Name: Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Keşfedin izole sıçan kalp modelinde iskemi-reperfüzyon hasarını incelemeyi. Langendorff perfüzyonu ve ventriküler basınç ölçümü ile kardiyak fonksiyonu değerlendirin. Bu yöntem kalp araştırmalarında terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yayın Güney Carolina Tıp Üniversitesi akademik ev, NIH / NCATS Hibe Numarası UL1 TR000062 ile, South Carolina Klinik ve Translational Research (SCTR) Enstitüsü tarafından desteklenmiştir. Ek destek DRM VA liyakat ödülü BX002327-01 tarafından sağlandı. DJH NIH / NCATS Hibe Numarası TL1 TR000061 tarafından ve NIH Hibe Numarası T32 GM008716 tarafından desteklenmiştir. DENİZ NIH Hibe Numarası T32 HL07260 tarafından desteklenmiştir.

Burada listelenen tüm işlemler Güney Carolina Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmıştır. Burada tarif edilen deneyler, akut, hayatta olmayan deneylerdir. Bu nedenle, var göz merhemi hiçbir kullanımı ve steril bir çalışma paketi gerekli değildir. Ötanazi kalbin hasat sırasında eksanguinasyon yoluyla elde edilir. 1. Deneysel hazırlanması <ol><li> Sabit bir basınç veya sabit akış Langendorff perfüzyon Aparatı 4 ya ayarlayın. </li><li> Tadil edilmiş bir Krebs Henseleit tamponu 4 L hazırlayın (mM olarak: 112 NaCl, 5 KCl, 1.2 MgSO 4, 1 K 2 HPO 4, 1.25 CaCl2, 25 NaHCO 3, 11 D-glikoz, 0.2 oktanoik asit, pH = 7.4). <ol><li> 10x stok tamponlar olun. <ol><li> 3 L&#39;lik, aşırı saf su içinde NaCI, KCI, MgSO 4 ve K 2 HPO 4 eritin. </li><li> 500 ml ultra saf su wi CaCl 2 çözülür1 N HCI, 40 ml inci. </li><li> Yavaşça 1.2.1.1 yapılan tampon CaCl2 çözüm ekleyin. 4 L. toplam kadar ultra-saf su ilave bir 0.8 um&#39;lik bir filtreden filtre edilmeden önce 1 saat boyunca karışmaya bırakın. 4 ° C&#39;de saklayın. </li><li> 4 L ultra saf su içinde NaHCO 3 eritin. 0.8 um filtre ile süzülmeden önce 1 saat boyunca karışmaya bırakın. Mağaza 4 ° C&#39;de </li></ol></li><li> 400 ml 10x NaHCO 3 tamponla 400 ml 10x Krebs Henseleit tampon birleştirin. Karıştırılırken glikoz ve oktanoik asit içinde çözündürülür 4 L. toplam kadar ultra-saf su ilave edilir. 0.8 um&#39;lik bir filtreden filtre. </li></ol></li><li> Kalp için sistem hazırlayın. <ol><li> 4 L&#39;lik bir şişeye süzüldü tampon 2 L ekleme aort kanülüne bağlanmış vana yukarıda 38 yerleştirilir. Bu, önerilen perfüzyon basıncı 4 olan kalp, 70-80 mmHg perfüzyon basıncını teslim edecek. </li><li> Şişede tampon içine gaz dağıtım bubbler yerleştirin. </li><li> Boru içinden kabarcıkları ortadan kaldırmak için emin olmak, sistem üzerinden tampon çalıştırın. </li><li> Kalp sistemi yerleştirilmesi için önce gaz (% 95 O 2 /% 5 CO 2) en az 30 dakika açın. Oksijen doygunluğu doğrulamak için bir gaz akış probu ve kan gazı analizörü kullanın. </li></ol></li><li> Cerrahi malzemeleri ve balon hazırlayın. <ol><li> Kalbin hasat için 6.75 bir çift &quot;cerrahi makas, 4.5 bir çift&quot; makas, 27 G iğne, 0-guage ipek sütür 2 adet (yaklaşık 15 hemostat iki çift, caramalt forseps iki takım, iki şırınga hazırlamak cm uzunluğunda), bir 1/16 inç dikenli kanülü, bir trakeal kanül. </li><li> Trakeal kanül monte etmek için, Y-konnektörüne 1/16 inç çaplı plastik boru kısa bir parça yapıştırıcı. </li><li> Balon cihazı monte etmek için: 1/16 inç boru parçasına bir gavaj iğne takılır, daha sonra basınç dönüştürücü konut hortumu takmak. Basınç tr diğer tarafına bağlı küçük bir şırıngaansducer konut balonu şişmesini ve sönmesini sağlayacaktır. <ol><li> Merkezinde sonda iğne plastik wrap ve yer ucunun bir kare kesin. Gavaj iğnenin etrafına plastik wrap sarın. </li><li> Tuzlu su ile balon doldurun ve iki dikiş ile kapalı kravat. Herhangi bir sızıntı olmadığından emin olmak için balonu şişirin. şişirilmiş balon içindeki tuzlu su hacmi yaklaşık 200 ul olmalıdır, ancak sıçan büyüklüğüne bağlı olarak değişebilir. </li><li> Alternatif olarak, plastik sargı yerine bir lateks parmak yatağı kullanır. Parmak karyolası içinde sonda iğne yerleştirin tuzlu su ile doldurun ve kapalı kravat. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. Hasat Kalp <ol><li> Bir decapicone veya diğer manuel emniyet aygıtı kullanarak bir Sprague Dawley sıçan kısıtlamaktadır. Sıçan tartılır. </li><li> Sıçan anestezisi için intraperitonal enjeksiyon yoluyla ketamin / ksilazin karışımı (0.85 mg / kg ketamin ve 0.15 mg / kg ksilazin) uygulayınız. Anestezik Bu doz için yeterli anestezi sağlayacaktır20-40 dakika, ancak prosedür olarak hızla anestezi onaylandıktan sonra mümkün olduğunca tamamlanması gerekmektedir. </li><li> Test ayak tutam refleks ile anestezi uygun derecede onaylayın. </li><li> Nefes borusu ameliyatı <ol><li> Kesi yapmak için postu ve makas yükseltmek için hemostat kullanarak, çene tabanına orta forepaw gelen postu çıkarın. Postu boyunca kesip çıkarmak için izin, altta yatan kas ayırmak için yükseltilmiş postu tutun. </li><li> Hemostat kullanarak, glandüler doku kaldırın ve bez dokuya fasya yatay kesi alt olun. Nick değil şah damarlar özen açık kesi yaymak için hemostat kullanın. </li><li> , Hemostat kullanma tutam kas trakea örten ve kullanan makas sadece hemostat ucu altındaki kas enine kesi yapmak. Hemostat kullanarak, trakea ortaya çıkarmak için birbirinden doku yayıldı. </li><li> Dikkatle hafifçe ilerleyen ve hemostat geri çekilmesiyle ilerlerken fasya temizleyerek, trakea altında hemostat yerleştirin. </li><li>Hemostatlar başarıyla trakea arkasına konduğunda, hemostatlarla 0-0 ipek sütür çimdik ve makas küçük, keskin çifti ile trakea Hemisect. </li><li> , Hemisected trakea içine trakeal kanül yerleştirin trakea arkasında dikiş çekin ve bir cerrah düğümü ile kanül Y-kasık sütür demirleme, kanüle trakea etrafında dikiş kravat. </li><li> 27 G iğne kullanarak, şah damarına 1000 U / kg heparin enjekte ve 30 saniye süreyle sirküle izin verir. </li></ol></li><li> Torakotomi <ol><li> Hemostatlarla kısma ve makasla keserek orta forepaw bölgeye orta karından postu çıkarın. </li><li> Hemen diyaframın altında, karın kası duvarında içine ¾ inç enine kesi olun. </li><li> Sternum boyunca kesme, karın duvarı ve göğüs duvarı yukarı dikey bir kesi yapmak. </li><li> Geri bilateral diyaframı Kes, daha sonra kalbi, bu yaymak kalmasını sağlamak için hemostatlarla kelepçe göğüs kafesi ortaya çıkarmak için göğüs kafesi yayıldı. </li&gt; <li> Hemostat kullanarak, yavaşça çıkan aort açığa timus çıkarın. </li><li> Hemostat ucu ile izin fasya yayılan hafifçe ilerleyen ve hemostat geri çekilmeden ve aort döngü hemostat Tease. </li><li> , Çıkan aort arkasında 0-0 ipek sütür çekin gevşek bir yarım kare düğüm içine dikiş kravat hemostat kullanın. </li><li> Perfüzyon tamponu Hemisect aort akışını başlatmak ve hemen aort lümeni içine kanül eklemek için musluğunu getirin. Hızla yarım kare düğüm cinch ve iyice sıkarak, düğümü tamamlayın. </li><li> Uzaklıkta büyük damarların kalbi incelemek göğüs kalp kaldırmak ve perfüzyon sütuna eklemek için makas kullanın. </li><li> Aşırı akciğer dokusu uzak trim ve kalp balon yerleştirilmesinden önce yaklaşık 15 dakika boyunca kolonu üzerinde dengelenmeye gelmeye bırakın. 10-20 ml / dk kalbinden tampon normal akış hızını kullanarak. </li></ol></li></ol> 3. Langendorff Perfüzyon ve İskemi Reperfüzyon Hasarı <ol><li> LV öncesi Yerleştirmessure balon <ol><li> Bir koni şekline haddeleme sırasında balon Deflate ve balon sönük kalmasını sağlamak için musluğunu açın. </li><li> ÖTV mitral kapak erişimi maruz makas küçük bir çifti ile atrium bıraktı. </li><li> Sol atrium ve sol ventrikül içine mitral kapaktan balonu yerleştirin. </li><li> Basıncı izleme yazılımını başlatın (LabChart Pro). </li><li> Stopcock açarak ve yavaşça mikromanometre okuma diastolik basınç sıfır geçene kadar balon serum fizyolojik miktarını artırarak balonu şişirmek. </li><li> Yavaş yavaş havasını, uzunluk-gerilim yanıtını kontrol 75 mmHg diyastolik basınç yavaş yavaş balonu şişirmek için bir kez tekrarlayın. </li><li> Balonla tuzlu miktarını modüle ederek 10 mmHg diyastolik basınç olarak ayarlayın. Enflasyon bu seviyede balonu mühür stopcock çevirin ve LV balon ve basınç dönüştürücü arasındaki kapalı basınç sistemi korumak. </li><li> Plastik ile ısıtılan bölme ve kapak odasına düşük kalp. </li></ol></li><li> Ilanİskemi Reperfüzyon Hasarı ve ministration <ol><li> Isıtmalı odasının alt Tak ve oda effused tampon ile doldurmak için izin verir. </li><li> Tampon kalbini batık zaman, küresel iskemi uyaran, kalbine tampon akışını durdurmak için stopcock çevirin. Iskemi süresi deney hedeflerine bağlı olarak değişebilir. </li><li> Iskemi 30 dakika sonra, reperfüzyon başlatılması, kalp içine tampon maddesi akışını geri musluğunu açın. </li><li> Deney sonlandırmadan önce 1 saat süreyle kalp reperfüzyon izin verin. Deney hedeflerine bağlı olarak, değişken reperfüzyon kez kullanabilirsiniz. </li></ol></li><li> Deney sona ermesi ve Doku Hasat <ol><li> Vana yan bağlantı noktasını kullanarak, 10 ml &#39;lik bir oranda kalp içine, 4 ° C&#39;de fosfat tamponlu tuzlu su içinde 10 ml tatbik / dak kalbi durdurmak için. </li><li> Perfüzyon sütunundan kalbi çıkarın atriyal doku kalan uzak trim. </li><li> Pa ile kaplayın, paslanmaz çelik, doku dilimleme matrisi içine kalbi yerleştirin8 dakika boyunca, ya da kalp kadar -80 ° C &#39;de rafilm ve yer hatmi benzeri bir tutarlılığı vardır. </li><li> Dondurucudan çıkarın bloğunu ve 2 mm&#39;lik dilimler halinde kalbi dilim matris dilimleme içine jilet yerleştirin. Doku blokları da 2 mm&#39;den daha başka dilim boyutları ile satın alınabilir. </li><li> Bir defada dilimleri birini çıkarın ve biyokimyasal çalışmalar için dondurma flaş sıvı azot içine bırakın. Enfarktüs boyama apeks üçüncü ventrikül dilim saklayın. </li><li> Biyokimyasal deneylerde kullanılana kadar -80 ° C&#39;de, sıvı azot ve deposundan doku çıkarın. </li></ol></li><li> Enfarktüs Boyama <ol><li> 15 dakika boyunca 37 ° C&#39;de / hac trifeniltetrazolyum klorür (TTC)% 1 w 10 ml, üçüncü ventriküler dilimleri inkübe edin. Not: TTC Kuluçka etkinliği 15 herhangi bir değişiklik ile 15 ya da 30 dakika süre ile gerçekleştirilebilir. </li><li> % 10 tamponlu formalin için TTC doku dilim aktarın ve gece boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. En iyi sonuçlar için, duymakts formalin üzerinden alındı ​​ve 24 saat 4 olan görüntülü olmalıdır. </li><li> Böyle ImageJ olarak Fotoğraf lekeli dilim ve kullanım yazılım üreticisinin protokolüne göre infarkt boyutunu tahmin etmek. Boya zamanla kaybolacak kadar, tespit sonrasında kısa sürede fotoğraf çekmek. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Bainey, K. R., Armstrong, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+perspectives+on+reperfusion+injury+in+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Clinical perspectives on reperfusion injury in acute myocardial infarction.</a> American Heart Journal. 167 (5), 637-645 (2014).</li>
<li>Beyersdorf, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+controlled+reperfusion+strategies+in+cardiac+surgery+to+minimize+ischaemia%2Freperfusion+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">The use of controlled reperfusion strategies in cardiac surgery to minimize ischaemia/reperfusion damage.</a> Cardiovascular Research. 83 (2), 262-268 (2009).</li>
<li>Langendorff, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Untersuchugen+am+%C3%BCberlebenden+S%C3%A4ugethierherzen%5BTitle%5D)+AND+%22Pfl%C3%BCgers+Archives%22%5BJournal%5D)">Untersuchugen am überlebenden Säugethierherzen.</a> Pflügers Archives. 61, 291-307 (1895).</li>
<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+heart+perfusion%3A+The+langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Retrograde heart perfusion: The langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li>
<li>Tyers, G. F., Todd, G. J., Neely, J. R., Waldhausen, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+myocardial+protection+from+ischemic+arrest+by+intracoronary+tetrodotoxin+administration%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">The mechanism of myocardial protection from ischemic arrest by intracoronary tetrodotoxin administration.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 69 (2), 190-195 (1975).</li>
<li>Murry, C. E., Jennings, R. B., Reimer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+with+ischemia%3A+A+delay+of+lethal+cell+injury+in+ischemic+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Preconditioning with ischemia: A delay of lethal cell injury in ischemic myocardium.</a> Circulation. 74 (5), 1124-1136 (1986).</li>
<li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiac+function+and+energetics+in+isolated+mouse+hearts+using+31P+NMR+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiac function and energetics in isolated mouse hearts using 31P NMR spectroscopy.</a> The Journal of Visualized Experiments. (42), (2010).</li>
<li>Fishbein, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+phase+acute+myocardial+infarct+size+quantification%3A+Validation+of+the+triphenyl+tetrazolium+chloride+tissue+enzyme+staining+technique%5BTitle%5D)+AND+%22American+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Early phase acute myocardial infarct size quantification: Validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique.</a> American Heart Journal. 101 (5), 593-600 (1981).</li>
<li>Aune, S. E., Herr, D. J., Mani, S. K., Menick, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+inhibition+of+class+I+but+not+class+IIb+histone+deacetylases+exerts+cardiac+protection+from+ischemia+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Selective inhibition of class I but not class IIb histone deacetylases exerts cardiac protection from ischemia reperfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 138-145 (2014).</li>
<li>Yellon, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+protective+role+of+heat+stress+in+the+ischaemic+and+reperfused+rabbit+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The protective role of heat stress in the ischaemic and reperfused rabbit myocardium.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 24 (8), 895-907 (1992).</li>
<li>Khaliulin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+preconditioning+of+isolated+rat+hearts--a+potent+cardioprotective+mechanism+involving+a+reduction+in+oxidative+stress+and+inhibition+of+the+mitochondrial+permeability+transition+pore%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Temperature preconditioning of isolated rat hearts--a potent cardioprotective mechanism involving a reduction in oxidative stress and inhibition of the mitochondrial permeability transition pore.</a> The Journal of Physiology. 581 (Pt 3), 1147-1161 (2007).</li>
<li>Molojavyi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ketamine+and+its+isomers+on+ischemic+preconditioning+in+the+isolated+rat+heart%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Effects of ketamine and its isomers on ischemic preconditioning in the isolated rat heart).</a> Anesthesiology. 94 (4), 623-629 (2001).</li>
<li>Asfour, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADH+fluorescence+imaging+of+isolated+biventricular+working+rabbit+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">NADH fluorescence imaging of isolated biventricular working rabbit hearts.</a> The Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).</li>
<li>Sill, B., Hammer, P. E., Cowan, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+mapping+of+langendorff-perfused+rat+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Optical mapping of langendorff-perfused rat hearts.</a> The Journal of Visualized Experiments. (30), (2009).</li>
<li>Ferrera, R., Benhabbouche, S., Bopassa, J. C., Li, B., Ovize, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One+hour+reperfusion+is+enough+to+assess+function+and+infarct+size+with+TTC+staining+in+langendorff+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Drugs+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">One hour reperfusion is enough to assess function and infarct size with TTC staining in langendorff rat model.</a> Cardiovascular Drugs and Therapy. 23 (4), 327-331 (2009).</li>
<li>Sutherland, F. J., Shattock, M. J., Baker, K. E., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+isolated+perfused+heart%3A+Characteristics+and+cautions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Pharmacology+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mouse isolated perfused heart: Characteristics and cautions.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 30 (11), 867-878 (2003).</li>
<li>Reichelt, M. E., Willems, L., Hack BA,, Peart, J. N., Headrick, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+and+coronary+function+in+the+langendorff-perfused+mouse+heart+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">Cardiac and coronary function in the langendorff-perfused mouse heart model.</a> Experimental Physiology. 94 (1), 54-70 (2009).</li>
<li>Xie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+inhibition+blunts+ischemia%2Freperfusion+injury+by+inducing+cardiomyocyte+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase inhibition blunts ischemia/reperfusion injury by inducing cardiomyocyte autophagy.</a> Circulation. 129 (10), 1139-1151 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

İzole perfüze sıçan kalp başarıyla iskemi reperfüzyon hasarı 9 kardiyak önkoşullama üzerindeki farmakolojik müdahalenin etkisini araştırmak için kullanılabilir. Ancak, tekrarlanabilir sonuçlar sağlamak için standardize edilmelidir prosedüre bazı temel adımlar vardır. Sistem içinde 37.4 ° C arasında bir sıcaklık muhafaza hatta hafif ve hipotermi hipertermi kalp önkoşullanma 10,11 neden olabilir, kritik öneme sahiptir. ketamin ile uzun süreli maruz kalp önkoşullama 12 engel olabilecek kalp...

Hem iskemi ve reperfüzyon kardiyak tepkiyi altında yatan olaylar izahı aort kros-sıkma 2. gerektiren miyokard infarktüsü 1 ve kardiyak cerrahi işlemlerin tedavi geliştirilmesi esastır. Iskemi reperfüzyon hasarının in vivo modelleri, çok kullanışlı bir son nokta analizi sağlarken, gerçek zamanlı olarak, akut iskemi reperfüzyon hasarının fonksiyonel etkilerinin araştırılması için etkili değildir. In vivo iskemi reperfüzyon modelleri genellikle reperfüzyon sırasında infarkt önemli değişkenlik ve kalbe ilacın doğrudan teslim üretmek içinde Ayrıca, zordur. iskemi reperfüzyon hasarının incelenmesi için bir Langendorff izole kalp sisteminin kullanımı, farmakolojik tedaviler, enfarkte doku tek biçimli alan ve doğrudan miyokarda ilacın anlık teslimat gerçek zamanlı fonksiyonel değerlendirmesi için izin verir. İlk b&#39;deki1895, 3 y Oscar Langendorff, Langendorff izole kalp son 40 yıl 4,5 için iskemi reperfüzyon araştırmalarında kullanılan edilerek, iskemi reperfüzyon hasarı incelemek için sağlam bir modeldir. Burada, bazı değişiklikler fonksiyonel analiz için izole kalbi optimize etmek için yapılır. Aortun yerinde kanülasyon kalp kalpte iskemi reperfüzyon çalışmaların 6 sonuçlarını değiştirecek iskemik önkoşullanma, tecrübe etmediğini garanti iken. Bunu kolaylaştırmak için, bir traketomi havalandırma sağlayan ve ameliyat sırasında sıçan fizyolojik istikrarın sağlanması gerçekleştirilir. Bundan sonra, kalp, Krebs Henseleit tamponu aort içine doğrudan retrograd perfüzyon yoluyla teslim edildiği bir cam su ceketli sarmal kolonuna bağlanmıştır. Bir tuzlu su dolu balon sol ventrikül içerisine eklenen ve ventrikül An içinden baskıların gerçek zamanlı ölçümüne izin veren bir basınç transdüktörüne, bağlı olduğuBirden fazla fonksiyonel parametreler d hesaplanması. Deneyin sonunda, kalp kasılma ve DNA, RNA ve protein seviyeleri alt analiz sağlamak için sıvı azot içinde dondurulmuş flaş tutulması için bir soğuk tuzlu su ile yıkanır. Böylece değiştirilmiş, Langendorff perfüze kalp iskemi reperfüzyon hasarı sırasında akut herhangi bir zamanda farmakolojik müdahalelerin fizyolojik etkisinin direkt izlenmesi için etkili bir sistem olarak hizmet vermektedir.

<table><tbody><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum Sülfat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>203726</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat Dibazik</td><td>Sigma Aldrich</td><td>RES20765-A7</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür Dihidrat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8106</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>D-Glikoz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Oktanoik Asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2875</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>Tıbbi Basınç Dönüştürücü</td><td>MEMSCAP</td><td>SP844</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex Peristaltik Pompa</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-07521-40</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex Kolay Yük Pompa Kafası</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-07518-10</td><td></td></tr><tr><td>Isıtmalı sirkülasyonlu su banyosu</td><td>Lauda</td><td>M3</td><td></td></tr><tr><td>Boru Akış Modülü</td><td>Transonic</td><td>TS410</td><td></td></tr><tr><td>Modüler Araştırma Konsolu</td><td>Transonic</td><td>T402</td><td></td></tr><tr><td>Hat içi akış sensörü</td><td>Transonic</td><td>ME2PXN</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab Veri Toplama Cihazı</td><td>AD Instruments</td><td>PL3508</td><td></td></tr><tr><td>LabChart veri toplama yazılımı</td><td>AD Instruments</td><td>MLU60/8</td><td></td></tr></tbody></table>

langendorff-perfüze sıçan hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon hasarı değerlendirilmesi

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Akut ortamda iskemi reperfüzyon hasarını çevreleyen biyokimyasal olaylar, miyokard infarktüsü ve göğüs cerrahisinin kardiyak komplikasyonları için yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesinde büyük önem taşımaktadır. Bazı ilaçların miyokard'ı iskemi reperfüzyon hasarına karşı ön koşullandırma yeteneği, çok az başarı ile çok sayıda klinik çalışmaya yol açmıştır. İzole kalp modeli, iskemi-reperfüzyon yaralanması penceresinden önce veya bu pencere içinde herhangi bir zaman noktasında uygulanan çeşitli farmakolojik müdahalelerin etkileri de dahil olmak üzere, iskemi reperfüzyon hasarının fonksiyonel etkilerinin gerçek zamanlı olarak akut olarak gözlemlenmesine olanak tanır. Kısa süreli iskemi kalbi iskemik hasara karşı ön koşullandırabileceğinden, önceden koşullandırılmamış miyokardın fonksiyonel değerlendirmesine izin vermek için in situ aort kanülasyonu yapılır. Basınç oluşumunun gerçek zamanlı ölçümünü sağlamak için sol ventriküle tuzlu su dolu bir balon yerleştirilir. İskemik hasar, perfüzyon tampon akışının kesilmesi ve ardından reperfüzyon ile simüle edilir. Hem iskemi hem de reperfüzyonun süresi, herhangi bir zaman noktasında biyokimyasal olayları incelemek için modüle edilebilir. Langendorff izole kalp modeli, iskemi ve reperfüzyonu etkileyen sistemik olayların dikkate alınmasına izin vermese de, iskemi reperfüzyon hasarı penceresindeki akut fonksiyonel ve biyokimyasal olayların yanı sıra farmakolojik müdahalenin kardiyak ön ve son koşullandırma üzerindeki etkisinin incelenmesi için mükemmel bir modeldir. Bu protokolün amacı, Langendorff modelinde in situ aort kanülasyonu ve kalp eksizyonu takiben iskemi/reperfüzyon hasarının nasıl yapılacağını göstermektir.

sol ventrikül balon aparatı müteahhitlik sol ventrikül (Şekil 1) tarafından geliştirilen basınç gerçek zamanlı izleme sağlar. Daha önce 7 tarif edildiği gibi, bu basınç izleme ventriküler fonksiyon parametrelerinin çoğu hesaplamak için kullanılabilir. Bu hesaplamalar, başlangıç ​​aşaması olarak reperfüzyon fazı yapılan her bir grup içinde birden fazla izleri üzerinden ortalaması alınmış, ve daha önce 9 yapmış gibi farmakolojik müdahale, kardiyak ön koşullandırma neden olup olmadığı...

İzole sıçan kalbi, iskemi reperfüzyon hasarı için kalıcı bir modeldir. Burada, yerinde aort kanülasyonu, kalbin Langendorff perfüzyonu, simüle edilmiş iskemi-reperfüzyon hasarı ve iskemik hakaretin derecesini doğrulamak için enfarktüs boyama yoluyla bir sıçandan atan kalbin çıkarılması sürecini açıklıyoruz.

Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Bu prosedürün genel amacı, iskemi ve reperfüzyon hasarını ex vivo olarak modellemektir. Bu işlem, öncelikle bir sıçanın anestezi altına alınması ve miyokardın iskemik ön koşullanmasını önlemek amacıyla aortanın C2 seviyesinden kanüle edilmesi için göğüs kafesinin açılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, kalp çıkarılarak Langendorff perfüzyon aparatına bağlanır.Son adım, tampon akışını bir süreliğine durdurup ardından akışı yeniden başlatarak bir iskemi reperfüzyon hasarı uygulamaktır. Son olarak, iskemi reperfüzyon hasarının miyokard fonksiyonu üzerindeki etkisini göstermek için ventriküler basınç oluşumu kullanılır. Bu yöntem, iskemi reperfüzyon hasarının dinamik ilk birkaç saati boyunca hangi moleküler olayların meydana geldiği gibi, kardiyak iskemi reperfüzyon alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olmak için kullanılabilir.Başlamak için, sıçanın anestezi aldığı onaylandıktan sonra gerekli anestetik miktarını hesaplayın. Trakeotomiye öncelikle deriyi dört patinin ortasından çene tabanına kadar açarak başlayın. Muskulatürü açığa çıkarmak için hemostatlar kullanarak deriyi kenara çekin.Ardından hemostatlarda kullanarak glandüler dokuyu kaldırın ve makasla fasyaya inferior bir insizyon yapın. Açığa çıkan dokuyu başka bir hemostat çiftiyle ayırın. Jugular vene zarar vermemeye dikkat edin.Şimdi makas ve hemostatlardan yardım alarak trakeanın üzerindeki kasta transvers bir insizyon yapın. Ardından, hemostatları kullanarak trakeayı açığa çıkarın; bu süreçte fasyayı temizleyerek hemostatları dikkatlice trakeanın altına yerleştirin. Daha sonra, trakeanın arkasındaki 0,0 ipek sütürü hemostatlarla kavrayın.Ardından, hemisizasyon için makas kullanın. Trakeayı trakea boyunca diseke edin. Trakeal kanülü yerleştirin ve kanülün Y şeklinde kasık kısmına dikiş atarak sütürle sabitleyin.Şimdi, 27 gauge iğneye sahip bir şırınga ile jugular vene kilogram başına 1000 ünite heparin enjekte edin. Torakotomiye geçmeden önce 30 saniye bekleyin. Hemostatlar ve makas kullanarak orta karın ile orta göğüs kafesi arasındaki deriyi çıkararak torakotomiye başlayın.Ardından, diyaframın hemen altına, abdominal duvara üç çeyrek inçlik bir insizyon yapın. İnsizyonu sternum boyunca dikey olarak sürdürün. Daha sonra göğüs kafesini açığa çıkarmak için diyaframı bilateral olarak kesin.Şimdi, göğüs kafesini genişletin ve hemostatlarla yana doğru sabitleyerek kalbi açığa çıkarın. Aortun kanülasyonu, prosedürün en kritik adımıdır. Kalbin, sonraki iskemi reperfüzyon sonuçlarını değiştirebilecek kısa süreli bir iskemi yaşamasını önlemek için kanül hassas bir şekilde yerleştirilmeli ve hızla bağlanmalıdır.Hemostatlarla deney yapın. Asendan aortaya erişmek için timusu dikkatlice çıkarın. Hemostatları fasyanın içinden aortik loop boyunca yönlendirin.Ardından, açıklıktan 00 ipek sütür geçirin ve gevşek bir tek düğümle bağlayın. Şimdi kanül üzerinden perfüzyon tamponu akışını başlatın. Sonrasında, aortayı diseke edin ve kanülü derhal aort lümenine yerleştirin.Düğümü sıkarak ve kare düğüm haline getirerek kanülü sabitleyin. Makas kullanarak kalbi büyük damarlardan ayırın. Serbest kaldığında, kalbi çıkarın ve perfüzyon kolonuna bağlayın.Fazla akciğer dokusunu kesin. Yaklaşık 15 dakika sonra kalp, dakikada 10 ile 20 mililitre arasındaki normal tampon akışıyla dengelenecektir. Kalp kolonla dengelendiğinde, balon yerleştirilebilir.İlk olarak, balonu koni şeklinde sararak söndürün. Balon söndükten sonra akışı balona sabitleyin. İkinci olarak, kalbin sol atriumunu eksize ederek mitral kapağa erişin.Üçüncü olarak, balonu mitral kapak aracılığıyla sol ventriküle yerleştirin. Şimdi lab chart pro yazılımı ile sistolik ve diyastolik basıncı izlemeye başlayın ve basınç sıfırdan büyük olana kadar balonu şişirin. Ardından uzunluk gerilim yanıtını kontrol edin.Basınç 75 mm Hg değerine ulaşana kadar balonu yavaşça şişirin. Ardından yavaşça söndürün ve işlemi tekrarlayın. Balondaki salin miktarını değiştirerek basıncı tekrar 10 mm Hg değerine düşürün.Ardından, balonu bu basınçta sabitleyin ve balon ile transducer arasında kapalı bir basınç sistemi sağlayın. Son olarak, kalbi ısıtmalı bir hazneye indirin ve plastik streç filmle kapatın. Hazne, tıkalı/kapalı olmalı böylece füzyon tamponu ile dolmalıdır.Kalp daldırıldıktan sonra tampon akışını durdurun. Bu işlem, ihtiyaç duyulan süre boyunca küresel iskemi oluşturur. Bu durumda süre 30 dakikadır.30 dakika sonra, kalbe tampon akışını yeniden sağlayarak ve hazneyi açarak iskemiyi durdurun. Reperfüzyonun istenilen süre boyunca devam etmesine izin verin ve ardından deneyi sonlandırın; bu durumda deney, stop kokun yan portundan bir saatlik reperfüzyonun ardından sonlandırılacaktır. Bir dakika boyunca 10 mililitre buz gibi soğuk PBS uygulayın.Bu işlem kalbi durduracaktır. Ardından kalbi kolondan çıkarın ve kalan tüm atriyum dokularını kesin. Kalbi kurulayın, bir dilimleme matrisine aktarın ve perfil ile kaplayın.Kalbi -80 °C'de sekiz dakika boyunca veya marşmelov kıvamına gelene kadar dondurun. Jilet kullanarak kalbi 2 mm'lik kesitlere ayırın veya tercih edilen yönteme göre, her bir dilimi tek tek çıkararak sıvı azot içinde dondurun. Biyokimyasal çalışmalar için dondurulmuş dilimler daha sonra -80 °C'de saklanmalıdır.İnfarkt boyaması için bir kesiti sıvı azot içinde dondurulmamış olarak saklayın. Açıklanan protokol ile sol ventrikül balon düzeneği, kasılan sol ventrikül tarafından oluşturulan basıncın gerçek zamanlı izlenmesine olanak tanır.Normal bir kalpte, gelişen basınç 70 ile 130 milimetre cıva arasında değişir. İskemik bir hasar sonrası, hayvanlara eksize etmeden önce Sınıf bir ve iki B HDAC inhibitörü saha gibi bir ön koşullandırma ajanı verilmediğinde, gelişen basınç azalır ve end diyastolik basınç yükselir; bu durumda bazal basınç değişkenlik gösterebilir ve iskemi reperfüzyon hasarının etkileri hafifletilir.Sol ventrikül fonksiyonuna ilişkin diğer ölçümler de doğrudan yazılım çıktılarından elde edilebilir veya hesaplanabilir. Metabolik olarak aktif dokuyu kırmızıya boyayan TTC ile hasarlı kalp incelendiğinde, iskemi-reperfüzyon hasarına maruz kalan kalbin metabolik aktivitesinin önemli ölçüde daha düşük olduğu, bunun da bu prosedürün ardından enfarkte doku içerdiği anlamına geldiği açıkça görülmüştür. Gerçek zamanlı kantitatif PCR, Western blotting ve kütle spektrometrisi gibi teknikler; iskeminin, reperfüzyon hasarının ve ilaç tedavisinin kalp üzerindeki biyokimyasal ve genetik etkileri nelerdir gibi soruları yanıtlamak için kullanılabilir.

induction-assessment-ischemia-reperfusion-injury-langendorff-perfused

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu makale, potansiyometrik boya kullanarak (di-8-ANEPPS) Langendorff perfüze sıçan kalpleri yüzeyinde optik görüntü aksiyon potansiyeli hareketi yüksek bir zamansal ve mekansal çözünürlükte tekniği açıklar.

Langendorff perfüze sıçan Kalpler Optik Haritalama

Akut miyokard infarktüsü (AMI) sıçan modelinde kalp patofizyolojik ve fizyolojik fonksiyonu MI sonucu incelemek için yararlıdır.

Sıçanlarda Akut Miyokard Enfarktüsü

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Koroner akış rezervi (CFR), maksimum koroner kan akışının istirahat koroner kan akışına oranı olarak tanımlanır. Biz obstrüktif koroner hastalığın yokluğunda kardiyovasküler risk faktörleri tahmin etmek için fırsat sunan ultrason yoluyla fareler CFR değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Burada, mikromanipülasyon yoluyla sol ön inen koroner arterin hassas ligasyonu ile farelerde miyokard enfarktüsü veya miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını indükleyebilen basit ve tekrarlanabilir bir yöntem tanımlanmıştır.

Farelerde Miyokard Enfarktüsü ve Miyokard İskemi-Reperfüzyon Hasarının İndüksiyonu

Sıçan kalbinin miyokard iskemi-reperfüzyon modeli, kendi kendine yapılan bir retraktör, polivinil klorür tüpü ve benzersiz bir düğümleme yöntemi kullanılarak geliştirilmiştir. Elektrokardiyogram, trifeniltetrazolyum klorür ve histolojik boyama ve yüzde sağkalım analizi sonuçları, geliştirilmiş model grubunun mevcut model grubundan daha yüksek başarı ve sağkalım oranlarına sahip olduğunu göstermiştir.

Miyokard İskemisi ve Reperfüzyon Hasarının Geliştirilmiş Kemirgen Modeli

Bu çalışma, sağkalım vakaları için sol mini torakotomi veya sağkalım dışı vakalar için orta hat sternotomi kullanan tavşanlarda akut bölgesel miyokardiyal iskemi ve reperfüzyon hasarının yüksek oranda tekrarlanabilir bir hayvan modelini göstermektedir.

Tavşanlarda İskemi ve Reperfüzyon Hasarı Modeli

Bu makale, Langendorff sırasında fizyolojik (60-80 mmHg) perfüzyon basınçlarından daha düşük (30-35 mmHg) uygulanarak murin kardiyak greftlerde fonksiyon kaybı olmadan daha uzun perfüzyon süreleri (4 saat) elde etmenin fizibilitesini göstermektedir.

Kemirgen Kardiyak Greftlerin Daha Uzun Perfüzyon Süreleri için Modifiye Langendorff Perfüzyonu

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Perioperatif ve yoğun bakım ile ilgili akut böbrek hasarı için güçlü bir model sundu. Neredeyse, klinik AKI, histolojik ve fonksiyonel değişiklikleri çoğaltmak mümkündür kardiyak arrest ile indüklenen tüm vücut hipoperfüzyon kullanma.

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Keşfedin izole sıçan kalp modelinde iskemi-reperfüzyon hasarını incelemeyi. Langendorff perfüzyonu ve ventriküler basınç ölçümü ile kardiyak fonksiyonu değerlendirin. Bu yöntem kalp araştırmalarında terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet