8 Haziran 2015
Fareler için çevresel zenginleştirme, farelerde sağlam metabolik ve anti-kanser etkileri sağlamak için karmaşık ve zorlu bir kurulumun yanı sıra kapsamlı yetiştirme ve işleme teknikleri gerektirir. Bu protokol, farelerde yukarıda belirtilen etkileri yeniden üretmek için ayrıntılı prosedürler sağlar.
Bu prosedürün amacı, farelerde sağlam metabolik ve anti-kanser etkileri üreten çevresel zenginleştirmede hayvanları barındırmak ve sürdürmek için gerekli ayrıntıları sağlamaktır. Bu, önce zenginleştirilmiş muhafaza ortamının tekerlekler, koşu kaynakları, kulübeler, borular, kütükler ve kafesler gibi nesnelerle büyük bir çöp kutusuna kurulmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, hayvanları yeni çevreye tanıtmaktır.
Daha sonra, çöp kutusundaki nesnelerin konumu ve türü değiştirilerek ve düzenli olarak taze yiyecek ve su sağlanarak zenginleştirilmiş ortam korunur. Son adım, gelecekte değiştirilmeye hazır olmaları için ortamda değiştirilen nesneleri temizlemektir. Sonuçta, ötenazi ve hayvan dokularının analizi üzerine.
Bu çevresel zenginleştirme tekniği, azalmış yağlanma, diyete bağlı obeziteye karşı artan enerji harcama direnci ve hipotalamik sym nöral adiposit eksenini aktive ederek beyazdan kahverengiye yağ fenotipik bir geçiş gösterir. Bu yöntem, laboratuvar kemirgenleri için kansere ve metabolik hastalıklara karşı direnci artıran zenginleştirilmiş bir ortamın kurulumuna ilişkin ayrıntıları açıklar. İlk olarak, büyük bir zenginleştirme kutusunun içini sporicidin dezenfektanlarla püskürtün ve silin.
Üreticinin talimatlarına uyarak, önceki dezenfektandan gelen kokuyu gidermek için çöp kutusunu %30 etanol veya musluk suyuna batırılmış kağıt, havlu ve kurutucu ile bir kağıt havluyla silin. Zenginleştirilmiş ortamda SOR tipi tekerleklere sahip plastik boru igloları ve diğer çeşitli plastik kulübeler gibi oyuncaklar kullanın. Bu oyuncakları daha önce olduğu gibi yıkayın, daha önce olduğu gibi yıkanmış metal koşu tekerlekleri kullanın.
Tekerleğin üzerindeki boya solmaya başlarsa, hayvanlar üzerinde koştuğunda tekerlek gürültülü hale gelirse, tekerlek ve aksın birleştiği yere az miktarda vazelin sürün. Zenginleştirilmiş ortamda ahşap kütükler kullanın. Yatak takımlarını veya diğer kalıntıları elle temizleyerek kütükleri temizleyin.
Daha sonra kütükleri, 15 dakika boyunca 121 santigrat derece sıcaklığa ulaşan kuru bir döngü veya tekstil döngüsünde otoklavlayarak sterilize edin. Tutmak için 29 santimetre x 18 santimetre x 12,5 santimetre ve 30,5 santimetre x 19 santimetre x 14 santimetre boyutlarında temiz besleme kafesleri kullanın. Bir besleme ve içme tel rafı, farelerin girip çıkması için kafesin ön altından en az beş santimetre çapında bir delik açar.
Başlamak. Çeyrek inçlik bir mısır koçanı laboratuvar hayvanı yatağı için, iki ila 2,5 santimetre derinliğe kadar temiz ila büyük zenginleştirme kutusuna koyun. Daha sonra, yaklaşık 1.225 santimetre karelik bir alanı tecrit etmek için önceki aort kütüğünden iki veya üçünü çöp kutusunun bir köşesine yerleştirin.
Daha sonra kütüklerin ayırdığı alana, üstüne SOR tekerlekleri olan üç yapıştırıcı yerleştirin. Tekerleklerin serbestçe dönecek alana sahip olduğundan emin olun. Şimdi plastik boruyu bir araya getirin, böylece birden fazla kol merkezi bağlantı parçasından ayrılıyor.
Bu hortumu, çöp kutusunun ortasına, çöp kutusunun iki köşesine yerleştirin. Çöp kutusuyla aynı yatakla doldurulmuş bir besleme kafesi yerleştirin. Her besleme kafesinin önündeki delik, haznenin ortasına doğru bakmalıdır.
Her besleme kafesinin üzerine fare yemi içeren bir yiyecek ve su teli yerleştirin. Su şişesini ekleyin. Çöp kutusuna 11,5 santimetrelik bir tekerlek, 20,5 santimetrelik bir tekerlek ve 28 santimetrelik bir tekerlek yerleştirin.
Ardından, zenginleştirme kutusu boyunca oyuncak veya tünel gibi dört ila beş plastik kafes daha yerleştirin. Hazneyi mikro izolatör filtre kağıdı ile örtün ve filtre kağıdını hazneye klipslemek için bağlayıcı klipsler kullanın. Hayvanları standart bir kafesten zenginleştirme kutusuna yerleştirirken, hayvanların standart kafesten zenginleştirme kutusuna serbestçe hareket edebilmesi için kafesi yan tarafındaki çöp kutusuna yerleştirin.
Yuvalama malzemelerinin zenginleştirme kutusuna aktarılmasına izin vermeyin. Aynı yaş, cinsiyet ve genetik suşa sahip 10 ila 20 hayvan zenginleştirilmiş ortamda aynı anda barındırılabilir. Hayvanların hastalık veya sıkıntı belirtileri açısından günlük olarak gözlemlendiğinden emin olun.
Gerekirse, durumlarını haftada iki kez daha fazla kontrol etmek için hayvanlara nazikçe tutun. Yiyecek ve su seviyelerini kontrol edin, yiyecek ve suyun önümüzdeki iki gün boyunca dayanacağından emin olun. Ayrıca, çalışan tekerlekleri ve zenginleştirme oyuncaklarını yayılacak ve kolayca kullanılabilecek şekilde düzeltin.
Kirlenmiş olan zenginleştirme öğelerini haftada bir kez, ideal olarak fareler ortamdan uzaklaştırıldığında değiştirin. Deneysel amaçlar için, besleme kafeslerini ve tel rafları çıkarın ve taze yiyeceklerle dolu temiz kafesler ve raflarla değiştirin. Su şişelerini temiz su şişeleriyle değiştirin.
Zenginleştirme öğelerini, kurulumun temel yönleri korunacak, ancak zenginleştirme öğeleri farklı şekilde yerleştirilecek şekilde önemli bir şekilde yeniden düzenleyin. Leke. Büyük zenginleştirme kutusunun geri kalanını kontrol edin ve gerekirse temizleyin. Kirli çöpleri toplayarak ve her iki haftada bir yeni temiz yatak takımlarını yayarak.
Haftalık hayvancılığı gerçekleştirirken oyuncakları elde yıkayın veya kafes yıkamadan geçirerek yıkayın. Her ay, zenginleştirme oyuncaklarını ve besleme kafeslerini çıkararak ve çöpleri dışarı çıkararak çöpün çoğunu temizleyin. Her üç ayda bir veya hayvan protokolünüzün gerektirdiği şekilde kafesin tüm alanlarında iki santimetre yatak takımı olduğundan emin olun, tüm yatak takımlarını ve oyuncakları çıkarın ve zenginleştirme kutusunu daha önce olduğu gibi yıkayarak dezenfekte edin ev kontrolü Hayvanları aynı 12 saatlik açık karanlık döngüde gruplandırın.
Mikro izole kafeslerde zenginleştirilmiş ortamdaki fareler olarak, zenginleştirilmiş ortamda olduğu gibi kontrol kafesinde de aynı mısır koçanı yatağını sağlayın ve normal bir fare kafesinde aynı cinsiyetten üç ila beş fareyi barındıran bir maister maker yuvası ile aydınlatılan dört santimetreye dört santimetrelik bir yuva ekleyin. Kafeste herhangi bir oyuncak tüp veya kafes bulundurmayın. Kafese yiyecek tutmak için bir tel ızgara ve kafes otomatik bir sulama sistemine bağlı değilse bir su şişesi ekleyin.
Hayvanların sağlığını günlük olarak izleyin, hayvanların bol miktarda yiyecek ve suya sahip olduğundan emin olun. Kafesleri, besleme kablolarını, yiyecekleri ve suyu değiştirin veya temizleyin. Haftada bir kez, kafesleri ve tel rafları daha önce olduğu gibi temizleyin.
Üç haftalık erkek fareler, hayvan başına 10 ila beş hücre ile tümör deri altı inokülasyonundan önce beş hafta boyunca zenginleştirilmiş bir ortamda veya kontrol kafeslerinde barındırıldı. Sonuçlar B 16 melanom tümör ağırlıklarını aşılamadan 17 gün sonra göstermektedir. Her grup 10 hayvandan oluşuyordu.
Yıldız işareti, burada öğrencilerin T-testi tarafından hesaplanan 0,05'ten küçük bir P değerini temsil eder. Üç haftalık fareler altı gün boyunca çevresel zenginleştirmeye tabi tutuldu. Zenginleştirilmiş bir ortamda altı gün, azalmış retroperitoneal, beyaz yağ dokusu, yağ yastığı ağırlığı.
Bu grafik, zenginleştirilmiş bir ortamda altı gün, vücut ağırlığına göre azalmış kahverengi yağ dokusu, epidermal beyaz yağ dokusu ve retroperitoneal beyaz yağ dokusu, yağ yastıkçığı ağırlıklarının azaldığını göstermektedir. Sonraki iki grafik, burada görüldüğü gibi dört hafta boyunca zenginleştirilmiş bir ortamda barındırılan farelerden, çevresel zenginleştirmede dört hafta, kahverengi yağ dokusu hariç tüm yağ tiplerinde azalmış yağ yastıkçığı ağırlıklarından elde edilen sonuçları paylaşmaktadır. Çevresel zenginleştirmede dört hafta, kahverengi yağ dokusu hariç tüm yağ tipleri için vücut ağırlığına göre yağ yastığı ağırlıklarında azalma.
Bu videoyu izledikten sonra, anti-kanser ve anti-obezite etkileri ve fareleri indükleyen zenginleştirilmiş bir ortamın nasıl kurulacağını ve sürdürüleceğini iyi anlamış olmalısınız.
Bu protokol, fareler için metabolik sağlığı destekleyen ve kanser riskini azaltan zenginleştirilmiş bir ortam oluşturma prosedürlerini ana hatlarıyla belirtmektedir. Protokol, hayvanlar için optimal koşullar sağlamak amacıyla ortamın kurulumu, bakımı ve izlenmesi hakkında ayrıntılı bilgi vermektedir.
Laboratuvar fareleri için standartlaştırılmış çevresel zenginleştirme protokolleri, preklinik araştırmalarda tekrarlanabilir metabolik ve onkolojik fenotipler oluşturmak açısından kritik öneme sahiptir. Kontrollü zenginleştirme; enerji harcaması, adipozite ve tümör biyolojisi hakkında güçlü hipotezlerin test edilmesine olanak tanıyarak hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma süreçlerini doğrudan etkiler. Tutarlı uygulama, metabolik ve kanser modellerinde translasyonel sürekliliği ve portföy güvenini destekler.
Çevresel zenginleştirme protokolleri, hem hedef doğrulamasını hem de translasyonel araştırmaları destekleyerek, erken keşif ile preklinik model geliştirme arasındaki arayüzde konumlandırılmıştır.