Hazırlanması ve Bireysel Karakterizasyonu ve Multi-ilaç Fiziksel, polimerik misellerin Entrapped Loaded

Aşağıdaki deneyin genel amacı, ilaç yüklü hücrelerimi ilgilenilen hastalık durumlarında değerlendirmeden önce hazırlama ve karakterize etme sürecini adım adım özetlemektir. Bu, çalışma için tekrarlanabilir my hücreleri oluşturmak için My cells'in çözücü döküm yöntemiyle hazırlanmasıyla elde edilir. İkinci adım olarak, hücre yükleme stabilitem ve boyutum değerlendirilir, bu da hücrelerimin klinik olarak anlamlı konsantrasyonları yükleme ve tutma yeteneğini belirler.

Daha sonra, in vivo stabiliteyi değerlendirmeden önce hücrelerimin uygun in vitro salım özelliklerine sahip olduğundan emin olmak için hücrelerimden ilaç salım hızı belirlenir. Sonuçlar, tekrarlanabilir şekilde üretilen kararlı hücrelerimin, burada sunulan değerlendirme tekniklerine dayalı olarak çeşitli hastalık durumlarında ilaç dağıtımını sürdürmek için bir platform sağlayabileceğini göstermektedir. Bu tekniğin veya denge yüklemesi veya diyaliz yöntemleri gibi mevcut yöntemlerin en büyük avantajı, tekrarlanabilir ilaç yüklemesi ve boyutu ile miyozinlerin çok daha hızlı hazırlanabilmesidir.

Bu tekniğin etkileri, çeşitli hastalık durumlarının tedavisine veya teşhisine kadar uzanır, çünkü nano ölçekli ilaçlar geleneksel formların ötesinde fırsatlar sunar, Genellikle yeni başlayan bireyler, basit olsalar bile bu tekniklerle mücadele edebilirler çünkü yine de serbest bırakma çalışmalarını yaparsınız, patlama etkisini gerçekten değerlendiremezsiniz. Bu prosedürü gösteren, yüksek lisans öğrencim Shaman Duke ve işbirlikçim Deepa olacak, önce hücrelerim veya DDM için bir miligram DTX, bir miligram EVR ve 15 miligram Peg 4, 000 blok PLA 2200'ü tartın. Tartıldıktan sonra, ilaçları ve polimeri 0.5 mililitre aseto nitril içinde çözün, daha sonra çözeltiyi, ilaç polimeri aseto çözeltisini bir döner buharlaştırıcı kullanarak düşük basınç altında buharlaştırarak ince bir ilaç dağıtılmış polimer film oluşturan beş mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişeye aktarın.

Bunu takiben, ilaç polimer filmini 50 santigrat derecede önceden ısıtılmış 0.5 mililitre deiyonize su ile rehidre edin ve fare hücrelerini oluşturmak için şişeyi 50 santigrat derece su banyosunda hafifçe sallayın. Çözeltiyi bir santrifüj tüpüne ekleyin ve üç dakika boyunca 7.200 kez G'de döndürün. Çözeltiyi bir iğne ile çizin ve elde edilen Micella çözeltisini, çözülmemiş herhangi bir ilacı veya kirleticileri çıkarmak için 0,2 mikronluk bir naylon filtre kullanarak yeni bir 1,5 mililitrelik santrifüj tüpüne süzün. Bu noktada, asetil I denemesinin mobil bir fazı ile Sokratik modda 40 santigrat derecede dengelenmiş bir C sekiz sütunu ile ters fazlı HPLC analizi yapın ve taze hazırlanmış mycells'i as göz denemesinde suyla seyreltin. ilk ilaç yüklemesini belirlemek için ters faz HPLC ile analiz edilmeden önce bir ila 100 oran.

Hücrelerimi seyreltilmemiş olarak oda sıcaklığında 48 saat sakladıktan sonra, ters faz HPLC ile yeniden değerlendirmek için taze seyreltilmiş numuneler hazırlayın ve hücrelerimdeki ilaç stabilitesini 48 saat boyunca belirleyin. DTX ve DVR tepe noktalarını sırasıyla 227 ve 279 dakikalık tutma süreleriyle 1.7 ve 5.7 nanometrelerde izleyin. Verileri, ilaç yüklemesinin ortalama artı veya eksi standart sapması olarak sunun.

Daha sonra, taze hazırlanmış hücrelerimi ve deiyonize suyu, mililitre başına 1.5 miligramlık bir nihai polimer konsantrasyonunda bir ila 20 oranında seyreltin. Dinamik ışık saçılımı ölçümü için solüsyonu bir veteriner hekime aktarın. Saçılmayı belirlemek için helyum neon lazerin yoğunluğunu 173 derecede ölçün.

Verileri, dağılımın poli dağılım indeksi veya PDI ile birlikte ortalama Z ortalama boyutu artı veya eksi standart sapma olarak sunun. DDM'yi daha önce tarif edildiği gibi hazırladıktan sonra, 2.5 mililitre my hücrelerini, mol başına 7.000 gramlık bir moleküler ağırlık kesimi ile üç mililitrelik bir diyaliz kasetine yükleyin. Kaseti aşağıdaki aralıklarla 2,5 litre 10 milimolar pH 7,4 fosfat tamponuna yerleştirin.

Çözeltiden 150 mikrolitre çekin ve 150 mikrolitre taze tampon ile değiştirin. Senkronizasyon koşullarını sağlamak için arabelleği her üç saatte bir değiştirin. İlaç konsantrasyon eğrisini belirlemek için ters faz HPLC kullanarak numuneleri analiz edin.

İstatistiksel yazılım D-T-X-E-V-R kullanarak tek fazlı üstel ilişkiye sahip basit bir difüzyon modeline dayalı ilaç salım verilerini uygun hale getirin ve DDM, 48 saat boyunca PEG 2000 blok PLA 1800 veya PEG 2000 blok PLA 2200'de benzer stabilite gösterdi. Tüm hücrelerim, oda sıcaklığında 48 saat sonra ilk yüklemenin %97'sini veya daha fazlasını korudu. Dinamik ışık saçılımı sonuçlarına dayanarak, tüm hücrelerim 0.2'den düşük PDI değerleri ile tek modlu bir dağılım gösterdi.

Verilere dayanarak, tek tek mycells ve DDM'den DTX sürümü 48 saat içinde yaklaşık %60 idi. Bireysel my hücrelerinden ve DDM'den EVR salınımı sırasıyla %60 ve %50 idi. Bireysel my hücrelerinden ve DDM'den %50 ilaç salınımı için gereken süre ve uyum verilerinin iyiliği burada sunulmaktadır.

EVR bireyi dışındaki tüm hücrelerim için eğri uydurma iyiliği, hücrelerim 0.950'nin üzerindedir, bu da birinci dereceden serbest bırakma varsayımının, bireysel hücrelerimden ve DDM'den ilaç salınımını açıklamak için iyi bir yaklaşım olduğu anlamına gelir Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknikler birkaç saat ila hafta içinde hücrelerim gibi bir ilaç ve polimer kütüphanesi üzerinde rutin olarak yapılabilir. Bu prosedüre katılırken, bu prosedürleri izleyerek hücre kültürüne veya hayvan modellerine erişmeden önce hücrelerimi tamamen karakterize etmeyi unutmamak önemlidir. Lipozomal taşıyıcı sistem gibi diğer taşıyıcı sistemler de tedavinin etkinliğinde ilaç taşıyıcı sistemin rolü ile ilgili soruyu cevaplamak için değerlendirilebilir veya karakterize edilebilir.

Bu videoyu izledikten sonra, hücrelerimi hastalıkta değerlendirmeden önce ilaç yükleme işleminin nasıl hazırlanacağını ve karakterize edileceğini iyi anlamış olmalısınız. İlgi durumu.