Name: Tetanik Uyarım tarafından Yerel CA1 γ Titreşim Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Keşfedin CA1 bölgesindeki gama salınımlarını kaydetmek için akut beyin kesileri hazırlama yöntemini. Bu teknik, nöronal uyarılabilirlik ve ilaç etkilerini incelemek için değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

APA'dan RJH'ye, NHMRC programı tarafından SP'ye 400121 hibe ve SP'ye 1005050 NMHRC bursu tarafından desteklenir. CAR, ARC (FT0990628) ve DOWD burs planının desteğini kabul eder. Florey Sinirbilim ve Ruh Sağlığı Enstitüsü, Victoria Eyalet Hükümeti altyapı fonları tarafından desteklenmektedir.

Fareler üzerinde tüm deneyler Florey Enstitüsü hayvan etik kurul tarafından onaylandı. Beyin Dilimler Kesme 1. Kur <ol><li> (MM) 125 Kolin-Cl, 2.5 KCI, 0.4 CaCl2, 6 MgCl2, 1.25 NaH 2 PO 4, 26 NaHCO 3 oluşan bir kesim çözüm hazırlayın, 20 D-glikoz karbojen gaz (% 95 O 2 -5 ile doyurulmuş (mM olarak) 125 NaCl, 2.5 KCl, 2 CaCl2, 2 MgCl2, 1.25 NaH 2 PO 4, 26 NaHCO 3 oluşan% CO2) ve yapay serebrospinal akışkan (CSF) kayıt çözeltisi, 10 D-glikoz, doyurulmuş karbojen. Soğuk tutmak için buz üzerinde kesme çözümü yerleştirin. </li><li> Kesme çözeltisi yaklaşık 400 ml Freeze ve bir buz bulamaç oluşturmak için donmamış kesme çözeltisi, 100 ml ile karıştırılır. Karbojen Kabarcık (% 95 O2 -5% CO2), küçük c ile yaklaşık olarak 0.5 L / dakikalık bir akıştaaliber boru ya da sinterlenmiş cam kabarcık sürekli ama nazik bir akış üretir. </li><li> Beyin dilimleri yerleştirileceği yükseltilmiş bir naylon ağ parçası ile 250 ml&#39;lik bir beher hazırlayın. Kabarcıklar doğrudan dilim tutarak alanı bozmaya olmadığını sağlanması, karbojen ile yaklaşık 2 cm örgü ve kabarcık kapak aCSF ile doldurun. Orada naylon mesh hiçbir hava kabarcıkları vardır, bu nedenle herhangi varsa bunları kaldırmak da önemlidir. Bu tutma bölmesi olacak ve oda sıcaklığında tutulur (20-25 ° C). </li><li> Makas büyük bir çifti, makas, küçük ve büyük mikro spatula ve forseps büyük ve küçük çift küçük bir çift de dahil olmak üzere diseksiyon aletleri düzeni ve buz üzerinde onları soğuk. Alüminyum folyo meydanında buz üzerinde vibratome doku kesme blok yerleştirin. 6 cm filtre kağıdı, bir tek kenar jilet ve hem de kesilmiş çözeltisi harç ile doldurulmuş bir 25 ml beher 2 adet elde edilir. </li><li> Buz ile ikinci bir kap doldurun ve doku PAP bir parça koymaker ve buz üzerinde üstüne bir 12 cm kültür çanak yerleştirin. Karbojen ile çözüm buz bulamacı ve kabarcık kesme kültür çanak doldurun. Bu beyin diseksiyonu yapılmalıdır ile hangi kapsayıcıdır. </li><li> Vibratome hazırlayın. Taze çift kenarlı jilet çıkarmak ambalajından (taze bıçak her zaman kullanın) ve% 80 etanol daha sonra deiyonize su ile sprey. Bu koniklik başladığı noktada bir 3 ml&#39;lik plastik transfer pipet kesin. Bu beyin dilimleri aktarmak için kullanılır. Bend yaklaşık 45 ° ve 1 ml şırınga takmak tarafından üssünde 27 G iğne. Bu kesim sırasında dilimleri işlemek için kullanılır. </li></ol> 2. Beyin Dilimler Kesme <ol><li> % 2 izofluran veya yerel onaylı yöntemle - Fare (P18 P16) anestezisi. Indüksiyon sonrasında, makas büyük bir çifti ile hayvan başını kesmek ve kabarmış kesme çözüm bulamaç içeren 12 cm kültür çanak içine kafasını bırakın. Bulamaç tamamen için başını sokmak gerekirhızlı soğutma. </li><li> Bir yandan cildi ileri burnuna doğru bağ dokusu soyulması ile baş önünü tutun. Bağ dokusu kesilmiş küçük makas kullanarak altta yatan kafatası ortaya çıkarmak için. Sonra kafatası ve boyun dorsal yönünü örten kasları kaldırın. </li><li> İlk büyük forseps ile kafatası ön güvence altına alarak kafatası beyin çıkarın ve ardından küçük bir makas (Şekil 1, A1 ve A2 etiketli kesimler) kullanarak foramen magnum kemik iki tarafında aracılığıyla iki yan keser. <ol><li> Gözler arasında başka bir kesim (bregma sadece ön) (Şekil 1, kesme etiketli B) daha sonra dikkatlice öne sagital sütür boyunca kesilir olun ve beyin (Şekil 1, kesme etiketli C) ortaya çıkarmak için kesilmiş kafatası bölümleri yansıtır. </li><li> Bir kültür çanak üzerine beyin ve yerde kepçe küçük bir spatula kullanın. Karter farkında olunihtiyacınız olacak beynin alt yönü üzerinde ial sinirler bu küçük boyutlu mikro spatula kullanılarak yapılabilir, kesilmiş olması. Kullanımı daha büyük spatula kesim çözüm bulamaç ile dolu 25 ml&#39;lik behere beyin aktarın. </li></ol></li><li> Dilimleme beyin yarımkürede hazırlanıyor. <ol><li> Sonra taze kesme çözüm bulamaç ve kabarcık ile doldurmak bir taze kültür çanak alt 6 cm filtre kağıdı bir parçası yerleştirin. Filtre kağıdı üzerine aşağı beyin, ventral tarafı konumlandırmak için büyük spatula kullanın. Yeni ve temizlenmiş tek kenar jilet alın ve daha sonra, beyincik kaldırmak orta hat boyunca bir kesim iki hemisfer içine beyin ayırmak için yapmak beyin kesti. </li></ol></li><li> Vibratome doku bloğu hazırlanması. <ol><li> , Soğutulmuş vibratome doku bloğu alın yüzeyi kurumaya, ve ortada siyanoakrilat yapıştırıcı bir damla koyun ve beynin yaklaşık boyutuna yayılır. Birini işlemek için küçük bir spatula kullanınBüyük mikro spatula üzerine beyin hemisfer beynin medial tarafı aşağı böylece. </li><li> Mümkün olduğunca çözümün kadar çıkarmak için filtre kağıdının ikinci parçası üzerinde beyin arayüzünde spatula kenarına dokunun. Tutkal üzerine rehberlik küçük spatula ile büyük spatula kapalı beyin kaydırın. </li><li> Beyin tamamen batırılır sağlanması, vibratome odasına kesme blok Güvenli ve kesim çözüm bulamaç ve kabarcık ile odasını doldurun. Beynin ventral yüzü bıçak bakacak şekilde kesme bloğu döndürün. </li></ol></li><li> Beyin dilimleme. Not: Her vibratome yüzden üreticinin talimatlarına uyun benzersizdir. <ol><li> 450 mikron dilim kalınlığı ayarlayın ve yaklaşık 0.3 mm / s hızında beyin üzerinden hareket ederken bıçak titreşimli emin olun. Kortikal yüzeye ventral taraftan beyin ile tamamen kesti, bu olabilir b tüm beyin sagittal dilimleri üretecekelektrofizyolojik kayıtlar için kullanılan e. Dilimler mediale yanal olarak imal edilecek ve tipik 3-4 dilim her yarımkürede kesilebilir. </li><li> Dilim asansörlerin baz dilim geri aşağı yumuşak basına bükülmüş 27 G iğne kullanın. Her dilim kesilir, onlar kadar 8 saat yaşayabilir tutma odasındaki platforma taşımak için transfer pipet kullanın. </li></ol></li></ol> 3. Ekstraselüler Elektrofizyoloji Kayıtlar <ol><li> Kayıt odasına dilim montajı. <ol><li> 2 ml / dak ve 32 ° C&#39;ye kadar ısıtıldı - transfer pipeti kullanarak, CSF 1 akan ile perfüze dalgıç bir kayıt odasına bir beyin dilim yerleştirin. kayıtları için kullanılan CSF Mg2 + konsantrasyonu, 4 mM ila 2 mM ila arttıkça tutma odası içinde farklıdır. </li><li> (- 3 mm aralıklı 2 de yayılmış naylon ipliklerini yarı dairesel paslanmaz çelik), bir &quot;harp&quot; ile dilim sabitleyin. YerArp ipliklerini CA1 paralel böylece. 32 ° C&#39;de 10 ml / dak - 8 perfüzyon hızını artırın. </li></ol></li><li> Bir mikroskop yer, bir uyarıcı elektrot ve CA1 (Şekil 2A) &#39;in stratum radiatumunun yüzeyi üzerinde bir kayıt elektrotu (ACSF kayıt solüsyonu ile doldurulmuş, cam elektrot) altında. Kayıt elektrot yerleştirmek sonra ilk uyarıcı elektrot yerleştirin. </li><li> Schaffer 120 ile teminatların teşvik - 150 uA genliği ve 0.1 msn süre test darbesi ve dilim sağlığı (Şekil 2B) belirlemek için ortaya çıkan alan, uyarıcı sonrası sinaptik potansiyel (fEPSP) dalga formunu gözlemleyin. dilim yüzeyinden 100 mikron bir fEPSP küçük lif voleybolu ve büyük genlikli ile kayıt almak için - uyarıcı ve kayıt elektrotları yaklaşık 50 dilim taşındı gerekebilir. Schaffer teminat fEPSPs basmakalıp ve dilim sağlığı iyi bir gösterge sağlamak uyarılmış. Healthy dilimler tipik olarak en az 0.3 amplitüd oranı fEPSP için bir fiber voleyle göstermektedir. </li><li> Elektrotlar Repozisyonlama. <ol><li> Bir disseksiyon mikroskobu kullanılarak, startum Oriens&#39;in ortasına uyarıcı elektrot taşıma ve Şekil 3A&#39;da gösterildiği gibi, mümkün olduğu kadar kayıt elektrot yakın olarak piramidal hücre tabakası kayıt elektrot hareket ettirin. 150 uA testi darbesi yaklaşık olarak 1 mV - 120 fEPSP yanıt genliği, böylece 100 um - uyarıcı ve kayıt elektrotları yaklaşık dilim içine 50 itti gerekebilir. </li></ol></li><li> Γ titreşimleri oluşturuluyor. <ol><li> Γ titreşimler 200 Hz teslim 20 x 0.1 msn bakliyat bir tren ile doku teşvik oluşturmak için. Her 5 dakikada teslim Bu tetanik uyaran tekrarlanabilir yanıtları verebilir. </li></ol></li><li> Aşağıdaki kayıt parametrelerini kullanın. <ol><li> Giriş gerilimi aralığı maç çıkış sinyalinin kazancını Scaledijital dönüştürücü analog. Maksimum beklenen sinyal gezi giriş gerilim aralığı% 30 az kullandığından emin olun. Sinyaller klip olabilir yüksek olarak kazançları ayarlarken dikkatli olun. alan kayıtları için gerekli tipik bant genişliği temel sürüklenme çıkarmak için 0.1 Hz AC bağlantı ile 500 Hz olduğunu. </li><li> Sinyal yumuşatma önlemek için düşük geçiş filtresi köşe frekansı 5 kat daha hızlı - en az 4 Digitize. </li></ol></li><li> Veri analizi. <ol><li> 5 Hz yüksek geçiren filtre verileri herhangi bir temel vardiya kaldırmak için. 10 ms arasında en az bir olay ayrımı, zirve ve 7 ms regresyon aralığı, ~ 100 mV / ms bir eşik tipik bir etkinlik süresi ve% 100 arasında bir ayırma vadi ile, bir türevi eşik kullanılarak ani belirlenmesi. İlk tespit başak için geçen zaman stimülasyon dışlayıcı bitiminden sonra oluşmaya olarak gecikme hesaplayın. Bu analiz, sivri, gecikme arası etkinlik aralığının sayıda karakterizasyonu için izin verir ve süresi hesaplanıraşağıdaki gibidir: </li><li> Her süpürme için salınım başına başak sayısı belirlenir olarak sivri sayısını hesaplayın. </li><li> Salınım gecikme hesaplayın. Her salınım için, stimülasyon dışlayıcı sonundan itibaren ilk tespit başak zamanı çıkarma. </li><li> Ortalama arası Olay aralığını (ISI) hesaplayın. Birden tespit sivri ve ortalama arasındaki süreyi belirleyin. </li><li> Salınım süresini hesaplayın. Her salınım içinde ilk ve son tespit edilen başak arasındaki süreyi ölçün. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theta+rhythm+of+navigation%3A+link+between+path+integration+and+landmark+navigation%2C+episodic+and+semantic+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Theta rhythm of navigation: link between path integration and landmark navigation, episodic and semantic memory.</a> Hippocampus. 15 (7), 827-840 (2005).</li>
<li>Vanderwolf, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+electrical+activity+and+voluntary+movement+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Hippocampal electrical activity and voluntary movement in the rat.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 26 (4), 407-418 (1969).</li>
<li>Bartos, M., Vida, I., Jonas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+mechanisms+of+synchronized+gamma+oscillations+in+inhibitory+interneuron+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic mechanisms of synchronized gamma oscillations in inhibitory interneuron networks.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8 (1), 45-56 (2007).</li>
<li>Buzsáki, G., Wang, X. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+gamma+oscillations%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of gamma oscillations.</a> Annu. Rev. Neurosci. 35, 203-225 (2012).</li>
<li>Kobayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+contribution+to+scalp+EEG+gamma+rhythms+associated+with+epileptic+spasms%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Dev%22%5BJournal%5D)">Cortical contribution to scalp EEG gamma rhythms associated with epileptic spasms.</a> Brain Dev. 35 (8), 762-770 (2013).</li>
<li>Andreou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Resting-State+Gamma-Band+Connectivity+in+First-Episode+Schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophr+Bull%22%5BJournal%5D)">Increased Resting-State Gamma-Band Connectivity in First-Episode Schizophrenia.</a> Schizophr Bull. , (2014).</li>
<li>Alarcon, G., Binnie, C. D., Elwes, R. D., Polkey, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Power+spectrum+and+intracranial+EEG+patterns+at+seizure+onset+in+partial+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Power spectrum and intracranial EEG patterns at seizure onset in partial epilepsy.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 94 (5), 326-337 (1995).</li>
<li>Fisher, R. S., Webber, W. R., Lesser, R. P., Arroyo, S., Uematsu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+EEG+activity+at+the+start+of+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">High-frequency EEG activity at the start of seizures.</a> J. Clin. Neurophysiol. 9 (3), 441-448 (1992).</li>
<li>Kwan, P., Brodie, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+identification+of+refractory+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Early identification of refractory epilepsy.</a> N. Engl. J. Med. 342 (5), 314-319 (2000).</li>
<li>Traub, R. D., Kopell, N., Bibbig, A., Buhl, E. H., LeBeau, F. E., Whittington, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions+between+interneuron+dendrites+can+enhance+synchrony+of+gamma+oscillations+in+distributed+networks%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gap junctions between interneuron dendrites can enhance synchrony of gamma oscillations in distributed networks.</a> J. Neurosci. 21 (23), 9478-9486 (2001).</li>
<li>Traub, R. D., Whittington, M. A., Buhl, E. H., Jefferys, J. G., Faulkner, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+the+gamma+--%3E+beta+frequency+shift+in+neuronal+oscillations+induced+in+rat+hippocampal+slices+by+tetanic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of the gamma --> beta frequency shift in neuronal oscillations induced in rat hippocampal slices by tetanic stimulation.</a> J. Neurosci. 19 (3), 1088-1105 (1999).</li>
<li>Whittington, M. A., Stanford, I. M., Colling, S. B., Jefferys, J. G., Traub, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+patterns+of+gamma+frequency+oscillations+tetanically+induced+in+the+rat+hippocampal+slice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal patterns of gamma frequency oscillations tetanically induced in the rat hippocampal slice.</a> J. Physiol. 502 (3), 591-607 (1997).</li>
<li>Avoli, M., Panuccio, G., Herrington, R., D’Antuono, M., de Guzman, P., Lévesque, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+different+interictal+spike+patterns+anticipate+ictal+activity+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Two different interictal spike patterns anticipate ictal activity in vitro.</a> Neurobiol. Dis. 52, 168-176 (2013).</li>
<li>Boido, D., Jesuthasan, N., de Curtis, M., Uva, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+Dynamics+During+the+Progression+of+Seizure-Like+Events+in+the+Hippocampal-Parahippocampal+Regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Network Dynamics During the Progression of Seizure-Like Events in the Hippocampal-Parahippocampal Regions.</a> Cereb Cortex. 24 (1), 162-173 (2014).</li>
<li>Gloveli, T., Albrecht, D., Heinemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+low+Mg2%2B+induced+epileptiform+activity+in+rat+hippocampal+and+entorhinal+cortex+slices+during+adolescence%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Properties of low Mg2+ induced epileptiform activity in rat hippocampal and entorhinal cortex slices during adolescence.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 87 (2), 145-152 (1995).</li>
<li>McLeod, F., Ganley, R., Williams, L., Selfridge, J., Bird, A., Cobb, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+seizure+threshold+and+altered+network+oscillatory+properties+in+a+mouse+model+of+Rett+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduced seizure threshold and altered network oscillatory properties in a mouse model of Rett syndrome.</a> Neuroscience. 231, 195-205 (2013).</li>
<li>Bracci, E., Vreugdenhil, M., Hack, S. P., Jefferys, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+synchronizing+mechanisms+of+tetanically+induced+hippocampal+oscillations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">On the synchronizing mechanisms of tetanically induced hippocampal oscillations.</a> J. Neurosci. 19 (18), 8104-8113 (1999).</li>
<li>Main, M. J., Cryan, J. E., Dupere, J. R., Cox, B., Clare, J. J., Burbidge, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+KCNQ2%2F3+potassium+channels+by+the+novel+anticonvulsant+retigabine%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Modulation of KCNQ2/3 potassium channels by the novel anticonvulsant retigabine.</a> Mol. Pharmacol. 58 (2), 253-262 (2000).</li>
<li>Wickenden, A. D., Yu, W., Zou, A., Jegla, T., Wagoner, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retigabine%2C+a+novel+anti-convulsant%2C+enhances+activation+of+KCNQ2%2FQ3+potassium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Retigabine, a novel anti-convulsant, enhances activation of KCNQ2/Q3 potassium channels.</a> Mol. Pharmacol. 58 (3), 591-600 (2000).</li>
<li>Otto, J. F., Kimball, M. M., Wilcox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+anticonvulsant+retigabine+on+cultured+cortical+neurons%3A+changes+in+electroresponsive+properties+and+synaptic+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of the anticonvulsant retigabine on cultured cortical neurons: changes in electroresponsive properties and synaptic transmission.</a> Mol. Pharmacol. 61 (4), 921-927 (2002).</li>
<li>Pomper, J. K., Graulich, J., Kovacs, R., Hoffmann, U., Gabriel, S., Heinemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+oxygen+tension+leads+to+acute+cell+death+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">High oxygen tension leads to acute cell death in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 126 (1), 109-116 (2001).</li>
<li>Hatch, R. J., Reid, C. A., Petrou, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+in+vitro+CA1+network+activity+in+a+sodium+channel+%CE%B21%28C121W%29+subunit+model+of+genetic+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Enhanced in vitro CA1 network activity in a sodium channel β1(C121W) subunit model of genetic epilepsy.</a> Epilepsia. 55 (4), 601-608 (2014).</li>
<li>Lord, L. -D., Expert, P., Huckins, J. F., Turkheimer, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+energy+metabolism+and+the+brain%2F%27s+functional+network+architecture%3A+an+integrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral energy metabolism and the brain/'s functional network architecture: an integrative review.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 33 (9), 1347-1354 (2013).</li>
<li>Hájos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+network+activity+in+submerged+hippocampal+slices%3A+importance+of+oxygen+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply.</a> Eur. J. Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).</li>
<li>Hájos, N., Mody, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+physiological+environment+for+visualized+in+vitro+brain+slice+recordings+by+increasing+oxygen+supply+and+modifying+aCSF+content%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a physiological environment for visualized in vitro brain slice recordings by increasing oxygen supply and modifying aCSF content.</a> J. Neurosci. Methods. 183 (2), 107-113 (2009).</li>
<li>Boido, D., Jesuthasan, N., de Curtis, M., Uva, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+Dynamics+During+the+Progression+of+Seizure-Like+Events+in+the+Hippocampal-Parahippocampal+Regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Network Dynamics During the Progression of Seizure-Like Events in the Hippocampal-Parahippocampal Regions.</a> Cereb Cortex. 24 (1), 163-173 (2012).</li>
<li>Antuono, M., Köhling, R., Ricalzone, S., Gotman, J., Biagini, G., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiepileptic+drugs+abolish+ictal+but+not+interictal+epileptiform+discharges+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Antiepileptic drugs abolish ictal but not interictal epileptiform discharges in vitro.</a> Epilepsia. 51 (3), 423-431 (2010).</li>
<li>Stenkamp, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+temporal+stability+of+cholinergic+hippocampal+gamma+oscillations+following+respiratory+alkalosis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Enhanced temporal stability of cholinergic hippocampal gamma oscillations following respiratory alkalosis in vitro.</a> J. Neurophysiol. 85 (5), 2063-2069 (2001).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Akut beyin dilimleri CA1 γ salınımları oluşturmak için sağlam bir yöntem tarif edilmektedir. oluşturulan titreşimler, kontrol ve ağ salınımlarının 12 nörofizyolojik temelini anlamak için daha iyi bir fırsat sağlayan bir yerel devresinden kaynaklanmaktadır. AMPA reseptörleri, GABA A reseptörleri, I, H ve T-tipi Ca2 + kanallarının bu modelde γ salınımlar için gereklidir. Burada açıklanan yerel CA1 salınımları sağlam oluşturulabilir iken bu beyin dilimleri sağlıklı olmasının sağl...

Beyin ağ salınımlar davranışsal devletlere ilişkili farklı frekans bantlarında içinde meydana gelir. Kemirgenlerde, hipokampal θ salınımlar (5-10 Hz), keşfedici davranışlar 1,2 sırasında gözlenen γ salınımlar yaparken - algı ve dikkat 3,4 dahil olmak üzere çeşitli bilişsel süreçler, (20 80 Hz) ortak. Senkron γ ağ etkinlik, aynı zamanda, epilepsi ve şizofreni 5,6 gibi bozuklukların patolojisinde rol oynar. Örneğin, γ salınımlar kortikal epileptik odağın 5,7,8 alanlarına karşılık düşünülmektedir ve pharmacosensitivity veya direnç, epilepsi araştırma 9 soruşturmanın iki önemli alanlar belirteç olarak kullanılabilir. hipokampal beyin dilim yaygın ağ etkinliğini 10-12 araştırmak için kullanılan bir modeldir. Çeşitli protokoller, tipik olarak beyin dilimleri γ osilasyonları üretmek için geliştirilmiştir ibu tür düşük Mg + 2, 4-aminopiridin (4AP), bicuculline ve kainik asit 12-17 olarak nvolve farmakolojik modülasyonu. Farmakolojik tetiklenen salınımların eksiklikleri uyuşturucu uygulamasından sonra rasgele ve güvenilir üretilen veya zamanla stabil olmadığını vardır. Elektrikle γ salınımlar bu sorunların çoğunun üstesinden de geçici epizodik kayıt ve analiz için izin uyarıcı etkinliğe kilitli avantajı var tetikledi. İşte bir protokol hipokampal dilim stratum Oriens bir tetanik stimülasyon sunarak CA1 γ salınımlarını üretilmesi için tarif edilmiştir.

<table><tbody><tr><td>4-(N-Etil-N-fenilamino)-1,2-dimetil-6- (metilamino) pirimidinyum klorür (ZD7288)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>Z3777</td><td></td></tr><tr><td>Biuculline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>14340</td><td></td></tr><tr><td>6-siyano-7-nitrokinoksa-line-2,3-dion (CNQX)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C127</td><td></td></tr><tr><td>Nikel</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>266965</td><td></td></tr><tr><td>Karbamazepin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4024</td><td></td></tr> <tr><td>(2R) -amino-5-fosfonopentano-at (APV)</td> <td>Tocris Bioscience</td><td>0105</td><td></td></tr><tr><td>Retigabine</td><td>ChemPacific</td><td>150812-12-7</td><td></td></tr><tr><td>Kolin-Cl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1879-5KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>NaH 2 PO 4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-250G</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6297-250G</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653-5KG</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 & boğa 2H 2 O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506-500G</td><td></td></tr><tr><td>MgCl 2 & boğa; 6H 2 O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670-500G</td><td></td></tr><tr><td>Elektrot camı</td><td>Harvard Aparatı&nbsp;</td><td>GC150F-10</td><td></td></tr><tr><td>Konsantrik bipolar uyarıcı metal elektrot ve nbsp;</td><td>FHC</td><td>CBBPF75</td><td></td></tr><tr><td>Dijital İzolatör</td><td>Alma Aletleri Modeli</td><td>BJN8-9V1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Model 1800 amplifikatör</td><td>sistemleri</td><td>Model 1800 amplifikatör</td><td></td></tr><tr><td>Sayısallaştırıcı</td><td>Ulusal Müdahaleler</td><td>NI USB-6211</td><td></td></tr><tr><td>Vibrotom</td><td>Leica</td><td>VT1200s</td><td></td></tr></tbody></table>

tetanik uyarım tarafından yerel ca1 γ titreşim Üretimi

Generation of Local CA1 &#947; Oscillations by Tetanic Stimulation

Nöronal ağ salınımları sağlık ve hastalık beyin aktivitesinin önemli özellikleri ve klinik olarak kullanılan ilaçların bir dizi tarafından modüle edilebilir. (- 80 ila 20 Hz), bir protokol CA1 γ salınımları çalışmak için bir model oluşturmak için temin edilmiştir. Bu γ salınımlar en az 30 dakika boyunca stabil olan ve kalp pili akımlarının aktivasyonu ek olarak, uyarıcı ve inhibitör sinaptik etkinliği bağlıdır. Tetanically uyarılmış salınımlar ağ durumuna rapor başak sayısı, salınım süresi, gecikme ve frekans da dahil olmak üzere tekrarlanabilir ve kolayca ölçülebilir özellikleri bir dizi var. elektriksel uyarılan salınımlar avantajları ağ fonksiyonu sağlam karakterizasyonu sağlayan istikrarı, tekrarlanabilirlik ve epizodik edinimini içerir. CA1 γ salınımları Bu model hücresel mekanizmaları incelemek ve sistematik hastalığı ve uyuşturucu değişmiş nasıl nöronal ağ etkinliği araştırmak için kullanılabilir.Hastalık devlet farmakoloji kolaylıkla özellikle hastalık mekanizmalarını hedef ilaçların seçimi etkinleştirmek için genetik olarak modifiye edilmiş veya girişimsel hayvan modellerinde beyin dilimleri kullanılarak dahil edilebilir.

Stratum Oriens&#39;in tetanik stimülasyon sağlam ve tekrarlanabilir γ salınımlar (35.4 ± 2.2 Hz) ürettiğini, Şekil 3B bakın. Salınımlar CA3 gelen girdiler bükük 32 G iğne kullanılarak CA2 bölgede dilim keserek kesildi yerel CA1 ağı içinde üretilen olduğunu göstermek için. salınımlar yerel olarak oluşturulan belirten, (kesilmemiş dilim 5.89 ± 0.8 sivri, n = 6;; kesme dilimleri 6.16 ± 1.1 ani n = 6 p = 0.85) kesim dilimleri salınım özelliklerinin kesilmemiş dilim farklı değildi. <p class="jove_content...

Salınımlar temel ağ özellikleri ve hastalık ve ilaçlarla modüle edilir. Beyin dilim salınımlar incelenmesi kontrollü koşullar altında izole ağların karakterizasyonu sağlar. Protokoller CA1 γ salınımları çağrıştıran akut beyin dilimleri hazırlanması için temin edilmiştir.

Tetanik Uyarım tarafından Yerel CA1 γ Titreşim Üretimi

Neuronal network oscillations are important features of brain activity in health and disease and can be modulated by a range of clinically used drugs. A ...

Bu prosedürün genel amacı, nöronal uyarılabilirlik modeli olarak hücre dışı gama osilasyonlarının kaydedilmesi için beyin kesitleri hazırlamaktır. Bu işlem, öncelikle beynin kafatasından çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda beyin, A CSF içerikli buzda hızla soğutulur ve 450 mikron kalınlığında kesitlere ayrılır.Ardından, bir kesiti kayıt odasına aktarın ve stimülasyon elektrodunu stratuma, kayıt elektrodunu ise ca one stratum parama doole bölgesine yerleştirin. Son adım, gama osilasyonlarını uyarmak ve ilaçların nöronal eksitabilite üzerindeki etkisini değerlendirmektir. Nihayetinde, hipokampal gama osilasyonlarının karakterizasyonu, ilaçların ağ fonksiyonu üzerindeki etkilerini göstermek veya nörogenetik hastalıklarda hastalık oluşum mekanizmalarını anlamak için kullanılır.Bu yöntem, epilepsi, otizm ve Alzheimer gibi nöronal ağ uyarılabilirliğinin arttığı hastalık mekanizmaları hakkında bilgi sağlamak için kullanılabilir ve ayrıca ilaçların etki mekanizmalarını araştırmak amacıyla da uygulanabilir. Bu prosedüre başlamak için, 250 mililitrelik bir behere yükseltilmiş bir naylon ağ yerleştirerek bir tutma haznesi hazırlayın. Ardından, beheri ağı yaklaşık iki santimetre ört

generation-of-local-ca1-oscillations-by-tetanic-stimulation

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

İzole hipokampi akut beyin kesitleri, hem de astrosit ve nöronların eşzamanlı elektrofizyolojik...

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

Bu video, tetanik simülasyonlar kullanılarak bir CA1 hipokampal fare beyin diliminde yerel CA1 gama salınımlarını indükleme prosedürünü göstermektedir. Bu yöntem, nöronal ağ aktivitesini anlamak için önemlidir.

Hipokampal Beyin Diliminde Tetanik Stimülasyonlar Kullanılarak Lokal Cornu Ammonis 1 (CA1) Gama Salınımlarının Oluşturulması

Bu videoda, bir sıçan hipokampal diliminde CA3-CA1 sinaptik yanıtlarını kaydetme yöntemi gösterilmektedir. Sinaptik yanıt gücünü değerlendirmek için uyarıcı ve kayıt elektrotlarının hipokampal dilim üzerine yerleştirilmesi ve alan uyarıcı postsinaptik potansiyelinin (fEPSP) ölçülmesinde yer alan adımları ana hatlarıyla belirtir.

Bir Sıçan Hipokampal Diliminde CA3-CA1 Sinaptik Yanıtlarının Kaydedilmesi

Bu video, izole bir hipokampusta teta salınımları olarak da bilinen ritmik nöronal ağ aktivitesinin kaydını göstermektedir. Elektrotlar, teta salınımlarını tespit etmek ve analiz etmek için çeşitli katmanlara ve uzamsal konumlara yerleştirilir. Bu, benzersiz nöronal bileşimleri ve nöronal ağın hipokampusun farklı katmanları arasındaki bağlantısını gösterir.

Fare hipokampusundaki teta salınımlarının in vitro kaydı

Bu video, bir fare beyin diliminde genetik olarak değiştirilmiş ışığa duyarlı internöronları aktive ederek, teta salınım senkronizasyonunu geliştirerek ve nöral devre davranışını inceleyerek hipokampal ağ dinamiklerini modüle etmek için optogenetik kullanma yöntemini göstermektedir.

Hipokampal Ağ Dinamiğinin Optogenetik Kontrolü

pedunculopontine çekirdeği (PPN) beyin sapı bulunur ve nöronlar maksimum uyanma ve hızlı göz hareketleri (REM) uykusu beyin devletler sırasında aktive edilir. Bu eser PPN nöronlar in vitro gama bandı eşik altı membran salınım kayıt için deneysel bir yaklaşım anlatılmaktadır.

Pedunculopontine Nucleus Nöronlar Kayıt Gama Bant Salınımlılığı

Burada, izole edilmiş bir tüm hipokampal preparattan ritmik nöronal ağ teta ve gama titreşimleri kaydetmek için bir protokol sunuyoruz. Hipokampusun çıkarılmasından teta ritminin optogenetik pacinginin yanı sıra alan, üniter ve tüm hücre yama klemp kayıtlarının ayrıntılarına kadar olan deneysel adımları açıklıyoruz.

Hipokampal Theta Bandında Tuning<em&gt; In vitro</em&gt;: İzole edilmiş Kemirgen Protokokal Circüse Kayıt için Metodolojiler

Biz optogenetics ve elektrofizyolojik kayıtlar hipokampal teta salınımları (5-10 Hz) farelerde davranıyor seçici işlemler için nasıl kullanılacağını açıklar. Yerel alan potansiyeli kullanarak ritim sürüklenme etkinliği izlenir. Opto - ve pharmacogenetic inhibisyon hipokampal eşitleme efferent okuma giderir.

Hipokampal teta salınımlarını fareler davranışlar içinde Optogenetic sürüklenme

Bu iletişim kuralı yerel alan potansiyelleri ile çoklu şaftlı doğrusal silikon sondalar kayıt açıklar. Geçerli kaynak yoğunluk analiz kullanarak sinyalleri dönüşüm yerel elektrik etkinlik yeniden inşası farenin hipokampus sağlar. Bu teknik ile dağınık şekilde kısıtlı beyin salınımlarını serbestçe fare hareket okudu olabilir.

Dağınık şekilde kayıt sınırlı salınım oluşur içinde fareler davranmak

Bazı gen manipüle hayvanlarda, tek bir protokol kullanarak serebellar Purkinje hücrelerinde LTD neden başarısız olabilir, ve LTD ve motor öğrenme arasında bir tutarsızlık olabilir. Gen lemanlı hayvanlarda LTD indüksiyonu değerlendirmek için birden fazla protokol gereklidir. Standart protokoller gösterilir.

Erişkin Serebellar Dilimlerde Uzun Süreli Depresyon İndüksiyonunun Değerlendirilmesi

Biz postitudinal hipokampal beyin dilimleri ve uzunlamasına konumlandırılmış kayıt ve stimülasyon elektrotlar in vivo hücre dışı postinaptik potansiyelleri uyandırmak ve göstermek için kullanılan kayıt ve stimülasyon elektrotlar uzunlamasına interlamellar CA1 boyunca uzun vadeli sinaptik plastisite.

Elektrofizyolojik Alan Kaydı ile Interlamellar Hipokampus CA1'de Uzun Süreli Sinaptik Plastisitenin Araştırılması

Keşfedin CA1 bölgesindeki gama salınımlarını kaydetmek için akut beyin kesileri hazırlama yöntemini. Bu teknik, nöronal uyarılabilirlik ve ilaç etkilerini incelemek için değerli bir araç sunar.

Tetanik Uyarım tarafından Yerel CA1 γ Titreşim Üretimi

Daha fazla video keşfet