Name: Doğrudan Fare Travma / Heterotopik Kemikleşme Model Yanık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Öğrenin, farelerde heterotopik kemikleşmeyi Achilles tenotomisi ve yanık yaralanması modeliyle nasıl çalışılacağını. Bu yöntem, travma sonrası ektopik kemik oluşumunu eksojen faktör kullanmadan araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

μCT görüntüleme ve analizindeki yardımları için Amanda Fair'e, CMI'ye ve Kathy Sweet'e ve UM'deki ORL'ye teşekkür ederiz. Finansman: BL, 1K08GM109105-01 ve Plastik Cerrahi Vakfı Ulusal Bağış Ödülü tarafından finanse edilmiştir.

Etik bildirimi: Laboratuar Hayvan Araştırmaları Enstitüsü&#39;nden Sekizinci Edition (Ilar, 2011) ve kişi: Bütün hayvan prosedürleri Laboratuvar Hayvanları Kullanımı ve Bakımı Kılavuzda verilen kılavuzda tanımlanan iyi hayvan uygulamaları ile tam uyum içinde gerçekleştirilmiştir Michigan Üniversitesi&#39;nden Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (PRO0001553) tarafından onaylanmıştır. 1. Fare Cerrahi İşlemleri NOT: 8-10 haftalık C57BL / 6 fareler. Diğer yaş, arka planlar ve farelerin suşları farklı koşullar veya genetik makyaj test etmek için kullanılır. Prosedürün tenotomi kısmı için, yüz maskesi, saç kaputu ve steril önlük, eldiven ve enstrümanları kullanarak steril koşullar korumak. Cerrahi siteler steril povidon-iyot ve steril draping ile hazırlanmalıdır. 37 ° C resüsitasyon çözümleri bir veteriner ısıtma yastığı kullanılarak ve ısıtarak hipotermi önlemek yönetilmekteydi önceyon. <ol><li> % 2.5 solunan izofluran kullanarak fare anestezisi. Kolay erişilebilir dorsum ve arka-bacaklarda bırakmak için bir burun konisi kullanın. Mukoza zarının uygun solunum hızı ve renklerini korumak için izofluran yönetiminin hızını ayarlayın ve kas tonusu, ayak tutam ve kornea refleksi kontrol ederek anestezi sağlamak. İşlem sırasında kuru göz yaralanmasını önlemek için farenin gözlerine mülayim oftalmik merhem sürün. Cerrahi alanının altında bir veteriner ısıtma yastığı veya sıcak su sirkülatör kullanılarak yeterli vücut ısısını korumak. </li><li> Analjezi için cerrahi subkutan hemen önce, buprenorfin, 0.1 mg / kg yönetme. </li><li> Yakından diz topuktan makası kullanarak sol arka pençe cerrahi siteyi tıraş. </li><li> Yakından omurga üzerinde başlayan ve dorsal orta hattın solunda traş alanını genişleten yanık karşılamak için bir alan en az 2 cm x 3 cm temizleyerek, fare dorsumuna tıraş. </li><li>3 alternatif povidon-iyot scrubs kullanarak diz arka pençesine dahil, cerrahi siteyi hazırlayın. </li><li> Sol Aşil tendonu medial boyunca uzunlamasına bir kesi yapın. Aşil tendonu kolayca görülebilmesi böylece kesi uzatmak; Yaklaşık 0.5 cm. </li><li> Keskin doku makas ile orta noktasında tendonun keskin diseksiyon ile Aşil tenotomisi gerçekleştirin. Tendon altındaki doku düzleminde doku makas biri bıçak yerleştirin ve bıçak tendon orta noktasında olduğu kadar düzlem boyunca teşrih. Keskin tendon koparmaya makas bıçakları kapatın. NOT: Gastrocnemius, Soleus ve Plantaris tendonlar da dahil olmak üzere tüm arka tendonların dahil olun. </li><li> Steril gazlı bez ile basınç uygulayarak hemostaz (orada en az kanama olmalıdır) ve 5-0 vikril dikiş ile cilt kesisi kapatın. </li><li> Yaklaşık ölçümü ile 35 g ağırlığında bir alüminyum bloğu ile dorsal kısmi kalınlıkta yanık gerçekleştirints 2 cm x 2 cm x 3 cm 17 sn için fare traş sırtına tatbik edilen bir su banyosu içinde 60 ° C&#39;ye kadar ısıtıldı. Not: Bununla birlikte, yani blok için ek basınç uygulamak bilmek bloğun bütün yüzey alanı fare ile temas halinde olması sağlanır anestezi fare üstünde blok dinlenme uygun yanık derinliği elde için yerçekimi izin yerinde bloğu tutan tek güç. Bloğun bir tarafına bağlı bir ince plastik kolu sıcak su banyosundan manipülasyonu, stabilizasyon ve alınması için uygundur. Bu yaklaşık% 30 toplam vücut yüzey alanı 8-10 haftalık C57BL / 6 fare yanık oluşturur. Bu iletişim yanık nedeniyle yara üzerinde yanık derinliği bütünlüğü ve hayvanlar arasındaki tekrarlanabilirlik diğer yöntemlerle (alev veya haşlanma yanığı) üzerinden seçildi. </li><li> Gazlı bez ile yanık sitesini kurulayın ve bir TEGADERM pansuman uygulanır. </li><li> Isıtılmış canlandırma sıvıları yönetme: Laktatlı Ringer çözeltisi 1 mlintraperitoneal enjeksiyon ve 0.5 ml deri altı enjeksiyonu. Resüsitasyon Bu tek seferlik idare yanık ve tenotomi kurtarma için yeterli. NOT: fareler tamamen iyileşti kadar gözetim altında temiz kafeslerde tek tek diğer fareler konut kafesleri evin anestezi fareler iade etmeyin. Tipik geri kazanım 1-6 saat içinde gerçekleşir. Yanık siteleri genellikle 2-4 hafta içinde iyileşir ve temiz konut ortamlarında muhafaza edilmesi durumunda nadiren yara enfeksiyonu ile komplike olur. </li><li> Buprenorfin 0.1 mg / kg deri altı enjeksiyonu prosedüre göre, 3 gün süre ile, her 12 saat uygulayın. Uygun aralıklarla seri uCT taramaları ile HO büyüme izleyin. Ektopik kemik büyümesi ilk uCT tarafından belirgin yaklaşık 3 hafta post-op olduğunu. NOT: HO geliştirme çoğunluğu post-op 9 hafta tamamlandı. Biz 15 haftada tarama uCT tek uç noktaya göre 15 hafta süreyle iki haftalık HO hacim veya tekrarlanan uCT ile yerde fark tarar gözlenen değil.Deneylerin sonunda, kurumsal kurallarına göre CO 2 inhalasyon sahip tüm fareleri euthanize ve 10 dakika sonra servikal dislokasyon ile ölüm doğrulayın. </li></ol> 2. uCT Toplama ve Analizi <ol><li> Yüzüstü pozisyonda tarayıcı yatağına anestezi fare sabitleyin. Hareket objeyi nefes önlemek için yatağa sıkıca arka bacaklarda bantlayın. Görüntü kalibrasyonu için fare altındaki hayalet içeren hava, su ve hidroksiapatit ekleyin. </li><li> Kemik Analizi yazılımı açın ve proksimal distale arka pençe ucuna kalça eklemi hem arka bacaklarda kapsar faiz (ROI) bir bölgeyi tanımlamak. Aşağıdaki parametreleri kullanarak bir görüntü elde. 80 kV, 500 uA ve 1.300 msn maruz kalma, 48 mikron voksel boyutu 14,15 </li><li> Uygun alanlara ortalama yoğunluğu üç hayalet odalarının her birinde bir yatırım getirisi çizerek ve girilerek Hounsfield üniteleri (HU) görüntü kalibreyazılımı. </li><li> Sol arka bacak tibia paralel ortotopik kortikal kemik yapıları ve HO belirlenmesi için net anatomik görünüm sağlamak için Z ekseni boyunca yani yazılımdaki &quot;kapmak&quot; aracını kullanarak, görüntüyü yeniden yönlendirin. </li><li> HO karşılaştı kadar diz başlayarak, görüntü dilimleri boyunca distale ilerleyin. Manuel spline aracını kullanarak, pençe üzerinden veya HO aştı kadar distale devam her 5 inci dilim ektopik kemik etrafında bir ROI yapmak. Genişletmek ve tüm HO içeren tek bir ROI bir araya İB&#39;leri dikiş tahmin etmek aracını kullanın. </li><li> 3D yatırım getirisi yapın ve analiz menüsünü seçin. En iyi kemik penceresini göstermek alt ve üst eşik değerlerini ayarlayarak kemik hacmini hesaplayın. Tüm taramalar için aynı sabit eşik değerlerini kullanın. </li></ol>

<ol><li>Leblanc, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP-9-induced+muscle+heterotopic+ossification+requires+changes+to+the+skeletal+muscle+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">BMP-9-induced muscle heterotopic ossification requires changes to the skeletal muscle microenvironment.</a> J Bone Miner Res. 26 (6), 1166-1177 (2011).</li>
<li>Shore, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoinductive+signals+and+heterotopic+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoinductive signals and heterotopic ossification.</a> J Bone Miner Res. 26 (6), 1163-1165 (2011).</li>
<li>Wosczyna, M. N., Biswas, A. A., Cogswell, C. A., Goldhamer, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+progenitors+resident+in+the+skeletal+muscle+interstitium+exhibit+robust+BMP-dependent+osteogenic+activity+and+mediate+heterotopic+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Multipotent progenitors resident in the skeletal muscle interstitium exhibit robust BMP-dependent osteogenic activity and mediate heterotopic ossification.</a> J Bone Miner Res. 27 (5), 1004-1017 (2012).</li>
<li>Potter, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+ossification+following+combat-related+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Heterotopic ossification following combat-related trauma.</a> J Bone Joint Surg Am. 92, Suppl 2. 74-89 (2010).</li>
<li>Van den Bossche, L., Vanderstraeten, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+ossification%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Rehabil+Med%22%5BJournal%5D)">Heterotopic ossification: a review.</a> J Rehabil Med. 37 (3), 129-136 (2005).</li>
<li>Chakkalakal, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Acvr1+R206H+knock-in+mouse+has+fibrodysplasia+ossificans+progressiva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">An Acvr1 R206H knock-in mouse has fibrodysplasia ossificans progressiva.</a> J Bone Miner Res. 27 (8), 1746-1756 (2012).</li>
<li>Yu, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+type+I+receptor+inhibition+reduces+heterotopic+%5Bcorrected%5D+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">BMP type I receptor inhibition reduces heterotopic [corrected] ossification.</a> Nat Med. 14 (12), 1363-1369 (2008).</li>
<li>Culbert, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alk2+regulates+early+chondrogenic+fate+in+fibrodysplasia+ossificans+progressiva+heterotopic+endochondral+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Alk2 regulates early chondrogenic fate in fibrodysplasia ossificans progressiva heterotopic endochondral ossification.</a> Stem Cells. 32 (5), 1289-1300 (2014).</li>
<li>Dinther, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALK2+R206H+mutation+linked+to+fibrodysplasia+ossificans+progressiva+confers+constitutive+activity+to+the+BMP+type+I+receptor+and+sensitizes+mesenchymal+cells+to+BMP-induced+osteoblast+differentiation+and+bone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">ALK2 R206H mutation linked to fibrodysplasia ossificans progressiva confers constitutive activity to the BMP type I receptor and sensitizes mesenchymal cells to BMP-induced osteoblast differentiation and bone formation.</a> J Bone Miner Res. 25 (6), 1208-1215 (1359).</li>
<li>Peterson, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burn+injury+enhances+bone+formation+in+heterotopic+ossification+model%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Burn injury enhances bone formation in heterotopic ossification model.</a> Ann Surg. 259 (5), 993-998 (2014).</li>
<li>Scott, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+review+of+models+of+ectopic+bone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Brief review of models of ectopic bone formation.</a> Stem Cells Dev. 21 (5), 655-667 (2012).</li>
<li>Tannous, O., Griffith, C., O'Toole, R. V., Pellegrini, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+ossification+after+extremity+blast+amputation+in+a+Sprague-Dawley+rat+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Trauma%22%5BJournal%5D)">Heterotopic ossification after extremity blast amputation in a Sprague-Dawley rat animal model.</a> J Orthop Trauma. 25 (8), 506-510 (2011).</li>
<li>Tannous, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+bone+formation+about+the+hip+undergoes+endochondral+ossification%3A+a+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop+Relat+Res%22%5BJournal%5D)">Heterotopic bone formation about the hip undergoes endochondral ossification: a rabbit model.</a> Clin Orthop Relat Res. 471 (5), 1584-1592 (2013).</li>
<li>Peterson, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+heterotopic+ossification+through+remote+ATP+hydrolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Treatment of heterotopic ossification through remote ATP hydrolysis.</a> Sci Transl Med. 6 (255), 255ra132(2014).</li>
<li>Peterson, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+burn+induced+heterotopic+ossification+using+transcutaneous+Raman+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Early detection of burn induced heterotopic ossification using transcutaneous Raman spectroscopy.</a> Bone. 54 (1), 28-34 (2013).</li>
<li>Perosky, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+heterotopic+ossification+using+near-infrared+optical+imaging+reveals+dynamic+turnover+and+progression+of+mineralization+following+Achilles+tenotomy+and+burn+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Early detection of heterotopic ossification using near-infrared optical imaging reveals dynamic turnover and progression of mineralization following Achilles tenotomy and burn injury.</a> J Orthop Res. 32 (11), 1416-1423 (2014).</li>
<li>Peterson, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Aging+on+Osteogenic+Response+and+Heterotopic+Ossification+Following+Burn+Injury+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of Aging on Osteogenic Response and Heterotopic Ossification Following Burn Injury in Mice.</a> Stem Cells Dev. , (2014).</li>
<li>Alfieri, K. A., Forsberg, J. A., Potter, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast+injuries+and+heterotopic+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+and+Joint+Research%22%5BJournal%5D)">Blast injuries and heterotopic ossification.</a> Bone and Joint Research. 1 (8), 174-179 (2012).</li>
<li>Hunt, J. L., Arnoldo, B. D., Kowalske, K., Helm, P., Purdue, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+ossification+revisited%3A+a+21-year+surgical+experience%5BTitle%5D)+AND+%22J+Burn+Care+Res%22%5BJournal%5D)">Heterotopic ossification revisited: a 21-year surgical experience.</a> J Burn Care Res. 27 (4), 535-540 (2006).</li>
<li>Ring, D., Jupiter, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operative+release+of+ankylosis+of+the+elbow+due+to+heterotopic+ossification.+Surgical+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Operative release of ankylosis of the elbow due to heterotopic ossification. Surgical technique.</a> J Bone Joint Surg Am. 86-A, Suppl 1. 2-10 (2004).</li>
<li>Crane, N. J., Polfer, E., Elster, E. A., Potter, B. K., Forsberg, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raman+spectroscopic+analysis+of+combat-related+heterotopic+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Raman spectroscopic analysis of combat-related heterotopic ossification.</a> Bone. 57 (2), 335-342 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur

Heterotopik ossifikasyon, travma, yanık ve invaziv kas-iskelet sistemi prosedürlerine maruz kalan hastaların karşılaştığı önemli bir fonksiyonel bozukluğu temsil eder. En fazla risk altındaki nüfus, el yapımı patlayıcılar (IED) gibi mekanizmalardan kaynaklanan büyük patlama yaralanmaları olan modern çatışmalardaki askerlerdir. 18 Geliştirilmiş vücut zırhı ve öne konumlandırılmış tıbbi üniteler, büyük ekstremite yaralanmasının daha iyi hayatta kalmasını sağlar. Ekstremite yaralanmalarının ilk stabilizasyonu ...

Heterotopik ossifikasyon (HO), osteo-potent hücrelerin iskelet dışında endokondral kemik oluşturmak üzere anormal bir şekilde indüklendiği ektopik kemik oluşumudur. HO oluşum yolunun detayları hala büyük ölçüde bilinmemekle birlikte, kabul edilen bir paradigma üç temel faktör içerir: inflamatuar bir kışkırtıcı olay, izin verilen bir niş ve kemik oluşturabilen mezenkimal kök hücreler. 1-3 HO, majör yanık yaralanmalarının %60'ından fazlasını, savaşla ilgili yaralanmaların %65'ini ve invaziv ortopedik cerrahi vakalarının %10'unu komplike hale getiren yaygın bir komorbiditedir. 4,5 Bununla birlikte, HO'nun nerede oluşacağını tahmin etmek genellikle zordur, çünkü yerel yaralanma bölgelerinde veya başka türlü yaralanmamış olabilecek uzak yerlerde ortaya çıkabilir. Lokasyondaki bu değişkenlik, lokal olarak hedeflenen bir şekilde reaktif kemik oluşumunu önlemek için profilaktik olarak müdahale etmeyi zorlaştırır. Fibrodisplazi ossificans progressiva (FOP) gibi hastaların minör travma veya inflamatuar hakarete yanıt olarak sağlam HO gelişimine yatkın olduğu konjenital HO formları da vardır. Transgenik fareleri kullanan güçlü hayvan modelleri bu fenotipi yeniden üretmiş ve travmaya bağlı HO'da da önemli olabilecek moleküler yollar hakkında bilgi sağlamıştır.6-9 Konjenital olmayan HO'nun patogenezine yönelik translasyonel araştırmalar, tek başına yaralanmadan eksojen osteo-indüktif materyallerin ve/veya hücrelerin implantasyonuna kadar çok çeşitli yapılar kullanmıştır. 10-13
Önceki çalışmamızda, farelerde herhangi bir eksojen materyalin uygulanmasını gerektirmeyen basit ve güvenilir bir HO oluşumu modelini doğruladık. 14-17 Bu model, HO'yu başlatmak için iki temel koşul yarattı: lokal travma ve küresel inflamasyon. Bu, uzak bir yanık yaralanması (küresel inflamasyon) ile birlikte bir Aşil tenotomisi (lokal travma) kullanılarak başarıldı. Fareler her iki tedaviyi de aynı anda aldı ve histolojik, radyolojik ve moleküler yollarla analiz edilebilecek sağlam miktarda HO geliştirdikleri bulundu. İlginç bir şekilde, eşzamanlı yanık yaralanması, gelişimsel zaman seyrini oluşturan ve hızlandıran HO miktarını önemli ölçüde artırdı. 14-16 HO, tenotomi yapılan ekstremitenin kalkaneus, ayak bileği eklemi ve tibia/fibula çevresinde öngörülebilir bölgelerde gelişti. Bilinen bir yerde HO gelişiminin güvenilirliği, ektopik ossifikasyonun erken evrelerinde moleküler ve histolojik özelliklerin odaklanmış olarak incelenmesine izin verdi. 14,17 Bugüne kadar, tenotomi ve eşzamanlı yanık yaralanması olan farelerin (50'den fazla hayvan) %100'ünde HO gelişmiştir. Ek olarak, HO'nun büyüme modelini ve biyokimyasal yapısını incelemek için uzunlamasına 2D ve 3D görüntüleme ve spektroskopik analiz yapılmıştır.15,16

<table><tbody><tr><td>C57BL / 6 fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>664</td><td>8-10 haftalık</td></tr><tr><td>Isofluran &ndash; Fluriso</td><td>VET one, Boise, ID</td><td>V1 501017</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin & Buprenex</td><td>Reckitt Benckiser Healthcare</td><td>NDC 12496-0757-1</td><td>0.3 mg / ml çözelti</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Owens ve Minor, Mechanicsville, VA</td><td>2047PVP202</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicryl sütürler</td><td>Ethicon, Summerville, NJ</td><td>J493</td><td></td></tr><tr><td>Tegaderm Film, 6 cm x 7 cm</td><td>3M</td><td>1624W</td><td>Yanık bölgesini ve mikroyu düzgün bir şekilde kapatmak için ikiye bölün</td></tr><tr><td>; CT - GE eXplore Locus SP</td><td>GE Healthcare Klinik Öncesi Görüntüleme, Londra, ON, Kanada</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microview 2.2 İleri Kemik Analizi Uygulaması</td><td>GE Healthcare Klinik Öncesi Görüntüleme, Londra, ON, Kanada</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

doğrudan fare travma / heterotopik kemikleşme model yanık

Direct Mouse Trauma/Burn Model of Heterotopic Ossification

Heterotopik ossifikasyon (HO), kemikte majör travma, yanık yaralanmaları ve ortopedik cerrahi işlemler sonrasında oluşan iskelet dışında kemik oluşumudur. HO'yu incelemek için kullanılan hayvan modellerinin çoğu, kemik morfogenetik proteini (BMP), eksojen hücre yapıları veya BMP sinyallemesindeki genetik mutasyonlar gibi eksojen maddelerin uygulanmasına dayanır. Bu modeller yararlı olsa da, HO vakalarının çoğuna neden olan enflamatuar durumları doğru bir şekilde yeniden üretmezler. Burada, farelerde güvenilir bir şekilde odaklanmış HO üreten bir yanık / tenotomi modelini açıklıyoruz. Bu protokol, toplam vücut yüzey alanının% 30'unun oluşturulmasını, dorsal deride kısmi kalınlıkta temas yanığı ve Aşil tendonunun orta noktasında bölünmesini içerir. Öngörülebilir bir yerde HO'yu indüklemek için yalnızca travmatik yaralanmaya güvenmek, yalnızca içsel fizyolojik süreçlerden ve çevreden endokondral heterotopik kemik oluşumunun zaman seyri çalışmasına izin verir. Bu yöntem, travmaya bağlı HO'da yer alan inflamatuar ve osteojenik yolakların anlaşılmasında etkili olabilir. Ayrıca, HO bu modelde öngörülebilir bir konum ve zaman seyrinde geliştiği için, HO oluşumunu önlemek için erken görüntüleme stratejilerini ve tedavi yöntemlerini geliştirmeye yönelik araştırmalara izin verir.

Bu çalışmamızda, protokol travma önce yayınlanan fare modeli tarif edilmiştir / HO. 14-17 Bu yanık kısmi kalınlıkta bir Aşil tenotomisinin ve küresel inflamatuar hakaret ile eş zamanlı lokalize kas-iskelet yaralanması oluşturulmasını içerir kaynaklı yanık. Bu seri görüntüleme ile takip edilebilir tenotominin sahasında reaktif kemik güvenilir oluşumu ile sonuçlanır. Bugüne kadar, hem Aşil tenotomisi sürekli ve yanık var (50&#39;den fazla) tüm fareler tenotomi yerinde HO ölçülebilir miktarda geliştirdik. Ektopi...

Heterotopik ossifikasyonun bir Aşil tenotomisi ve yanık yaralanması modeli, travmaya bağlı ektopik kemik oluşumunun ekzojen faktörlerin uygulanmadan güvenilir bir şekilde incelenmesine olanak tanır.

Doğrudan Fare Travma / Heterotopik Kemikleşme Model Yanık

Heterotopic ossification (HO) is the formation of bone outside of the skeleton which forms following major trauma, burn injuries, and orthopaedic surgical ...

Bu prosedürün genel amacı, eksojen materyal uygulaması yapmadan, travmatik bir yaralanmayı takiben ektopik kemik oluşumunu indüklemektir. Bu, öncelikle odaklanmış bir kas-iskelet sistemi yaralanması oluşturularak gerçekleştirilir. Bu vakada, bir Aşil tendonotomisi uygulanmıştır.İkinci adımda, global bir inflamatuar durum indüklenir. Burada, yüzey alanının %30'unu kapsayan parsiyel kalınlıkta bir kontakt yanık gösterilmektedir. Ardından, sonraki beş ila dokuz hafta boyunca tenotomi bölgesinde heterotopik ossifikasyonun veya HO'nun gelişmesine izin verilir.Nihayetinde, ektopik kemiğin miktarı ve konumu mikro tomografik görüntüleme ile değerlendirilebilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bu modelde klinik bir korelasyonunun olmasıdır. Fareler, herhangi bir ek sitokin veya farelerde ek mutasyon olmaksızın önce bir kıkırdak öncüsü, ardından heterotopik kemik oluştururlar.Böylece, heterotopik ossifikasyonu olan hastalarda gördüğümüz kemik tipini iyi bir şekilde taklit ettiği için, bu yöntemin terapötiklerin ve diğer görüntüleme modalitelerinin daha iyi test edilmesine olanak sağlayacağını düşünüyoruz. Bu tekniğin etkileri, ektopik kemik gelişiminin ossifikasyona uğramadan önceki potansiyel tedavilerinin incelenmesine imkan tanıdığı için HO'nun tedavisi ve teşhisine kadar uzanmaktadır. Bu yöntemle ilgili ilk fikri, yanık bölgesinden uzak çeşitli konumlarda HO gelişen ağır yanık hastalarında ve diğer hastalarda kas-iskelet sistemi travması olan bölgelerde HO gördüğümüzde edindik.Anestezi uyguladıktan sonra, ayak parmakları sıkıştırmaya karşı yanıt olmadığını doğrulayın ve analjezik uygulayın. Sekiz ila 10 haftalık yetişkin bir C 57 BL six fareinin gözlerine merhem sürün. Ardından hayvanı bir ısıtma pedine yerleştirin ve tıraş makinesi kullanarak arka patiyi topuktan dize kadar yakından tıraş edin.Ardından omurga üzerinden başlayarak dorsal orta hattın soluna doğru genişletin. Yanık yaralığının oluşturulabileceği en az iki çarpı üç santimetrelik bir alanı temizleyin. Tüm tüyler alındıktan sonra, cerrahi alanı ve arka patiyi temizlemek için ardışık olarak üç kez povidon iyot ile scrub uygulayın; yüz maskesi, bone, steril önlük ve eldiven dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu donanımı giyin.Ardından, steril aletler kullanarak sol aşil tendonunun medial yönü boyunca 0,5 santimetrelik boyuna bir insizyon yapın. Tendon görünür hale geldiğinde, keskin bir doku makasının bir ucunu tendonun altındaki doku düzlemine yerleştirin ve makas ucu tendonun orta noktasına gelene kadar bu düzlem boyunca diseksiyon yapın. Daha sonra, tendonu kesmek için makas uçlarını hızla kapatın ve hemostaz sağlamak için steril bir gazlı bezle basınç uygulayın.Cilt insizyonu 5-0 Vicryl dikişle kapatıldıktan sonra, 35 gramlık 2x2x3 cm boyutlarındaki bir alüminyum bloğu bir su banyosunda 60 °C'ye kadar ısıtın. Blok ısındığında, tüm yüzeyin fareyle temas ettiğinden emin olarak farenin üzerine 17 saniye boyunca yerleştirin. Ardından, dorsal parsiyel kalınlık yanığını gazlı bezle kurulayın ve tegaderm pansuman uygulayın; hayvanı, intraperitoneal ve subkutan enjeksiyon yoluyla ısıtılmış laktatlı ringer solüsyonu uygulayarak resüsite edin.Ardından, fareyi tamamen iyileşene kadar izleme amacıyla tekli bir kafese yerleştirin. Dorsal kısmi kalınlık yanığı sonrası uygun zaman noktalarında yaralanmaların heterotopik ossifikasyonunu mikro CT analizi ile izlemek için, anestezi altındaki fareyi pron pozisyonda tarayıcı tablasına sabitleyin. Solunum hareketine bağlı artefaktları önlemek için arka ekstremiteyi tablaya güvenli bir şekilde bantlayın ve görüntü kalibrasyonu için farenin altına hava, su ve hidroksiapatit içeren fantomu yerleştirin.Ardından, kemik analiz yazılımını açın ve kalça ekleminden proksimal olarak arka pençenin ucuna distal olarak kadar her iki arka ekstremiteyi kapsayan bir ilgi alanı tanımlayın. Belirtilen parametreleri kullanarak bir görüntü elde edin. Daha sonra, üç fantom odasının her birinde bir ilgi alanı çizin ve görüntüyü hounds alan birimlerine kalibre etmek için ortalama yoğunluğu yazılımdaki uygun alanlara girin.En net anatomik görünümü elde etmek için, sol arka ekstremitenin tibia kemiği Z ekseni boyunca paralel olacak şekilde görüntüyü yeniden yönlendirmek üzere yazılımdaki yakalama aracını kullanın. Ardından, dizden başlayarak görüntü kesitleri boyunca distal yönde ilerleyin. HO ile karşılaşıldığında, pençeye kadar distal yönde devam ederek veya HO geçilene kadar her üçüncü ila beşinci kesitte, ektopik kemiğin etrafında bir ilgi alanı oluşturmak için manuel spline aracını kullanın.Ardından, ilgi bölgelerini genişletmek ve tüm heterotopik ossifikasyonları (HO) içeren tek bir ilgi bölgesine dönüştürmek için ekstrapolasyon aracını kullanın. Son olarak, 3 boyutlu bir ilgi bölgesi oluşturun ve analiz menüsünü açarak, kemik hacmini hesaplamak için kemik penceresini en iyi şekilde gösteren alt ve üst eşik değerlerini ayarlayın. Az önce gösterildiği gibi hem Aşil tendonotomi hem de yanık yaralanmasına maruz kalan tüm farelerde, ektopik kemik oluşumunu nicelleştirmek için tendonotomi bölgesinde ölçülebilir miktarda HO gelişmiştir.Kalibre edilmiş görüntü mikro CT protokolü, istenen her zaman noktasında kullanılır. Yanık yaralanmasının Aşil tendonotomi ile kombinasyonunun, belirgin heterotopik kemikleşmenin indüklenmesinde anahtar olduğu kanıtlanmıştır; nitekim her iki yaralanma eş zamanlı olarak uygulandığında, sadece Aşil tendonotomisine kıyasla tendonotomi bölgesinde oluşan ektopik kemik miktarında önemli bir artış görülmektedir. Uzmanlaşıldığında, bu teknik uygun şekilde uygulandığında hayvan başına 10 dakika veya daha kısa sürede tamamlanabilir.Bu prosedürü uygularken, tüm posterior tendonların tamamen kesilmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir. Bu prosedürün ardından, ne kadar kemik oluştuğunu ve belirli ilaçların etkisini değerlendirmek için RO spektroskopisi, biyolüminesans veya BT taraması gibi görüntüleme yöntemlerini kullanabiliriz. Ayrıca, heterotopik ossifikasyonun neden geliştiğinin ardındaki gerçek sinyal mekanizmalarını ve ilaçlarımızın nasıl çalıştığını incelemek için histoloji, immünohistokimya ve immünofloresan yöntemlerini de kullanabiliriz.

direct-mouse-traumaburn-model-of-heterotopic-ossification

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Wang, Y. ve diğerleri. In Vivo'da Çoklu ilaç dirençli Acinetobacter baumannii yanık enfeksiyonlarında biyolüminesans görüntüleme kullanılarak antimikrobiyal mavi ışık tedavisinin araştırılması. J. Vis. Exp. (2017)Bu video, fare modelinde ısıtılmış pirinç blok uygulanarak ardından patojenik bakteriyel aşı uygulanarak yanık enfeksiyonu nasıl oluşturulacağını gösteriyor. Bakteriler, açıkta kalan ekstrasellüler matriksi kolonileştirir ve bir biyofilm oluşturur; bu da konak-patojen...

Patojenik Bakterilerle Yanık Enfeksiyonlarının Fare Modeli Oluşturmak

Biz özel yapım bir şıkkı kullanılarak geliştirilmiş bir fare tibial oyalama osteogenesis modeli mevcut. Bir fare kullanımı bir analizi hedef olarak araştırma ilerlemek için avantajlıdır.

Bir fare oyalama Osteogenesis modeli

Burada, meme blastema oluşumu ve Intramembranous ossifikasyon araştırmak için yetişkin fare terminali falanks amputasyon bir protokol sunuyoruz, floresan immünhistokimya ve sıralı in-vivo MİKROBİLGİSAYARLI tomografi ile analiz.

Yetişkin fare basamak amputasyon ve rejenerasyonu: Mammalin Blastema oluşumu ve Intramembranous ossifikasyon araştırmak için basit bir model

Bu çalışmanın amacı yanık yara iyileşmesi bir murine modeli geliştirmektir. Önceden ısıtılmış pirinç şablonu kullanılarak farelerin sırt derisinde termal yanık yapıldı. Yanmış doku debrideed ve genetik olarak benzer donör fare kuyruğundan hasat bir deri greft içip kaplandı.

Allojenik Deri Grefti ile Yeniden Yapılandırılan Yanık Yarasının Murine Modeli

Yanık hasarı ve enfeksiyonunun klinik senaryosunu taklit eden bir model, yanık araştırmalarını ilerletmek için gereklidir. Mevcut protokol, insanlardakiyle karşılaştırılabilir basit ve tekrarlanabilir bir sıçan yanığı enfeksiyon modeli göstermektedir. Bu, yeni topikal antibiyotik tedavileri geliştirmek için yanık ve yanık sonrası enfeksiyonların incelenmesini kolaylaştırır.

Tam Kalınlıkta Kutanöz Termal Yanık ve Enfeksiyonu İncelemek için Sıçan Yanık Modeli

Bu protokol, farelerde alkali yanığın neden olduğu kornea neovaskülarizasyonuna odaklanır. Yöntem, patolojik anjiyogenezi ve ilişkili moleküler mekanizmaları incelemek ve kornea neovaskülarizasyonunu önlemek için yeni farmakolojik ajanları test etmek için tekrarlanabilir ve kontrol edilebilir bir kornea hastalığı modeli oluşturur.

Alkali Yanığı ile Kornea Neovaskülarizasyonu için Bir Fare Modeli

Bu protokol, insan benzeri yara izini simüle etmek için mekanotransdüksiyon sinyalini artıran bir hipertrofik yara izi oluşturan murin modelinin nasıl oluşturulacağını açıklayacaktır. Bu yöntem, bir farede iyileşen bir kesi boyunca mekanik gerilimi artırmayı ve ayrıntılı histolojik ve biyoinformatik analizler için tekrarlanabilir, aşırı skar dokusu oluşturmak için özel bir cihaz kullanmayı içerir.

Mekanotransdüksiyon Odaklı, İnsan Benzeri Hipertrofik Yara İzinin Bir Fare Modeli

Dijital bir ısıtma cihazı kullanan farelerde bir yanık yarası iyileşme modeli oluşturmak için aerodinamik bir protokol sunulmuştur. Deri üzerinde oluşturulan satranç tahtası benzeri deney bölgeleri, yara iyileşme testi için daha fazla fonksiyonel analizi kolaylaştırır.

Dijital Isıtma Cihazına Dayalı Farelerin Satranç Tahtası Benzeri Yanık Yara İyileşme Modeli

Heterotopik arka uzuvdan boyuna vaskülerize kompozit allotransplantasyonlu tekrarlanabilir bir fare modeli sunuyoruz. Bu süpermikrocerrahi protokol, 0,3-0,5 mm damar anastomozlarını içerir ve naylon filament yönlendirmesi ile venöz kelepçeleme ile birleştirilir. Vaskülerize kompozit allotransplantasyonda tolerans, iskemi-reperfüzyon hasarı ve immünolojik mekanizmalar üzerine translasyonel çalışmalar için güvenilir bir platform sağlar.

Farede Heterotopik Arka Uzuvdan Boyuna Nakil: Vaskülerize Kompozit Allotransplantasyonun Süpermikrocerrahi Modeli

Farelerde kalplerin heterotopik nakli için mikrocerrahi prosedür için, donör toplama ve alıcı damar anastomozu için basitleştirilmiş yöntemler de dahil olmak üzere bir teknik gösterilmiştir.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Öğrenin, farelerde heterotopik kemikleşmeyi Achilles tenotomisi ve yanık yaralanması modeliyle nasıl çalışılacağını. Bu yöntem, travma sonrası ektopik kemik oluşumunu eksojen faktör kullanmadan araştırmaya olanak tanır.

Doğrudan Fare Travma / Heterotopik Kemikleşme Model Yanık

Daha fazla video keşfet