Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli

Bu prosedürün genel amacı, stabil bir beyin enfarktüsü ile basit bir trombotik inme modeli oluşturmak ve doku plazminojen aktivatörünün veya TPA tedavisinin koruyucu etkilerini değerlendirmektir. İlk olarak, sağ ortak karotid arterin (RCCA) çift ligasyonu ve trombozun indüklenmesi için ligasyon uygulanmış hayvanın hipoksik koşullara maruz bırakılması yoluyla geçici serebral hipoksi iskeminin (THI) indüklenmesi gösterilmektedir. 30 dakikalık hipoksik durumdan sonra, karotid arter üzerindeki iki düğüm çözülür.

Son adımda, TPA tedavisinin uygulanması ve etkilerinin değerlendirilmesi gösterilmektedir. Alternatif olarak, serebral kan akışının gerçek zamanlı kaydı, trombozun oluşumu ve damar tıkanıklığının derecesi incelenebilir. Bu yöntem, yetişkin farelerde kendi koagülasyon sistemlerini kullanarak trombotik inme oluşturulmasına olanak tanır.

Bu modeli, hipoksik iskemi koşulları altında beynin kendi kan akışını nasıl düzenlediğini incelemek için kullanmak istiyoruz. Ayrıca, trombotik tedaviyi nasıl geliştirebileceğimizi araştırmak için de kullanacağız. Beyin enfeksiyonu sırasında doğru vücut sıcaklığını korumanın ve düzenli solunumu sağlamanın zor olabilmesi nedeniyle, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir.

İndüksiyon adımları İşleme başlamadan en az 15 dakika önce. Cerrahi yatağı bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin, 37 °C'ye ayarlayın ve üç ml'lik bir şırınga gövdesinden yapılmış bir boyun rulosunu yatağın üzerine yerleştirin. Hipoksi sistemini, %92,5 azot ile dengelenmiş %7,5 oksijen içinde %2 isofloran verecek şekilde ayarlayın ve sıcaklık kontrolörlerini düzenleyin.

10 ila 13 haftalık, 22 ila 30 gram ağırlığında erkek bir C 57 black six faresini cerrahi yatağa yerleştirin. Toe pinch yöntemiyle anesteziyi doğruladıktan sonra, hayvanın gözlerine pomad uygulayın. Dört uzvu boyun boyunca gerin, yuvarlayın ve tıbbi bantla sabitleyin.

Ardından, bir tüy dökücü krem kullanarak hayvanın boynundaki tüyleri temizleyin ve cerrahi alanı sterilize edin. Şimdi cerrahi yatağı bir diseksiyon mikroskobunun altına taşıyın ve orta hat boyunca deride 0,5 santimetrelik sağ servikal insizyon yapın. İnce uçlu bir pens kullanarak, sağ ortak karotis arterini açığa çıkarmak için trake ve kası birbirinden ayırın ve arterin altına önceden kesilmiş iki adet 5-0 ipek sütür yerleştirin.

Karotis arterini vagus sinirinden dikkatlice ayırın; sağ ortak karotis arterine (RCCA) önceden yerleştirilmiş, serbest bırakılabilir iki adet 5-0 ipek sütür uygulayın. Ardından, cildi kapatmak için 4-0 naylon monofilaman sütürler kullanın ve fareyi hızla hipoksi sistemine aktarın. Hipoksi uygulaması boyunca 37,5 °C vücut sıcaklığının korunması için hayvanın burnuna ve ağzına yüz maskesini ve rektal probu yerleştirin.

30 dakika sonra ısıtıcı lambaları ayarlayın. Fareyi tekrar cerrahi yatağa aktarın ve iki dikişi serbest bırakın. Ardından yarayı doku yapıştırıcısı ile kapatın ve hayvan tamamen iyileşene kadar izleyerek fareyi kafesine geri koyun.

Alternatif olarak, hipoksi iskemisi sırasında ve sonrasında serebral kan akışını incelemek için lazer spekle kontrast görüntüleme kullanılabilir. Hayvanı yüzüstü pozisyona getirin. Ardından, kafatası açılmadan ancak ortaya çıkarılacak şekilde, saçlı deriyi bir santimetre uzunluğunda bir orta hat insizyonu ile açın.

Ardından hayvanı derhal kan akış görüntüleme cihazına transfer edin ve serebral kan akışının kaydına başlayın. Seçilen bölgeleri gerçek zamanlı olarak analiz etmek için üretici talimatlarına uygun olarak FLPI yazılımını kullanarak serebral kan akış görüntülerini inceleyin. TPA tedavisinin etkilerini değerlendirmek için, geçici tek taraflı karotis oklüzyonu ve hipoksi sonrası uygun zamanda hayvanların kuyruk veninden intravenöz enjeksiyon yapın.

Ardından, geçici serebral hipoksik iskemiden 24 saat sonra in vivo TTC ile enfarkt hacmini belirleyin. Ertesi gün, bir milimetre kalınlığında kesitler elde etmek için vibrotom kullanın. Son olarak, dijital mikroskopi ile bir dizi dört beyin kesit görüntüsü elde edin ve enfarkt hacmini, beyaz enfarkt alanının hasarsız kontralateral hemisfer alanına oranı olarak belirlemek için uygun görüntüleme yazılımını kullanın.

Bu prosedür için, etkilerini ve klinik potansiyellerini değerlendirmek amacıyla diğer tromboliz yöntemleri de kullanılabilir. Bu teknik, iskemik inme alanındaki araştırmacıların beyinde trombolitik tedaviyi keşfetmelerinin yolunu açmıştır.