Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

Aşağıdaki deneyin genel amacı, optik sinirdeki demiyelinizasyonu in vivo olarak izlemektir. Bu, önce görsel korteks üzerine mikro elektrotların implante edilmesiyle elde edilir. İkinci adım olarak lyin, optik sinire mikro enjekte edilir ve bu da demiyelinizasyonun fokal bir lezyonunu indükler.

Daha sonra görsel olarak uyarılmış potansiyel kayıtlar yapılabilir. Sonuç olarak, regresyon analizi, görsel olarak uyarılan olası gecikme gecikmesi ile hacim arasında güçlü bir doğrusal korelasyon olduğunu gösterir. Bu video, sıçanlardan görsel uyarılmış potansiyelleri kaydetme tekniğimizi gösterecektir.

İmplante edilmiş kafatası elektrotlarını kullanarak, bir mikroenjeksiyon tekniği kullanarak optik sinirin fokal demiyelinizasyonu için bir teknik de göstereceğiz. Tüm deneyler burada, Macquarie Üniversitesi Tıp Fakültesi'ndeki laboratuvarımızda gerçekleştirilmektedir. Teknik, doktora öğrencimiz Nitin Chichi tarafından gösterilecektir Ameliyata başlamadan önce intraperitoneal ketamin ve meine enjeksiyonu ile 12 haftadan daha eski yetişkin bir sıçanı uyuşturmaya başlamak.

Geri çekilme reflekslerinin olup olmadığını kontrol edin. Ameliyat sırasında hayvana geri dönmesi gereken herhangi bir refleksle başa çıkmak için gerektiği gibi% 10 dozda ketamin uygulamaya hazır olun. Daha sonra, cerrahi bölgedeki cildi tıraş edin ve ardından hazırlıkları tamamlamak için hayvanı bir ısı yastığına yerleştirin.

Cildi povidon iyot ile ovalayın, hayvanı örtün ve oftalmik merhem sürün. Ayrıca, steril aletler kullanarak asepsisi koruduğunuzdan emin olun. Ameliyata başlamak için başın orta hattında uzunlamasına bir cilt kesisi yapın.

Ardından, kafatasının iyi bir şekilde ortaya çıkması için bağ dokusunu temizleyin. Daha sonra, bir mikro el matkabı kullanarak, bgma'nın yedi milimetre arkasına ve orta hattın üç milimetre yanına ait küçük frez deliklerini dikkatlice deliklere yerleştirin. Kafatasından ve kortekse yaklaşık 0,5 milimetre vida elektrotları yerleştirin.

Daha sonra orta hatta, gerektiğinde bgma'ya üç milimetre rostral olacak şekilde bir referans vida elektrodu implante edin. Vida elektrotlarını kaplamak ve sabitlemek için diş çimentosu uygulayın. Son olarak, cildi kapatın.

Elektrotlar açıkta bırakılabilir, böylece cildin her kayıt için yeniden açılmasına gerek kalmaz. Şimdi, hayvan anesteziden iyileşmeden önce steroid olmayan bir antienflamatuar ilaç veya nsaid veya bir opioid analjezik uygulayın. Bitirmek için cilde antibiyotik bir merhem uygulayın.

Hayvanı bir ısıtma pedi ile bir kurtarma kafesine koyun ve tamamen yürüyene kadar sürekli izleyin. Ardından en az bir hafta iyileşmesine izin verin. VEP kayıtlarını yapmadan önce, hayvanı daha önce tarif edildiği gibi ameliyata hazırlayın ve ince iris makası ile gözü yörüngesinin üzerinde bir ila 1,5 santimetrelik bir cilt kesisi yapın.

Deri altı dokusunu açın ve orbital boşluğa erişin. Sonra bir stereoskop altında konjonktiva ve ön tendon kapsülünü açın. Ardından, ekstraoküler kasları ve intraorbital lakrimal bezleri geri çekin.

Optik sinirin etrafındaki optik sinirin yaklaşık üç milimetresini açığa çıkarmak için, dura ve araknoid madde katmanlarını uzunlamasına açmak için bir oftalmik bıçak kullanın. Daha sonra bir Hamilton şırıngayına bağlı bir cam mikro pipeti, dünyanın iki milimetre gerisindeki sinirin içine yerleştirin. 30 saniyeden fazla, prosedürü tamamlamak için boya ile bir bolus lyin enjekte edin.

Cilt kesisini dikin. Enfeksiyonu önlemek için antibiyotik merhem sürün. Hayvanı bir ısıtma pedine taşıyın ve iyileşene kadar izleyin.

Hayvanı uyuşturduktan ve cildi daha önce olduğu gibi hazırladıktan sonra, oradaki karanlık bir odaya aktarın. Karanlıkta izlenirken bir homeo temalı battaniye sistemi ve bir sıcaklık probu kullanarak vücut ısısını yarım derece 37 santigrat derece içinde tutun. Hayvanı beş ila 30 dakika boyunca uyarlayın.

Yarım saat sonra göz bebeklerini %1 tropik IDE göz damlası ile genişletin. Sonra makas ve forseps kullanarak. Kafatasının üzerindeki cildi açın ve önceden yerleştirilmiş NC iki vidalı elektrotlara erişin.

Vidaları empedans ölçere bağlayın. Ardından elektrot empedansını beş kilo ohm'un altında ölçün ve koruyun. Şimdi vidayı uyarılmış gözün kontralateral görsel korteksinin üzerine bağlayın.

Ardından, zemini yüzeye çıkarmak için kuyruğa bir iğne elektrodu yerleştirin. Şimdi göz izolasyonunu iyileştirmek için göz kapaklarının etrafındaki cilde kalibre edilmiş bir mini ganzfeld stimülatörü yerleştirin. Ardından, bir hertz'de düşük geçiren filtre ve yüksek bant geçişi ile bir hertz'de 100 flaş kullanarak fotik stimülasyon sağlayın.

100 hertz'de filtreleyin. Tamamlandıktan sonra cildi kapatın ve anesteziden kurtulmak için hayvanı bir ısınma pedi üzerinde tutun. Haftada birkaç ila birkaç haftada bir arasında tekrarlanan kayıtlar mümkündür.

Şefaat, VEP izleri, N bir gecikmede önemli bir gecikme olduğunu göstermektedir. Optik sinir enjeksiyonundan sonra, tekrarlanabilirliği göstermek için günlük olarak kayıtlar alındı. Demiyelinizasyonun parsiyelyen optik sinir lezyonları, luxal fast blue ile boyanmış doku kesitlerinde görülebilir.

Lezyon hacmi ölçüldükten sonra, gecikme gecikmesi ile lezyonun boyutu arasındaki korelasyon belirginleşti. Bu teknik, optik sinirde lezyonları indüklemek ve bu lezyonları VP'deki değişikliklerle ilişkilendirmek için kullanılabilir, fokal demiyelinizasyon modeli olarak kullanılabilir. İndüklenen lezyon boyutu oldukça değişken olduğundan, değişiklikleri histolojik olarak ilişkilendirmek önemlidir.