Name: Basit ve Bilgisayar destekli Fareler için Koku Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Öğrenin farelerde koku ayırt etme, tercih ve kaçınma davranışlarını değerlendirmek için basit ve bilgisayar destekli koku testi yöntemini. Bu yöntem Image J yazılımı ile hızlı ve güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Alzheimer hastalığı araştırmalarını desteklemek için İsviçre Ulusal Vakfı (31_138429) ve Synapsis Vakfı tarafından finanse edilmektedir.

Bütün hayvan prosedürleri bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması konusunda AB Direktifi 2010/63 / AB ile uyumlu olan ve (Canton of Fribourg, İsviçre) yerel Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Hayvan hazırlanması <ol><li> Deney hayvanları <ol><li> Yetişkin erkek vahşi tip ve yaş 3-5 ay transgenik farelerin (C57BL / 6 background) üzerinde deneyler yapın. farelerin üç grup vahşi tip yavru kontroller karşılık (grup A, Jagged1 flox / flox 19) ve iki koşullu KO fare hatları (B grubu, Jagged1ncKO ve C, Jagged1gcKO). </li><li> 12 saat kontrollü aydınlık / karanlık döngüsü ile havalandırılmış bir odada standart laboratuvar koşullarında Ev fareleri, ve yiyecek ve su ad libitum sağlar. </li></ol></li></ol> 2. Deneysel Kurulum <ol><li> Deneysel arena <ol><li> Deneysel arenada için, temiz bir steril fare kafesini kullanın (36 cm uzunluk x 20,5 cm genişlik x 13.5 cm yükseklik) (Şekil 1A). </li><li> 3 cm yüksekliğinde taze yatak, bir numaralı kafes her fare atayın. Kafesleri yeniden ise, koku hassasiyeti testinde olduğu gibi, koku ve fareler arasında çapraz bulaşmayı önlemek için aşağıdaki önlemleri alacaktır. <ol><li> Su tarafı işaretleyin. </li><li> % 70 etanol, her tarafı için biri ile püskürtülür iki doku kağıtları ile kafesleri dar duvarları temizleyin. </li><li> Farelerin genotip göre kafesleri yığmak ve laminar kaputun altında geçici olarak saklamak. </li></ol></li></ol></li><li> Kamera <ol><li> Kafes (Şekil 1A) altından 58 cm amacı ile özel bir tripod üzerinde kamera monte edin. Tripod ve kafesin konumunu düzeltmek ve kamera kafesinin üst merkezli olması için izin vermek için işaretleriyle sınırlandırmak. </li><li> X 240 piksel, MOV dosyaları olarak saniyede 15.08 kare 320 piksel Video kaydetme. </li></ol></li><li> Kokular <ol><li> Scen yeniden süspansebelirtilmedikçe, TH, bir çözücü içinde ki bu çözünürdür. </li><li> Tercih testi kullanım fıstık ezmesi için. Yer fıstığı yağı, fıstık yağı (ağ / hac% 10) yeniden süspanse edin. </li><li> Kaçınma testi kullanımı saf 2-metilbutirik (2 MB) asit (% 98) için. </li><li> Duyarlılık testi için, aynı fare kolonisi ve arka plan (C57BL / 6) kadın idrar kullanın. <ol><li> Kolaylık sağlamak için koku testi 1-2 gün önce idrar toplamak. Dizginlemek ve kafes ızgara üzerinde karnı ile kaputun altındaki fareyi tutun. Kafes ızgara altında idrar damla toplamak için plastik bir petri yerleştirin. </li><li> 1.5 ml tüp içinde her kadın idrar toplayın ve hayvanlar arasındaki değişkenliği normalleştirmek için tüm idrar örnekleri karıştırın. Kullanılıncaya kadar -20 ° C&#39;de saklayın. </li><li> Deney gününde, idrar çözülmesi ve 10 bir seyreltme faktörü ile iki kere damıtılmış su içinde 4 seyreltileri, yerine (1:10, 1: 100, 1: 1000, 1: 10,000). </li></ol></li></ol></li></ol>3. Koku Testi Not: Güçlü cezbedici (fıstık ezmesi ve kadın idrar) veya güçlü kovucu (2-MB asit) 15 olarak algılanmaktadır kasten seçilmiştir Bu protokol kokuları içinde. Bu koku davranışı ile herhangi bir müdahale olasılığını ortadan kaldırmak için kaçınma testi öncesinde keyifli kokulara tercih ve duyarlılık testleri yürütmek önemlidir. Bununla birlikte, bu kağıt, tercih ve kaçınma testinde basitlik, hem algı test altında açıklanacaktır. Her davranış oturumu alışma aşaması ile başlar. <ol><li> Alışma Faz <ol><li> Temiz atanan kafeste hayvan koyun ve 5 dakika (Şekil 1B) için inceleyelim. Deneysel kafesin çevre evde kafes tanıdık olduğundan, bu kısa süre alışma izin vermek için yeterlidir. </li><li> Duyarlılık testi bir günde tamamlanması durumunda, uygulamanıza önce sadece bir kez alışkanlık gerçekleştirmekEn yüksek sulandırılmış koku n. Duyarlılık testi farklı günlerde yapılır, her gün yeni bir temiz kafes bir alışma aşaması gereklidir. </li></ol></li><li> Algı Testi <ol><li> Alışma sonra kamerayı etkinleştirmek ve hemen altındaki (Şekil 1C) yaklaşık 10 cm kafesin zıt duvarlarına hoş koku (fıstık ezmesi) 60 ul ve nötr koku (musluk suyu) 60 ul pipetle. </li><li> Fare 2 dakika (Şekil 1D) için kokuları inceleyelim. Bundan sonra, fotoğraf makinesini kapatın. </li><li> Bu noktada, bir sonraki fare alışkanlık aşamasından devam edin. Kovucu koku 60 ul (2-MB asit) ve su içinde 60 ul uygulanarak aynı şekilde tam olarak Uzak Durma testi gerçekleştirir. </li></ol></li><li> Hassasiyet testi <ol><li> 1: aşağıdaki sırayla bir kadın idrar artan konsantrasyonlarda erkek farelerin gözde eşik değerlendirir 10,000; 1: 1,000; 1: 100; 1:10 ve saf idrarı. </li><li> Alışma sonra, daha önce 3.2.1&#39;de açıklandığı gibi deneyci tarafından pipetle yüksek seyreltme her fare maruz bırakmaktadır. </li><li> Bir video kamerada 2 dk zaman diliminde, su karşı idrar keşif davranışlarını kaydedin. Tüm farenin kohort yüksek seyreltme (1: 10,000) açısından test edilir sonra, yukarıda belirtildiği gibi, idrar, daha yüksek bir konsantrasyona maruz kalmaktadır. </li></ol></li></ol> 4. Post-hoc Veri Analizi Not: açıklanan tüm davranış testleri veri analizi talimatları izleyerek post hoc işlenir. <ol><li> Windows sistemler için ImageJ MOV dosyaları açın <ol><li> Http://www.apple.com/quicktime/download özelleştirilmiş ayarları kullanarak Java için Quick Time yükleyin. </li><li> ImageJ sitesinde (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html) den Quick Time eklenti yüklemek. </li><li> Kütüphane EXTENS içine: ( Program Files QuickTime QTSystem C) QTJava.zip İthalatImageJ iyon (.ImageJ jre lib ext). </li><li> Plugins klasörüne kopyalayın de QTJava.zip ve QTJava.jar olarak yeniden adlandırın. </li><li> Makro klasöründe bağlı altı komut takın (ImageJ plugins Makrolar). </li><li> Açık ImageJ sonra yakın ImageJ derlemek ve Quick Time eklentisi çalıştırmak ve. </li><li> Quick Time kullanarak&gt; ImageJ yeniden açın ve Dosya&gt; Al&#39;ı kullanarak MOV dosyasını açın. </li></ol></li><li> Video Ayar <ol><li> Video dosyası ImageJ açıldığında, deneyi kafes (T0) içine Koku moleküllerini pipetle olan zaman sabit bir 2 dakika keşif elde etmek için video kesti. (Yığınları ToolsSlice sökücü ImageJ Image) 1 artışlarını kullanarak önceki çerçeveleri T0 tekabül çerçeveyi belirlemek ve kaldırmak. 2 dk keşif aşan tüm kareleri silmek için aynı komutunu kullanın. </li><li> Kafes merkezli olduğundan emin olun ve gerekli kullanım Image&gt; Transform eğer&gt; Döndür komutunu hizalamak için. </li></ol></li><li> Bakınızo İşleme Not: video işleme tamamen bilgisayar destekli ve bu kağıdı eşlik eden makrolar komutları kullanır. <ol><li> 127 piksel x 218 piksel boyutu kafes üzerine alanını kısıtlamak amacıyla Plugin&gt; Makrolar&gt; Çalıştır komutu Adım 1 makroyu çalıştırın. Kafes (Şekil 2, Adım 1) üzerinde sabit bir dikdörtgen getirin. </li><li> Adım 2 makro (Şekil 2, Adım 2) kullanılarak faiz (ROI) bölgede kafes alanını kırpın. </li><li> Bir eşik sinyali atama despeckling ve sinyal değişimini filtreleyerek kökenli fare görüntüsünü çıkarmak için Adım 3 makro kullanın. Z ekseni arsa çıkış değerleri 2 dk keşif sırasında &quot;su haznesinin&quot; nin ROI içinde hareket fare gölge yoğunluğuna karşılık, ortalama gri değerlerini gösterir. Bir elektronik tablo dosyasına ROI (Şekil 2, Adım 3) &#39;e göre adlı bir çalışma sayfasına sonuçları kopyalayın. </li><li> Adım 4 makro kullanınROI &quot;koku odasına&quot; fare ortalama gri değerleri ayıklamak. 4.3.3 aynı elektronik tablo dosyasındaki ROI (Şekil 2, Adım 4) &#39;e göre adlı bir çalışma sayfasına sonuçları kopyalayın. </li><li> Daha fazla ROI &quot;su çevre&quot; fare hareketi analizi kısıtlamak amacıyla Adım 5 makro kullanın. 4.3.3 aynı elektronik tablo dosyasındaki ROI (Şekil 2, Adım 5) göre adlandırılır çalışma sayfası üzerine sonucunu kopyalayın. </li><li> ROI &quot;koku çevre&quot; fare hareketi analizi kısıtlamak için Adım 6 makro kullanın. 4.3.3 gibi ROI elektronik tablo dosyası (Şekil 2, Adım 6) göre adlandırılır çalışma sayfası üzerine sonucunu kopyalayın. </li><li> Tüm videoları işlemek ve hayvanların başına kare sayısını tutarlılık açısından kontrol edin. Burada, 2 dk keşif oturumuna gelen 1.810 kare için tüm hayvanları kayıt. </li><li> Her bir hayvan için ve sıralama çerçeveleri ortalama gri va her ROI içinlues büyük 0. Divide daha değerlere göre kare sayısı 1 saniye tekabül ve her ROI harcanan saniye edinin. </li></ol></li></ol> 5. İstatistiksel Analiz <ol><li> Her test için http://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/ bulunan formülü kullanarak Bartlett testi ile gruplar / genotipleri içinde varyans homojenliği doğrulayın. </li><li> Zaman Bartlett testi sonuçlarına bağlı olarak eşit veya eşitsiz varyansları varsayarak bir yönsüz Student t-testi kullanılarak tek grup içindeki koku karşı su ile harcanan arasında cazibe ve kaçınma testinde, karşılaştırmalar yürütmek. Bonferroni post-hoc testi ile tek yönlü ANOVA ile genotipler arasındaki su ile harcanan zaman çıkarılır kokuları ile harcanan süreleri karşılaştırın. </li><li> Duyarlılık testinde Wate ile harcanan zaman çıkarılır koku ile harcanan zaman karşılaştırmalar analizBonferroni post-hoc testi ile tek yönlü ANOVA ile idrar belirli bir seyreltilerde gruplar arasında r. Bonferroni post-hoc testi ile tekrarlı 2-Yönlü ANOVA büyüyen koku konsantrasyonları gruplar arasında duyarlılık karşılaştırın. </li><li> Cazibe ve kaçınma testinde genotipleri ve tedaviler arasındaki etkileşim Bonferroni post-hoc testi ile 2 yollu ANOVA ile incelenmiştir. </li></ol>

<ol><li>Doty, R. L., Kamath, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influences+of+age+on+olfaction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cognitive+Science%22%5BJournal%5D)">The influences of age on olfaction: a review.</a> Cognitive Science. 5, 20(2014).</li>
<li>Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+neurodegenerative+disease%3A+a+meta-analysis+of+olfactory+functioning+in+Alzheimer%E2%80%99s+and+Parkinson%E2%80%99s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases.</a> Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).</li>
<li>Moberg, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Dysfunction+in+Schizophrenia%3A+A+Qualitative+and+Quantitative+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review.</a> Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).</li>
<li>Kovács, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+olfactory+dysfunction+in+aging+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders.</a> Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).</li>
<li>Barrios, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+and+neurodegeneration+in+HD%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Olfaction and neurodegeneration in HD.</a> Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).</li>
<li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+Parkinson%E2%80%99s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Olfaction in Parkinson’s disease and related disorders.</a> Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).</li>
<li>Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+University+of+Pennsylvania+Smell+Identification+Test%3A+a+standardized+microencapsulated+test+of+olfactory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function.</a> Physiology & Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).</li>
<li>Devanand, D. p, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Deficits+in+Patients+With+Mild+Cognitive+Impairment+Predict+Alzheimer%E2%80%99s+Disease+at+Follow-Up%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer’s Disease at Follow-Up.</a> American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).</li>
<li>Conti, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+Identification+Deficit+Predicts+Clinical+Conversion+from+Mild+Cognitive+Impairment+to+Dementia+Due+to+Alzheimer%E2%80%99s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Clinical+Neuropsychology%22%5BJournal%5D)">Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer’s Disease.</a> Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).</li>
<li>Keller, A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Better+Smelling+Through+Genetics%3A+Mammalian+Odor+Perception%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception.</a> Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).</li>
<li>Brai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+activity+in+the+olfactory+bulb+is+odour-dependent+and+contributes+to+olfactory+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour.</a> European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).</li>
<li>Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+discrimination+learning+deficit+in+heterozygous+reeler+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice.</a> Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).</li>
<li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Discrimination+Learning+Increases+the+Survival+of+Adult-Born+Neurons+in+the+Olfactory+Bulb%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).</li>
<li>Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+urinary+odor+discrimination+in+female+aromatase+knockout+%28ArKO%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice.</a> Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).</li>
<li>Kobayakawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).</li>
<li>Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Behavioral+Testing+in+the+Adult+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).</li>
<li>Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+olfactory+sensitivity+and+apparent+speed+of+forebrain+neuroblast+migration+in+three+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice.</a> Neuroscience. 118 (1), 263-270 (2003).</li>
<li>Page, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+assessment+of+social+approach+behavior+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Computerized assessment of social approach behavior in mouse.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48(2009).</li>
<li>Nyfeler, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged1+signals+in+the+postnatal+subventricular+zone+are+required+for+neural+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal.</a> Embo J. 24 (19), Available from:
	
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"</a> 3504-3515 (2005).</li>
<li>Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+and+mechanisms+of+olfactory+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Properties and mechanisms of olfactory learning and memory.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li>
<li>Steinlechner, S. Chapter 2.12 - Biological Rhythms of the Mouse. The Laboratory Mouse (Second Edition). , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179">http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179</a> 383-407 (2012).</li>
<li>Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Bulb+Monoamine+Concentrations+Vary+with+Time+of+Day%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li>
<li>Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+assays+for+mouse+models+of+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804(2014).</li>
</ol>

Çıkar çatışması yoktur.

kokulara karşı algısını, kokulara, su ve duyarlılık karşısında kokular arasındaki ayrım: Bu protokol önerilen testler farelerde doğuştan koku davranış farklı yönlerini değerlendirmek için izin verir. Bu protokol daha önce 15 gösterilen tercih ve kaçınma ölçeğine göre herhangi bir koku uygulanabilir. Protokol keşif faaliyeti dayalı yana fareler kendi hareketini etkileyecek ve koku keşif engel olabilir herhangi bir motor bozukluğu ya da kaygı görüntü yok önemlidir. tarif edilen testler, ancak bunlar, yetişkin k...

Olfaction memelilerde en gelişmiş ve önemli duyu işlevlerinden biridir. Koku aktivitede herhangi bir değer düşüklüğü kötü durum senaryosu gıda alımını, sosyal davranış ve hatta hayatta kalma etkileyebilir. İnsanlarda, koku bozulma 1 bağımlı yaş ve nörolojik bozukluklar 2 güçlü bir belirleyicisi olarak kabul edilir - 6. Pennsylvania Üniversitesi tarafından geliştirilen koku kimlik testi şu anda erken nörolojik defisit 7 değerlendirmek ve yüksek olasılıkla demans 8,9 ilerlemesini tahmin edebilirsiniz en çok kullanılan non-invaziv ve ölçülebilir, tanısal testlerin birini temsil eder. koku alma sistemi ve kemirgenler koku duyusunun öne erişilebilirlik, altında yatan mekanizmaları koku fonksiyonları 10 adresleme araştırma yoğun bir çizgi yol açtı. Daha önce sinyal alınmasından fonksiyon kaybının göstermiştirya Notch1 koku kaçınma 11 etkiler. Bu protokolde koku performansı incelemek için nöronların veya glia sinyalizasyon ligandı, Jagged1 eksik fareler, kullanın. Doğuştan koku alma algısı olarak üç parametre, koku ve koku hassasiyeti 4 arasındaki ayrım olarak tanımlanır. Kemirgenlerde Koku kontrol çeşitli şekillerde yapılabilir ve bazı davranış çalışmalarda belli bir buhar konsantrasyonlarda ve hassas bir zaman dilimi 12 hayvana bir kokunun sağlanması olfactometers yararlanabilirler - 14. Bununla birlikte, bu enstrümantasyon pahalı ve sadece uzman tesislerde mevcut olabilir. Bizim çalışmamızda, uçucu koku kullanılarak gerçekleştirilen bir basit, hızlı ve yeniden üretilebilir bir koku test protokolü, sağlar. testler cezbedici veya itici koku tedbir algısını açıklanan ve koku ve su 11,15,16 arasındaki ayrımcılığı değerlendirir. W, aynı kurulumu kullanarake farklı konsantrasyonlarda 16,17 bir koku hassasiyeti ölçebilirsiniz. Page ve arkadaşları 18 çalışmalarından esinlenerek post-hoc bilgisayar destekli görüntü işleme, deneysel Körlemenin ve tüm deneyi yürütmek için bir tek kişi için izin gerek kalmadan tarafsız sonuçlar sağlar. Bu protokol, farelerde koku alma davranışı incelemek için bir başlangıç ​​noktası sağlamak için tasarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Fare kafesi</td><td>Italplast (İtalya)</td><td>1144B</td><td>36 cm uzunluk x 20,5 cm genişlik x 13,5 cm yükseklik</td></tr><tr><td>Yontma ahşap yatak takımı</td><td>Abedd (Avusturya)</td><td>LTE E-001</td><td>3 cm yüksekliğinde</td></tr><tr><td>Fıstık ezmesi</td><td>Migros (İsviçre)</td><td>NA</td><td>1:10</td></tr><tr><td>2-Metilbütirik</td><td>Sigma Aldrich (İsviçre)</td><td>W269514</td><td></td></tr><tr><td>Aynı fare suşunun verimli dişilerinden elde edilen saf dişi idrarı</td><td>NA</td><td></td><td>NA Seyreltme serisi</td></tr><tr><td>Kamera</td><td>Olympus (ABD)</td><td>Camedia C-8080</td><td>MOV dosyaları</td></tr><tr><td>Java için Quicktime (Windows)</td><td>Apple (ABD)</td><td>MOV</td><td>dosyalarını görselleştirmek için NA video eklentisi</td></tr><tr><td>Windows için ImageJ</td><td>NIH (ABD)</td><td>NA</td><td>Video İşleme/Analiz</td></tr></tbody></table>

basit ve bilgisayar destekli fareler için koku testi

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Koklama yüksek türler arasında muhafaza edilir ve üreme ve hayatta kalma için gereklidir. İnsanlarda, olfaction da yaşlanma ile etkilenir duyu biridir ve nörodejeneratif hastalıkların güçlü bir belirleyicisidir. Böylece, olfaction testi erken nörolojik açıklarının tespit etmek için bir non-invaziv tanı yöntemi olarak kullanılmaktadır. Koku ağ duyarlılık altında yatan mekanizmaları anlamak için, kemirgenlerde koku araştırmalar son on yılda ivme kazanmıştır. Burada, biz önceden yiyecek veya su kısıtlaması gerek kalmadan farelerde doğuştan koku algısı ve duyarlılık çok basit, zaman verimli ve tekrarlanabilir koku test yöntemi sunuyoruz. Testler farelere tanıdık bir ortamda gerçekleştirilir, kokular ve odorant maruz kalma 2 dk oturumu sadece gerektirir. Analiz ImageJ bilgisayar destekli komutları kullanarak, post-hoc yapılır ve bu nedenle olabilirBir araştırmacı tarafından başından sonuna kadar yürüttü. Bu protokol, herhangi bir özel donanım veya kurulum gerektirmez ve koku algı ve hassasiyeti test ilgilenen herhangi bir laboratuvar endikedir.

algı testi 2-MB asit fıstık ezmesi ve kaçınma için cazibe ölçer. Farelerin üç grup test edilir ve su ile karşılaştırıldığında &quot;koku çevre&quot; harcanan zaman ölçülür. Su (t 8 = 2.52, p &lt;0.05) ile karşılaştırıldığında tercih testte, kontrol grubu ve bir koku önemli tercih gösterir. Öte yandan, B grubu fıstık ezmesi önemli cazibe görünmüyor ve su (t 6 = 3.22, p &lt;0.05) daha fazla zaman harcıyor. Böylece, kontrol grubu A (F 1,7 = 26,39, p &lt;0.005) farklı davranır. Buna ek olara...

Farelerde basit ve tarafsız bir koku alma testi sunuyoruz. Bu protokol ile koku ayrımı, tercih, kaçınma ve suya kıyasla yeni bir kokuya duyarlılık tek davranışsal seanslarda değerlendirilebilir. Bu yöntem tek bir deneyci için endikedir ve analiz bilgisayar destekli video işlemeye dayanmaktadır.

Basit ve Bilgisayar destekli Fareler için Koku Testi

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farelerde doğuştan gelen koku ayırt etme, koku tercihi veya kaçınması ve koku duyarlılığını test etmektir. Bu işlem, farenin yeni bir çekici veya itici kokuya ve nötr bir koku olan suya maruz bırakılmasıyla gerçekleştirilir. Bu sırada, davranışsal oturum bir video kamera tarafından kaydedilir.Ardından, koku ve su parametrelerinde geçirilen süreyi elde etmek için video, sağlanan makrolar kullanılarak Image J'de analiz edilir. Sonuçlar, post hoc bilgisayar destekli analize dayanarak farklı genotipler arasında kokulara karşı suya kıyasla tercih veya kaçınma davranışını gösterir. Olfaktorik testin özel arena ve olfaktorik kullanımı üzerindeki temel avantajı, tanıdık bir arena kullanması ve bu nedenle hızlı tamamlanması ve kurulumunun basit olmasıdır.Ayrıca, prosedürü demonstre etmek için laboratuvarımdaki doktora öğrencisi Emmanuel Abry tarafından uygun maliyetli donanımlar kullanılacaktır. Bu deney için üç ile beş ay arasında değişen yaşlarda, erkek, C 57 black, altı yabanıl tip ve transgenik fareler kullanın. Bu demonstrasyonda iki nakavt hattı ve kardeş kontrol grubu kullanılmıştır.Deneysel arenalar için, üç santimetre altlık içeren temiz sterilize edilmiş fare kafesleri kullanın. Ardından, kamera düzeneğini hazırlayın. Kamerayı, özel bir tripod bağlantısı üzerinde kafes tabanının 58 santimetre üzerine konumlandırın.Kafesin konumunun neresi olması gerektiğini belirtmek için tezgaha bazı işaretler koyun. Merkez görüntü için kamerayı saniyede yaklaşık 15 kare hızında, 320 x 240 piksel çözünürlüğünde video kaydedecek şekilde ayarlayın. Testi hazırlamak için, mümkün olduğunca her kokunun konsantrelerini çözücü içinde saklayın.Tercih testi için, fıstık yağında ağırlıkça hacme %10'luk fıstık ezmesi çözeltisi hazırlayın. Kaçınma testi için %98'lik metil bütirik asit çözeltisi hazırlayın. Hassasiyet testi için, testten bir ila iki gün önce aynı soydan bir fareden dişi idrarı toplayın.Dişi bir hayvanı karnı kafes ızgarasının üzerinde olacak şekilde sabitleyin ve idrar damlalarını plastik bir kaba toplayın. Normalizasyon sağlamak için birkaç farklı dişiden örnekler toplayın. Bireysel değişkenlik için, tüm örnekleri 1,5 milliliter'lik bir tüpte birleştirin ve -20 °C'de saklayın.Alıştırma işlemine başlamak için hayvanlardan birini temizlenmiş bir kafese yerleştirin ve keşfetmesine izin verin. Beş dakika boyunca test kafesinin ortamı, ev kafesinin ortamı ile aynı olmalıdır. Alıştırma aşamasını her test gününde bir kez tekrarlayın; alıştırma süresi tamamlandığında kaydı başlatın ve 60 µL hoş bir koku pipetleyin.Bu durumda, karşıt duvarlardan birine fıstık ezmesi, diğerine ise aynı miktarda su pipetleyin. Nötr bir koku olarak, damlaları her duvarın yaklaşık 10 santimetre yukarısına uygulayın. Şimdi hayvanın iki dakika boyunca keşif yapmasına izin verin, ardından kaydı durdurun ve fareyi ev kafesine geri götürün.Süreci test edilecek her bir fare için tekrarlayın. Her seferinde yeni test kafesleri kullanın. Tüm tercih testlerini gerçekleştirdikten üç ila beş gün sonra, yeni bir test kafesi kullanarak kaçınma testini yürütün.Her bir fare için kaçınma testini gerçekleştirin. Çekim testinde olduğu gibi, sadece hoş kokuyu, iki metil bütirik asit olan kaçınma kokusuyla değiştirin. Hassasiyet testi için, aynı fareye ait denemeler arasında tek bir kafes yeniden kullanılabilir.Kafesin su tarafını işaretleyin ve denemeler arasında kısa duvarları %70 etanolle ıslatılmış kağıtla temizlemeye hazır olun. Deney gününde, on katlı seyreltme serisi ile idrarın dört farklı konsantrasyonunu hazırlayın. Kaçınma testinde olduğu gibi çift distile su kullanarak, her hayvanı test kafesine beş dakika boyunca alıştırın.Ardından, her bir fareyi önce en yüksek dilüsyon olan 1:10.000 oranındaki idrara maruz bırakın. Kayıt sırasında, idrar dilüsyonunu test kafesine, suyu ise karşı duvara uygulayın. Diğer testlerde yapıldığı gibi, hayvanın keşfetmesine izin verin.İki dakika boyunca bekletin. Ardından hayvanı temiz bir fare kafesine aktarın. Tüm hayvanlar en düşük konsantrasyona maruz kaldıktan sonra, tüm test kafesi duvarlarını temizleyin ve her fare üzerinde bir sonraki en konsantre idrarı kullanarak testi tekrarlayın.Saf idrar test edilene kadar bu işleme devam edin. Bir deney için tüm veriler toplandıktan sonra, ayarlanmış videoları Image J'de açın; düzenleme ve işleme detayları, açıklanan protokoller kullanılarak metin protokolünde sunulmuştur. İki farklı nakavt hattı.B ve C grupları, yatak malzemesinden yapılmış kontrol grubu A ile karşılaştırılmıştır. Genotipler içinde koku ve su arasında geçirilen süreyi karşılaştırmak için eşit veya eşit olmayan varyanslı, yönlendirilmemiş bir Student T-testi uygulanmıştır. Genotipler arasındaki davranışlar tek yönlü ANOVA kullanılarak karşılaştırılmıştır. Hem B hem de C deneysel grupları, çekici kokuya karşı herhangi bir tercih göstermemiştir. Kaçınma testinde, itici 2-metil bütirik asit kokusuna verilen yanıt A ve B grupları için beklendiği gibiyken, C grubu bu kokuya karşı herhangi bir kaçınma davranışı göstermemiştir.Hassasiyet testinde, çekim eşiği, 1'e 1000 seyreltmede tercih edilen idrar ile suyun birlikte geçirilen süreleri arasındaki fark çıkarılarak elde edilmiştir. B ve c deney gruplarının her ikisinin ise tercih göstermesi için 100 kat daha yüksek bir konsantrasyona ihtiyaç duyduğu görülmüştür. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, işlem düzgün bir şekilde yürütülürse birkaç saat içinde tamamlanabilir; ardından bu prosedürü takiben, koku plastisitesini ve öğrenmeyi araştırmak için kokuyla öğrenme ve sönme gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

simple-and-computer-assisted-olfactory-testing-for-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Kemirgen koku alma sisteminin temel karşın benzersiz özellikleri biyologlar arasında artan çalışmaya yol açmıştır. Işlevi nispeten basit bir değerlendirme daha sonra da ihtiyaç vardır. Burada fare koku alma hassasiyeti ve tercih karakterizasyonu için hassas testler açıklar.

Yetişkin Fare Olfaktör Davranış Testi

Koku alma fonksiyonundaki bozulma, Parkinson, Alzheimer ve Huntington hastalıkları dahil olmak üzere birçok nörodejeneratif bozuklukta ortak bir özelliktir. Bu makalede, nörodejeneratif hastalıkların fare modellerinde koku alma yeteneklerini ölçmek için kullanılabilecek farelerde koku alma ayrımını ve tespitini değerlendirmek için bir dizi test açıklanmaktadır.

Nörodejeneratif Hastalığının fare modelleri için koku alma Tahliller

Bu el yazması, kemirgenlerin koku alma sistemini incelemek için bir protokolü açıklar. Koku alma alışkanlığı / alışma testi, araştırmacıların bir farenin tekrar tekrar sunulan bir kokuya alışıp alışmadığını ve farenin yeni bir koku sunulduğunda alışkanlık bozukluğu gösterip göstermediğini belirlemesine olanak tanır.

Fare Koku Ayrımcılık ve alışkanlık için test

Dikkat seti değiştiren bilişsel anormallikler birçok psikiyatrik hastalığın temel bir özelliğidir. Burada, farelerde dikkat seti kaydırma yeteneklerinin, yürütücü işlevlerin ve diğer bilişsel yeteneklerin etkili bir şekilde incelenmesi için yeni bir otomatik sistemin geliştirilmesini sunuyoruz.

Fareler için bir Edimsel Intra- / Ekstra boyutlu Set-shift Görev

Burada, fareler üzerinde koku ayrımcılık test etmek için bir ilişkisel öğrenme görev eğitim. Bu iletişim kuralı öğrenme kaynaklı beyin yapısal değişimler üzerine çalışmalar için de sağlar.

Koku öğrenme ve ayrımcılık farelerde bir objektif ve tekrarlanabilir testi

Bu makalede, yeni bir fare yargısı önyargı protokolünün ayrıntılı bir açıklaması sağlanmaktadır. Bu koku alma kazı görevinin duygusal duruma duyarlılığının kanıtı da gösterilmiştir ve çeşitli araştırma alanlarındaki faydası tartışılmaktadır.

Koku Alma Kazma Görevi Yoluyla Fare Yargısı Önyargısının Değerlendirilmesi

Bu makale, farelerde solunan çevresel kirleticilere maruz kalmanın koku alma fonksiyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için gömülü gıda testinin ve sosyal koku ayrımcılığı deneyinin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır.

Solunan Çevresel Kirleticilerin Farelerde Koku Alma Fonksiyonu Üzerindeki Etkilerinin İncelenmesi

Bu protokol, ol/gitme koku alma davranışı deneyleri için bir olfaktometrenin yapımını açıklar. Olfaktometrenin başarılı bir şekilde oluşturulmasını sağlamak için resimlerle birlikte adım adım talimatlar sağlanmıştır. İşlem sırasında karşılaşılan sorunların giderilmesine yönelik bilgiler de dahil edilmiştir.

Kemirgen Koku Alma Davranışı Çalışmaları için Bir Olfaktometre Oluşturma

Burada, fare depresyon modellerinde hem iştah açıcı hem de caydırıcı koku uyaranlarına yönelik olumsuz koku alma yanlılıklarının değerlendirilmesine izin veren bir koku tercihi testinin bir protokolünü sunuyoruz.

Depresyonun Fare Modellerinde Koku Hedonik Yanlılıklarını Ölçmek İçin Bir Koku Tercihi Testi

Bu makalede, farelerde öğrenme korku ve belleği değerlendirmek için bir video analiz sistemi kullanılarak bir bağlamsal ve cued korku klima testi için bir protokol sunuyor.

Farelerde Video Analiz Sistemi kullanma ve bağlamsal cued Korku Klima Testi

Öğrenin farelerde koku ayırt etme, tercih ve kaçınma davranışlarını değerlendirmek için basit ve bilgisayar destekli koku testi yöntemini. Bu yöntem Image J yazılımı ile hızlı ve güvenilir sonuçlar sağlar.

Basit ve Bilgisayar destekli Fareler için Koku Testi

Daha fazla video keşfet