Name: Hazırlanması ve Bireysel Karakterizasyonu ve Multi-ilaç Fiziksel, polimerik misellerin Entrapped Loaded (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Öğrenin ilaç yüklü misellerin çözücü döküm yöntemiyle hazırlanması ve karakterizasyonunu. Bu yöntem, ilaç taşıma sistemlerinde tekrarlanabilirlik ve stabilite sağlayarak çeşitli hastalık durumlarında etkili tedavi olanakları sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, AACP Yeni Eczacılık Fakültesi Araştırma Ödül Programı, Oregon Tıbbi Araştırma Vakfı Yeni Araştırmacı Hibesi, Oregon Eyalet Üniversitesi-Başlangıç fonu ve Pasifik Üniversitesi, Eczacılık Fakültesi Başlangıç fonu tarafından desteklenmiştir.

Çözücü döküm yöntemiyle ayrı ayrı ve Çok-ilaç yüklü misellerin hazırlanması 1. <ol><li> Çift ilaç miselleri için 1 mg her (DDM) de DTX 1 mg veya EVR 1 mg veya her ikisi ilaçlar tartılır. </li><li> PEG 2000 15 mg tartılır - -PLA 1800 veya PEG 4000 b - b -PLA 2200 bireysel ya da DDM biri için. </li><li> Ilaç / uyuşturucu ve bir 5 ml&#39;lik yuvarlak dipli bir şişeye asetonitril ve yerine 0.5 ml içindeki polimeri ayrıştırın. </li><li> Bir döner buharlaştırıcı kullanılarak indirgenmiş basınç altında ilaç (lar)-polimer asetonitril çözeltiyi buharlaştırarak ince ilaç dağıtılmış polimer film oluşturmak. 100 rpm, 40 o C su banyosu sıcaklığında ve 3 dakika daha 100 mbar, bir redüksiyon sonrasında 5 dakika boyunca 260 mbar&#39;lık bir vakum basıncı döner bir buharlaştıncı ayarlayın. </li><li> 50 ° C&#39;de iyonu giderilmiş su, 0.5 ml ilaç polimer film rehidrate ve yavaşça miseller oluşturmak için çalkalanır. </li><li> Filtre sonucu0.2 um naylon filtre vasıtasıyla misel çözeltisi ing 1,5 ml santrifüj tüpüne bir Erimemiş ilaç veya kirleri çıkarmak için. </li></ol> Ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi (RP-HPLC) kullanarak Değerlendirme miseller ilaç yükleme ve stabilitesi 2. <ol><li> 1 ml / dk&#39;lık bir akış oranında, bir cep asetonitril / su fazı (62/38)% 0.1 fosforik asit,% 1 metanol ile izokratik modda, 40 ° C&#39;de equilibriated bir C8 sütunu ile RP-HPLC analizi gerçekleştirmek ve 10 ul bir enjeksiyon hacmi. </li><li> Önceden ilk ilaç yükleme belirlemek için RP-HPLC ile analiz mobil faz: 100 taze hazırlanmış miseller (bölüm 1) 1 seyreltin. RP-HPLC ile tekrar değerlendirilmesi ve 24 saat boyunca miselleri içine ilaç (lar) dengesini belirlemek için mobil faz olarak 100 seyreltilmiş örnekleri: Mağaza seyreltilmemiş bağımsız miselleri ve 48 st için oda sıcaklığında (25 ° C) de DDM ve taze 1 hazırlar. </li><li> Sırasıyla 227 ve 279 nm DTX ve EVR doruklarına Monitörsırasıyla 1.7 ve 5.7 dakika tutma süreleri ile. Üçlü olarak tüm ölçümleri yapın. Ortalama ± SD ilaç yüklemesi olarak mevcut veriler. </li></ol> Dinamik ışık saçılımı ile misel Partikül Boyutu 3. Değerlendirmesi (DLS) <ol><li> 1.5 mg / ml&#39;lik nihai bir polimer konsantrasyonuna vermek üzere 1:20 oranında iyonu giderilmiş su içinde (bölüm 1 &#39;de tarif edildiği gibi), taze hazırlanmış miseller seyreltilir. </li><li> Saçılma belirlemek için 173 ° He-Ne lazer (633 nm) yoğunluğunu ölçün. 2 dakika süresince ön-dengeyi takiben 25 ° C &#39;de, tüm ölçümler gerçekleştirmek. </li><li> Üçlü olarak tüm ölçümleri yapın. Dağıtım polidispersite indeksi (PDI) ile birlikte SD ± Ortalama Z-ortalama boyutu olarak mevcut veriler. </li></ol> Bireysel miselleri ve DDM 4. Değerlendirme In Vitro İlaç Yayın <ol><li> 3 ml diyaliz kaseti içine bölüm 1. Yük misellerin 2.5 ml açıklandığı gibi bireysel miseller ve DDM hazırlayın7000 g / mol bir molekül ağırlığı kesme değeri (MWCO). Not: Bu MWCO kaset dışına serbestçe yaygın ve böylece lavabo koşulları sağlamak için ilişkilendirilmemiş polimer molekülleri ile birlikte ücretsiz ilaç (lar) etkinleştirmek için seçildi. </li><li> (Stok 200 mM&#39;lik çözelti seyreltilerek hazırlandı), 10 mM pH 7.4 fosfat tampon maddesi 2.5 L, kasetler yerleştirin ve lavabo koşulları temin etmek üzere bir tampon her 3 saat değiştirin. Deney süresi boyunca 37 o C tampon sıcaklığını muhafaza. </li><li> &#39;De 0, 0.5, 1, 2, 3, 6, 9, 12, 24, ve 48 saat, kasetlerinde çözeltisi 150 ul çekme ve taze tampon 150 ul ile değiştirin. </li><li> Ilaç konsantrasyonu belirlemek için 2. bölümünde kurulan RP-HPLC kullanılarak numunelerin analiz. Stastitical yazılımını kullanarak bir fazlı üstel dernek ile basit difüzyon modeline dayalı ilaç (lar) salım verileri Eğrisi-uyacak. </li><li> E ilaç salımı% 50 ulaşmak için gereken süreyi hesaplayın (t 1/2)eğri dayanan bireysel miseller veya DDM olarak ach uyuşturucu. Dördüzden tüm ölçümleri yapın. </li></ol>

<ol><li>Yokoyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles+as+a+new+drug+carrier+system+and+their+required+considerations+for+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles as a new drug carrier system and their required considerations for clinical trials.</a> Expert Opin Drug Deliv. 7, 145-158 (2010).</li>
<li>Shin, H. C., Alani, A. W., Rao, D. A., Rockich, N. C., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-drug+loaded+polymeric+micelles+for+simultaneous+delivery+of+poorly+soluble+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Multi-drug loaded polymeric micelles for simultaneous delivery of poorly soluble anticancer drugs.</a> J Control Release. 140, 294-300 (2009).</li>
<li>Adams, M. L., Lavasanifar, A., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphiphilic+block+copolymers+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Amphiphilic block copolymers for drug delivery.</a> J Pharm Sci. 92, 1343-1355 (2003).</li>
<li>Oerlemans, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles+in+anticancer+therapy%3A+targeting%2C+imaging+and+triggered+release%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles in anticancer therapy: targeting, imaging and triggered release.</a> Pharm Res. 27, 2569-2589 (2010).</li>
<li>Shin, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3-in-1+polymeric+micelle+nanocontainer+for+poorly+water-soluble+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">A 3-in-1 polymeric micelle nanocontainer for poorly water-soluble drugs.</a> Mol Pharm. 8, 1257-1265 (2011).</li>
<li>Hasenstein, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+activity+of+Triolimus%3A+a+novel+multidrug-loaded+micelle+containing+Paclitaxel+Rapamycin%2C+and+17-AAG%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Antitumor activity of Triolimus: a novel multidrug-loaded micelle containing Paclitaxel Rapamycin, and 17-AAG.</a> Mol Cancer Ther. 11, 2233-2242 (2012).</li>
<li>Mazzaferro, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bivalent+sequential+binding+of+docetaxel+to+methyl-beta-cyclodextrin%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Bivalent sequential binding of docetaxel to methyl-beta-cyclodextrin.</a> Int J Pharm. 416, 171-180 (2011).</li>
<li>Iwase, Y., Maitani, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+in+vivo+evaluation+of+liposomal+everolimus+for+lung+carcinoma+and+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Preparation and in vivo evaluation of liposomal everolimus for lung carcinoma and thyroid carcinoma.</a> Biol Pharm Bull. 35, 975-979 (2012).</li>
<li>Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Nguyen, D., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+effect+of+docetaxel+and+everolimus+as+individual+and+dual-drug-loaded+micellar+nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic effect of docetaxel and everolimus as individual and dual-drug-loaded micellar nanocarriers.</a> Pharm Res. 31, 660-669 (2014).</li>
<li>Xu, W., Ling, P., Zhang, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles%2C+a+promising+drug+delivery+system+to+enhance+bioavailability+of+poorly+water-soluble+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles, a promising drug delivery system to enhance bioavailability of poorly water-soluble drugs.</a> J Drug Deliv. 2013, 340315(2013).</li>
<li>Lavasanifar, A., Samuel, J., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28ethylene+oxide%29-block-poly%28L-amino+acid%29+micelles+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Poly(ethylene oxide)-block-poly(L-amino acid) micelles for drug delivery.</a> Adv Drug Deliv Rev. 54, 169-190 (2002).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

İlaç dağıtımında polimerik misellerin kullanımı, çok yönlülükleri ve çeşitli hastalık durumları için hidrofobik ilaçlar verme yetenekleri nedeniyle genişlemeye devam ediyor. Bu nedenle, hücre kültüründe veya hayvanlarda kullanılmadan önce bu formülasyonları hazırlamak ve karakterize etmek için gereken teknikler, ilaç ve polimer arasındaki en iyi eşleşmeyi belirlemek için kritik bir ilk adımdır. PEG-b-PLA, ilaç dağıtım amaçları için mükemmel amfifilik blok kopolimerlerdir. Bununla birlikte, hidrofilik ve hidro...

Hidrofilik ve hidrofobik alanlardan oluşur yinelenen yapısına Amfifilik blok kopolimerleri kendiliğinden polimerik miseller olarak bilinen üç boyutlu bir makro-moleküler derlemeleri oluşturmak üzere kendi kendine birleşebilen olabilir. Bu yapılar, bir hidrofilik kabuk tarafından çevrelenmiş bir iç hidrofobik bir çekirdeğe sahiptir. Hidrofobik merkez fiziksel olarak yakalanmalarında hidrofobik etkileşimler yoluyla ya da polimer omurgasına kimyasal konjügasyon yoluyla hidrofobik ilaçların da kapsama alınması için yeteneği vardır. 1 Bir çok avantajı, ilacın verilmesi için miselleri meydana getirmek üzere, bu blok kopolimerleri kullanarak bulunmaktadır. Bu polimerlerin az çözünen ilaçların birleşme, dahil ilaçların farmakokinetik özelliklerini iyileştirmek ve biyo-uyumluluk ve / veya biyo-bozunabilirlik içerir olanağına klasik çözünür hale güvenli bir alternatif yapar. 2, polimerik miseller kullanmanın bir diğer avantajı 15- arasında kendi kolloidal parçacık büyüklüğü olan pa için onları çekici hale 150 nm 3,eksipiyanlar teslimat. Bu nedenle, son 20 yılda, polimerik miseller, özellikle kanser terapisi için suda zayıf çözünür ilaçlar için uygun bir ilaç verme sistemleri olarak ortaya çıkmıştır. 3,4 Son polietilenoksit içeren bir üç bloklu kopolimer ise şu anda klinik denemeler geçiren kanser tedavisi. Klinik çalışmalarda misellerin 4 Four için beş polimerik misel formülasyonları PEG-bazlı çift bloklu kopolimerleri bulunması halinde. Bu misellerin büyüklüğü 20 nm ila 85 nm için değiştirilebilir. PEG bazlı polimerlerin kullanılmasının avantajı, bunların biyolojik uyumluluk ve ikinci blokta bağlı olarak biyo-bozunabilir de olabilir. Polietilenglikol blok -polylactic asit (-PLA b PEG), polimerik miseller göre en son yeni ilaç verme sistemleri birden fazla anti-kanser ilaçları eş zamanlı verilmesi için geliştirilmiştir. PEG-PLA b- misellerin bir biyouyumlu ve biyobozunur her ikisi de. Yüklenen miseller olarak göstermiştir bu çoklu ilaçynergistic vitro ve in vivo 2,5,6 farklı kanser modelleri önlenmesi ve direncini önleme kemoterapide birden fazla ilaç kullanan ve toksisiteyi düşürmek mevcut paradigma uyum sağlar. Bu nedenle, hazırlanması ve kanser ve diğer hastalık durumlarında kullanılmak üzere bu misel ilaç taşıyıcı sistemleri karakterize bir ilgi çok şey var. Çalışmada bu tür misel hazırlanmış ve ilgi hastalık durumlarında onları değerlendirilmeden önce karakterize edilebilir bir adım-adım süreci ana hatlarıyla aşağıda. Bu çalışmanın amacı için iki zayıf çözünen anti-kanser ajanları, dosetaksel (DTX) ve everolimus (EVR) seçilmiştir. DTX ve EVR Hem sırasıyla ml / 1.9 ve 9.6 ug içsel su çözünürlük ile suda az çözünen bileşiklerdir. Farklı moleküler ağırlıklara sahip 7,8 İki PEG b -PLA polimerler formüle polimer yapı taşları olarak bu protokolü kullanılmıştır miseller,-PLA 1800 (3800 Da) ve PEG 4000 b - - -PLA 2200 (6200 Da) b bu polimerler PEG 2000 bulunmaktadır. PEG-b -PLA miseller, bu nedenle DTX ve EVR tek tek ve kombinasyon halinde bir nanocarrier olarak benzersiz bir platform sağlar. Gerekli Reaktifler / Malzeme ve Ekipmanları hazırlamak ve bu misel Tablo 1&#39;de belirtilmiştir karakterize gerekiyordu.

<table><tbody><tr><td>PEG2000-b-PLA1800</td><td>Advanced Polymer Materials, Inc</td><td>6-01- PLA / 2000</td><td>PLA MW</td></tr>, <tr><td>PEG4000-b-PLA2200</td><td>Advanced Polymer Materials, Inc</td><td>6-01- PLA / 4000</td><td>PLA MW sipariş üzerine belirtilebilir</td></tr><tr><td>Docetaxel</td><td>LC Laboratories</td><td>D-1000</td><td>100 mg</td></tr><tr><td>Everolimus</td><td>LC Laboratories</td><td>E-4040</td><td>100 mg</td></tr><tr><td>Asetonitril</td><td>EMD / VWR</td><td>EM-AX0145-1</td><td>HPLC sınıfı; 4 L</td></tr><tr><td>Yuvarlak tabanlı şişe&nbsp;</td><td>Glassco/VWR</td><td>89426-496</td><td>5 ml</td></tr><tr><td>RV 10 Kontrollü Döner Evaporatörler</td><td>IKA Works</td><td>8025001</td><td>DAD dedektörlü Rotoevaporatör</td></tr><tr><td>Shimadzhu HPLC</td><td>Shimadzhu</td><td></td><td>RP-HPLC</td></tr><tr><td>Slide-a-lyzer diyaliz kaseti MWCO 7000</td><td>Thermo Scientific, Inc</td><td>66370</td><td>3 ml</td></tr><tr><td>Fosfat tampon pH 7.4, 200 mM</td><td>VWR</td><td>100190-870</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Malvern NanoZS</td><td>Malvern Instruments, UK</td><td></td><td>DLS</td></tr><tr><td>Naylon filtre</td><td>Acrodisc/VWR</td><td>28143-242</td><td>13 mm; 0.2 & M</td></tr><tr><td>Fosforik asit, NF</td><td>Spectrum Chemical/VWR</td><td>700000-626</td><td>100 ml</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td><td></td><td>Analiz yazılımı</td></tr><tr><td>Zorbax SB-C8 Hızlı Çözünürlük kartuşu&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>866953-906</td><td>4.6 ve kez; 75 mm, 3,5 & # 956; m</td></tr></tbody></table>

hazırlanması ve bireysel karakterizasyonu ve multi-ilaç fiziksel, polimerik misellerin entrapped loaded

Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles

Polietilenglikol blok -polylactic asit (PLA b- PEG) gibi bir amfifilik blok kopolimerleri, sulu ortamlarda hidrofilik kabuğuyla çevrelenmiş hidrofobik çekirdekler oluşturulmasını kritik misel konsantrasyonunun üzerinde miseller halinde kendi kendine birleşebilen olabilir. Bu misellerin çekirdek dosetaksel (DTX) ve everolimus (EVR) gibi hidrofobik, suda çözünürlüğü zayıf olan ilaçların yüklemek için kullanılabilir. Misel yapısı ve ilaç yükleme özellikleri sistematik karakterizasyonu yapılabilir in vitro ve in vivo çalışmalar önce önemlidir. Bu tarifnamede tarif edilen protokol amacı standart misel ürünler elde etmek için gerekli olan karakterizasyon adımları sağlamaktır. DTX ve EVR, sırasıyla, bu misellerin hazırlanışı, sırasıyla 1.86 ve 1.85 mg / ml için DTX ve EVR suda çözünürlüğünü arttırır solvent döküm yoluyla elde edilebilir ml / 1.9 ve 9.6 ug içsel çözünürlüklere sahiptir. Eval miseller ilaç stabilitesi48 saat boyunca oda sıcaklığında değerlendirmeler yapılmıştır ilaçların% 97 ya da daha fazla çözelti içinde muhafaza ettiğini göstermektedir. Misel boyutu, dinamik ışık saçılması ile değerlendirildi ve bu misellerin büyüklüğü 50 nm&#39;nin altında ve polimerin molekül ağırlığına bağlı olduğu belirtilmiştir. Misellerin gelen ilaç salım 48 saat içinde 37 o C&#39;de pH 7.4&#39;te lavabo koşullarında diyaliz kullanılarak değerlendirildi. Eğri uydurma sonuçlar ilaç salım difüzyon tahrik belirten birinci dereceden bir işlem tarafından tahrik edilir olduğunu göstermektedir.

Bireysel DTX veya EVR miselleri ve miseller başarıyla PEG 4000 ya formüle edilir -PLA b PEG içinde DTX ve EVR DDM - b -PLA 2200 veya PEG 2000 - b -PLA 1800 (Şekil 1). DTX EVR ve DDM PEG 4000 içindeki kararlılık göstermiştir - 48 saatten fazla bir -PLA 1800 b (Şekil 2) - -PLA 2200 veya PEG 2000, b. -PLA 2200, b ve...

Bu protokolün amacı, amfifilik blok kopolimerlerden oluşan misel ilaç taşıyıcı sistemlerde fiziksel olarak hapsolmuş, suda az çözünür ilaçların hazırlanmasını ve karakterizasyonunu tanımlamaktır.

Hazırlanması ve Bireysel Karakterizasyonu ve Multi-ilaç Fiziksel, polimerik misellerin Entrapped Loaded

Amphiphilic block copolymers like polyethyleneglycol-block-polylactic acid (PEG-b-PLA) can self-assemble into micelles above their critical micellar ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, ilaç yüklü hücrelerimi ilgilenilen hastalık durumlarında değerlendirmeden önce, bunların hazırlanması ve karakterize edilmesine yönelik adım adım bir süreç özetlemektir. Bu, çalışma için tekrarlanabilir hücreler üretmek amacıyla çözücü döküm yöntemiyle hücrelerimin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci bir adım olarak, hücrelerimin klinik olarak ilgili konsantrasyonları yükleme ve tutma kapasitesini belirleyen hücre yükleme stabilitesi ve boyutu değerlendirilir.Ardından, in vivo stabiliteyi değerlendirmeden önce hücrelerin uygun in vitro salım özelliklerine sahip olduğundan emin olmak amacıyla, hücrelerden ilaç salım hızı belirlenir. Sonuçlar, tekrarlanabilir şekilde üretilen stabil hücrelerin, burada sunulan değerlendirme tekniklerine dayanarak çeşitli hastalık durumlarında ilaç iletimini yürütmek için bir platform sağlayabileceğini göstermektedir. Bu tekniğin; denge yüklemesi veya diyaliz yöntemleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, miyozinlerin tekrarlanabilir ilaç yüklemesi ve boyutuyla çok daha hızlı hazırlanabilmesidir.Nanölçekli ilaçlar geleneksel formların ötesinde fırsatlar sunduğundan, bu tekniğin etkileri çeşitli hastalık durumlarının tedavisine veya teşhisine kadar uzanmaktadır. Genellikle, yeni başlayan bireyler bu teknikler basit olsa bile zorlanabilirler; çünkü salım çalışmalarını gerçekleştirmeniz gerekir, aksi takdirde burst etkisini gerçekten değerlendiremezsiniz. Bu prosedürleri lisansüstü öğrencim Shaman Duke ve iş birlikçim Deepa gösterecekler. İlk olarak, çift ilaç yüklü miseller veya DDM için 1 mg DTX, 1 mg EVR ve 15 mg Peg 4,000 blok PLA 2200 tartın. Tartım işleminden sonra, ilaçları ve polimeri 0.5 mL asetonitrilde çözün, ardından çözeltiyi 5 mL'lik bir yuvarlak tabanlı balona aktarın; bir döner evaporatör kullanarak ilaç-polimer aseto çözeltisini indirgenmiş basınç altında buharlaştırarak ince bir ilaç dağılımlı polimer film oluşturun.Ardından, ilaç polimer filmini 50 °C'de ön ısıtmaya tabi tutulmuş 0,5 mL deiyonize su ile yeniden hidrate edin ve miselleri oluşturmak için balonu 50 °C'lik bir su banyosunda hafifçe çalkalayın. Çözeltiyi bir santrifüj tüpüne aktarın ve 3 dakika boyunca 7.200 ×g hızında santrifüjleyin. Çözeltiyi bir iğne ile çekin ve çözünmemiş ilaç veya kontaminantları uzaklaştırmak için 0,2 µm naylon filtre kullanarak oluşan misel çözeltisini yeni bir 1,5 mL santrifüj tüpüne filtreleyin. Bu aşamada, asetonitril ve su mobil fazı ile izokratik modda, 40 °C'de dengelenmiş bir C8 kolonu kullanarak ters faz HPLC analizi gerçekleştirin. Başlangıç ilaç yüklemesini belirlemek amacıyla, ters faz HPLC ile analiz etmeden önce yeni hazırlanan miselleri asetonitril ile 1:100 oranında seyreltin.Seyreltilmemiş hücrelerimi oda sıcaklığında 48 saat boyunca sakladıktan sonra, ters faz HPLC ile yeniden değerlendirmek ve hücrelerimdeki ilaç stabilitesini 48 saat üzerinden belirlemek için taze seyreltilmiş örnekler hazırlayın. DTX ve DVR piklerini, sırasıyla 1,7 ve 5,7 dakikalık alıkonma süreleri ile 227 ve 279 nanometrelerde izleyin. Verileri, ilaç yüklemesinin ortalaması artı veya eksi standart sapma olarak sunun.Ardından, taze hazırlanmış hücrelerimi ve deiyonize suyu, nihai polimer konsantrasyonu 1,5 mg/mL olacak şekilde 1:20 oranında seyreltin. Çözeltiyi dinamik ışık saçılması ölçümü için bir kaba aktarın. Saçılmayı belirlemek için 173 derecedeki helyum neon lazerin yoğunluğunu ölçün.Verileri, ortalama Z boyutunun ortalaması artı veya eksi standart sapma ve dağılımın polidispersite indeksi veya PDI ile birlikte sunun. DDM'yi daha önce açıklandığı şekilde hazırladıktan sonra, 2,5 mililitre hücreyi, 7.000 g/mol moleküler ağırlık kesim noktasına sahip üç mililitrelik bir diyaliz kasetine yükleyin. Kaseti, aşağıdaki aralıklar boyunca 2,5 litre 10 mM pH 7,4 fosfat tamponuna yerleştirin.Çözeltiden 150 µL çekin ve yerine 150 µL taze tampon ekleyin. Senkronizasyon koşullarını sağlamak için tamponu her üç saatte bir değiştirin. İlaç konsantrasyon eğrisini belirlemek için örnekleri ters faz HPLC kullanarak analiz edin.İlaç salınım verilerini, D-T-X-E-V-R istatistiksel yazılımını kullanarak tek fazlı eksponansiyel ilişkilendirmeli basit bir difüzyon modeline göre uyarlayın; DDM, PEG 2000 blok PLA 1800 veya PEG 2000 blok PLA 2200 içerisinde 48 saat boyunca benzer bir stabilite göstermiştir. Tüm hücrelerim, oda sıcaklığında 48 saatte başlangıç yüklemesinin %97'sini veya daha fazlasını korumuştur. Dinamik ışık saçılım sonuçlarına dayanarak, tüm hücrelerim 0,2'den küçük PDI değerleri ile unimodal bir dağılım sergilemiştir.Verilere dayanarak, tekil misellerden ve DDM'den DTX salınımı 48 saat boyunca yaklaşık %60 idi. Tekil misellerden ve DDM'den EVR salınımı sırasıyla %60 ve %50 idi. Tekil misellerden ve DDM'den %50 ilaç salınımı için gereken süre ve uyum iyiliği verileri burada sunulmuştur.EVR bireyi dışındaki tüm hücrelerim için eğri uydurma iyiliği 0,950'nin üzerindedir; bu durum, birinci derece salınım varsayımının, bireysel hücrelerimden ve DDM'den ilaç salınımını açıklamak için iyi bir yaklaşım olduğu anlamına gelir. Bu tekniklerde uzmanlaşıldıktan sonra, hücrelerimdeki ilaç ve polimer kütüphanesi üzerinde rutin olarak birkaç saat ile bir hafta arasında işlem yapılabilir. Bu prosedür uygulanırken, hücre kültürüne veya hayvan modellerine erişmeden önce hücrelerin tamamen karakterize edilmesinin önemli olduğu unutulmamalıdır. Tedavinin etkinliğinde ilaç taşıyıcı sistemin rolüne ilişkin soruları yanıtlamak amacıyla, lipozomal taşıyıcı sistemler gibi diğer taşıyıcı sistemler de değerlendirilebilir veya karakterize edilebilir.Bu videoyu izledikten sonra, ilaç yüklü hücreleri hastalık durumunda değerlendirmeden önce nasıl hazırlayacağınız ve karakterize edeceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

preparation-characterization-individual-multi-drug-loaded-physically

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bu makale diblock co-polimerler kullanarak polimer bazlı nanopartiküller sentezlemek için nanoprecipitation yöntem açıklanır. Biz diblock sentezi co-polimerler, nanoprecipitation tekniği ve potansiyel uygulamalar ele alınacaktır.

Nanoprecipitation Tekniği Diblock Polimerik Nanopartiküller formülasyonu

Lipofilik doksorubisin ön-ilacın hazırlanması ve tanımlanması için bir protokol, 1,2-distearoil, sn -glisero-3-phosphoethanolamine- N yüklü - [amino (polietilen glikol) -2000] (DSPE-PEG) miseller anlatılmıştır.

Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Metoksi-polietilen glikol (MPEG-b -PPheGE) üzerine fenil glisidil eter (PheGE) anyonik polimerizasyon yaşayan önemli adımlar anlatılmıştır. Elde edilen blok kopolimer miseller (BCMS) fizyolojik olarak uygun koşulları elde edildi altında 4 gün boyunca doksorubisin% 14 (% ağırlık) ve ilacın sürekli bırakılmasını sağlar ile yüklendi.

π-π İstifleme etkileşimlerle Stabilize blok kopolimer miselleri hazırlanması için bir amfifilik kopolimerin anyonik polimerizasyonu

Kanser ilaçlarını tümör bölgelerine yüksek özgüllük ve azaltılmış yan etkilerle ulaştırmak için nanopartiküllere dayalı yeni yöntemler gereklidir. Burada, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon ile kolayca hazırlanabilen ve yükleri serbest bırakmak için indirgeyici bir tümör ortamı altında verimli bir şekilde ayrışabilen disülfür çapraz bağlı miselleri açıklıyoruz.

Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım

Bu çalışmada nanopartikül karakterizasyonu takip nanoliposome hazırlık için ince lipid film yöntemi kullanılarak klasik hidrasyon açıklanır. A 47 kDa-hidrofilik ve küresel protein, tarin, başarıyla istikrarı artırmak için bir strateji olarak kapsüllenir, hızlı açıklık önlemek, ve kontrollü salınımı teşvik. Bu yöntem hidrofobik moleküllerkapsülasyonuna adapte edilebilir.

Biyoaktif Hidrofilik Globüler Proteinlerin Tuzakları Için Nanoliposomes Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Polielektrolit kompleks misellerin, polielektrolitlerin ve hidrofilik yüklü blok kopolimerlerin oluşturduğu çekirdek kabuklu nano partiküllerin tasarımı, montajı ve karakterizasyonu için protokoller ve temsili veriler salıyoruz.

Polielektrolit Kompleksi Misellerinin Montajı ve Karakterizasyonu

Peptid üçüncül amidler (PTAs) gibi peptitler, peptoidler ve N-metillenmiş peptidlere sınırlı değildir peptidomimetik bir süper ailesidir. Burada PTA bir tek tane tek bileşik kütüphanesi sentezlenmesi için iki-ve-havuz ve alt monomer stratejileri hem de birleştiren bir sentetik yöntem açıklanmaktadır.

Split-ve-havuz Sentezi ve Peptit Tersiyer Amid Kütüphanesi Karakterizasyonu

Kasıtlı olarak tasarlanmış metal-organik çerçeve maddelerin sentezi, aktivasyon ve karakterizasyonu bina blokları uyumsuz veya istenmeyen polimorflan termodinamik istenen formlar üzerinde tercih edilir, özellikle de zordur. Biz süperkritik CO 2 kurutma yoluyla kılcal ve aktivasyon çözücü-destekli bağlayıcı değişimi, toz X-ışını kırınımı uygulamaları, bu zorlukların bazılarını ele nasıl açıklar.

Fonksiyonlu Sentezi ve Karakterizasyonu Metal-organik Altyapıları

Bu protokolün amacı, bir kök hücre hedef arama faktörü olan SDF-1α'yı dekstran sülfat-kitosan nanopartiküllerine dahil etmektir.  Elde edilen parçacıklar, boyutları ve zeta potansiyellerinin yanı sıra nanoparçacıklardan SDF-1α'nın içeriği, aktivitesi ve in vitro salım hızı için ölçülür.

SDF-1α-Kitosan-Dekstran Sülfat nano partiküllerin hazırlanması ve Karakterizasyonu

Supramoleküler kısımlarla kaplanmış kolloidlerin sentezi ve karakterizasyonu için bir protokol açıklanmıştır. Bu supramoleküler kolloidler, yüzeye sabitlenmiş moleküller arasındaki hidrojen bağlarının UV ışığı ile aktivasyonu üzerine kendi kendine birleşir.

Supramoleküler Kolloidlerin Sentezi ve Karakterizasyonu

Öğrenin ilaç yüklü misellerin çözücü döküm yöntemiyle hazırlanması ve karakterizasyonunu. Bu yöntem, ilaç taşıma sistemlerinde tekrarlanabilirlik ve stabilite sağlayarak çeşitli hastalık durumlarında etkili tedavi olanakları sunar.

Hazırlanması ve Bireysel Karakterizasyonu ve Multi-ilaç Fiziksel, polimerik misellerin Entrapped Loaded

Daha fazla video keşfet