Bir Klinik İlgili kurulması Ex Vivo Mock Katarakt Cerrahisi Modeli

Bu prosedürün genel amacı, yara onarımının doğal mikro ortamında takip edilebileceği klinik olarak ilgili bir model oluşturmaktır. Bu, önce lensi bir tavuk embriyosunun gözünden çıkararak gerçekleştirilir. İkinci adım, lensin ön kısmında küçük bir kesi yapmaktır.

Daha sonra lens lifi hücre kütlesini hidro elüte edin. Daha sonra, ilişkili epitel ile lens kapsülü, ön kapsülde ek kesiler yapılarak düzleştirilir. Son adım, yara iyileşmesini meydana geldikçe takip etmek için yara kültürünü doku kültürü kabına sabitlemektir.

Sonuç olarak, hızlandırılmış mikroskopi, konfokal mikroskopi ve biyokimyasal analiz, in vivo ortamı yakından özetleyen bir modelde yara onarım mekanizmalarını göstermek için kullanılır. Bu yöntem, hücrelerin yarayı kapatmak için koordineli olarak nasıl birlikte hareket ettiği gibi yara iyileşme alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu yöntem yara onarımı süreci hakkında fikir verebilir.

ABER yara iyileşmesi, özellikle fibroz ve yara izi çalışmalarına da uygulanabilir. Steril bir laminer akış başlığına üç adet 100 milimetrelik Petri kabı yerleştirerek başlayın. Petri kaplarından ikisini yarıya kadar oda sıcaklığında tris dekstroz tamponu ile doldurun ve üçüncüsünü boş bırakın.

Daha sonra 37.7 santigrat derece inkübatörden verimli bir embriyonik gün 15 beyaz leghorn civciv yumurtasını çıkarın ve sterilize etmek için kabuğun dışını %70 etanol ile temizleyin. Daha sonra, yumurtayı dikkatlice kırın ve içindekileri boş 100 milimetrelik Petri kabına yerleştirin. Standart forseps ve ince makas kullanarak, embriyonun başını kesin ve kafayı TST dekstroz tamponu içeren tabaklardan birine yerleştirin.

15 dakika içinde civciv embriyo kafasını bir Petri kabı kapağına taşıyın. Gözün arkasını sıkıştırmak için yüksek hassasiyetli forseps kullanın ve gözün arkasında küçük bir açıklık oluşturun. Daha sonra vitreus mizahını forseps ile kavrayın ve yuvarlanma hareketi ile vitreusu hafifçe çekin.

Lens takılıyken vitreus gözden çıkacaktır. Lensi ve vitreusu, Tex extras Buffer içeren kalan Petri kabına yerleştirin. Diseksiyona devam etmeden önce lenslerin tamponda 30 dakikadan fazla kalmasına izin vermeyin.

Daha sonra, lensi yüksek hassasiyetli forsepsli bir diseksiyon mikroskobu altında yeni bir Petri kabı kapağına taşıyın, forsepsin kenarını kullanarak lensle yerinden çıkan siliyer vücut hücrelerini dikkatlice fırçalayın. Daha sonra vitreus gövdesini arka lens kapsülü ile olan ilişkisinden sıkıştırarak lensi vitreus mizahından ayırın. Ayrıldıktan sonra, lensi 35 milimetrelik bir doku kültürü kabında 200 mikrolitrelik bir tris dekstroz tamponuna aktarın ve lensin ön yüzü yukarı bakacak şekilde yönlendirin.

Lensin ön kısmı, lens epitelinin iç ve ekvator bölgesi arasındaki sınırı not eden dokuda yoğun bir halkanın varlığı ile kolayca tanımlanabilir. İki yüksek hassasiyetli forseps kullanarak, dokuyu her iki elinizde bir forseps ile kavrayarak ve zıt yönlerde hafifçe çekerek ön lens kapsülünün merkezinde yaklaşık 850 mikron uzunluğunda küçük bir kesi yapın. Daha sonra, 27.5 gauge iğne ucu ile bir mililitrelik bir şırınga alın ve 300 mikrolitre TST dekstroz tamponu ile doldurun.

İğne ucunu ön lens kapsülünde yapılan kesiye ve lensin yaklaşık yarısına kadar yerleştirin. Daha sonra şırıngaya hafifçe bastırın ve TST dekstroz tamponunu lense enjekte edin. Lif hücre kütlesi.

Fiber hücre kütlesini çevreleyen epitel ve lens kapsülünden gevşetmek için 50 ila 200 mikrolitre tampon enjekte edin. Asla 300 mikrolitreden fazla enjekte etmeyin. Yüksek hassasiyetli forseps kullanarak, gevşemiş lif hücre kütlesini ön insizyon bölgesinden lensten çıkarın.

Fiber hücre kütlesinin arka kapsül üzerindeki bağlantısından çıkarılması, yaralı epitel ile çevrili bazal membran üzerinde yüksek oranda tekrarlanabilir bir yara alanı oluşturur. Kapsül torbasından başlayarak, lensin ön yönüne ve ekvatora kadar beş kesi yapın. Elde edilen beş lens kapsülü kanadını, ekli epitel kültür kabı kapsülü tarafı aşağı ve hücre tarafı yukarı bakacak şekilde düzleştirin.

Kapsülü tabağa sabitlemek için yıldızın her bir noktasında forseps ile yumuşak bir şekilde bastırın. Bu, x explan'ın en dış beş ucunda küçük bir girinti yapacak ve tabağa sürekli bağlanma ile sonuçlanacaktır. Ardından tris dekstroz tamponunu 35 milimetrelik çanaktan çıkarın ve 1,5 mililitre savaş öncesi M1 99 ile değiştirin.

Hem L-glutamin hem de penisilinin% 1'i ile desteklenmiş ortam. Streptomisin, tabağı kapağı ile kapladı ve inkübatöre yerleştirdi. Kültür kabını diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin ve merkezi göç bölgesi ile epitel hücrelerinin orijinal bağlanma bölgesi arasındaki sınırı gözlemleyin.

Ardından, iki bölge arasındaki sınır çizgisinin her iki tarafının kenarını kavramak için iki yüksek hassasiyetli forseps kullanın. İki bölgeyi kolayca ayırmak için orijinal bağlantı bölgesini çizgi boyunca yavaşça çekin. İki bölge tamamen ayrılana kadar tüm kültürün etrafındaki iki bölgeyi ayırmaya devam edin.

Standart moleküler veya biyokimyasal analitik teknikler kullanarak iki fraksiyonu inceleyin. Lif hücre kütlesinin çıkarılmasını takiben, mentten zengin mezenkimal onarım hücrelerinin bir alt popülasyonu aktive olur ve epitelin yara kenarına göç eder. Bu hücreler, iyileşmeye başlamak için hızla merkezi göç bölgesi olan endojen bazal membran kapsülünün hücresiz bölgesine hareket eder.

Yara, burada anlatılan teknik, bu model sistemi bu süreci mikroskop veya video kamera ile görüntülemek için mükemmel bir şekilde hazırlar Yara iyileşmesi, kültürde ilk gün yaranın önemli bir alanını kaplayarak hızla ilerler. Üçüncü günde, yara iyileşme süreci tipik olarak merkezi migrasyon ve orijinal bağlanma bölgelerinin ayrılmasını takiben tamamlanır. Bu farklı bölgeler arasındaki moleküler farklılıklar burada analiz edildi.

Her iki zonda fokal adezyon kinaz düzeyleri ölçüldü ve migrasyona özgü santral migrasyon zonunda fosforile olmuş, fokal adezyon kinaz miktarının arttığı tespit edildi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu sahte katarakt ameliyatı tekniği, uygun şekilde yapılırsa üç dakika içinde tamamlanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, doğal bir mikro ortamda yara onarımını yakından taklit eden sahte bir katarakt ameliyatı modelinin nasıl oluşturulacağını iyi anlamış olmalısınız.