Kemirgen Beyin Mikroenjeksiyon Moleküler Alt Tabakalar Motive Davranış Eğitim için

Bu prosedürün genel amacı, bir kanül ve mikro enjektörleri doğru bir şekilde üretmek ve aynı zamanda mikroenjeksiyonu uygun şekilde gerçekleştirmektir. Bu, önce uygun uzunlukta bir kanül üretilerek gerçekleştirilir. İkinci adım, mikro enjektörleri kesmek ve monte etmektir.

Ardından, mikro enjektörler, hortumlar ve mikroenjeksiyon için bir pompa hazırlayın. Son adım, mikroenjeksiyonun tamamlanması ve bir difüzyon süresinin geçmesine izin vermektir. Sonuç olarak, mikroenjeksiyon, reaktifleri istenen beyin bölgesine doğru bir şekilde enjekte etmek için kullanılır ve uygun kullanımı gösterir.

Mikroenjeksiyon sırasında laboratuvarımda bir öğrenci olan Ryan Poland olacak. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan bireyler mücadele edecektir, çünkü uygun kanül yerleşimi ve mikroenjeksiyon yerini sağlamak için özel dikkat gösterilmesi ve tüm adımların büyük dikkat gerektirmesi gerekir. Önce kanülü hazırlamak için ince uçlu bir kalem kullanarak bant üzerine 15 milimetrelik bir referans çizgisi çizin.

Ardından, 15 milimetrelik bölümleri keskin bir kalıcı işaretleyici ile boru üzerinde sırayla işaretlemek için bir kılavuz olarak kullanın. Ardından, kanül hortumunu döner aletin yavaş dönen kesme diskine dokundurarak çentik atın. İşaretli noktalarda, kanülü 180 derece döndürün ve borunun karşı tarafına çentik açın.

Tıkanmaya neden olabileceğinden boruyu tamamen kesmeyin. Daha sonra, boruyu 15 milimetrelik bölümlere ayırmak için keskin bir şekilde bükün. Ardından kanülün her iki ucunu başparmak ve işaret parmağı arasında kesme diskine dik olarak tutun.

Künt bir uç oluşturmak için ucunu kesme diskinin yüzeyine dokundururken kanül hortumunu döndürün. Ardından, tüm çapakların alındığından ve kanülün engellenmediğinden emin olmak için kanülün her iki ucunu 26 gauge eğimli bir iğne ile raybalayın. Obturator klempini hazırlamak için, orta ağırlıkta düz kanama durdurucularla yaklaşık yarım uzunlukta bir kanül sıkıştırın, kilitli kanama durdurucuyu, kanül tezgaha dik olacak şekilde tezgahın üzerine yerleştirin.

Daha sonra ator telinin bir ucunu tezgaha ulaşana kadar kanülün içine besleyin. Obturator ile tezgah arasındaki teması korurken 30 derecelik bir açı elde edilene kadar parmaklarınızla sıkıştırarak teli bükün. Bundan sonra, teli kanülden çıkarın ve fazla kısmı küçük çapraz kesicilerle dirsekten 2,5 milimetre uzakta kesin.

Bu prosedürde, mikro enjektör hortumunun bir ucunu kilitli düz bir kanama durdurucu ile dik olarak tutun. Hortumun gerginliğini korurken bir kanama durdurucuyu bükün ve en az bir kez kanama durdurucunun etrafına sıkıca sarın. Ardından, mikro enjektör borusunun karşı gevşek ucundan 32 milimetre ölçün ve bu noktayı ikinci bir kanama durdurucu ile dik olarak kavrayın.

Gerginliği kırılana kadar korurken boruyu ileri geri bükün. Ardından, her iki ucun da düz olduğundan ve iç çapın engellenmediğinden emin olmak için mikro enjektör hortumunu inceleyin. Mezura üzerine beş milimetrelik bir referans çizgisi çizin ve kalıcı bir işaretleyici kullanarak kanül borusunun beş milimetrelik bölümlerini sırayla işaretleyin.

Ardından, boruyu çentiklemek için kanül hortumunu işaretli noktalarda yavaş dönen kesme diskine dokundurun. Ardından, mikro enjektör bileziği borusunu beş milimetrelik bölümlere ayırmak için keskin bir şekilde bükün. Her bir mikro enjektör borusunun üzerine uçtan yaklaşık iki santimetre uzakta olacak şekilde bir bileziği kaydırın.

Mikro enjektör borusuna bir ucundan beş milimetre olacak şekilde az miktarda süper yapıştırıcı sürün. Ardından, bileziği mikroenjeksiyon tüpünün ucundan bir milimetre uzakta olacak şekilde süper tutkal boncuğunun üzerine kaydırın. Bundan sonra, yakanın her iki ucunu da tutkalla örtün.

Ardından steril suyla doldurulmuş bir mililitrelik şırıngaya 26 gauge iğne takın. Ve sekiz santimetrelik mikro enjektör plastik borusunu iğnenin üzerine kaydırın, ardından tüpü delmemeye dikkat edin, bundan sonra plastik borunun diğer ucunu kurutulmuş mikro enjektörün yaka ucunun üzerine kaydırın. Patent testi yapmak için su dolu şırınga pistonunu itin C.In bu adımda, tamamlanan mikro enjektörü bileziğin karşısındaki uçtan 15 milimetre 95 derece bükün.

Ardından, plastik boruyu 70 santimetreye kadar kesin ve mikro enjektör bileziğinin üzerine kaydırın. Pompayı mikroenjeksiyona hazırlamak için, mikroenjeksiyon iğnesinin çapını, istenen infüzyon hızını ve tüp üzerindeki hedef enjeksiyon hacmini ayarlayın. Ardından, hassas bir ses seviyesinin otomatik olarak iletilmesi için pompa modunu ses seviyesine ayarlayın.

Ardından, şırınganın enjeksiyon hacmine ve ek 0,2 mikrolitreye kadar doldurulmasına izin vermek için pompa geri durdurucusunu ayarlayın. Şimdi gaz geçirmez şırınganın ucunu küçük bir peynir altı suyu teknesinde bulunan steril suya yerleştirin ve iç teli eşit şekilde yağlamak için pistonu hafifçe çırpın. Mikroenjeksiyon iğnesini suyla doldurmak için pistonu pompa üzerindeki arka durdurucuya kadar çekin.

Sonraki slayt. Mikro enjektöre bağlanan PE 20 hortumu, bir mililitrelik steril su dolu bir şırıngaya bağlı 26 gauge iğneye bağlanır. Mikro enjektörden steril su püskürtün ve püskürtme düzenini ve mesafesini kontrol edin.

Ardından sterilize edilmiş bir mikro enjektörü steril bir alana yerleştirin. Boruyu iğneden kaydırın, suyun dışarı damlamasını önlemek için dik tutarken iğnenin zarar verdiği alanın altındaki boruyu kesin. Ardından, iğnenin ucunda bir damlacık oluşturmak için mikro enjektör şırınga pistonunu hafifçe ileri doğru itin ve su dolu PE 20 borusunu iğnenin üzerine kaydırın.

Bundan sonra, numune yüklemeye hazırlanmak için pistonu tamamen ileri doğru itin ve mikro enjektörde eser etanol kalmadığından emin olun. Mikro enjektörün ucunda oluşan su damlacığına temiz bir laboratuvar mendiliyle birkaç kez dokunarak sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Ardından, steril su ile PE 20 borusu ve enjekte edilecek çözelti arasında bir kabarcık oluşturmak için şırınga pistonunu 0,2 mikrolitre geri çekin.

Bundan sonra, mikro enjektörü enjekte edilecek reaktife yerleştirin ve şırınga pistonunu yavaşça geri tepme ucuya çekin. Hayvanı enjeksiyona hazırlamak için, farenin göğsünü deneycinin göğsüne karşı tutun. Kanülün etrafındaki alanı Betadine batırılmış bir pamuk aplikatörü ile temizleyin.

Baş kapağını Betadine ile üç kez temizleyin ve ardından iki kez etanol ile temizleyin. Ardından doldurulmuş mikro enjektörü kanülün içine yerleştirin. Mikro enjeksiyon pompasında başlat düğmesine basın ve kabarcık hareketini izleyin.

Enjeksiyon tamamlandığında, mikro enjektörü kanülden çıkarın ve obturator ile değiştirin. Bu şekil, nükleus accumbens astrosit bölgesinin mikro enjekte edilen virüs tarafından transfeksiyonunu göstermektedir ve bu şekil, nucleus accumbens'te aşırı eksprese edilen bir transgeni aktive ederek sıçanların etanolü kendi kendine uygulama motivasyonunun azaldığını göstermektedir. Çekirdek astrositler bölgeleri, CNO'nun sistemik uygulamasıyla dehşetin aktivasyonu, sıçanların yoksunluktan sonra etanolü kendi kendine uygulama motivasyonunu, araç CNO'suna kıyasla önemli ölçüde azalttı, bu da bir zamanlar hakim olduğu korku yerine GFP'yi ifade eden eşit eğitimli bir kohortta hiçbir etkisi olmadı.

Bu teknik, özelleştirilmiş beyin mikroenjeksiyon uygulamalarına ve deneysel prosedürlerin daha fazla esnekliğine izin verebilir. Bu prosedürü denerken, istenen etkiyi elde etmek için kesin mikroenjeksiyon yerinin zorunlu olduğunu hatırlamak önemlidir.