Name: Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda optik sinir demyelinizasyonunu izlemek için görsel uyarılmış potansiyel kayıt yöntemini. Bu protokol, kafatası elektrotları ve mikroenjeksiyon kullanarak odak lezyon oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Avustralya Oftalmik Araştırma Enstitüsü (ORIA) tarafından desteklenmiştir. Biz başlangıçta VEP kayıt tekniğini geliştirmek için bize yardımcı olduğunuz için Prof. Algis Vingrys Dr. Bang Bui, University of Melbourne teşekkür ederim.

Etik Beyanı: hayvanlarla ilgili tüm işlemler Bakım ve Bilimsel Amaçlarla Hayvanların Kullanımı ve Oftalmik ve Vizyon Araştırma Hayvanların Kullanım ARVO Tablosu kılavuzlar için Uygulama Avustralyalı Kanunu&#39;na göre yapılmıştır ve ile kabul edildi Macquarie Üniversitesi Hayvan Etik Kurul. 1. VEP Elektrot İmplantasyonu <ol><li> Bir intraperitonal ketamin enjeksiyonu (75 mg / kg) ve medetomidin (0.5 mg / kg) ile hayvan anestezisi. Anestezi indüksiyonu takiben ameliyat başlamak için bir gösterge olarak çekilme refleksler (tutam testi, korneal ve palpebral refleks, vb) ve bunların yokluğu dikkat: Not. Sürekli ameliyat boyunca hayvanları izlemek ve refleksleri varsa ek anestezik ilaç (kontör başına ilk ketamin dozunun% 10) yönetmek. Yetişkin sıçanlarda (&gt; 12 haftalık) deneylerde kullanılır. </li><li> Cerrahi alanın cildi tıraş.Ameliyat sırasında vücut sıcaklığının muhafaza edilmesi için bir ısıtma pedi (37 ° C) hayvan yerleştirin. Povidon-iyot topikal uygulama sayesinde cildi hazırlayın. Cerrahi dökümlü uygulayın. Genel anestezi altında kornea kuruluğunu önlemek için topikal oftalmik merhem sürün. Steril aletler kullanarak asepsi koruyun. </li><li> Kafa derisinin orta hat üzerinde uzunlamasına bir cilt kesi olun. Kafatasının iyi pozlama elde etmek için bağ dokusu temizleyin. </li><li> Dikkatle, el bregma arkasında 7 mm ve orta hatta 3 mm yanal bir mikro el matkabı kullanarak küçük çapak delik. </li><li> Yaklaşık 0.5 mm&#39;lik bir derinliğe kadar korteksi penetre korteks (bölge 17) içerisine kafatası yoluyla implant vidalı elektrotlar. Bregma orta hat, 3 mm rostral bir referans vida elektrot implante. Vidaları örtmek ve düzeltmek için diş çimento uygulayın (her zaman gerekli değildir). </li><li> Reco hayvan, baş derisini dikin cilde antibiyotik merhem yönetmek ve izinver bir ısınma pad üzerinde anesteziden. Not: Alternatif olarak, elektrotlar maruz sol olabilir, bu cilt, her kayıt yeniden açılması gerekmez böylece. Ameliyattan hemen ancak önceden anestezi kurtarma kesilmesiyle, bir steroid olmayan anti-enflamatuar ilaç (NSAID), (eğer Ameliyat öncesi tatbik) veya bir opioid analjezik uygulayın. Anestezi ve tamamen ayaktan tam iyileşme kadar sürekli hayvanların izleyin. </li><li> Hayvanlar ameliyat öncesi VEP kayıt kurtarmak için en az 1 hafta izin verin. </li></ol> 2. Optik Sinir Enjeksiyon <ol><li> , Hayvan anestezisi cildi hazırlar ve (1.1 ve 1.2) yukarıdaki gibi dökümlü uygulayın. </li><li> Rasgele seçilen bir göz yörüngede üzerinde deri bir 1- 1.5 cm kesi olun. İnce iris makas kullanarak yörünge boşluğuna ulaşmak için deri altı doku açın. Konjonktiva açın ve işletim mikroskop altında Tenon kapsülü anterior. </li><li> Ekstraokuler geri çekinkas ve intraobital gözyaşı bezleri optik sinirin yaklaşık 3 mm uzunluk ortaya çıkarmak. Uzunlamasına bir göz bıçak kullanarak optik sinir etrafında dura ve araknoid madde katmanları açın. </li><li> Dünyanın 2 mm&#39;lik posterior mesafeden optik sinir içine cam pipet yerleştirin. cam mikropipet Hamilton şırınga takılır. </li><li> Yaklaşık 30 saniyelik bir süre boyunca sinir yavaşça - (miyelinasyon üzerinde etkiye sahip değildir% 0.02 Evan Mavisi ile, 1.0 ul 0.4),% 1 lisolesitin enjekte edilir. </li><li> Cilt kesisi dikin. Enfeksiyonu önlemek için antibiyotik merhem sürün. Fellow gözler elektrofizyoloji kayıtları için iç kontroller olarak servis edilebilir. </li><li> Anestezi kurtarmak için bir ısınma pad üzerinde hayvanları yerleştirin. </li></ol> 3. VEP Kaydı <ol><li> Hayvan anestezisi ve 1.1 ve 1.2 olarak cildi hazırlar. Not: anestetiklerin daha düşük doz elektrofizyolojik reco için kullanılabilirrding (ketamin 40 mg / kg ve 0.25 mg / kg medetomidin). </li><li> Karanlık bir odada sıçan yerleştirin ve 5 için karanlığa uyum sağlayacak - 30 dakika. Bazı durumlarda fareler sırasıyla Fotopik VEP kayıtları 8 için uyarlanmış scotopic veya ışık karanlık adapte O / N olabilir. </li><li> Rektal termometre probu ile homoeothermic battaniye sistemi tarafından 37 ± 0.5 ° C&#39;de vücut ısısını korumak. </li><li> % 1.0 tropikamid göz damlaları ile öğrencileri dilate. Erişmek için kafatası üzerindeki deriyi açıp önceden yerleştirilmiş in situ vida elektrotlar. </li><li> Uyarılmış gözün kontralateral görme korteksine ve amplifikatör referans vida üzerine vidayı takın. Zemin olarak kuyruk içine bir iğne elektrot yerleştirin. Tedbir ve 5 kohm altında elektrot empedansı korumak. </li><li> Üstün göz izolasyonu 7 sağlamak için göz kapaklarının etrafında cilt üzerinde doğrudan bir mini Ganzfeld uyarıcı yerleştirin. stimülatörü aydınlatma önceden kalibre edilmesi gerekirBir fotometre ile. </li><li> Sırasıyla 1 ve 100 Hz düşük ve yüksek bant-geçiren filtre ayarları ile, 1 Hz frekansta ışığı yanıp aracılığıyla 100 kez fotik uyarımı sunun. Sinyal örnekleme hızı 5 kHz olduğunu. Not: Sinyaller, en az yaklaşık 250 örneklenmelidir - en fazla iki numuneler, her döngü sırasında toplanan sağlamak için 300 Hz. </li><li> Geri cildi dikin ve anestezi kurtarmak için bir ısınma pad üzerinde hayvanları tutmak. Kayıt sürekli bir zaman süresi boyunca, fonksiyonel değişiklikleri izlemek için, ayrı ayrı hayvanlar üzerine kaydedilebilir. </li><li> Son noktada, hayvan euthanize sodyum pentobarbıton (100 mg / kg, ip) aşırı dozda enjeksiyon uygulayın. Kardiyak arrest, solunum durması ve vücut sıcaklığının düşmesi ile ötenazi onaylayın. </li></ol> 4. Doku hazırlanması ve Histoloji <ol><li> Mikroskop altında ötenazi hayvanlardan optik sinirleri çıkarın ve% 1 paraformaldehid O / N doku çözmek. </li> &lt;li&gt; tuz çözeltisi ile iyice doku yıkayın. Otomatik doku işlemci doku davranın ve parafin embed. Bir döner mikrotom kullanılarak - (10 mikron 5) Kesim bölümleri. Not: immünohistokimya çalışması için,% 1 paraformaldehid doku çözmek tuzlu su ile yıkayın ve% 30 sukroz O / N ile kuluçkaya yatmaktadır. Ekim göm doku gömme orta ve Kriyostat kullanarak cryosections yapmak. </li><li> 56 ° C &#39;de bu Luxol (% 95 etanol) O / N olarak% 0.1, hızlı mavi çözelti içinde bölümleri inkübe edin. Daha sonra başka bir 30 saniye için% 70 etanol, 30 saniye için% 0.05 lityum karbonat bölümleri ayırt eder ve. Son olarak, bölümler monte etmeden önce 30 saniye için% 0.1 cresyl mor çözeltisi içinde counterstain. Optik sinir 5 miyelini tanımlamak için hızlı mavi boyama kullanın. </li></ol>

<ol><li>Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Optic+neuritis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Optic neuritis.</a> N Engl J Med. 354 (12), 1273-1280 (2006).</li>
<li>Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLassmann%2C+H+%22Multiple+sclerosis+as+a+neuronal+disease%22">Multiple sclerosis as a neuronal disease</a>. Waxman, S. G. , Elsevier. 153-164 (2005).</li>
<li>Fahle, M., Bach, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFahle%2C+M+%22Principles+and+practice+of+clinical+electrophysiology+of+vision%22">Principles and practice of clinical electrophysiology of vision</a>. Heckenlively, J., Arden, G. , MIT Press. 207-234 (2006).</li>
<li>Halliday, A. M., McDonald, W. I., Mushin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+visual+evoked+response+in+optic+neuritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Delayed visual evoked response in optic neuritis.</a> Lancet. 1, 982-985 (1972).</li>
<li>You, Y., Klistorner, A., Thie, J., Graham, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latency+delay+of+visual+evoked+potential+is+a+real+measurement+of+demyelination+in+a+rat+model+of+optic+neuritis%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Latency delay of visual evoked potential is a real measurement of demyelination in a rat model of optic neuritis.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (9), 6911-6918 (2011).</li>
<li>You, Y., Klistorner, A., Thie, J., Gupta, V. K., Graham, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+loss+in+a+rat+model+of+optic+neuritis+is+closely+correlated+with+visual+evoked+potential+amplitudes+using+electroencephalogram+based+scaling%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Axonal loss in a rat model of optic neuritis is closely correlated with visual evoked potential amplitudes using electroencephalogram based scaling.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 3662(2012).</li>
<li>You, Y., Klistorner, A., Thie, J., Graham, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+reproducibility+of+VEP+recording+in+rats%3A+electrodes%2C+stimulus+source+and+peak+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Improving reproducibility of VEP recording in rats: electrodes, stimulus source and peak analysis.</a> Doc Ophthalmol. 123 (2), 109-119 (2011).</li>
<li>Heiduschka, P., Schraermeyer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+visual+function+in+pigmented+and+albino+rats+by+electroretinography+and+visual+evoked+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Comparison of visual function in pigmented and albino rats by electroretinography and visual evoked potentials.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 246 (11), 1559-1573 (2008).</li>
<li>You, Y., Thie, J., Klistorner, A., Gupta, V. K., Graham, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+of+visual+evoked+potentials+using+underlying+electroencephalogram+levels+improves+amplitude+reproducibility+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Normalization of visual evoked potentials using underlying electroencephalogram levels improves amplitude reproducibility in rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (3), 1473-1478 (2012).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+optic+nerve+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Animal models of optic nerve diseases.</a> Eye (Lond). 18 (11), 1066-1074 (2004).</li>
<li>Henry, K. R., Rhoades, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+albinism+and+drugs+to+the+visual+evoked+potential+of+the+mouse%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+Psychol%22%5BJournal%5D)">Relation of albinism and drugs to the visual evoked potential of the mouse).</a> J Comp Physiol Psychol. 92 (2), 271-279 (1978).</li>
<li>Murrell, J. C., Waters, D., Johnson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+effects+of+halothane%2C+isoflurane%2C+sevoflurane+and+desflurane+on+the+electroencephalogram+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Comparative effects of halothane, isoflurane, sevoflurane and desflurane on the electroencephalogram of the rat.</a> Lab Anim. 42 (2), 161-170 (2008).</li>
<li>Makela, K., Hartikainen, K., Rorarius, M., Jantti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+F-VEP+during+isoflurane-induced+EEG+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Suppression of F-VEP during isoflurane-induced EEG suppression.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 100 (3), 269-272 (1996).</li>
<li>Boyes, W. K., Padilla, S., Dyer, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+temperature-dependent+and+independent+actions+of+chlordimeform+on+visual+evoked+potentials+and+axonal+transport+in+optic+system+of+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Body temperature-dependent and independent actions of chlordimeform on visual evoked potentials and axonal transport in optic system of rat.</a> Neuropharmacology. 24 (8), 743-749 (1985).</li>
<li>Hetzler, B. E., Boyes, W. K., Creason, J. P., Dyer, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-dependent+changes+in+visual+evoked+potentials+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Temperature-dependent changes in visual evoked potentials of rats.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 70 (2), 137-154 (1988).</li>
<li>Mitchell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+lysolecithin+on+non-myelinated+axons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The effects of lysolecithin on non-myelinated axons in vitro.</a> Acta Neuropathol. 58 (4), 243-248 (1982).</li>
<li>Meyer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neuronal+apoptosis+in+a+rat+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Acute neuronal apoptosis in a rat model of multiple sclerosis.</a> J Neurosci. 21 (16), 6214-6220 (2001).</li>
<li>Lachapelle, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+remyelination+in+the+nonhuman+primate+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Failure of remyelination in the nonhuman primate optic nerve.</a> Brain Pathol. 15 (3), 198-207 (2005).</li>
</ol>

Yazarların hiçbirinin çatışan çıkarları veya çatışan çıkarları yoktur.

Optik sinir mekanik hasara karşı çok hassastır. 1 saniyelik bir süre boyunca optik sinir ezilme yaralanması, 2 haftalık bir süre boyunca yaklaşık %75 RGC kaybına yol açabilir10. Bu nedenle cerrahi işlemler yapılırken son derece dikkatli olunması gerekir. Yazarların deneyimlerine göre, optik sinire dik bir yönde nüfuz etmek yerine, sinirin oryantasyonu boyunca optik sinir çevresindeki dokuları ortaya çıkarmak ve yol açmak için künt bir diseksiyon yaklaşımını uyarlamak çok daha iyidir. Ayrıca, RGC aksonlarında a...

Optik nörit, optik nöropatinin en yaygın formlarından biridir ve tam veya kısmi görme kaybına neden olur1. Histolojik olarak inflamatuar demiyelinizasyon, retinal ganglion hücreli aksonal kayıp ve optik sinir2'de değişen derecelerde remiyelinizasyon ile karakterizedir. Optik nörit genellikle multipl sklerozun belirgin başlangıcıdır. Görsel uyarılmış potansiyel (VEP), görsel sistemin işlevini araştırmak için invaziv olmayan bir araçtır. Retinadan primer görsel kortekse kadar retina sonrası fonksiyonu yansıtır ve birçok optik sinir hastalığı durumunda etkilenir3. VEP, ağırlıklı olarak optik nörit hastalarında görsel yolun4 bütünlüğünü değerlendirmek için kullanılmıştır. 
Görsel yol boyunca sinyal iletiminin hızını yansıtan VEP'in latansı, optik sinirdekimiyelin ile ilişkili değişikliklerin seviyesinin doğru bir ölçümü olarak kabul edilir 5; VEP'in amplitüdünün retinal ganglion hücrelerinin (RGC) aksonal hasarı ile yakından ilişkili olduğuna inanılmaktadır6. Bu hipotez, lizolesitin ile indüklenen optik sinir demiyelinizasyonununsıçan modeli kullanılarak oldukça iyi kurulmuştur 5. 
Burada, kemirgenlerde optik sinir mikroenjeksiyon tekniğinin kapsamlı bir protokolünü açıklıyoruz, bu da sinirin yanı sıra ekstraoküler kaslar ve kan damarları gibi bitişik dokulara cerrahi manipülasyonla ilgili hasarı en aza indirebilir. Ayrıca, kafatası elektrot implantasyon cerrahisi hayvanlarda VEP kaydı için tarif edilmiştir7. VEP kayıtları, demiyelinizasyon/remiyelinizasyon ile ilgili değişikliklerin yanı sıra optik sinirdeki aksonal bütünlük üzerindeki etkiyi değerlendirmek için belirli bir süre boyunca hayvanlar üzerinde tekrar tekrar gerçekleştirilebilir.

<table><tbody><tr><td>Ketamin 100 mg / ml (Ketamil)</td> <td>Troy Laboratories</td><td>AC 116</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidin 1 mg / ml (Domitor)</td> <td>Pfizer</td><td>sc-204073</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide 1.0% (Midriasil)</td> <td>Alcon</td><td>sc-202371</td><td></td></tr><tr><td>Homoeotermik battaniye sistemi</td><td>Harvard Aparatı</td><td>NC9203819</td><td></td></tr><tr><td>Empedans ölçer ve nbsp;</td><td>Çim</td><td>F-EZM5</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı elektrotlar&nbsp;</td><td>Mikro Bağlantı Elemanları</td><td>M1.0 ve kez; 3mm Csk Yuvası M / T 304 S / S Subdermal</td><td></td></tr><tr><td>iğne elektrotları ve nbsp;</td><td>Çim</td><td>F-E3M-72</td><td></td></tr><tr><td>Hızlı Tamir&nbsp;</td><td>DeguDent GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Işık yayan diyot&nbsp;</td><td>Nichia</td><td>NSPG300A</td><td></td></tr><tr><td>Biyoamplifikatör</td><td>CWE, Inc.</td><td>BMA-400</td><td></td></tr><tr><td>CED sistemi</td><td>Cambridge Elektronik Tasarım, Ltd.</td><td>Power1401</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırınga&nbsp;</td><td>Hamilton</td><td>87930</td><td></td></tr><tr><td>Lisolesitin</td><td>Sigma</td><td>L4129</td><td></td></tr><tr><td>Evan' s mavi&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr></tbody></table> Sertifikası

deneysel optik sinir demyelinizasyon bir rat modelinde görsel uyarılmış potansiyel kayıt

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Görsel uyarılmış potansiyel (VEP) kaydı, optik nöritin akut fazındaki şiddetini değerlendirmek ve takip döneminde hastalık seyrini izlemek için klinik pratikte yaygın olarak kullanılmaktadır. VEP parametrelerindeki değişiklikler, optik sinirdeki patolojik hasar ile yakından ilişkilidir. Bu protokol, optik sinirde kısmi bir demiyelinizasyon lezyonunun üretildiği optik sinir mikroenjeksiyonunun kemirgen modeli hakkında ayrıntılı bir açıklama sağlar. VEP kayıt teknikleri de tartışılmaktadır. Kafatasına implante edilmiş elektrotları kullanarak, seans içi ve seanslar arası tekrarlanabilir VEP izleri elde edebiliyoruz. VEP'ler, optik sinirdeki fonksiyonel değişiklikleri uzunlamasına değerlendirmek için belirli bir süre boyunca tek tek hayvanlar üzerinde kaydedilebilir. Optik sinir demiyelinizasyon modeli, VEP kayıt protokolü ile birlikte, demiyelinizasyon ve remiyelinizasyon ile ilişkili hastalık süreçlerini araştırmak için bir araç sağlar ve potansiyel olarak yeni remdelininizan ilaçların veya nöroprotektif tedavilerin etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.

Tekrarlanabilir içi oturumlar VEP izleri Şekil 1&#39;de gösterilmiştir ve N1 gecikme önemli bir gecikme optik sinir enjeksiyonundan sonra görülebilir. Demiyelinizasyonun Kısmi optik sinir lezyonları Luxol hızlı mavi boyama 5 ile histolojik kesitlerde görülebilir. 2 optik sinir merkezinde küçük fokal demiyelinize lezyonu olan temsili bir bölümü göstermektedir. Kesit lezyonun toplam hacmi temsil unutmayın. demiyelinize alan üç boyutlu rekonstrüksiyon kullanarak...

Optik sinirde lisolesitin mikroenjeksiyonu kullanılarak fokal demiyelinizasyon indüklenir. Görsel uyarılmış potansiyeller, in vivo olarak görsel yol boyunca sinyal iletimini incelemek için görsel korteks üzerine implante edilen kafatası elektrotları aracılığıyla kaydedilir. Bu protokolde elektrot implantasyonu ve optik sinir mikroenjeksiyonunun altında yatan cerrahi prosedürler detaylandırılır.

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, optik sinirdeki demiyelinizasyonu in vivo olarak izlemektir. Bu, öncelikle görsel korteks üzerine mikro elektrotlar implante edilerek gerçekleştirilir. İkinci bir adım olarak, optik sinire odaklanmış bir demiyelinizasyon lezyonu indükleyen lyin mikroenjeksiyonu yapılır.Ardından görsel uyarılmış potansiyel kayıtları yapılabilir. Nihayetinde, regresyon analizi görsel uyarılmış potansiyel latans gecikmesi ile hacim arasında güçlü bir lineer korelasyon olduğunu göstermektedir. Bu video, sıçanlardan görsel uyarılmış potansiyeller kaydetmek için kullandığımız tekniğimizi gösterecektir.İmplant edilmiş kafatası elektrotlarını kullanarak, mikroenjeksiyon tekniği ile optik sinirin fokal demiyelinizasyonu için bir yöntemi de göstereceğiz. Tüm deneyler burada, Macquarie Üniversitesi Tıp Fakültesi'ndeki laboratuvarımızda yürütülmektedir. Teknik, doktora öğrencimiz Nitin Chichi tarafından gösterilecektir. Başlamak için, cerrahi işleme geçmeden önce yetişkin bir sıçanı (12 haftadan büyük), intraperitoneal ketamin ve ksilazin enjeksiyonu ile anestezi edin.Geri çekilme reflekslerinin yokluğunu kontrol edin. Cerrahi işlem sırasında hayvanda tekrar ortaya çıkabilecek reflekslerle başa çıkmak için gerektiğinde %10'luk ketamin dozları uygulamaya hazır olun. Ardından, cerrahi bölgedeki deriyi tıraş edin ve hazırlıkları tamamlamak için hayvanı bir ısıtma pedine yerleştirin.Cildi povidon iyot ile temizleyin, hayvanı örtün ve oftalmik pomad uygulayın. Ayrıca, steril aletler kullanarak asepsiyi koruduğunuzdan emin olun. Cerrahiye başlamak için başın orta hattı boyunca boyuna bir cilt insizyonu yapın.Ardından, kafatasının iyi görünmesini sağlamak için bağ dokusunu temizleyin. Daha sonra, bir mikro el matkabı kullanarak, bgma'nın yedi milimetre arkasına ve orta hattın üç milimetre yanına dikkatlice küçük bur delikleri açın. Vida elektrotları kafatası üzerinden ve kortekse yaklaşık 0.5 milimetre girecek şekilde implante edin.Ardından, gerektiğinde bgma'nın 3 mm rostralinde, orta hatta bir referans vida elektrodu implante edin. Vida elektrotlarını kaplamak ve sabitlemek için diş simanı uygulayın. Son olarak, cildi sütürle kapatın.Her kayıt için cildin yeniden açılmasına gerek kalmaması amacıyla elektrotlar açık bırakılabilir. Şimdi, hayvan anesteziden uyanmadan önce hızlıca bir steroid olmayan anti-inflamatuar ilaç veya NSAİD ya da opioid analjezik uygulayın. İşlemi tamamlamak için cilde bir antibiyotikli merhem sürün.Hayvanı, ısıtma pedli bir iyileşme kafesine yerleştirin ve tamamen hareketli hale gelene kadar sürekli olarak izleyin. Ardından en az bir hafta boyunca iyileşmesine izin verin. VEP kayıtlarını yapmadan önce, hayvanı daha önce açıklandığı şekilde cerrahiye hazırlayın ve ince iris makasları kullanarak göz orbitasının üzerinde, gözün üst kısmında 1 ila 1,5 santimetrelik bir cilt insizyonu yapın.Subkütan dokuyu açın ve orbital kaviteye erişin. Ardından bir stereoskop altında, konjonktivayı ve anterior tendon kapsülünü açın. Son olarak, ekstraoküler kasları ve intraorbital lakrimal bezleri geri çekin.Optik sinirin çevresinde yaklaşık üç milimetrelik bir alanı açığa çıkarmak için, dura ve araknoid tabakaları boyuna yönde açmak amacıyla bir oftalmik bistüri kullanın. Ardından, bir Hamilton şırıngasına bağlı bir cam mikro pipeti, globden iki milimetre posteriora, sinirin içine yerleştirin. Prosedürü tamamlamak için 30 saniye boyunca boyalı lyin bolusunu enjekte edin.Cilt insizyonunu dikin. Enfeksiyonu önlemek için antibiyotikli merhem uygulayın. Hayvanı bir ısıtma pedine alın ve iyileşene kadar gözlemleyin.Hayvanı anestezi altına alıp cildi daha önce anlatıldığı gibi hazırladıktan sonra, hayvanı oradaki karanlık bir odaya aktarın. Homeotermik bir battaniye sistemi ve bir sıcaklık probu kullanarak, karanlıkta izleme altındayken vücut sıcaklığını 37 °C'nin yarım derece sınırları içerisinde tutun. Hayvanı beş ila 30 dakika boyunca adapte edin.Yarım saat sonra, %1'lik tropic IDE göz damlası ile pupillaları dilate edin. Ardından, makas ve pens kullanarak kafatası üzerindeki deriyi açın ve önceden yerleştirilmiş olan NC iki vida elektrotlara erişin.Vidaları empedans metreye bağlayın. Ardından elektrot empedansını ölçün ve beş kilo ohm değerinin altında tutun. Şimdi, stimüle edilen gözün karşı tarafındaki görsel korteks üzerine vidayı yerleştirip bağlayın.Ardından, topraklamayı sağlamak için kuyruğa bir iğne elektrot yerleştirin. Şimdi, göz izolasyonunu artırmak için göz kapaklarının etrafındaki deriye kalibre edilmiş bir mini ganzfeld stimülatörü yerleştirin. Daha sonra, bir hertz düşük geçiren filtre ve yüksek bant geçiren filtre ile bir hertz hızında 100 flaş kullanarak fotik stimülasyon uygulayın.100 hertz değerinde filtreleme yapın. İşlem tamamlandığında, cildi sütürle kapatın ve hayvanın anesteziden çıkması için bir ısıtma pedinin üzerinde tutun. Haftada birkaç kezden birkaç haftada bir kez olacak şekilde tekrarlanan kayıtlar alınması mümkündür.Kesi sonrası VEP izleri, N1 latansında anlamlı bir gecikme olduğunu göstermektedir. Optik sinir enjeksiyonundan sonra, tekrarlanabilirliği kanıtlamak amacıyla günlük kayıtlar alınmıştır. Luxol fast blue ile boyanmış doku kesitlerinde, demiyelinizasyona bağlı kısmi optik sinir lezyonları gözlemlenebilmiştir.Lezyon hacmi ölçüldükten sonra, latans gecikmesi ile lezyon boyutu arasındaki korelasyon belirgin hale gelmiştir. Bu teknik, optik sinirde lezyonlar oluşturmak ve bu lezyonları VP'deki değişikliklerle ilişkilendirmek için kullanılabilir; ayrıca fokal demiyelinizasyon modeli olarak da kullanılabilir. Oluşturulan lezyon boyutu oldukça değişken olduğu için, değişikliklerin histolojik olarak korele edilmesi önemlidir.

visual-evoked-potential-recording-rat-model-experimental-optic-nerve

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Göz retina ganglion hücrelerinin aksiyon potansiyellerinin beyin dizileri ile görsel bilgi iletir. Burada, tek ganglion hücrelerinin aksiyon potansiyelleri kayıt nasıl...

Tek birim In vivo</emSıçan, optik kiazma> Kayıtlar

Bu video, retina sağlığını ve görsel yol bütünlüğünü incelemek için bir sıçan modelinin hazırlanışını göstermektedir. Görsel uyarılmış potansiyel ve elektroretinografi referansı ve aktif elektrotlar sıçana bağlanır, ardından eşit retinal aydınlatma için platformu Ganzfeld çanağının önünde sıçan ile hizalar ve dış paraziti önlemek için Faraday kafesi kapatılır.

Bir Elektrofizyoloji Kurulumu Kullanarak Görsel Yol Bütünlüğünü Değerlendirmek için Bir Sıçan Modeli Hazırlama

Bu video, ışık uyaranlarına yanıt olarak beynin görsel korteksinden gelen elektrik sinyallerini kaydeden önceden implante edilmiş kafatası elektrotları ile karanlığa uyarlanmış, anestezi uygulanmış bir sıçanda görsel uyarılmış potansiyelleri veya VEP'leri ölçme sürecini göstermektedir.

Bir Sıçan Modelinde Kafatası Elektrotları aracılığıyla Görsel Uyarılmış Potansiyellerin Kaydedilmesi

Bu video, bilinçli bir sıçanda elektroretinogram (ERG) ve görsel uyarılmış potansiyelin (VEP) nasıl kaydedileceğini gösterir. Cerrahi olarak implante edilen elektrotlara sahip sıçan önce karanlığa adapte edilir. Dilatasyon damlaları uygulandıktan sonra, hayvan bir kısıtlayıcıya yerleştirilir ve bir Ganzfeld kasesine yerleştirilir. ERG ve VEP sinyalleri daha sonra kaydedilir.

Bir Sıçanda Elektroretinogram ve Görsel Uyarılmış Potansiyelin Kaydedilmesi

Bu video, anestezi uygulanmış bir hayvanda optik sinire cerrahi olarak erişme ve fokal demiyelinizasyonu indüklemek için hassas bir şekilde lizolesitin verme prosedürünü göstererek daha fazla çalışma için nöropatolojik koşullar yaratır.

Lisolesitin kullanılarak optik sinirde lokal demiyelinizasyonun indüklenmesi

Bu protokol, anestezi uygulanmış sıçanlarda elektroretinogram ve görsel uyarılmış potansiyellerin eş zamanlı ölçümünü tanımlar.

Elektroretinografi Eşzamanlı Kayıt ve Anestezi Sıçanlar Görsel Uyarılmış Potansiyeller

Biz kayıtları anestezi karıştırıcıların olmadan yapılan insan durumuna daha benzerdir gözün (Elektroretinogram) ve bilinçli sıçanlarda beyin (görsel uyarılmış potansiyel), görsel elektrofizyolojik sinyaller ölçmek için cerrahi implantasyon ve Kayıt işlemleri göstermektedir.

Bilinçli Sıçanlarda implantasyon ve Kablosuz Elektroretinogram Recording ve Görsel Uyarılmış Potansiyel

Biz non-invaziv, deforme ve yeniden kullanılabilir olan bir kuru tip 16 kanal EEG sensör tasarlanmıştır. Bu kağıt tüm sinyal işleme görsel uyarılmış potansiyel (VEP) için önerilen EEG elektrot kuru bir non-invaziv çok kanallı EEG sensör kullanarak fare kafa derisi üzerinde ölçülen sinyalleri üretimden anlatılmaktadır.

Görsel uyarılmış potansiyel kayıtları bir kuru Non-invaziv çok kanallı kullanarak farelerde EEG sensör kafa derisi

Burada, optik sinirin ve nöronlarının yapısını ve işlevini anlamak için keçi ve rhesus makakında birkaç in vivo testi (flaş görsel uyarılmış potansiyel, desen elektroretinogramı ve optik koherens tomografisi) demostrate ediyoruz.

In Vivo Büyük Hayvanlarda Retina Ganglion Hücre ve Optik Sinir Fonksiyonu ve Yapısını Değerlendirme Yöntemleri

Bu makale, standart oftalmik cerrahi teknikler kullanılarak bir tavşan modelinde optik sinir ezilmesini gerçekleştirmek için ayrıntılı talimatlar sunmaktadır.

Bir tavşan modelinde optik sinir ezilmesine yönelik cerrahi bir yaklaşım

Öğrenin, sıçanlarda optik sinir demyelinizasyonunu izlemek için görsel uyarılmış potansiyel kayıt yöntemini. Bu protokol, kafatası elektrotları ve mikroenjeksiyon kullanarak odak lezyon oluşturur.

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

Daha fazla video keşfet