Bir "Hasta gibi" Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

Kanserin metastaz kansere bağlı ölümlerin önemli bir nedenidir. Biz solid organ tümörlerinin metastaz mekanizmaları çalışmak için bir "hasta" gibi ortotopik singenik fare modeli sistemi kurulması için hayatta kalma cerrahi yönteminin derinlemesine bir açıklama sağlar.

Bu prosedürün genel amacı, hepatosellüler karsinomda metastaz mekanizmalarını incelemek için Ortotopik Sinjeneik fare model sistemi gibi bir hasta sistemi kurmaktır. Bu, ilk olarak fare hepatosellüler karsinom hücrelerinin implantasyon için hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, alıcı sinjeneik bir hayvanın karnı açılır ve hücreler dikkatlice karaciğerin sağ lobuna enjekte edilir.

Sonuç olarak, bu metodolojinin başarısı ve tekrarlanabilirliği, hepatosellüler karsinom metastazının biyolojik mekanizmalarının aydınlatılmasında yaygın olarak kullanılmasını önermektedir. Bu tekniğin fare ksenogreft tümör modelleri gibi mevcut tekniklere göre en büyük avantajı, syn genetik tümör model sistemimizin tümör metastazında immün yanıtın rolünün araştırılmasına izin vermesidir. Bu prosedürü benimle birlikte gösteren, laboratuvarımızdan bir lisans öğrencisi olan Michelle Nadu olacak: Hücreleri implantasyona hazırlamak için, hepatosellüler karsinom hücrelerinin %60 ila 70 oranında birleşen bir kültürünü beş mililitre PBS ile iki kez yıkayarak başlayın.

Hücre kültürünü 37 santigrat derecede iki mililitre tripsin ile inkübe edin. Beş dakika sonra, hücreleri sayın ve mililitre PBS başına beş kez 10 ila beşinci hücreler arasında seyreltin. Daha sonra, hücrelerin 100 mikrolitrelik alikotunu fare başına bir steril 1.5 mililitre mikro santrifüj tüpüne aktarın ve hücreleri buzun üzerine yerleştirin.

Cerrahi işleme başlamadan önce, ayak parmağınızla uygun anestezi seviyesini onaylayın. 16 ila 20 gramlık sağlıklı bir yetişkin bsy farenin gözlerine çimdikleyin, merhem sürün ve hayvanın karnının orta hattı etrafındaki yaklaşık bir inçlik alanda tıraş edin. Daha sonra bir çift lateks eldiven giyin ve açıkta kalan cildi sabunlu bir dezenfektan ovma ile birkaç kez yıkayın, ardından yaklaşık beş dakika steril bir PBS durulama yapın.

Cilt hazırlandıktan sonra eldivenleri atın ve uygun kişisel koruyucu ekipmanı giyin. İşlem sırasında anestezik hipotermiyi önlemek için harici bir ısı kaynağı sağlayın ve ardından fareyi sırtüstü pozisyonda sabitlemek için hayvanın, uzuvlarının ve kuyruğunun üzerine cerrahi bant yerleştirin. Daha sonra, xiphos sternumdan hemen daha düşük düz bir kesi yapın ve karnı açmak için steril bir kendi kendini tutan cerrahi ekartör kullanın.

Karaciğer görünür olduğunda, 20 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik şırıngaya bir hücre alikotu aspire edin ve hepatosellüler karsinom hücrelerinin 100 mikrolitresinin tamamını karaciğerin sağ lobuna yavaş ve dikkatli bir şekilde enjekte edin. İğneyi çıkardıktan sonra, herhangi bir kanamayı durdurmak için en az bir dakika steril bir pamuklu çubuk uygulayın. Daha sonra deri altı dokusunu kapatmak için emilebilir bir sütür kullanın ve ardından cildi kapatın.

Cerrahi klipslerle, yarayı başka bir dezenfektan ovma ile temizleyin ve deri altına 100 mikrolitre normal salin uygulayın. Daha sonra ameliyattan hemen sonra, fareyi en az 24 saat boyunca refakatçi olmadan ve kağıt yataklı temiz bir kafese aktarın. Bu BSY fare karaciğerleri, altı bir ME ile beş kez 10 kez implante edildi. Bir fare hepatosellüler karsinom hücreleri az önce gösterildiği gibi.

Hepatosellüler karsinom gelişiminin klinik klinik kanıtı, bir farede okla gösterildiği gibi 63 gün sonra gözlenebilirdi. Karaciğer yüzeyinde, karın duvarına bir miktar yapışma ile yüzeysel bir tümör gözlendi. Bu farenin akciğerleri anormal bir morfoloji sergiledi ve aynı zamanda görünür kanama nekrozu alanlarını gösterdi.

İkinci bir farede, karaciğer büyük ölçüde anormal görünüyordu ve anormallik, beklenen kontrol olarak yüzeysel bir tümöre çok benziyordu. İmplante edilmeyen farelerde karaciğerde veya akciğerlerde tümör gelişmedi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu ortotopik syn genetik fare modeli, metastaz ve hepatosellüler karsinomun biyolojik mekanizmalarını aydınlatmak için iyi bir platform sağlayabilir.