Name: Dalbavansin için Başvuru sıvı mikrodilüsyon yöntemi İn Vitro Duyarlılık Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: Öğrenin, dalbavancin için sıvı mikrodilüsyon yöntemiyle Gram-pozitif bakterilerin duyarlılık testini nasıl yapılır. Bu protokol, DMSO ve polisorbat 80 kullanımıyla doğru ve tekrarlanabilir MIC sonuçları elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dalbavansinin duyarlılık testi ile ilgili önceki çalışmalar, standart bir yöntemin geliştirilmesinde değerli olmuştur ve bu çalışma için JMI Laboratuvarları, Robert Rennie ve Beth Goldstein'a teşekkür edilmiştir.

Antimikrobiyal duyarlılık 2, 3, 4 referans sıvı mikrodilüsyon yöntemi tüm detaylar için CLSI belgeler M7-A10 ve M100-S25 ve / veya ISO / FDIS 20776-1 bakın referans yöntemleri bazı seçenekleri için izin: Not. inokulum hazırlama ve MIC paneli üretimine özel prosedürler aynı sonuca ulaşmak için. Burada açıklanan yöntem, bir antimikrobiyal madde, Dalbavansin ilişkindir ve bazı adımlar referans prosedürü yapılabilir potansiyel çeşitli yollardan temsil eder. (Biyogüvenlik seviye 2 ile uyumlu) uygun güvenlik önlemleri 10 kullanılmalıdır. Bu Video yayın amacıyla kullanılan MIC panel format Tablo 1 &#39;de gösterilmiştir. 1. Mağaza dalbavansin Toz <ol><li> Olmayan bir defrost dondurucuda bir kurutulmuş ortamda -20 o C&#39;de tanı dereceli dalbavansin tozu, mağaza aldıktan sonra. Kullanımdan önce, toz dengelenmeye olmalıdıraçmadan önce RT ulaşır. </li></ol> 2. MIC Panel dilüsyonlarının hazırlayın <ol><li> Steril cam ya da plastik tüplerde, temiz (saf), DMSO Dalbavansin hiç daha yüksek 1600 ug / ml stok çözelti hazırlayın ve -60 ° C&#39;nin altında veya gelecekte kullanılmak üzere -20 ° C&#39;de işleme ve hazırlama deposu aynı gün kullanmak olmayan bir buz çözme dondurucu. Toz ağırlığında olduğunda toz ile alınan belgelerde verilen olarak dikkate Dalbavansin potens al, (örneğin, 800 ug / ml stok hazırlanması için Denklem 1 e bakınız). </li><li> Steril cam ya da plastik tüplerde saf DMSO ile Tablo 2&#39;de kolon 1 e (&quot;Kaynak Konsantrasyon&quot;) &#39;de gösterildiği gibi şemaya benzer hazır seyreltme ile seyreltilir. Seyreltici ve birinci tüp başlangıç ​​dalbavansin stok eklemek için başka bir pipet ölçmek için, bir pipet kullanın. Sonraki her dalbavansin stok konsantrasyonu için yeni bir pipet kullanın. </li><li> 100X son MIC paneli concent hazırlayınsaf DMSO ile tayın seyreltileri (ara konsantrasyonlar). Sütun 2, Tablo 2-4 de gösterildiği gibi, (yapılacak MIC panelleri sayısına bağlıdır kullanılacak hacim) istenen ara madde konsantrasyonu elde etmek için kaynak ve DMSO, uygun hacimleri birleştirir. </li><li> % 0.004 P80 hazırlayın: 4.9 ml dH 2 O 0.1 ml P80 eklenerek% 2 P80 taze çalışma stok çözeltisi hazırlayın Hazırlık aynı gün 0.22 mikron filtre ve kullanım çözeltisi geçirilerek sterilize edin. (CAMHB içinde 149,7 ml örneğin, 0.3 ml% 2 P80) 500 seyreltme% 2 P80: 1 yaparak% 0.004 P80 seyreltici hazırlayın. </li><li> Bundan başka Aşama 1 2,2 &#39;da hazırlanan ara konsantrasyonları sulandırmak 100% 0.004 ile takviye edilmiş bir katyon arındırılmış, Mueller Hinton suyu (CAMHB) içindeki bir (h / h) polisorbat-80 (P-80), P-80 ve / veya LHB (streptokok için) ilave 2 seyreltme: iki nihai konsantrasyonda aşılama (adım 4.3) ilave bir 1 sonuçlanacaktır. Tablo 2&#39;de sütun 6 ve 7 görün </st&gt; Rong. </li></ol> 3. MIC Panelleri hazırlayın <ol><li> MIC panelin uygun oyuklara adım 2.3 hazırlanan her dalbavansin çözeltisi 50 ul koyun ve (de büyüme kontrolü), yalnızca bir kuyuda ortamı içerir. Steril uçları bir çok kanallı pipet bu aşama için kullanılabilir. </li><li> Hemen panelleri kullanın ya da plastik torbalarda plastik film, yer mühür ve hemen ≤-20 o C (tercihen ≤-60 o C de) ihtiyaç duyulana kadar az olmayan bir defrost dondurucuda yerleştirin. Donmuş paneller kullanılması halinde, mühürleri kaldırmak ve (iyi içeriği çözülmüş kadar) Panel aşılamadan geçmeden önce 15-30 dakika süreyle laboratuvar bankta tek tek panelleri yerleştirin. </li></ol> 4. MIC Panelleri inoküle Saflık ve Kurulum Koloni Sayısı gerçekleştirin <ol><li> Bir 18-24 saat kan agar veya diğer non-selektif agar plakasından birkaç iyi izole edilmiş koloniler seçin. 1-5 ml CAMHB veya s steril döngü veya bez ve transferi ile her koloninin üst dokununbulanık oluncaya dek aline 0,5 McFarland standart eşdeğerdir. 0.5 McFarland veya fotometrik bir cihaz ile karşılaştırma yapılarak bulanıklık değerlendirin. </li><li> CAMHB içinde 100 (100 ul, 10 ml CAMHB da): preparatın 15-30 dakika içinde, inokulum 1 seyreltin. S. hariç Dalbavansin karşı test Çoğu bakteriler için pneumoniae, bu seyreltme 5 x 10 5 CFU / ml&#39;lik bir son konsantrasyonda (kabul edilebilir aralık 2-8 x 10 5 CFU / ml) sağlar. S. pneumoniae, 0.5 McFarland türbidite karşılaştırılmasına dayanarak bakteri konsantrasyonu, bu nedenle, (10 mi CAMHB +% 10 + LHB içine 400 ul) inokulum 1:25 seyreltin, daha az, tipik olarak. </li><li> Aşı hazırlama sonra 15 dakika içerisinde, steril uçları kullanarak bir çok kanallı pipet bu aşama için kullanılabilecek adım 3&#39;te hazırlanan MIC panelin (sterilite kontrolü hariç kuyu) her nihai bir inokulum 50 ul aktarma. </li><li> Bir saflık kontrolü yapıntransfer ve iyi bir seçici olmayan agar (% 5 koyun kanı ile, örneğin, triptikaz soya agar) steril döngü kullanarak pozitif büyüme denetimden 1-10 ul kısım yayarak. </li><li> (: 1000 seyreltme 1) tuzlu su 10 ml büyüme kontrolü de bir tek kanal pipet steril ucu transfer 10 ul çıkararak Kur koloni sayısı. Farklı yönlerde iki kez karıştırın ve uygun bir selektif olmayan agar ortamında (örneğin, triptikaz soya,% 5 koyun kanı agar) ve steril bir çerçevenin bulunduğu tüm agar yüzeyi üzerine yayılmış, tekrar için tek bir kanal pipet steril ucu ile 100 ul aktarma inokulum (1:10 seyreltme) eşit dağılımı sağlamak için. </li></ol> 5. inkübe MIC Paneller, Koloni Sayımı ve Saflık Tabaklar <ol><li> Plastik bantla veya kuluçka önce dar plastik kapaklı, plastik bir torba içinde en fazla 4 panellerin her MIC panelini veya yığını Seal. Alternatif olarak, t boş MIC paneli yerleştirmeken fazla 4 MIC panellerinin yığınının op, bir plastik kap içinde nemli bir kağıt havlu koyun, plastik kap ve güvenli kapaklı yakın kapta yer MIC panelleri. </li><li> 16-20 saat (stafilokoklar ve enterokoklar) ile inokülasyon 30 dakika içinde 20-24 saat (streptococci) için 35 ° C ± 2 ° C &#39;de ortam hava kuluçka makinesi içinde MIC panelleri inkübe edin. % 5 CO2 inkübatöründe inkübe streptokoklar dışında aynı koşullar altında, koloni sayımını ve saflık inkübe edin. </li></ol> 6. MIC okuyun ve Koloni Sayım Plakası; Saflık Plakası Kontrol <ol><li> Tamamen çıplak gözle tespit edilen kuyulardan bakteri üremesini engeller düşük konsantrasyon olarak MIC okuyun. </li><li> Koloni sayımı plaka üzerinde koloniler sayın. Seyreltme faktörü (1: 10,000), her bir koloni çarpın (örneğin, 50 koloni 5 x 10 5 CFU / ml&#39;ye eşittir). Kabul edilebilir bir aralık 20-80 kolonidir (2-8 x 10 5 CFU / ml) ve beğenme olarak kullanılanximate kılavuz. </li><li> Saflık plakasını kontrol edin. Tüm koloni aşama 4,1 kullanılan koloniler benzer ise, o zaman aşı saf olarak kabul edilebilir. Mevcut başka bir koloniler varsa bir kirletici MIC panelinde mevcut olması ve test tekrar edilmelidir, daha sonra bir potansiyel vardır. </li></ol> 7. Kontrol Kalite Kontrol Sonuçları. <ol><li> CLSI kalite kontrol suşları beklenen aralıkları için Tablo 3&#39;e bakınız. Sadece kalite kontrol organizmanın (ler) için dalbavansin MIC sonuçlar beklenen kapsama alanında izolatları ise testin sonuçlarını rapor. </li><li> ≥0.25 ug / ml&#39;lik bir MIC herhangi bir klinik S. elde edilirse aureus dalbavansin MIC testi tekrarlamak ve / veya doğrulama için bir referans laboratuvarına gönderin, izole. </li></ol>

<ol><li>Boucher, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Once-weekly+dalbavancin+versus+daily+conventional+therapy+for+skin+infection%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Once-weekly dalbavancin versus daily conventional therapy for skin infection.</a> The New England journal of medicine. 370, 2169-2179 (2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22M07-A10.+Methods+for+Dilution+Antimicrobial+Tests+for+Bacteria+that+Grow+Aerobically.%3A+Approved+Standard%22">M07-A10. Methods for Dilution Antimicrobial Tests for Bacteria that Grow Aerobically.: Approved Standard</a>. , Tenth Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22M100-S25.+Performance+Standards+for+Antimicrobial+Susceptibility+Testing%3B+Twenty-Fifth+Informational+Supplement%22">M100-S25. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-Fifth Informational Supplement</a>. , Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+laboratory+testing+and+in+vitro+diagnostic+test+systems+--+Susceptibility+testing+of+infectious+agents+and+evaluation+of+performance+of+antimicrobial+susceptibility+test+devices+--+Part+1%3A+Reference+method+for+testing+the+in+vitro+activity+of+antimicrobial+agents+against+rapidly+growing+aerobic+bacteria+involved+in+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22ISO%2FFDIS%22%5BJournal%5D)">Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems -- Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices -- Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases.</a> ISO/FDIS. 20776-1, International Organization for Standardization. (2006).</li>
<li>Jones, R. N., Farrell, D. J., Flamm, R. K., Sader, H. S., Dunne, M. W., Mendes, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+analysis+of+vancomycin+to+predict+susceptible+categorization+of+dalbavancin%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Surrogate analysis of vancomycin to predict susceptible categorization of dalbavancin.</a> Diagn Microbiol Infect Dis. , (2015).</li>
<li>Turnidge, J., Paterson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Setting+and+revising+antibacterial+susceptibility+breakpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+microbiology+reviews%22%5BJournal%5D)">Setting and revising antibacterial susceptibility breakpoints.</a> Clinical microbiology reviews. 20, 391-408 (2007).</li>
<li>Rennie, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+broth+microdilution+antimicrobial+susceptibility+test+results+for+dalbavancin%2C+a+new+glycopeptide+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Factors influencing broth microdilution antimicrobial susceptibility test results for dalbavancin, a new glycopeptide agent.</a> Journal of clinical microbiology. 45, 3151-3154 (2007).</li>
<li>Arhin, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polysorbate+80+on+oritavancin+binding+to+plastic+surfaces%3A+implications+for+susceptibility+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+agents+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Effect of polysorbate 80 on oritavancin binding to plastic surfaces: implications for susceptibility testing.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 52, 1597-1603 (2008).</li>
<li>Farrell, D. J., Mendes, R. E., Rhomberg, P. R., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+reference+broth+microdilution+method+for+testing+telavancin%3A+effect+on+MIC+results+and+correlation+with+other+testing+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+agents+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Revised reference broth microdilution method for testing telavancin: effect on MIC results and correlation with other testing methodologies.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 58, 5547-5551 (2014).</li>
<li>Ribbon Panel, B. lue <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+Safe+Work+Practices+in+Human+and+Animal+Medical+Diagnostic+Laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Supplements%22%5BJournal%5D)">Guidelines for Safe Work Practices in Human and Animal Medical Diagnostic Laboratories.</a> MMWR Supplements. 61 (01), 1-101 (2012).</li>
<li>Anderegg, T. R., Biedenbach, D. J., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+quality+control+evaluations+for+susceptibility+testing+of+Dalbavancin+%28BI397%29%2C+an+investigational+glycopeptide+with+potent+gram-positive+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Initial quality control evaluations for susceptibility testing of Dalbavancin (BI397), an investigational glycopeptide with potent gram-positive activity.</a> Journal of clinical microbiology. 41, 2795-2796 (2003).</li>
<li>Koeth, L. M., Windau, A. R., Goldstein, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Broth+Microdilution+and+Agar+Dilution+Dalbavancin+and+Vancomycin+MIC+Results+for+42+Aerobic+Gram-positive+Bacteria.+Poster+132%5BTitle%5D)+AND+%22ASM%22%5BJournal%5D)">Comparison of Broth Microdilution and Agar Dilution Dalbavancin and Vancomycin MIC Results for 42 Aerobic Gram-positive Bacteria. Poster 132.</a> ASM. , San Francisco, CA. (2012).</li>
<li>Fritsche, T. R., Rennie, R. P., Goldstein, B. P., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+dalbavancin+MIC+values+determined+by+Etest+%28AB+BIODISK%29+and+reference+dilution+methods+using+gram-positive+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of dalbavancin MIC values determined by Etest (AB BIODISK) and reference dilution methods using gram-positive organisms.</a> Journal of clinical microbiology. 44, 2988-2990 (2006).</li>
<li>Mushtaq, S., Warner, M., Johnson, A. P., Livermore, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+dalbavancin+against+staphylococci+and+streptococci%2C+assessed+by+BSAC+and+NCCLS+agar+dilution+methods%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+antimicrobial+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Activity of dalbavancin against staphylococci and streptococci, assessed by BSAC and NCCLS agar dilution methods.</a> The Journal of antimicrobial chemotherapy. 54, 617-620 (2004).</li>
<li>Jones, R. N., Flamm, R. K., Sader, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+of+dalbavancin+potency+and+spectrum+in+the+United+States+%282012%29%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+microbiology+and+infectious+disease%22%5BJournal%5D)">Surveillance of dalbavancin potency and spectrum in the United States (2012).</a> Diagnostic microbiology and infectious disease. 76, 122-123 (2013).</li>
</ol>

Sandra McCurdy Durata Therapeutics bir çalışanı olduğu; Laboratuvar Uzmanları, Inc., Laura Koeth ve Jeanna Fisher işveren, yazının hazırlamak için Durata Therapeutics tarafından ihale edildi. Bu yazı için Yayın ücretleri Laboratuvar Uzmanları, Inc. tarafından ödendi

Dalbavansin MIC testi için hazırlarken aşağıdaki yöntem detayları ek hususlar için sunulmuştur. Antimikrobiyal maddeler sayısı (yani., Tek başına ya da çok sayıda dalbavansin maddeler) ve bakteri türleri, test edilecek test edilecek MIC panelinin tasarımı bağlı olacaktır. Dalbavansin konsantrasyonları en az bir QC suşu için beklenen test edilecek tüm bakteri türlerinin ve dilüsyonlarının tüm aralığı için yorumlayıcı kesme noktalarını içermelidir. Antimikrobiyal seyreltme serisi, antimikrobiyal maddeler ve / veya / plaka ve inokülasyon yöntemini yalıtır sayısına bağlı olarak satırlar veya sütunlar ya organize edilebilir. Dalbavansin tozu ve suyu hacmi optimal miktarlarının üretildiği ve atık az olduğundan emin olmak için hesaplanmalıdır. Bu yayında kullanılan Örneğin, cildi, iki MIC panellerin hazırlanması dayanmaktadır. Katyon düzeltilmiş Mueller Hinton suyu adama göre hazırlanan ve otoklavlanmalıdırolarak üreticinin talimatları ve medya sterilite doğrulandı. MIC panel yapılmıştır ve hazırlık aynı günde veya kullanılmış, uygun kalite kontrol organizmalar ve gelecekte kullanılmak üzere dondurulabilir saklanan doğrulanmış paneller ile test edilebilir edilebilir. Bu prosedür boyunca steril teknikleri kullanmak önemlidir. Koloni sayıları ile inokulum konsantrasyonu doğrulanması için kesin kriter yoktur. Koloni sayımları aşama 4,2 gerçekleştirilen seyreltme adımı doğrulamak için periyodik olarak test ve / veya her tür için, başlangıçta kontrol edilebilir. Bu 0,5 McFarland standardına geçerliliği de E. ile rutin olarak kontrol edilmesi önemlidir 4.5 adım e benzer bir prosedür kullanılarak E. coli ATCC 25922. Sonuçlar 1-2 x 10 8 CFU denk değilse / ml, yeni 0,5 McFarland standart alınmalıdır. MIC kuyulardan koloni sayımları kabul edilebilir aralığın dışında ise (klinik izolat (ler) için 2-8 x 10 5 CFU / ml ve MIC sonuçları inci değişirE beklenen normal dağılım (örn. 0,03-0,12 ug / S. aureus için ml) ve / veya kalite kontrol izolatı (ler) için MIC sonuçlar beklenen aralıkların dışında, doğrulama testleri gereklidir ve yöntem değiştirme garantili olabilir. Bir valide 0,5 McFarland standart koloni sayısı (ler) tekrar için kullanılan ileri sürülmektedir ve sonuçları beklenen sonuçların dışında yine eğer, adım 4.2 gerçekleştirilen şekilde aşı seyreltme buna göre ayarlanmalıdır ve MIC tekrarladı. Koloni sayımı işlemi mutlaka kirletici organizmaların düşük konsantrasyonlarda tespit olmayabilir seyreltilmiş hacmi kullanır çünkü koloni sayımı yapılır bile saflık kontrolü gerekli olduğunu unutmayın. MIC testi geçerli sayılabilmesi için, kabul edilebilir bir büyüme de büyüme kontrolü yapılmalıdır. Dalbavansin karşı test edilecektir çoğu bakteriler için (yani., Stafilokoklar, streptokoklar ve enterokoklar, büyüme bir düğme (genellikle&gt; 2 mm) ve daha az fr olarak görülecektirequently büyüme kuyuda bulanıklık olarak görünebilir. Konsantrasyonları arttıkça etkisi sondaki görülebilir bazı antimikrobiyal ajanların aksine, dalbavansin uç noktaları genellikle iyi tanımlanmıştır. Sürece kuyularda büyümeyi ayırt yeteneği hiçbir uzlaşma olmadığı için dalbavansin içeren plakalar okumak için kullanılan olabilir okuma mikrodilüsyon testleri kolaylaştırmak amacıyla çeşitli görüntüleme cihazları vardır. Protokol içindeki kritik adım Dalbavansin ve P80 eklenmesi çözünürlük ile ilişkili prosedür parçaları ile ilgilidir. Bu besiyeri seyreltmeleri hale getirmek için bu DMSO çözücü olarak kullanılır ve bu ara ürün konsantrasyonları DMSO içinde hazırlanmaktadır, kullanılan Dalbavansin maksimum konsantrasyonu büyük olmayan 1.600 den ug / ml olması özellikle önemlidir, böylece MIC nihai DMSO konsantrasyonu, Panel kuyuları% 1 daha büyüktür. DMSO higroskopiktir ve bu nedenle, DMSO eski şişelerin kullanımı considerat oldudalbavansin çözünürlüğü ile ilgili olarak iyon. Kalite kontrol suşları ile küçük BMD çalışma bu göstermiştir Ancak, (sonuçlar bölümüne bakınız) önemli bir değişken olarak değil, bu DMSO yeni veya yakın zamanda açılan şişe kullanmak iyi bir uygulamadır. Bu P80, ilaç seyreltme hazırlama son aşamada çorbasına eklendiği de önemlidir ve de MIC% 0.002 nihai konsantrasyondadır. BMD prosedürü buraya dahil iyi Dalbavansin ve P-80 konsantrasyonları iki kez nihai konsantrasyon ve 50 ul inokulum ek olarak / de öylesine nihai hacim / kuyu 100 ul olduğunu 50 ul / kullanarak MIC panellerin hazırlanmasını kullanır. Tek MIC paneli biçimi, hem S. test için üretilecek için bu yöntem veriyor aureus ve S. pneumoniae lize at kanı inokulum eklenebilir, çünkü. 100 ul / oyuk ile 10 ul ilave kullanarak MIC panellerin hazırlanması için alternatif yöntemler / göz tarif edilmektedirCLSI ve ISO işlemleri. S. dalbavansin duyarlı kesme noktası aureus ≤0.12 ug / ml (FDA paket eki) &#39;dir. Son gözetim de gösterildiği gibi, izolatların çoğunluğu 0,06 ug / ml 15 seviyelerinde dalbavansin ile inhibe edilir. Kapat modal MIC duyarlı kesme, yöntem farklılıkların sonucu olarak MIC herhangi bir değişiklik duyarlılık oranları etkileyebilir. Dalbavansin için BMD prosedürü (bazı benzersiz adımları içerdiğinden, özellikle de MIC stoklar ve orta sulandırılmış ilaç ve% 0.002 P80 hazırlanması DMSO kullanımı, bu yöntem tam olarak takip etmesi zorunludur. S. aureus QC organizma 0.06 mg / ml çok açık dalbavansin modal MIC ile (ATCC 29213), yöntem varyasyon iyi bir göstergesi olmuştur ve BMD yöntemini doğrulamak için rutin olarak kullanılmalıdır. MIC sonuçları 0.03-0.12 ug beklenen yelpazesi ile iseniz / ml, ama ya düşük ya da HIG için trend olanBu aralığın h tarafı, yöntemin ayrıca doğrulama garanti edilir. % 0.002 P80 eklenmesi tüm ilgili gram-pozitif organizmalar için önerilir (staphylococcci, enterokoklar ve streptokoklar). Bununla birlikte, bu bağlayıcı, anti onun P-80 nisbetle benzer hareket at kanı lize gösterilmiştir dikkat çekicidir yeteneği ve + LHB dalbavansin streptokoklar MIC sonuçlarına ek bir etkiye sahip CAMHB P-80 eklenmesi bu. Orada test Dalbavansin hiçbir disk difüzyon yöntemi şu anda olduğundan ve yoksul KMY korelasyon ve AD sonuçları, AD yöntemi kullanılarak Dalbavansin duyarlılık testi 12, 14 tavsiye edilmez. BMD yöntemi dalbavansin yatkınlığın gelecekteki değerlendirilmesi için kullanılmalıdır ve ticari antimikrobiyal duyarlılık testlerinin geliştirilmesi için altın standart olarak.

Dalbavansin Gram-pozitif organizmaların 1 kaynaklanan akut bakteriyel deri ve deri eklerinin enfeksiyonlarının tedavisinde Mayıs 2014 yılında FDA tarafından onaylanmış bir yarı sentetik lipoglycopeptide olduğunu. Bir video formatında bu yöntemi ayrıntılı birincil hedefi doğru ve tekrarlanabilir dalbavansin duyarlılık sonuçlarının test edilmesi ve raporlanması için klinik laboratuvar ve araştırma bilim adamları açık bir rehberlik sağlamaktır. Ticari yöntemlerle antimikrobiyal bir madde MIC tespiti rutin patojenik bakterilere karşı bir ajan, in vitro etkinliğinin değerlendirilmesi için klinik laboratuarlarda gerçekleştirilir. CLSI ve ISO 2,3,4 tarafından tavsiye edilen Burada anlatılan yöntem sıvı mikrodilüsyon yöntemidir. Ve disk difüzyon ve agar dilüsyon yöntemleri (Bu yayının anda) ticari duyarlılık yöntemleri henüz mevcut değildir dalbavansin beri halen f tavsiye edilmezveya dalbavansin, referans suyu seyreltme yöntemleri 12,14 mevcut akım seçenekleridir. Bu referans yöntem ticari olmayan ve FDA laboratuvar geliştirilen testte (LDT) için düzenleyici gerekliliklere uymak zorundadır hasta testi için bu yordamı kullanabilirsiniz ABD&#39;de in vitro diagnostik yöntem, klinik laboratuvarlar temizlenir gibi. Bu dalbavansin kullanım arttıkça, daha fazla laboratuvarlar bu bileşiği test etmek için bir ihtiyaç olacağı tahmin edilmektedir. S. dalbavansin karşı hassasiyetlerinin belirlenmesi için bir vekil olarak vankomisin testi aureus 5 onaylanmıştır. Bununla birlikte, dalbavansin vankomisin ara madde S. karşı etkin olabilir aureus (VISA) ve bu nedenle, klinisyenlerin dalbavansin MIC sonuçlarını isteyebilir. Buna ek olarak, diğer bakteri türleri için MIC sonuçları istenebilir. S. karşı Dalbavansin FDA duyarlı kesme aureus ≤0.12 ug / ml&#39;de kurulmuştur. FDA atanmış yalnızca susceptiÇünkü dirençli izolatların verilerinin eksikliği ble kategorisi. Vahşi tip S. arasında, normal dağılım MIC aureus 0.06 ug / ml &#39;lik bir açık modal MIC ug 0,03-0,12 arası / ml vardır. Sözü geçen yöntemin farkı MIC sonuçları küçük bir farklılık, ±, bir seyreltme doğasında BMD değişime ek olarak, potansiyel olarak duyarlılık oranları üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. Diğer lipoglycopeptide ajanlara benzer 6, dalbavansin duyarlılık testi sonucu zor olabilir Çözünürlük ve molekülün nispeten büyük bir boyutu ve bağlanma özellikleri 7,8,9 arasında. Burada tarif edilen bir referans BMD yöntemi çözülmeyen maddeler ve / veya lipoglycopeptide maddeler için benzersiz olan iki spesifik adımları içerir: (1) Nihai MIC panelinde Stok çözeltilerin hazırlanması ve% 0.002 P-80 (2) ek olarak DMSO kullanımı dilüsyonları. Bu videoyu yayının amacı dalbavansin BMD yöntemi ve Istenen özelliklere netlik sağlamak içinLly doğru ve tekrarlanabilir MIC sonuçları sağlamak için, bu önemli adımlar odaklanın.

<table><tbody><tr><td>Dalbavancin</td><td>Metrikleri A.Ş.</td><td>Greenville, NC</td><td>BI-397</td></tr><tr><td>Vankomisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>St. Louis, MO</td><td>C5793</td></tr><tr><td>Katyon Ayarlı Mueller Hinton Et Suyu</td><td>Becton Dickinson</td><td>Sparks, MD</td><td>212322</td></tr><tr><td>Parçalanmış at kanı</td><td>Cleveland Scientific</td><td>Bath, OH</td><td></td></tr><tr><td>Doz-it peristaltik pompa</td><td>Integra Biosciences</td><td>Hudson, NH</td><td></td></tr><tr><td>Çok kanallı pipet (Viaflo II)</td><td>Integra</td><td>Hudson, NH</td><td>4164</td></tr><tr><td>12 kanallı pipet (Matris)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>Tek kanallıpPipetler (Ovation 10 ve mikro; L - 100 ve mikro; l)</td><td>VistaLab</td><td>Brewster, NY</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu mikroplaka</td><td>Greiner Bio-one</td><td>Monroe, NC</td><td>650161</td></tr><tr><td>50 ml düz kapaklı konik tabanlı santrifüj tüpleri</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>16x125 mm tek kullanımlık cam tüpler</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>12x17 mm geçmeli kapak, polistiren tüpler</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>16 ml santrifüj tüpleri</td><td>BioExpress</td><td>Kaysville, UT</td><td>C-3394-2</td></tr><tr><td>Reaktif rezervuarları</td><td>Integra Biosciences</td><td>Hudson, NH</td><td>4312</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık sterilelLoops (1 & mikro; l & 10 ve mikro; l)</td><td>Biologix</td><td>Lenexa, KA</td><td>65-0001,65-0010</td></tr><tr><td>Triptik soya agar + %5 koyun kanı</td><td>Becton Dickinson</td><td>Sparks, MD</td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka makinesi (ortam)</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnkübatör (%5 CO2)</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analitik terazi&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>Eldivenleri</td><td>Kimberly-Clark</td><td></td><td>52817</td></tr><tr><td>Laboratuvar önlükleri</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dalbavansin için başvuru sıvı mikrodilüsyon yöntemi<em&gt; İn vitro</emaerobik olarak büyüyen bakterilerin&gt; duyarlılık testi

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Antimikrobiyal duyarlılık testi (AST), çeşitli bakterilere karşı antimikrobik maddelerin in vitro aktivitesini değerlendirmek için gerçekleştirilmektedir. Minimum inhibe edici konsantrasyonlar (MIC) olarak ifade edilmiştir AST sonuçlar, direnç gelişme antimikrobiyal gelişimi ve izlenmesi için araştırma ve antimikrobiyal tedavisi rehberlik için klinik ortamda kullanılır. Dalbavansin Gram-pozitif organizmaların neden olduğu akut bakteriyel deri ve deri eklerinin enfeksiyonlarının tedavisinde Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından Mayıs 2014 yılında kabul edildi yarı sentetik lipoglycopeptide antimikrobiyal ajandır. Mevcut anti-stafilokok tedavileri karşısında Dalbavansin avantajı, haftada bir dozlama için izin veren, uzun yarılanma ömrü vardır. Dalbavansin, koagülaz-negatif stafilokoklar (hem metisiline duyarlı S. aureus [MSSA] ve metisilin dirençli S. aureus [MRSA] dahil) Staphylococcus aureus karşı aktiviteye sahiptir <em&gt; Streptococcus pneumoniae, Streptococcus anginosus grubu, β-hemolitik streptokoklar ve vankomisin duyarlı enterokok. Plastik maddenin yapışmasını azaltmak için stok solüsyonları ve polisorbat 80 (P80) hazırlarken diğer yeni lipoglycopeptide maddeleri, CLSI ve ISO suyu duyarlılık test yöntemleri optimizasyonu benzer şekilde, bir çözücü olarak dimetil sülfoksit (DMSO) kullanımını içerir. Klinik çalışmalarda ve Dalbavansin ilk gelişimi sırasında önce duyarlılık çalışmaları P-80 kullanılması ile gerçekleştirildi ve MIC sonuçları 2-4 kat daha yüksek ve daha yüksek bir MIC Benzer sonuçlar agar dilüsyon duyarlılık yöntemi ile elde edilen olma eğilimindeydi değildi. Dalbavansin ilk olarak 2005 yılında CLSI sıvı mikrodilüsyon yöntemi tablolara dahil ve DMSO ve P-80 kullanımını açıklamak için 2006 yılında değiştirilmiştir. Lapa mikro-seyreltme burada gösterilir (BMD) prosedürü Dalbavansin özgüdür ve adım adım detaylı ya da elverişli olan, CLSI ve ISO yöntemlere uygun olarak birKritik adımlar bize netlik eklendi.

Standardize MIC yöntemler direnç gelişimi, çeşitli antimikrobiyal gözetim programlarının önemli bir hedefi izlemek için gereklidir. 2011-2013 yılında Avrupa ve ABD&#39;de toplanan izolatlar için dalbavansin MİK sonuçları S.aureus% 99.9 ve streptokok% 100 (Tablo 4) için &lt;0.25 mg / ml idi. Taze (mühürlü) DMSO, QC suşları S. dalbavansin BMD MİK üçlü test kullanmanın önemini değerlendirmek için aureus ATCC 29213 ve E. ve ATCC 29212 faecalis S. test çoğaltmak pneumoniae ATCC 49619 son kullanma tarihini ve 2 yıl ve daha önce kullanılmış olan 1 L&#39;lik bir şişe sızdırmaz ampuller, (1) DMSO (2) DMSO kullanılarak gerçekleştirilmiştir (3), aynı 1 L bir DMSO alikosu kullanımdan önce 72 saat için bir açık çanak içinde kalmasına izin verilen bir şişe (Örnek 2). Her üç DMSO örnekleri ile yapılan paneller kullanılarak dalbavansin MIC sonuçları benzer ve w vardıolarak kabul edilebilir bir kalite kontrol aralıkları IŞIN (Tablo 5). P-80 ilave plastik olmadan stok çözeltisi maruz kaldıktan sonra dalbavansin aktivite kaybı de 7 belgelenmiştir. 2 ek çalışmalar, başlangıç ​​ve ara stok çözeltileri (Tablo 6), P-80 eklenmesi ve başlangıç ​​ve ara Stok çözeltilerin hazırlanması için, cam veya plastik boruların kullanımı (Tablo 7) üzerinde bir etkisi yoktu dalbavansin MIC sonuçları. Üç üreticilerin polipropilen ve polistiren levhalar (Tablo 7) kullanıldığı zaman dalbavansin MİK sonuçları üzerinde hiçbir etkisi yoktu. Streptokok test sıvısı ortamı içinde lize at kanı varlığı P-80 7, 8 ile kıyaslanabilir bir yüzey aktif madde benzeri bir aktiviteye sahip olduğu gösterilmiştir. Streptokoklar için dalbavansin referans yöntem her ikisi de P-80 ve lize at kanı dahil etmez ,Bununla birlikte, stafilokok ve enterokoklar farklı olarak, streptokoklar için dalbavansin MIC sonuçları ve P-80 ilavesi olmadan (+/- 1 seyreltme içinde) benzerdir. Daha önce sunulan ve Şekil 1 &#39;de gösterilmiş olduğu gibi, dalbavansin agar seyreltme (AD), MIC&#39;ler 2-8 kat daha yüksek akım BMD referans 12, 13, 14 ile karşılaştırıldığında. BMD,% 0.002 ilave aksine, P-80, tipik olarak değil MIC 12 sonuçları dalbavansin AD etkiler. <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/53028/53028eq1.jpg" /> Denklem 1:. 800 ug / ml dalbavansin çözelti 25 ml dalbavansin Stok Çözeltisinin Hazırlanması Hazırlama aşamalarının örneği. <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/53028/53028fig1.jpg" /> AD dalbavansin ve Vankomisin BMD Şekil 1. karşılaştırılması. Dalbava karşılaştırıldığında çalışmanın sonuçlarıprogramcısı tarafından araya ve vankomisin BMD basıp Gram-pozitif bakteri izolatları için AD MİK sonuçları. Ortalama (A) dalbavansin ve (B) 15 Staphylococcus aureus, 8 koagülaz negatif stafilokok (KNS), 5, Enterococcus faecalis ve 14 Streptokoklar için ug / ml Vankomisin sıvı mikrodilüsyon ve Agar Sulandırma MIC Sonuçları (Grup A, B, ve C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53028/53028fig1highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 11 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> A </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL; 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> B </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> C </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> D </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> E </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td&gt; <td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> F </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> G </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 00,5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> H </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> DAL </td><td colspan="2"> Dalbavansin </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td&gt; </td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="12"> Konsantrasyonlar 50 ul / oyuk aşılamadan sonra ug / ml olarak ifade edilmiştir </td></tr></tbody></table> Tablo 1. MIC Plaka Biçimi. Bu, video yayında, örnek olarak kullanılan dalbavansin seyreltici ve pozitif kontrol kuyuları 96 kuyucuklu plak format gösteren Yer <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Kaynak Kons. (ug / ml) </td><td> Hacim Kaynak (ml) </td><td> Hacim DMSO (mi) </td><td> Intermediate Kons. DMSO (ug / ml) </td><td> Ses Intermediate Kons. (mi) </td><td> Cilt CAMHB +% 0.004 P80 * (ml) </td><td> 2X Kons. 1 sonra: CAMHB 100 seyreltme (ug / ml) </td><td> Final Panel Kons. Mesaj aşılama (ug / ml) </td></tr><tr><td> 800 </td><td> 1.0 </td><td>1.0 </td><td> 400 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 4 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 200 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 2 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 100 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 1 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 3,5 </td><td> 50 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.5 </td><td> 0.25 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 25 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.25 </td><td> 0.125 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 12.5 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.125 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 3,5 </td><td> 6.25 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 &lt;/ td&gt; <td> 0.5 </td><td> 3.13 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 1.5 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 </td><td> 3,5 </td><td> 0,8 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.008 </td><td> 0.004 </td></tr><tr><td> 0,8 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 0.4 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.004 </td><td> 0.002 </td></tr><tr><td colspan="5"> Bu tablo CLSI M100-S25, Tablo 8B 3 modifiye edilmiş </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Suda çözünmez Antimikrobiyal Ajanların seyreltiler hazırlanarak Tablo 2. Şema Broth seyreltileri Hassasiyet Testinde Kullanılacak. Dalbavansin çalışma çözümleri ve seyrelticilerin Birimleri nihai MIC hazırlanması için0,002-2 ug / ml dalbavansin çözümler. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Kalite Kontrol Gerginlik </td><td> Beklenen dalbavansin MIC (ug / ml) </td></tr><tr><td> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 0,03-0,12 </td></tr><tr><td> E. faecalis ATCC 29212 </td><td> 0,03-0,12 </td></tr><tr><td> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 0,008-0,03 </td></tr></tbody></table> Önerilen suşları için Kalite Kontrol suşlar 3, 11. CLSI kalite kontrol sonuçları için Tablo 3. Beklenen dalbavansin MIC Sonuçlar doğru metodoloji doğrulamak için klinik izolatlar ile birlikte test edilecek <img alt="Tablo 4" src="/files/ftp_upload/53028/53028table4.jpg" /> ABD ve Avrupa 2011-2013 Surveill (her MIC at Number) dalbavansin MIC Sonuçlar Tablo 4. Dağılımıance Çalışması 15. In vitro aktivite geçerli Dalbavansin bir göstergesi olarak son klinik izolat yayımlanmış bir çalışmanın dalbavansin MİK sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><colgroup></colgroup><tbody><tr><td rowspan="2"> # Yalıtmak </td><td colspan="3"> Dalbavansin MIC (ug / ml) </td></tr><tr><td> DMSO 1 </td><td> DMSO 2 </td><td> DMSO 3 </td></tr><tr><td rowspan="3"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 0.12 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.12 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td rowspan="3"> E. faecalis ATCC 29212 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td rowspan="2"><em&gt; S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td colspan="4"> DMSO 1 = Açılmamış alev 10 ml ampul kapalı </td></tr><tr><td colspan="2"> DMSO 2 = Sık açıldı 1L şişe </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> DMSO 3 = Sık açıldı 1L şişe - 72 saat boyunca çıplak beher bankta oturdu </td></tr></tbody></table> Tablo 5. dalbavansin MIC sonuçları 3 Kaynaklardan DMSO DMSO stok ve Aramadde seyreltileri Hazırlama kullanılarak (ug / ml). Dalbavansin stoku ve ara-ürün seyreltileri hazırlanmasında, farklı DMSO çözücüler kullanılarak etkisini karşılaştırıldığında dalbavansin MIC çalışmanın sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="2"> Numarasını yalıtmak </td><td rowspan="2"> Numarasını Çoğalt </td><td colspan="2"> Dalbavansin MIC (ug / ml) </td></tr><tr><td> DMSO içinde DALB ağırlık / P80 </td><td> DALB w DMSO içinde o P80 / </td></tr><tr><td rowspan="4"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> S. aureus, klinik DP80-002SA </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> S. aureus ATCC 700699 </td><td> 1 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td rowspan="4"> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td>S. pyogenes Klinik: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-004PY </td><td> 1 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> DP80-005PY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-006PY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> DP80-007PY </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-008PY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> S. Klinik agalactiae&#39;de: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-009AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.12 </td></tr><tr><td> DP80-010AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-011AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> DP80-012AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> S. dysgalactiae Clinical DP80-013DY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> S. pneumoniae klinik: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-014SP </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> DP80-015SP </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-016SP </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-017SP </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr></tbody></table> Ve% 0.002 olmadan DMSO Stok ve Orta Düzey Seyreltiler Hazırlık kullanarak Tablo 6. dalbavansin MIC Sonuçları P-80.% 0.002 P-80 stok ve ara seyreltilerini dalbavansin ekleyerek etkisini karşılaştırıldığında dalbavansin MIC çalışmanın sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="3"> Izole etmek </td><td rowspan="3"> Numarasını Çoğalt </td&gt; <td colspan="4" rowspan="2"> Stok Seyreltme Tüpler </td><td colspan="4"> Mikrotiter Plate (Plastik Türü) </td></tr><tr><td rowspan="2"> Poli-propilen, Greiner </td><td colspan="3"> Polistiren </td></tr><tr><td> Bardak </td><td> Plastik </td><td> Plastik 1saat </td><td> Plastik 1saat / Intermediate 1 saat </td><td> Greiner </td><td> Corning </td><td> Nunc </td></tr><tr><td rowspan="3"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td rowspan="3"> E. faecalis ATCC 29212 </td><td&gt; 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td rowspan="2"> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 1 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td></tr><tr><td colspan="10"> Cam şişe yapılan cam = stoğu, ara madde konsantrasyonunu yapmak üzere hemen kullanılmıştırHemen kullanılan plastik tüpler, s suyu dilüsyonları yapmak. </td></tr><tr><td colspan="10"> Hemen kullanılan plastik bir santrifüj tüpüne yapılan ilk = plastik stok sıvısı seyreltiler yapmak üzere hemen kullanılmıştır plastik tüpler, içinde bir ara madde konsantrasyonları hazırlamak için. </td></tr><tr><td colspan="10"> Plastik bir santrifüj tüpüne yapılan plastik 1 hr = stoğu daha sonra suyu içinde konsantrasyonları hazırlamak için hemen kullanılmıştır plastik tüpler, içinde bir ara madde konsantrasyonlarını yapmak için kullanılan 1 st için tezgah üzerinde bekletin. </td></tr><tr><td colspan="10"> Plastik bir santrifüj tüpüne yapılan plastik 1 saat / Aramadde 1 hr = stoğu daha sonra, plastik borular içinde bir ara madde konsantrasyonları hazırlamak daha sonra suyu içinde konsantrasyonları hazırlamak için kullanılan 1 st için tezgah üzerinde bekletilir için kullanılan 1 st için tezgah üzerinde bekletin. </td></tr></tbody></table> Plastik ve Cam Tüpler ve MIC Levha Plastik Türleri Stok Seyreltiler Hazırlık kullanarak Tablo 7. dalbavansin MIC Sonuçları. O Sonuçlarfa dalbavansin da mikrotitre plakaları için farklı kaynaklardan ve plastik türlerini kullanarak etkisini stok çözelti hazırlamak ve ne zaman plastik ya da cam tüpler kullanarak etkisini karşılaştırıldı MIC çalışması.

Burada, bir et suyu mikrodilüsyon referans metodolojisi kullanarak klinik olarak anlamlı Gram-pozitif bakterilerin dalbavansin duyarlılığının belirlenmesi için bir protokol sunuyoruz.

Dalbavansin için Başvuru sıvı mikrodilüsyon yöntemi<em&gt; İn Vitro</emAerobik Olarak Büyüyen Bakterilerin&gt; Duyarlılık Testi

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

Aşağıdaki prosedürün genel amacı, dalbavancin için minimum inhibitör konsantrasyonunu belirlemektir. Bunu gerçekleştirmek için, Dalbavancin'e özgü temel adımlara odaklanarak sıvı mikro dilüsyon yöntemi kullanılır. Dalbavancinin stok ve ara dilüsyonları DMSO içinde, nihai dilüsyonları ise polisorbat ile desteklenmiş, katyonla ayarlanmış Mueller Hinton broth içinde yapılır.Seyreltmeler 96 kuyucuklu bir plakete dağıtılır ve standartlaştırılmış bir bakteri süspansiyonu ile ekim yapılır. Plaket daha sonra 16 ila 24 saat boyunca inkübe edilir ve bakteriyel büyümeyi inhibe etmek için gerekli olan minimum dalbavansin miktarını belirlemek üzere incelenir. Bu standartlaştırılmış yönteme bağlılık, hem klinik izolatlarla hem de burada gösterildiği gibi kalite kontrol izolatlarıyla tutarlı sonuçlar sağlayacaktır. Dalbavansin, gram-pozitif organizmaların neden olduğu akut bakteriyel deri ve deri yapısı enfeksiyonlarının tedavisi için Mayıs 2014'te FDA tarafından onaylanmış semisentetik bir lipoglikopeptid antimikrobiyal ajandır.Bu yöntem, ajanın plastiğe yapışmasını önlemek için polisorbat 80 içinde stok çözeltiler hazırlamak amacıyla DMSO kullanımını içeren, daptomycin için standartlaştırılmış bouillon, mikro dilüsyon duyarlılık yöntemini tanımlamaktadır. Bu yöntemin görsel gösterimi faydalıdır; çünkü stok ve MIC plaka çözeltisi hazırlama adımları, çoğu antimikrobiyal ajana kıyasla tipik değildir. Bu adımlar lipoglikopeptit ajanlara özgüdür ve tekrarlanabilir ve doğru MIC sonuçları elde etmek için takip edilmeleri önemlidir.Prosedür, laboratuvarımdaki araştırma bilimcisi Gina Fisher tarafından gösterilecektir. Lütfen aşağıdaki prosedürü uygularken biyogüvenlik seviye iki ile uyumlu uygun güvenlik önlemlerinin alınması gerektiğini unutmayın. Mililitre başına 800 mikrogramlık bir stok çözelti hazırlamak için uygun miktarda dalbavancin tartarak başlayın.Steril bir cam veya plastik tüpe uygun miktarda SAF DMSO ekleyin, ardından tozu tüpe aktarın ve vorteksleyin. Sonrasında, 800 µg/mL'lik DALBAVANCIN stok çözeltisini kullanarak, bir ile dört arasındaki sütunlarda gösterildiği gibi, nihai MIC plaka konsantrasyonlarının 100 katını hazırlayın. Bunlar ara konsantrasyonlar olarak adlandırılır.Hazırlanan toplam hacim, MIC panellerinin sayısına bağlı olarak değişecektir. Son olarak, ara konsantrasyonları, %0,004 P 80 ile desteklenmiş ve C-A-M-H-B olarak da bilinen katyonu ayarlanmamış Mueller Hinten broth içerisinde 1/100 oranında seyrelttirin. Elde edilen DALBAVANCIN ve P 80 çalışma konsantrasyonu, nihai konsantrasyonun iki katıdır.İnokülüm eklenmesi, steril uçlu çok kanallı bir pipet kullanılarak bir ila iki katlık bir dilüsyonla sonuçlanacağından, her bir dalbavancin dilüsyonundan 50 µL'lik miktarları 96 kuyucuklu steril mikro dilüsyon panelinin uygun kuyucuklarına dağıtın. MIC plaka formatı, plaka başına sekiz inokülümün test edilmesine olanak tanır. Paneller hemen kullanılmayacaksa, onları mühürlemek için plastik film uygulayın, ardından plastik torbalara yerleştirin ve ihtiyaç duyulana kadar en az -60 °C'lik buz çözme özelliği olmayan bir dondurucuda saklayın.Bu gösterimde, taze hazırlanmış bir plak ekimi yapılacaktır. İnokülumu hazırlamak için, 18 ila 24 saatlik kanlı agar veya diğer seçici olmayan agar plaklarından iyi izole edilmiş birkaç koloni seçin. Burada, kalite kontrol s aria ve EPHI callous suşları kullanılmıştır.Steril bir pamuklu çubukla her koloninin üst kısmına dokunun ve bir kısmını bir ila beş mililitre C-A-M-H-B veya salin içeren bir tüpe aktarın. Hazırlama sonrası 15 ila 30 dakika içinde bulanıklık 0.5 McFarland standardı ile eşleşene kadar aktarmaya devam edin, inokülümü C-A-M-H-B içerisinde bir ila 100 oranında seyrelterek mililitre başına beş x 10⁵ CFU nihai konsantrasyona ulaşın. Kabul edilebilir aralık, mililitre başına iki ila sekiz x 10⁵ CFU'dur.Steril uçlu çok kanallı bir pipet kullanarak, final inokülümünden 50 µL'yi hemen MIC panel plakasındaki ilgili her bir kuyucuğa aktarın. Her bir izolat için dört satır inoküle edilerek izolat başına toplam dört tekrar sağlanır. Ardından, saflık kontrolü yapmak için bir pipet yardımıyla pozitif büyüme kontrolündeki çözeltiden 1 ila 10 µL'yi, %5 koyun kanlı tryptic soy agar gibi seçici olmayan bir agara aktarın.Çözeltiyi plağın yüzeyine yaymak için steril bir öze kullanın. İnokülümün eşit şekilde dağıldığından emin olmak için plağı 90 derece döndürün ve tekrar ekim yapın. Plağın kapağını kapatın ve kenara alın.Koloni sayımı hazırlığı için, büyüme kontrol kuyucuğundaki çözeltiden 10 µL'yi tek kanallı bir pipet yardımıyla 10 mL'lik salin karışımına aktarın; ardından, %5 koyun kanlı soya soya agar gibi uygun, seçici olmayan bir agar ortamına steril bir öze kullanarak 100 µL aktarın ve çözeltiyi tüm agar yüzeyine yayın. İnokulumun eşit dağılımını sağlamak için bu işlemi farklı yönlerde iki kez tekrarlayın. Ardından, en üstteki panelin bir kapakla sıkıca kapatıldığından emin olarak, dört adede kadar MIC panelini plastik bir kapta üst üste dizin.Ardından, plastik kabın içine nemli bir kağıt havlu yerleştirin ve inokülasyondan sonraki 30 dakika içinde kapağını sıkıca kapatın. MIC panellerini, koloni sayım plağını ve saflık kontrol plağını, ortam hava inkübatöründe 35 ± 2 °C'de 16 ila 20 saat boyunca inkübe edin. Ertesi gün, minimum inhibitör konsantrasyonu, kuyucuklardaki bakteriyel büyümeyi çıplak gözle tespit edilebildiği kadarıyla tamamen inhibe eden en düşük konsantrasyon olarak okuyun.Koloni sayım plağındaki koloni sayısını belirleyin. Sayılan koloni sayısını seyreltme faktörü ile çarpın. Örneğin, 50 koloni çarpı 10.000 seyreltme faktörü, mililitrede beş x 10⁵ CFU'ya eşittir.Kabul edilebilir aralık 20 ila 80 koloni olup, bu değer ml başına 2 ila 8 x 10⁵ koloni oluşturan birime tekabül eder. Doğru sonuçlar elde etmek için inokülum konsantrasyonu, duyarlılık testini kontrol eden önemli bir değişkendir. Son olarak, saflık plakasını kontrol edin.Tüm koloniler inokülum olarak kullanılan kolonilere benziyorsa, kültür saf kabul edilebilir. Eğer başka koloniler mevcutsa, MIC panelinde kontaminasyon olasılığı vardır ve test tekrarlanmalıdır. DAL bevans için MIC sonuçları, burada gösterilen agri dilüsyon yöntemi kullanılarak elde edilen sonuçlarla karşılaştırılmıştır.Dal bevans için agar MIC sonuçları tipik olarak besiyeri MIC sonuçlarından iki ila sekiz kat daha yüksektir. Mikro dilüsyon, MIC sonuçları. Bu durum, besiyeri ve agar yöntemleri ile elde edilen vankomisin sonuçlarıyla tezat oluşturmaktadır.Bu nedenle, dalbavancin broth testi için agri dilüsyonu önerilmez. Mikro dilüsyon MIC kalite kontrol sonuçları, burada gösterildiği gibi beklenen aralıklarda olmalıdır. 0,06 micrograms per milliliter şeklinde çok net bir modal MIC değerine sahip olan SS kalite kontrol organizması A TCC 2 9 2 1 3, yöntem varyasyonunun iyi bir göstergesi olmuştur.Kalite kontrol organizmaları için elde edilen sonuçlar beklenen aralıkların dışındaysa veya aralığın alt veya üst sınırına doğru eğilim gösteriyorsa, yöntemin yeniden doğrulanması gerekir. Yöntemin kalite kontrol organizmaları kullanılarak doğrulanmasına ek olarak, bölgesel antimikrobiyal sürveyans programlarından elde edilen dalbavancin MIC verileri, klinik laboratuvar ortamında beklenen MIC sonuçları için bir temel sağlayabilir; burada gösterildiği üzere, Dal b Anson MIC, 2011 ile 2013 yılları arasında Avrupa ve ABD'de toplanan izolatlar için sonuçlar, SIU'ların %99,9'u ve streptokokların %100'ü için 0.25 µg/mL'den azdı. Bu sürveyans verilerine dayanarak, stafilokoklar ve streptokoklar için 0.12 µg/mL'den yüksek dalbavancin MIC sonuçlarının nadir olduğu görülmektedir.Daha yüksek değerler görülürse, test tekrarlanmalı ve/veya doğrulama için bir referans laboratuvarına gönderilmelidir. Stok dilüsyonun DMSO içinde hazırlanması ve P 80'in son MIC kuyucuğundaki nihai konsantrasyonu %0,002 olacak şekilde besiyeri dilüsyonuna eklenmesi, doğru ve tekrarlanabilir dalbavancin MIC sonuçları elde etmek için kritik adımlardır. Her zaman olduğu gibi, ancak özellikle bakteriyel direnç gelişiminin söz konusu olduğu bu alanda, doğru antimikrobiyal duyarlılık sonuçları klinisyenin uygun tedavi seçimi için kritik öneme sahiptir.

a-reference-broth-microdilution-method-for-dalbavancin-vitro

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Mycobacterium tuberculosis Antimikrobiyal duyarlılık testi zor ama hasta bakımı için kritik. Bu mikrotiter plate formatı 12 antimikobakteriyel ilaçların test sunar ve uygun tedavi yardımcı olacak minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) değerleri sağlar.

Microtiter Plate Format Broth Seyreltme Birinci ve İkinci Line İlaçları Mycobacterium tuberculosis kompleksi Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

Güncel tanısal antimikrobiyal duyarlılık testi besin açısından zengin, aerobik koşullarda izolatların planktonik büyüme dayanır. Burada, kistik fibrozis akciğer daha fazla temsilcisi hem aerobik hem de mikroaerofilik şartlarda Pseudomonas aeruginosa biyofilmlerin antimikrobiyal duyarlılık incelemek için alternatif yapay balgam orta istihdam.

Karşı Antibiyotik Etkinlik Test Yapay Balgam Orta Kullanımı<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Kistik Fibrozis Akciğer Daha İlgili Koşullar

Kaynak: Koeth, LM, et. al., Aerobik Olarak Büyüyen Bakterilerin Dalbavancin İn Vitro Duyarlılık Testi için Bir Referans Et Suyu Mikroseyreltme Yöntemi. J. Vis. Uzm. (2015).Bu video, Gram pozitif bakterilere karşı bir lipoglikopeptid antibiyotiğin minimum inhibitör konsantrasyonunu (MIC) belirlemek için et suyu mikroseyreltme yöntemini göstermektedir. Bakteri kolonisi izolasyonu, seyreltme, değişen antibiyotik konsantrasyonları ile mikroplaka kuyularının aşılanması ve kültür saflığının ve hücre...

Gram Pozitif Bakterilerin Antibiyotik Duyarlılık Testi İçin Bir Et Suyu Mikrodilüsyon Yöntemi

Bu video, bakterilere karşı test antibiyotiklerinin Minimum İnhibitör Konsantrasyonunu (MIC) belirlemek için mikrotitre plakası tabanlı bir yöntemi göstermektedir. Bir test antibiyotiğinin seri dilüsyonlarını içeren bir mikrotitre plakasına bakteriyel patojen Pseudomonas aeruginosa'nın bir süspansiyonu ve bakteriler tarafından pyomelanin üretiminin bir inhibitörü eklendikten sonra, oyukların optik yoğunluğu, antibiyotiğin minimum inhibitör konsantrasyonunu ve piyomelanin üretim inhibitörünün...

Bir Antibiyotiğin Minimum İnhibitör Konsantrasyonunu Değerlendirmek için Bir Mikrotitre Plaka Yöntemi

Bu video, bir et suyu mikrodilüsyon testi kullanarak antifungal bileşikleri taramak için bir in vitro testi göstermektedir. Test bileşikleri, bir mikrotitre plakasında seri olarak seyreltilir ve bir mantar aşısı ile inkübe edilir. İnkübasyon sonrası, plaka, test bileşiklerinin antifungal potansiyelini ve minimum inhibitör konsantrasyonlarını (MIC) değerlendirmek için görünür mantar büyümesi olmayan kuyucuklar için incelenir.

Antifungal Bileşiklerin Taranması için İn Vitro Et Suyu Mikrodilüsyon Testi

Charcoal agar r esazurin assay (CARA), test ajanlarının replike eden, replike olmayan veya her ikisi olan mikobakterilere karşı aktivitesini değerlendirmek için yarı kantitatif, orta verimli bir yöntemdir.  CARA, zamana ve konsantrasyona bağlı aktivitenin hızlı bir şekilde değerlendirilmesine izin verir ve koloni oluşturan birim (CFU) tahlilleri ile izlenecek parametreleri tanımlar.

Mikobakteriler Yarı kantitatif, Orta hacimli Sayımı İçin Kömür Agar Resazurin Testi görselleştirme

Mantar önleyici bileşikler ve özleri süzmek için bir kolay ve uyarlanabilir suyu microdilution yöntem.

Suyu Microdilution Vitro tarama: yeni mantar önleyici bileşikler algılamak için kolay ve hızlı bir yöntem

Bu protokol, D 2O metabolizmasının tek hücreli uyarılmış Raman saçılma görüntülemesi ile 2.5 saat içinde hızlı antimikrobiyal duyarlılık testi (AST) testi sunar. Bu yöntem, klinikte hızlı tek hücreli fenotipik AST için dönüştürücü olan idrar veya tam kan ortamındaki bakteriler için geçerlidir.

Tek Bir Bakteride Döteryum Birleşmesinin Uyarılmış Raman Saçılma Görüntülemesi ile Hızlı Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

Burada, fenotipik tarama yoluyla potansiyel anti-tüberküloz ilaç adaylarını belirlemek için bir protokol sunuyoruz; bu protokol 4-aminokinolin bileşiğinin kimyasal sentezini, Mycobacterium tuberculosis karşısında minimum inhibitör konsantrasyonunun belirlenmesini ve memeli hücre hatlarında sitotoksisitesinin değerlendirilmesini kapsıyor.

Potansiyel Anti-TB Adaylarının Tanımlanması: Memeli Hücrelerinde Sentez, MIC Belirleme ve Sitotoksisite Değerlendirmesi için Adım Adım Rehber

Biz oluşumu için basit, hızlı ve sağlam bir bir yöntem...

İzleme Oluşumu ve Antifungal Duyarlılık Testi için 96 Şey microtiter Levha tabanlı Yöntemi Candida albicans Biyofilmler

Öğrenin, dalbavancin için sıvı mikrodilüsyon yöntemiyle Gram-pozitif bakterilerin duyarlılık testini nasıl yapılır. Bu protokol, DMSO ve polisorbat 80 kullanımıyla doğru ve tekrarlanabilir MIC sonuçları elde etmeyi sağlar.

Dalbavansin için Başvuru sıvı mikrodilüsyon yöntemi

Daha fazla video keşfet