Koroid Pleksus Epitel Hücreleri Silier Hareketi Gözlem Ex Vivo

Aşağıdaki deneyin genel amacı, koroid Pleksus epitel hücresi Celia'nın ex vivo hareketini analiz etmektir. Bu, koroid pleksus dokusunu izole etmek için önce beynin bir fare embriyosundan veya yavrusundan çıkarılmasıyla elde edilir. Mosiliyer hareket, diferansiyel girişim kontrastı veya DIC mikroskobu ile görselleştirilir ve daha sonra siliyer uç konumlarının manuel olarak izlenmesi için siliyer uçların dijital bir filmi elde edilir.

Nihayetinde, Celia'nın yeniden yapılandırılmış uç hareketleri, hareketlerinin modellerine göre kategorize edilir ve nicelleştirilir. Bu yöntem, hücre biyolojisindeki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir, örneğin Celia mortalitesi gelişim sırasında nasıl kontrol edilir ve hareketlilik modeli zaman içinde nasıl değişir? Bu tekniklerin kapsamı, yol fizyolojik analizi ve teşhisiydi.

Suriye ile ilişkili hastalıklar olarak kinetik Suriye ile ilgili temel anlayışımız hala mahmuzdur. % 70 etanol ile durulanmış bir yenidoğan faresi, buz gibi soğuk liebovitz L 15'e, orta dalda, dekapitasyondan hemen sonra 10 santimetrelik steril bir tabağa yerleştirerek başlayın. Ardından, kafa derisini kafatasından çıkarmak için bir çift saatçi forseps kullanın.

Daha sonra beyni ortaya çıkarmak için kafatasını uzunlamasına sütür boyunca medyan bölümden kesin, ardından tüm organı çıkarmak için kraniyal sinirleri kesin. İzole edilmiş beyni, sırt yönü yukarı bakacak şekilde taze buz, soğuk ortamla dolu yeni bir tabağa aktarın ve tabağı stereo mikroskop altına yerleştirin. Daha sonra dokuyu, koku ampulleri saat üç konumuna gelecek şekilde yönlendirin ve beyni saatçi forseps ile nazikçe kavrayın.

Öte yandan, serebral hemisferleri serebral gövdeye bağlayan serebral poonları kesmek için ince diseksiyon forsepsleri kullanın. Yarım küreleri daha da ayırmak için Dion Cephalon'u sıkıştırın ve kesilen yüzeyi yukarı bakacak şekilde yerleştirin, ardından hipokampusun yan tarafına bağlı lateral ventriküler koroid pleksusu çıkarmak için lamina afia'yı çekin. Koroid pleksus izole edildiğinde, dokuyu taze ortam içeren 35 milimetrelik bir cam tabanlı tabağa aktarın ve ötenaziden sonraki 25 ila 60 dakika içinde nazikçe yerinde tutmak için doku üzerine bir ağırlık yerleştirin, koroid pleksus epitel hücresi Celia'nın canlı görüntülemesine başlayın, objektif lensin odağını gözle ayarlayarak.

Kondansatörü, merkez ve odak Kula aydınlatmasına uyacak şekilde ayarlayın. Ardından, DIC optiğine uyması için uygun optik elemanları ışık yoluna yerleştirin. Görüntülerin kontrastını, dokunun yüzey yapısının net bir şekilde tanınacağı bir konuma ayarlamak için DIC prizmasını hareket ettirin.

Ardından ışık yolunu video kameraya çevirin ve ışık gücünü artırın. Nötr yoğunluk filtrelerinin çıkarılmasıyla, istenen görüntüleme süresi için video kameranın zamansal çözünürlüğünü 200 hertz'e ve pozlama süresini 0,1 milisaniyeye ayarlayarak bir gözlem alanı ve odak ayarlayın. Ardından, görüntü yığını elde edildikten sonra görüntüleri alın, her bir kare, her bir silyumun vuruş modellerini manuel olarak izlemek için Celia'nın net bir görüntüsünü görüntüler.

Her karedeki siliyer uçların konumunu işaretlemek için fare işaretçisini kullanın. Ardından, uygun yazılımı kullanarak, yörünge verilerini analiz edin ve yörüngeleri ileri geri veya gözle dönme olmak üzere iki hareket modundan birine sınıflandırın. Formülü kullanarak, birden fazla siliyer atma döngüsü için siliyer atma frekansını hesaplayın.

Aynı hücredeki diğer Celia'lar her bir silyumun hareketine müdahale edebilir. Daha sonra, tek bir hücre içindeki siliyer atma eksenlerinin açısal tekdüzeliğini analiz etmek. İleri geri yörüngeler için, Celia uçlarının konumlarını düz bir çizgiye sığdırın ve tetayı çizginin X ekseni ile yaptığı açı olarak tanımlayın.

Dönme yörüngeleri için, pozisyonları bir elipse sığdırın, bu da tetayı elipsin ana ekseninin x ekseni ile yaptığı açı olarak tanımlar. Son olarak, her bir yörüngenin nicel bir açıklaması için, en boy oranlarını x ve y ekseni boyunca dağılımlarının genişlikleri arasındaki oranlar olarak tanımlayarak yörüngeleri döndürün. Bu ilk klipte, yüksek hızlı video mikroskobu ile görüntülenen doğum sonrası ikinci gün fare yavrusundan Celia ile koroid pleksus epitel hücrelerinin üstten görünümü gösteriliyor, koroid pleksus dokusunun düzensiz yüzeyi onu hem odak içi hem de odak dışı düzlemlerde görünür kılıyor.

Bu ikinci klipte, önceki filmden kutulu alanın büyütülmüş bir görünümü gösterilerek, tek tek silyum tarafından sergilenen dönme ve ileri geri hareketlerin daha yakından gözlemlenmesini sağlar. Burada, birden fazla döngü boyunca film kayıtlarından yeniden oluşturulan temsili siliyer uç hareketlerinin yörüngeleri, grafiklerde çizilen uç konumlarının x ve y koordinatlarının zaman rotaları ile sunulmaktadır. Bu grafiklerdeki iki koordinat arasındaki faz kaymasını göstermek için, x ve Y koordinatları normalleştirildi ve üst üste bindirildi.

Hareketli KLİALAR canlı görüntüleme ile kolayca tanınırken, bu yöntemle hareketsiz KLIA'yı tanımlamak kolay değildir. Bu zorluğun üstesinden gelmek için, taramalı elektron mikroskobu, motilitelerinden bağımsız olarak klianın tüm görüntülerini elde etmek için vazgeçilmez olabilir. Bu prosedürü denerken, numunenin tazeliğini korumak ve Suriye'nin motilitesini korumak için diseksiyonu yeterince hızlı bir şekilde yapmayı unutmamak önemlidir.

Bu videoyu izledikten sonra, viral tahıl ile doku örneklerinin nasıl hazırlanacağını ve CX vivo mortalitesinin nasıl izleneceğini ve ölçüleceğini iyi anlamış olmalısınız.