Name: Fare Akciğer Kanseri Araştırma Faydalı instillation ve Fiksasyon Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Öğrenin fare akciğer kanserinde hücre enjeksiyonu, doku fiksasyonu ve akciğer hacmi ölçümü için güvenilir yöntemler. Bu protokoller onkoloji ve patoloji araştırmalarında tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Aşağıdaki protokol 20-35 g farelerde iyi çalışan bir sistemi tarif eder. Yöntem basitçe kateter boyutunu değiştirerek büyük veya daha küçük farelere adapte olabilir. Tüm hayvan protokolleri Johns Hopkins Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. 1. Akciğer damlatma <ol><li> Entübasyon için kullanılacak ticari 1-inç uzunluğunda 20 g intravenöz kanül Select. </li><li> El ile Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, uç bir hafif bir eğrilik oluşturmak için büküm kateter ucunu değiştirin. </li><li> IP ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (15 mg / kg) karışımı ile fare enjekte anestezisi, ve refleks hareketinin olmaması ile anestezi teyit etmektedir. Hemen anestezi sonrası gözlerde veteriner merhem sürün. Anestezi gözleri veteriner merhem uygulamak ve cerrahi sonrası ve aşılama analjezi için Karprofen (5-10 mg / kg SQ) vermek hemen sonra. </li><li> Mou yerleştirineğimli bir platform üzerinde se yatar. Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi, ameliyat dikiş ipliği döngüler ile büyük bir ofis birleştirici çok iyi işler bantlanmış. </li><li> Boyun ve temiz ventral bölümünü Tıraş ve% 70 alkol ile boyun alanı dezenfekte edin. Yeni latex ve pudrayla eldivenlerle,% 70 alkol ile dezenfekte cerrahi aletler kullanmayın. </li><li> Kullanımı keskin makas yaklaşık 12 mm alt kesici altında boyun küçük bir cerrahi kesi yapmak. </li><li> Bir forseps yavaşça boyun cildi çekme ile trakea ventral duvarı görülebilir kaudale kadar. </li><li> Yavaşça dilini geri çekin ve fare ventral yüzeyine doğru eğik bükük ucu ile kanül yerleştirin. 1.4 gibi boyun cilt üzerinde nazikçe çekin ve trakea içine kanül yerleştirin. NOT: Küçük bir uygulama ile, kateter trakea aşağı hareket görünür olacaktır. O yemek borusu giderse, o zaman kateterin hareketinin hiçbir görsel nişan olacak. Hiçbir kesiTrakea yapılır. </li><li> Kateter boyun trakea görüldüğü sonra, güvenilir olmak o yaklaşık 5 mm ileri ses telleri geçti ama yine de karinanın üstünde. </li><li> Bir jel yükleme pipet ile kateter içinden enjekte edilerek sıvının 50 ul kadar aşılamak hazırlayın. Diş hub ucu yerleştirin, ancak farenin nefes ucu senkron sıvı hareketini gözlemlemek için dikkatle göz enjekte etmeden önce. Ardından instillate enjekte. </li><li> 1 ml şırınga ile hemen akciğerlerde sıvı derin dağıtma yardımcı olmak için kateter yoluyla akciğerlere hava 0,6 ml nispeten hızlı enflasyonu yapın. Kanül kaldırın. </li><li> Kanül kaldırın. </li><li> Vetbond için paket eki talimatlarına uygun olarak, küçük bir cerrahi yara kapatma siyanoakrilat yapıştırıcı madde küçük bir miktar kullanın. Bireysel kafeslerde fareler yerleştirin ve uyanmak kadar görsel onları izlemek ve discomf herhangi bir gösterge olmadan normal davranmayaort. </li></ol> 2. Akciğer Fixation Not: tüm deney prosedürleri bir farede yapılır, akciğerler formaldehid (veya arzu edilen herhangi fiksatif) ile sabitlenmesi ile histolojik işlem için hazır hale edilebilir. <ol><li> Bir IACUC kabul edilebilir prosedüre fare Kurban. Videoda gösterilen temsili fare, bir anestezi fare servikal dislokasyon kullanılır. </li><li> Cerrahi, trakea ventral tarafında ortaya küçük bir kesim yaparak ve trakea içine 18 G saplama iğne ucu takarak, ve iplik ile bağlayarak (zaten bitmiş değilse) bir trakeostomi gerçekleştirin. </li><li> Dikkatle, orta hat kesi ile göğüs kafesi açmak için diyaframı kesip, ve akciğerler açığa lateral göğüs duvarları kaldırmak. </li><li> Formaldehit içeren bir halka standında bir rezervuar iğnenin diş ucunu. Şekil 3 Bkz. </li><li> 25 cm MM&#39;nin seviyesinden formaldehit üst yüzeyini ayarlamase. Şekil 3 Bkz. Sonraki bir vana sonuna dışarı akışkan çalıştırarak tespit tüp hava olduğundan emin olun. Rezervuar tüp trakea kanül diş ucunu. Formaldehit ile akciğerlerini şişirmek için musluğunu açın. En az 20 dakika boyunca basınç altında akciğerlere bırakın. </li><li> Formaldehit ile akciğerlerini şişirmek için musluğunu açın. En az 20 dakika boyunca basınç altında akciğerlere bırakın. </li><li> Sonra, saplama iğnenin ucunun ötesine trakea kapalı kravat. Bu uncannulated trakea daha açığa iğne geri yavaşça çekin yardımcı olabilir. Güvenli bağlı olduğunda, stopcock çıkarın. </li><li> Dikkatle akciğerleri teşrih. </li><li> Gecede formaldehit içinde akciğerleri yerleştirin. Daha uzun zaman ince ve bazı lekeler ya da prosedürler belirli süreleri belirtebilirsiniz. Ayrıca bu gibi z-düzeltme başka bir sıvı sabitleyici, uygulaması ve daldırma için kullanılabilir. </li><li> Daha fazla işlenmeden önce histolojik ölçmekBir sonraki açıklandığı gibi sabit akciğer hacmi. </li></ol> Sabit Akciğer Hacim 3. Ölçüm <ol><li> . Şekil 4&#39;te gösterildiği gibi Archimedes prensibi kullanılarak akciğer hacmini ölçmek formaldehit sabit akciğer çıkarın ve kalp ve herhangi bir diğer non-akciğer dokusu disseke. </li><li> Tamamen su altında akciğerleri tutmak için kullanılan bir önce inşa basit ev yapımı tel destek aygıtı kullanın. NOT: Bu cihaz kullanılıyor hangisi denge ile uyumlu hale gerekmektedir. Şekil 5&#39;te gösterilen tipik bir cihaz, plastik pipet ve ince (20 G) telden yapılır. Bu sistem videoda kullanılan denge ile iyi çalışır, ancak kolayca en Laboratuvar teraziler adapte olabilir. </li><li> Su içinde bir yerde destekleyici kafes denge ve dara su ≈200 ml beher yerleştirin. . Şekil 6&#39;ya bakın metal kafes çıkarın; Su yüzeyinde akciğer koyun ve su altında basınkafesi ile. </li><li> Denge üzerinde ağırlığını kaydedin. Bu sayı, su yerinden hacmini yansıtır ve dolayısıyla akciğer hacminin doğrudan bir ölçüsüdür. Emin akciğer veya dikiş veya kenarlarına veya beher alt değmeyecek tel kafes herhangi bir bölümünü yapmak için dikkatli olun. </li><li> Doğruluk için, bu ölçümü tekrarlayın. Bir doku üzerinde su akciğer ve kurutun. Yerinde tekrar kafes ile beher dara ve akciğer hacim ölçümü tekrarlayın. İki hacim ölçümleri daha sonra ortalaması alınmalıdır. Not: akciğerler fazla yaklaşık bir hafta için formalin içerisinde kalır, akciğerlerdeki hava sıvı içinde çözülmektedir. Bu durumda, akciğer batar, bu nedenle batık akciğer tutmak için Şekil 5&#39;te olduğu gibi herhangi bir cihazı kullanmak için artık gerekli değildir. Bu durumda hacmi, Şekil 4 &#39;de gösterildiği gibi tamamen daldırılmış kadar ameliyat dikiş ipliği diziden biri ile akciğer tutarak, sadece ile ölçülebilir. </li></ol>

<ol><li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).</li>
<li>Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cellular+profile+and+lung+function+with+repeated+bronchoalveolar+lavage+in+individual+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice.</a> Physiol Genomics. 2, 29-36 (2000).</li>
<li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation%3A+description%2C+evaluation+and+comparison+with+transillumination%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory animals. 42, 222-230 (2008).</li>
<li>Spoelstra, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory%22%5BJournal%5D)">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Laboratory. 41, 128-135 (2007).</li>
<li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+retrograde+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">A technique for retrograde intubation in mice.</a> Lab animal. 35, 39-42 (2006).</li>
<li>Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+endotracheal+intubation+of+mice+and+rats+used+in+imaging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+topics+in+laboratory+animal+science+%2F+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 44, 52-55 (2005).</li>
<li>Vergari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+of+orotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+review+for+medical+and+pharmacological+sciences%22%5BJournal%5D)">A new method of orotracheal intubation in mice.</a> European review for medical and pharmacological sciences. 8, 103-106 (2004).</li>
<li>Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video-assisted+orotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Video-assisted orotracheal intubation in mice.</a> Laboratory animals. 37, 204-206 (2003).</li>
<li>Hastings, R. H., Summers-Torres, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+Laryngoscopy+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+topics+in+laboratory+animal+science+%2F+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Direct Laryngoscopy in Mice.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).</li>
<li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society%3A+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).</li>
<li>Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodology+for+the+measurement+of+mucociliary+function+in+the+mouse+by+scintigraphy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy.</a> J Appl Physiol. 90, 1111-1117 (2001).</li>
<li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50601(2013).</li>
<li>Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).</li>
<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).</li>
<li>Lum, H., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+10%25+formalin+fixation+on+fixed+lung+volume+and+lung+tissue+shrinkage%5BTitle%5D)+AND+%22American+Reveiw+of+Respiratory+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage.</a> American Reveiw of Respiratory Diseases. 132, 1078-1083 (1985).</li>
<li>Bishai, J., Fields, M. J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Mouse+Lung+Volumes+Inflated+with+Air+and+Instilled+Fixatives%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Am+Thorac+Soc%22%5BJournal%5D)">Comparison of Mouse Lung Volumes Inflated with Air and Instilled Fixatives.</a> Proc Am Thorac Soc. 3, A549(2006).</li>
<li>Mitzner, W., Brown, R., Lee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurement+of+lung+volumes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">In vivo measurement of lung volumes in mice.</a> Physiol Genomics. 4, 215-221 (2001).</li>
</ol>

Burada anlatılan prosedürler çeşitli avantajları vardır. İlk Gerekli ekipman basit ve ucuzdur. İkincisi, entübasyon hızla birkaç hatalar yapılabilir. Üçüncüsü, sabit akciğer hacmi sabit basınçta akciğerlere düzeltmek ve daha sonra ölçebilme akciğer 10 yapıların veya hücrelerin düzgün ölçümü sağlar. Entübasyon için bir olası olumsuz küçük cerrahidir. Bu 2. instillation gerekiyorsa prosedürü tekrarlayın yeteneğini sınırlayabilir. Ancak, yapıştırıcı dikkatli cerrahi ve uyg...

Bir takım nedenlerden, akciğer kanseri yaygın farede çalışılmamıştır. Bunun bir nedeni, akciğere erişim in vivo olarak çok zordur ve sabit akciğer kantitatif analiz genel olarak yapılmaz olmasıdır. Bu yazıda anlatılan yöntemler bu durumu düzeltmek için tasarlanmıştır. Hedefler burada büyük akciğer kanseri ya da diğer patolojiler ile kurulum ve fare akciğerlerin analizine yardımcı olacak basit yöntemler tarif vardır. Bu yaklaşımlardan hiç biri bütünüyle yeni olmakla birlikte, burada tarif edildiği gibi basitleştirilmiş biçimde tek başına yöntemlerle bir araya sunulmamıştır. Öncelikle uzunlamasına çalışmalarda bireysel farelerde tekrar akciğer fonksiyonunu veya bronkoalveoler lavaj yapmanın amacıyla fare akciğer entübasyon için yöntemler tarif etmişlerdir el yazması bir dizi olmuştur. Orijinal kağıt beri, mous farklı yaklaşımlar tarif var diğer bazı kağıtlar olmuşture entübasyon 1 -9. Bu yöntemlerin tümü başarıyla kullanılabilir olsa da, genellikle önemli bir eğitim gerektirir ve bir nontrivial başarısızlık oranı olmadan sık sık değildir. Buna ek olarak, akciğer fonksiyon ölçümleri gerçekleştirmek amacıyla, kanül herhangi bir hava kaçağı olmaması için yeterince sıkı bir şekilde uyacak trakea gerekmektedir. Ancak, entübasyon başka pratik kullanım akciğere doğrudan belirli maddeler (kanser hücrelerini ya da diğer hakaret) ya da tedavi edici ilaçlar teslim etmektir. Böyle bir prosedür sıkı uydurma kanül ne de herhangi bir gelişmiş solunum fonksiyon ekipman gerektirmez. Burada gösterilen bu yöntemin yeni özelliği yemek borusu giren kanülün herhangi imkanı olmadan entübasyon izin veren küçük bir cerrahi prosedür gerektirir. Bu basit yaklaşım, nispeten daha az eğitim veya deneyime sahip başarılı entübasyon sağlar. En çok 30 fareler / saat sıfıra yaklaşan bir başarısızlık oranı ile bu yaklaşımı kullanılarak tedavi edilebilir. T kezO fareler yaralı ya da kanserli akciğerler sonra histolojik ve patolojik analiz için kaldırılabilir, kurban edilecek hazırız. Ancak, düzgün diğer akciğerler ile karşılaştırıldığında herhangi bir histolojik değişkenleri ölçmek için, bu tespit prosedürleri standardize ve düzgün bir şekilde monte akciğer hacmini 10 ölçmek esastır. Bu yazıda ayrıntılı olarak standardize tespit usullerinin yanı sıra sabit akciğer hacmini ölçmek için bir yol sağlayan basit yordamlar açıklanır. Böyle bir hacim tespiti olmadan, sadece göreli yoğunlukları 10 ölçülebilir çünkü hacim, histoloji miktarının önemli bir ölçümdür. Akciğer hacmi bilinmektedir Ancak, bir kez hücreler ve akciğerde diğer yapısal ölçümler mutlak ölçüm daha sonra ölçülebilir.

<table><tbody><tr><td>Laboratuvar</td><td>Terazisi Ohaus</td><td>Adventurer Pro Model AV 313&nbsp;</td><td>1-300 g aralığına sahip olan diğer teraziler kullanılabilir</td></tr><tr><td>20 g Luer intravenöz kateter</td><td>Insylte</td><td></td><td>Diğer birkaç olası satıcı, ör., Jelco Optiva</td></tr><tr><td>500 ml laboratuvar şişesi</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Diğer birkaç olası satıcı</td></tr></tbody></table>

fare akciğer kanseri araştırma faydalı instillation ve fiksasyon yöntemi

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Yaralanmasına veya fareler öldürmeden doğrudan akciğere canlı ajanlar, hücreleri veya kimyasal aşılamak yetenek akciğer kanser araştırmalarında önemli bir araçtır. Solunum fonksiyon ölçümleri için fareler entübe nasıl gösteren yayınlanmış bir dizi yöntem olmasına rağmen, hiçbiri farelerin büyük kohortlarda hızlı trakeal damlatma potansiyel sorunsuz vardır. Bu yazıda, basit ve hızlı bir yöntem etkin bir biçimde bu tür instilasyonları yürütmek için bir müfettiş sağlayan tarif edilmektedir. Yöntem, herhangi bir özel alet veya aydınlatma gerektirmez ve çok az uygulama ile öğrenilebilir. Bu, bir fare anestezi trakea görselleştirmek için boyun küçük bir kesi yapıyor ve daha sonra doğrudan bir intravenöz kateter takmadan içerir. Ufak bir kesik hızlı bir doku yapışkanı ile kapatılır ve farenin iyileşmelerine izin verilir. Yetenekli bir öğrenci ya da teknisyen 2 dk / fare ortalama hızında instilasyonları yapabilirsiniz. T kezKanser kurulduğunda da akciğerlere kantitatif histolojik analiz için bir ihtiyaç sık sık vardır. Geleneksel fiksasyon sırasında akciğer enflasyonu standardize etmek zahmet etmeyin, genellikle patolog ve analizler genellikle oldukça öznel olabilir bir puanlama sistemine dayanmaktadır. Bu bazen bir akciğer tümörü büyüklüğü brüt tahminler için yeterli yeterli olabilirken, akciğer yapısı veya hücrelerin herhangi bir uygun stereolojik miktar tekrarlanabilir tespit prosedürü ve sonraki akciğer hacmi ölçümünü gerektirir. İşte biz de baskı altında akciğerleri sabitleme ve daha sonra doğru sabit akciğer hacmini ölçmek için basit, güvenilir prosedürler açıklanmaktadır. Tek şart, 1 mg-300 g aralığında doğru olan bir laboratuar dengedir. Böylece burada sunulan prosedürleri büyük ölçüde farelerde akciğer kanserlerini oluşturmak tedavi ve analiz etme yeteneğini geliştirmek olabilir.

Prosedür, tek başına herhangi genel sonuçlara yol etmez ilk protokolde tarif eder. Bu, yalnızca doğrudan nefes borusu içine maddeleri aşılamak için çok güvenilir bir araç tarif eder. 7 trypan blue Burada anlatılan yöntemle damlatıldı olan bir akciğer bir örneğini göstermektedir. Trakea veya farelere 11,12 doğrudan verilen diğer boyalar ya da izleyiciler ile görülmüştür ne benzer boya yaygın dağıtım vardır. Biz de sırasıyla yaygın fibrozis veya amfizem, sonuçlanan akciğer, içi...

Bu yazının amacı, büyük ölçüde akciğer kanseri ya da diğer patolojiler ile kurulum ve fare akciğerlerin analizine yardımcı olacak basit yöntemler tarif etmektir. Biz sadece ve güvenilir akciğer instilasyonlar, fiksasyon ve akciğer hacim ölçümleri yürütmek için 3 protokol sunuyoruz.

Fare Akciğer Kanseri Araştırma Faydalı instillation ve Fiksasyon Yöntemi

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Burada gösterilen prosedürün genel amacı, akciğer kanseri veya diğer akciğer patolojileri olan farelerin kurulumu ve analizine büyük ölçüde yardımcı olacak basit yöntemleri göstermektir. İlk olarak, kanser hücrelerinin veya kimyasal tedavilerin doğrudan akciğerlere verilmesi yöntemi sunulmaktadır. Ardından, ölüm sonrası tespit ve akciğer hacmi ölçümleri açıklanmaktadır.Bu işlem, öncelikle farenin hafifçe modifiye edilmiş bir intravenöz kanül ile entübe edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, ilgilenilen sıvı kanül aracılığıyla akciğere verilir. Daha sonra tüm in vivo deneyler tamamlandığında ve fare öldüğünde.Akciğerler, fiksasyon için bir rezervuara bağlanır. Son adımda, akciğerler diseke edilir ve akciğer hacmi ölçülür. Nihayetinde, fikse edilmiş akciğer dokusunun kantitatif morfolojisi, deneysel akciğer örnekleri arasında karşılaştırılabilir.Bu yeni yerleştirme tekniğinin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, yöntemimizle kanülün trakea içerisine yanlış yerleştirilme ihtimalinin neredeyse hiç olmamasıdır. Akciğerlerin sabit basınç altında fikse edilmesi prosedürü basit olup farklı akciğerlerde tutarlı bir fiksasyon sağlar. Son olarak, fikse edilmiş fare akciğer hacmini ölçme yöntemi, akciğer hücrelerinin ve yapısal elementlerin miktarının belirlenmesi için uygun normalizasyona olanak tanır.Bu yöntemi uygulayın. İlacın veya ilgilenilen diğer ajanın akciğere doğrudan iletimini ve akciğerin doğru ve kesin bir şekilde ölçülmesini sağlayın. İşleme başlamadan önce, ticari olarak satılan bir inç uzunluğundaki 20 gauge intravenöz kanülün ucunu manuel olarak hafif bir kavis oluşturacak şekilde bükün.Ardından, ayak parmağı sıkıştırma yöntemine yanıt alınmadığıyla anestezi onaylandıktan sonra, yetişkin bir farenin gözlerine merhem sürün ve fareyi, büyük bir ofis klasörü ve sütür halkaları kullanarak eğimli bir platform üzerinde sırtüstü pozisyonda sabitleyin. Boynun ventral kısmını tıraş edin ve cildi %70 alkol ile dezenfekte edin. Daha sonra keskin bir makas kullanarak, alt kesici dişin yaklaşık 12 milimetre altına boyun bölgesinde küçük bir cerrahi insizyon yapın.Ardından, trakenin ventral duvarı görünene kadar boyun derisini pensle nazikçe çekin. Daha sonra dili hafifçe geri çekin ve bükülmüş ucu farenin ventral yüzeyine doğru eğik olacak şekilde kanülü yerleştirin. Az önce gösterildiği gibi, boyun derisini tekrar nazikçe çekin.Kateter trakeada gözlemlendiğinde kanülü trakeaya yerleştirin, vokal kordları geçmek için kateteri yaklaşık beş milimetre daha ilerletin. Şimdi, 50 µL instillat yüklü bir jel yükleme pipetinin ucunu kateterin luer bağlantı noktasına yerleştirin. Sıvının uçtaki hareketinin farenin solunumuyla senkronize olduğunu doğrulayın.Ardından, bir mililitrelik bir şırınga kullanarak installatı enjekte edin. Sıvının dağılmasına yardımcı olmak ve akciğerleri derinleştirmek için kateter aracılığıyla akciğerleri derhal 0.6 mililitre hava ile şişirin. Sonrasında kanülü çıkarın.Cerrahi yarayı az miktarda siyanoakrilat yapıştırıcı ile kapatın ve fareyi, tamamen iyileşene kadar izleneceği şekilde münferit bir kafese yerleştirin. Son deneysel zaman noktasından sonra, trakenin ventral tarafını açığa çıkarmak için hayvanın boynunda küçük bir kesi yapın. Ardından, trakeanın içine 18 gauge küt uçlu bir iğne ucu yerleştirin.İpliği kullanarak iğneyi trakeaya bağlayın ve orta hat kesisi ile toraksı dikkatlice açın. Ardından diyaframı kesin ve akciğerleri açığa çıkarmak için yan göğüs duvarlarını kaldırın. Sonrasında, stopkokun ucundan formaldehit akıtarak tespit tüplerinde hava kalmadığından emin olun.Ardından, formaldehit rezervuarını ve dolu tüpü doğrudan trakeostomi iğnesinin lure ucuna bağlayın. Formaldehitin üst yüzeyini ağız seviyesinin 25 santimetre üzerine ayarlayın ve akciğerleri tespit çözeltisiyle şişirmek için musluğu açın. Akciğerleri en az 20 dakika boyunca basınç altında bıraktıktan sonra, iğnenin ucundaki kısa kısmın ötesinden trakeayı bağlarken, kanülsüz trakeanın daha fazlasını açığa çıkarmak için iğneyi yavaşça geri çekin.Trake güvenli bir şekilde bağlandığında, musluğu çıkarın ve akciğerleri dikkatlice diseke edin. Ardından akciğerleri gece boyunca formaldehit içinde bekletin. Burada, sabit akciğer hacmi belirlenirken akciğerleri yerinde tutmak için plastik pipetler ve ince 20 gauge telden yapılmış tipik bir düzenek gösterilmiştir; önce sabit akciğer hacmini ölçün, ardından kalbi ve akciğer dışındaki diğer tüm dokuları akciğerlerden diseke edin.Ardından, tel destek düzeneği ile birlikte yaklaşık 200 mililitre su içeren bir beheri teraziye yerleştirin ve cihazı daralayın. Sonra düzeneği kaldırın. Akciğeri su yüzeyine yerleştirin ve dokuyu suyun altına bastırmak için düzeneği kullanın.Akciğer sütürünün veya cihazın herhangi bir parçasının beherin kenarlarına veya tabanına değmediğinden emin olarak, ağırlığı terazide kaydedin. Bu sayı, yer değiştiren su hacmini yansıtır ve dolayısıyla akciğer hacminin doğrudan bir ölçüsüdür. Ardından akciğeri bir kurulama kağıdıyla kurulayın, beheri cihazla tekrar doldurun ve akciğer hacmi ölçümünü tekrarlayın.Ardından, bu iki hacim ölçümünün ortalaması alınmalıdır. Az önce gösterildiği gibi tripan mavisi instile edilmiş bir akciğer örneği gösterilmiştir. Fare trakesine doğrudan uygulanan diğer boya izleyicileri için gözlemlenenlere benzer şekilde, boyanın yaygın dağılımına dikkat edin. Bu prosedürü uygularken, kanülün yerleştirilmesi sırasında dikkatli olmayı ve ucunu ventral taraf yukarıda tutmayı unutmamak önemlidir.Burada tarif ettiğimiz teknikler akciğer kanseri çalışmalarında faydalıdır, ancak aynı zamanda farelerdeki diğer çoğu akciğer hastalığı modeli için de uygulanabilirler.

instillation-and-fixation-methods-useful-in-mouse-lung-cancer-research

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Intratrakeal instilasyonlar doğrudan ciğerlerine çözünenlerin sağlar. Bu prosedür, akciğer distal bölgeye instillate teslim hedefler ve bu nedenle sık sık alveoller okuyan yönelik çalışmalar dahil edilmiştir. Biz farelerde intratrakeal instilasyonlar gerçekleştirmek için ayrıntılı bir yaşam protokolü sağlar.

Fare Akciğer içine çözünenlerin Doğrudan Trakeal damlatma

Bu çalışmada bildirilen yeni protokol kombine farelerde tek hücreli çözünürlükte metastaz seçici algılama...

Kombine tarafından Farelerde Tek Hücre çözünürlükte Akciğer Metastaz Geliştirilmiş Görselleştirme<em&gt; In-situ</emAkciğer Doku ve X-Gal Boyanma&gt; Perfüzyon<em&gt; LacZ</em&gt;-Tagged Tümör Hücreleri

Bu videoda, hava yollarını fibrozise neden olan ajan-bleomisin ile önceden koşullandırarak murin akciğerlerinde akciğer adenokarsinomu hücrelerini aşılamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, akciğer kanseri hücrelerinin murin akciğerlerine ortotopik aşılanmasını önemli ölçüde...

Adenokarsinom Aşılaması: Kanser Hücrelerini Murin Akciğerlerine İmplante Etme Yöntemi

Bu videoda, akciğer damlatma, fiksasyon ve akciğer hacmi ölçümü için soluk borusuna sıvı eklemenin basit ve güvenilir bir yöntemi açıklanmaktadır.

Akciğer İnstilasyonu ve Fiksasyonu: Sabit Akciğer Hacmini Ölçmek için Trakeaya Sıvı Verilmesi ve Akciğerlerin Sabitlenmesi

Bu yazıda akciğer fonksiyonu ölçümleri veya fareler kurtarmak için ve daha sonraki dönemlerde de incelenebilir sağlar pulmoner instilasyon için fare entübasyon bir striaghforward ve etkili bir yöntem açıklanır. Işlem doğrudan soluk borusu yanması pahalı olmayan bir fiber optik ışık kaynağı içerir.

Fare Akciğer Entübasyonun Basit Bir Yöntem

Biz önceden airways yaralanma ile Klima tarafından fare ciğerlerine akciğer kanser hücrelerinin orthotopic engraftment önemli ölçüde geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım aynı zamanda akciğer microenvironment, metastatik yayılması, akciğer kanseri komorbiditeler içinde stromal etkileşimleri çalışmaya uygulanabilir ve daha verimli bir şekilde hasta oluşturmak için xenografts türetilmiş.

Bleomycin ile fareler Airways önceden Merkezi Klima Orthotopic akciğer kanseri hücre Engraftment verimliliğini artırır

Burada sunulan amfizem bir fare modeli akciğer örneklerinin histolojik değerlendirilmesi için istikrarlı bir durum oluşturur akciğer fiksasyonu için yararlı bir protokoldür. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç ile birçok akciğer düzeltebilirsiniz.

Farelerde AmfizemIn Değerlendirilmesi İçin Sabit Basınç Altında Akciğer Fiksasyonu

Farelerde deneysel ajanlar intratracheal (It) yönetimi genellikle distal akciğerlere asimetrik teslim sonuçlanır.  Bu raporda, her akciğeri operatif olmayan canlı fareler içinde cannulate için doğrudan intrabronchial (ıB) yaklaşımı açıklanmaktadır.  Bu yaklaşım, bir akciğer için seçici olarak ajanlar yönetmek için kullanılabilir ya da her iki akciğerde simetrik Ajan teslim geliştirmek için adapte olabilir.

Fare akciğer Içinde seçici Ajan biriktirme geliştirmek için doğrudan Intrabronchial yönetim

Bu yöntemin amacı, akciğer tümörü patolojisinin incelenmesi ve akciğere metastazların değerlendirilmesi için fare akciğerlerinin perfüzyonu, enflasyonu ve fiksasyonu için basit ve verimli bir yöntem sunmaktır.

Tümör Histolojisi için Fare Akciğerinin Perfüzyonu ve Enflasyonu

Floresan mikroskobu ile analiz için akciğer hava yollarındaki mantar sporlarının doğal yerleşimini koruyan bir mantar patogenez modeli için bir yöntem sunuyoruz.

Hava Yollarındaki Mantar Sporlarının Mekansal Dinamiklerini Koruyan Murin Akciğerlerini Görüntülemek için Etkili Yöntem

Akciğer kanseri için yeni tedaviler geliştirmenin en büyük zorluğu, bölgesel hastalık metastatik hastalığa ilerlerken tümör mikro çevresinin modellenmesini içerir. Burada, zaman içinde hastalığın in vivo olarak izlenmesine izin veren ortotopik bir sinjeneik akciğer kanseri modeli oluşturmanın basit bir yöntemini açıklıyoruz.

Akciğer Kanserinin Sinjeneik Ortotopik Fare Modelini Oluşturmak için Minimal İnvaziv Bir Yöntem

Öğrenin fare akciğer kanserinde hücre enjeksiyonu, doku fiksasyonu ve akciğer hacmi ölçümü için güvenilir yöntemler. Bu protokoller onkoloji ve patoloji araştırmalarında tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

Fare Akciğer Kanseri Araştırma Faydalı instillation ve Fiksasyon Yöntemi

Daha fazla video keşfet