Name: Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: Öğrenin, çok doku parafin bloklarında doku tanımlamasını kolaylaştıran SpOT oluşturma yöntemini. HistoGel ve doku işaretleme boyası kullanarak renkli jel tıpalar hazırlayıp standart histoloji teknikleriyle işleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar yazının eleştiri sağlamak için Dr. Brent Harris teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmalar NIH / NCI hibe P30-CA051008 kısmen desteklenen Lombardi Kapsamlı Kanser Merkezi Histopatoloji ve Doku Paylaşılan kaynağın gerçekleştirilmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Kanser Enstitüsü veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

SPOT 1. İnşaat <ol><li> 1 dakika süre ile ya da tamamen çözülene kadar 15 ml konik bir tüp ya da 2 mi mikrofüj tüpüne ve vorteks 1 ml doku markalama boyaya Sığır Serum Albumin (BSA), 50 mg ekleyin. Not: Bu protokol için biyokimyasal Sınıf BSA kullanın. Diğer sınıflarda ve saflık test edilmemiştir iken, sınıf ve saflık SPOT başarısı üzerinde önemli bir etkisi olmazdı beklenmektedir. </li><li> Jel tamamen eriyene kadar 10 saniye artışlarla% 30 güçte bir mikrodalga bir 15 ml konik tüp Isı 9 ml hidroksietil agaroz jel işlem. </li><li> Tek bir 15 ml konik tüp içinde erimiş işleme jel ve boya-BSA çözüm birleştirin ve bir pipet ile iyice karıştırın. Çözüm vorteksleyin. </li><li> Bir kaç saat için ya da katı kadar bir buzdolabı içinde konik tüp yerleştirin. </li><li> Yavaşça konik tüp renkli jel fişi serbest bırakmak için uzun, ince, metal bir spatula ya da prob kullanın. </li><li> Cu bir neşter veya jilet kullanınJel 5 mm kalınlığında kesitler içine enine fişini t. Yuvarlak uçları çıkartın ve atık (Şekil 2A) olarak imha ediniz. </li><li> Histoloji kasetlerinde düz jel fiş bölümleri yerleştirin ve 1 saat% 70 etanol içinde tutun. 24 saatlik bir süre boyunca en az 3 değişiklikler için% 70 etanol çözeltisi 2-4 saat değiştirin. </li><li> (1 saat boyunca her birinin (örneğin, alifatik hidrokarbonlar çözelti, 3 kez temizleme daha sonra açık bir% 70 etanol,% 80 etanol,% 95 etanol,% 100 etanol (3 x değişiklikleri): El, bir etanol serisi (1 saat her birinden jel bölümleri işleme ksilenler yerine)) bu protokol kullanılmıştır, ksilenler ya da el ile ya da bir doku processer altında) da kabul edilebilir, ve 1 saat her), erimiş parafın (3x sızmasıdır. Not:% 100 etanol tam dehidrasyon öncesinde, boya otomatik doku işlemci diğer doku ve sıvı reaktifler etkileyebilecek jel fiş sızabilir. Böyle, manuel rehidrasyon tavsiye edilir gibi, ancak otomatik işleme equ olduğunumüttefiki etkili. </li><li> Metodolojisi (Şekil 2B) katıştırma standart parafin kullanılarak göm birden işlenmiş jel bölümleri. Blok soğumaya ve sertleşmeye ve daha sonra oda sıcaklığına çıkmasına izin verin. </li><li> Blok (Şekil 2C) tükenene kadar gömülü jel kesimlerinden nOKTA çekirdeklerini çıkarmak için istenilen büyüklükte bir dermal yumruk iğne kullanın. Bir tek blok 20 x 2 mm 2 çekirdek kadar sağlayabilir. Serin bir çekirdeği saklayın. Bu protokol dermal yumruk kullanın Şekiller, bkz 1,5 mm (Şekil 1D, 2D ve) ya da 2 mm (Şekil 1B, 1C ve 2C). </li></ol> 2. Orient Olmayan dizilmiş Bloklar noktalar kullanma <ol><li> İstediğiniz yerleri ve birlikte gömülü bireysel doku parçalarının her kimliklerini ve spot yerini belirtmek için bir doku yönlendirme şeması oluşturun. NOT: Doku yönlendirme şeması p içeren resimli haritasıtanımlayıcıları ve spot konumu ile etiketlenmiş tüm doku parçaları hysical yerleri. Bu elektronik oluşturulabilir veya elle çizilmiş olabilir. diyagram en son ürünü kullanırken teknisyen ve araştırmacı uygun ne olursa olsun yöntemi kullanılarak oluşturulmalıdır. Numuneler kolayca mikroskobik analizi sırasında tespit edilebilir, böylece bu harita araştırmacı için rehber olarak görev yapacak. Bu protokolde kullanılan harita elle çizilmiş. Bu doku, her parça ve spot çizilmiş ve gerçek doku bloğu ve slayt aynı pozisyonda etiketli bir doku blok ve cam mikroskop lamı göstermektedir. </li><li> Düzgün grossing ve işlem aşamaları boyunca tespit kalır sağlanması, normal doku parçaları işleyin. % 70 etanol,% 80 etanol,% 95 etanol,% 100 etanol (x3 değişiklikleri), alifatik hidrokarbonlar (ksilen yerine) (x3 değişiklikleri) ve erimiş doku infiltrasyonu parafin at: Bu protokol için 1 saat her dokuları işlemek 60 ° C (x3 değişiklikleri). NOT:ll dokular, standart histoloji laboratuvar prosedürleri takip işleme tabi tutulmalıdır. Bu durum, bireysel laboratuvar prosedürü, doku boyutu ve türü değişken olabilir, ama bu bir oryantasyon aracı olarak nokta kullanma yeteneği etkilemez. </li><li> Doku oryantasyon şemasına göre doğru atanan yerlerde gömme istasyonu doku parçaları düzenlemek. Her blokta nOKTA ve doku parçaları düzenlemek için nasıl teknisyeni rehberlik için bir referans olarak doku oryantasyon şeması kullanın. NOT: şemasında çizildiği gibi gömme teknisyen aynı düzende gömme istasyonu doku parçaları gömme istasyonu yanında elle çizilmiş oryantasyon haritası koymak ve düzenlenmiş bu protokolde. Bu, tüm doku parçaları, nihai ürün içinde doğru bir şekilde tanımlanabilir kalmasını sağlar. Bu çoklu doku blokları başarıyla kullanımı için çok önemlidir. </li><li> Tüm doku parçaları blokta gömülü olarak daha nOKTA çekirdek uzun boylu olduğundan emin olun. </li><li> Standart gömme yöntemi kullanılarak doku oryantasyon şemasına göre uygun yerlerde daha sonra doku parçaları ve son (enine) spot gömün. Gerektiğinde parafin nOKTA (lar) (1-2 dk) üzerinden düşmeyecek yeterince katılaşmış kadar, forseps ile dik nokta (lar) tutun. </li><li> Standart metodoloji kullanılarak nokta ile Bölüm ve leke parafin kesitleri. <ol><li> Bölümler, bir pozitif yüklü cam slayt, 40 ° C&#39;de bir su banyosu üzerinde yüzen ve yapışmış izin verin (yüksüz slaytlar test edilmemiştir). En az 20 dakika süreyle 60 ° C&#39;de bir kurutma fırınında slaytlar kurutun. </li><li> Aşağıdaki reaktifler ile bir otomatik Stainer slaytlar yerleştirin ve işlenmiş: ksilenler (ksilenler 1-5 dakika, ksilenler 2 ve 3-2 dakika, her biri),% 100 etanol (2 dakika),% 95 etanol (1 dakika), 80 % etanol (30 sn),% 70 etanol (30 sn), çalışan musluk suyu (2 dk), hematoksilin (1.5 dakika), çalışan musluk suyu (3 dk), asit alkol (1 dakika), çalışan musluk suyu (2 dk ), bluing reaktif madde (1 dakika), akan su (2 dakika),% 80 etanol (30 sn), eozin (1 dakika), akan su (10 sn),% 80 etanol (1 dakika),% 100 etanol (3 değişikliği, 2 dk), ksilenler (3 değişiklik, 30 saniye) ekstrakte edildi. </li><li> Montaj orta monte cam lamelleri ile slaytlar örtün. NOT: Bu protokol, histotechnician 5 um bölümlerde bir mikrotom üzerinde parafın bloklar kesitli. Biz otomatik bir Boyayıcı kullanılan bu protokol için, ancak eşit sonuçlar manuel boyama ile elde edilebilir. </li></ol></li></ol> TMAlar 3. nOKTA (Manuel TMA Kit) <ol><li> 2.1 tarif ve spot istenen yer (ler) atamak gibi bir doku yönlendirme şeması oluşturun. </li><li> Bir gömme istasyonunda erimiş parafin ile TMA kalıp doldurun. Kalıp soğutma gibi, doku oryantasyon şemasında gösterilen istenen yerlerde TMA kalıp kenarlarında ucundaki nokta (lar) embed. Gerektiğinde, parafin ha kadar dik forseps ile nokta (lar) tutuns nOKTA (lar) (1-2 dk) üzerinden düşmeyecek yeterli katılaşmış. </li><li> Üreticinin talimatlarına ve dizi marjları (Şekil 2D) Spot (lar) ın konumu ile ilgili olarak TMA çekirdekleri toplayın ve standart kesit ve boyama protokolleri uygulayın. NOT: Bu protokolde kullanılan kesit ve boyama yöntemleri görmek için adım 2.6 bakınız. </li></ol>

<ol><li>Jawhar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+microarray%3A+a+rapidly+evolving+diagnostic+and+research+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Saudi.+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool.</a> Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).</li>
<li>Dhir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+microarrays%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Bio%22%5BJournal%5D)">Tissue microarrays: an overview.</a> Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).</li>
<li>Parsons, M., Grabsch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+make+tissue+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn.+Histopath%22%5BJournal%5D)">How to make tissue microarrays.</a> Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).</li>
<li>Saxena, R., Bade, S. Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSaxena%2C+R+%22Immunohistochemical+Staining+Methods+6th+ed%22">Immunohistochemical Staining Methods 6th ed</a>. , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.dako.com/08002_ihc_staining_methods_5ed.pdf">http://www.dako.com/08002_ihc_staining_methods_5ed.pdf</a> (2013).</li>
<li>Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+microarrays+%28TMAs%29+for+high-throughput+molecular+pathology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research.</a> Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).</li>
<li>Rangel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tissue+microarray%3A+helpful+hints%5BTitle%5D)+AND+%22J.Histotech%22%5BJournal%5D)">The tissue microarray: helpful hints.</a> J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).</li>
<li>Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+immunophenotyping+of+43+ferret+lymphomas+using+tissue+microarray+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Path%22%5BJournal%5D)">High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology.</a> Vet. Path. 44, 196-203 (2007).</li>
<li>Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+microarrays%3A+one+size+does+not+fit+all%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Pathol%22%5BJournal%5D)">Tissue microarrays: one size does not fit all.</a> Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).</li>
<li>Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+microarray-based+immunohistochemical+study+can+significantly+underestimate+the+expression+of+HER2+and+progesterone+receptor+in+ductal+carcinoma+in+situ+of+the+breast%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech.+Histochem%22%5BJournal%5D)">Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast.</a> Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).</li>
<li>Wampfler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+the+optimal+numbers+of+cores+based+on+tissue+microarray+antibody+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Sci.+Ther%22%5BJournal%5D)">Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer.</a> J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).</li>
<li>Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+new+players+in+hepatocarcinogenesis%3A+Limits+and+opportunities+of+using+tissue+microarray+%28TMA%29%5BTitle%5D)+AND+%22Microarray%22%5BJournal%5D)">Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA).</a> Microarray. 3, 91-102 (2014).</li>
<li>Miettinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+generating+multitissue+blocks+without+special+equipment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunohistochem.+Mol.+Morphol%22%5BJournal%5D)">A simple method for generating multitissue blocks without special equipment.</a> Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).</li>
<li>Jones, M., Calabresdi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agar-gelatin+for+embedding+tissues+prior+to+paraffin+processing%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing.</a> BioTechniques. 42, 569-570 (2007).</li>
<li>Carson, F., Hladik, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarson%2C+F+%22Histotechnology%3A+A+Self-Instructional+Text%22">Histotechnology: A Self-Instructional Text</a>. , 3rd ed, American Society for Clinical Pathology Press. Chicago, IL. (2009).</li>
<li>Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSuvarna%2C+S+%22Bancroft%E2%80%99s+Theory+and+Practice+of+Histological+Techniques.+7th+ed%22">Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed</a>. , 7th ed, Churchill Livingstone Elsevier Ltd. London, UK. (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Noktalar Başarılı hazırlanması ve kullanımı birkaç teknik adımda dikkatli bağlılık gerektirir. Hidroksietil agaroz Erime yavaş ve düşük ısıda yapılmalıdır. Yüksek ısıda hızla Erime optimum sonuçlar daha az agaroz bazı arıza neden olabilir. Işlenmesi için parçalar halinde boya yüklü fişler keserken, her parçanın kalınlığı fazla 4.5 mm ve 7 mm&#39;yi aşmaz emin olun. bunlar kalınlığında üniform 5 mm gibi yuvarlatılmış uçları atık olarak kaldırılır. 5 mm&#39;den az adet bitişik doku malzemesi bitmeden kesitler tarafından b...

Tek bir parafin blok içinde birden kişilerden doku örnekleri embed yeteneği, tedavi ve bireyler arasında kolay yan yana karşılaştırma sağlayan slaytlar arasındaki değişkenliği ortadan kaldırır ve kesit ve örneklerin boyanması maliyetini ve iş yükünü azaltır. Bu çok-doku blokları tipik olmayan bir dizi düzeninde birden bireylerden alınan doku içeren her iki doku mikrodizileri (TMA) ya da parafin bloklar olarak üretilir. Örnek kimlik Bakım herhangi bir çok doku analizi başarısı için kritik öneme sahiptir. Araştırmacılar, analiz verimliliğini artırmak slaytlar arasındaki farklılıkları azaltmak, değerli doku kaynaklarını korumak, zaman ve deneyler 1 maliyetini azaltmak için onların gelişimi beri TMAlar kullanarak olmuştur. TMAlar Doğru yönlendirme doku çekirdekleri 2-4 çekirdek gruplarının asimetrik düzenleme 3, 5 (örneğin, contro arasındaki boşluk, satır veya sütun olmak üzere, çeşitli yöntemler kullanılarak yapılabilirTedavi vs l) &quot;işaret&quot; çekirdek 6 ve TMA matrisin 3 dışında bulunan özel oryantasyon çekirdek. Bu yöntemler TMAlar için iyi çalışır rağmen, çoğu doku çekirdekleri zamanla tükenmiş gibi tanımlayıcıları kafa karıştırıcı hale gelebilir olarak boşluklar ve boşluk değerli TMA çekirdek alanı ve TMAlar tüketir. Onlar tanımlayıcı olarak tekdüze mikroarray çekirdek sıkıca sunumda anomaliler güveniyor çünkü Ayrıca, bu yöntemler bir dizi formatında olmadan çoklu doku bloklarında kullanılmak için uygun değildir. Çoğu olmayan dizilmiş çok doku blokları bu sapmaları yerlerinden olarak kılan yapısal dizi ızgara görüntülemek yok, tanımı gereği, düzgün olmayan dokuları uyum ve olmalıdır. Bir TMA, en büyük dezavantajlardan birini kullanarak pek çok avantajı olmasına rağmen, her zaman büyük ölçüde heterojen dokusu 1 temsilcisi değildir çekirdeklerin, küçük boyutudur. Sigara dizilmiş çok doku blokları t birçok sağlamako bir TMA faydaları, ancak daha büyük doku örnekleri, ya da hayvan çalışmalarından elde edilen tüm organları içerir. Tek çekirdeği kullanarak Doku mikrodizileri ilgi protein dayalı tüm doku bölümleri ile uyumu değişen ve birçok artan uyum 7-11 için birden fazla çekirdeği gerektirir. Nedeniyle karmaşıklığı ve bazı biyomarker fenotipleri heterojen doğası, TMAlar hala yetersiz olabilir çekirdek bile çok sayıda (&gt; 10) ile ve analiz 8 mikrodizilerinden farklı yöntemler gerektirebilir. Ayrıca, TMA inşaat teknik olarak zor bir zaman tüketen, ve doku arrayer başlangıç ​​maliyeti ve yatırımı veya erişimi gerektirir. Sigara dizilmiş çok doku blokları önemli ölçüde daha az zaman ve çaba ile herhangi bir temel laboratuvar yapılan ve diziler izin vermek veya maliyetlerini düşürmek ve analizi basitleştirmek için bir araç olarak daha fazla doku gerektiren çalışmalar için geçerli bir alternatif olabilir. Sigara dizilmiş çok doku blokları benzer güvenilir gerektiren veyaientation markör Örnek kimlik izlemek için, ancak, bu markerlerin gelişimi sınırlanmıştır. Doku yönünü anlatan literatürün çoğu bu tür mürekkep 12 ile doku dövme gibi bireysel doku parçaları, gömme için doğru fizyolojik yönü üzerinde duruluyor, işlemden önce 13 agar-jelatin içinde dokuların ön gömme ve çentik 14 veya dikiş 15 ile bazı dokuların işaretleme . Işlevsel olsa da, bu yöntemler nedeniyle sınırlamalara çoklu doku blokları belirteçleri olarak ideal değildir. Bir dikiş hızla aracılığıyla bölümlere edilecek ve her bölümde görünür olmayabilir. Işleme ve gömme sırasında doğru yönlenmede doku devam edebilir agar jelatin teknikler kullanılarak ön gömme ancak parafin bloğu ve slaytlar çoklu numuneler arasında ayırt etmek için bir görsel işaret temin etmez. Doku üzerindeki çentikler veya boya analizi komplike veya önemli morfolojik ayrıntıları occlude. Alternatif olarak, doku, kimlikolmayan bir dizilmiş çoklu doku bloğu bir asimetrik düzenlemesinin doku parçalarının yerleştirilmesi vasıtasıyla yapılmaktadır, ancak bu 3 ya da daha fazla doku parçaları gerektirir ve analiz için dokuların uygun düzenleme için yeterli olmayabilir edilebilir. Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça çoklu doku bloklar halinde dokuları tespit etmek kolay ve ucuz bir yöntem olarak geliştirilen ve mevcut oryantasyon yöntemleri üzerinde birçok faydalar sunmaktadır. NOKTA Hidroksietil agaroz jeli işleme ve doku işaretleme boyası, oluşan ve parafin (Şekil 2C) ile infiltre küçük, renkli, çekirdeğidir. NOKTA çekirdeği çok doku parafin blok içinde tek bir dokuya sonraki ucunda gömülü ve blok ve her bölümde bir parlak renkli nokta olarak görünür - açıkça blok ve bölümlerin doğru yönünü gösteren (Şekil 1A D) Kolay doku tanımlama için.

<table><tbody><tr><td>Histogel Numune İşleme Jeli</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td><a href="http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html" target="_blank">http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html</a></td></tr><tr><td>Doku İşaretleme Boya</td><td>Üçgeni Biyomedikal Bilimler A.Ş. </td><td>TMD-5</td><td>Herhangi bir doku işaretleme boyası büyük olasılıkla yeterli olacaktır.</td></tr><tr><td>Arraymold Kit A 2 mm (60 çekirdek)</td><td>Arraymold</td><td>20015A</td><td>Herhangi bir manuel doku dizileyici benzer şekilde çalışır.</td></tr></tbody></table>

doğru doku Çok doku blokları her zaman nokta

SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

Çok doku parafin blokları verimlilik artışı, deneysel bütünlüğü ve azaltılmış zaman ve maliyet ile yüksek verimlilik analizi sağlar. Doku mikrodizileri çoklu doku parafin bloklar çoğunluğunu oluşturan, ancak giderek, araştırmacılar planlama ve teçhizat önemli yatırım yapmadan doku mikrodizilerinin avantajları birçok sağlayabilir birden bireylerden daha dokuları içeren olmayan dizilmiş blok kullanıyor. Herhangi bir çok doku analizi önemli bir bileşeni, her bir doku tanımlamak için kullanılan yönlendirme yöntemidir. Yöntemler uygun oryantasyon ve çoklu doku blokları dokuların belirlenmesi korumak için mevcut olmasına rağmen, pek çok, bir dizi içindeki değerli alanı tüketebilir dizilmemiş bloklar için çok uygun değildir ve / veya standart histoloji laboratuarda üretilmesi zordur. Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça parafin blok ve tüm doku kesitlerinde fo görünür basit, düşük maliyetli yönlendirme aracıdizilmiş olan ve olmayan dizilmiş düzenleri r güvenilir örnek tanımlama. Nokta o dokuya doğrudan bir değişiklik gerektirmez olmayan dizilmiş blokları için varolan yönlendirme yöntemlerine göre avantajlar sağlamaktadır, doku parçalarının düzenlemesinde esneklik sağlar.

NOKTA tüm parafin kesitlerde yuvarlak, parafin bloğunda parlak renkli nokta (Şekil 1A ve 2D) olarak görünür, ve H &amp; E veya İHK boyama işlemi ile cam slayt üzerinde kalır (Şekil 1B - 1D ve 2D). Bu bariz bir görsel işaret yardımları, hem her doku parçası belirlenmesinde histotechnician ve araştırmacı ve histotechnician olarak iletişim kolaylaştırır mikroskopta slayt veri toplama araştırmacı doku parçalarının düzenlemesi göstermek için...

Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) amacı çoklu doku parafin bloklar bireysel doku tanımlanmasında yardımcı olmak için bir oryantasyon aracı olarak işlev etmektir. Bu protokoller, ortak, düşük maliyetli histolojisi malzemelerden kolayca inşa edilmiş ve parafin bloklar ve kesitlerde güvenilir bir görsel belirteç olarak hizmet eder gösterilmektedir.

Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta

Multi-tissue paraffin blocks provide high throughput analysis with increased efficiency, experimental uniformity, and reduced time and cost. Tissue ...

Bu prosedürün genel amacı, çoklu doku içeren parafin bloklarda doku tanımlamaya yardımcı olacak bir araç oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle HistoGel'in doku işaretleme boyasıyla birleştirilerek parlak renkli bir jel tıpa oluşturulmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, renkli HistoGel tıpaların standart doku işleme ve gömme teknikleri takip edilerek işlenmesi ve gömülmesidir.Ardından, küçük silindirleri çıkarmak için bir biyopsi pançı kullanılır. Bunlar örnek yönlendirme etiketleri veya nokta örneklerdir. Son adım, nokta örneğin konumu ve her bir örneğin kolayca başvurulabilmesi için dikkatle belgelenerek çoklu doku bloğuna gömülmesidir.Nihayetinde, nokta; doku mikro dizileri ve çoklu doku bloklarında numune yönlendirmesi ve tanımlanması için net bir görsel işaret sağlar. Bu tekniğin, sütürler veya asimetrik korlar gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, noktanın dokuyu değiştirmemesi ve optimal analiz için numunelerin düzenlenmesinde esneklik sağlamasıdır. Bu yöntem fikri ilk olarak, maliyetleri düşürmek ve analizi basitleştirmek amacıyla birden fazla hayvandan alınan doku örneklerini tek bir parafin bloğunda birleştirmek isteyen araştırmacılardan gelen talepler üzerine ortaya çıkmıştır. Noktaları hazırlamak için, 15 mL'lik konik bir tüp içerisindeki 1 mL doku işaretleme boyasına 50 mg biyokimyasal derece BSA ekleyerek başlayın.Karışımı, tamamen çözünene kadar en az bir dakika boyunca vorteksleyin. Ardından, bir 15 ml'lik konik tüpe dokuz mililitre hidroksietil aros işleme jeli ekleyin ve mikrodalgada %30 güçte ısıtın. Jel tamamen eriyene kadar ısıtma işlemini on saniyelik aralıklarla tekrarlayın.Şimdi, eritilmiş işlem jelini ve boyalı BSA çözeltisini tek bir 15 mililitrelik konik tüpte birleştirin ve bir pipet yardımıyla iyice karıştırın. Ardından çözeltiyi vorteksleyin ve katılaşması için birkaç saat boyunca buzdolabına aktarın. Sertleştiğinde, katılaşmış jeli dar bir spatula ile nazikçe serbest bırakarak çıkarın.Tıkaçları beş milimetre kalınlığında kesitlere ayırın. Yuvarlanmış uç kısımları kullanmayın. Üç ila altı kesiti bir histoloji kasetine aktarın ve %70 Ethanol içine daldırın; tıkaçlar tamamenledehidre olana kadar %70 ethanol çözeltisini her iki ila dört saatte bir ve 24 saat boyunca en az üç kez değiştirin.Bu işlem, işaretleme boyasının bir kısmının etanol çözeltisine sızmasına neden olacaktır. Başlangıçta taze etanol değişimleri yapmak, fazla boyanın bir kısmının temizlenmesine yardımcı olarak renk sızdırma olasılığı daha düşük ve daha temiz bir doku örneği sağlar. Ardından, kasetleri önce %80 ethanol ve ardından her bir banyoda bir saat kalacak şekilde %95 ethanol içerisine aktarın.Boya, jel tıkaçtan sızabilir ve bu durum diğer dokuları ve otomatik doku işlemcideki sıvı reaktifleri etkileyebilir. Bu nedenle, manuel dehidrasyon şiddetle tavsiye edilir. Bununla birlikte, otomatik işlem de aynı derecede etkilidir.Dehidratasyonu, her biri bir saat süren %100 etanol ile üç yıkama yaparak tamamlayın. Numuneleri, her bir banyoda bir saat süreyle üç kez statik hidrokarbonlara veya ksilenlere daldırarak şeffaflaştırın. Şimdi kesitleri, her biri bir saat süren üç banyo ile infiltre edin.Eritilmiş parafin içerisinde. İşlenmiş kesitleri her zamanki gibi gömün ve blok oda sıcaklığına geldiğinde, nokta çekirdekler oluşturmak için dermal punch iğnesi kullanın. Bir bloktan 22 adet milimetrelik çekirdek veya daha fazla sayıda 1,5 milimetrelik çekirdek elde edilebilir.Birlikte gömülecek tüm münferit doku parçalarının istenen konumlarını ve kimliklerini ve spotun konumunu belirten bir diyagram çizerek başlayın. El altında tutmak için bir kopya hazırlayın. Örnek yönelim etiketlerinin başarılı kullanımı, tüm biyolojik örnekleri, konumlarını ve spota göre pozisyonlarını doğru bir şekilde detaylandıran, açık ve takip edilmesi kolay bir biyolojik örnek haritası gerektirir.Doku parçalarını işledikten sonra, bunları gömme istasyonuna yerleştirin. Doku oryantasyon diyagramına göre, doğru yönlendirme kesinlikle kritiktir. Ayrıca, spot çekirdeğin, bloğa gömülecek tüm doku parçalarından daha yüksek olması hayati önem taşır.Doku düzenlemesi tamamlandıktan sonra, spotları gömün. Parafin katılaşana kadar her bir spotun devrilmemesi için pensle dik tutun. Bir veya iki dakika yeterli olacaktır.Manuel bir TMA kiti için, TMA kalıbını eritilmiş parafin ile doldurun. Kalıp soğurken, örnek spotlarını dizi kenarlarına benzer bir şekilde yerleştirin. Şimdi kesitler alın ve bu kesitleri spotlarla birlikte boyayın.Standart bir yaklaşım kullanılarak, burada beş mikronluk kesitler hazırlanır. Kesitleri lamların üzerine yerleştirmek için onları 40 °C'lik bir su banyosunda yüzdürün ve ardından pozitif yüklü cam lamlara aktarın. Lamlara yapıştıktan sonra, 60 °C'de en az 20 dakika boyunca kurutun.Slaytlar artık manuel olarak veya otomatik bir boyama sistemiyle boyanabilir. Rutin h ve d boyaması için, özel boyalar veya immünohistokimyasal noktalar, parafin blokta ve tüm parafin kesitlerinde parlak renkli yuvarlaklar şeklinde görülmüştür.Farklı bireylerden ve tedavi gruplarından gelen benzer görünümlü dokuları içeren çoklu doku bloklarında, kolay yönlendirme ve doku tanımlama için spotlar kullanılmıştır. Bir doku mikro dizisi (tissue microarray) kullanıldığında, spotlar her bir örneğin değerli doku örnekleri için değerlendirilmesine olanak tanımış ve spotlar doku mikro dizisi örneğinin bitişiğinden kolayca seçilebilmiştir. Bu prosedür uygulanırken, biyolojik örneğin ve bloktaki spotun doğru ve net bir şekilde belgelenmesinin, başarılı kullanım açısından kritik olduğunu unutmamak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, çoklu doku içeren parafin bloklarda doku tanımlama yardımcısı olarak numune yönlendirme etiketinin nasıl kolayca oluşturulacağı ve kullanılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

spot-the-correct-tissue-every-time-in-multi-tissue-blocks

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Tuvar dokuların çok sayıda eşzamanlı bilgi elde etmek için etkili bir yöntem sağlar. Dokuların Temsilcisi parçaları tek bir parafin blok içine monte edilir. Bloktan bölümleri proteini ifade kalıpların immünhistokimya ve analiz için kullanılır. Dijital tarama veri dağıtımı için ilgili görüntüler oluşturur.

İnsan Protein Atlas içinde Doku Mikroarray&#39;ler, İmmünohistokimya Boyama ve Sayısallaştırma Üretimi

Kompleks doku kitleleri, organlardan tümörler, çeşitli hücresel elemanların oluşmaktadır. Bu hücre köken hem de protein ekspresyonu göre hücre özelliklerini deşifre spektral unmixing ardından çok parametreli immünofloresan boyama ile bir arada çok etiketli floresan transgenik fareler kullanılarak bir doku içinde hücre fenotipleri katkısını açıklanacaktır.

Hücre Origins, Türleri ve Etkileşimler Görselleştirme için Floresan Doku Nakli ardından Kantitatif Çokspektrumlu Analizi

3 boyutlu (3D) histoloji hacim rekonstrüksiyonu için, bir organın hücrelerden oluşan makroyapılar düzeyindeki değişikliklerinin incelenmesini kolaylaştıran bir görüntü kayıt yaklaşımı sunuyoruz. Bu yaklaşımı kullanarak, vahşi tip ve Igfbp7-boş meme bezleri arasındaki 3 boyutlu değişiklikleri inceledik.

3-Boyutlu Histoloji hacmi ve Fare meme bezlerinin Eğitim için onun Uygulama İmar

Protokol biyomarker araştırma için inşaat ve doku microarrays kalitesini optimize edilmesini amaçlamaktadır. Bu planlama ve tasarım, dijital patoloji, sanal slayt açıklama ve otomatik doku arraying yönlerini kapsamaktadır.

Biyomarker Çalışmaları için bir sonraki nesil Doku Mikrodizi (ngTMA) Protokol

İmmünohistokimya, dokulardaki protein lokalizasyonunu ve ekspresyonunu değerlendirmek için güçlü bir laboratuvar tekniğidir. Kantitasyon için mevcut yarı otomatik yöntemler öznelliği ortaya çıkarır ve çoğu zaman tekrarlanamaz sonuçlar yaratır. Burada, multispektral görüntüleme kullanılarak çoğullanmış immünohistokimya ve protein ekspresyonunun objektif kantitasyonu ve ko-lokalizasyonu için yöntemler tanımlanmıştır.

Çoklanmış Immuno-histokimyasal boyanması ve Multispektral Görüntüleme kullanma Protein Ekspresyonu ve Co-lokalizasyon Kantifikasyonu

Pratik uygulaması ve yöntemleri performansını aşağı akım analizleri biobank projeleri geniş bir yelpazede için domuz hayvan modellerin temsilcisi doku örnekleri oluşturmada, volumetry, dahil olmak üzere içinde gösterilen sistematik rastgele örnekleme, ve doku örnekleri nitel ve nicel morfolojik ve moleküler analiz türleri için farklı işleme.

Örnekleme stratejileri ve Biobank doku örnekleri domuz Biyomedikal modellerinden işlenmesi

Burada, formalin-sabit parafin gömülü tümör doku bölümlerinde bağışıklık hücrelerini görselleştirmek, ölçmek ve haritalamak için basit ve erişilebilir bir strateji tanımlıyoruz. Bu metodoloji, mevcut görüntüleme ve dijital analiz tekniklerini görüntüleme testlerinin çoklama yeteneğini ve multiparametre analizini genişletmek amacıyla birleştirir.

Tümör Mikroortamında Bağışıklık Hücre Popülasyonlarının Görselleştirilmesi, Ölçülmesi ve Haritalanması

Eksvivo görüntüleme sistemlerini kullanan hücre penetran peptidler ile transdüksiyon derecesini değerlendirmek için protokolleri, parafin katıştırma, kesitleme ve konfokal floresan mikroskopisi kalp hedefleme peptidini örnek olarak kullanarak açıklıyoruz. Protokolümüzde, tek bir hayvan aynı organların her iki tür de görüntüleme değerlendirmesini elde etmek için kullanılabilir ve bu da çalışmalar için gerekli hayvan sayısını yarı yarıya azaltabilir.

Kardiyak Hedefleme Peptidin Transdüksiyon Verimlerinin Vivo Görüntülemesinde

Bu makalede, canlı, hastaya bağlı, preklinik bir model sisteminde tümör ilaç yanıtlarının değerlendirilmesi için hasta kaynaklı eksplantların üretimi, ilaç tedavisi ve analizi için yöntemler açıklanmaktadır.

Hasta Kaynaklı Tümör, Hastalarda İlaç Direncini Tahmin Etmek İçin "Canlı" Preklinik Bir Platform Olarak Eksplantlar

Bu protokol, farklı derinliklerdeki FFPE donör bloklarını kullanarak bir doku mikrodizisinin manuel olarak nasıl oluşturulacağına dair bant yöntemini özetlemektedir.

Bant Yöntemi ve El Tipi Mikrodizileyici Kullanılarak Doku Mikrodizisinin Manuel Yapımı

Öğrenin, çok doku parafin bloklarında doku tanımlamasını kolaylaştıran SpOT oluşturma yöntemini. HistoGel ve doku işaretleme boyası kullanarak renkli jel tıpalar hazırlayıp standart histoloji teknikleriyle işleyin.

Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta

Daha fazla video keşfet