Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta

Bu prosedürün genel amacı, çok dokulu parafin bloklarında doku tanımlamasına yardımcı olacak bir araç oluşturmaktır. Bu, önce HistoGel'in parlak renkli bir jel tıkaç oluşturmak için doku işaretleme boyası ile birleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, standart doku işleme ve gömme tekniklerini takip ederek renkli HistoGel tıkaçlarının işlenmesi ve gömülmesidir.

Daha sonra, küçük silindirleri çıkarmak için bir biyopsi zımbası kullanılır. Bunlar numune yönlendirme etiketleri veya noktadır. Son adım, noktayı, noktanın konumu ve her bir numunenin kolay referans için dikkatlice belgelendiği çok dokulu bir bloğa gömmektir.

Sonuç olarak, nokta, doku mikrodizilerinde ve çoklu doku bloklarında numune oryantasyonu ve tanımlanması için net bir görsel ipucu sağlar. Bu tekniğin sütürler veya asimetrik çekirdekler gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, noktanın dokuyu değiştirmemesi ve optimal analiz için numunelerin düzenlenmesinde esnekliğe izin vermesidir. Bu yöntem için ilk olarak, araştırmacılardan birden fazla hayvandan alınan doku örneklerini paradan tasarruf etmek ve analizi basitleştirmek için tek bir parafin bloğunda birleştirme talepleri aldığımızda aklımıza geldi: Lekeleri hazırlamak için, 15 mililitrelik konik bir tüpte bir mililitre doku işaretleme boyasına 50 miligram biyokimyasal dereceli BSA ekleyerek başlayın.

Karışımı tamamen eriyene kadar en az bir dakika vorteksleyin. Daha sonra dokuz mililitre hidroksietil aros işleme jelini 15 mililitrelik konik bir tüpe yükleyin ve mikrodalgada% 30 güçte ısıtın. Jel tamamen eriyene kadar ısıyı on saniyelik artışlarla vurun.

Şimdi erimiş işleme jeli ve boya BSA çözeltisini tek bir 15 mililitrelik konik tüpte birleştirin ve bir pipetle iyice karıştırın. Daha sonra çözeltiyi girdaplayın ve katılaşması için birkaç saat buzdolabına aktarın. Sertleştikten sonra, jel içindeki katı dilatı dar bir spatula ile hafifçe serbest bırakarak çıkarın.

Fişi beş milimetre kalınlığında bölümler halinde dilimleyin. Yuvarlatılmış uçları kullanmayın. Üç ila altı bölümü bir histoloji kasetine aktarın ve bunları %70 Etanole batırın,% 70 etanol çözeltisini her iki ila dört saatte bir ve tapalar tamamen susuz kalana kadar 24 saat boyunca en az üç kez değiştirin.

İşaretleme boyasının bir kısmını etanol çözeltisine süzeceklerdir. Taze etanol değişikliklerinin kullanılması, başlangıçta fazla boyanın bir kısmının atılmasına yardımcı olur ve bu da rengi sızma olasılığı daha düşük olan daha temiz bir tıkaç ile sonuçlanır. Daha sonra, kasetleri her banyoda bir saat boyunca% 80 etanole ve ardından% 95 etanole aktarın.

Boya, jel tıkacından sızabilir, bu da diğer dokuları ve otomatik bir doku işlemcisindeki sıvı reaktifleri etkileyebilir. Bu nedenle, manuel dehidrasyon şiddetle tavsiye edilir. Bununla birlikte, otomatik işleme eşit derecede etkilidir.

Dehidrasyonu, her biri bir saat boyunca% 100 etanol içinde üç yıkama ile tamamlayın. Her banyoda bir saat boyunca üç kez atik hidrokarbonlara veya ksilenlere batırarak numuneleri temizleyin. Şimdi bir saatlik üç banyo ile bölümlere sızın.

Erimiş parafin içinde. İşlenmiş bölümleri her zamanki gibi gömün ve blok oda sıcaklığındayken, nokta maçaları yapmak için dermal bir zımba iğnesi kullanın. Bir blok 22 milimetre çekirdek veya daha fazla 1,5 milimetre çekirdek yapabilir.

Birlikte gömülecek tüm bireysel doku parçalarının istenen konumlarını ve kimliklerini ve noktanın konumunu belirtmek için bir diyagram yaparak başlayın. Elinizin altında bulundurmak için bir kopya hazırlayın. Numune yönlendirme etiketlerinin başarılı bir şekilde kullanılması, tüm biyonumuneleri, konumlarını ve noktaya göre konumlarını doğru bir şekilde detaylandıran net ve takip etmesi kolay bir biyonumune haritası gerektirir.

Doku parçalarını işledikten sonra, bunları gömme istasyonuna yerleştirin. Doku oryantasyon diyagramına göre, doğru oryantasyon kesinlikle kritiktir. Spot çekirdeğin, bloğa gömülecek tüm doku parçalarından daha uzun olması da çok önemlidir.

Doku düzenlemesini tamamladıktan sonra lekeleri gömün. Parafin katılaşana kadar her noktayı forseps ile dik tutun, böylece devrilmez. Bir veya iki dakika yeterli olacaktır.

Manuel bir TMA kiti için, TMA kalıbını erimiş parafin ile doldurun. Kalıp soğurken, noktaları dizi kenar boşluklarına benzer şekilde tutturun. Şimdi bölümleri bölümlere ayırın ve nokta ile boyayın.

Standart bir yaklaşım kullanılarak, burada beş mikronluk kesitler yapılır. Bölümleri slaytlara koymak için, 40 santigrat derece su banyosunda yüzdürün ve ardından pozitif yüklü cam slaytlara aktarın. Slaytlara takıldıktan sonra, en az 20 dakika boyunca 60 santigrat derecede kurutun.

Slaytlar artık manuel olarak veya otomatik bir boyama sisteminde boyanabilir. Rutin h ve d boyama için, özel lekeler veya immünohisto kimya lekeleri yuvarlak parlak renkli olarak ortaya çıktı. parafin bloğunda ve tüm parafin bölümlerinde.

Lekeler, farklı bireylerden ve tedavi gruplarından benzer görünen dokuları içeren çoklu doku bloklarında kolay oryantasyon ve doku tanımlamasına izin verdi. Bir dokuda kullanıldığında, mikrodizi noktaları, her çekirdeğin değerli doku örnekleri için kullanılmasına izin verdi ve noktalar, bir doku mikrodizi çekirdeğine bitişik olarak kolayca seçilebildi. Bu prosedürü denerken, biyolojik numunenin ve bloktaki noktanın doğru ve net bir şekilde belgelenmesinin, başarılı kullanımı için kritik öneme sahip olduğunu hatırlamak önemlidir.

Bu videoyu izledikten sonra, çok dokulu parafin bloklarında doku tanımlama yardımcısı olarak numune yönlendirme etiketinin nasıl kolayca oluşturulacağını ve kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız.