Bir Salınım basınçlı perfüzyon Aygıt Sıçan karaciğerinin decellularization Prosedürü

Aşağıdaki deneyin genel amacı, sıçan karaciğeri perfüzyon decellularizasyonunun homojenliğini optimize etmede perfüzyon kökünün rolünü değerlendirmektir. Bu, ilk olarak yeni izole edilmiş sıçan karaciğerlerinin portal venleri ve hepatik arterleri kanüle edilerek elde edilir. İkinci adım olarak, karaciğerler, portal venlerin veya hepatik arterlerin seçici perfüzyonu için bir perfüzyon cihazına bağlanır.

Daha sonra, solunum sırasında meydana gelen karın içi basınç değişikliklerini taklit etmek için perfüzyon odasına salınımlı basınç değişiklikleri uygulanır. Karaciğer mikro perfüzyonunu optimize ederek, salınımlı basınç koşulları altında hepatik arter yoluyla perfüze edilen karaciğerler, makroskopik gözlem ve histolojik ve biyokimyasal analizlerle değerlendirildiği gibi daha homojen ve daha hızlı bir hücre dışı bırakma sergiler. Bu tekniğin portal venöz perfüzyon hücre dışı bırakma gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, salınımlı basınç koşulları kullanılarak arteriyel perfüzyonun daha homojen bir hücre dışı bırakma sonucuna yol açmasıdır.

Daha kısa sürede, ancak bu yöntem yavaşlama teknikleri hakkında fikir verebilir. Res solarizasyon deneyleri, ekstraoral perfüzyon kurulumları ve organ modelleri gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler mücadele edecektir çünkü kırmızı karaciğerlerin toplanması ve arteriyel kanülasyonu karmaşık olabilir.

Karaciğeri toplamadan önce, periferik bir G 20 venöz kateterin 1,5 santimetrelik bir parçasının ucuna eğik bir kesim yapın. Kateteri üç yollu bir durdurma musluğuna bağlayın ve sistemi havalandırmak için zil çözeltisi ile doldurulmuş 10 mililitrelik bir şırınga kullanın. Daha sonra, bir kelebek kanülünün iğnesini beş milimetre uzunluğunda kesin ve beş santimetrelik bir tüpü iğneye sabitlemek için süper yapıştırıcı kullanın.

Daha büyük tüpe iki santimetre uzunluğunda bir tüp yerleştirin ve bu tüpü de süper yapıştırıcı ile sabitleyin. Bu yapının üzerine başka bir tüp kaydırın ve bir abutment oluşturmak için yerine yapıştırın. Daha sonra, yeni inşa edilen arteriyel kanülü de hasat için karaciğeri onarmak için zil çözeltisi ile doldurulmuş beş mililitrelik bir şırınga kullanın.

Anestezi uygulanmış yetişkin bir sıçan kranının medial ve sol karaciğer loblarını diyaframın kubbesi altında tutmak için ıslak neden bandajı kullanarak başlayın. Bu sırada hepato duodenal ligament ve üst karaciğer lobunu da açığa çıkarın. Daha sonra, üst omental loba bağlı ligamenti lob hareketli olana kadar dikkatlice incelemek için iki mikro forseps ve yaylı makas kullanın.

Sonra medial ve sol lobları yerinde tutmak. Lobu GRE'nin kompresinin altına ve mideyi hayvanın soluna doğru hareket ettirmek için ıslak pamuklu çubuklar kullanın. Mideyi bir kelepçe ile sabitleyin ve küçük momentumu inceleyin.

Daha sonra alt veya zihinsel karaciğer lobunu hareketli olana kadar inceleyin ve duodenumu tutmak için bir arka ev kelepçesi kullanarak lobu boşluğuna geri hareket ettirin, herpa duodenum ligamenti ortaya çıkarmak için duodenumu sola hareket ettirin. Ortak safra kanalını sınırlamak. Daha sonra safra kanalını adipoz ve pankreas dokusundan ayırın ve kanalı safra kanalı çatallanmasından 1.5 santimetre kesin.

Gastroduodenal veni açığa çıkararak sal veni çevredeki yağ dokusundan diseksiyon edin. Daha sonra gastroduodenal veni altı sıfır dikişle iki kez bağlayın ve damarı iki düğüm arasında bölün. Çölyak gövdesini ve ortak hepatik arteri, tüm arteriyel ramia ortaya çıkana kadar çevre dokudan diseksiyon yapın.

Tüm arterler diseke edildikten sonra, sağ böbrek ile sağ lateral karaciğer lobu arasındaki inferior kaval veni sınırlayın ve veni retroperitoneal boşluktan diseke edin. Aortu ortaya çıkarmak için çölyak gövdesini takip edin. Daha sonra retroperitoneal yağ dokusunu inceleyin ve aortu çölyak gövdesinin üzerine yerleştirin.

Şimdi bir mililitre salin içinde 1000 ünite heparini inferior vena mağarasına enjekte edin. Kesiği pamuklu bir bezle örtün ve heparinin etkili olması için bir ila iki dakika bekleyin. Daha sonra aortu forseps ile sınırlayın ve aortu ve inferior vena mağarasını böbrekten distal olarak inceleyin.

Portal venöz kanülü yerleştirmek için distal portal vende balık ağzı kesisi yapın ve kesiyi forseps ile açın. Daha sonra portal veni kanüle edin ve karaciğeri 20 mililitre zil çözeltisi ile yıkayın, karaciğer insanlıktan çıkana kadar Kanülü yerine sabitlemek için ipek altı sıfır ligatür kullanın. Arteriyel kanülü yerleştirmek için, aort segmenti retroperitoneal boşluktan serbest bırakılana kadar aortu çölyak gövdesinin üzerine diseke edin.

Bir aort yaması oluşturmak için aort segmentini uzunlamasına kesin ve kendi kendine oluşturulan kanülü statik bir tutucuya yerleştirin. Daha sonra aort yamasını kanülün üzerinden geçirmek için iki forseps kullanın ve hepatik arteri kanül üzerine ipek altı sıfırlı bir sütür ile bağlayın. Hücre gidermeyi gerçekleştirmek için yamanın abutmente sabitlenmesi Portal ven kanülü üzerindeki üç vanayı ilgili reaktör erişimine bağlayın ve sistemlere hava girmemesine dikkat ederek arteriyel kanülü arteriyel erişime bağlayın.

Ardından, solunum cihazını basınç dağıtım odasına bağlayın ve odayı reaktöre bağlayın. Basınç uygulamasını başlatın. Sonra hücreselleştirmeyi başlatmak için.

Karaciğeri dakikada beş mililitre hızında% 1 tritton X 100 ile kaynaştırın. Perfüzyon odası içindeki sıvı seviyesini sabit ve perfüze karaciğerin üzerinde tutmak için perfüzyon cihazının dışarı akışı yoluyla atık atık asına izin verin. 90 dakika sonra, kuvvet damarı yoluyla perfüze edilen karaciğerler, işlem sırasında ve sonrasında makroskopik olarak görülebilen kalan hücrelerle decellularizasyonu gösteren homojen bir açıklama sergilerken, hepatik arter yoluyla perfüze edilen karaciğerler, daha az görünür kalan hücrelerle daha homojen bir decellularizasyon seyri gösterir.

Karaciğerler salınımlı basınç koşullarının uygulanmasıyla perfüze edilirse, kalan hiçbir hücre görünmüyordu. Perfüzyondan bağımsız olarak. Decellularize karaciğer matrislerinin kök histolojik değerlendirmesi, hepatik arter yoluyla perfüze edilen karaciğerlerde makroskopik bulguları desteklemektedir.

Salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilmiş olsun ya da olmasın, kalan hiçbir hücre gözlenmez Portal Ven yoluyla perfüze edilen karaciğerler, bununla birlikte, salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilseler bile, kalan hücrelerin bölgelerini sergilerler, ancak bu koşullar bu karaciğerlerde kalan hücre kütlesini azaltır, decellularization koşullarından bağımsız olarak karaciğerlerin hücre dışı matrislerinin korunmasına dikkat edin. Karaciğer matrisinin kuru ağırlığı başına DNA içeriği de doğal karaciğerlere kıyasla tüm deney gruplarında azalmıştır. Her ne kadar farklılıklar sadece salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilen grupta istatistiksel olarak anlamlı olsa da.

Ek olarak, decellularized karaciğer matrislerinin korozyon dökümü, perfüzyon işlemi sırasında karaciğerin mikroanatomisinin korunmasını doğruladı. Bu videoyu izledikten sonra, tekrarlanabilir homojen yavaşlama için kanül nasıl hasat edileceğini ve kırmızı karaciğerlerin nasıl perfüze edileceğini iyi anlamış olmalısınız. Triton X 100 ve SDS ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi uygulayarak eldiven giymek gibi önlemlerin de alınması gerektiğini unutmayın.