Name: Bir Salınım basınçlı perfüzyon Aygıt Sıçan karaciğerinin decellularization Prosedürü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Öğrenin, sıçan karaciğerinde salınım basınçlı perfüzyon kullanarak dehücreselleştirme homojenliğini nasıl optimize edeceğinizi. Bu yöntem, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği araştırmalarında daha hızlı ve tutarlı sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu projedeki yardımları için Steffen Lippert, Khalid Aliyev, Korinna Jöhrens ve Katharina Struecker'e minnetle teşekkür eder.

Hayvanlar Deneysel Tıp (FEM, Charité, Berlin, Almanya) için Tesisi&#39;nde tutuldu ve tüm deneysel protokoller gözden geçirilecek ve Devlet Sağlık ve Yerel İşleri Ofisi (LAGeSo, Berlin, Almanya tarafından kabul edildi;. Reg No O 0365 / 11). 1. Karaciğer Hasat <ol><li> Ön Cerrahi hazırlık <ol><li> Sabitleme için bir mantar plaka kullanın. Plaka üzerinde tıbbi örtü koyun. Dört iğneler kullanılarak, intraoperatif inhalasyon narkoz için mantar plaka üzerinde bir inhalasyon maskesi düzeltmek. </li></ol></li><li> Portal Venöz Kanül prearrangement <ol><li> Üç-yollu bir periferal venöz kateter (G 20) bağlanır. kateter yaklaşık bir uzunluğa sahip, eğik olarak kesilmelidir. 1,5 cm. </li><li> De hava Ringer çözeltisi ile doldurulmuş bir 10 ml şırınga kullanarak sistem. Dikkatle de hava gaz embolisi olumsuz perfüzyon decellularization etkileyebilir çünkü çok önemlidir. </li></ol></li><li> PrearrangementArter Kanül <ol><li> Kelebek kanül kullanıldığı ve 5 mm bir uzunluğa iğne kesti. 5 mm iğne ve superglue ile sabitleyin, 5 cm tüp (OD 0.96 mm ID 0.58 mm) takınız. Büyük tüp içine ve superglue ile sabitleyin, 2 cm uzunluğunda bir tüp (OD 0.61 mm ID 0.28 mm) yerleştirin. </li><li> Bir dayanak olarak bu yapı üzerinde başka tüp kayma ve superglue ile sabitleyin. De hava Ringer çözeltisi ile dolu bir 5 ml şırıngaya arteryel kanül. </li></ol></li><li> Anestezi ve Analjezi <ol><li> 1.5 L / dakikalık bir akış oranında% 3.5 oksijen izofluran anestezi indüksiyon odasında sıçan narkozu neden. </li><li> Çalışma sırasında analjezi sağlamak için, karın içinden metamizol (100 mg / kg vücut kütlesi) ve düşük doz ketamin / medetomidini (kg vücut ağırlığı başına 10 mg / 0.1 mg) enjekte edilir. </li><li> Cerrahi anestezi sonraki bakım için inhalasyon maskesi üzerinden 1 L / dk oksijen% 1.5 izofluran sağlayın. </li></ol></li><li> Ameliyat öncesi Düzenlemeler &lt;ol&gt; <li> Elektrikli kesme makinesi ile liberal karın Tıraş. Dezenfeksiyonu için% 70 etanol ile karın traş kesi sitesini nemlendirin. </li><li> Hazırlanan plaka üzerinde yatar pozisyonda hayvan yerleştirin inhalasyon maskesi içine kafasını takın ve tıbbi bant ve iğneler ile bacaklarda düzeltmek. Bir gazlı bez kompres ile aşırı etanol ve kürk çıkarın. </li></ol></li><li> Anestezi Değerlendirmesi <ol><li> Solunum hızı izleyerek anestezi derinliği değerlendirin. Anestezi (40-60 solunum / dk) yeterince derin görünüyor zaman analjezi her iki arka bacaklarda ayak parmakları arasında cilt çimdik cerrahi forseps kullanarak ayak tutam refleks tetiklemek için deneyerek yeterli olup olmadığını kontrol edin. </li></ol></li><li> Karın Yaklaşım <ol><li> Mesane üstünde kaudal karın duvarı içine medyan kesi yapmak. V-şekilli bir biçimde her iki lateral kot kemerler için, bu noktadan itibaren kesilir. Diyaframın içine kesmek için özen gösterin. Göğüs üzerine kesilmiş karın duvarı çekin. </li&gt; <li> Bir Overholt kelepçe ile kılıç şeklinde Fix cranially çekin ve bir lastik bant ile sabitleyin. Bağırsak tahliye ıslak pamuk bezlerden kullanın. Islak gazlı bez içinde bağırsak sarın. Ayrıca, ıslak bandaj ile tüm karın marjlarını kapsamaktadır. </li></ol></li><li> Karaciğer Hazırlık <ol><li> Falciform ligament parçalara ayır. Cranially diyaframın kubbe altında medial ve sol karaciğer loblar tutmak için ıslak bir gazlı bez bandaj kullanın. Triadın ve üst omentum karaciğer lobu Açığa. </li><li> Lob mobil kadar dikkatlice üst omentum lob bağlı ligament incelemek için iki microforceps ve yaylı makas kullanın. Yerinde medial ve sol lobu tutan, gazlı bez kompres altında ıslak pamuklu çubuklarla kullanarak lob hareket ettirin. </li><li> Üst omentum karaciğer lobunun seferber sonra sola mide hareket ettirin. Bir kelepçe ile mide Fix ve microforceps ve yaylı makas ile küçük omentum teşrih. </li><li> Alt omenta Seferberl karaciğer lobu mobil ve daha sonra onun boşluğuna geri lobun taşımak kadar. Duodenum korumak için bir Backhaus kelepçe kullanın. Streç ve triadın maruz sola duodenum taşıyın. Gergin hepatoduodenal ligaman koledok circumscribe. </li><li> Adipoz ve pankreas dokusundan safra kanalını parçalara ayır. Safra kanalını safra kanalı bifurkasyondan 1,5 cm kesin. Çevreleyen yağ dokusundan portal ven parçalara ayır. Gastroduodenal ven Açığa. </li><li> Ipek 6-0 ile iki kez gastroduodenal ven bağlanır ve 2 bitişik harfler arasındaki damar bölün. Tüm arteriyel rami ortaya kadar çevreleyen dokudan çölyak gövde ve ortak hepatik arter parçalara ayır. </li><li> Çevreleyen dokudan gastroduodenal arter Özgürleştirin. Birbirinden uzak bağları, ipek 6-0 ile iki kez gastroduodenal arter kravat. 2 bitişik harfler arasındaki gastroduodenal arter parçalara ayır. </li><li> Dalak arteri kurtarmakçevreleyen dokudan. Birbirinden uzak bağları, ipek 6-0 ile iki kez dalak arteri bağla. 2 bitişik harfler arasındaki dalak arteri parçalara ayır. </li><li> Çevreleyen doku sol gastrik arter Özgürleştirin. Birbirinden uzak bağları, ipek 6-0 ile iki kez sol gastrik arter kravat. 2 bitişik harfler arasındaki arter parçalara ayır. </li><li> Sağ böbrekte ve sağ yanal karaciğer lobu arasındaki alt kaval ven circumscribe. Retroperitoneal uzaydan damar parçalara ayır. Çölyak gövde izleyerek aorta Açığa. </li><li> Retroperitoneal adipoz doku teşrih. Inferior vena kava içine 1 ml serum fizyolojik içinde 1.000 IE heparin enjekte edilir. Kanül geri çekin ve pamuklu ped ile kesi kapatın. Heparin sistemik etki için 1-2 dakika bekleyin. </li><li> Forseps ile aorta circumscribe. Aorta incelemek ve sıçan asıl bulbus olfaktoryusları alındı. Ayrıca, böbrek distal inferior vena kava teşrih. </li></ol></li><li> Portal Venöz Kanülasyon (Kullanım bölüm 1.2 hazırlanan kanül) <ol><li> Distal portal vende bir balık ağzı kesi olun. Forseps ile kesi açın ve portal ven cannulate. Karaciğer rengini yitiren kadar 20 ml Ringer solüsyonu ile karaciğer yıkayın ve bitişik harfler (ipek 6-0) ile kanül düzeltin. </li></ol></li><li> Arteriyel Kanülasyon (Kullanım bölüm 1.3 hazırlanan kanül) <ol><li> Çölyak gövde üzerinde aorta parçalara ayır. Retroperitoneal uzaydan aort segmenti Özgürleştirin. Aort yama oluşturmak için uzunlamasına aort segmenti kesin. Statik tutucu içine kendini inşa kanül yerleştirin. </li><li> Kanül üzerinde aort yama kayma 2 forseps kullanın. Kanül üzerinde ipek 6-0 ile hepatik arter bağlanır ve dayanak olarak yama sabitleyin. </li></ol></li><li> Karaciğer eksplantasyonu <ol><li> , Diyaframı açıp dairesel kesi yapmak ve çevre yapılardan karaciğer teşrih. </li></ol></li><li> Depolama <ol><li> Stokullanılana kadar 350 ml Ringer çözeltisi ile doldurulmuş, steril 500 ml tankında karaciğer yeniden. </li></ol></li></ol> 2. Deterjan Çözümleri <ol><li> % 10 Triton X-100 stok solüsyonu <ol><li> 900 ml su dest ile 1.000 ml&#39;lik şişe doldurun. ve 100 ml Triton X-100 (% 99,9) ekleyin. Triton X-100 eritmek için bir karıştırıcıyı kullanarak. Damıtılmıs şişeyi doldurun. 1000 ml&#39;lik toplam hacme kadar ulaşılır. </li></ol></li><li> % 1 Triton X-100 <ol><li> 1.000 ml şişe stok çözeltisi, 100 ml (% 10) ilave edilir. 900 mi su Hedef ekle. ve iki kez şişeyi çalkalayın. Steril bir filtre içerisinden,% 1 Triton X-100 çözeltisi filtre. </li></ol></li><li> % 10 SDS Stok Çözeltisi <ol><li> 900 ml su dest ile 1.000 ml&#39;lik şişe doldurun. ve 66.99 g SDS (% 99.9, yoğunluk 0.67) ekleyin. SDS çözmek için bir karıştırıcı kullanın. Damıtılmıs şişeyi doldurun. 1000 ml&#39;lik toplam hacme kadar ulaşılır. </li></ol></li><li> % 1 SDS <ol><li> 1.000 mi bot stok çözeltisi, 100 ml (% 10) ilave edilirtle. 900 mi su Hedef ekle. ve iki kez şişeyi çalkalayın. Steril bir filtre ile% 1 SDS çözeltisi filtre. </li></ol></li></ol> 3. Decellularization <ol><li> Perfüzyon Cihaz Set-up <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/53029/53029fig1.jpg" /></li></ol> Şekil 1:. Oscillating Basınç Koşullarda Seçici Arter ve Dört Rat karaciğerinin Portal Venöz Perfüzyon için Perfüzyon Cihaz Programı (. Struecker ark değiştirilmiş 14) <ol><li> Üç yollu ve dolum seviyesini düzenleyen ve 500 ml% 0,9 NaCl ile reaktörü doldurmak için Heidelberger uzantısı drenaj bağlayın. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53029/53029fig2.jpg" /></li></ol> Şekil 2:. (4) portal venöz yoldan kabarcık kapanı (5) (2) ya da arteriyel ac yoluyla uzak ucuna perfüzyon set-up Plan perfüzyon odasına bağlantı (1.400 cm 3) (1)ri (3). Kabarcık kapanı (5) uzak ucunda bir tıkama (4) ve bir delik (6) ile donatılmış olmalıdır. Bir Heidelberger uzatma (7) kabarcık tuzak (5) bağlayın. Pompa segmenti (8) ile Heidelberger uzantısı bağlayın. Bundan başka, bir başka Heidelberger uzantısı (9), pompa segmenti (8) bağlanır. Deterjan çözeltisinin (10) şişenin içine geçen Heidelberger uzantısı (9) takın. (Ya da birden perfüzyonları durumunda basınç dağıtıcıya) perfüzyon odasına solunum cihazı (11) takın. Reaktör sıvıları boşaltmak için, atık şişe (12) çıkışı bağlayın. <ol><li> Pompanın içine pompa segmenti yerleştirin. PBS ile döngüsü doldurmak için pompayı çalıştırın, kabarcık kapanı distal ucunu kapatın ve havalandırma açın. Kabarcık alt güvenli PBS (2-3 cm) ile kaplı olduğunda, havalandırma kapatın ve baloncuk kapanı distal ucunu açın. </li><li> Karaciğer Kurulum <ol><li> İlgili reaktör erişmek için portal ven kanül üç yönlü stopcock bağlayın. Carteriyel erişim arteriyel kanül taşıyıcılarına bağlan- ması. Hava sistemlerini girmemesini sağlamak için dikkatli olun. </li></ol></li><li> Titreşimli Basınç Koşullar Uygulaması <ol><li> 15 bpm bir frekans ve 26 mbar (dak. 4 mbar, maks. 30 mbar), bir genlik solunum cihazı kullanın. Basınç dağılımı odasına solunum bağlayın ve reaktöre odasına bağlayın. Basınç uygulamasını başlatın. </li></ol></li><li> Decellularization Protokolü <ol><li> / Dakika, 5 ml bir akış oranı ile perfüzyon adımları. 90 dakika boyunca,% 1 Triton X-100 ile birlikte karaciğer perfüzyonu ile decellularization başlatın. Perfüzyon odasının sabiti içinde ve perfüze karaciğer üzerindeki sıvı seviyesini korumak için perfüzyon cihazının çıkışı yoluyla atık effluence izin verin. 90 dakika sonra,% 1 SDS deterjan değiştirin. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53029/53029fig3.jpg" /> <img alt="Tablo 1" src="/files/ftp_upload/53029/53029table1.jpg" /></li></ol></li></ol> &lt;p&gt; Şekil 3: Tüm Deneysel Grupları için Perfüzyon Protokolü.

<ol><li>Struecker, B., Raschzok, N., Sauer, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+support+strategies%3A+cutting-edge+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Liver support strategies: cutting-edge technologies.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11, 166-176 (2014).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32, 3233-3243 (2011).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+liver+scaffolds+effectively+support+the+proliferation+and+differentiation+of+mouse+fetal+hepatic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Decellularized liver scaffolds effectively support the proliferation and differentiation of mouse fetal hepatic progenitors.</a> J Biomed Mater Res A. , (2013).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat Med. 16, 814-820 (2010).</li>
<li>Shupe, T., Williams, M., Brown, A., Willenberg, B., Petersen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+decellularization+of+intact+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Method for the decellularization of intact rat liver.</a> Organogenesis. 6, 134-136 (2010).</li>
<li>Bao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+a+portal+implantable+functional+tissue-engineered+liver+using+perfusion-decellularized+matrix+and+hepatocytes+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+transplantation%22%5BJournal%5D)">Construction of a portal implantable functional tissue-engineered liver using perfusion-decellularized matrix and hepatocytes in rats.</a> Cell transplantation. 20, 753-766 (2011).</li>
<li>Baptista, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+whole+organ+decellularization+for+the+generation+of+a+vascularized+liver+organoid%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The use of whole organ decellularization for the generation of a vascularized liver organoid.</a> Hepatology. 53, 604-617 (2011).</li>
<li>Soto-Gutierrez, A., Wertheim, J. A., Ott, H. C., Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspectives+on+whole-organ+assembly%3A+moving+toward+transplantation+on+demand%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Perspectives on whole-organ assembly: moving toward transplantation on demand.</a> J Clin Invest. 122, 3817-3823 (2012).</li>
<li>Soto-Gutierrez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+whole-organ+regenerative+medicine+approach+for+liver+replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">A whole-organ regenerative medicine approach for liver replacement.</a> Tissue engineering. Part C, Methods. 17, 677-686 (2011).</li>
<li>De Kock, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+quick+method+for+whole-liver+decellularization%3A+a+novel+in+vitro+three-dimensional+bioengineering+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+toxicology%22%5BJournal%5D)">Simple and quick method for whole-liver decellularization: a novel in vitro three-dimensional bioengineering tool.</a> Archives of toxicology. 85, 607-612 (2011).</li>
<li>Park, K. M., Woo, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+decellularization+for+multi-organ+scaffolds+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+proceedings%22%5BJournal%5D)">Systemic decellularization for multi-organ scaffolds in rats.</a> Transplantation proceedings. 44, 1151-1154 (2012).</li>
<li>Shirakigawa, N., Ijima, H., Takei, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+liver+as+a+practical+scaffold+with+a+vascular+network+template+for+liver+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Decellularized liver as a practical scaffold with a vascular network template for liver tissue engineering.</a> J Biosci Bioeng. , (2012).</li>
<li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver Int. 33, 448-458 (2013).</li>
<li>Struecker, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+rat+liver+decellularization+by+arterial+perfusion+under+oscillating+pressure+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Improved rat liver decellularization by arterial perfusion under oscillating pressure conditions.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2014).</li>
<li>Struecker, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+Liver+Decellularization+Under+Oscillating+Pressure+Conditions%3A+A+Technical+Refinement+to+Improve+the+Homogeneity+of+the+Decellularization+Process%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Porcine Liver Decellularization Under Oscillating Pressure Conditions: A Technical Refinement to Improve the Homogeneity of the Decellularization Process.</a> Tissue engineering. Part C, Methods. , (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Sıçan karaciğer hasat ve decellularization sunulan tekniği kolayca tekrarlanabilir olmasına rağmen, dikkate bazı kritik adımlar vardır: Kan pıhtılaşmasını aktive edecek ve karaciğer içinde kan pıhtısı oluşumuna neden olabilir, çünkü karaciğer hasat için hazırlık sırasında, şiddetli kanama önlemek için önemlidir. Bizce, bu portal ven yoluyla perfüzyon sırasında hepatik arter yoluyla kan akışını önlemek için portal ven kanülasyonu önce doğrudan abdominal aorta kesilirken avantajlıdır. Karaciğe...

Decellularization ve Recellularization vitro 1&#39;de işlevsel ve çoklu organ üretilmesini sağlayabilir. Kaldırma hücreleri ile antijenik madde ile (ör., DNA, a-Gal epitopları), bir organdan, olmayan ya da daha az immünojenik hücre dışı matris (ECM) elde edilebilir. Bu matris, bir organ, üç boyutlu mikroanatomisinin korur ve farklı, muhtemelen ksenogeneik kökenli 2 hücreleri ile yeniden popüle için ideal bir biyolojik matris olarak görev yapabilir. Bu durumda, bir hücresizleştirilmiş sıçan karaciğer matrisi insan karaciğer hücreleri ile yeniden doldurulur edilebilir. Bu insanlaştırılmış mikro-karaciğer hastalıkları (örn., Doğumsal metabolik hastalıklar, viral hastalıklar veya maligniteler) veya preklinik ilaç testi 3 araştırma için bir ex vivo modeli olarak hizmet verebilir. Sıçan karaciğer perfüzyon decellularization için çeşitli protokoller zaten 4-13 yayınlanmıştır. Tüm protokollerde, decellularleştirilmesi kanüllü portal ven aracılığıyla alkali iyonik veya non-iyonik deterjanlar perfüzyon ile elde edilmiştir. Bizim bilgimize göre, biz portal ven ve / veya sıçan hepatik arter 14 üzerinden seçici perfüzyon ile sıçan karaciğer decellularization bildiren ilk gruptu. Karaciğer farklı vasküler sistemlerinin seçici perfüzyon etkinleştirilmesi hücre yeniden popüle önemli bir rol oynayabilir, bundan başka, daha decellularization sonuçlar etkinleştirmek olabilir. Burada ayrıntılı çalışmada, karaciğer titreşen basınç koşullarında perfüzyon sağlayan bir ısmarlama tescilli perfüzyon cihazında perfüze edildi. Bu basınç koşulları karaciğer fizyolojik solunum bağımlı perfüzyon taklit: in situ, karaciğer hareketi solunum sırasında karaciğer perfüzyon üzerinde doğrudan etkisi vardır diyaframın copula altında asılı. İlham, özellikle optimize diyaframın düşürülmesi ve karaciğerde sıkma yol açarhepato-venöz çıkış, oysa son karaciğer yükselmesi ve portal venöz girişi 15 optimize karın içi basıncının düşürülmesi yol açar. Amacımız salınan basınç koşulları karın içi koşullar ex vivo taklit ederek sıçan karaciğer perfüzyon decellularization homojenliği üzerinde bir etkisi olup olmadığını araştırmaktır. decellularization sürecinin homojenliği perfüzyon decellularization bir hafife bir faktör olabilir. Bilinen tüm maddeler ECM karaciğer decellularization neden değişiklikler için kullanılır. Diğer alanlarda zaten tamamen decellularized oysa kötü perfüze alanlarda hücreler, ECM içinde kalır. Geri kalan hücrelerin çözmek için, perfüzyon süresi ya da basınç iyi perfüze alanlara daha fazla değişiklik neden yükselmiş olması gerekir. Bu nedenle, decellularization deterjanlar organ içindeki homojen dağıtılmalıdır.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Kendi kendine inşa edilmiş arteriyel kanül</td></tr><tr><td>&nbsp; Portex Steril Olmayan Polieten Boru</td><td>SIMS Portex</td><td>REF 800/110/100</td><td>0,28 mm İç Çap 0,61 mm OD</td></tr><tr><td>&nbsp; Portex Steril Olmayan Polieten Boru</td><td>SIMS</td><td>Portex REF 800/110/200</td><td>0.58 mm ID 0.96 mm OD</td></tr><tr><td>Venodrop Safe kelebek kateter</td><td>Fresenius Kabi</td><td>3275851</td><td>21 G</td></tr><tr><td colspan="4">portal ven kanülü</td></tr><tr><td>Periferik Venöz Kateter</td><td>BD</td><td>393224</td><td>BD Venflon Pro 20G</td></tr><tr><td>Üç musluk</td><td>demircileri medikal</td><td>888-101RE</td><td></td></tr><<tr>td colspan="4">ameliyat</td></tr><tr><td>Pamuk Çubukları</td><td>Hecht-Assistent</td><td>4302</td><td></td></tr><tr><td>Pamuklu Pedler&nbsp;</td><td>Shaoxing Zhengde Cerrahi pansuman</td><td>13H118-03</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı Bez Bandaj</td><td>Hubei Haige&nbsp; Tıbbi Aletler</td><td>14388</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Ringer Solüsyonu</td><td>Fresenius Kabi</td><td>13 HKP022</td><td>1000 ml</td></tr><tr><td>10 ml Şırınga</td><td>Braun</td><td>4606108V</td><td>10 ml/ Luer Solo</td></tr><tr><td>5 ml Şırınga</td><td>Braun</td><td>4606061V</td><td>5 ml /Luer Solo</td></tr><tr><td>Sütür (İpek 6/0)</td><td>Resorba</td><td>H1F</td><td>LOT 105001.81</td></tr><tr><td>tıbbi</td><td>örtü Shaoxing Zhengde Cerrahi pansuman</td><td>D0613011</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">cerrahi aletler</td></tr><tr><td>iğne tutucu</td><td>Geuder</td><td>17570</td><td></td></tr><tr><td>mikro forseps</td><td>Inox-Electronic</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>mikro makas</td><td>Martin</td><td>11-740-11</td><td></td></tr><tr><td>mikro forseps</td><td>S & T &nbsp;</td><td></td><td></td>112314</tr><tr><td>Kelepçe</td><td>Aesculap</td><td>BH111R</td><td></td></tr><tr><td>makas</td><td>FS T&nbsp;</td><td>14501-14</td><td></td></tr><tr><td>cerrahi forseps</td><td>Aesculap</td><td>BD 557</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Hücre</td></tr><tr><td>Dışı Solunum Maskesi Resmed</td><td>14.24.11.0004</td><td>SmartAIR ST</td><td></td></tr><tr><td>Perfüzyon Cihazı</td><td>Charite, tıp mühendisliği laboratuvarı</td><td>ısmarlama cihaz</td> hücre <td>giderme cihazı</td></tr><tr><td>peristaltik pompa ismatec reglo ICC</td><td>IDEX</td><td>ISM4408&nbsp;</td><td>4 kanallı</td></tr><tr><td>Heidelberger uzatma 75 cm&nbsp;</td><td>Fresenius Kabi</td><td>2873</td><td>75 cm</td></tr><tr><td>MS/CA pompa segmenti</td><td>IDEX</td><td>IS 3510&nbsp;</td><td>MS/CA/tıkla ve git/POM-C</td></tr><tr><td>CA 2 durdurucu tüp</td><td>Pharmed</td><td>BPT NSF-51</td><td></td></tr><tr><td>kabarcık tuzağı&nbsp;</td><td></td><td>ısmarlama ürün</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lock hortum bağlantısı</td><td>Neolab</td><td>No. 02-1887</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Deterjanlar</td></tr><tr><td>SDS peletleri</td><td>Carl Roth&nbsp;</td><td>CN30.4&nbsp;</td><td>2,5 kg</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Carl Roth&nbsp;</td><td>3051.1&nbsp;</td><td>10 L</td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>DPBS</td></tr><tr><td colspan="4">boyama</td></tr><tr><td>Eosin %1</td> <td>Morphisto</td><td>10177</td><td></td></tr><tr><td>Mayer hematoksilen</td><td>AppliChem</td><td>A4840</td><td></td></tr><tr><td>gomori boyama</td><td>Morphisto</td><td>11104</td><td></td></tr><tr><td>AlcainBlue-PAS boyama</td><td>Morphisto</td><td>11388</td><td></td></tr><tr><td>Doğrudan Kırmızı 80&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>365548</td><td></td></tr></tbody></table>

bir salınım basınçlı perfüzyon aygıt sıçan karaciğerinin decellularization prosedürü

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

Parankimal organların hücreden arındırılması ve yeniden hücreselleştirilmesi, in vitro fonksiyonel organların oluşturulmasını sağlayabilir ve kemirgen karaciğer hücresizleştirmesi için çeşitli protokoller zaten yayınlanmıştır. Portal ven ve/veya hepatik arter yoluyla selektif perfüzyonu mümkün kılan tescilli bir perfüzyon cihazı inşa ederek decellularizasyon sürecini iyileştirmeyi amaçladık. Ayrıca, hücreden arındırmanın homojenliğini artırmak için salınımlı çevre basıncı koşulları altında perfüzyon gerçekleştirmeye çalıştık. Perfüzyon decellularizasyonunun homojenliği bugüne kadar hafife alınan bir faktör olmuştur. Decellularizasyon sırasında, organ içinde zayıf perfüze edilmiş alanlar hala hücre içerebilirken, iyi perfüze edilmiş alanlardaki hücre dışı matris (ECM) alkali deterjanlardan zaten etkilenmiş olabilir. Salınımlı basınç değişiklikleri, karaciğer içindeki mikroperfüzyonu optimize etmek için solunum sırasında meydana gelen karın içi basınç değişikliklerini taklit edebilir. Burada sunulan çalışmada, hücreden arındırılmış sıçan karaciğer matrisleri histolojik boyama, DNA içerik analizi ve korozyon dökümü ile analiz edildi. Hepatik arter yoluyla perfüzyon, portal venöz perfüzyondan daha homojen sonuçlar gösterdi. Salınımlı basınç koşullarının uygulanması, perfüzyon hücre gidermenin etkinliğini artırdı. Hepatik arter yoluyla ve salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilen karaciğerler en iyi sonuçları gösterdi. Tescilli cihazımızı kullanarak karaciğer toplama, kanülasyon ve perfüzyon için sunulan teknikler, sıçan karaciğerlerinde hücre giderme ve yeniden hücrelendirme deneylerini iyileştirmek için karmaşık perfüzyon kurulumlarını mümkün kılar.

homojenliği ve dolayısıyla farklı decellularization protokolleri etkinliği makroskopik gözleminden, histolojik analiz ve hücresizleştirilmiş karaciğer matrisleri içinde kalan DNA içeriğinin analizi ile değerlendirilmiştir. Ayrıca, korozyon döküm decellularization sonra karaciğerinin sağlam mikroanatomisinin görselleştirmek için yapıldı. Makroskopi Decellularization sırasında, karaciğer hücre içeriğine çıkarılmasını gösteren lucent hale gelir. Portal ven aracılığı...

Tescilli cihazımızı kullanarak karaciğer toplama, kanülasyon ve perfüzyon için sunulan teknikler, sıçan karaciğerlerinde hücre giderme ve yeniden hücreselleştirme deneylerini iyileştirmek için karmaşık perfüzyon kurulumlarını mümkün kılar.

Bir Salınım basınçlı perfüzyon Aygıt Sıçan karaciğerinin decellularization Prosedürü

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, sıçan karaciğeri perfüzyon deselülarizasyonunda homojenliğin optimize edilmesinde perfüzyon kökünün rolünü değerlendirmektir. Bu işlem, öncelikle taze izole edilmiş sıçan karaciğerlerinin portal venlerinin ve hepatik arterlerinin kanüle edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, karaciğerler portal venlerin veya hepatik arterlerin seçici perfüzyonu için bir perfüzyon cihazına bağlanır.Ardından, solunum sırasında meydana gelen intraabdominal basınç değişikliklerini taklit etmek amacıyla perfüzyon odasına salınımlı basınç değişiklikleri uygulanır. Karaciğer mikro perfüzyonunun optimize edilmesiyle, sonuç olarak hepatik arter yoluyla salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilen karaciğerler, makroskobik gözlem ile histolojik ve biyokimyasal analizlerle değerlendirildiğinde daha homojen ve daha hızlı bir deselülarizasyon sergiler. Bu tekniğin, portal venöz perfüzyon deselülarizasyonu gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, salınımlı basınç koşulları kullanılarak yapılan arteriyel perfüzyonun daha homojen bir deselülarizasyon sonucu sağlamasıdır.Buna rağmen, bu yöntem daha kısa bir sürede yavaşlatma teknikleri hakkında bilgi sağlayabilir. Ayrıca, rezidüel solarizasyon deneyleri, ağız dışı perfüzyon düzenekleri ve organ modelleri gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, kırmızı karaciğerlerin hasadı ve arteriyel kanülasyonu karmaşık olabildiği için zorluk çekebilirler.Karaciğer hasadı yapmadan önce, periferik G 20 venöz kateterin 1,5 santimetrelik bir parçasının ucuna eğik bir kesik atın. Kateteri üç yollu bir musluğa bağlayın ve sistemi havasını almak için ringer solüsyonu ile doldurulmuş 10 mililitrelik bir şırınga kullanın. Ardından, bir kelebek kanülün iğnesini beş milimetre uzunluğunda kesin ve iğneye beş santimetrelik bir tüpü sabitlemek için hızlı yapıştırıcı kullanın.Daha büyük olan tüpün içine iki santimetre uzunluğunda bir tüp yerleştirin ve bu tüpü de Japon yapıştırıcısı ile sabitleyin. Bir destek oluşturmak için bu düzeneğin üzerine başka bir tüp geçirin ve yapıştırarak sabitleyin. Ardından, hasat için karaciğeri onarmak amacıyla, yeni oluşturulan arter kanülünü temizlemek için ringer solüsyonu ile doldurulmuş beş mililitrelik bir şırınga kullanın.Anesteziz edilmiş yetişkin bir sıçanın diyafram kubbesinin altında kalan medial ve sol karaciğer loblarını tutmak için ıslak gazlı bez kullanarak başlayın. Bu sırada hepato duodenal ligamenti ve üst karaciğer lobunu da açığa çıkarın. Ardından, üst omental lob hareketli hale gelene kadar, loba bağlı olan ligamenti dikkatlice diseke etmek için iki mikro pens ve yaylı makas kullanın.Ardından medial ve sol loblar sabit tutulur. Lobu GRE kompresinin altına, mideyi ise hayvanın soluna taşımak için ıslak pamuklu çubuklar kullanın. Mideyi bir klemple sabitleyin ve omentum minus'u diseke edin.Ardından, hareketli hale gelene kadar karaciğerin alt veya mental lobunu disseke edin ve duodenumu tutmak için bir backhouse klembi kullanarak lobu boşluğuna geri itin; herpa duodenal ligamenti açığa çıkarmak için duodenumu sola kaydırın. Ortak safra kanalının çevresini belirleyin. Daha sonra safra kanalını yağ ve pankreas dokusundan disseke ederek, kanalı safra kanalı bifurkasyonundan 1.5 santimetre uzaklıktan kesin.Sal venini çevreleyen adipöz dokudan diseke ederek gastroduodenal veni açığa çıkarın. Ardından, gastroduodenal veni 6-0 sütürlerle iki kez ligatleyin ve veni iki düğüm arasından kesin. Çölyak trunkus ve ortak hepatik arteri, tüm arteriyel ramia açığa çıkana kadar çevre dokulardan diseke edin.Tüm arterler diseke edildikten sonra, sağ böbrek ile sağ lateral karaciğer lobu arasından vena cava inferior'u çevreleyin ve veni retroperitoneal alandan diseke edin. Aortu açığa çıkarmak için truncus coeliacus'u takip edin. Ardından retroperitoneal yağ dokusunu diseke edin ve truncus coeliacus'un üzerinden aortu çevreleyin.Şimdi, bir mililitre salin içindeki 1000 ünite heparini vena cava inferior'a enjekte edin. İnsizyonu bir pamukla kapatın ve heparinin etkisini göstermesi için bir ila iki dakika bekleyin. Ardından, aortu pensle çevreleyin ve aort ile vena cava inferior'u böbrekten distal olarak disseke edin.Portal ven kanülünü yerleştirmek için distal portal vende balık ağzı insizyon yapın ve insizyonu pens ile açın. Ardından portal veni kanüle edin ve karaciğer rengi açılana kadar karaciğeri 20 milliliters ringer çözeltisi ile yıkayın. Kanülü sabitlemek için silk altı sıfır ligatürler kullanın. Arteriyel kanülü yerleştirmek için, aorta segmenti retroperitoneal boşluktan serbest kalana kadar aortayı çölyak trunkun üzerinden disseke edin.Bir aort yaması oluşturmak için aorta segmentini boylamsal olarak kesin ve kendi yapımınız olan kanülü statik bir tutucuya yerleştirin. Ardından, iki pens yardımıyla aort yamasını kanülün üzerine geçirin ve hepatik arteri kanül üzerinde ipek altı sıfır sütür ile bağlayın. Deselülarizasyonu gerçekleştirmek için yamayı bağlantı noktasına sabitleyin. Portal ven kanülündeki üç yollu musluğu ilgili reaktör girişine bağlayın ve sistemlere hava girmediğinden emin olarak arteriyel kanülü arteriyel girişe bağlayın.Ardından, respiratörü basınç dağıtım odasına ve odayı reaktöre bağlayın. Basınç uygulamasını başlatın. Daha sonra deselülarizasyon işlemini başlatın.Karaciğeri, dakikada beş mililitre hızla %1 Triton X 100 ile perfüze edin. Perfüzyon odası içindeki sıvı seviyesini sabit ve perfüze edilen karaciğerin üzerinde tutmak için atık akışının perfüzyon cihazının çıkışı yoluyla tahliyesine izin verin. 90 dakika sonra deterjanı %1 SDS ile değiştirin. Vena porta yoluyla perfüze edilen karaciğerler, işlem sırasında ve sonrasında makroskobik olarak görülebilen hücre kalıntılarıyla birlikte deselülarizasyona işaret eden homojen bir aydınlanma sergilerken; hepatik arter yoluyla perfüze edilen karaciğerler, daha az görünür hücre kalıntısı ile daha homojen bir deselülarizasyon seyri göstermektedir.Karaciğerlere salınımlı basınç koşulları uygulanarak perfüzyon yapıldığında, hiçbir kalıntı hücre görülmemiştir. Perfüzyon yönteminden bağımsız olarak, deselülerize edilmiş karaciğer matrislerinin histolojik değerlendirmesi, özellikle hepatik arter yoluyla perfüze edilen karaciğerlerdeki makroskobik bulguları desteklemektedir.Salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilsin ya da edilmesin, hiçbir kalıntı hücre gözlenmemiştir; ancak portal ven aracılığıyla perfüze edilen karaciğerler, salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilseler bile kalıntı hücre bölgeleri sergilemektedir, her ne kadar bu koşullar söz konusu karaciğerlerdeki kalıntı hücre kütlesini azaltsa da. Deselülarizasyon koşullarından bağımsız olarak, karaciğerlerin hücre dışı matrislerinin korunduğuna dikkat edilmelidir. Karaciğer matrisinin kuru ağırlığı başına düşen DNA içeriği, tüm deney gruplarında doğal karaciğerlere kıyasla azalmıştır. Farklar yalnızca salınımlı basınç koşulları altında perfüze edilen grupta istatistiksel olarak anlamlıdır.Ek olarak, deselülerize karaciğer matrislerinin korozyon dökümü, perfüzyon işlemi sırasında karaciğerin mikroanatomisinin korunduğunu doğrulamıştır. Bu videoyu izledikten sonra, tekrarlanabilir ve homojen deselülerizasyon için kırmızı karaciğerlerin nasıl hasat edileceği, kanüle edileceği ve perfüze edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Triton X 100 ve SDS ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken eldiven giymek gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

procedure-for-decellularization-rat-livers-an-oscillating-pressure

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Perfüzyon decellularization organ ekstraselüler matriks kompozisyonu ve mikromimarisini korur tüm karaciğer iskeleleri üretmek için yeni bir tekniktir. Burada, hepatositler ile perfüzyon decellularization ve sonraki repopulation kullanarak tüm organı iskeleleri hazırlama yöntemi açıklanmıştır. Fonksiyonel ve transplante karaciğer greft tekniği kullanılarak oluşturulabilir.

Tüm karaciğerleri Decellularization ve Recellularization

Sıçan karaciğerinden portal fibroblastlar izole etmek için bir yöntem tarif edilmiştir. Karaciğerleri perfüze ve...

Sıçan Portal Fibroblastlar izolasyonu ile<em&gt; Yerinde</em&gt; Karaciğer Perfüzyon

İlköğretim hepatositler bir fizyolojik ilgili deneysel sistem biyokimyasal, moleküler ve metabolik fonksiyonlarını değerlendirmek için değerli bir araç sağlar. Biz sürekli to1.0 × 10 kadar yaşayabilir hepatositler üretir yerinde karaciğer perfüzyon, sıçan için güvenilir bir protokol...

Sıçan Karaciğer Hücreleri İzolasyon ve İlköğretim Kültür

Bu tür yağlı karaciğerleri, yaşlı donörden greft veya kardiyak ölüm (DCD) sonra alınan karaciğerinin Marjinal greftler, sadece kötü konvansiyonel, soğuk statik depolama tahammül. Biz transplantasyon öncesinde marjinal karaciğer greft korunması, değerlendirilmesi, ve onarımı için subnormothermic ex vivo karaciğer perfüzyon yeni bir model geliştirdi.

Subnormothermic Tekniği<em&gt; Ex vivo</em&gt; Karaciğer Depolama, Değerlendirme Perfüzyon ve Marjinal Karaciğer Greft Onarımı

Önemli karaciğer donör kan olmadığını ve karaciğer bağış için ölçüt genişletilmiştir. Normothermic ex vivo karaciğer perfüzyon (NEVLP) değerlendirmek ve organ işlevini değiştirmek için geliştirilmiştir. Bu çalışma NEVLP bir fare modeli gösterir ve karaciğer koruma yaralanma azaltmak için pegile-katalaz, yeteneğini sınar.

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

Biz daha fazla vivo içinde kısmi karaciğer gelecekte mühendislik eğitimi için bir önkoşul olarak köstebeğiyle vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon modeli için yeni bir cerrahi teknik kurmak.

Sıçan Vivo içinde kısmi karaciğer Dairesi'nde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik

Bu protokol, özel bir intravenöz kateter, standartlaştırılmış steril tek kullanımlık tüp, gerçek zamanlı izleme ile tamamlanan sıcaklık kontrolü ve izole primer sıçan hepatositlerinin yaşayabilirliği, verimi ve işlevselliğindeki tutarlılığı artırmak için iki aşamalı kollajenaz perfüzyon prosedürü için bir alarm sisteminin kullanımını detaylandırmaktadır.

Primer Sıçan Hepatositlerinin Çok Parametreli Perfüzyon Kontrolü ile İzolasyonu

Protokol, özelleştirilmiş bir perfüzyon biyoreaktöründe flep vaskülatürü boyunca sodyum dodesil sülfat deterjanının perfüzyonu ile vaskülarize domuz fleplerinin cerrahi tedarikini ve ardından desellülarizasyonunu açıklamaktadır.

Özelleştirilmiş Perfüzyon Biyoreaktöründe Domuz Vaskülarize Fleplerinin Tedariği ve Perfüzyon-Desellülarizasyonu

Bu yazıda kompozit sıçan arka bacakları için cerrahi teknik ve desellülarizasyon süreci anlatılmaktadır. Desellülarizasyon, bir ex vivo makine perfüzyon sistemi aracılığıyla düşük konsantrasyonlu sodyum dodesil sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Vaskülarize Kompozit Allotransplantasyon için Ex Vivo Perfüzyon Bazlı Biyoreaktör Kullanılarak Sıçan Arka Bacaklarının Tedariği ve Desellülarizasyonu

Fare karaciğerleri için normotermik ex vivo karaciğer perfüzyonu (NEVLP) sistemi oluşturuldu. Bu sistem mikrocerrahide deneyim gerektirir ancak tekrarlanabilir perfüzyon sonuçlarına izin verir. Fare karaciğerlerini kullanma yeteneği, yeni perfüzyon katkı maddelerini tanımlamak için moleküler yolakların araştırılmasını kolaylaştırır ve organ onarımına odaklanan deneylerin yürütülmesini sağlar.

Normothermic Ex Vivo Karaciğer Makinesi Farede Perfüzyon

Bu protokol, bir sıçan modelinde optimize edilmiş iki aşamalı kollajenaz karaciğer perfüzyon tekniği sunar ve in vitro uzun süreli 3D organoid kültürü için izole hepatositlerin kullanımını gösterir.

Sıçan Karaciğer Perfüzyonu ve Primer Hepatosit İzolasyonu: Son Teknoloji 3D Organoid Kültürü İçin Çok Önemli Eski Bir Prosedür

Öğrenin, sıçan karaciğerinde salınım basınçlı perfüzyon kullanarak dehücreselleştirme homojenliğini nasıl optimize edeceğinizi. Bu yöntem, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği araştırmalarında daha hızlı ve tutarlı sonuçlar sağlar.

Bir Salınım basınçlı perfüzyon Aygıt Sıçan karaciğerinin decellularization Prosedürü

Daha fazla video keşfet