Name: Ozmotik implantasyonu Pompalar ve Sistem izleyicilerin teslim fizyopatolojik Koşullarında Beyin Reorganizasyon Çalışması için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Öğrenin mini-osmotik pompaları beynin fizyopatolojik koşullarda reorganizasyonunu incelemek için nasıl implante edilir. Bu yöntem, tedavi ajanlarının sürekli iletimi ve beyin bağlantılarındaki değişikliklerin izlenmesi için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Dr. Werner Jackstädt Vakfı (Eduardo Sanchez-Mendoza'ya), Alman Akademik Değişim Servisi (DAAD'ye; Jeismar Carballo'ya), Alman Araştırma Konseyi (HE3173/2-1, HE3173/2-2 ve HE3173/3-1; Dirk M. Hermann'a), Heinz Nixdorf Vakfı (Dirk M. Hermann'a) tarafından desteklenmiştir.

Hayvan deneyleri hükümet onayı ile yapıldı (G1361 / 13, AZ84-02.04.2013.A192 ve G1362 / 13, AZ84-02.04.2013.A194; Bezirksregierung Düsseldorf) Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım NIH Rehberi dayalı. 1. Hazırlık, mini-ozmotik pompalar ve <ol><li> Steril bir ortamda (yani., Hücre kültürü davlumbaz), pompa, kateter elde moderatör, beyin infüzyon kanülü ve aralayıcı diskler kullanılabilir (Şekil 1) akar. </li><li> Kanül iğnenin sadece ucu ventrikül ile temas halindedir ve böylece doğrudan ventriküller içine ilaçların verilmesi için tek bir boşluk disk kullanın. Baş aşağı forseps ile kanül tutun. Siyanoakrilat yapıştırıcı (CA) iki damla ekleyin ve bir boşluk diski tanıtmak. </li><li> Yukarı bakacak şekilde düz bir yüzeye kanül bırakın, böylece boşluk disk ve kanül kurudukça arasındaki tutkal. </li><li> Yaklaşık 2.5 cm bölümlerinde kateter kesilir. </li><li> Ea içinBu kateter içinde kabarcıkların oluşumunu önlemek için bunun içinde tamamen ve böylece tüm havayı ekstrüzyon pompa doldurmak için gerekli olacak kadar kanal pompası, ilgi konusu çözeltinin 300-350 ul az hazırlar. Kabarcıklar akışını engelleyecektir beyin içine çözeltisi. </li><li> Dikkatle akış moderatörlüğe kateter bağlayın. </li><li> Çözeltinin az miktarda, böylece bunun içindeki hava kabarcıklarını önlemek, pompa çıkana kadar beyin infüzyon kiti tarafından sağlanan iğnesine bağlanır 2 ml&#39;lik bir şırınga kullanarak, pompa doldurun. </li><li> Dikkatle akış moderatör doldurup dikkat kateter kateter içinde kalan kabarcıklarını engellemek için. </li><li> Pompa içindeki akış moderatör tanıtın. </li><li> Doldurulduktan sonra, dikkatli bir şekilde kateterin ucuna kanül bağlayın. Bir kabarcık kanül çıkarın ve dikkatli bir şekilde taşıyıcı veya ilaç solüsyonu ile kateter dolum ve daha sonra kanül yeniden gündeme oluşturulduğu görülmektedir edin. </li><li> Pu yerleştirinSteril tuzlu su çözeltisi ile bir kapta mp ve 37 ° CO / N de bırakın. </li><li> Implantasyon öncesi kabarcık oluşumu için tekrar kontrol edin. Gerekli (yani., Kabarcıklar izlenir) Eğer kanül kaldırmak ve tüp dolum. Kanül takın. Bu çözeltinin bir kaç mikrolitre almalıdır. </li></ol> Ozmotik 2. implantasyonu Pompalar Not: Bu deneyler hayvanların% 1 izofluran (% 30 O 2,% 70 N 2 O) ile anestezi yapıldı için. Bu mevcut değildir ancak eğer anestezi intraperitoneal kullanımı da 11 mümkündür. <ol><li> Anestezi altında stereotaktik cihazda hayvan bulun ve anestezi altında iken kuruluğu önlemek için koruyucu bir merhem ile gözleri kapsamaktadır. Parmaklarla ya da bir forseps ile basıldığında arka ayağın içinde yanıt eksikliği gözlemleyerek anestezi onaylayın. Hayvan tamamen uykuda kadar devam etmeyin. </li><li> O aşkın kürk Cutmakas veya tıraş makinesi ile ya reklam. Cilde zarar vermeden mümkün olduğunca kesin. </li><li> Antibakteriyel ve fungisit özelliklere sahip% 70 etanol ve dezenfektan ile cildi temizleyin. </li><li> Bir neşter ile orta hatta biraz sağında 1 cm&#39;lik kesi açıp kafatası maruz. </li><li> Bir pamuklu çubuk ile kafatası temizleyin. % 70 etanol ile ıslatın ve kafatası üzerinde geçmek. Bu kafatası kurumaya neden olacaktır. </li><li> Kafatası ışığı kanaması varsa, herhangi bir kanama noktaları ortadan kaldırmak için bir cauterizer kullanın. Kan kanül yerleştirilir kez kemik üzerinde düzgün kurumasını CA önler. </li><li> Kanül implante edilecek kafatası noktasında bir işareti yapmak için stereotaktik aygıtı kullanın. Sol hemisfer koordinatlarına ventriküler infüzyon için -0.2 mm kaudal, bregmaya 0.9 yanal mm (Şekil 2A) bulunmaktadır. </li><li> Yavaşça 45 ° açı yaparak kafatası üzerinde matkap; Bu kazayla Brai girmesini engeller matkapn. Tekrar tekrar birkaç saniye matkap ve sonra delik ne kadar derin olduğunu kontrol edin. Kafatası inceltilmiş ama hala tam olarak nüfuz değil edildikten sonra sondaj durdurun. </li><li> Beyin tamamına erişim elde edilene kadar steril bir iğne ucu ile meninks kırın. Beyin zarar vermeyecek şekilde yavaşça çekin. </li><li> Bir pamuklu çubuk kullanarak% 70 etanol ile kafatası temizleyin. </li><li> Bir ön-kaudal yönde hayvanın derisinin altına düz bir forseps tanıtın. Pompa implante edilecek hayvanın sırtına deri altına alan açmak için forseps kullanabilir. Dış kateter ve kanül (Şekil 2B) ayrılan hayvanın sırtına Pompayı tanıtılması. Kaldırılır ve tespitin her türlü ihtiyacı yoktur kadar pompa bu konumda kalacaktır. </li><li> Dikkatle sonraki kanül iğne tutkal dört küçük damla koyun. </li><li> Dikkatle yanlara doğru hareket ettirmeden kafatası yoluyla iğne tanıtmak. 15-30 saniye konumda tutun uKanül, tamamen bağlı ntil (Şekil 2C.1). Bir ara disk kullanılmış ise bir kez yerinde, kanül dorso ventral yönde 2.5 mm ulaşacak. Düzgün takılı ise, kanül deneyin sonuna kadar kemiğe bağlı kalacaktır. </li><li> Çıkarılabilir sekmesinin üzerine bir parmağınızı yerleştirin ve sonra makas bir dizi (Şekil 2C.2) ile boynundan kesti diğer elinizi kullanın. </li><li> 5-0 sütür ile cilt üzerinde yara kapatın ve (Şekil 2D) enfeksiyonunu önlemek için yara üzerine povidon-iyot çözeltisi (PVP-I) ve bir kaç damla ekleyin. </li><li> Yeni kafes içine hayvan taşıyın. Hala ameliyat edilmemiş hayvanlara ameliyat hayvanları koymayın. İlaç uygulamaları sırasında kafeslerine yalnız pompalarla implante edilmiş hayvanları tutun. </li><li> Onlar uyanık ve sternum yatma kazanmış kadar sahipsiz fareler bırakmayın. </li></ol> 3. Pompa Removablel Not: Genellikle deney pompası tarafından izin verilen teslimat süresi sonunda sona erecek, ancak bir uyuşturucu teslim takip olarak ikincil deneyler yapmak için pompayı kaldırmak mümkündür. Yolu izli enjeksiyonları yapmak için bu pompayı kaldırmak ve böylece gereklidir. <ol><li> Anestezi altında seterotactic cihazda hayvan koyun ve anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için koruyucu merhem gözleri kapsamaktadır. Parmaklarla ya da bir forseps ile basıldığında arka ayağın içinde yanıt eksikliği gözlemleyerek anestezi onaylayın. Hayvan tamamen uykuda kadar devam etmeyin. </li><li> Dikkatle pompa implantasyon gününde yapılan kesiden keserek cilt açın. </li><li> Cerrahi kelepçe ile kanül tutun ve çekin. Kolayca kafatası çıkarılmalıdır. Nazik kanama beklendiği gibi, bir pamuklu çubuk yerleştirerek onu durdurmak ve 1-2 dakika bekleyin. </li><li> Kateter pompayı dışarı çekin. Kendisio iterek cilt üzerinde baskı oluşturarak çıkıp lp. </li><li> 5-0 sütür ile tekrar yara kapatın ve PVP-I birkaç damla ekleyin. </li><li> Yeni kafes içine hayvan taşıyın. Do hala ameliyat edilmemiş hayvanlara ameliyat hayvanları koymak değil. Ameliyat geçiren hayvanlar bir araya getirilebilir. </li><li> Onlar uyanık ve sternum yatma kazanmış kadar sahipsiz fareler bırakmayın. </li><li> Hayvan yolu tracer enjeksiyonundan geçmeden önce 10 gün boyunca kurtarmak için izin verin. </li></ol> Sağ Motor cortex 45 ° Açılar at 4. Basınç Yolu Tracer Enjeksiyon <ol><li> Anestezi altında stereotaktik cihaz üzerinde hayvan koyun ve anestezi altında iken kuruluğu önlemek için koruyucu bir merhem ile gözleri kapsamaktadır. Parmaklarla ya da bir forseps ile basıldığında arka ayağın içinde yanıt eksikliği gözlemleyerek anestezi onaylayın. Hayvan tamamen uykuda kadar devam etmeyin. </li><li> Baş yara açın. </li><li> C% 70 Etanol bir pamuklu bir bez kullanarak kafatası yalın. </li><li> Cihazın dikey tutucu bir 5 ul cam şırınga (26S ga) tanıtın. Cam tutucu alt uç tutucu parçasına tam olduğundan emin olun. O zaman dikey konumdan 45 ° yerleştirin ve enjeksiyon yapmak imkansız olacak gibi şırınga çok altında olmamalıdır. </li><li> Bregma üzerinden doğrudan şırınga yönlendirmek ve ardından istediğiniz koordinatları bulun. Point # 1: 0,5 mm rostral ve 2,5 mm bregma göre yanal motor korteks koordinatları bir enjeksiyon içindir. Point # 2: 1,34 mm rostral, bregma göre 2,5 mm yanal. </li><li> Koordinatları bulunduktan sonra, ince bir ucu ile bir işaretleyici ile kafatası üzerinde konumlarını gösterir. Doğru koordinat gizlemek olabilir aşırı mürekkep sürümü olarak kafatasında tek bir nokta yapın. </li><li> Dikkatle 45 ° matkap tutan kafatası matkap. Tam perf değildir, böylece adım 2.8 olduğu gibi, sık kafatası kontrolmatkap yol açtığı beyin hasarı önlemek için orated. Tüm kemik kaldırıldı emin olmak için bir şırınganın ucu kullanın. </li><li> Şırıngaya yolu izleyici seyreltme 600 nl yükleyin. </li><li> Hayvanın sağ tarafına doğru 45 ° dikey konumunu ayarlar. Mikroskop altında, sağ deliğin önünde şırınga en iğne ucu yerleştirin. </li><li> 1,5 mm dikey yönde hareket ettirin. Basınç enjeksiyonları yapmadan önce 30 saniye ile 1 dakika boyunca bu pozisyonda iğne istikrarlı edelim. </li><li> 30 saniye süre ile birbirinden ayrılmış 100 nl üç adımda izleyici seyreltme 300 nl enjekte edilir. Son enjeksiyondan sonra beyin akmaya izleyici önlemek için 30 saniye ile 1 dakika için sürekli şırınga bırakın. </li><li> Yavaşça, şırıngayı çekin ikinci deliğin üzerine taşınmaya ve şırınga içinde olan, kalan 300 nl aynı işlemi tekrarlayın. </li><li> İkinci enjeksiyondan sonra, şırınga kaldırmak ve Wou kapatmak için devamnd ve 5-0 sütür ile PVP-I birkaç damla ekleyin. </li><li> Yeni kafes içine hayvan taşıyın. Do hala ameliyat edilmemiş hayvanlara ameliyat hayvanları koymak değil. Ameliyat geçiren hayvanlar bir araya getirilebilir. Onlar uyanık ve sternum yatma kazanmış kadar sahipsiz fareler bırakmayın. </li><li> Hayvan kurban önce 10 gün boyunca kurtarmak için izin verin. </li></ol> 5. Yolu Tracer Gözlem <ol><li> Kurumsal kurallarına göre tamamen hayvan anestezisi. Parmaklarla ya da bir forseps ile basıldığında arka ayağın içinde yanıt eksikliği gözlemleyerek anestezi onaylayın. Hayvan tamamen uykuda kadar devam etmeyin. </li><li> Standart protokoller 6 altında PBS içinde% 4 paraformaldehid (pH 7) ile hayvanların serpmek. </li><li> % 4 paraformaldehid O / N daldırma yoluyla beyin ve sonrası düzeltme onu kaldırın. </li><li> Beyin lavaboya kadar% 30 sakaroz olarak beyinleri cryoprotect. Sonra beyinleri çıkarın ve 10 saniye Imme onları dondurmaksıvı nitrojen içinde rsion. Bölümler üretilmektedir kadar -80 ° C&#39;de beyinleri tutun. </li><li> Bir cryostate üzerinde kesit ile retrograd yolu tracer analizi ve anterograde yolu izleyici analizi için 40 mikron 20 mikron de bölümleri üretin. </li></ol> Not: FG etiketli nöronlar ultraviyole ışık uyarma altında beyaz hücreler olarak görülebilir. BDA elyaf 6,7 kontrastının arttırılması için bir avidin-biyotin-peroksidaz kompleksi ve% 0.4 nikel ilavesiyle 3,3 &#39;diaminobenzidin ile O / N içerikli inkübasyon ile tespit edilir.

<ol><li>Doeppner, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-124+protects+against+focal+cerebral+ischemia+via+mechanisms+involving+Usp14-dependent+REST+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-124 protects against focal cerebral ischemia via mechanisms involving Usp14-dependent REST degradation.</a> Acta Neuropathol. 126, 251-265 (2013).</li>
<li>Hoyo-Becerra, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Regulation+of+Depression-Associated+Genes+in+a+New+Mouse+Model+Mimicking+Interferon-alpha-Related+Depression+in+Hepatitis+C+Virus+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Rapid Regulation of Depression-Associated Genes in a New Mouse Model Mimicking Interferon-alpha-Related Depression in Hepatitis C Virus Infection.</a> Mol Neurobiol. , (2014).</li>
<li>Puntel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+into+rat+brain+using+adenoviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene transfer into rat brain using adenoviral vectors.</a> Curr Protoc Neurosci. Chapter 4, Unit 4.24(2010).</li>
<li>Miao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+adiponectin+improves+neurobehavioral+outcomes+after+focal+cerebral+ischemia+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurosci+Ther%22%5BJournal%5D)">Overexpression of adiponectin improves neurobehavioral outcomes after focal cerebral ischemia in aged mice.</a> CNS Neurosci Ther. 19, 969-977 (2013).</li>
<li>Pellegrini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+benefit+of+a+combined+strategy+using+erythropoietin+and+endothelial+progenitor+cells+after+transient+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Therapeutic benefit of a combined strategy using erythropoietin and endothelial progenitor cells after transient focal cerebral ischemia in rats.</a> Neurol Res. 35, 937-947 (2013).</li>
<li>Reitmeir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+delivery+of+erythropoietin+induces+stroke+recovery+by+promoting+perilesional+tissue+remodelling+and+contralesional+pyramidal+tract+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Post-acute delivery of erythropoietin induces stroke recovery by promoting perilesional tissue remodelling and contralesional pyramidal tract plasticity.</a> Brain. 134, 84-99 (2011).</li>
<li>Reitmeir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+induces+contralesional+corticobulbar+plasticity+and+functional+neurological+recovery+in+the+ischemic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor induces contralesional corticobulbar plasticity and functional neurological recovery in the ischemic brain.</a> Acta Neuropathol. 123, 273-284 (2012).</li>
<li>Hermann, D. M., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoting+brain+remodelling+and+plasticity+for+stroke+recovery%3A+therapeutic+promise+and+potential+pitfalls+of+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Promoting brain remodelling and plasticity for stroke recovery: therapeutic promise and potential pitfalls of clinical translation.</a> Lancet Neurol. 11, 369-380 (2012).</li>
<li>Overman, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+ephrin-A5+in+axonal+sprouting%2C+recovery%2C+and+activity-dependent+plasticity+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A role for ephrin-A5 in axonal sprouting, recovery, and activity-dependent plasticity after stroke.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, E2230-E2239 (2012).</li>
<li>Wolf, W. A., Martin, J. L., Kartje, G. L., Farrer, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+Fibroblast+Growth+Factor-2+as+a+Mediator+of+Amphetamine-Enhanced+Motor+Improvement+following+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evidence for Fibroblast Growth Factor-2 as a Mediator of Amphetamine-Enhanced Motor Improvement following Stroke.</a> PLoS One. 9, e108031(2014).</li>
<li>Arras, M., Autenried, P., Rettich, A., Spaeni, D., Rulicke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+intraperitoneal+injection+anesthesia+in+mice%3A+drugs%2C+dosages%2C+adverse+effects%2C+and+anesthesia+depth%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Optimization of intraperitoneal injection anesthesia in mice: drugs, dosages, adverse effects, and anesthesia depth.</a> Comp Med. 51, 443-456 (2001).</li>
</ol>

Bu maddede kullanılan mini-ozmotik pompalar üreten DURECT Corporation tarafından sağlanan üretim ve Açık Erişim yayın ücretleri.

Uzun yıllar boyunca, iskemik inme veya travmatik beyin hasarı gibi nörodejeneratif koşulları araştırma akut inme aşamasında nöronal canlılığı teşvik etmeyi amaçlamaktadır nöroprotektif tedavilerin geliştirilmesi üzerine odaklanmıştır. Kliniğe çevrilirken bulunmuştur ilaç tedavilerinin büyük çoğunluğu başarısız kemirgen modellerinde etkili olduğu bulunmuştur. Bu tedavi başarısızlığının nedenleri arasında, ancak fonksiyonel nörolojik iyileşme kalıcı sonuçlanan sürekli ilaç etkileri olmaması sınırlı değildir. Bu uzun vadede beyin yenileme teşvik stratejileri geliştirmek ve böylece önemlidir. Nöronal hayatta kalma promosyon yalnız başarılı inme kurtarma izin vermek için yeterli değildir, çünkü başarısız nöro çalışmaların çok sayıda tarafından önerilen, nöronal plastisite uyarılması son zamanlarda alanında büyük bir ilgi aldı. Ilaç dağıtım olan intraperitoneal enjeksiyon, kuyruk intravasküler i için araçlarnjection femoral enjeksiyon, tek stereotaktik beyin içine vektörlerin enjeksiyon ve mini-ozmotik pompalar ile sabit teslim sürdürdü. Pompa bir kanül yoktur, ya da biz beyne teslimat için gösterdiği gibi, organı yönlendirilmiş edilebildiği takdirde ikincisi, sistemik teslimat içerebilir. Mini-ozmotik pompalar hariç ve viral vektörlerin kullanımı, tüm diğer stratejiler dalgalı ilaç konsantrasyonları neden olacaktır. Uzun süreli deneyler için böylece sıklıkla enjeksiyonlarını alan strese hayvan göndermek için gerekli olur. BBB beyinde terapötik konsantrasyonları elde etmek için büyük bir protein ya da ilaç dozlarına ihtiyaç sonuçlanan kan protein veya ilaçların beyne alınmasındaki için önemli bir engel getirmektedir. Örnek Pellegrini ve diğerleri için. 30 g (300 g bir fare için 750 IU / gün), bir hayvan için 75 lU / gün eşdeğer bir dozda intraperitonal enjeksiyon yoluyla rhEPO teslim (2013) 5. Buna karşılık, rhEp teslim hedeflenenbeyne o bize 0,25 ul / saat sabit bir hızda büyük bir zaman ölçeği üzerinde iyileşme elde etmemizi sağladı başarılı inme kurtarma için çalışmamızda, sadece 10 IU / gün çok daha düşük dozda kullanmak için izin. Bu çalışmada biz, böylece BBB engellemeyi, ventrikül içine doğrudan plastisite teşvik protein rhEPO sunmak için kafatasına bağlı bir kanül mini pompalardan implantasyon yöntemini göstermiştir. Bu yöntem ile, rhEPO enfarktüs boyutunun azaltılması, glial yara oluşumunun azaltılmasına ve anjiyogenez indüksiyonu da dahil olmak üzere, bir dizi yolla, nörolojik düzelme sağlamıştır. rhEPO da nöronal hayatta kalma terfi ve Denerve kırmızı çekirdek ve yüz çekirdekleri karşı contralesional motor korteks gelen projeksiyonlar yükselmiştir. Liflerin filizlenme motor korteks (Şekil 4A ve 5A) içine anterograd yolu izleyici BDA enjeksiyonuyla ortaya çıktı. Liflerin filizlenmesi için fonksiyonel bir korelasyon prmotor becerilerinin geliştirilmesi (Şekil 5B) tarafından ovided. Buna ek olarak, sistem izleyici enjeksiyon için aynı yaklaşım retrograd yolu tracer FG (Şekil 6B) enjeksiyonu ile talamo-kortikal bağlantıları meydana çıkarmak için uygulanabilir olduğunu göstermiştir. Mini-ozmotik pompası hazırlanmasında, hedef noktası ve aralama kullanımını dikkate için kritik öneme sahiptir. Biz birlikte, 0.9 mm yanal, iğnenin çok uç verilen koordinatlarda ventrikül ile temas (-0.2 mm kuyruktaki bu yolla olduğu gibi 0.5mm 2,5 mm dorso ventral iğnenin uzunluğu azaltmak için bir ayırıcı kullanabilirsiniz Bregma saygı). Derin yapılar Araştırmanın hedefi olan ancak, daha sonra hiçbir pullar ihtiyaç duyulacaktır. Daha harici teslim noktası isteniyorsa Benzer şekilde, (yani., Korteks), daha sonra boşluk diskler gerekli olacaktır. Pompa kafasının çok yakın değildir bu yüzden MM&#39;nin hareketlerini engelleyecektir kateter, yeterince uzun olmalıdırse, aynı zamanda çok uzun zaman olduğu gibi bir kez implante aşırı uzunluğu böylece fare doğal hareketi ile kanül çıkarılması riskini artıran, kateter eğilmesine neden olabilir. Kateterin 2 cm bir bölümü hareketlilik ve implantın stabilitesi (Şekiller 1 ve 2) açısından çok iyi sonuçlar vermektedir. 37 ° CO / N pompanın Kuluçka pompa hemen implantasyon anında beyine ilaç pompalamaya başlamanızı sağlar. Mini-ozmotik pompa implantasyonu o kafatası düzgün kanül implante önce kurutulur sağlamak için kritik öneme sahiptir. Genellikle kuru kemik neden olacaktır% 70 Etanol ile temizlik, ama sürekli kanama tespit edilmesi halinde, bir cauterizer hafifçe kafatası dokunmadan tamamen kurur. Bu iğne giriş mümkün olduğu kadar dikey ve yavaş olduğundan emin olmak için önemlidir. Pozisyonda, ve tutkal kururken sonra, kanül üstünde parmak yerleştirme ov yanlara hareket etmesini önlerkafatası er. Özel bakım kanül yara ve yerleştirme verilmelidir. Bu kesi tam kafatasının orta hat üzerinde ama biraz sağ tarafında gerçekleştirilmez önemlidir. Yarayı kapatırken insizyon orta hattında yapıldığı takdirde, cilt ve böylece yara açılması riskini artırarak, overstretched olacaktır. Bir tarafa hafifçe kesi yaparak dikiş noktaları kanül en yüksek kesiminde uzak olmasını sağlayacaktır. Sonuç olarak orada dikiş noktaları daha az gerginlik olacak ve yara düzgün iyileşir. Hayvanlar yalnız kafesli ve özellikle implantasyon sonrası ilk 10-15 gün boyunca, her gün kontrol edilmelidir. Yara açılması durumunda, yaralar kısa sürede kapalı olması gerekir. Kanül çıkarılır veya hayvan enfeksiyon sunarsa, deney sonlandırılır için vardır. Kanülün yeniden implantasyonu tavsiye edilmez. Başarılı implantasyon doku reklamın yeterli miktarda kullanmak için çok önemlidirhesive (çok değil!) bu kemik alçaltır ve kanül çıkarılması riskini artırır olarak. Ancak, aynı zamanda kemiğe bağlı kanül tutmayacağını çok az yapıştırıcı kullanılarak. Mini-ozmotik pompalar Çözücü biyolojik olarak uyumlu olan, bu tek sınırlama olarak, maddelerin çeşitli içinde çözülmüş ilaç taşıyabilir. Buna ek olarak, hacim ufak olacak verilen (200 ul), bir deney için gerekli konsantrasyon uygun olup olmadığını tespit olmalı ve pompa içindeki çökelmesine neden olmaz. Anterograd veya retrograd ya izleyiciler ile izleme Yolu beyin bağlantısı ve plastisite incelemek için çok iyi kurulmuş bir tekniktir. Tek incelemek istediği beyin alanı hedefleme doğruluğunu sağlamak için enjekte dikkatli kullanımı stereotaktik çerçeveler verilmelidir (korteks enjekte ederken, yani korpus kallosum üzerinde enjeksiyon engellemek için). Tüm cerrahi müdahaleler için ve ağrıyı azaltmak için veinflamasyon, hayvanlar müdahaleden sonra üç gün / kg, günde bir kez 4 mg müdahale ve Caprofen önce 0.1 mg / kg Buprenorfin ile tedavi edilmelidir. Sonuç olarak, bu yaklaşım, zamanda beyin plastisitesi çalışmalar için uygun olan bir yöntem temsil yaralı beyinde protein ya da farmakolojik bileşiklerin etkisini incelemek için uygun bir araç sağlar.

Proteinlerin ve farmakolojik bileşiklerin beyne verilmesi, beyin hastalıklarının altında yatan mekanizmaları incelemek ve yeni tedaviler için aday molekülleri değerlendirmek için önemli stratejilerdir 1,2. Deneysel sinirbilimde, plazmitler veya adenovirüsler gibi vektörlerin verilmesi, beyindeki proteinlerin uzun vadeli etkilerini incelemek için önemli bir araç haline gelmiştir 3,4. Tek vektör enjeksiyonları, beyindeki terapötik ajanın kendi başına oldukça stabil seviyelerini koruyacak bir sistemin avantajını sunar 4. Bununla birlikte, saflaştırılmış ilaçlarla yapılan uzun süreli deneyler için, intraperitoneal enjeksiyon yoluyla sistemik uygulama, farelerde veya sıçanlarda strese neden olur ve ayrıca yüksek dozlarda ilaç5 gerektiren, hedeflenen bir beyin tepkisi gerektiğinde en iyi seçim değildir. Miniozmotik pompalar, ilacın verilmesi doğrudan beyinde hedeflenen bir yere ve seçilen pompa modeli tarafından belirlenen sabit bir akış hızında gerçekleştiğinden, hem beyne düşük erişilebilirliği hem de ilaç konsantrasyonunun zirvelerini atlatarak beyne uzun süreli doğrudan ilaç iletimi için ideal bir sistemi temsil eder2,6,7. Gerçekten de bu sistem, rekombinant insan eritropoietin (rhEpo) ve vasküler endotelyal büyüme faktörü 6,7 gibi çeşitli ilaçların verilmesiyle inme sonrası beyin iyileşmesini başarılı bir şekilde incelememize izin verdi. 
Beyin plastisitesi, beyin yaralanmalarına yanıt olarak bağlantıların yeniden kablolanması için gereklidir. Plastisite, sinaptik temasların oluşumu veya ortadan kaldırılması, dendritik dikenlerin büyümesi ve ayrıca uzun mesafeli bağlantıların uzaması veya geri çekilmesinden oluşan geniş bir kavramdır8,9. Beynin daha önce bir lezyondan sonra bağlantıları yeniden yapılandırma yeteneğine sahip olmadığına inanılıyordu. Bununla birlikte, birçok yaklaşım, uygun şekilde uyarılırsa, bağlantıyı yeniden kurabileceğini göstermiştir 6,7,10. Bunu incelemek için özellikle yararlı olan bir teknik, yol izleyicilerinin kullanılmasıdır. Anterograd yol izleyicileri, somadaki nöronlara girebilen ve daha sonra bunlar hedef yapılarına ulaşana kadar aksonlar boyunca dağılabilen bileşiklerdir. İki örnek, kaskad mavisi (CB) ve biyotinile edilmiş dekstran amindir (BDA). Tersine, kolera toksin B (CTB) veya florogold (FG) gibi retrograd yol izleyicileri, akson terminalinden nörona girer ve daha sonra soma'ya geri dağıtılır, böylece enjeksiyon bölgesini hedefleyen nöronların köken bölgesini ortaya çıkarır.
Burada, nöral plastisite üzerinde potansiyel etkileri olan proteinlerin veya ilaçların doğrudan verilmesi için miniozmotik pompaların implantasyonu için kullandığımız yöntemleri ve motor kortekse giriş ve çıkış bağlantılarını ortaya çıkarmak için BDA ve FG enjeksiyonunu sunuyoruz. BDA ayrıca, rhEpo tedavisi altında inme sonrası ko'dan çıkan aksonların artmış plastisitesini göstermek için kullanılan bir yol izleyicinin bir örneği olarak kullanılacaktır.

<table><tbody><tr><td>Alzet miniozmotik pompa. 2004 modeli.</td><td>Alzet</td><td>000298</td><td>İlaç kabı</td></tr><tr><td>Beyin infüzyon kiti 3 1-3 mm</td><td>Alzet</td><td>0008851</td><td>İlaç beyin dağıtım sistemi</td></tr><tr><td>Loctite&nbsp; 454 Prizma jel&nbsp;</td><td>Loctite</td><td>45404</td><td>Kafatasına kanül yapışması için siyanoakrilat yapıştırıcı</td></tr><tr><td>75N cam şırınga&nbsp;</td><td>Hamilton</td><td>87900/00</td><td>Kanal izleyicilerinin enjeksiyonu</td></tr><tr><td>Biotin Dekstran Amin (10.000 MW)</td><td>Moleküler problar</td><td>N-7167</td><td>Anterograd yol izleyici</td></tr><tr><td>Fluorogold</td><td>Fluorochrome, LLC.</td><td></td><td>Retrograd kanal izleyici</td></tr><tr><td>Quintessential Stereotaksik Enjektör (QSI)</td> <td>Stoelting</td><td>53311</td><td>Koordinat belirleme, pompa implantasyonu ve kanal izleyici enjeksiyonu için stereotaktik cihaz.</td></tr></tbody></table>

ozmotik implantasyonu pompalar ve sistem izleyicilerin teslim fizyopatolojik koşullarında beyin reorganizasyon Çalışması için

Implantation of Miniosmotic Pumps and Delivery of Tract Tracers to Study Brain Reorganization in Pathophysiological Conditions

Serebral hastalığın hayvan modellerinde farmakolojik tedavi, hayvanlarda strese neden olabilecek ve ilacın kalıcı olmayan doku seviyelerine neden olabilecek tekrarlanan enjeksiyon protokolleri sorununu ortaya çıkarır. Ek olarak, beyne ilaç dağıtımı, kan beyin bariyeri (BBB) nedeniyle hassastır, bu nedenle sistemik uygulamadan sonra seçici ilaçların intraserebral konsantrasyonlarını önemli ölçüde azaltır. Bu nedenle, hem pik seviyeleri olmadan sürekli ilaç verilmesine hem de BBB'nin atlatılmasına izin veren bir sistem, BBB'ye geçirimsiz olan yeterince yüksek intraserebral ilaç konsantrasyonları elde etmek içindir. Bu bağlamda, miniozmotik pompalar, hayvanlarda günlük enjeksiyon stresi sorununu ortadan kaldıran ve ilaçların doğrudan beyin iletimi için de kullanılabilen, bilinen sabit bir oranda sürekli ilaç dağıtımı için ideal bir sistemi temsil eder. Burada, bu tekniği başarılı bir şekilde uygulamak için hayvanlara verilmesi gereken miniozmotik pompa implantasyonu ve ameliyat sonrası bakım için bir yöntem tarif ediyoruz. Yukarıda bahsedilen deneysel paradigmayı, C57BL6 farelerinin beynindeki nöroplastisiteyi incelemek için kullanılan standart prosedürlere yerleştirdik. Bu nedenle, hayvanları 30 dakikalık beyin enfarktüsüne maruz bıraktık ve plastisite yanlısı bir ilaç vermek için bir kanül aracılığıyla kafatasına bağlanan miniozmotik pompalarla implante ettik. Tedavi süresinin 30 günü boyunca davranış testi yapıldı. Çıkarıldıktan sonra, hayvanlara, iyileşmenin kronik fazında nöronal plastisiteyi analiz etmek için anterograd sistem izleyicileri enjeksiyonları yapıldı. Sonuçlar, verilen ilacın nöroproteksiyonuna, hedef yapılarda beynin orta hattını geçen motor liflerde artışın eşlik ettiğini gösterdi. Sonuçlar, modern sinirbilimde ilaç uygulaması ve beyin plastisitesi çalışmaları için bu tekniklerin değerini doğrulamaktadır.

Biz 3 gün sonra başlayan 30 gün boyunca ozmotik pompalar (Şekil 1, Şekil 3) vasıtasıyla doğrudan beyne rhEPO teslim sonra sol striatum lezyon ve uyaran intraluminal sütür yöntemiyle orta serebral arter tıkanıklığı 30 dakika hayvanların teslim strok 6. Şekil 4 CB ve BDA enjeksiyonu ve izleyiciler enjekte edildi alana sonrasında takip edildi kortiko spinal kanalın şemasını göstermektedir. Biz sırasıyla rhEPO teslimat 14 ve 42 gün sonra kavrama gücü ve motor performansı (Şekil 5) bir iyileşme gösterdi. Sol striatum bir inme alınan hayvanların sağ motor korteksin içine BDA teslim olarak lifleri çimlenme başarılı boyama gösteren kırmızı ve yüz çekirdek düzeyinde orta çizgiyi motor lifler bir artış (Şekil 5) gösterdi miniosmot ile farmakolojik bir tedavi sonucuic pompalar. rhEPO tedavisi de yaygın astrositoz gecikmiş nöronal hayatta kalma artmış glial skar oluşumu azalır ve çalışılan dönemde 6 anjiyogenez arttı. Yolu izleyici enjeksiyon için aynı tekniği kullanarak başarılı retrograd yolu izleyici FG enjeksiyonu (Şekil 6) tarafından korteks bağlı talamik çekirdekleri algılayabilir. <img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/52932/52932fig1.jpg" /> Şekil Bu protokolde kullanılan mini-ozmotik pompa 1. Bileşenleri. Aralama disk, kanül ve çıkarılabilir sekme, kateter, akış moderatör ve mini-ozmotik pompa görülebilir. Tam olarak monte pompa yönü Şekil 2A görülebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52932/52932fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> ithin-page = &quot;1&quot;&gt; <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52932/52932fig2.jpg" /> Pompa implantasyonu kilit noktaları 2. Özeti Şekil. Yanında tam olarak inşa, mini-ozmotik pompa ile stereotaktik cihaz yerleştirilir (A), fare gösterilmiştir. Ok implantasyonu için seçilen koordinatları gösterir. (B) pompa hayvanın sırtında tanıttı ve sadece kanül dış yüzeyinde kalır edilmiştir. İmplantasyondan sonra baş kafatası önceden delinmiştir. (C) boy. (C.1) kanül konumuna ancak çıkarılabilir sekme kesilmiş edilmemiştir. (C.2) çıkarılabilir sekme kesilmiş ve dikiş arasında olmuştur Yara hemen başlayabilir. (D) yıldız 30 gün implantasyon (#) sonra, bir hayvan ile karşılaştırıldığında, bir son implante hayvan gösterir. Doğru yer zaman görüntüde gösterildiği gibi, yara prosedürü sonuna kadar kapalı kalmalıdır.ove.com/files/ftp_upload/52932/52932fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52932/52932fig3.jpg" /> Şekil 3. korteks üzerinde implantasyon siteyi gösteren Nissl boyama. Küçük bir kesi, sol korteks (ok) kısmında görülebilir. Nüfuz alanının genişliği yaklaşık 50 mm. Karşılık gelen karşı taraftaki bölgede (*) ile karşılaştırıldığında Nissl boyama göre belirgin bir ciddi doku değişiklikler vardır. R: Sağ hemisfer. L: Sol yarım küre. Ölçek çubuğu = 300 mikron. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52932/52932fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52932/52932fig4.jpg" /> Şekil 4. YoluReitmeier ve ark., 6,7 ile daha önce yayınlanmış olan izleyici enjeksiyon stratejisi. (A) CB ise kontralateral motor korteks de yolu izleyici BDA için şematik belirten enjeksiyon siteleri enfarkte yarımkürenin motor kortekste enjekte edildi. Lifler gösterilen kırmızı çekirdeğe (gösterilmemiştir) ve yüz çekirdeğe (Şekil 5). (B) aşağıdaki motor korteks anterograd yolu izleyici BDA enjeksiyon site takip edildi. Siyah ok BDA etiketli birkaç kortikal hücreler gösterir, oysa iğne izi gösteren kırmızı ok unutmayın. Cx: Cortex. CC: Korpus kallosum. V: Ventrikül. FN: Sakal çekirdeği. B Ölçek çubuğu = 200 mikron. Şekil 4A tür izni 6 çoğaltılamaz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52932/52932fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt = &quot;Şekil 5&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52932 / 52932fig5.jpg&quot; /&gt; RhEPO doğum sonrası enfarkte beyin Şekil 5. Kurtarma. (A) BDA contralesional motor korteks enjekte daha sonra yüz çekirdeğin seviyesinin (bregma -5.8 mm -6,3 mm) kortikobulbar lifleri tespit edilir. Her bir yarım küre üzerinde kesişme hatları orta hat ve ipsilesional ve contralesional yarımküre yönünde her satırı geçen liflerin paralel çizildi sayılır ve kortikospinal sistem toplam etiketlenmiş liflerin yüzdesi olarak ifade edildi. Araçlar + Eritropoietin contralesional yüz çekirdek Veri yönünde lif geçişleri arttı vardır - SD. Veriler en az önemli farklar testleri, §P &lt;0.05 araçla tedavi edilen iskemik olmayan fareler ile karşılaştırıldığında. (B) motor davranışı rota çubuk testinde el kavrama gücü ve koordinasyon bir iyileşme göstermiştir ve ardından tek yönlü ANOVA ile analiz edilmiştir. Veriler ortalama valu vardıres + - SD. Veriler, her zaman noktası için tek yönlü ANOVA / en az önemli farklar testleri, ardından iki tekrarlı ölçümler ANOVA ile analiz edilmiştir. §P &lt;pre-iskemik başlangıca kıyasla 0,05; * P araçla tedavi iskemik farelere kıyasla &lt;0.05. 5A ve B tür izni 6 ile yeniden üretilir Şekil. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52932/52932fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/52932/52932fig6.jpg" /> Şekil 6. Hedef yapıları Fluorogold (FG) enjeksiyonundan sonra ulaştı. (A) motor korteksin yanında FG enjeksiyon sitesi Şekil 1&#39;de gösterildiği gibi. İğne parça ve birkaç etiketli hücreleri gösteren beyaz ok gösteren kırmızı ok Not Korteks. (B) FG motora yakın enjektekorteks VPL saptanır. Fi: fimbria. IC: İç kapsül. RT: Talamik retiküler nükleus. VPL: Talamik ventral posterolateral çekirdek. Ölçek çubuğu = 200 mikron. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52932/52932fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Patolojik koşullar altında beynin yeniden düzenlenmesini incelemek için, kan beyin bariyerini atlayarak beyne doğrudan protein iletimi için miniozmotik pompalar kullandık. Daha sonra proteinin etkisi altında beyin bağlantısındaki değişiklikleri incelemek için kanal izleyicileri enjekte edilir.

Ozmotik implantasyonu Pompalar ve Sistem izleyicilerin teslim fizyopatolojik Koşullarında Beyin Reorganizasyon Çalışması için

Pharmacological treatment in animal models of cerebral disease imposes the problem of repeated injection protocols that may induce stress in animals and ...

Bu prosedürün genel amacı, beyne terapötik ajanlar iletmek için mini ozmotik pompaları implante etmek ve ardından kortikospinal traktus iletkenliğindeki modifikasyonları incelemek için traktus izleyicileri iletmektir. Bu yöntem, potansiyel terapötik ajanların varlığında merkezi sinir sistemi içindeki uzun mesafe bağlantılarının nasıl değiştiği gibi nörorestoratif araştırma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajı, terapötik ajanın sürekli iletiminin sonuçların tekrarlanabilirliğini sağlaması, traktus izleyicilerinin ise uzun mesafe bağlantılardaki morfolojik değişiklikleri takip etmek için oldukça güvenilir ajanlar olmasıdır.Genel olarak, bu yöntemlerde yeni olan kişiler, çeşitli müdahaleler sonucunda beyin hasarını önlemek için hassasiyet ve cerrahi beceriler temel gereksinim olduğundan zorluk yaşayacaklardır. Prosedürü, Profesör Hammond'un laboratuvarından lisansüstü öğrencisi Jeismar Carballo ile birlikte göstereceğim. Mini ozmotik pompanın steril bir ortamda hazırlanmasıyla başlayın.İlk olarak, beyin infüzyon kanülünü ters tutmak için pens kullanın. Ardından, iki damla siyanoakrilat yapıştırıcı ekleyin ve ventriküle ilaç iletimi için bir ara disk yerleştirin. Sonrasında, kateteri 2,5 santimetre uzunluğunda kesin ve dikkatlice akış modülatörüne bağlayın.Ardından, hava kabarcığı oluşumunu önlemek için, pompa ucundan az miktarda solüsyon çıkana kadar pompayı doldurmak üzere iğneye bağlı 2 milliliter'lık bir şırınga kullanın. Şimdi, kateterin içinde kabarcık kalmadığından emin olarak akış moderatörünü ve kateteri dikkatlice doldurun. Daha sonra, akış moderatörünü pompanın içine yerleştirin.Doldurulduktan sonra, kanülü dikkatlice kateterin ucuna bağlayın, ardından pompayı steril salin solüsyonu içeren bir kaba yerleştirin ve gece boyunca 37 °C'de bekletin. Hayvana onaylanmış protokoller uyarınca anestezi uygulayıp arka pençe sıkıştırma testiyle anestezinin gerçekleştiğini doğruladıktan sonra, hayvanı stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin. Kurumayı önlemek için gözleri koruyucu pomadla kapatın.Ayrıca, baş üzerindeki tüyleri cilde mümkün olduğunca yakın olacak şekilde kesin ve cildi %70 etanol ile antibakteriyel ve fungusid özelliklere sahip bir dezenfektanla temizleyin. Orta hattın hafifçe sağında 1 santimetrelik bir insizyon yapmak için neşter kullandıktan sonra kafatasını açığa çıkarın ve %70 etanolle ıslatılmış pamuklu bir çubukla temizleyin. Bregma üzerindeki stereotaksik kolu ayırdıktan sonra, ventrikülü hedeflemek için stereotaksik kolu ilgili koordinatlara taşıyın.Kafatası üzerindeki bu noktayı işaretleyin. Beyne yanlışlıkla zarar vermeyi önlemek için matkabı 45 derecelik açıyla tutarak kafatasını bu noktadan nazikçe delin. Birkaç saniye boyunca tekrarlı delme işlemleri yapın ve ardından deliğin derinliğini kontrol edin.Kafatası inceldiğinde ancak henüz tamamen delinmediğinde delme işlemini durdurun, ardından beyne erişim netleşene kadar steril bir iğnenin ucuyla meningesleri yırtın. Daha sonra, düz pensleri hayvanın derisinin altına anterokaudal yönde yerleştirin ve pompanın implante edileceği hayvanın sırtındaki deri altı boşluğunu açmak için pensleri kullanın. Kateteri ve kanülayı dışarıda bırakacak şekilde pompayı hayvanın sırtına yerleştirin.Kanülün iğneye yakın kısmına dikkatlice dört küçük damla yapıştırıcı sürün. Şimdi, iğneyi yanlara doğru oynatmadan dikkatlice kafatası boyunca ilerletin. Kanül tamamen yapışana kadar 15 ila 30 saniye boyunca pozisyonda tutun.Pompa iğnesini yerleştirirken nazik ve hassas olmak ve kanülün, hayvan tarafından yerinden çıkarılmadan iletim süresini tamamlamasını sağlamak için kafatasına düzgünce sabitlendiğinden emin olmak önemlidir. Ardından, çıkarılabilir sekmenin üzerine bir parmağınızı yerleştirin ve dar kısmından kesmek için makas kullanın. Son olarak, insizyonu beş sıfır sütürle kapatın ve kapatılan insizyonu povidon-iyot çözeltisi ile dezenfekte edin.Hayvanı temiz bir kafese alın ve sternal rekumbensi geri kazanana kadar izleyin. İlaç uygulaması sırasında hayvan tek başına barındırılmalıdır. Hayvanı daha önce yapıldığı gibi hazırlayıp, anestezi uygulayıp stereotaksik çerçeveye yerleştirdikten sonra, pompa implantasyonu için kullanılan insizyon yerinden keserek cildi açın, ardından kanülü cerrahi bir klemple tutarak gösterildiği gibi dışarı çekin.Kafatasından kolayca çıkarılmalıdır. Pamuk uçlu bir çubuğu bölgeye bir ila iki dakika boyunca bastırarak kanamayı durdurun. Kateteri kavrayın ve kateteri çekerken aynı anda pompayı iterek pompayı çıkarın.Pompa çıkarıldıktan sonra, yarayı daha önce yapıldığı gibi kapatın ve birkaç damla povidon-iyot uygulayın. Hayvanı temiz bir kafese aktarın ve hareketli hale gelene kadar takip edin. Mini ozmotik pompanın çıkarılmasından on gün sonra, hayvanı anestezi altına alın, stereotaksik çerçeveye yerleştirin ve kafa yarasını açın.Kafatası %70 etanol ile temizleyin. Beş µL'lik cam şırıngayı stereotaksik cihazın dikey tutucusuna uygun şekilde yerleştirin. Şırıngayı doğrudan bregma üzerine hizalayın ve motor kortekse enjeksiyon yapmak için istenen koordinatlara ilerletin.Bu noktayı ince uçlu bir markör ile işaretleyin. Ardından, şırıngayı ikinci noktaya getirin ve bu noktaya küçük bir işaret koyun. Matkabı 45 derecelik bir açıda tutarak kafatasını her iki noktadan dikkatlice delin.Kafatası tamamen delinmemelidir; kemiğin son kısmını çıkarmak için bir iğne ucu kullanın. Şırıngaya 600 nanolitre izleyici yükleyin. Ardından, iğnenin konumunu kafatasının sağ tarafında 45 derecelik bir açıya göre ayarlayın.Cerrahi mikroskop altında bakarken, iğnenin ucunu tam deliğin önüne getirin ve ardından iğneyi beyne 1,5 milimetre derinliğe kadar yerleştirin. Gösterilen hız yalnızca demonstrasyon amaçlıdır. Normalde, her 0,5 milimetrelik adım arasında 30 saniye bekleyin.İğnenin 30 saniye ila bir dakika boyunca yerinde kalmasına izin verin. Gördüğünüz üzere, trakt izleyici enjeksiyonu sırasında iğne penetrasyonu, bireyler arasında kafa karıştırıcı sonuçlara yol açabilecek yanlış alanların hedeflenmesini önlemek için mantodan yapılır. İğnenin yavaşça çıkarılması, izleyicinin geri akışını önleyecektir.Ardından, her bir adım arasında 30 saniyelik aralıklar olacak şekilde, 300 nanolitre izleyiciyi üç adet 100 nanolitrelik adımda enjekte edin. Son enjeksiyondan sonra, şırıngayı yavaşça geri çekmeden önce 30 saniye ile bir dakika arasında şırınganın yerinde kalmasını sağlayın. Şırınganın ucunu ikinci deliğin üzerine konumlandırın.İğneyi daha önce olduğu gibi yerleştirin ve ardından şırıngada kalan 300 nanolitre ile enjeksiyonu tekrarlayın. İkinci enjeksiyondan sonra şırıngayı geri çekin ve yarayı beş sıfır sütürle kapatın. Hayvanı tekrar temiz bir kafese yerleştirin ve barınma odasına geri götürmeden önce anestezikten ayılana kadar izleyin.Sol striatumda lezyon oluşturmak amacıyla hayvanlara 30 dakika boyunca orta serebral arter oklüzyonu uygulandı. Üç gün sonra, mini osmotik pompalar aracılığıyla 30 günlük bir süre boyunca rekombinant insan eritropoietini verildi. Enfarktlı hemisfer ile kontralateral hemisferlere sırasıyla cascade blue ve biyotinize dekstran amin enjekte edildi.Lifler fasyal çekirdeğe kadar takip edildi. Kontralezyonel motor kortekse enjekte edilen biyotin dekstran amin, kortikobulber liflerde tespit edildi. İpsilezyonal ve kontralezyonel hemisferlere giden lifler sayıldı ve kortikospinal traktattaki toplam etiketli liflerin yüzdesi olarak ifade edildi.Eritropoietin, kontralezyonel fasiyal çekirdeğe doğru olan lif çaprazlamalarını artırmıştır. Rekombinant insan eritropoietin infüzyonunun ardından, el kavrama gücündeki motor davranışın iskemik öncesi bazal seviyeye kıyasla iyileştiği görülmüştür. Rotarod testi ile değerlendirilen motor koordinasyon da rekombinant insan eritropoietin infüzyonundan sonra gelişme göstermiştir.Bu teknik bir kez kavrandıktan sonra, düzgün bir şekilde uygulandığı takdirde cerrahi prosedür başına 30 dakikadan kısa sürede tamamlanabilir. Bu prosedür gerçekleştirilirken, beyin enfeksiyonlarını önlemek için pompa hazırlığı ve cerrahi sırasında yeterli sterilizasyonun sağlandığından emin olmak önemlidir. Anterograd ve retrograd trakt izleyicilerin kullanımı, beynin hem sağlıklı hem de hastalıklı durumdaki bağlantısallığının anlaşılmasını sağlayan güvenli ve düşük maliyetli bir yaklaşımdır.Bu videoyu izledikten sonra, mini ozmotik pompaların nasıl implante edileceği ve çıkarılacağı veya trakt izleyici enjeksiyonlarının nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

implantation-miniosmotic-pumps-delivery-tract-tracers-to-study-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Nörobilim soruşturma hale geldikçe, daha sofistike, beyin yapılarının incelenmesi ve devreleri, doğruluk ve daha yüksek çözünürlük gelişmiş düzeyde gerektirir. Biz bir ucu çapı 50 mikron ile borosilikat mikrokanül kullanarak beynin içinde kronik bir infüzyon sistemi hazırlanması ve implantasyon için bir yöntem geliştirdiler.

Nöroaktif Acenteleri Sürekli teslim için bir mikroinfüzyon Sistemi İnşaat ve İmplantasyon.

In vivo biyolüminesans ve manyetik rezonans görüntüleme (i) ve (ii) post mortem histolojik analiz: Bu makale ile kemirgen beyinde hücresel greft multimodal görüntüleme için optimize edilmiş olaylar dizisi anlatılmaktadır. Tek bir hayvan bu görüntüleme yöntemleri birleştirerek, yüksek çözünürlüklü, duyarlılık ve özgüllük ile hücresel greft değerlendirilmesine olanak tanımaktadır.

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

Bu videoda, bir mikro-ozmotik pompa beyin infüzyon sisteminin montajını ve ardından fare kafatasına cerrahi implantasyonunu gösteriyoruz. Bu sistem, potansiyel ilaçların sürekli olarak verilmesini sağlar ve bunların beyin ve beyin dokusu üzerindeki etkilerinin incelenmesini kolaylaştırır.

Fare Modelinde Sürekli İlaç İnfüzyon Sistemi: Sürekli İlaç Dağıtımı için Fare Beynine Mikro-ozmotik Pompa İnfüzyon Sistemini İmplante Etmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Kaynak: Wang, X. et. al., Merkezi Sinir Sistemi Üzerine In Vivo Remiyelinasyon Araştırması için Ozmotik Pompa Tabanlı İlaç Dağıtımı. J. Vis. Uzm. (2021)Bu video, demiyelinize bir fare modelinde ozmotik bir pompa kullanarak nöroterapötik ilaçların verilme yöntemini göstermektedir. Kontrollü ilaç salınımı, korpus kallozumdaki miyelin üreten hücreleri aktive ederek remiyelinizasyonu teşvik eder.

 Demiyelinize Fare Modelinde Ozmotik Pompa Bazlı Nöroterapötik İlaç Dağıtımı

Burada optik temizleyerek, ve kemirgen beyin dokusunda kronik implante Mikrocihazlarda çevresindeki görüntüleme sağlam beyin dokusuna arayüzü, etiketleme, yakalamak için bir histolojik yöntem sunuyoruz. Bu yöntem oluşan tekniklerden elde edilen sonuçlar, çevreleyen doku ile ilgili çeşitli nüfuz edici beyin-implant etkisini anlamak için yararlıdır.

Beyin-implante Microdevices ve Çevresi Doku Bozulmamış Histolojik Karakterizasyonu

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için Microfil ile İskemik arka ayaklarında ve damarları bir Perfüzyon için osmotik İlaç Taşıyıcı

Bir cerrahi yöntem, yeni doğmuş sıçanlarda ventral kafatasını açığa çıkarmak için tarif edilmektedir. Bu yaklaşımı kullanarak bu anestezi yavruların beyin sapı akut elektrofizyoloji ve iki-foton mikroskopi deneylerini gerçekleştirmek için bir kraniotomi açmak mümkündür.

Yenidoğan Kemirgenlerin Ventral Kafatası kranyotomi olun Bir Yöntem

Bu iletişim kuralı bir antagonisti, MetCCL5, bir mikro-ozmotik pompa beyin infüzyon sistemi kullanarak fare beyin içine sunarak Kemokin (C-C motifi) ligand 5 (CCL5) üzerindeki rolünü inceliyor. CCL5 faaliyet geçici bu inhibisyon sinyal, glukoz intoleransı ve periferik sistemik insülin duyarlılık için lider hipotalamik insülin kesildi.

Hipotalamik insülin sinyal fare beyin içine sürekli uyuşturucu infüzyon sistemi ile periferik glikoz intoleransı için eğitim

Konveksiyon-geliştirilmiş teslimat (CED) büyük doku hacimleri doğrudan perfüzyon ile beyin içine terapötik etkili teslim sağlayan bir yöntemdir. Prosedür kateterler ve optimize enjeksiyon prosedürü kullanımı gerektirir. Bu protokol, bir antikor, bir fare beyninde CED için bir metodoloji açıklanmaktadır.

Konveksiyon ile Murine beyin içine antikorların teslimi-gelişmiş teslimat

Demiyelinasyon çoklu santral sinir sistemi hastalıklarında görülür. Remiyelinizan ilaç testi için güvenilir bir in vivo ilaç dağıtım tekniği gereklidir. Bu protokol, uzun süreli ilacın doğrudan beyin parankimine verilmesine izin veren ve remiyelinasyon araştırmalarında geniş bir uygulama ile ilaç biyoyararlanımını geliştiren ozmotik pompa bazlı bir yöntemi tanımlamaktadır.

Merkezi Sinir Sistemi Üzerine In Vivo Remiyelinasyon Araştırması için Ozmotik Pompa Bazlı İlaç Dağıtımı

Bu makalede, farelerin beyin omurilik sıvısındaki (BOS) glikoz konsantrasyonunu arttırmak için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, yüksek BOS glikozunun farelerde nörodejenerasyon, biliş ve periferik glikoz metabolizması üzerindeki etkilerini incelemek için yararlı olabilir.

Fare Beyin Omurilik Sıvısında Glikoz Konsantrasyonunu Artırmak için Ozmotik Minipump İmplantasyonu

Öğrenin mini-osmotik pompaları beynin fizyopatolojik koşullarda reorganizasyonunu incelemek için nasıl implante edilir. Bu yöntem, tedavi ajanlarının sürekli iletimi ve beyin bağlantılarındaki değişikliklerin izlenmesi için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Ozmotik implantasyonu Pompalar ve Sistem izleyicilerin teslim fizyopatolojik Koşullarında Beyin Reorganizasyon Çalışması için

Daha fazla video keşfet