Basit ve Bilgisayar destekli Fareler için Koku Testi

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farelerde doğuştan gelen koku alma ayrımını, koku tercihini veya kaçınma ve koku alma hassasiyetini test etmektir. Bu, fareyi yeni bir cezbedici veya temyiz ediciye ve su olan nötr bir kokuya maruz bırakarak elde edilir. Bu arada, bir video kamera davranışsal oturumu kaydeder.

Daha sonra, koku ve su parametrelerinde harcanan süreyi elde etmek için sağlanan makrolar kullanılarak video Görüntü J'de analiz edilir. Sonuçlar, post hoc bilgisayar destekli analize dayalı olarak farklı genotipler arasında suya kıyasla kokulara karşı tercih veya kaçınma davranışını göstermektedir. Koku testinin özel arena ve koku alma kullanımına göre en büyük avantajı, tanıdık bir arena kullanması ve bu nedenle hızlı tamamlama ve basit kurulum olmasıdır.

Buna ek olarak, laboratuvarımdaki öğrenciye göre prosedürün Emmanuel Abry olacağını gösteren Ucuz donanım kullanıyor. Bu deney için üç ila beş aylık erkek, C 57 siyah, altı vahşi tip ve transgenik fare kullanın. Bu gösteri, iki nakavt hattı ve çöp arkadaşı kontrolleri kullanır.

Deneysel alanlar için, üç santimetre yatak takımına sahip temiz, sterilize edilmiş fare kafesleri kullanın. Ardından, kamera kurulumunu hazırlayın. Özelleştirilmiş bir tripod yuvası üzerinde kafes tabanının 58 santimetre yukarısına yerleştirin.

Kafesin konumunun nerede olması gerektiğini belirtmek için tezgah üzerinde bazı işaretler yapın. Ortada bir görüntü için, kamerayı saniyede yaklaşık 15 kare hızında 320 x 240 piksel video kaydedecek şekilde ayarlayın. Testi hazırlamak için uygulayıcı, mümkün olduğunca her kokunun konsantrelerini çözücü içinde saklayın.

Tercih testi için, fıstık yağında hacimce ağırlıkça %10'luk bir fıstık ezmesi çözeltisi yapın. Kaçınma testi için,% 98 ila metil bütirik asit çözeltisine sahip olun. Duyarlılık testi için, testten bir ila iki gün önce aynı suştaki bir fareden kadın idrarını toplayın.

Bir dişiyi göbeği kafes ızgarasının üzerinde olacak şekilde tutun ve idrar damlalarını plastik bir tabağa toplayın. Normalleştirmek için birkaç dişiden örnekler toplayın. Bireysel değişkenlik için, tüm numuneleri 1,5 mililitrelik bir tüpe çekin ve eksi 20 santigrat derecede saklayın.

Hayvanları alışkanlık haline getirmeye başlamak için, birini temizlenmiş bir kafese koyun ve keşfetmesine izin verin. Beş dakika boyunca test kafesinin ortamı ev kafesininki gibi olmalıdır. Alışma aşamasını her test gününde bir kez tekrarlayın, alışma süresi sona erdiğinde, kayda başlayın ve 60 mikrolitre hoş bir koku pipetleyin.

Bu durumda, fıstık ezmesini karşı duvardaki bir duvara sürün, aynı miktarda su pipetleyin. Nötr bir koku, damlaları her duvara yaklaşık 10 santimetre uygulayın. Şimdi hayvanın iki dakika boyunca keşfetmesine izin verin ve ardından kaydı durdurun ve fareyi ev kafesine geri koyun.

Test edilecek her fare ile işlemi tekrarlayın. Her zaman yeni test kafesleri kullanmak. Üç ila beş gün Tüm tercih testlerini yaptıktan sonra, yeni bir test kafesi kullanarak kaçınma testini gerçekleştirin.

Her fare için kaçınma testini gerçekleştirin. Çekim testinde olduğu gibi, hoş kokuyu yalnızca iki metil bütirik asit olan kaçınma kokusuyla değiştirin. Duyarlılık testi için, aynı fare için denemeler arasında bir kafes yeniden kullanılabilir.

Bu yüzden kafesin su tarafını işaretleyin ve denemeler arasında kısa duvarları %70 etanol ile ıslatılmış kağıtla temizlemeye hazırlanın. Deney gününde, on kat seyreltme serisi ile dört konsantrasyonda idrar yapın. Kaçınma testi gibi çift damıtılmış su kullanarak, her hayvanı beş dakika boyunca test kafesine alıştırın.

Daha sonra her fareyi ilk başta en yüksek seyreltmede, yani bir ila 10.000 arasında idrara maruz bırakın. Kayıt sırasında idrar seyreltmesini test kafesine uygulayın ve karşı duvara su uygulayın. Diğer testler için yapıldığı gibi, hayvanın keşfetmesine izin verin.

İki dakika boyunca. Daha sonra hayvanı temiz bir fare kafesine aktarın. Tüm hayvanlar en düşük konsantrasyonu deneyimledikten sonra, tüm test kafesi duvarlarını temizleyin ve bir sonraki en konsantre idrarı kullanarak testi her fare üzerinde tekrarlayın.

Saf idrar test edilene kadar bu işleme devam edin. Bir deney için tüm verileri topladıktan sonra, açıklanan protokolleri kullanarak metin protokolünde ayrıntıları sağlanan ayarlama ve işleme ayrıntıları için resim J'deki videoları açın. İki farklı nakavt hattı.

Grup B ve C, çöpten yapılan kontrollerle karşılaştırıldı, grup A.A.Yönsüz öğrenci T-testi, eşit veya eşit olmayan varyanslı genotipler içinde koku ve su arasında geçirilen süreyi karşılaştırır. Tek yönlü bir inova kullanarak genotipler arasındaki davranışı karşılaştırın. Her iki deney grubu, B ve C, çekici kokuyu tercih etmedi Kaçınma testinde, itici iki metil bütirik asit kokusuna karşı yanıt, grup A ve B için beklendiği gibi oldu, ancak grup C bu kokuya karşı kaçınma davranışı göstermedi.

Duyarlılık testinde, idrarla geçirilen sürenin su ile geçirilen süreden, tercih edilen idrarın suya bir ila 1000 seyreltmede çıkarılmasıyla çekim eşiği elde edildi. Her iki deney grubu da, B ve c'nin bir tercih göstermek için 100 kat daha fazla konsantrasyona ihtiyacı vardı. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa birkaç saat içinde yapılabilir, daha sonra bu prosedürü takiben, koku alma plastisitesini ve öğrenmeyi araştırmak için koku alma öğrenme ve sönme gibi diğer yöntemler de yapılabilir.