Name: Kemirgen Beyin Mikroenjeksiyon Moleküler Alt Tabakalar Motive Davranış Eğitim için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: Öğrenin kemirgenlerde beyin mikroenjeksiyonu yöntemini, davranış ve psikiyatrik bozuklukların moleküler temellerini araştırmak için. Bu hassas teknik, kanül ve mikro enjektör üretimini kapsar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

MSB, Alkollü İçecek Tıbbi Araştırma Vakfı, Translasyonel Araştırma Merkezi Ödülü (UL1 TR000058), Ulusal Alkol Suistimali ve Alkolizm Enstitüleri (P50 AA022537) ve Virginia Yüksek Öğrenim Ekipmanları Güven Fonu ve VCU Tıp Fakültesi tarafından sağlanan başlangıç fonları tarafından desteklenmektedir.

<ol><li>Koob, G. F., Volkow, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurocircuitry+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Neurocircuitry of addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).</li>
<li>Kalivas, P. W., Peters, J., Knackstedt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+and+brain+circuits+in+drug+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Interv%22%5BJournal%5D)">Animal models and brain circuits in drug addiction.</a> Mol Interv. 6 (6), 339-344 (2006).</li>
<li>Bossert, J. M., Marchant, N. J., Calu, D. J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reinstatement+model+of+drug+relapse%3A+recent+neurobiological+findings%2C+emerging+research+topics%2C+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">The reinstatement model of drug relapse: recent neurobiological findings, emerging research topics, and translational research.</a> Psychopharmacology (Berl). 229 (3), 453-476 (2013).</li>
<li>Connor, E. C., Chapman, K., Butler, P., Mead, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+predictive+validity+of+the+rat+self-administration+model+for+abuse+liability%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">The predictive validity of the rat self-administration model for abuse liability).</a> Neurosci Biobehav Rev. 35 (3), 912-938 (2011).</li>
<li>Watson, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+dopamine+D3+receptors+enhances+while+D2+receptor+antagonism+impairs+social+novelty+discrimination+and+novel+object+recognition+in+rats%3A+a+key+role+for+the+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of dopamine D3 receptors enhances while D2 receptor antagonism impairs social novelty discrimination and novel object recognition in rats: a key role for the prefrontal cortex.</a> Neuropsychopharmacology. 37 (3), 770-786 (2012).</li>
<li>Takahashi, A., Shimamoto, A., Boyson, C. O., DeBold, J. F., Miczek, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA%28B%29+receptor+modulation+of+serotonin+neurons+in+the+dorsal+raphe+nucleus+and+escalation+of+aggression+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GABA(B) receptor modulation of serotonin neurons in the dorsal raphe nucleus and escalation of aggression in mice.</a> J Neurosci. 30 (35), 11771-11780 (2010).</li>
<li>Spencer, R. C., Klein, R. M., Berridge, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychostimulants+act+within+the+prefrontal+cortex+to+improve+cognitive+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Psychostimulants act within the prefrontal cortex to improve cognitive function.</a> Biol Psychiatry. 72 (3), 221-227 (2012).</li>
<li>Bowers, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activator+of+G+protein+signaling+3%3A+a+gatekeeper+of+cocaine+sensitization+and+drug+seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activator of G protein signaling 3: a gatekeeper of cocaine sensitization and drug seeking.</a> Neuron. 42 (2), 269-281 (2004).</li>
<li>Abudara, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connexin43+mimetic+peptide+Gap19+inhibits+hemichannels+without+altering+gap+junctional+communication+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The connexin43 mimetic peptide Gap19 inhibits hemichannels without altering gap junctional communication in astrocytes.</a> Front Cell Neurosci. 8, 306(2014).</li>
<li>Cahill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1R%2FGluN1+complexes+in+the+striatum+integrate+dopamine+and+glutamate+signalling+to+control+synaptic+plasticity+and+cocaine-induced+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">D1R/GluN1 complexes in the striatum integrate dopamine and glutamate signalling to control synaptic plasticity and cocaine-induced responses.</a> Mol Psychiatry. 19 (12), 1295-1304 (2014).</li>
<li>McFarland, K., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+circuitry+mediating+cocaine-induced+reinstatement+of+drug-seeking+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The circuitry mediating cocaine-induced reinstatement of drug-seeking behavior.</a> J Neurosci. 21 (21), 8655-8663 (2001).</li>
<li>Fuchs, R. A., Branham, R. K., See, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+neural+substrates+mediate+cocaine+seeking+after+abstinence+versus+extinction+training%3A+a+critical+role+for+the+dorsolateral+caudate-putamen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Different neural substrates mediate cocaine seeking after abstinence versus extinction training: a critical role for the dorsolateral caudate-putamen.</a> J Neurosci. 26 (13), 3584-3588 (2006).</li>
<li>Ebersberger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+meningeal+innervation%3A+aspects+and+consequences+of+chemosensitivity+of+meningeal+nociceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Physiology of meningeal innervation: aspects and consequences of chemosensitivity of meningeal nociceptors.</a> Microsc Res Tech. 53 (2), 138-146 (2001).</li>
<li>Netter, F. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNetter%2C+FH+%22Musculoskeletal+System+Part+I%3A+Anatomy%3B+Physiology%2C+and+Metabolic+Disorders%22">Musculoskeletal System Part I: Anatomy; Physiology, and Metabolic Disorders</a>. 8, 1st ed, CIBA-Geigy. Summit, New Jersey. (1987).</li>
<li>Ferguson, S. M., Eskenazi, D., Ishikawa, M., Wanat, M. J., Phillips, P. E., Dong, Y., Roth, B. L., Neumaier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+neuronal+inhibition+reveals+opposing+roles+of+indirect+and+direct+pathways+in+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transient neuronal inhibition reveals opposing roles of indirect and direct pathways in sensitization.</a> Nat Neurosci. 14 (1), 22-24 (2011).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Guerrero-Cazares, H., Quinones-Hinojosa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+deep+brain+structures+with+microinjections+for+delivery+of+drugs%2C+viral+vectors%2C+or+cell+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Targeting of deep brain structures with microinjections for delivery of drugs, viral vectors, or cell transplants.</a> J Vis Exp. (46), (2010).</li>
<li>Inquimbert, P., Moll, M., Kohno, T., Scholz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+injection+of+a+viral+vector+for+conditional+gene+manipulation+in+the+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic injection of a viral vector for conditional gene manipulation in the mouse spinal cord.</a> J Vis Exp. (73), (2013).</li>
<li>Schier, C. J., Mangieri, R. A., Dilly, G. A., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+of+ethanol+during+operant+ethanol+self-administration+and+ethanol+determination+by+gas+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microdialysis of ethanol during operant ethanol self-administration and ethanol determination by gas chromatography.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li>
<li>Fornari, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+stereotaxic+surgery+and+animal+welfare+outcome+improvements+for+behavioral+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rodent stereotaxic surgery and animal welfare outcome improvements for behavioral neuroscience.</a> J Vis Exp. (59), e3528(2012).</li>
<li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survivable+stereotaxic+surgery+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Survivable stereotaxic surgery in rodents.</a> J Vis Exp. (20), e880(2008).</li>
<li>Richardson, N. R., Roberts, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+ratio+schedules+in+drug+self-administration+studies+in+rats%3A+a+method+to+evaluate+reinforcing+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Progressive ratio schedules in drug self-administration studies in rats: a method to evaluate reinforcing efficacy.</a> J Neurosci Methods. 66 (1), 1-11 (1996).</li>
<li>Cheeta, S., Brooks, S., Willner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reinforcer+sweetness+and+the+D2%2FD3+antagonist+raclopride+on+progressive+ratio+operant+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of reinforcer sweetness and the D2/D3 antagonist raclopride on progressive ratio operant performance.</a> Behav Pharmacol. 6 (2), 127-132 (1995).</li>
<li>Roberts, D. C., Morgan, D., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+make+a+rat+addicted+to+cocaine%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neuropsychopharmacol+Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">How to make a rat addicted to cocaine.</a> Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 31 (8), 1614-1624 (2007).</li>
<li>Arnold, J. M., Roberts, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critique+of+fixed+and+progressive+ratio+schedules+used+to+examine+the+neural+substrates+of+drug+reinforcement%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">A critique of fixed and progressive ratio schedules used to examine the neural substrates of drug reinforcement.</a> Pharmacol Biochem Behav. 57, 441-447 (1997).</li>
<li>Hodos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+ratio+as+a+measure+of+reward+strength%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Progressive ratio as a measure of reward strength.</a> Science. 134 (3483), 943-944 (1961).</li>
<li>Depoortere, R. Y., Li, D. H., Lane, J. D., Emmett-Oglesby, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+of+self-administration+of+cocaine+in+rats+under+a+progressive-ratio+schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Parameters of self-administration of cocaine in rats under a progressive-ratio schedule.</a> Pharmacol Biochem Behav. 45 (3), 539-548 (1993).</li>
<li>Bowers, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleus+accumbens+AGS3+expression+drives+ethanol+seeking+through+G+betagamma%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nucleus accumbens AGS3 expression drives ethanol seeking through G betagamma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (34), 12533-12538 (2008).</li>
<li>Bull, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+Nucleus+Accumbens+Core+Astrocytes+Modulate+Reward+and+the+Motivation+to+Self-Administer+Ethanol+after+Abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Rat Nucleus Accumbens Core Astrocytes Modulate Reward and the Motivation to Self-Administer Ethanol after Abstinence.</a> Neuropsychopharmacology. 39 (12), 2835-2845 (2014).</li>
<li>Hopf, F. W., Chang, S. J., Sparta, D. R., Bowers, M. S., Bonci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motivation+for+alcohol+becomes+resistant+to+quinine+adulteration+after+3+to+4+months+of+intermittent+alcohol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Motivation for alcohol becomes resistant to quinine adulteration after 3 to 4 months of intermittent alcohol self-administration.</a> Alcohol Clin Exp Res. 34 (9), 1565-1573 (2010).</li>
<li>Hopf, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+nucleus+accumbens+SK+channel+activity+enhances+alcohol+seeking+during+abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Reduced nucleus accumbens SK channel activity enhances alcohol seeking during abstinence.</a> Neuron. 65 (5), 682-694 (2010).</li>
<li>Salerni, C. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSalerni%2C+CM+%22Engineering+Adhesives+for+Repeated+Sterilization%22">Engineering Adhesives for Repeated Sterilization</a>. , Henkel. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.henkelna.com/us/content_data/99736_Engineering_Adhesives_for_Repeated_Sterilization.pdf">http://www.henkelna.com/us/content_data/99736_Engineering_Adhesives_for_Repeated_Sterilization.pdf</a> (2015).</li>
<li>Gundersen, H. J., Jensen, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+systematic+sampling+in+stereology+and+its+prediction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The efficiency of systematic sampling in stereology and its prediction.</a> J Microsc. 147 (Pt 3), 229-263 (1987).</li>
<li>Mastakov, M. Y., Baer, K., Xu, R., Fitzsimons, H., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+injection+of+rAAV+with+mannitol+enhances+gene+expression+in+the+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Combined injection of rAAV with mannitol enhances gene expression in the rat brain.</a> Mol Ther. 3 (2), 225-232 (2001).</li>
<li>Burger, C., Nguyen, F. N., Deng, J., Mandel, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+mannitol-induced+hyperosmolality+amplifies+rAAV2-mediated+striatal+transduction+to+a+greater+extent+than+local+co-infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic mannitol-induced hyperosmolality amplifies rAAV2-mediated striatal transduction to a greater extent than local co-infusion.</a> Mol Ther. 11 (2), 327-331 (2005).</li>
<li>Agulhon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+autonomic+nervous+system+by+acute+glial+cell+Gq-GPCR+activation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of the autonomic nervous system by acute glial cell Gq-GPCR activation in vivo.</a> J Physiol. 591 (22), 5599-5609 (2013).</li>
<li>Armbruster, B. N., Li, X., Pausch, M. H., Herlitze, S., Roth, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+the+lock+to+fit+the+key+to+create+a+family+of+G+protein-coupled+receptors+potently+activated+by+an+inert+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Evolving the lock to fit the key to create a family of G protein-coupled receptors potently activated by an inert ligand.</a> PNAS. 104 (12), 5163-5168 (2007).</li>
<li>Cruikshank, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+block+of+Cx36+and+Cx50+gap+junction+channels+by+mefloquine%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Potent block of Cx36 and Cx50 gap junction channels by mefloquine.</a> PNAS. 101 (33), 12364-12369 (2004).</li>
<li>Miguel-Hidalgo, J., Shoyama, Y., Wanzo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infusion+of+gliotoxins+or+a+gap+junction+blocker+in+the+prelimbic+cortex+increases+alcohol+preference+in+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Psychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Infusion of gliotoxins or a gap junction blocker in the prelimbic cortex increases alcohol preference in Wistar rats.</a> J Psychopharmacol. 23 (5), 550-557 (2008).</li>
<li>Bowers, M. S., Lake, R. W., Rubinchik, S., Dong, J. Y., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+Homer+1a+function+in+the+nucleus+accumbens+using+adenovirus+gene+transfer+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Elucidation of Homer 1a function in the nucleus accumbens using adenovirus gene transfer technology.</a> Ann N Y Acad Sci. 1003, 419-421 (2003).</li>
<li>Mackler, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NAC-1+is+a+brain+POZ%2FBTB+protein+that+can+prevent+cocaine-induced+sensitization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NAC-1 is a brain POZ/BTB protein that can prevent cocaine-induced sensitization in the rat.</a> J Neurosci. 20 (16), 6210-6217 (2000).</li>
<li>Geyer, M. A., Swerdlow, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+startle+response%2C+prepulse+inhibition%2C+and+habituation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Measurement of startle response, prepulse inhibition, and habituation.</a> Curr Protoc Neurosci. 8, Unit 8.7(2001).</li>
<li>Bedford, J. A., Bailey, L. P., Wilson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine+reinforced+progressive+ratio+performance+in+the+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Cocaine reinforced progressive ratio performance in the rhesus monkey.</a> Pharmacol Biochem Behav. 9 (5), 631-638 (1978).</li>
</ol>

Yazarların hiçbirinin rekabet eden veya çatışan çıkarları yoktur.

Burada sunulan prosedür mikroenjeksiyon kanül ve motive davranışının moleküler yüzeylerde durulaştırmada yardımcı olacak mikroenjektörler üretimi için verimli bir araçtır. Bu yöntem çeşitli avantajlar sunmaktadır. İlk olarak, kişinin kendi implantlar ve mikroenjektörler üreterek, yeni deneysel parametreler hızla optimize edilebilir; yani, bir gelmesi ısmarlama bileşenler için beklemenize gerek yoktur. İkinci olarak, kanülün çapının küçük nedeniyle, daha çok kanülleri eş zamanlı olarak implante edilebilir. Bu beka artırabilir gerekli cerrahi zamanı, kısaltır, hem de hayvan başına birden implantlar verir. Sabit bir oran paradigma hızla basitçe istenen takviye takvimi içeren bir olay geçiş parametre listesine uygulayarak ilerici oran paradigma dönüştürülebilir çünkü Üçüncüsü, edimsel odaları kontrol etmek için kullanılan yazılım kolayca ilerici oran programları barındırmaktadır. Olmakgeniş kullanışlı, genel mikroenjeksiyon işlemi mevcut hemen hemen her reaktif mikroenjeksiyon için geniş uygulanabilir olmalıdır sunuldu. Sonuç olarak, biz bu tekniğin küçük değişiklik ile gelecekte benzer yüksek fayda olmaya devam edeceğini tahmin ediyoruz. Sadece birkaç değişken değiştirerek, bu yaklaşım, reaktifler geniş bir dizi uygulanabilir. En yaygın olarak manipüle edilebilir olacaktır parametreler mikroenjektör kanül çıkıntı yapan uzunluğu, enjeksiyon hacmi, ve enjeksiyon oranını içerir. Örneğin, tek bir enjektör genellikle kronik implant etrafında oluşturan glial skar önlemek için kanül ucundan daha çıkıntı isteyebilirsiniz. Buna ek olarak, daha büyük bir hacim enjekte etmek isteyebilir. Bu kullanım ile karşılaştırıldığında (10 dakika ek bir difüzyon süresi genellikle 7 - - 10 dakika artı 3) striatal virüsü mikroenjeksiyon için, 1 uL hacmi genellikle kullanılır ve bu hacmi genellikle daha uzun bir süre boyunca enjekte edilirFarmakolojik reaktif d (genellikle 0,3-3 dakika artı 1 - 2 - 0,5 ul 3 dk ek difüzyon süresi). Kullanıcı literatürüne başvurun ve / veya ampirik iyi kendi ihtiyaçları için uygun parametreleri belirlemek gerekir. Enjeksiyondan önce mikropüskürtücü püskürtme deseni 1) kanül uzunluğu, 2) mikroenjektör uzunluğu, 3) kalite ve 4) sistem bütünlüğü: Ne olursa olsun, bu prosedürün başarısı 4 değişkenlere bağlı kritik bağlıdır. Mikroenjeksiyon yeri mikroenjektör kanül çıkıntı derinliğine bağlı olduğundan hem kanüller (Adım 1.2.8) ve mikroenjektör uzunluğu (post-bükme, Adım 2.2.1) hem tam tüm bireyler arasında bilinen ve muntazam olduğunu, bu zorunludur . Bu kolayca kolayca herhangi final yeniden ölçüm de gerekli uzunluk değil uygulamak reddederek kontrol edilebilir. Bu kılavuz kanül hemen altında oluşur Ayrıca, eğer püskürtme konumu, sadece tahmin edilebilir. Böylece, herhangi bir mikroenjektör doe olduğuTest sırasında uzun, ince dere sprey s (Adımlar 2.4.6) reddedilmelidir. Kaliteli bir enjeksiyonu, enjeksiyondan önce sistem bütünlüğü ile ilgilidir. Birden noktalar laboratuarda-silin gözlenmektedir enjektör tüm su dağıtım sonra (önceki reaktif ile doldurulmadan), sonra bir kaçak (Adım 2.4.8 ile ilgili not) giderilmesini gerekiyor. PE20 boru su ilaçtan ayıran balonu (Aşama 2.4.9) bir değil, tek bir balon (reaktif ile mikroenjektör doldurulduktan sonra) ise, daha fazla, daha sonra enjektör kısmen tıkanmıştır. Bu yapışmasına neden önlemek veya enjeksiyon aktarmak olabilir ya. Bu da kolayca çözülebilir (Not adım 2.4.8 üzerine). Üç alternatifler vardır hayvan stereotaksik çerçeve içinde iken Microinject isterseniz. Birincisi, kimse stereotaksik manipülatör tarafından sıkıca tutulur ve ayrıca PE20 boru bağlantı sağlamak için yeterince uzatmak edilecek şekilde mikropüskürtücü yaka uzunluğunu artırabilir. İkinci olarak,e zamansal bir kanül implant ve burada sunulan standart Mikroenjektör kullanabilirsiniz. Üçüncüsü, tek çizilmiş ve parlatılmış cam pipetler kullanın başladı. 16,17 Burada sunulan yöntemin önemli bir sınırlama en iyi yordamı hakkında bilginiz iyi ele sıçanlarda yapılan olmasıdır. Aynı araştırıcı 2 aydan fazla bir süre günlük bazda sıçan ele çünkü sonuçları bölümünde açıklanan veriler için kullanılan sıçanlar özel taşıma prosedürleri gerekli. Bu, en az 2 hafta boyunca, cerrahi implant günlük gözlem ve manipülasyon dahildir. Bununla birlikte, hızlı bir şekilde fareler stres etkilenebilir ön darbe inhibisyon deneyi öncesinde için kullanılan bir dizi teknik ile alışmış edilebilir. Bu özel alışkanlık teknikleri güzel önceden ayrıntılı oylandı. 43 bu işlemlerin yanı sıra, fareler kısaltılmış mikroenjektörler du kullanılan mikroenjeksiyon işlemi alışmış olması tavsiye edilirhalka &#39;sahte&#39; enjeksiyonlar. Bu sahte enjeksiyonları sırasında, mikroenjektör doku hasarını sınırlamak amacıyla dokuya çıkıntı çok önemlidir. Diğer bir deyişle, mikropüskürtücü artık 14 mm&#39;den daha kıvrık olmalıdır. Böylece, bu tekniğin iyi uygulanması için gerekli olan tam bir alışkanlık bir sınırlama olarak görülebilir. Birkaç davranışsal paradigmalar motivasyonunu ölçmek için mevcut olmakla birlikte, ilerleyen oran genellikle konu bir güçlendirici almak için uygulamak için istekli olduğunu çaba ölçmek için kullanılır. Ilerici oran paradigma genellikle en son tamamlanan oranda kolu presler maksimal sayısı olarak tanımlanır kesme olarak bilinen bir ölçü, üretir;.. Yani maksimum bir güçlendirici oluşturulan yanıt 21 ilerici oran büyüklüğünü güçlendiricidir duyarlıdır. Örneğin, daha yüksek kokain (veya sukroz) doz daha yüksek bir kesme noktası ve daha düşük kokain (veya sukroz) dozları daha düşük bir verim breakp üretmekoint. 21,22 Buna göre, kesme motivasyon ve / veya takviye etkinliği için bir rutin olarak kullanılan proxy. 21,23-26 kesme niyeti hayvan yanıt vermiyor belirlemek için olduğundan, ilerici oran paradigmanın önemli bir parametredir aktif kalma süresini. Sonlu oturum uzunlukları kesme değerleri yanlış kap koyabilirsiniz ve bu anormal öz-yönetim veya artış sonrası takviye duraklatma oranını azaltmak öncesi tedaviler şiddetlenir edilebilir. . Bu şaşırtmak yaklaşımların herhangi bir sayı aşılabilir;., Örneğin, oturumlar, hayvan, ortalama arası infüzyon aralığının bazı katlarına göre yanıt tevkif zaman sona 44 Bu yaklaşımın daha yaygın olarak uygulanan varyantı vardır yanıt kez oturumları sonlandırmak için konular arasında sabit tutulur bazı ampirik olarak tespit değerine göre tevkif edilmiştir. Biz adım 4.4.9.11 bu yaklaşımı uygulamak için yöntem sağlamıştır.

Kemirgenler ve insanlar, davranışsal olarak ilgili uyaranlara1-3 oldukça benzer şekillerde yanıt verirler. Bu, kemirgenlerin davranışın moleküler substratlarını ve karmaşık psikiyatrik durumları aydınlatmak için uygun denekler olduğunu göstermektedir4. Motivasyon gibi karmaşık davranışsal süreçlerin moleküler substratlarını anlamak sıklıkla beyin mikroenjeksiyonu gerektirir. Burada hem beyin mikroenjeksiyon tekniği hem de birincil motivasyon testi sunulacaktır. Sıçanlar denek olarak kullanılacaktır, ancak bu prosedürler iyi idare edilen farelere kolayca uyarlanabilir. Burada, gerekli kanüllerin, obturatörlerin (sahte kanüller veya stiletler) ve mikroenjektörlerin üretimi için prosedürler yer almaktadır. Sunulan yöntem, prefabrike aletlerden önemli ölçüde daha esnek ve daha uygun maliyetlidir. Bu esneklik, koşulları optimize ederken değerli olacaktır. Daha da önemlisi, mikroenjeksiyon prosedürü sayısız hipotezi test etmek için kullanılabildiğinden; Burada sunulan teknikler geniş çapta uygulanabilir olmalıdır. Örneğin, nörokimyayı anlamak için reseptör ligandlarımikroenjekte edilebilir 3,5,6; hücre geçirgen peptitler ve küçük moleküller, hücre içi sinyal yolaklarını7-10 anlamak için mikroenjekte edilebilir; Devre1,11,12'yi anlamak için toksinler, iyon kanalı blokerleri veya antagonist kokteyller mikroenjekte edilebilir.
Burada sunulan jenerik protokol, kullanıcı tarafından kendi özel ihtiyaçları için kolayca uyarlanabilirken, mikroenjeksiyon sadece hafif el kısıtlaması altında olan uyanık kemirgenlerde meydana geldiğinden, prosedür özellikle davranışsal testler için çok uygundur. Anestezi veya özel kısıtlamalar gerekmez. Bu mümkündür çünkü beynin kendisi ağrı hissinden yoksundur. Bununla birlikte, anestezi kullanılmazsa, daha önce stereotaksik olarak implante edilmiş kanüller yoluyla mikroenjeksiyon yapılmalıdır. Bunun nedeni, nosiseptörlerin kafa derisinde, beyni çevreleyen zarlar olan meninkslerde13 ve kafatasını kaplayan zar olan periostteumda14 bulunmasıdır. Anestezi altında mikroenjeksiyonun bazen arzu edildiğine dikkat edilmelidir. Bir örnek, virüsün enjekte edildiği zamandır ve virüsü doğrudan paslanmaz iğneler15 veya cam pipetler yoluyla enjekte etmek isteyebilirsiniz, çünkü bu, doku hasarını azaltabilir ve transdüksiyon verimliliğini artırabilir. 16,17 Aşağıda açıklanan mikro enjektörler bu amaç için değiştirilebilir ve bunun nasıl yapılacağına ilişkin öneriler Tartışma'da bulunabilir. Diğer JoVE makaleleri stereotaksik beyin kanülü implantasyonunu gösterdiğinden,18-20 bu prosedürler burada ele alınmayacaktır.
Bu mikroenjeksiyon prosedürlerini, motivasyonu ölçen bir testle birlikte sunuyoruz. Pist kutusu ve bariyer ölçeklendirme gibi çeşitli motive edilmiş davranış modelleri şu anda kullanılmaktadır. Burada, edimsel tepkinin bir pekiştireç tarafından sürdürüldüğü durumlarda motivasyonu ölçmek için edimsel aşamalı bir pekiştirme çizelgesinin nasıl kullanılacağını açıklıyoruz. İlerleyen orana yanıt vermek, pekiştireç büyüklüğüne yanıt verir. 21,22 Buna göre, bu test rutin olarak motivasyon ve/veya pekiştirici etkinlik için bir vekil olarak kullanılmaktadır. 21,23-30 Birkaç mükemmel inceleme bu konuyu ayrıntılı olarak ele aldığından,21,24 esas olarak pratik kaygılara odaklanacağız.

<table><tbody><tr><td>Kanül Boru</td><td>Amazon Kaynağı/ Küçük Parçalar</td><td>HTXX-26T-60</td><td>26 G, Hypotube S/S 316-TW 26GA</td></tr><tr><td>Obturator</td><td>Amazon Kaynağı/ Küçük Parçalar</td><td>GWXX-0080-30-05</td><td>33 ölçü, Tel S/S 316LVM 0.008 IN</td></tr><tr><td>Mikroenjektör Teli MicroGroup</td><td></td><td>33RW 304</td><td>33 gauge</td></tr><tr><td>Süper Tutkal</td><td>Loctite</td><td>3924AC</td><td>Sıvı, Jel olmayan, otoklavlanabilir</td></tr><tr><td>Mikroenjektör Plastik Boru</td><td>Becton Dickson</td><td>427406</td><td>PE20</td></tr><tr><td>Orta Ağırlıkta Kanama Durdurucular</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>501241-G</td><td></td></tr><tr><td>Cetvel</td><td>Fisher</td><td>09-016</td><td>150 mm</td></tr><tr><td>#7 Forseps</td><td>Çalmak</td><td>52100-77</td><td>Dumont, Dumostar</td></tr><tr><td>Döner Alet</td><td>Dremmel</td><td>285</td><td>İki Hızlı</td></tr><tr><td>Kesme Diski</td><td>McMaster Carr</td><td>3602</td><td>15/16 "x 0.025"</td></tr> <tr><td>Mikroenjeksiyon Pompası</td><td>Harvard Aparatı</td><td>PhD 2000</td><td></td></tr><tr><td>1 ul Cam Şırınga</td><td>Hamilton</td><td>7001KH</td><td>İğne Stili: 25s / 2.75 "/ 3</td></tr><tr><td>Pamuk Uçlu Aplikatör</td><td>Fisher</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>Lab Mendil</td><td>Kimwipes</td><td>34133</td><td></td></tr><tr><td>Operant Yazılım</td><td>Coulbourn</td><td>Grafik Devlet</td><td></td></tr><tr><td>Operant Odaları</td><td>Coulborun</td><td>Habitest</td><td></td></tr></tbody></table>

kemirgen beyin mikroenjeksiyon moleküler alt tabakalar motive davranış eğitim için

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Beyin mikroenjeksiyonu, motivasyon gibi karmaşık davranışların moleküler substratlarının aydınlatılmasına yardımcı olabilir. Bu amaçla, kemirgenler uygun modeller olarak hizmet edebilir, çünkü kısmen davranışsal olarak ilgili uyaranlara verilen yanıt ve uyaran-eylem sonuçlarını ayrıştıran devre, insanlar ve kemirgenler arasında şaşırtıcı derecede benzerdir. Karmaşık davranışların moleküler substratlarını incelerken, belirli sistemleri değiştiren, artıran veya susturan reaktiflerin mikroenjeksiyonu paha biçilmez bir tekniktir. Bununla birlikte, sonuçların yorumlanmasına yardımcı olmak için mikroenjeksiyon bölgesinin hassas bir şekilde hedeflenmesi çok önemlidir. Cerrahi aletlerin ve mikroenjeksiyon iğnelerinin üretimi için minimum maliyetle doğru mikroenjeksiyon ve sınırsız özelleştirilebilirlik sağlayan bir yöntem sunuyoruz. Daha da önemlisi, bu teknik, gerekli cerrahi prosedürleri kapsayan diğer JoVE makaleleri ile birlikte yürütülürse uyanık kemirgenlerde başarılı bir şekilde tamamlanabilir. Ek olarak, motivasyonu ölçmek için çok uygun olan birçok davranışsal paradigma vardır. Progresif oran, (genellikle katlanarak) artan bir iş gereksinimine rağmen yanıt vermeyi sürdürmek için bir pekiştiricinin etkinliğini ölçen yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Bu test, güçlendirici büyüklüğe ve farmakolojik manipülasyonlara duyarlıdır, bu da pekiştirme etkinliğinin ve / veya motivasyonunun belirlenmesine izin verir. Ayrıca, aşamalı bir oran takviye programına uyum sağlamak için edimsel yazılımı programlamak için basit bir yaklaşım sunuyoruz.

Burada yukarıda belirtilen yöntemle elde edilebilir sonuçlarının örneklerini göstermektedir. Gösterilen ilk viral vektörler (Şekil 3) ile transfekte edilir tipik bir örnektir. Genel olarak, ~ 1 mm 3 bir transfekte hacmi striatal doku elde edilir. Transfekte bölgenin hacmi Cavalieri yöntemi kullanarak seri bölümleri arasında ölçülebilir 32 Önemli olarak, transfekte edilmiş hacmi, transfekte edilmekte olan dokuda tipi gibi birçok faktöre bağlıdır.; Viral serotip; promoteri; hızı ve hacim enjekte; enjekte parçacıkların sayısı; Enjektat pH; ve mannitol gibi hiperozmolar reaktifler, ister kullanılmıştır. 33,34 Genellikle, 10 dakika boyunca 10 ila 12 parçacık / ml, 1 ul / yan Microinject ve Obturator değiştirilmesi ile 7 ek bir dakika önce izin verir. Ayrıca, Enjektat pH 8. Sonraki çevresinde genellikle, biz motivasyon ya transgen ifade tarafından manipüle edilebilir olduğunu göstermektedir (Şekil 4)ya da farmakolojik reaktif madde mikroenjeksiyon (Şekil 5). Şekil 4, biz Münhasıran Tasarımcı Uyuşturucu (DREADDs) tarafından aktive Tasarımcı Reseptör dile getirdi. DREADD reseptör kodlayıcı bölgesi, bir ic ribosom giriş sitesi ve mCitrine kaseti izledi. MCitrine transfekte edilen hücrelerin uygun bir görselleştirme sağlar. DREADD heterotrimerik G-protein Gαq birleştirilmiştir. Astrositler, 28,35 ve DREADD kendisini uyarabilir Gαq-bağlanmış DREADD aktivasyonu klozapin-N-oksit (CNO, 3 mg / kg, ip) sistemli uygulanması ile aktive edilebilir. 14,22,36 Sıçanlar şekilde eğitildi kolu 3 kol presler 60 bitişik gün içinde günde 1 saat oturumları sırasında içmek için 1 şans verdi etanol takviye için yanıt. Sonra, fareler oruç zorlanan ve nükleus çekirdek astrositler akumbens içinde Gαq-birleştiğinde DREADDs ifade edildi. 3 hafta yoksunluk, kendini Adini motivasyon sonra<html> Nister etanol kesme ile ölçülmüştür. çekirdeğinin 21,27-30 aktivasyonu sistemik CNO uygulama yoluyla, yoksunluk, taşıyıcı ile karşılaştırılmıştır sonra etanol ile kendi kendilerine uygulamalarına devam etmek için farelerin motivasyon azalma çekirdek astrositler akumbens. Önemlisi, CNO yerine DREADD Yeşil Floresan Protein dile getiriyordu eşit eğitimli kohort etkisi olmamıştır. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53018/53018fig3.jpg" /> Microinjected virüs tarafından transfekte Şekil 3. Örnek ventral striatal bölgesi. Bu görüntü çekirdeğinin bölgesi yukarıdaki yöntemi izleyerek transfekte edilmiştir astrositleri akkumbens göstermektedir. Veriler telif hakkı sahibinin izni ile Bull ve ark., 13 yeniden basıldı edilir. Detaylar bu yayın ve beraberindeki ek malzeme bulunabilir.&quot;blank&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53018/53018fig4.jpg" /> Kendi kendine uygulamak etanole farelerin Şekil 4. Motivasyon çekirdeği çekirdek astrositler akumbensteki. Eksprese fazla virüs ifade etmek için bir hafta sonra, virüs izin mikroenjeksiyon ile enjekte edildi ve motivasyon kesme ile ölçülmüştür bir transgen aktive azaltılmıştır. Transgen Münhasıran Tasarımcı Uyuşturucu (DREADDs) tarafından Tasarımcı Reseptör Aktif edildi dile getirdi. Bir tek-yollu ANOVA (F (2,30) = 3.29, p = 0.04), bir post-hoc Scheffé ortaya takip ettiği klozapin-N-oksit sistemli uygulanması ile DREADD aktivasyonu (CNO, 3 mg / kg, ip ) önemli ölçüde yerine DR) CNO Yeşil Floresan Protein (GFP ifade edildi eşit eğitimli kohort hiçbir etkisi yoktu araca kıyasla yoksunluk sonra kendini administer etanole sıçanların motivasyon azalırEADD. Veriler telif hakkı sahibinin izni ile Bull ve ark., 13 yeniden basıldı edilir. Detaylar bu yayın ve beraberindeki ek malzeme bulunabilir. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/53018/53018fig5.jpg" /> Şekil gap junction bloker 5. Mikroenjeksiyon perhiz sonrası etanol-yönetmek kendini sıçanların motivasyonunu arttırdı iki gap junction blokerler etanol-yönetmek kendini sıçanların (kesme yoluyla ölçülen) motivasyon üzerindeki etkileri açısından değerlendirildi. Meflokin ve 18- a-glisiretinik asit (18-α). Bir iki yönlü ANOVA çekirdeğin içine boşluk kavşak blokerlerin mikroenjeksiyon çekirdek perhiz sonrası etanol-yönetmek kendini sıçanların motivasyonunu arttırdı akumbens ortaya (F (3,40) = 5.56, p = 0.003). Veriler telif hakkı sahibinin izni ile Bull ve ark., 13 yeniden basıldı edilir. Detaylar bu yayında bulunabilir veEkteki ek malzeme.

Kemirgenler, davranışın moleküler alt tabakalarını ve karmaşık psikiyatrik bozuklukları araştırmak için uygun bir modeldir. Uyanık kemirgenlerde beyin mikroenjeksiyonu, hastalık substratlarını aydınlatmak için kullanılabilir. Verimli ve özelleştirilebilir bir beyin mikroenjeksiyon yönteminin yanı sıra motivasyonu ölçen edimsel bir paradigmanın yürütülmesi sunulmaktadır.

Kemirgen Beyin Mikroenjeksiyon Moleküler Alt Tabakalar Motive Davranış Eğitim için

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Bu prosedürün genel amacı, bir kanül ve mikro enjektörleri doğru şekilde üretmek ve mikroenjeksiyon işlemini uygun olarak gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle uygun uzunlukta bir kanül üretilerek gerçekleştirilir. İkinci adım ise mikro enjektörlerin kesilmesi ve monte edilmesidir.Ardından, mikroenjeksiyon için mikro enjektörleri, tüpleri ve bir pompayı hazırlayın. Son adım, mikroenjeksiyonu tamamlamak ve bir difüzyon süresinin geçmesini beklemektir. Nihayetinde mikroenjeksiyon, uygun uygulama yöntemlerini göstererek reaktiflerin istenen beyin bölgesine doğru şekilde enjekte edilmesi için kullanılır.Mikroenjeksiyon işlemini laboratuvarımdaki bir öğrenci olan Ryan Poland gerçekleştirecektir. Genellikle, bu yönteme yeni başlayan kişiler zorluk yaşarlar; çünkü kanülün doğru yerleştirilmesini ve mikroenjeksiyon konumunun doğruluğunu sağlamak için özel bir dikkat gösterilmeli ve tüm adımlar büyük bir titizlikle uygulanmalıdır. Kanülü hazırlamak için öncelikle, ince uçlu bir kalem kullanarak bandın üzerine 15 milimetrelik bir referans çizgisi çizin.Ardından, keskin bir kalıcı markör kullanarak tüp üzerindeki 15 milimetrelik bölümleri sırayla işaretlemek için bunu kılavuz olarak kullanın. Daha sonra, kanül tüpünü döner aletin yavaşça dönen kesme diskine değdirerek çentikler açın. İşaretli noktalarda, kanülü 180 derece döndürün ve tüpün karşı tarafına çentik atın.Tıkanmaya yol açabileceği için tüpleri tamamen kesmeyin. Ardından, tüpleri 15 milimetrelik bölümlere ayırmak için keskin bir şekilde bükün. Sonra, kanülün her bir ucunu, başparmak ve işaret parmağınız arasında kesim diskine dik tutun.Küt bir uç oluşturmak için kanül tüpünü, ucunu kesme diskini yüzeyine değdirerek döndürün. Ardından, tüm çapakların giderildiğinden ve kanülün tıkanıklık içermediğinden emin olmak için kanülün her iki ucunu 26 gauge eğimli bir iğne ile genişletin. Obtüratör klempi hazırlamak için, kilitli hemostatı kanül dik duracak şekilde tezgaha yerleştirin ve orta ağırlıktaki düz hemostatlar ile kanülü yaklaşık yarı uzunluktan kesin.Ardından, ator telinin bir ucunu kanülün içine, tezgaha ulaşana kadar itin. Obtüratör ile tezgah arasındaki teması sürdürürken, parmaklarınızla sıkarak teli 30 derecelik bir açı elde edene kadar bükün. Bundan sonra, teli kanülden çıkarın ve küçük diyagonal kesicilerle büküm noktasından 2,5 milimetre uzaklıktaki fazla kısmı kesin.Bu prosedürde, mikro enjektör tüpünün bir ucunu kilitli düz bir hemostata dik olacak şekilde tutun. Tüpü gergin tutarak hemostatı döndürün ve tüpü hemostatın etrafına en az bir kez sıkıca sarın. Ardından, mikro enjektör tüpünün karşıdaki boş ucundan 32 milimetre ölçün ve bu noktayı ikinci bir hemostatla dik olarak kavrayın.Gerilimi koruyarak, tüp kırılana kadar ileri geri bükün. Ardından, her iki ucun düz olduğundan ve iç çapın tıkalı olmadığından emin olmak için mikro enjektör tüpünü inceleyin. Mezura üzerinde beş milimetrelik bir referans çizgisi çizin ve kanül tüpünün beş milimetrelik bölümlerini kalıcı bir kalem kullanarak sırayla işaretleyin.Ardından, tüpte çentikler oluşturmak için kanül tüpünü, işaretli noktalarda yavaşça dönen kesme diskine değdirin. Daha sonra, mikro enjektör boyun tüpünü beş milimetrelik bölümlere ayırmak için sertçe bükün. Her bir mikro enjektör tüpünün ucundan yaklaşık iki santimetre uzağa bir adet boyun halkası kaydırın.Mikroenjektör tüpünün bir ucundan beş milimetre uzağına az miktarda hızlı yapıştırıcı uygulayın. Ardından, bileziği hızlı yapıştırıcı damlasının üzerine, mikroenjeksiyon tüpünün ucundan bir milimetre mesafede olacak şekilde kaydırın. Bundan sonra bileziğin her iki ucunu yapıştırıcıyla kaplayın.Ardından, steril suyla doldurulmuş bir mililitrelik şırıngaya 26 gauge bir iğne takın. Sekiz santimetrelik mikro enjektör plastik tüp parçasını, tüpü delmediğinizden emin olarak iğnenin üzerine kaydırın; ardından plastik tüpün diğer ucunu kurumuş mikro enjektörün yakalı ucuna geçirin. Geçirgenliği test etmek için suyla dolu şırınganın pistonunu itin. Bu adımda, tamamlanmış mikro enjektörü, yakalı ucun karşı tarafındaki uçtan 15 mm uzaklıktan 95 derece bükün.Ardından, plastik tüpü 70 santimetre uzunluğunda kesin ve mikro enjektör yakasının üzerine geçirin. Pompayı mikroenjeksiyon için hazırlamak amacıyla, mikroenjeksiyon iğnesinin çapını, istenen infüzyon hızını ve tüpteki hedef enjeksiyon hacmini ayarlayın. Daha sonra, hassas bir hacmin otomatik olarak iletilmesi için pompa modunu hacim olarak ayarlayın.Ardından, şırınganın enjeksiyon hacmi artı ek 0.2 µL kadar doldurulabilmesi için pompa arka stoperini ayarlayın. Şimdi, gaz sızdırmaz şırınganın ucunu küçük bir whey boat içerisindeki steril suya yerleştirin ve içteki teli eşit şekilde yağlamak için pistonu hafifçe hızlıca hareket ettirin. Mikroenjeksiyon iğnesini suyla doldurmak için pistonu pompadaki arka stopere kadar çekin.Sonraki slayt. Mikro enjektöre bağlı olan PE 20 tüp, bir mililitre steril suyla doldurulmuş bir şırıngaya takılı 26 gauge bir iğneye bağlanmıştır. Mikro enjektör aracılığıyla steril su püskürtün ve püskürtme düzenini ve mesafesini kontrol edin.Ardından sterilize edilmiş bir mikro enjektörü steril bir alana yerleştirin. Boruyu iğneden kaydırarak çıkarın, suyun damlamasını önlemek için boruyu dik tutarak iğnenin zarar verdiği bölgenin altından kesin. Daha sonra, iğnenin ucunda bir damlacık oluşturmak için mikro enjektör şırınga pistonunu hafifçe ileri itin ve suyla dolu PE 20 boruyu iğneye geçirin.Ardından, örnek yüklemesine hazırlanmak için pistonu tamamen ileri itin ve mikro enjektörde hiç etanol kalmadığından emin olun. Mikro enjektörün ucunda oluşan su damlacığına temiz bir laboratuvar mendiliyle birkaç kez dokunarak düzeneği sızıntı açısından kontrol edin. Daha sonra, steril su ile PE 20 tüpü ve enjekte edilecek solüsyon arasında bir hava kabarcığı oluşturmak için şırınga pistonunu 0,2 µL geri çekin.Ardından, mikro enjektörü enjekte edilecek reajentin içine yerleştirin ve şırınga pistonunu yavaşça geri durdurucuya kadar çekin. Hayvanı enjeksiyona hazırlamak için sıçanın göğsünü deneycin göğsüne yaslayın. Kanül çevresini Betadine emdirilmiş bir pamuklu aplikatörle temizleyin.Baş kapağını üç kez Betadine ile, ardından iki kez etanol ile silin. Daha sonra, dolu mikro enjektörü kanüle yerleştirin. Mikro enjeksiyon pompasında başlat düğmesine basın ve hava kabarcığının hareketini izleyin.Enjeksiyon tamamlandığında, mikro enjektörü kanülden çıkarın ve yerine obturatörü yerleştirin. Bu şekil, mikro enjekte edilen virüs ile nucleus accumbens astrosit bölgesinin transfeksiyonunu göstermektedir ve bu şekil, nucleus accumbens'te aşırı eksprese edilen bir transgenin aktive edilmesiyle sıçanların etanolü kendi kendine uygulama motivasyonundaki azalmayı göstermektedir. Core astrosit bölgelerinde, CNO'nun sistemik uygulamasıyla DREAD'ın aktivasyonu, CNO yerine araç (vehicle) verilen gruba kıyasla, yoksunluk sonrası sıçanların etanolü kendi kendine uygulama motivasyonunu önemli ölçüde azaltmıştır; DREAD yerine GFP eksprese eden benzer şekilde eğitilmiş bir kohortta ise herhangi bir etki gözlenmemiştir.Bu teknik, kişiselleştirilmiş beyin mikroenjeksiyon araçlarının kullanımına ve deneysel prosedürlerde daha fazla esnekliğe olanak tanıyabilir. Bu prosedür uygulanırken, istenen etkinin elde edilmesi için hassas mikroenjeksiyon konumunun zorunlu olduğunu unutmamak önemlidir.

rodent-brain-microinjection-to-study-molecular-substrates-motivated

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Hayvanların serbestçe hareket eden, farklı beyin bölgeleri ekstrasellüler nörotransmitter düzeylerinin izlenmesi nörotransmitter salınımı ve davranış arasındaki bağlantıyı irdeliyoruz. Ve bazal nörotransmisyon farmakolojik veya fizyolojik manipülasyonlar nasıl değiştirdiğini hakkında bilgi; in vivo mikrodiyaliz elektrokimyasal algılama ile birleştiğinde mükemmel anatomik ve kimyasal çözünürlük sağlar.

Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi

Kaynak: Poland, R. et al. Motive edilmiş davranışın moleküler substratlarını incelemek için kemirgen beyin mikroenjeksiyonu. J. Vis. Uzm. (2015)Bu videoda, hassas ilaç iletimi için bir şırınga ve mikroenjektör hortumundan oluşan su dolu bir mikroenjeksiyon kurulumu kullanılmıştır. Önceden implante edilmiş bir kılavuz kanülü olan bir sıçan, hedefe yönelik beyin mikroenjeksiyonuna tabi tutulur ve bu da uyanık hayvanlarda minimum doku hasarı ile terapötik ajanların doğru bir şekilde uygulanmasını...

Terapötik Bir Ajanın Uyanık Bir Kemirgen Beynine Mikroenjeksiyon Tabanlı Verilmesi

Bu protokol, anestezi uygulanmış bir sıçanın hedeflenen beyin bölgelerine hassas ilaç iletimi için bir enjekrodun montajını ve kullanımını, ardından kaydedilen elektrik sinyalleri aracılığıyla nöronal aktivitenin izlenmesini ana hatlarıyla belirtir.

Sıçan Beyninde Elektrofizyolojik Kayıt ile İlaç Mikroenjeksiyonu

Kaynak: Paolone, G., et al. Kemirgen beynine mikroenjeksiyonlar için kişiselleştirilmiş iğneler. J. Vis. Uzm. (2018).Bu video, delikli bir kuvars mikroiğne kullanılarak yapılan bir kemirgen beyin mikroiğne enjeksiyonunu göstermektedir. Mikroiğne, teslimat hızını kontrol etmek için bir şırıngaya ve mikro pompaya bağlanır. Enjeksiyon solüsyonu ile iğne, iletim hızı düşük olarak ayarlanmış olarak beyne yerleştirilir. Konumlandırıldıktan sonra teslimat hızı artırılır. Kısa bir duraklamadan sonra...

Kuvars mikroiğne kullanılarak kemirgen beyin mikroenjeksiyonu

MicroRNA beyin yapısı ve fonksiyonu önemli rolleri vardır. Burada aşırı ifadesi bir mühendislik miRNA-ifade lentivirüs stereotaktik enjeksiyonu kullanılarak hipokampal miRNA uygulamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, değerlendirmek için nispeten hızlı bir yöntem olarak hizmet...

Bir Stereotaktik Enjeksiyon MicroRNA-ifade Fare Hippocampus CA1 Bölgesi Lentiviruses ve Davranış Sonuç Değerlendirilmesi

Bu makalede, fare beynine viral vektörler microinject ve sonra satın alma, yok olma ve iade faz içeren klimalı yerde tercih paradigma test etmek için nasıl.

Cre Recombinase Kokain Klima yeri tercihi Hedef Genlerin Rolü Eğitim için ifade Viral Vektörler stereotaksik Mikroenjeksiyon

Burada, ikili işlevlere sahip bir cam pipet yapıyoruz: ilaçların mikroenjeksiyonları ile derin beyin yapılarının inhibisyonu ve eşzamanlı elektrofizyolojik kayıtlar yoluyla etkilerinin gerçek zamanlı olarak izlenmesi.

Eşzamanlı Elektrofizyolojik Kayıt ve kemirgen Beyindeki inhibitör Ajanların Mikro-enjeksiyon

Lentivirüsler cDNA'larını ifade eden ya da shRNAs farelerde spesifik beyin bölgelerinde gen ifadesini modüle edebilen stereotaktik enjeksiyon. Burada, biz Açık Alan Testi (OFT) ve Zorla Swim Testi (FST) gibi davranışsal görevleri ile stereotaktik enjeksiyon birleştirmek için bir protokol mevcut.

Stereotaktik Enjeksiyon Tekniği uygulamak Hayvan Davranışları üzerinde Genetik Etkileri Eğitim için

Bu prosedür, ucuz ve yaygın olarak kullanılabilir araçları kullanarak yüksek kaliteli protein ve RNA elde etmek için ayrık dondurulmuş beyin bölgelerinin toplanmasını açıklar.

Downstream Analizleri için Dondurulmuş Kemirgen Beyin Bölgeleri Koleksiyonu

Bu protokol, düşük maliyetli bir mikroenjeksiyon sisteminin inşasını, derin beyin yapılarına stereotaksik implantasyonunu ve uyanık ve sınırsız sıçanlarda tetrodotoksin zamanlanmış mikroenjeksiyon prosedürünü açıklar. Amaç, hipotalamik yapıların nöral aktivitelerini engelleyerek yumurtlamanın düzenlenmesine katılımını ortaya çıkarmaktır.

Tetrodotoksin Mikroenjeksiyonları ile Ters İnaktivasyon Yoluyla Yumurtlamanın Düzenlenmesinde Sıçan Beyninin Ayrık Alanlarının Rolünün Çözülmesi

Öğrenin kemirgenlerde beyin mikroenjeksiyonu yöntemini, davranış ve psikiyatrik bozuklukların moleküler temellerini araştırmak için. Bu hassas teknik, kanül ve mikro enjektör üretimini kapsar.

Kemirgen Beyin Mikroenjeksiyon Moleküler Alt Tabakalar Motive Davranış Eğitim için

Daha fazla video keşfet