Name: Bir Klinik İlgili kurulması Ex Vivo Mock Katarakt Cerrahisi Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Öğrenin, tavuk embriyosu gözünde klinik önemli bir ex vivo katarakt cerrahisi modeli kurarak epitel dokularının yara iyileşmesi mekanizmalarını incelemeyi. Bu yöntem, göz dokularında doku onarımı araştırmaları için değerli bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından A.S.M.'ye (EY021784) hibe ile desteklenmiştir.

Aşağıdaki protokol Thomas Jefferson Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu kurallarına ve Vizyon Araştırma Hayvanların Kullanım ARVO Bildirimi ile uyumludur. Ex Vivo Yara Kültür Lensler 1. Kurulum ve Hazırlık <ol><li> Steril, laminer akış başlığı içinde üç adet 100 mm petri kapları yerleştirin. Oda sıcaklığında, yarım Tris / Dekstroz tamponu ile petri kutularının iki (140 mM NaCI, 5 mM KCI, 0.7 mM Na-2 PO 4, 5 mM D-glikoz, 8.25 mM Tris baz, HCI ile 7.4&#39;e pH td tamponu) doldurun Üçüncü boş bırakarak. Ön sıcak kültür ortamı 37 o C ye (Ortam 199,% 1 L-glutamin ve% 1 penisilin / streptomisin ile takviye edilmiş) Not: in vivo meydana geldiği gibi kültür ortamı iyileşme, standart bir yara, serumsuz olduğu; Bununla birlikte, yara onarımı kültürleri serum ya da diğer faktörleri de tanımlanmış ortam koşullarında başarıyla yetiştirilebilir. </li><li> Bereketli embriyonik d kaldıray inkübatör 15 beyaz leghorn civciv yumurta (hafif hafif sallanarak 37.7 ° C&#39;de tutulan) </li><li> Bir yıkama şişesinden laminar akış çeker ve% 70 etanol ile kabuğun temiz bir dış seçilen yumurta yerleştirin. Steril çözümleri ve araçları kullanarak, laminer akış kaputu aseptik koşullarda aşağıda tüm prosedürleri yürütün. </li><li> Boş 100 mm petri içine yumurta ve yer içeriğini Crack. Standart forseps ve ince makas kullanılarak embriyo başını kesmek. TD tampon içeren bir petri civciv embriyo baş koyun ve düzgün embriyonun geri kalan atmayın. İsteğe bağlı, 15 dakika daha uzun, kısa bir süre için TD tamponda civciv embriyo başlarını tutun. </li><li> Bir petri kapağı üzerinde civciv embriyo başını yerleştirin. Yüksek hassasiyetli forseps kullanarak, aşağıdaki sırayla göz ekli vitreus ile birlikte lensi çıkarın. Gözün arkasında küçük bir açıklık oluşturmak için forseps ile gözün arka sıkıştırın. </li><li> Sonra, w vitreus mizah kavramaki forseps ve yavaşça bir yuvarlanma hareketi ile vitreus römorkör, ekli lens ile vitreus göz yerinden edilecektir. TD tampon içeren kalan petri vitreus yerleştirin objektif /. Lensler artık 30 dakika için TD tamponu içinde kalmasına izin verir. </li><li> Bir mikroskop altında yeni bir petri kapak lensi hareket ettirin. Bu noktada bir mikroskop altında tüm adımları uygulayın. Yüksek hassasiyetli forseps dikkatle mercek dokusuna zarar vermemeye dikkat alarak forseps kenarı kullanılarak lens ile yerinden edilmiş herhangi siliyer cisim (pigmentli hücreler) uzakta fırça ile. Not: siliyer gövde çıkarılması lens endojen olmayan hücre tipleri, yara onarımı kültürü dahil olmasını sağlar. </li><li> Arka lens kapsülü ile dernekten vitreus vücudu kapalı kısma yüksek hassasiyetli forseps ile vitreus mercek ayırın. </li><li> Yüksek hassasiyet kullanarak küçük bir damla içine lensi transferi forsepsbir 35 mm doku kültürü çanağı içinde TD tamponu (yaklaşık 200 ul). </li></ol> 2. Sahne Mock Katarakt Cerrahisi <ol><li> Yukarı bakacak şekilde lensin ön yönü ile 35 mm çanak TD tampon damla lensi yönlendirin. Not: merceğin ön kolay lens epitelyum ön ve ekvator bölgesi arasındaki sınır notlar dokuda yoğun halkasının mevcudiyeti ile tanımlanır. Bunun aksine, mercek elyaf hücrelerinin bağlı olduğu mercek kapsülünün arka işaretlerin yokluğu vardır. </li><li> , Her el bir forseps ile doku tutarak iki yüksek hassasiyetli forseps ön lens kapsülü, objektif dokusunu çevreleyen kalın bazal membran ve ilişkili lens ön epitel merkezinde küçük bir kesi (yaklaşık 850μm) yapmak kullanma ve yavaşça karşıt yönlerde asılarak. </li><li> Lens dokusu, dislod kısmını oluşturan lif hücre kütlesi, KaldırLens epitel eklerinde onu ging ve (Şekil 1A modellenmiş klasik katarakt cerrahisinde kullanılan bir yaklaşım,) hidro-elüsyon lens kapsülü çevreleyen. </li><li> TD tampon 300 ul bir 27.5 g bir iğne ucu ile bir 1 ml şırınga doldurun. Anteryor mercek kapsülünün yapılan kesi içine iğne ucu yerleştirin ve yaklaşık yarım lens içine. </li><li> Yavaşça mercek fiber hücre kitlesinin içine TD tampon enjekte şırınga basınız. 50 ila 200 ul TD, ve asla fazla 300 ul enjekte edilir. Epitel ve lens kapsülünün kendisini gevşeterek lif hücre kütlesi gözlemleyin. </li><li> Yüksek hassasiyetli forseps kullanarak, ön kesi sitesi aracılığıyla objektiften gevşetti lif hücre kütlesi kaldırın. Not: Bu yordam, bu siteye sadece komşu lif hücreleri ekli hücrelerin soyulmuş edilmişti posterior lens bazal membran kapsülü ve bir yaralı lens epitel bırakır. </li></ol> 3. PreparinEx Vivo Kültür g Yaralı Objektif <ol><li> Kapsül çanta ön yüzünde beş kesim yaparak, kültür tabağına yukarıda açıklanan katarakt cerrahisi, hücre tarafı yukarı kaynaklanan objektif kapsül çanta düzleştirin. </li><li> Lensin ekvatora kadar orijinal kesi dik kesin. Aşağı kültür çanak kapsül tarafında takılı epiteli hücre tarafı yukarı ile mercek kapsülünün sonuçtaki beş &quot;flep&quot; dümdüz. Bir yıldızın ya da flowerlike şekli (Şekil 1B bakınız) almalı şimdi ex vivo yaralı lensi unutmayın. </li><li> Yıldızın her noktada usulca aşağı forseps ile, çanak basın kapsülü sabitlemek için. Bu eksplant beş en dış ucunda küçük bir girinti yapmak ve yemek için sürekli eki neden olur. Not: Bu işlem sırasında kapsül zarar mümkündür ve böylece fla uçlarına yakın çanak kapsülü sabitlemek için önemlidirmümkün olduğunca PS yanı sıra mümkün olduğunca emniyet noktalarının en az miktarda yapmak için (genellikle iki, flep başına üç maksimum). </li><li> 35 mm çanak TD tamponunu çıkarın ve önceden ısıtılmış ortam 1,5 mi ile değiştirin. Inkübatör, kapağı ve yer ile 35 mm çanak Kapak (37 ° C,% 5 CO2). </li></ol> Arka Kapsül Yaralı Alanı Yeniden epitelizasyon Kantitatif Analiz Lens Epitel Hücreleri Orjinal Ek Zonu (OAZ), dan, oluşuyor Orta Göç Bölgesi (CMZ), 4. ayrılması. Not: hücreler, hasara tepki olarak, hemen CMZ bölgeye doğru hareket etmeye başlar. Kültürde günden yeterince hücrelerin mikro diseksiyon 23 ile CMZ ve Oaz ayrılması sonrasında, moleküler ve biyokimyasal analiz için CMZ genelinde göç vardır. Bu protokol, kapsülün yaralı bölgeden bir seferde bir kanat (OAZ) kaldırılmasını içerir. <ol><li> Bir Demar gözlemleyinkatyondur, OAZ ve Cmz arasında mikroskop altında açıkça görülebilir (Şekil 2A). İki yüksek hassasiyetli forseps kullanılarak, çizginin her iki tarafında, OAZ / CMZ hattı, başka bir hemen yanında bir kenarına, her iki forseps ile kavramak (Şekil 2A, B, ok). </li><li> Bir elinizi kullanarak / CMZ tarafta bir forseps Öte yandan / forseps ile yavaşça OAZ / CMZ hattı boyunca Oaz çekerken, yaralı kültüre tutunmaya devam ediyor. CMZ kolayca bu hat boyunca Oaz ayrılır. Iki bölge tamamen ayrılır kadar tüm kültür etrafında bu çizgi boyunca devam edin. </li><li> Örneğin Western blot veya ko-immünopresipitasyon 23,25 gibi RNA Dizi 24 veya biyokimyasal analizler gibi moleküler analiz için ayrıldı OAZ ve CMZ fraksiyonlar incelenmesi. </li></ol>

<ol><li>Walker, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+precursors+for+the+mesenchymal+cells+involved+in+injury+response+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Unique precursors for the mesenchymal cells involved in injury response and fibrosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 13730-13735 (2010).</li>
<li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration+in+morphogenesis%2C+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nature reviews. Molecular cell biology. 10, 445-457 (2009).</li>
<li>Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+wound-healing+assays+for+probing+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+laboratory+automation%22%5BJournal%5D)">Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration.</a> Journal of laboratory automation. 17, 59-65 (2012).</li>
<li>Khalil, A. A., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+leader+cells+in+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+biology+%3A+quantitative+biosciences+from+nano+to+macro%22%5BJournal%5D)">Determinants of leader cells in collective cell migration.</a> Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 2, 568-574 (2010).</li>
<li>Walker, J. L., Wolff, I. M., Zhang, L., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+SRC+kinases+signals+induction+of+posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Activation of SRC kinases signals induction of posterior capsule opacification.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 48, 2214-2223 (2007).</li>
<li>Sta Iglesia, D. D., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+basement+membrane+after+corneal+debridement%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Disruption of the basement membrane after corneal debridement.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1045-1053 (2000).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+the+study+of+recurrent+corneal+epithelial+erosions%3A+alpha9beta1+integrin+implicated+in+progression+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 45, 1775-1788 (2004).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+basement+membrane+enhances+corneal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing.</a> Experimental eye research. 93, 927-936 (2011).</li>
<li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental eye research. 121, 178-193 (2014).</li>
<li>Kuwabara, T., Perkins, D. G., Cogan, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sliding+of+the+epithelium+in+experimental+corneal+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Sliding of the epithelium in experimental corneal wounds.</a> Investigative ophthalmology. 15, 4-14 (1976).</li>
<li>Sherrard, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+corneal+endothelium+in+vivo%3A+its+response+to+mild+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The corneal endothelium in vivo: its response to mild trauma.</a> Experimental eye research. 22, 347-357 (1976).</li>
<li>Stramer, B. M., Zieske, J. D., Jung, J. C., Austin, J. S., Fini, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+controlling+the+fibrotic+repair+phenotype+in+cornea%3A+implications+for+surgical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms controlling the fibrotic repair phenotype in cornea: implications for surgical outcomes.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4237-4246 (2003).</li>
<li>Escamez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+wound+healing+in+genetically+modified+skin-humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice.</a> The Journal of investigative dermatology. 123, 1182-1191 (2004).</li>
<li>Werner, S., Breeden, M., Hubner, G., Greenhalgh, D. G., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+keratinocyte+growth+factor+expression+is+reduced+and+delayed+during+wound+healing+in+the+genetically+diabetic+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of keratinocyte growth factor expression is reduced and delayed during wound healing in the genetically diabetic mouse.</a> The Journal of investigative dermatology. 103, 469-473 (1994).</li>
<li>Tarin, D., Croft, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin.+II.+Dermo-epidermal+interrelationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin. II. Dermo-epidermal interrelationships.</a> Journal of anatomy. 106, 79-91 (1970).</li>
<li>Croft, C. B., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin+I.+Epithelial+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin I. Epithelial behaviour.</a> Journal of anatomy. 106, 63-77 (1970).</li>
<li>Winstanley, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epithelial+reaction+in+the+healing+of+excised+cutaneous+wounds+in+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+comparative+pathology%22%5BJournal%5D)">The epithelial reaction in the healing of excised cutaneous wounds in the dog.</a> Journal of comparative pathology. 85, 61-75 (1975).</li>
<li>Wormstone, I. M., Wride, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+lens%3A+a+classic+model+for+development%2C+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">The ocular lens: a classic model for development, physiology and disease.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 366, 1190-1192 (2011).</li>
<li>Danysh, B. P., Duncan, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lens+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The lens capsule.</a> Experimental eye research. 88, 151-164 (2009).</li>
<li>Awasthi, N., Guo, S., Wagner, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsular+opacification%3A+a+problem+reduced+but+not+yet+eradicated%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Posterior capsular opacification: a problem reduced but not yet eradicated.</a> Archives of ophthalmology. 127, 555-562 (2009).</li>
<li>Walker, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+attempts+to+reduce+posterior+capsule+opacification+after+cataract+surgery--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+experimental+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Pharmacological attempts to reduce posterior capsule opacification after cataract surgery--a review.</a> Clinical & experimental ophthalmology. 36, 883-890 (2008).</li>
<li>Schmidbauer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22International+ophthalmology+clinics%22%5BJournal%5D)">Posterior capsule opacification.</a> International ophthalmology clinics. 41, 109-131 (2001).</li>
<li>Menko, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+vimentin+in+regulating+repair+function+during+healing+of+the+lens+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">A central role for vimentin in regulating repair function during healing of the lens epithelium.</a> Molecular biology of the cell. 25, 776-790 (2014).</li>
<li>Chauss, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+state-specific+mitochondrial+dynamic+regulatory+networks+are+revealed+by+global+transcriptional+analysis+of+the+developing+chicken+lens%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Differentiation state-specific mitochondrial dynamic regulatory networks are revealed by global transcriptional analysis of the developing chicken lens.</a> G3 (Bethesda). 4, 1515-1527 (2014).</li>
<li>Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+N-Cadherin+linked+c-Src+and+fyn+kinases+in+lens+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+%3A+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for N-Cadherin linked c-Src and fyn kinases in lens development.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 242, 469-484 (2013).</li>
<li>Sieg, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FAK+integrates+growth-factor+and+integrin+signals+to+promote+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">FAK integrates growth-factor and integrin signals to promote cell migration.</a> Nature cell biology. 2, 249-256 (2000).</li>
<li>Sieg, D. J., Hauck, C. R., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Required+role+of+focal+adhesion+kinase+%28FAK%29+for+integrin-stimulated+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cell+science%22%5BJournal%5D)">Required role of focal adhesion kinase (FAK) for integrin-stimulated cell migration.</a> Journal of cell science. 112 (Pt 16), 2677-2691 (1999).</li>
<li>Hauck, C. R., Hsia, D. A., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+focal+adhesion+kinase--a+regulator+of+cell+migration+and+invasion%29%5BTitle%5D)+AND+%22IUBMB+life%22%5BJournal%5D)">The focal adhesion kinase--a regulator of cell migration and invasion).</a> IUBMB life. 53, 115-119 (2002).</li>
<li>Zhao, X., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+adhesion+kinase+and+its+signaling+pathways+in+cell+migration+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+drug+delivery+reviews%22%5BJournal%5D)">Focal adhesion kinase and its signaling pathways in cell migration and angiogenesis.</a> Advanced drug delivery reviews. 63, 610-615 (2011).</li>
<li>Menko, A. S., Bleaken, B. M., Walker, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional-specific+alterations+in+cell-cell+junctions%2C+cytoskeletal+networks+and+myosin-mediated+mechanical+cues+coordinate+collectivity+of+movement+of+epithelial+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Regional-specific alterations in cell-cell junctions, cytoskeletal networks and myosin-mediated mechanical cues coordinate collectivity of movement of epithelial cells in response to injury.</a> Experimental cell research. 322, 133-148 (2014).</li>
<li>Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing--aiming+for+perfect+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Wound healing--aiming for perfect skin regeneration.</a> Science. 276, 75-81 (1997).</li>
<li>Ferguson, M. W., O'Kane, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scar-free+healing%3A+from+embryonic+mechanisms+to+adult+therapeutic+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 839-850 (2004).</li>
<li>Redd, M. J., Cooper, L., Wood, W., Stramer, B., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+inflammation%3A+embryos+reveal+the+way+to+perfect+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 777-784 (2004).</li>
<li>Nodder, S., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+in+embryos%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+and+embryology%22%5BJournal%5D)">Wound healing in embryos: a review.</a> Anatomy and embryology. 195, 215-228 (1997).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Burada, civciv embriyo lenslerinin gözden çıkarıldıktan sonra ex vivo katarakt ameliyatının yapılmasını içeren bir yara onarımı kültür modeli hazırlamak için bir teknik açıklanmaktadır. Lens epiteli, klinik olarak ilgili bu yaralanmaya, in vivo olarak meydana geleni yakından taklit eden bir onarım süreciyle yanıt verir ve diğer epitel dokularında yara onarımı ile özellikleri paylaşır2,4. Protokolün takip edilmesi basit ve basit olsa da, embriyonik lenslerle sahte katarakt ameliyatı yapmak, em...

klinik olarak anlamlı, sahte katarakt cerrahisi, burada açıklanan ex vivo epitel yara iyileşmesi modeli bir yaralanma tepki olarak epitel dokuların onarımını düzenleyen mekanizmaları araştırmak için bir araç sağlamak için geliştirilmiştir. Bu modeli oluştururken için amaçlanmıştır Temel özellikler, yakından onarma işlemini bir kültür ayarı, 2), tamir düzenleyici unsurları modüle kolaylığı yaralama in vivo cevabı çoğaltılmış ve görüntü 3) yeteneği 1) sağlayan koşullar dahil gerçek zamanlı olarak bütünüyle içinde. meydan, bu nedenle, hücrelerin doğal mikroçevresinin, epitel yara onarımı incelemek mümkün olduğu bir kültür modeli oluşturmak ve işlemek için oldu. Bu yara onarım modelinin mevcudiyeti onarım sürecini düzenleyen matriks proteinleri, sitokinler ve kemokinlerin endojen sinyal ipuçları belirlenmesi için yeni olanaklar açar. Buna ek olarak, bir model incelenmesi için idealdir nasıln epitel yara alan 2,3, reepitelizasyonu için kolektif bir levha olarak ve yaralı epiteli 4 kolektif göç yönetmenlik işlev yara kenarında mezenkimal lideri hücrelerinin soy belirlemek için hareket edebilmektedir. Bu model de etkili yara iyileşmesini teşvik etmek ve anormal yara onarım 5 engelleyebilir terapötikleri belirlemek için bir platform sağlar. Mevcut yara tamir modelleri bir dizi kültürü ve günümüzde yara onarım süreci hakkında bilinenlerin çoğu sağladı vivo, hem de zaten vardır. Böyle kornea 6-12 ve cilt 13-17 gibi hayvan modellerinde yaralanma, olarak, katkıları da dahil olmak üzere süreçte yer olabilir tüm tamir arabulucuların bağlamında yaralama doku yanıtını incelemek için fırsat var damarlar ve sinir sistemi. Ancak, bu deneyimlerden manipüle sınırlamalar vardırin vivo olarak zihinsel koşullar ve zaman içinde sürekli olarak, in vivo olarak onarım yanıtı görüntüleme çalışmaları yürütmek üzere henüz mümkün değildir. Bunun aksine, örneğin çizilmeye yara çok in vitro yara onarımı kültürü modelleri, kolayca manipüle edilebilir ve zaman içinde takip ancak in vivo dokusunda yara iyileşmesinin okuyan çevresel bağlamı yoksundur. Ex vivo modeller sürecinde herhangi bir zaman noktasında onarım moleküler regülatörleri modüle yeteneği ile birleştiğinde hücrelerin mikroçevresinin bağlamında zamanla sürekli yaralanma onarım işlemini okuyan avantajı sunarken, bu uygun birkaç model var parametreleri. İşte fizyolojik yaralama bir epitel dokusunun yanıtını yeniden kültürleri şifa yüksek tekrarlanabilir ex vivo epitel yara oluşturmak için bir prosedür açıklanmaktadır. Bir doku kaynağı, bir ex vivo moc olarak civciv embriyo lens kullanarakk katarakt cerrahisi yapılmaktadır. Lens avasküler, innerve ve eşlik eden stroma 18,19 serbest değil, o kendi kendine yeten bir kalın bazal membran kapsül içinde olduğundan bu çalışmalar için kullanılacak ideal bir dokudur. İnsan hastalıkta, katarakt cerrahisi nedeniyle lensin opasifikasyon için görme kaybı giderir ve lens toplu içermektedir lens fiber hücre kitlesinin, kaldırılmasını içerir. Aşağıdaki katarakt cerrahisi görme yapay göz içi lensi yerleştirilmesi yoluyla geri yüklenir. katarakt ameliyatı prosedürü, lif hücrelerinin çıkarılması, Fiber hücreleri tarafından işgal edilmiş olan mercek kapsülünün arka bölgenin yeniden epitelizasyon ile yanıt verir bitişik lens epitelyum, bir yaralanma tepkisini indükler. Katarakt cerrahisi, çoğu yara tamir yanıtları gibi, bazen lens Arka Capsu olarak bilinen miyofibroblastlar ortaya çıkması ile ilişkili yara iyileşmesi yanıt bir anormal fibrotik sonucunu ortaya çıkmaktadırle Opasitesi 20-22. Katarakt ameliyatı yara iyileşmesi modeli oluşturmak için, katarakt cerrahisi prosedürü fizyolojik bir yaralanma üretmek için civciv embriyo göz kaldırılır lenslerde taklit edilir. Mercek epitelyal hücreleri tarafından çevrelenmiş bir çok tutarlı dairesel bir yara bölgesinde lens elyaf hücrelerinin sonuçları Mikrocerrahi çıkarılması. Bu hücre popülasyonu sıkıca mercek bazal membran kapsüle bağlı kalır ve cerrahi prosedür ile yaralandı. epitel hücreleri lider hücreleri 1 olarak onarım sürecinde bilinen vimentin zengin mezenkimal hücre popülasyonu tarafından yönetilen yara, iyileşmek için endojen bazal membran arındırılır alan üzerine göç ederler. Bu model ile yaralanma bir epitel yanıtı kolaylıkla görülebilir ve hücrelerin mikroçevresinin bağlamında zamanla izledi. Hücreler ifadesi ya da yara iyileşmesi bir rol oynaması beklenmektedir moleküllerin aktivasyonu modifikasyonlara kolaylıkla temin edilebilir. Th bir güçlü özelliğiModel izole etmek ve yara iyileşmesi çerçevesinde göç özgü değişiklikleri incelemek için yeteneğidir olduğunu. çalışmalar için yaş uyumlu ex vivo olarak yara iyileşme kültürler çok sayıda hazırlanması için yeteneği, bu modelin bir diğer avantajdır. Böylece, bu model sistemi yara iyileşme süreci üzerindeki etkisi yara onarım mekanizmalarını ve test terapötik ayrı kızdırmak için eşsiz bir fırsat sunuyor. ex vivo sahte katarakt cerrahisi modeli yaralanma tamir mekanizmaları çalışmak için kritik bir kaynak sağlayarak, geniş uygulama olması bekleniyor.

<table><tbody><tr><td>Sodyum Klorür (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td><td>TD Tamponunda 140 mM'de Kullanım</td></tr><tr><td>Potasyum Klorür (KCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217-500</td><td>TD Tamponunda 5 mM'de Kullanım</td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat (Na2HPO4)</td><td>Sigma</td><td>S0876</td><td>TD Tamponunda 0.7 mM'de kullanım</td></tr><tr><td>D-glikoz (Dekstroz)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D16-500</td><td>TD Tamponunda 0,5 mM'de Kullanım</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td>TD Tamponunda 8,25 mM'de Kullanım</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144-500</td><td>7,4'e kadar pH TD tamponunda kullanın</td></tr><tr><td>Medya 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Corning/CellGro</td><td>25-005-CI</td><td>Media199'da %1'de kullanın199</td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin</td><td>Corning/ CellGro</td><td>30-002-CI</td><td>Media199 100 mm petri kaplarında %1 oranında kullanın</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875711Z</td><td></td></tr><tr><td>Stericup Filtre Ünitesi</td><td>Millipore SCGPU01RE</td><td></td><td>Filtrelemek, sterilize etmek, Media</td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps (2'ye ihtiyaç duyar)</td> <td>için kullanın, Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Hücre Kültürü Kabı</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>27 G 1 ml SlipTip ile hassas kayma iğnesi</td><td>BD</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>İnce Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Standart Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91100-12</td><td></td></tr><tr><td>Gerekli Diğer Öğeler: Genel diseksiyon aletleri, &nbsp; verimli beyaz leghorn tavuk yumurtası, yumurta kuluçka makinesini kontrol edin (nemlendirilmiş, 37.7 derece; C), laminer akış başlığı, binoküler stereovizyon diseksiyon mikroskobu</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir klinik İlgili kurulması<em&gt; ex vivo</emyerli mikroçevresinin epitelyal yara tamir incelenmesi için&gt; mock katarakt cerrahisi modeli

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Bir epitel dokusunun yara onarımını nasıl gerçekleştirdiğini anlamanın önündeki en büyük engel, in vivo epitel doku yaralanmasını yakından taklit eden bir ortamda yara tepkisini ex vivo olarak takip etmenin ve manipüle etmenin mümkün olduğu modellerin sınırlı mevcudiyetidir. Bu sorun, katarakt cerrahisine dayalı klinik olarak anlamlı bir epitelyal ex vivo yaralanma onarım modeli oluşturularak ele alındı. Bu kültür modelinde, lens epitelinin yaraya tepkisi, hücrelerin doğal mikro ortamında canlı olarak takip edilebilir ve yara onarımının moleküler aracıları, onarım işlemi sırasında kolayca manipüle edilebilir. Kültürleri hazırlamak için mercekler gözden çıkarılır ve merceğin ön kısmında mercek lifi hücrelerinin iç kütlesinin çıkarıldığı küçük bir kesi yapılır. Bu prosedür, lensi çevreleyen kalın bazal membran olan arka lens kapsülü üzerinde dairesel bir yara oluşturur. Fiber hücrelerin bağlandığı bu yara alanı, cerrahi prosedür sırasında lens kapsülüne bağlı kalan sürekli bir lens epitel hücresi tek tabakasının hemen bitişiğinde bulunur. Gelişim sırasında lif hücrelerinin türetildiği hücre tipi olan yaralı epitel, mezenkimal progenitörleri lenseendojen olan vimentin açısından zengin onarım hücrelerinin bir popülasyonu tarafından yönetilen yara alanı boyunca toplu olarak hareket ederek lif hücresinin çıkarılmasının yaralanmasına yanıt verir 1. Bu özellikler, normal bir epitelyal yara iyileşme yanıtının tipik bir örneğidir. Bu modelde, in vivo olarak, yara onarımı, bu ex vivo kültür sisteminde benzersiz bir şekilde korunan endojen ortam tarafından sağlanan sinyallere bağlıdır ve yaralamayı takiben bir epitelin onarımını düzenleyen mekanizmaların keşfi için ideal bir fırsat sağlar.

Ex Vivo Model hücrelerin doğal mikroçevresinin yara iyileşme sürecini incelemek için oluşturulan Hücrelerin doğal mikroçevresinin içinde epitel yara iyileşmesini düzenleyen katılan mekanizmalarını araştırmak için, klinik olarak anlamlı ex vivo sahte katarakt cerrahisi modeli oluşturuldu. Bu model nedeniyle yapısal özellikleri konusunda pek çok avantajlar sunmaktadır mercek dokularından oluşturulur: 1) objektif mercek kapsülü olarak adlandırılan kalın bir taban zan ile sarıl...

Burada açıklanan, epitel dokularının doğal mikro çevreleri içindeki yaralanma tepkisinin mekanizmalarını araştırmak için kullanılabilecek klinik olarak anlamlı bir ex vivo sahte katarakt cerrahisi modelinin oluşturulmasıdır.

Bir Klinik İlgili kurulması<em&gt; Ex Vivo</emYerli mikroçevresinin Epitelyal Yara Tamir incelenmesi için&gt; Mock Katarakt Cerrahisi Modeli

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Bu prosedürün genel amacı, yara onarımının kendi doğal mikroçevresinde takip edilebileceği klinik olarak ilgili bir model oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle bir tavuk embriyosunun gözünden lensin çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise lensin ön kısmına küçük bir insizyon yapmaktır.Ardından, lens fiber hücresi kütlesini hidro elüsyonla temizleyin. Sonrasında, anterior kapsülde ek kesiler oluşturarak, ilişkili epitelyum ile birlikte lens kapsülü düzleştirilir. Son adım, yara iyileşmesi gerçekleşirken bunu takip edebilmek için yaralı kültürü doku kültürü kabına sabitlemektir.Nihayetinde, in vivo ortamı yakından taklit eden bir modelde yara onarım mekanizmalarını göstermek için zaman ayarlı mikroskopi, konfokal mikroskopi ve biyokimyasal analizler kullanılır. Bu yöntem, hücrelerin yarayı kapatmak için nasıl koordineli bir şekilde birlikte hareket ettiği gibi, yara iyileşmesi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntem, yara onarım sürecine dair içgörü sağlayabilir.Bu yöntem ayrıca ABER yara iyileşmesi, özellikle de fibrozis ve skarlaşma çalışmalarına da uygulanabilir. İlk olarak, steril bir laminar akış kabinine üç adet 100 milimetrelik Petri kabı y

establishment-clinically-relevant-ex-vivo-mock-cataract-surgery-model

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

sığır endotel hücrelerinin ana bir kültürü kornea endotelial-mezenkimal geçiş mekanizmasını araştırmak için kullanıldı. Ayrıca, bir fare endotel cryoinjury modeli in vivo olarak endotel-mezenkimal geçiş göstermek için kullanılmıştır.

Vitro ve in vivo Modelleri Kornea Endotel-mezenkimal Geçiş Çalışması için

Bu el yazması kültürlü epitel hücre monolayers üzerinde yapılan nasıl kesi benzeri lezyonlar elverişli bir konuma sahip modeli şifa vitrogörüntüleme için tarafından confocal sağlayan, yarası. açıklar veya lazer tarama mikroskobu ve yüksek kaliteli sağlayabilir nicel ve nitel veri hücre davranış ve mekanizmaları geçişinde dahil çalışmak için.

Mikroskopi Vitro yara iyileşmesi sırasında epitel hücre göç değerlendirilmesi için yöntemleri temel

Eski bir protokol vivo kornea organ kültür model çalışmaları şifa yara açıklanan için yararlı. Bu modeli sistem rejeneratif iyileşmesine katkıda bulunmak üzere ajanlar veya ilaç toksisitesi organize 3D çok hücreli ortamında etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.

Ex vivo kornea Organ kültür modeli için yaranın çalışmaları

Burada kornea endotel hücrelerinin (MSK) neodimyum kullanarak Descemet zarından (DM) ayrılması için bir protokol sunuyoruz:YAG (Nd:YAG) lazer, büllöz keratopati (BK) için eksvivo hastalık modeli olarak.

Kornea Endotel Hücre Kaybının Noninvaziv, Lazer Destekli Deneysel Modelinin Geliştirilmesi

Burada, ex vivo insan derisini kullanarak yara onarımını değerlendirmek için optimize edilmiş bir teknik ve tam montajlı bir boyama yaklaşımı sergiliyoruz. Bu metodoloji, potansiyel yara tedavilerinin değerlendirilmesi için klinik öncesi bir platform sağlar.

Cilt Onarımını Doğru Değerlendirmek için İnsan Ex vivo Yara Modeli ve Tam Montajlı Boyama Yaklaşımı

Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu kornea yara iyileşmesi modeli yüksek oranda tekrarlanabilir ve şimdi hastalıklar bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Kornea Yara İyileşmesini İncelemek İçin Epitelyal Aşınma Modeli

Burada, kornea epitelinin mekanik ve kimyasal hasarı için fare ve tavşana dayalı hayvan modelleri, yeni terapötikleri ve altta yatan mekanizmayı taramak için geliştirilmiştir.

Kornea Epitelinin Mekanik ve Kimyasal Yaralanmaları için Ex Vivo ve In Vivo Hayvan Modelleri

Mevcut protokol, ovo'daki embriyonik bir civcivin korneasının yaralanmasında yer alan farklı adımları göstermektedir. Rejenere veya tamamen restore edilmiş kornealar, yaralama prosedürünü takiben çeşitli hücresel ve moleküler teknikler kullanılarak rejeneratif potansiyel açısından analiz edilebilir.

Embriyonik Yaralı Civciv Kornealarında İzsiz Doku Rejenerasyonunun İncelenmesi

Bu makalede, süreci basitleştirmek ve otolog şartlandırılmış serum (AKS) hazırlanmasını daha ucuz hale getirmek için bir protokol açıklanmaktadır. Özel şırıngalara veya yüzey kaplamalı cam boncuklara gerek yoktur. Ayrıca, modifiye ACS (mACS), murin gözlerin ex vivo kornea yara iyileşmesinde konvansiyonel otolog seruma göre rekabet avantajına sahiptir.

Modifiye Otolog Şartlandırılmış Serum Üretimi ve Murin Kornea Epitelinde İyileşme Potansiyelinin Ex Vivo Değerlendirilmesi

Bu yazıda, canlı bir Clytia hemisphaerica medusa'nın epitelinde yara oluşturmak ve in vivo olarak yüksek çözünürlükte yara iyileşmesini görüntülemek için bir yöntem açıklanmaktadır. Ek olarak, yara iyileşmesi sırasında epitel hücrelerinde ve hücre dışı matrikste sinyal süreçlerini bozmak için boyalar ve ilaçlar tanıtmak için bir teknik sunulmaktadır.

Cnidarian Model Organizma Clytia hemisphaerica'yı Kullanarak İn Vivo Epitelyal Yara İyileşmesini Karakterize Etmek

Bu yöntem, katarakt ameliyatını modeller: in vivo yetişkin farelerden lens lifi hücrelerini çıkararak ve bağlı lens epitel hücreleri (LEC'ler) ile kapsül torbasını geride bırakarak. Yaralanma yanıtı daha sonra cerrahi sonrası moleküler ve morfolojik kriterler kullanılarak çeşitli zamanlarda değerlendirilir.

Farelerde Katarakt Cerrahisinin Modellenmesi

Öğrenin, tavuk embriyosu gözünde klinik önemli bir ex vivo katarakt cerrahisi modeli kurarak epitel dokularının yara iyileşmesi mekanizmalarını incelemeyi. Bu yöntem, göz dokularında doku onarımı araştırmaları için değerli bir platform sunar.

Bir Klinik İlgili kurulması

Daha fazla video keşfet