Name: Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Öğrenin, farelerde geçici serebral hipoksi-iskemi kullanarak trombotik inme modeli oluşturmayı ve tPA tedavisinin rekanalizasyon üzerindeki etkilerini değerlendirmeyi. Bu yöntem, inme mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini araştırmak için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH hibe NS074559 tarafından desteklenmiştir (C. K.'ye). Bu metodoloji raporunun dayandığı araştırma makalelerimizde emeği geçen tüm işbirlikçilerimize teşekkür ederiz.

Bu protokol Emory Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Talimatı&#39;nın Ulusal Enstitüleri izler. 1. Kur <ol><li> Ameliyat öncesi en az 15 dakika süreyle 37 ° C&#39;de ısı pompası ile bağlantılı ısınma pad cerrahi yatak hazırlayın. Cerrahi yatakta 3 ml şırınga varil kullanarak boyun rulo yerleştirin. Tıbbi havada% 2 izofluran ile anestezi gazı hazırlayın. </li><li> Otoklavlanmış forseps, makas, iğne mikro sahipleri, hemostat, pamuklu ve sütür hazırlayın. Doku yapıştırıcısı ve göz merhemi hazırlayın. </li><li> Isıtma lambası ve rektal prob ile hipoksi sistemi ve sıcaklık kontrol ayarlayın. % 92.5 N 2 göre dengeli 7.5% O 2% 2 izofluran ile hipoksi gazı hazırlayın. </li><li> Bir saat ameliyattan önce, fareler yavaş salınım Meloksikam (4.0 mg / kg) deri altından enjeksiyonu ile analgesized edilir. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. Geçici Serebral Hipoksi-iskemi (Şekil 1B) <ol><li> 10-13 haftalık erkek C57BL anestezisi / hayvan ayak sıkmak yanıt vermeyen ve daha sonra bir elektronik tıraş makinesi kullanarak doğru boyun saç kaldırmak kadar% 3 izofluran ile anestezi indüksiyon odasında 22 ila 30 g ağırlığındaki 6 fareleri. </li><li> 2 litre / dakika akış hızında, tıbbi hava içinde% 2 izofluran ile bağlantılı cerrahi yatak fareler yerleştirin. Güvenli ön ayakları tıbbi bant kullanarak yanlarda boyun rulo boyunca uzanmış. </li><li> Alkol ve daha sonra pamuklu tarafından takip betadin kesi cerrahi siteyi temizleyin. </li><li> Diseksiyon mikroskop altında düz bir forseps ve yaklaşık 0.2 cm orta hat cilt yanal mikro makas kullanarak 0.5 cm sağ servikal kesi yapmak. </li><li> Sağ karotis arter (RCCA) maruz fasya ve doku dışında çekin ince dişli forseps bir çift kullanın. Dikkatle ince yumuşak forseps bir çift kullanarak vagus sinirden RCCA ayrı. </li><li> Canlı RCCA üzerinde (serbestleştirilebilen) iki precut 5-0 ipek sütür düğüm, sonra 4-0 Naylon monofilament sütür (Şekil 1C) kullanarak cilt dikmek. </li><li> Kuruluğunu önlemek için her iki göze göz merhemi sürün. </li><li> Hızla hipoksi sistemine fareler aktarmak ve 30 dakika boyunca / 0.5-1 L akış hızında% 7.5% 2 izofluran ile yüz maskesi olarak min O 2 burun ve ağız koydu. <ol><li> Hipoksi sırasında, 37.5 ± 0.5 ° C&#39;de rektal sıcaklığı kontrol etmek için ısıtma lambalı sıcaklık kontrolörleri kullanın. / Dk 80-120 nefesler solunum hızını izleyin. hipoksi sırasında 37 ° C&#39;nin üzerinde vücut ısısı bakım tutarlı beyin enfarktüsü oluşturmak için önemlidir. Düşük solunum hızı genellikle 20 dakika hipoksi sonra olur. Yüz maskesi çıkarın ve solunum hızı Bu 1-2 dakika sürer ve 30 dakika hipoksi süresi içine sayılmaz 40&#39;a altına düşerse, normal hava girişini sağlar. </li></ol></li><li> Hipoksi sonra, aktarmakcerrahi yatağa fareler ve RCCA iki sütür serbest bırakın. Kafesine fareler dönün doku yapıştırıcı kullanarak yara kapatın ve. İki canlı knot hem beklenmedik hipoksi sonra yayımlanan ise hayvanların dışla. </li><li> Hipoksi ve anestezi kurtarmak için 5-10 dakika boyunca fareler izleyin. Kafeste ıslanan yiyecek koyun ve hayvan bakım tesisi iade. Not: Thi 24 saat sonra şiddetli çizerek davranışı hafif gösteren hayvanlar beyin kural ihlali ile ilişkilidir. Nöbet semptomları olan çoğu hayvanlar THI sonra 24 saat timepoint gelmeden ölmektedir. </li></ol> 3. Lazer Benek Kontrast Görüntüleme Not: Bu thi modelin önemli bir işlem değildir, ancak, iki boyutlu bir lazer benek kontrast görüntüleme sistemi 16 içinde ya da geçici hipoksi-iskemi sonrası beyin kan akışının (CBF) değişiklikleri karakterize etmek için kullanılabilir. St hemen sonra, THI altında rekor CBF değişiklikler belgelemek içinep 2.6. Alternatif olarak, bu işlemler adım 2.10 Aşağıdaki yapılabilir, THI hakaret sonra CBF kurtarma karşılaştırmak. <ol><li> Yüzüstü pozisyonda bir anestezi fare yerleştirin ve maruz ancak açılmamış kafatası ile saçlı deride 1 cm uzunluğunda orta hat kesi yapmak. </li><li> Üreticinin protokolüne göre bir kan akışı görüntüleyici altında hem serebral hemisferde CBF Monitör ve CCAO cerrahisi (adım 2.6) hemen sonra serebral kan akımını kaydetmeye başlayın. 50 dakika devam edin. </li><li> 16 renk paleti keyfi birimleri ile CBF görüntüyü göstermek ve gerçek zamanlı olarak analiz üreticinin talimatlarına (Şekil 2) Aşağıdaki MoorFLPI yazılımını kullanarak seçilen bölgeler. </li><li> CBF görüntüyü kaydettikten sonra, doku yapıştırıcısı ile kafa derisi kapatın ve kafesine hayvan dönün. </li></ol> 4. tPA İdaresi <ol><li> (220-300 ve kg yeniden birleştirici tPA / çözücü ya da 10 mg kuyruk damarından hayvanların enjekte956. 1 mg / m tPA) l, 0.5, 1 ya da tCCAo artı hipoksi sonra 4 saat sonra (Şekil 4). </li></ol> Birkaç Farklı Seçenekleri ile 5. Brain Damage Algılama Beyin örnekleri toplamak için Thi sonra 1, 4 veya 24 saatte fareler euthanize: Not. <ol><li> Açıklanan önceki olarak Thi hakaret sonra 24 saat in vivo 2,3,5-Triphenyltetrazolium klorür enfarktüs hacminin ölçümü yapın (TTC) yöntemi. 17 <ol><li> İntraperitoneal 1.4 M mannitol çözeltisi (~ 0.1 ml / g vücut ağırlığı) transcardial perfüzyon 30 dakika önce hayvanlara enjekte edilir. PBS ile perfüze Transcardial farenin% 2 TTC 10 ml eklenmiştir. </li><li> 10 dakika sonra, cerrahi aletler ile hayvanların beyin çıkarın ve bir vibratome 1 mm kalınlığında içine gece boyunca tespit ve bölüm için% 4 paraformaldehid içine koyun. </li><li> Dijital mikroskop ve kuvantı dört kesitli beyin slaytlar bir dizi çekinImageJ yazılımı kullanarak hasarsız, kontralateral yarımkürenin alanına enfarkte alana (sağ tarafta beyaz alan) oranı olarak enfarktüs hacmini ify. </li></ol></li><li> Alternatif olarak, THI hakaret sonra 1 saat sonra immünofloresans ile tromboz oluşumunu gerçekleştirin. <ol><li> Ekim bileşik ve bölüm bir Kriyostat kullanılarak 12 mikron kalınlığında beyinleri sabit beyin dondurun. </li><li> Bir floresan mikroskop üzerinde floresan gözlemlemek için: keçi anti-tavşan Alexa Floro 488 boya (200 1) ile: (1: 100), aşağıdaki tavşan anti-fibrinojen antikor ile beyin slayt inkübe edin. </li></ol></li><li> Alternatif olarak, thi akıntıdan sonra 4 saat sonra, 100 ul% 2 Evans mavi boya kuyruk damarı enjeksiyonu ile damar tıkanıklığı gerçekleştirin. <ol><li> Evans mavisi enjeksiyondan sonra% 4 paraformaldehid içine beyinleri kaldırmak için başını kesip hızla fareler Euthanize ve. Not: Hem fotoğrafların ön mavi renk ile Evans mavisi dolaşım için 5-10 dakika sürer ve bacaklarda gerisinde kalınmıştır. </li><li> Secti100 mikron kalınlığında sabit beyinleri üzerinde kayan bir mikrotom kullanılarak ve bir floresan mikroskop üzerinde 680 nm emisyon filtre kullanarak floresan gözlemleyin. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Broderick, J. P., Hacke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+acute+ischemic+stroke%3A+Part+I%3A+recanalization+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies.</a> Circulation. 106 (12), 1563-1569 (2002).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+basis+of+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological basis of translational stroke research.</a> Folia Neuropathol. 47 (3), 213-227 (2009).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two+pathophysiologies+of+focal+brain+ischemia%3A+implications+for+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 32 (7), 1310-1316 (2012).</li>
<li>Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+stroke+research--advantages+and+disadvantages+of+the+most+common+rodent+models+of+focal+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Preclinical stroke research--advantages and disadvantages of the most common rodent models of focal ischaemia.</a> Br. J. Pharmacol. 164 (4), 1062-1078 (2011).</li>
<li>Niessen, F., Hilger, T., Hoehn, M., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+clot+preparation+determine+outcome+of+recombinant+tissue+plasminogen+activator+treatment+in+experimental+thromboembolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in clot preparation determine outcome of recombinant tissue plasminogen activator treatment in experimental thromboembolic stroke.</a> Stroke. 34 (8), 2019-2024 (2003).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Prado, R., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+laser-induced+arterial+photothrombosis.+Characterization+and+possible+application+to+therapy+of+arteriovenous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Argon laser-induced arterial photothrombosis. Characterization and possible application to therapy of arteriovenous malformations.</a> J. Neurosurgery. 66 (5), 748-754 (1987).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+combined+tPA-edaravone+therapy+in+experimental+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synergy of combined tPA-edaravone therapy in experimental thrombotic stroke.</a> PLoS One. 9, e98807(2014).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anoxic-ischemic+encephalopathy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Anoxic-ischemic encephalopathy in rats.</a> Am. J. Pathol. 36, 1-17 (1960).</li>
<li>Rice, J. E. 3rd, Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Neurol%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Vannucci, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+stroke+in+the+female+diabetic%2C+db%2Fdb%2C+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Experimental stroke in the female diabetic, db/db, mouse.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 21 (2), 52-60 (2001).</li>
<li>Adhami, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia-hypoxia+induces+intravascular+coagulation+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia-hypoxia induces intravascular coagulation and autophagy.</a> Am. J. Pathol. 169 (2), 566-583 (2006).</li>
<li>Shereen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+diffusion+tensor+imaging+and+neuropathological+correlation+in+a+murine+model+of+hypoxia-ischemia-induced+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Ex vivo diffusion tensor imaging and neuropathological correlation in a murine model of hypoxia-ischemia-induced thrombotic stroke.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 31 (4), 1155-1169 (2011).</li>
<li>Michaud, J. P., Pimentel-Coelho, P. M., Tremblay, Y., Rivest, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+Ly6C+low+monocytes+after+cerebral+hypoxia-ischemia+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The impact of Ly6C low monocytes after cerebral hypoxia-ischemia in adult mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 34 (7), e1-e9 (2014).</li>
<li>Zoppo, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virchow%27s+triad%3A+the+vascular+basis+of+cerebral+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Neurol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Virchow's triad: the vascular basis of cerebral injury.</a> Rev. Neurol. Dis. 5, 12-21 (2008).</li>
<li>Dunn, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+speckle+contrast+imaging+of+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Laser speckle contrast imaging of cerebral blood flow.</a> Annals Biomed. Eng. 40 (2), 367-377 (2012).</li>
<li>Sun, Y. Y., Yang, D., Kuan, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mannitol-facilitated+perfusion+staining+with+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+%28TTC%29+for+detection+of+experimental+cerebral+infarction+and+biochemical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Mannitol-facilitated perfusion staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) for detection of experimental cerebral infarction and biochemical analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 203 (1), 122-129 (2012).</li>
<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2010).</li>
<li>Murray, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disability-adjusted+life+years+%28DALYs%29+for+291+diseases+and+injuries+in+21+regions%2C+1990-2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Disability-adjusted life years (DALYs) for 291 diseases and injuries in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2197-2223 (2012).</li>
<li>Dirnagl, U., Macleod, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+a+road+block%3A+the+streets+from+adversity+should+be+paved+with+meta-analysis+and+good+laboratory+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Stroke research at a road block: the streets from adversity should be paved with meta-analysis and good laboratory practice.</a> Br. J. Pharm. 157 (7), 1154-1156 (2009).</li>
<li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li>
<li>Khatri, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revascularization+end+points+in+stroke+interventional+trials%3A+recanalization+versus+reperfusion+in+IMS-I%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Revascularization end points in stroke interventional trials: recanalization versus reperfusion in IMS-I.</a> Stroke. 36 (11), 2400-2403 (2005).</li>
<li>Rosenberg, R. D., Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular-bed--specific+hemostasis+and+hypercoagulable+states%5BTitle%5D)+AND+%22New+Eng.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Vascular-bed--specific hemostasis and hypercoagulable states.</a> New Eng. J. Med. 340 (20), 1555-1564 (1999).</li>
<li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31 (11), 2707-2714 (2000).</li>
</ol>

İnme bir yaşlanma nüfusa sahip herhangi bir toplum için önemi giderek artan önemli bir sağlık sorunudur. Küresel olarak, inme, tüm ölümlerin 18% 11,1 eşdeğer 2010 yılında tahmini 5,9 milyon ölümcül olaylar ile ikinci ölüm önde gelen nedenidir. İnme da sakatlığa ayarlanmış yaşam yıllık üçüncü önde gelen nedenidir (DALY) 1990, 19 beşinci pozisyona yükselen, 2010 yılında küresel kaybetti. Bu epidemiyolojik veriler akut (iskemik) inme daha etkili tedavilerin ihtiyacını vurgulamaktadır. Ancak, klinik ön...

Tromboliz ve rekanalizasyonun klinik pratikte 1 akut iskemik inme en etkili tedavidir. Oysa, klinik öncesi araştırma nöro çoğunluğu damar tıkanıklığı çıkarılması üzerine serebral kan akımının hızlı iyileşme üreten ve tPA lizisle hiçbir fayda az gösteren bir geçici mekanik tıkanıklık modeli (lümen dikiş orta serebral arter tıkanıklığı) uygulandı. Inme modelini şüpheli seçimi hastanın 2,3 için nöro-koruyucu tedavisi çeviri zorluk, en azından kısmen, katkıda bulunduğu öne sürülmüştür. Bu nedenle, klinik öncesi araştırma tPA duyarlı tromboembolik inme modelleri istihdam için artan bir çağrı var, ama bu tür modelleri de teknik sorunlar (Tartışma) 4-7 var. Burada tek taraflı geçici hipoksik-iskemik (ti) hakaret ve intravenöz tPA tedavisine 8 yanıtları dayalı yeni bir trombotik inme modeli açıklar. Thi inme modeli 1960 9 yetişkin sıçan deneyleri için icat edilmiştir Levine prosedürü (bir odasında geçici hipoksi maruz kalma ve ardından tek taraflı karotis arter kalıcı ligasyonu) dayalı olarak geliştirilmiştir. Orijinal Levine prosedürü karanlığa gömüldüğü, çünkü sadece değişken beyin hasarı üretti, fakat 1981 10 neonatal hipoksik-iskemik ensefalopati (HİE) bir model olarak Robert Vannucci ve arkadaşları tarafından yeniden tanıtıldı aynı hakaret kemirgen yavrular tutarlı nevropatolojisi neden oldu. Son yıllarda, bazı Araştırmacılar hipoksik odasına 11 sıcaklığı ayarlayarak yetişkin farelere Levine-Vannucci modeli adapte yeniden. Orijinal Levine prosedüründe tutarsız beyin lezyonları hipoksik odasında yetişkin kemirgenler vücut sıcaklıklarını dalgalanan doğabilecek düşünülebilir. Bu hipotezi test etmek için, hipoksik gaz verilerek Levine prosedürünü modifiyeBir yüz maskesi vasıtasıyla, ameliyat masasına 12, 37 ° C&#39;de, kemirgen temel sıcaklık muhafaza edilirken. Beklendiği gibi, katı vücut ısısı kontrolü büyük ölçüde HI-kaynaklı beyin patolojisi tekrarlanabilirliği artmıştır. HI hakaret de pıhtılaşmayı, Otofaji ve gri-beyaz-madde hasarı 13 tetikler. Diğer araştırmacılar da inme sonrası inflamatuar yanıtlar 14 araştırmak için HI modeli kullandık. HI inme modelinin benzersiz bir özelliği de yakından kan akımı, endotel hasarı (örn nedeniyle HI-kaynaklı oksidatif strese) ve hiperkoagübilite (HI-indüklenen platelet aktivasyonu) staz dahil trombüs oluşumu Virchow&#39;un üçlü, (aşağıda olduğunu Şekil 1A) 15. Bu nedenle, HI modeli gerçek dünya iskemik inme ile ilgili bazı patofizyolojik mekanizmaları yakalayabilir. Bu düşünceyle, biz daha un tersine çevrilebilir ligasyonu ile HI modeli rafineilateral karotis arter (dolayısıyla geçici HI hakaret oluşturmak için), ve ya Edaravone olmadan tPA trombolitik onun yanıtları test edilmiştir. Edaravone zaten başlangıç ​​9 24 saat içinde iskemik inme tedavisinde Japonya&#39;da onaylanmış serbest radikal temizleyicisidir. Bizim deneyler kadar kısa 30 dakika kadar geçici HI trombotik enfarktüs tetikler gösterdi ve bu kombine tPA-Edaravone tedavi sinerjik faydalar 8 bahşeder. Burada detaylı cerrahi girişimler ve akut iskemik inme reperfüzyon tedavileri optimize etmek için kullanılabilecek Thi modelinin metodolojik hususlar, açıklar.

<table><tbody><tr><td>yetişkin erkek fareler</td><td>Charles River</td><td>C57BL / 6&nbsp;</td><td>10-13 haftalık (22-30 g)</td></tr><tr><td>Mobil Laboratuvar Hayvanı Anestezi Sistemi</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td>anestezi</td></tr><tr><td>Tıbbi hava (Sıkıştırılmış) hava tankı</td><td>Airgas</td><td>UN1002</td><td>anestezi</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Piramal Sağlık NDC</td><td>66794-013-25</td><td>anestezi</td></tr><tr><td>Çok İstasyonlu Laboratuvar Hayvan Anestezi Sistemi</td><td>Surgivet</td><td>V703501</td><td>hipoksi sistemi</td></tr><tr><td>% 7,5 O < alt > 2 < / alt>% 92,5 N < alt > 2 < / alt > tankı</td><td>Airgas</td><td>UN1956</td><td>hipoksi sistemi</td></tr><tr><td>Isıtma lambalı Sıcaklık Kontrol Cihazı&nbsp;</td><td>Cole Parmer&nbsp;</td><td>EW-89000-10</td><td>sıcaklık kontrol cihazları</td></tr><tr><td>Rektal prob</td><td>Cole Parmer ve nbsp;</td><td>NCI-00141PG</td><td>sıcaklık kontrol cihazları</td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu &nbsp;</td><td>Olimpos&nbsp;</td><td>SZ40</td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>Isıtma pedli ısı pompası</td><td>Gaymar&nbsp;</td><td>TP700</td><td>cerrahi kurulum</td></tr><tr><td>İnce kavisli forseps (tırtıklı)</td><td>FST</td><td>11370-31</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>İnce kavisli forseps (pürüzsüz)</td><td>FST</td><td>11373-12</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>mikro makas</td><td>FST</td><td>15000-03</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>mikro iğne tutucular</td><td>FST</td><td>12060-01</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>Halsted-Sivrisinek kanama durdurucular</td><td>FST</td><td>13008-12</td><td>cerrahi alet</td></tr><tr><td>5-0 ipek sütür&nbsp;</td><td>Harvard Aparatı</td><td>624143</td><td>cerrahi malzemeler</td></tr><tr><td>4-0 Naylon monofilament sütür</td><td>LOOK</td><td>766B</td><td>cerrahi malzemeler</td></tr><tr><td>Doku yapıştırıcısı</td><td>Abbott Laboratuvarları</td><td>NC9855218</td><td>cerrahi malzemeler</td></tr><tr><td>Puralube Vet merhem</td><td>Fisher</td><td>NC0138063&nbsp;</td><td>göz kuruluğunu önleme&nbsp;</td></tr><tr><td>MoorFLPI-2 kan akışı görüntüleyici</td><td>Moor</td><td>780-nm lazer kaynağı</td><td>Lazer Benek Kontrast Görüntüleme</td></tr><tr><td>Mannitol</td><td>Sigma</td><td>M4125</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Çalmak</td><td>51425</td><td>beyin kesiti için in vivo TTC&nbsp;</td></tr><tr><td>Dijital mikroskop</td><td>Dino-Lite</td><td>AM2111</td><td>tüm beyin görüntüleme</td></tr><tr><td>OCT bileşiği</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>keçi anti-tavşan Alexa Fluro 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>İmmünohistokimya</td></tr><tr><td>Kriyostat</td><td></td><td>Vibratom ultrapro 5000</td><td>beyin bölümü IHC</td></tr><tr><td>Evans mavi</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td>için Vasküler algılama perfüzyon</td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>Histoloji için</td><td>5000</td> beyin bölümü</tr><tr><td>Avertin (2, 2, 2-Tribromoetanol)</td> <td>Sigma</td><td>T48402</td><td>ötenazi</td></tr><tr><td>Floresan mikroskop</td><td>Olympus</td><td>DP73</td><td></td></tr><tr><td>Meloksikam SR</td><td>ZooPharm</td><td></td><td>NSAID analjezi</td></tr></tbody></table>

geçici serebral hipoksi-iskemi dayalı bir trombotik İnme modeli

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

İnme araştırması klinik uygulamaya nöroprotektif tedavilerin tercüme birçok aksiliklere dayandı. Buna karşılık, gerçek dünya tedavisi (tPA trombolitik) nadiren preklinik inme araştırma hakim mekanik tıkanıklığı tabanlı deneysel modellerde faydaları üretir. Tezgah ve Yatağımın arasındaki bu bölünme klinik öncesi inme araştırma tPA-duyarlı modeller istihdam ihtiyacını göstermektedir. Bu amaçla, basit ve tPA-reaktif trombotik inme modeli icat burada tarif edilmektedir. 37.5 ± 0.5 ° C &#39;de, hayvan, rektal sıcaklık muhafaza edilirken bu model, 30 dakika boyunca, yetişkin farelerde bir yüz maskesi vasıtasıyla tek taraflı karotis ve% 7.5 oksijen teslimat geçici oklüzyonu meydana gelir. Tek taraflı karotis arter veya hipoksi geri dönüşümlü ligasyonu her biri sadece geçici serebral kan akımı bastırılmış olsa da, her iki hakaret kombinasyonu reperfüzyon açıkları, fibrin ve trombosit birikimi ve büyük infar kalıcı nedenorta serebral arter tarafından sağlanan bölgede ct. Önemli olarak, kuyruk ven 0.5, 1, ya da 4 saat sonra-Thi (10 mg / kg) yeniden birleştirici tPA enjeksiyonunu bir ölüm oranı ve enfarkt boyutunun zamana bağımlı bir azalma sağladı. Bu yeni model, inme basit ve deney sonuçlarını karşılaştırmak için laboratuvarlar arasında standardize edilebilir. Bundan başka, bu kraniektomi ya da önceden-oluşturulmuş emboli yol açmadan tromboz indükler. Bu eşsiz yararları göz önüne alındığında, THI modeli klinik öncesi inme araştırma repertuvarına bir kullanışlı bir ektir.

İki boyutlu lazer benek kontrast görüntüleme (LSCI) 16 30 dk geçici tek taraflı karotis tıkanıklığı (tCCAO), hipoksi 30 dakika maruz kalma (% 7.5 oksijen) ve 30 dakika tek taraflı serebral kan akımı (CBF) ve değişiklikleri karşılaştırmak için kullanıldı hipoksi (ti) altında ligasyonu karotis. Bu deney tCCAO normoxia altında karotis bağlandı yarımkürede CBF bastırılmış ortaya için ~ hızla karotis tıkanıklığı (Şekil 2A R) yayımlandıktan sonra 85 üzerinde% kurtarılan bazal değerin,% 50. Sistemik...

Tromboembolik inme modelleri, rekanalizasyon tedavisini optimize etmek için hayati araçlardır. Burada, tromboz ve enfarktüsü tetikleyen ve inme hastalarındakine benzer bir terapötik pencerede doku plazminojen aktivatörü (tPA) aracılı fibrinolize olumlu yanıt veren geçici serebral hipoksik-iskemik (tHI) insafa dayalı bir murin trombotik inme modeli sunulmaktadır.

Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Bu prosedürün genel amacı, stabil bir beyin enfarktüsü ile basit bir trombotik inme modeli oluşturmak ve doku plazminojen aktivatörünün veya TPA tedavisinin koruyucu etkilerini değerlendirmektir. İlk olarak, sağ ortak karotid arterin (RCCA) çift ligasyonu ve trombozun indüklenmesi için ligasyon uygulanmış hayvanın hipoksik koşullara maruz bırakılması yoluyla geçici serebral hipoksi iskeminin (THI) indüklenmesi gösterilmektedir. 30 dakikalık hipoksik durumdan sonra, karotid arter üzerindeki iki düğüm çözülür.Son adımda, TPA tedavisinin uygulanması ve etkilerinin değerlendirilmesi gösterilmektedir. Alternatif olarak, serebral kan akışının gerçek zamanlı kaydı, trombozun oluşumu ve damar tıkanıklığının derecesi incelenebilir. Bu yöntem, yetişkin farelerde kendi koagülasyon sistemlerini kullanarak trombotik inme oluşturulmasına olanak tanır.Bu modeli, hipoksik iskemi koşulları altında beynin kendi kan akışını nasıl düzenlediğini incelemek için kullanmak istiyoruz. Ayrıca, trombotik tedaviyi nasıl geliştirebileceğimizi araştırmak için de kullanacağız. Beyin enfeksiyonu sırasında doğru vücut sıcaklığını korumanın ve düzenli solunumu sağlamanın zor olabilmesi nedeniyle, bu yöntemin görsel

a-thrombotic-stroke-model-based-on-transient-cerebral-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Hipoksik-iskemik beyin hasarı için postnatal sıçan modelinde, insan yenidoğan hipoksik iskemik ensefalopati (HIE) köklü bir model. Bu makalede, doğum sonrası sıçan Yavrularda HIE modeli açıklanmaktadır.

Perinatal İskemi Hipoksik İskemik Ensefalopati Modeli

Bu video, sağ ortak karotis arteri bloke ederek ve fareyi düşük oksijenli bir ortama maruz bırakarak bir fare modelinde trombotik bir inmeyi çoğaltma prosedürünü göstermektedir. Bu işlem beyne giden kan ve oksijen akışını azaltarak kan pıhtısı oluşumuna ve beyin hasarına neden olur.

Bir fare modelinde hipoksi ve iskemi yoluyla trombotik inme inmesinin indüklenmesi

Fototromboz son derece tekrarlanabilir bir şekilde ilgi alanları küçük ve iyi ayrılmış enfarktüsü uyaran için hızlı, minimal invaziv bir tekniktir. Bu transgenik farelerde beyin plastisitesi oluşturan hücresel ve moleküler okuyan cevapları için özellikle uygundur.

Photothrombotic İskemi: Fare İnme Araştırmalar bir Minimal İnvaziv ve tekrarlanabilir fotokimyasal Kortikal Lezyon Model

Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) çeşitli kemirgen modelleri yaygın deneysel beyin araştırmalarda kullanılır. Burada, insan iskemik strok çoğunluğu tarafından uygulanan zarar tekabül eden bir boyutta tutarlı bir kortikal enfarktüs üreten transkraniyal sürekli uzak MCAO modelini göstermektedir.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Neonatal inme, çalışmayı mümkün kılmak için tutarlı fokal yaralanma paternlerine ve yüksek tekrarlanabilirliğe sahip translasyonel bir model gerektiren erken beyin hasarının önemli bir nedenidir. Bu çalışmada, tam terim eşdeğeri kemirgenlerde hemorajik olmayan, tek taraflı fokal iskemi-reperfüzyon hasarı oluşturmak için ayrıntılı cerrahi prosedür anlatılmaktadır.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Burada açıklanan fototrombotik inme modeli, bir inmenin, ışığa duyarlı bir boyanın kullanılmasından sonra lazer aydınlatma kullanılarak kalıcı mikrovasküler tıkanıklık indüklenerek sağlam kafatasından üretildiği yerdir.

Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar

Deneysel inme araştırmalarında orta serebral arter tıkanma (MCAo) farklı modelleri kullanılmaktadır. Burada, serebrovasküler trombüsin spontan pıhtı lizisi veya tedavisi nedeniyle çıkarıldığı insan inmesini taklit etmeyi amaçlayan dış karotis arter (ECA) yoluyla geçici MCAo'nun deneysel bir inme modeli tanımlanmıştır.

Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Bu çalışma, akut hiperglisemisi olan C57BL/6 farelerinde orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu (MCAO/R) kullanılarak hemorajik dönüşümün (HT) yüksek oranda tekrarlanabilir bir hayvan modelinin oluşturulması için bir protokol sunmaktadır.

Geçici Fokal İskemi ile Kombine Akut Hipergliseminin Neden Olduğu Hemorajik Dönüşümün Bir Fare Modeli

Öğrenin, farelerde geçici serebral hipoksi-iskemi kullanarak trombotik inme modeli oluşturmayı ve tPA tedavisinin rekanalizasyon üzerindeki etkilerini değerlendirmeyi. Bu yöntem, inme mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini araştırmak için değerlidir.

Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli

Daha fazla video keşfet