından uyarılan karaciğer rejenerasyon intrahepatik naklini kolaylaştırmak için bir strateji olarak sunulmuştur.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

Karaciğer metastazlarının klinik öncesi bir sıçangil modeli, hemispleen enjeksiyon tekniği ile gerçekleştirilir.

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

İmünokompetan farelerde böbrek hücreli karsinom ortotopik bir model uygulanması Araştırmacı aynı hayvanda bir primer böbrek tümörü, akciğer metastazların varlığı ile tanımlanan bir klinik açıdan ilgili bir sistem elde edilir. Bu sistem, klinik öncesi, in vivo olarak tedaviler çeşitli test etmek için de kullanılabilir.

Preklinik Tedaviler Nicel ve Boyuna Değerlendirme A sinjeneik Fare Modeli Yapmış Bir Renal Hücreli Karsinom

Burada, hepatosellüler kanserin (HCC) tipik bağışıklık özelliklerini özetlemek için karaciğer kanserinin klinik olarak ilgili bir murine modelinin gelişimini açıklıyoruz.

Hepatik İnflamasyon ve Fibrozis Ortamında Ortaya Çıkan Hepatosellüler Kanserin Onkojenik Hepatositkaynaklı Ortotopik Fare Modeli

Ortotopik insan karaciğeri metastatik uveal melanom ksenogreft fare modelleri, hasta kaynaklı tümör öbek ve kültürlü insan uveal melanom hücre hatları ile iğne enjeksiyon teknikleri ile cerrahi ortotopik implantasyon teknikleri kullanılarak oluşturulmuştur.

İmmünficient Farelerde Karaciğer Ortotopik İnsan Uveal Melanom Xenograft Platformu Üretimi

Burada, hepatik arter ligasyonu olan ve olmayan ortopik hepatosellüler karsinom ksenogreftleri oluşturmak ve [18 F]Floromisonidazol ([18 F]FMISO) ve [18 F]Florodeoksiglukoz ([18F]FDG) kullanılarak tümör hipoksisinin non-invaziv pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntülemesini gerçekleştirmek için bir protokol sunuyoruz.

Hepatosellüler Karsinomun Ortotopik Fare Modelinde Non-İnvaziv PET/MR Görüntüleme

Pankreatik duktal adenokarsinomun (PDAC) sinjenik fare ortotopik allogreftleri, hastalık alt tiplerinin biyolojisini, fenotiplerini ve terapötik yanıtlarını özetler. Hızlı, tekrarlanabilir tümör progresyonları nedeniyle, preklinik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadırlar. Burada, pankreasa sinjenik murin PDAC kültürleri enjekte ederek bu modelleri oluşturmak için ortak uygulamalar gösteriyoruz.

Pankreas Kanserini Modellemek için Sinjenik Fare Ortotopik Allogreftleri

Öğrenin hepatoselüler karsinom metastazını araştırmak için ortotopik singenik fare modeli kurma yöntemini. Bu teknik immün yanıtın tümör davranışındaki rolünü inceleyerek kanser araştırmalarında yüksek tekrarlanabilirlik sağlar.

Bir "Hasta gibi" Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

Daha fazla video keşfet