Bir Klinik İlgili kurulması

Bu prosedürün genel amacı, yara onarımının kendi doğal mikroçevresinde takip edilebileceği klinik olarak ilgili bir model oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle bir tavuk embriyosunun gözünden lensin çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise lensin ön kısmına küçük bir insizyon yapmaktır.

Ardından, lens fiber hücresi kütlesini hidro elüsyonla temizleyin. Sonrasında, anterior kapsülde ek kesiler oluşturarak, ilişkili epitelyum ile birlikte lens kapsülü düzleştirilir. Son adım, yara iyileşmesi gerçekleşirken bunu takip edebilmek için yaralı kültürü doku kültürü kabına sabitlemektir.

Nihayetinde, in vivo ortamı yakından taklit eden bir modelde yara onarım mekanizmalarını göstermek için zaman ayarlı mikroskopi, konfokal mikroskopi ve biyokimyasal analizler kullanılır. Bu yöntem, hücrelerin yarayı kapatmak için nasıl koordineli bir şekilde birlikte hareket ettiği gibi, yara iyileşmesi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntem, yara onarım sürecine dair içgörü sağlayabilir.

Bu yöntem ayrıca ABER yara iyileşmesi, özellikle de fibrozis ve skarlaşma çalışmalarına da uygulanabilir. İlk olarak, steril bir laminar akış kabinine üç adet 100 milimetrelik Petri kabı yerleştirin. Petri kaplarından ikisini oda sıcaklığındaki tris dekstroz tamponu ile yarıya kadar doldurun, üçüncüsünü ise boş bırakın.

Ardından, 37,7 °C'deki inkübatörden 15 günlük fertil bir beyaz leghorn civciv yumurtasını çıkarın ve sterilize etmek için kabuğun dış kısmını %70 etanol ile temizleyin. Daha sonra yumurtayı dikkatlice kırın ve içeriğini boş 100 mm'lik Petri kabına yerleştirin. Standart penset ve ince makas kullanarak embriyoyu kafasından ayırın ve başı, TST dekstroz tamponu içeren kaplardan birine yerleştirin.

15 dakika içinde, piliç embriyosu başını bir Petri kabı kapağına taşıyın. Gözün arka kısmında küçük bir açıklık oluşturmak için yüksek hassasiyetli pensle gözün arkasını sıkıştırın. Ardından, vitreus humoru pensle kavrayın ve yuvarlama hareketiyle vitreusu nazikçe çekin.

Lense bağlı olan vitreus göze ayrılacaktır. Lensi ve vitreusu, Tex extras Buffer içeren diğer Petri kabına yerleştirin. Diseksiyona devam etmeden önce lenslerin tampon çözeltide 30 dakikadan fazla kalmamasına dikkat edin.

Ardından, lensi yüksek hassasiyetli forsepsler kullanarak bir diseksiyon mikroskobu altında yeni bir Petri kabı kapağına taşıyın ve lensle birlikte kopmuş olan tüm siliyer cisim hücrelerini forsepsin kenarıyla dikkatlice fırçalayarak temizleyin. Daha sonra, vitreus gövdesini posterior lens kapsülü ile olan bağlantısından kopararak lensi vitreus hümörden ayırın. Ayırma işlemi tamamlandığında, lensi 35 milimetrelik bir doku kültürü kabındaki 200 microliter tris dekstroz tamponu damlasına aktarın ve lensin anterior yüzeyi yukarı bakacak şekilde konumlandırın.

Lensin ön kısmı, lens epitelyumunun iç ve ekvatoral bölgesi arasındaki sınırı belirten dokudaki yoğun bir halkanın varlığıyla kolayca tanımlanabilir. İki adet yüksek hassasiyetli pens kullanarak, her iki eldeki penslerle dokuyu kavrayıp zıt yönlere doğru hafifçe çekerek, anterior lens kapsülünün merkezinde yaklaşık 850 mikron uzunluğunda küçük bir insizyon yapın. Ardından, 27,5 gauge iğne uçlu bir mililitrelik şırınga alın ve bunu 300 mikrolitre TST dekstroz tamponu ile doldurun.

İğne ucunu, anterior lens kapsülünde açılan insizyona yerleştirin ve lensin yaklaşık yarısına kadar ilerletin. Ardından, TST dekstroz tamponunu lense enjekte ederek şırıngayı nazikçe bastırın. Fiber hücre kitlesi.

Lif hücresi kütlesini çevreleyen epitelden ve lens kapsülünden ayırmak için 50 ile 200 µL arasında tampon enjekte edin. Asla 300 µL'den fazla enjekte etmeyin. Yüksek hassasiyetli pensler kullanarak, gevşemiş lif hücresi kütlesini ön insizyon bölgesinden lensin içinden çıkarın.

Lif hücre kitlesinin posterior kapsüldeki bağlantı noktasından uzaklaştırılması, yaralı epitel ile çevrili bazal membran üzerinde yüksek derecede tekrarlanabilir bir yara alanı oluşturur. Kapsül kesesiyle başlayarak, lensin anterior kısmına ve ekvatora kadar beş kesi yapın. Ortaya çıkan, epitel yapışık beş lens kapsülü flebini, kapsül tarafı aşağıda ve hücre tarafı yukarıda olacak şekilde kültür kabına yayın.

Kapsülü kaba sabitlemek için forsepsle yıldızın her noktasına hafifçe bastırın. Bu işlem, x explan'ın en dıştaki beş ucunda küçük bir çöküntü oluşturacak ve kaba kalıcı tutunmayı sağlayacaktır. Ardından, 35 milimetrelik kaptaki tris dekstroz tamponunu uzaklaştırın ve yerine 1,5 mililitre ön ısıtmalı M1 99 ekleyin.

%1 L-glutamin ve penisilin-streptomisin ile desteklenmiş besiyeri. Kabı kapağıyla kapatıp inkübatöre yerleştirin. Kültür kabını diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin ve epitel hücrelerin merkezi göç bölgesi ile orijinal tutunma bölgesi arasındaki sınırı gözlemleyin.

Ardından, iki bölge arasındaki sınır çizgisinin her iki yanından tutmak için iki adet yüksek hassasiyetli pens kullanın. İki bölgeyi kolayca ayırmak için orijinal eklenme bölgesini çizgi boyunca nazikçe çekin. İki bölge tamamen ayrılana kadar, tüm kültür boyunca iki bölgeyi ayırmaya devam edin.

İki fraksiyonu standart moleküler veya biyokimyasal analitik teknikler kullanarak inceleyin. Fiber hücre kütlesinin uzaklaştırılmasının hemen ardından, ment açısından zengin mezenkimal onarım hücrelerinden oluşan bir alt popülasyon aktive olur ve epitelyumun yara kenarına göç eder. Bu hücreler, iyileşmeyi başlatmak için endojen bazal membran kapsülünün hücreden arındırılmış bölgesi olan merkezi göç bölgesine hızla hareket eder.

Burada açıklanan teknik, bu model sistemini yaranın bir mikroskop veya video kamera ile izlenmesi için mükemmel şekilde hazırlar; yara iyileşmesi hızla ilerleyerek kültürdeki birinci güne kadar yaranın önemli bir kısmını kapatır. Üçüncü güne gelindiğinde, merkezi göç ve orijinal tutunma bölgelerinin ayrılmasının ardından yara iyileşme süreci tipik olarak tamamlanır. Bu farklı bölgeler arasındaki moleküler farklar burada analiz edilmiştir.

Fokal yapışma kinaz seviyeleri iki bölgede ölçülmüş ve fosforile fokal yapışma kinaz miktarının, migrasyona özgü merkezi migrasyon bölgesinde arttığı saptanmıştır. Uzmanlaşıldığında, bu sahte katarakt cerrahisi tekniği, uygun şekilde uygulandığı takdirde üç dakika içinde tamamlanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, doğal bir mikroortamdaki yara onarımını yakından taklit eden bir sahte katarakt cerrahisi modelinin nasıl oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmanız gerekir.