Name: Üretim ve Darbeli Düşük Frekanslı Ultrason Kantitatif Analiz neoplastik Hücreler Tedavi edilmeyen Sonic Duyarlılık belirleyin ve Tedavi için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: Öğrenin düşük frekanslı ultrason ile insan lösemi hücrelerinde kolesterol tüketim ajanının etkisini artırarak neoplastik hücre hasarını değerlendirmeyi. Bu yöntem onkolojide yeni tedavi stratejileri sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, sistem tasarımımızla ilgili konularda yenilikçi yardımları için Syracuse Üniversitesi Fizik Bölümü atölyesi personeline teşekkür eder.

1. Temizleme Hücre Sonifier Sistemi <ol><li> Boynuz ve dönüştürücü kullanılarak kloroform ve pamuk çubukla arasındaki birliği temizleyin. Bundan başka, metal talaşı, pas ya da oksidasyon oluşumunu kaldırmak için boynuz ve dönüştürücü dişlerine hafif yağ veya mineral yağ uygulanır. </li><li> Yağ ile konuları silerek sonra sendika yağ ve diğer kirleri çıkarmak için kloroform kullanın. </li></ol> 2. Hücre sonifier Reassembling ve Sistem kurma <ol><li> Dönüştürücü korna takın. Düzgün bir şekilde sistemi tork, fincan (Şekil 2A) alt dışarı boynuz çekerek fincan montaj monte dönüştürücü ve boynuz çıkarın. Dönüştürücü (Şekil 2B) üst kısmına yakın üç küçük deliklerden biri içinde bir yuva anahtarı yerleştirin. Daha sonra, boynuz (Şekil 2B) oluklu parçası üzerinde yarım inç karga ayağı ile donatılmış bir tork anahtarı yerleştirin. S sıkıntork metre 54,23 N okuyana kadar saat yönünde tandard. m (Şekil 2C), üretici tarafından tavsiye edilen 16 tork. Sıkılır dönüştürücü takın ve arka fincan içine boynuz ve dik bir pozisyonda bir halka sehpasına korna ve dönüştürücü monte edin. Deneysel darbe dozaj için sistem ayarlamadan önce güç kaynağına dönüştürücü takın. </li><li> Darbeler arasında 1 sn ile sonication 1 sn kullanarak darbe dozaj için sistem ayarlayın. Farklı dozlama modelleri diğer deney koşulları için kullanılabilmektedir. Su hacmi ve korna çapı gibi birçok değişken, potansiyel olarak bu doz değişiklikleri gerektirecektir. Bahsedilen hücre örneği türleri, hacim ve konsantrasyonu kullanılarak, deneysel veriler ve gözlem, bu dozaj rejiminin formülasyonuna yol açmıştır. </li><li> İstediğiniz genlik sistemi ayarlayın. Bu protokolde, sonosensit etkinliğini kılacak tam hücre yıkımını önlemek için% 33 ve% 50 genlik kullanınzor veya imkansız oranla biraz ölçmek için. NOT: genlikleri karşılaştırıldığında bu çalışmada. </li></ol> 3. Sistem Yoğunluk ve Fonksiyon değerlendirilmesi <ol><li> Numune Sonication seviyesi 1.5 cm, en kavitasyon cihazı tutun. Sistem beklenen yoğunlukta çalıştığını değerlendirmek için okuma unutmayın. Mevcut sistem ve su seviyeleri kullanarak, 100-110 W / 33% genliği ve 115-125 W / 50% genliği için cm 2 cm 2 arasında bekliyoruz. Doğrudan / W cm 2 kavitasyon enerjisini temsil göstergeden kavitasyon sayaç okumaları unutmayın. Suyun yüzeyinde bu okumaları alın ve hiçbir kabarcıklar metre prob karşısında mevcut olduğundan emin olun. NOT: Bu işlemler korna üzerindeki erişim için kapağı olmadan yapılabilir olduğunu not etmek önemlidir. Her sonikasyon sonra tekrar gerekli değildir. Aksine, onlar sadece, temizlik yeniden monte ve sistemi kurduktan sonra yapılmalıdır. </li&gt; <li> Tam hidrofon sensörü sokmak için su 12,5 ml ihtiva eden bir numune şişesine hidrofona yerleştirin. Halka standı kullanarak hidrofona Askıya. </li><li> Dalga özelliklerini değerlendirmek için osiloskop girişine hidrofona takın. Anormal dalgalar üreticisinin özelliklerine sistemin frekansını değiştirebilir olarak, net bir sinüs dalgası için osiloskop inceleyin. Kavitasyon metre ve osiloskop Hem hatalı sistem veya uygunsuz montaj göstergesidir anormal dalgalar gösterecek bir frekans okuma, ancak osiloskop verir. </li></ol> Hücreler ve Orta 4. hazırlanması <ol><li> 240 ml Iscove Modifiye Dubecco Ortamı (IMDM) içinde 50 ml cenin sığır serumu ile orta hazırlayın. Sıcaklık hızlı artışlar, serum istikrar bir uzlaşmaya yol açabilir gibi bir sıcak su banyosu içinde fetal sığır serumu çözülme etmeyin. Ul gentamisin 50 mg / ml 240 ve 5 ml penisilin birleştirin/ Standart kültür şişelerinde 100x streptomisin ve orta ekleyin. 4 ° C&#39;de orta saklayın. </li><li> Tohum U937 hücreleri de ~ 4 x 10 hazırlanmış ortam kullanılarak 25 cm 2 şişede 4 hücre / ml olmuştur. Bir TC20 hücre sayacı kullanarak konsantrasyon ve canlılığı için hücreleri değerlendirmek ve bir mikro-santrifüj tüpüne hücreleri ve 15-20 ul tripan mavisi 15-20 ul yerleştirerek ve içeriğini karıştırarak mavi dışlama tripan. Pipette15-20 bir TC20 örnekleme slayt içine bu karışımı ul ve TC20 hücre sayıcı içine slayt koyarak sayıları başlatırlar. </li><li> 37 ° C&#39;de ve% 5 CO2 ile inkübe hücreleri, ve tripan mavi dışlama ve TC20 hücre sayacı kullanılarak hücre canlılığı edin. Hücreler uygun bir yoğunlukta ve / veya uygun bir zaman dilimi için sonosensitizers, aktarım, bir 20 ml&#39;lik bir cam sintilasyon şişesi kültür şişesi hücre 3 mL ile muamele edilmiştir zaman. Bu protokol, 48 saat süre ile U937 hücreleri büyütmek ve daha sonra 0.5, 1 ile tedavi,ya da 30 dakika boyunca 5 mM MeβCD yeterli sonikasyon öncesinde hücrelerin kolesterol tüketmek için. </li></ol> 5. Hücre Sonikasyon <ol><li> Degas deiyonize bir vakum ve Buchner şişesi kullanılarak distile su. Fincan boynuz su aktarın ve boynuz üstünden 15 mm seviyesine doldurun. sonikasyon işlemi birkaç dakikalık bir süre için su Daha fazla gazdan arındırmadan neden olur, ve sistem sonikasyon örnek önceki seferden değilse deney boyunca tutarsızlıklara yol açabilir. Bu nedenle, sonication örnek öncesinde ~ 7 dakika süreyle sistemi çalıştırmak. </li><li> Tutma cihazına hücreleri içeren sintilasyon flakonu takın. Ardından, fincan boynuz üstüne tutma cihaz takmak ve (sürgülü mekanizmasını kullanarak su yüzeyinde) korna üstünden 15 mm&#39;lik bir yüksekliğe ayarlayın. </li><li> Hücreler tipik olarak 1 sn bu darbeler her birinin arasına aralık ile, ultrason, üç 1 sn darbeleri kullanılarak sonike edilmiştir. Bunun içinprotokol, yukarıda belirtilen darbe doz kullanılarak% 33 ve% 50 genlikte sonikasyon hücreleri. </li></ol> 6. Hasar Sonrası sonication için Hücreleri değerlendirilmesi <ol><li> Tripan mavisi ve TC20 hücre sayacı kullanarak hasar ve canlılığı için askıya hücreleri değerlendirin. Buna ek olarak, bir Z2 sayacı kullanarak örnek analiz. (: 1 oranında 200) Z2 sayacı analizi için, 20 ml izotonik serum fizyolojik içine 100 ul hücre süspansiyonu pipetle. Analizden önce, izotonik serum fizyolojik kullanılarak en az iki kez Z2 parçacık analizörü diyafram yıkayın. Sayaç tutucuya Z2 örnek yerleştirin ve sayıları başlatmadan önce diyafram platformu yükseltmek. </li><li> Üreticisi tarafından sağlanan yazılımı kullanarak TC20 ve Z2 sayaçları verileri edinin. Hücre hasarı, canlılığı ve sonikasyon hücresel enkaz oluşturulması için bu verileri analiz edin. </li></ol> 7. XTT Deneyi Hücre Canlılık belirleyin ve Tedavi U937 ve THP1 Hücrelerinin Mitokondriyal Etkinlik için <ol><li> PrioXTT değerlendirmeleri R, aynı koşullar altında U937 ve THP1 hücreleri büyür. Önceden, sonikasyon işlemine 30 dakika boyunca MeβCD aynı konsantrasyon aralığı ile hücrelerin ön işlemden geçirin. Hücreler artık 1-3 bir saniye bakliyat bir dizi kullanarak soniklendi olması dışında daha önce olduğu gibi aynı ultrason parametrelerini kullanın değerlendirmek için XTT kiti için hasar bir dizi geliştirmek için bir saniye aralıklı. Not: Bu adımların birçoğu XTT kiti kılavuzuna doğrudan alınır ve sadece ilgi laboratuvarlarının kolaylık sağlamak için tekrarlanır. </li><li> 10 dakika boyunca 200 x g&#39;de santrifüj ile hücreler toplanır. Büyüme ortamında yeniden süspanse hücre topağı daha önce tarif edildiği. ~ 1 x 10 5 hücre / ml&#39;de yeniden süspanse hücreleri. Daha sonra 100, üç kopya halinde a-düz tabanlı 96-çukurlu mikro-titre plaka içine göz başına ul ve en Tohum U937 hücreleri ayrı bir 96-kuyucuklu plaka kullanılarak THP1 hücreleri için tekrarlayın. Tam büyüme ortamı tek başına boş olarak absorbans okumaları 100 ul içeren 3 kontrol kuyuları ekleyin. Ardından, 2 inoküle plakalar inkübe4 saat. </li><li> XTT reaktifi ve kullanımdan önce 37 ° C &#39;de aktivasyon tepkin maddesinin iki alikotları çözülmesini sağlayın. Girdap tümbölenler hafifçe açık çözümler elde edilinceye kadar. Bir 96-yuvalı mikrotiter plakası deneyi için yeteri kadar aktive XTT çözeltisi oluşturan XTT reaktifi, 5.0 ml aktivasyon reaktifi 0.1 ml ilave edilir. Diğer plaka için işlemi tekrarlayın. </li><li> Her bir oyuğa aktive-XTT çözeltisi 50 ul ekle. 2 saat boyunca hücre kültürü CO 2 inkübatör plaka dönün. Nazikçe eşit pozitif kuyularda turuncu renk dağıtmak için kuluçka dönemini takiben plaka çalkalayın. Bir mikrotitre plaka okuyucusu kullanılarak 450-500 nm dalga boyu arasında bir dalga boyunda hücreleri ihtiva eden test gözlerine ve işlenmemiş Art alan kontrol oyukları absorbansı ölçülür. </li><li> Ya boş kontrol kuyuları kullanarak mikrotiter plaka okuyucu sıfır veya belirli sonuçlarından ortalama değer çıkarın. Bir waveleng tekrar tüm tahlil kuyuların absorbansı ölçülürinci 630-690 nm arasında 450-500 nm ve elde edilen değerlerden değerleri çıkarmak. Not: Bu ikinci absorbans tayini tahlil sonuçlarından non-spesifik okumaları ortadan kaldırılmasına yardımcı olur. XTT deneyi Her iki hücre hattı için dört kez yinelenmiştir. </li></ol>

<ol><li>Trendowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+sonodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">The promise of sonodynamic therapy.</a> Cancer Metastasis Rev. 33 (1), 143-160 (2014).</li>
<li>Semins, M. J., Trock, B. J., Matlaga, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+shock+wave+rate+on+the+outcome+of+shock+wave+lithotripsy%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">The effect of shock wave rate on the outcome of shock wave lithotripsy: A meta-analysis.</a> J Urol. 179 (1), 194-197 (2008).</li>
<li>Pace, K. T., Ghiculete, D., Harju, M., Honey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shock+Wave+Lithotripsy+at+60+or+120+shocks+per+minute%3A+A+randomized%2C+double-blind+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Shock Wave Lithotripsy at 60 or 120 shocks per minute: A randomized, double-blind trial.</a> J Urol. 174 (2), 595-599 (2005).</li>
<li>McClain, P. D., Lange, J. N., Assimos, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+shock+wave+lithotripsy%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Urol%22%5BJournal%5D)">Optimizing shock wave lithotripsy: a comprehensive review.</a> Rev Urol. 15 (2), 49-60 (2013).</li>
<li>Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Healing+sound%3A+the+use+of+ultrasound+in+drug+delivery+and+other+therapeutic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Healing sound: the use of ultrasound in drug delivery and other therapeutic applications.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (3), 255-260 (2005).</li>
<li>Cordeiro, E. R., Cathelineau, X., Thüroff, S., Marberger, M., Crouzet, S., de la Rosette, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-intensity+focused+ultrasound+%28HIFU%29+for+definitive+treatment+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">High-intensity focused ultrasound (HIFU) for definitive treatment of prostate cancer.</a> BJU Int. 110 (9), 1228-1242 (2012).</li>
<li>Li, P. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-intensity+focused+ultrasound+treatment+for+patients+with+unresectable+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatobiliary+Pancreat+Dis+Int%22%5BJournal%5D)">High-intensity focused ultrasound treatment for patients with unresectable pancreatic cancer.</a> Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 11 (6), 655-660 (2012).</li>
<li>Xiaoping, L., Leizhen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+of+high+intensity+focused+ultrasound+%28HIFU%29+for+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Advances of high intensity focused ultrasound (HIFU) for pancreatic cancer.</a> Int J Hyperthermia. 29 (7), 678-682 (2013).</li>
<li>Lukka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-intensity+focused+ultrasound+for+prostate+cancer%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">High-intensity focused ultrasound for prostate cancer: a systematic review.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 23 (2), 117-127 (2011).</li>
<li>So, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIFU+ablation+is+not+a+proven+standard+treatment+for+localized+prostate+cancer%29%5BTitle%5D)+AND+%22Can+Urol+Assoc+J%22%5BJournal%5D)">HIFU ablation is not a proven standard treatment for localized prostate cancer).</a> Can Urol Assoc J. 5 (6), 424-426 (2011).</li>
<li>Crouzet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-gland+ablation+of+localized+prostate+cancer+with+high-intensity+focused+ultrasound%3A+oncologic+outcomes+and+morbidity+in+1002+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol%22%5BJournal%5D)">Whole-gland ablation of localized prostate cancer with high-intensity focused ultrasound: oncologic outcomes and morbidity in 1002 patients.</a> Eur Urol. 65 (5), 907-914 (2014).</li>
<li>Tezel, A., Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+inertial+cavitation+bubbles+with+stratum+corneum+lipid+bilayers+during+low-frequency+sonophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Interactions of inertial cavitation bubbles with stratum corneum lipid bilayers during low-frequency sonophoresis.</a> Biophys J. 85, 3502-3512 (2003).</li>
<li>Tang, H., Wang, C. C., Blankschtein, D., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+the+role+of+cavitation+in+low-frequency+ultrasound-mediated+transdermal+drug+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">An investigation of the role of cavitation in low-frequency ultrasound-mediated transdermal drug transport.</a> Pharm Res. 19 (8), 1160-1169 (2002).</li>
<li>Ueda, H., Mutoh, M., Seki, T., Kobayashi, D., Morimoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acoustic+cavitation+as+an+enhancing+mechanism+of+low-frequency+sonophoresis+for+transdermal+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Acoustic cavitation as an enhancing mechanism of low-frequency sonophoresis for transdermal drug delivery.</a> Biol Pharm Bull. 32 (5), 916-920 (2009).</li>
<li>Trendowski, M., Yu, G., Wong, Y., Aquafondata, C., Christen, T., Fondy, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+real+deal%3A+Using+cytochalasin+B+in+sonodynamic+therapy+to+preferentially+damage+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">The real deal: Using cytochalasin B in sonodynamic therapy to preferentially damage leukemia cells.</a> Anticancer Res. 34 (5), 2195-2202 (2014).</li>
<li>Sonifier Cell Disrupter Model SLPeEDP. , Branson Ultrasonics Corporation. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.emersonindustrial.com/en-US/documentcenter/BransonUltrasonics/Sonifier_Brochure.pdf">http://www.emersonindustrial.com/en-US/documentcenter/BransonUltrasonics/Sonifier_Brochure.pdf</a> (2010).</li>
<li>Lagneaux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+low-energy+treatment%3A+A+novel+approach+to+induce+apoptosis+in+human+leukemic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic low-energy treatment: A novel approach to induce apoptosis in human leukemic cells.</a> Exp Hematol. 30 (11), 1293-1301 (2002).</li>
<li>Krasovitskia, B., Frenkelb, V., Shohama, S., Kimmel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramembrane+cavitation+as+a+unifying+mechanism+for+ultrasound-induced+bioeffects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Intramembrane cavitation as a unifying mechanism for ultrasound-induced bioeffects.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (8), 3258-3263 (2011).</li>
<li>Sundaram, J., Mellein, B. R., Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+and+theoretical+analysis+of+ultrasound-induced+permeabilization+of+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">An experimental and theoretical analysis of ultrasound-induced permeabilization of cell membranes.</a> Biophys J. 84 (5), 3087-3101 (2003).</li>
<li>Mizrahi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+intensity+ultrasound+perturbs+cytoskeleton+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Low intensity ultrasound perturbs cytoskeleton dynamics.</a> Soft Matter. 8 (8), 2438-2443 (2012).</li>
<li>Chen, X., Leow, R. S., Hu, Y., Wan, J. M., Yu, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-site+sonoporation+disrupts+actin+cytoskeleton+organization%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Single-site sonoporation disrupts actin cytoskeleton organization.</a> J R Soc Interface. 11 (95), 20140071(2014).</li>
<li>Trendowski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+enlargement+of+leukemia+cells+using+cytoskeletal-directed+agents+and+cell+cycle+growth+control+parameters+to+induce+sensitivity+to+low+frequency+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Preferential enlargement of leukemia cells using cytoskeletal-directed agents and cell cycle growth control parameters to induce sensitivity to low frequency ultrasound.</a> Cancer Lett. In press, (2015).</li>
<li>Dumontet, C., Sikic, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+action+of+and+resistance+to+antitubulin+agents%3A+Microtubule+dynamics%2C+drug+transport%2C+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of action of and resistance to antitubulin agents: Microtubule dynamics, drug transport, and cell death.</a> J Clin Oncol. 17 (3), 1061-1070 (1999).</li>
<li>Verrills, N. M., Kavallaris, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+targeting+of+tubulin-binding+agents%3A+lessons+from+drug+resistance+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Improving the targeting of tubulin-binding agents: lessons from drug resistance studies.</a> Curr Pharm Des. 11 (13), 1719-1733 (2005).</li>
<li>Trendowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inherent+metastasis+of+leukaemia+and+its+exploitation+by+sonodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oncol+Hematol%22%5BJournal%5D)">The inherent metastasis of leukaemia and its exploitation by sonodynamic therapy.</a> Crit Rev Oncol Hematol. In press, (2014).</li>
<li>Trendowski, M., Wong, V., Wellington, K., Hatfield, S., Fondy, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerated+doses+in+zebrafish+of+cytochalasins+and+jasplakinolide+for+comparison+with+tolerated+doses+in+mice+in+the+evaluation+of+pre-clinical+activity+of+microfilament-directed+agents+in+tumor+model+systems+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Tolerated doses in zebrafish of cytochalasins and jasplakinolide for comparison with tolerated doses in mice in the evaluation of pre-clinical activity of microfilament-directed agents in tumor model systems in vivo.</a> In Vivo. 28 (6), 1021-1031 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Optimum sonuçlar elde etmek için, özel bakım dikkatle örnek yerleştirin ve dönüştürücü-boynuz birliğini temizlemek için önlemler alınmalıdır. boynuz numunenin yerleştirilmesi boynuz mesafeyi değiştirerek Örnek maruz enerjisini değiştirir, bu nedenle akustik odaklar değiştirebilir ve gibi, uyumlu hücre yıkımı elde edilmesi için önemlidir. fincan boynuzu içinde akustik enerji, maksimum kavitasyon konumunu bulmak için kavitasyon ölçer kullanılarak eşlenebilir. Buna ek olarak, osiloskop ile birlikte kavitasyon metre, hücreler maruz ediliyor ses yoğunluğunu yanı sıra dalga homojenliğini belirlemek için hayati öneme sahiptir. Bu nedenle, bu enstrümanlar sistemi ile ilgili sorunları tespit ve giderme sistem kararsızlığına düzeltmek için gerekli olabilir belirlemek yardımcı olmak için kullanılmalıdır. Daha önce belirtildiği gibi, düşük frekans sistemi aday değilse deney boyunca daha gaz çıkışına su hareket edebilirsonication örnek birkaç dakika önce. Bu ilk çalıştırma deneyleri sırasında nispeten gazı alınmış sonikasyon orta ve böylece tutarlı sonuçlar elde etmek için yapılmalıdır. Sensitizasyon gerçek ölçüde değerlendirilmesi zor olurdu, sonosensitizers etkinliğini değerlendirmek Buna ek olarak, hücreler ya da maksimum genlik yakınındaki sonikasyona tabi olmamalıdır. 40 kHz sistemi üzerinde% 33 genlik kullanarak bu önemli hasar üretir, ideal bir ayardır, ancak U937 ve THP1 hücreleri (Şekil 7) karşı MeβCD ile gösterildiği gibi, onların etkinliğini göstermek için sonosensitizers bol bol yer sağlar. Bu veriler aynı zamanda MeβCD doza bağımlı bir şekilde, düşük frekanslı ultrason birden fazla lösemi hatları karşı duyarlı olduğunu teyit etmektedir. Sonikasyon 17-19 aracılığıyla oluşturulan zar içi Kavitasyon kabarcıklarının göstergesi olan 8 MHz 0.75 MHz aralığında daha yüksek frekans ile yapılan bir dizi deney yapılmıştır. Bununla birlikte, questioHala ultrason kaynaklı hücre parçalama 18 tam mekanizması açısından kalır ns. Biz düşük frekanslı ultrason 15, diğer laboratuvarlar 20, gösterdiği bir olguyu kullanarak hücre iskeletinin akışkan hale arasında bir bağ olduğunu göstermiştir ve sonik hassasiyet artmıştır 21. Ayrıca, bu tür sitokalasin B olarak microfilament bozucu maddeler birden fazla lösemi ultrasonik hassasiyetini potansiyalize bulduk aktin polimerizasyonu engellediği fikrini hatları, ancak hHSCs veya 22 lökositleri, özellikle ilgi çekici bir sonosensitizing mekanizması olabilir. Ayrıca belirgin şekilde, akut miyeloid lösemi, kronik miyeloid lösemi, akut lenfoid lösemi dahil olmak üzere, in vitro olarak, farklı lösemi tipleri ultrasonik hassasiyeti artar, vinkristin, tübülin polimerizasyonunu 23, 24 inhibe eden bir mikrotübül bozucu ajan gözlemledik. Buna karşılık, iskelet parçaları stabilize iskelet yönlendirilmiş ajanlar (paklitaksel bird jasplakinolid) hücre parçalama 22 daha düşük oranlarda yansıyan, sonication hücrelerine karşı dirençli hale getirmek için görünür. Birlikte ele alındığında bu veriler, neoplastik hücrelerin sitoskeletal komponentleri akışkanlaştırma hipotezi gerçekten de SDT 25 etkinliğini artırmada önemli bir faktör olduğunu destekler. Bu çalışma aynı zamanda, kolesterol tükenmesi MeβCD ile muamele edilmiş U937 hücreleri belirgin 40 kHz ultrasona duyarlı olarak ayrıca neoplastik hücrelerin ultrasonik duyarlılığını güçlendirme hangi bir yöntem olabilir göstermektedir. Bizim sonikasyon protokolleri, in vitro olarak belirgin antineoplastik aktivite göstermiştir birlikte, mevcut metodoloji, sonication için kullanılan şişelerde uyabileceğini kültürü ve küçük omurgalı modellerinde çalışması ile sınırlıdır. Bu güvenli bir şekilde palslı düşük frekanslı ultrason (20 kHz) kullanılarak sonikasyona tabi tutulmuş olabilir zebrafish göstermiştir ve kemoterapötik maddelere karşı toleransı kantitatif karşılaştırılabilir olduğunutümör taşıyan zebrafish öne murin modellerinde 26 tarafından tolere doz, bu protokollerin in vivo antineoplastik aktiviteyi değerlendirmek için, ön araştırmalarda kullanılabilir. Bununla birlikte, önceden memeli modelleri sonication, kemoterapötik ajanların verilmesini MHz aralığında 1 &#39;de rapor edilmiştir ve bu protokoller muhtemelen düşük frekanslı ultrason gibi kolesterol-tüketici değildir ve sitoskeletal yönelik maddeleri de kapsayacak şekilde genişletilebilir. SDT bu tür potansiyel klinik uygulamaları antineoplastik ajanlar intravenöz (iv), kan önce sonikasyon 25 kaldırılmakta ki ekstrakorporal kan sonikasyon içerebilir. Bu yöntem, insan anatomisi yarattığı potansiyel ses engelleri kaldırır ve solid tümörlerin gelen lösemili patlamaları yanı sıra metastazları zarar için etkili bir yol olabilir. O kolesterol tüketen ve iskelet yönettiği ajanlar olabilir de mümkündürZaten, bu tedavi yönteminin etkinliğini arttırmak amacıyla klinikte incelenmektedir HIFU&#39;nun protokollerinde kullanılabilir. Bu çalışmada tarif edilen yöntemler, bu yardımcı arttırabilmektedir potansiyel sonosensitizers değerini ve ayrıca sistem arıtma değerlendirmek yeteneğine sahiptir. Ancak, güç kaynağı kalitesi, akustik odaklar ve dönüştürücüler arasında bireysel varyasyon dahil olmak üzere bu ultrasonik vasiyetler, kullanırken dikkat edilmesi gereken pek çok değişken bulunmaktadır. Bu nedenle, gelecekteki araştırmalar sonik dalgalar görselleştirilmesi ve sonuçları üzerinde nüfuzlarını anlamak üzerinde durulacak. SDT in vitro hücre lizizine arttırdığı gösterilmiştir ve elde edilen memeli modellerinde in vivo veriler daha fazlası, klinik olarak uygulanabilir olduğunu kanıtlayabilir. Birden çok maddeleri ve ultrason kapsayan kötü huylu hücrelerin diğer potansiyel olarak işletilebilir özelliklerinin yanı sıra, çeşitli kombine yöntemleri inceleyen deneyler laboratuvarda devam etmektedir.

Ultrason insan işitme kapasiteleri üst sınırından daha yüksek bir frekansa (~ 20 kHz) 1 ile herhangi bir salınım ses basınç dalgası değinmektedir. 20-60 kHz aralığında düşük frekanslı ultrason doku hasarı için, nükleik asit çıkarma hücre örneklerinin hazırlanması, emülsiyonlar üretilmesi için bir araç olarak laboratuarda kullanılan ve diğer testler için çeşitli edilmiştir. Düşük frekanslı ultrason yarar çeşitli temizlik malzemeleri, kaynak için endüstri ayara genişletilmiş ve malzeme işleme edilmiştir. Piyasada mevcut ultrason jeneratörleri 100-1,200 W. gelen elektrik gücü miktarı 18-60 kHz arasında değişen frekanslarda gelir ve tam ölçekli Ultrason uzun tanısal görüntüleme için klinik ortamda kullanılmasına rağmen, ancak son zamanlarda bir tedavi yöntemi olarak uygulanmaktadır. Ultrason ≥1 MHz th güvenle idrar taşlarının (böbrek taşları) ve safra taşı kesintiye (taş yeteneğine sahiptirHastaların e safra kesesi veya karaciğer) semptomları 2,3 azaltmak için. Ekstrakorporeal shockwave litotripsi (ESWL) olarak bilinen bu yaklaşım, günümüzde yaygın kliniğe (bir milyondan fazla hastada sadece ABD&#39;de ESWL ile yılda 4 tedavi edilir) uygulanan ve bir modalite sunuyor hangi non-invaziv ile taşı kırmak olduğunu dışarıdan uygulanan, odaklanmış, yüksek yoğunluklu akustik bakliyat 2-4 kullanımı yoluyla asgari teminat hasar. Nedeniyle yüksek yoğunluklu ultrason tarafından oluşturulan benzersiz doğrudan kesme kuvvetlerinin yanı sıra kavitasyon baloncukları ile, bu metodolojiler yüksek yoğunluklu olarak bilinen bir yaklaşım içinde kastrasyon dirençli prostat karsinomu ve pankreas adenokarsinomu tedavisi için kanser terapisinde incelenmiştir odaklanmış ultrason (HIFU ) 5-8. ESWL&#39;nin çok benzeyen bir şekilde, HIFU&#39;nun çok ultrason dalgalarının kullanır ve 60 ° C ya da HIG sıcaklıkları oluşturmak için seçilen bir fokal alanına bunları odaklanıronun hedef dokuda 5 koagülasyon nekrozuna neden olan akustik enerji kullanımı ile. Termal ablasyon diğer yöntemler şu anda (radyofrekans ablasyonu ve mikrodalga ablasyon) mevcut olmasına rağmen, HIFU sadece non-invaziv bir yöntemdir hipertermik 5 olması bu yöntemleri üzerinde ayrı bir avantaj sunuyor. HIFU klinikte karışık sonuçlar elde ve şu anda klinik çalışmalarda 8-11 yalnızca kullanılabilir olmuştur. Bununla birlikte, elde edilen sınırlı başarı, ve klinik öncesi memeli modellerinde elde edilen in vivo veriler, çok umut verici bir kanser terapisi ultrason potansiyelini göstermiştir. HIFU geliştirmek için bir çaba olarak, araştırmacılar sonochemotherapy bir form oluşturmak için uygun bir antineoplastik ajanlar ile birlikte ultrason birleştirmek için çalışılmıştır. Sonodynamic terapi (SDT) in vitro ve hem de etkileyici antineoplastik aktiviteyi göstermiştir umut verici bir roman tedavi yöntemidir <em&gt; In vivo çalışmalar 1. Bu zarar verir, tercihen, bu hücrelerin normal histoloji 1,5 arasındaki boyutu farkı göre malign hücreler bu ultrason gösterilmiştir. SDT neoplastik hücrelere karşı ultrason tarafından uygulanan tercihli hasarının derecesini arttırmak için sonosensitizers olarak bilinen özel maddeler içermektedir. SDT terapötik uygulamalar önceden incelenmiş olsa da, kullanılan ultrasonik sistemler tipik olarak daha yüksek frekanslı ultrason (≥1 MHz) istihdam ve düşük kHz frekans ultrason etkileri henüz tam olarak keşfedilmeyi vardır. Ultrason alt frekansları nedeniyle fizikokimyasal hasar 12-14 uyaran mikrokabarcıkların hızlı çökmesi, genellikle atalet kavitasyon, hücrelerin imha sonuçlanan bir fenomen üretmek daha yetkin. MHz ve düşük kHz ultrason arasındaki atalet kavitasyon nesil bu fark daha düşük dalga frekansları Kabarcığa olanak gerçeği atfedilmiştirAşağıdaki sıkıştırma yarım döngüsü 12 sırasında dolayısıyla daha şiddetli çökme üreten, genişleme yarım çevriminde rektifiye difüzyonla büyümek için daha fazla zaman s. Biz daha önce U937 insan monositik lösemi hücreleri düşük frekanslı ultrason (23.5 kHz) duyarlı olduğunu göstermiştir ve bu duyarlılık belirgin hücre iskeleti 15 karıştırmayı antineoplastik ajanlar uygulaması ile arttırılabilir. Ayrıca, biz hücreler tercihen yüksek ultrasonik hassasiyeti gösteren büyük hücreler, boyutuna göre hasarlı olduğunu göstermiştir. Buna ek olarak, benzer hücre boyutlarına de normal insan hematopoietik kök hücreler (hHSCs) ile lökositler geçici olarak düşük frekanslı ultrason tercihan normal doku varlığında malign hücrelere zarar için kullanılabilir olduğunu düşündürmektedir, bunların neoplastik meslektaşları 15 daha sonikasyon çok daha dirençlidir. Ayrıca benzersiz pervane incelemek içinPotansiyel terapötik kullanım için düşük frekanslı ultrason erties, bizim şimdiki sonication sistemlerinden biri etkinliğini ve güvenilirliğini artırmak için temizlik ve istikrar prosedürlerini geliştirdik, bir 20 mm boynuz ile donatılmış Branson Model SLPe 150 W, 40 kHz Hücre Parçalayıcı, hazır 7.62 cm&#39;lik kabına. Ayrıca, hidrofon bir kavitasyon metre ve osiloskop kullanarak 40 kHz aralığında doğru örnek kavitasyon enerjileri yanı sıra tutarlı dalga formları ve genlik belirlemek mümkün olmuştur. Rafine ve protokolleri sistematize ederek, bize nicelik farklı histogenetik soy neoplastik ve normal hücrelerin sonik hassasiyetlerini karşılaştırmak için izin, bizim deneysel sonikasyon tutarlılık kurmak mümkün olmuştur. 40 kHz sistemi için protokol ilgilenen laboratuarlar için sipariş karşılaştırılabilir deneyler yeteneğine sahip olması ve ortaya çıkardığı antineoplastik etkileri bizim bulgularının değerlendirilmesi için geniş detaylı sunulmuşturDüşük frekanslı ultrason. (Şekil 1 MeβCD), bir kolesterol tüketen maddesi, U937 ultrasonik duyarlılık ve THP1 insan monositik lösemi hücreleri artan ek olarak, metil-β-siklodekstrin doza bağlı etkileri incelenmiştir.

<table><tbody><tr><td>Iscove'un Modifiye Dulbecco'nun NaHCO3 ve 25mM Hepes ile Ortamı&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>12440079</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterisin B Solüsyonu&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2942&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin 100x Çözeltisi&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12105</td><td></td></tr><tr><td>Branson SLPe 40kHz 3 "(25mm) Cuphorn ile Hücre Bozucu</td><td>Branson Ultrasonik</td><td>101-063-726</td><td>sonikasyon cihazı</td></tr><tr><td>Tempolu Isı SDC Tezgah Üstü Dijital Sıcaklık Kontrol Cihazı, 1000 ml Beher Isıtıcı ile Sıcaklık</td><td>kontrolü için kullanılan</td> Canlı <td>Isı</td><td>SDCJF1A-GBH1000-1</td> ısıtıcı</tr><tr><td>Beckman-Coulter Z2 AccuComp özellikli Hücre Boyutlandırıcı&reg; Yazılım</td><td>Beckman-Coulter</td><td>6605700</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad TC20 Otomatik Hücre Sayacı</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0102</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin 50 mg / ml</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1397 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi Çözelti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50 ml ve 25 ml Bacalı Kültür Şişeleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>353082</td><td></td></tr><tr><td>Lonza L-Glutamin 200 mM %0.85 NaCl</td><td>Lonza</td><td>17-605C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Seal-Rite 1.5 ml Mikrosantrifüj Tüpleri</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5510</td><td></td></tr><tr><td>Beckman-Coulter Accuvette ST 25 ml Şişeler ve kapaklar</td><td>Beckman-Coulter</td><td>&nbsp; A35473</td><td></td></tr><tr><td>AccuJet Pro Otomatik Pipet&nbsp;</td><td>BrandTech Scientific</td><td>26330</td><td></td></tr><tr><td>USA Scientific 10 ml Tek Kullanımlık Serolojik Pipetler</td><td>USA Scientific</td><td>1071-0810</td><td></td></tr><tr><td>Tip One 100 &#956; l ve 1.000 &#956; l Filtre</td><td>İpuçları ABD Bilimsel</td><td>1120-1840, 1126-7810</td><td></td></tr><tr><td>100 & # 956; l Mikropipet ve nbsp;</td><td>Wheaton</td><td>851164</td><td></td></tr><tr><td>1.000 &#956; l Mikropipet</td><td>Wheaton</td><td>851168</td><td></td></tr><tr><td>BioRad Çift Odacıklı Sayma Slaytları</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0015</td><td></td></tr><tr><td>Forma Scientific Çift odacıklı su ceketli İnkübatör</td><td>Forma Scientific</td><td>3131</td><td></td></tr><tr><td>Tektronix & nbsp; DPO 2002B Dijital Fosfor Osiloskopu</td><td>Tektronix</td><td>DPO2002B</td><td>ultrasonik dalga biçimini ölçmek için kullanılır</td></tr><tr><td>PPB MegaSonics Model PB-500 Ultrasonik Enerji Ölçer</td><td>PPB Megasonics</td><td>PB-500&nbsp;</td><td>W/cm2</td></tr><tr><td>Teledyne RESON TC4013-1 Hidrofon</td><td>Teledyne</td><td>TC4013-1&nbsp;</td><td>osiloskopa bağlanır&nbsp;</td></tr><tr><td>Wheaton 250 ml Şişeler</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z364827</td><td></td></tr><tr><td>20 ml Cam Sintilasyon Şişeleri&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z190527</td><td></td></tr><tr><td>Beckman-Coulter İzotonik Salin Solüsyonu&nbsp;</td><td>Z2 sayacı için Beckman-Coulter</td><td>N / A</td><td>seyreltici</td></tr><tr><td>Kloroform% 99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 200 Kanıt Susuz & nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459836</td><td></td></tr><tr><td>Mineral Oil</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>XTT Hücre Proliferasyon Test Kiti</td><td>ATCC</td><td>30-1011K</td><td></td></tr><tr><td>96 Kuyulu Mikroplaka Okuyucu</td><td>Cole-Palmer</td><td>&nbsp; EW-13055-54</td><td></td></tr><tr><td>U937 İnsan Monositik Lösemi Hücreleri</td><td>ATCC</td><td>CRL ve utangaç; 1593.2</td><td></td></tr><tr><td>THP1 İnsan Monositik Lösemi Hücreleri</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr></tbody></table>

Üretim ve darbeli düşük frekanslı ultrason kantitatif analiz neoplastik hücreler tedavi edilmeyen sonic duyarlılık belirleyin ve tedavi için

Generation and Quantitative Analysis of Pulsed Low Frequency Ultrasound to Determine the Sonic Sensitivity of Untreated and Treated Neoplastic Cells

20 ila 60 kHz aralığında düşük frekanslı ultrason, neoplastik hücrelerde seçici hücre lizisi ve ölümünü indüklemek için yeni bir fiziksel modalitedir. Ek olarak, bu yöntem, ultrasonun neoplastik hücrelere karşı uyguladığı tercihli hasarın derecesini artırmak için sonosensitizörler olarak bilinen özel ajanlarla kombinasyon halinde kullanılabilir, bu da sonodinamik tedavi (SDT) olarak adlandırılan bir yaklaşımdır. Klinik öncesi bir in vitro ortamda düşük frekanslı ultrason üretme ve uygulama metodolojisi, sonikasyonun neoplastik ve normal hücreler üzerindeki etkilerini incelemek ve karşılaştırmak için tekrarlanabilir hücre yıkımının elde edilebileceğini göstermek için sunulmuştur. Bu, neoplastik hücreleri preklinik terapötik değerlendirme için gerekli bir tutarlılık seviyesinde güvenilir bir şekilde sonikasyon yapmak için bir araç sunar. Ek olarak, kolesterol tüketen ve hücre iskeletine yönelik ajanların neoplastik hücrelerde ultrasonik duyarlılığı güçlendirme üzerindeki etkileri, sonokemoterapötik yaklaşımlara elverişli etki mekanizmalarını detaylandırmak için tartışılmıştır.

Sistem kararlılığı tekrarlanabilir ve güvenilir sonuçlar elde önemlidir. 54,23 N. m uygun tork şartname Şekil 3B örnek şişesine içindeki ölçümler göstermektedir. dalga tutarlılık, bir osiloskop ve hidrofon (Şekil 3A) kullanılarak değerlendirilen ile dönüştürücü ve Sonotrode 2 uygun kaplin elde ve Şekil 3C fincan boynuz içinde istikrarı değerlendirir. Beklendiği gibi bazı enerji cam tarafından emilerek nedeniyle, genlik biraz düşürüldü. Bununla birlikte, dalga biçimi bozulmuş ya da örnek sonik enerji güvenilir bir doğum için gerekli olan her iki panel B veya C, çarpıtılan değildi. Net bir tekil sinüs dalgası olarak görünmüyor bir dalga hatalı transdüser veya yanlış kurulum gösterir. Bu, çoklu olarak anormal dalgaları göstermektedir, Şekil 3B, bir sinüs dalgası net olmaması ifade edilir, ve bir frekans bir okumat düzgün işleyen bir sistem ile beklenen. Kavitasyon enerji üretilir (Şekil 4) ölçmek için kullanılan kavitasyon ölçer 100-110 W /% 33 genliğinde cm2 ve 125-130 W /% 50 genliğinde cm2 olarak ses yoğunluğu bulunamadı. 40 kHz sistemi uygun şekilde ayarlanır ve bütünüyle (Şekil 5) bir araya getirildikten sonra, her iki TC20 ve Z2, sayaçlar (Şekil 6) tarafından tespit edildiği üzere, güvenilir bir hücre harabiyeti, hali hazırda, elde edildi. Beklendiği gibi, daha geniş bir hücre hasarı yerine% 33 genliğinde daha% 50 sonike hücre popülasyonlarında gözlenmiştir. Bununla birlikte,% 33 genlik o fark hasar üretir, uygulanan ajanların potansiyel sonik hassaslaştırıcı etkilerini tespit etmek için bir başlangıç ​​noktası olarak yararlıdır, ancak ajanlar ultrasonik hassasiyet onların potansiyelini değerlendirmek için uygulandığında daha fazla hasar tespit için yer bırakır. Bu durum, Şekil 7A, gösterilmektedir buradaU937 hücreleri, ultrasonik duyarlılığını güçlendirmek ilgili MeβCD doza bağlı etkileri sunulmaktadır. Olmayan sonike MeβCD ile muamele edilmiş hücreler olmayan sonike, muamele edilmemiş hücrelere canlılığı çok benzer olmasına rağmen, canlılık belirgin uygulandı 1 sn 40 kHz ultrason üç darbe takiben düşmüştür. Buna ek olarak, sonikasyon sonrasında canlılığı azalma, 5 mM MeβCD en 1 mM ardından hücre sayısında bir düşüş, ve daha sonra 0.5 mM MeβCD üretilen, doza bağımlı olduğu görülmektedir. Hücre canlılığı ve mitokondriyal aktivitesi üzerinde benzer etkilere XTT kiti (Şekil 7B) ile değerlendirildiği gibi, önceden, sonikasyon işlemine MeβCD değişen konsantrasyonları ile muamele edildi, her iki U937 ve THP1 hücrelerinde gözlenmiştir. THP1 hücreleri U937 hücrelerden daha dirençli biraz daha sonic gibi görünseler de, her ikisi de insan lösemi hatları doza bağımlı bir şekilde zarar görür. MeβCD yüksek konsantrasyonlarda ve ultrason eşya fazla bakliyathücre canlılığı ve mitokondriyal aktiviteyi azaltmak için karşılık gelen, U937 ve THP1 hücreleri için çözünür, parlak turuncu türevine XTT düşük azalma uced. <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/53060/53060fig1.jpg" /> Metil β-siklodekstrin Şekil 1. moleküler yapısı. (A) Metil-β-siklodekstrin (MeβCD) tam yapısı. (B) MeβCD H ya da CH3, ya bir R grubu yedi tekrar birimlerinin bir polimeridir. Moleküler Formülü: C 56 H 98 O 35. Moleküler ağırlık = 1331,36. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53060/53060fig2.jpg" /> Şekil 2. Düzgün 40 kHz ultrason sistemi torqueing. (A) korna ve dönüştürücü fincan pri kaldırılırya torqueing için. (B) kendi konumlarında yuva anahtarı ve tork anahtarı yerleştirin. (C) fincan korna ve dönüştürücü reattaching önce saat yönünde tork 54,23 N. M uygulayın. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53060/53060fig3.jpg" /> Ultrasonik sistemin dalga biçimini karakterize bir osiloskop 3. Kullanımı Şekil. (A) &#39;hidrofon olan bir osiloskop genlik ve dalga biçimi tutarlılığını değerlendirmek için de kullanılabilir. (B) bir kayıt 1.5 cm doğrudan boynuz üzerine fincan çekilmiş ve% 33 genlik ayarlayın. (C) &#39;de resimde dalga hidrofon 20 ml&#39;lik bir cam sintilasyon şişesi içine yerleştirilmiş olduğunda elde edilen bir okuma arasındadır. Şişe boynuz üzerinde 1.5 cm yerleştirilmiş ve yeniden% 33 genlik ayarlanır. (D) Bir osiloskop ekran oArızalı sistem veya boynuz dönüştürücü birliğinin uygunsuz bağlama ile beklendiği gibi anormal frekansları ile fa sistemi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53060/53060fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53060/53060fig4.jpg" /> Bir kavitasyon metre Şekil 4. ultrason sisteminin ses yoğunluğu karakterize etmek için. Burada görülen kavitasyon ölçer W / cm2 kavitasyon enerjisini temsil etmek için kullanılır. Bu örneğe göre olan enerji tutarlılığını değerlendirmek için çok önemli bir araçtır. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/53060/53060fig5.jpg" /> 40 kHz ultrason sisteminin Şekil 5. Ana bileşenler. Ultrasonik sistem fincan boynuz ile tam gösterilmiştir ( <strong&gt; A), ısıtma tertibatı (B), dönüştürücü (C) ve örnek konumlandırma mekanizması (D). Bu tasarım boynuz (F) Yukarıdaki örnek (E) kolay konumlandırma için izin verir. <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/53060/53060fig6.jpg" /> TC20 ve Z2 sayaçları kullanarak U937 hücrelerinde ultrasonik lizis üzerinde genliği farklı düzeylerde Şekil 6. Etkileri. Hücreler her arasında 1 sn aralıklı, ultrason, üç 1 sn darbeleri kullanarak% 33 genliği 40 kHz hücre Dismemrator (100-110 W / cm 2) veya% 50 genlikli (125-130 W / cm2) ile selenlenmiştir Bu darbelerin. (A) Z2 sayacı yazılımı bir ekran U937 hücreleri üzerinde sonication etkisini göstermektedir. TC20 sayacı (B) veri sonucu tekrar üretilebilirliğini gösteren bir grafik derlendis. Bu veriler, toplam canlı hücre sayımları yanı sıra tripan mavisi değerlendirilen hücre canlılığı bulunmaktadır. Barlar 4 bağımsız hücre popülasyonları için ortalama (SEM) standart hata yansıtmaktadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53060/53060fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/53060/53060fig7.jpg" /> U937 ve THP1 hücrelerinin ultrasonik duyarlılığını güçlendirmek ilgili metil β-siklodekstrin Şekil 7. etkileri. (A) U937 hücreleri önce 40 kHz ultrason (105 W / cm sonike edilmeden 30 dakika boyunca MeβCD konsantrasyonunun değiştirilmesi ile tedavi edilen 2 ) üç 1 sn darbeleri kullanarak birbirinden 1 sn aralıklı. Hücre popülasyonları ≥12 um ve ≥17 mikron gruba ayrıldı. (B), U937 ve THP1 hücreleri daha değişen konsantrasyonlarda ile muamele edildi30 dakika boyunca önceden 1 sn ultrason 1-3 darbeleri kullanarak 40 kHz sistemi ile sonicated olmanın MeβCD rasyonlarına 1 sn aralıklı. Hücre canlılığı ve mitokondriyal aktivite XTT kiti ile değerlendirildi. 100 ul hücre, bir düz tabanlı 96 oyuklu bir mikrotiter plakası içine, göz başına tohumlanmıştır. Plaka önceden XTT çözeltisi ilave edilmeden 24 saat süreyle inkübe edildi. Dalga boyu okundu önce Hücreler daha sonra, ilave bir 2 saat süre ile inkübe edildi. Barlar 4 bağımsız hücre popülasyonları için SEM yansıtmaktadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53060/53060fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

İnsan lösemi hücrelerinin seçici hasarı, lösemik ve normal hematopoetik hücrelerin hem kemoterapötik ön tedavisi ile hem de kemoterapötik ön tedavi olmadan düşük frekanslı ultrason uygulanmasının yeni bir yaklaşımıyla sağlanabilir.

Üretim ve Darbeli Düşük Frekanslı Ultrason Kantitatif Analiz neoplastik Hücreler Tedavi edilmeyen Sonic Duyarlılık belirleyin ve Tedavi için

Low frequency ultrasound in the 20 to 60 kHz range is a novel physical modality by which to induce selective cell lysis and death in neoplastic cells. In ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, kolesterol azaltıcı bir ajanın varlığında veya yokluğunda, düşük frekanslı darbeli ultrasonun insan lösemi hücresi popülasyonlarına zarar verme etkinliğini ve tekrarlanabilirliğini değerlendirmektir. Bu, sonikasyon sisteminin temizlenmesi ve stabilitesinin değerlendirilmesiyle sağlanır. Ardından, insan lösemi hücrelerine metil beta siklodekstrin varlığında ve yokluğunda sonikasyon uygulanır.Ardından, hücre canlılığını ve sonikasyon ile kolesterol tükenmesinin etkilerini değerlendirmek için otomatik hücre sayıcılar kullanılır. Lösemi hücrelerinin mitokondriyal aktivitesi XTT testi ile değerlendirilir. Sonuç olarak veriler, düşük frekanslı ultrasonun malign hücrelere zarar vermek için kullanılabileceğini ve bunun kolesterol tükenmesine neden olan bir ajan kullanımıyla güçlendirildiğini göstermektedir.Laboratuvarımız, ultrasonun anti-neoplastik etkilerini, sonik etkileri artırmak için kullanılan özel ajanlarla birleştiren yeni bir terapötik modalite olan sonar namp terapisi ile ilgilenmektedir. Protokolümüz, daha fazla preklinik araştırmayı gerektiren potansiyel ano kemoterapötik yaklaşımları belirlemek amacıyla hem neoplastik hem de normal hücrelerin sonik hassasiyetini değerlendirmektedir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, cihazların nasıl optimize edileceğini öğrenmek zaman alabildiğinden, so sisteminin stabilitesini değerlendirmek için kullanılan ekipmanlarla ilgili zorluklar yaşayabilirler.Temizlik ve stabilizasyon prosedürleri, sonikasyon sistemini değerlendirmek için zorunlu olduğundan ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için kritik önem taşıdığından, bu yöntemin görsel gösterimi büyük önem taşımaktadır. Bir deneye başlamadan önce, horn ile konvertör arasındaki bağlantı noktasını temizlemek için kloroform ve pamuklu çubuk kullanın. Ardından, horn ve konvertörün dişlerine hafif bir yağ uygulayın.Kalan metal talaşlarını, pası veya oksidasyon birikintilerini tamamen temizlemek için, ardından birleşim yerindeki yağı ve diğer tüm kontaminantları daha fazla kloroform ile temizleyin ve hornu dönüştürücüye yeniden takın. Sistemi doğru şekilde torklamak için, hornu kabın altından dışarı çekin ve dönüştürücünün üst kısmına yakın üç küçük delikten birinin içine bir kanal anahtarı yerleştirin. Şimdi, yarım inçlik ayaklı anahtar takılı bir tork anahtarını hornun kanallı kısmına konumlandırın ve torkmetre 39.99 foot pounds değerini gösterene kadar standart saat yönünde sıkın.Sıkma işlemi tamamlandıktan sonra, dönüştürücü ve boynuzu tekrar kaba yerleştirin ve parçaları dik konumda bir halka standa monte edin, dönüştürücüyü güç kaynağına yeniden bağlayın ve ardından sistemi darbeli dozajlama için ayarlayın. Nabızlar arasında bir saniye olacak şekilde bir saniyelik sonikasyon kullanarak, sauna Fire sisteminin yoğunluğunu ve işlevini değerlendirmek için sistemi istenen genliklere ayarlayın. Kavitasyon ölçerini 1,5 santimetre uzaklıkta tutarak başlayın ve ölçer probunun yüzeyinde hiç kabarcık bulunmadığından emin olun.Sistemin uygun yoğunlukta çalıştığını onaylamak için kavitasyon ölçer ekranını okuyun. Ardından, hidrofon sensörünü 12,5 millilitersu içeren bir örnek tüpüne tamamen daldırın ve hidrofonu askıya almak için halka standını kullanın. Dalga formu özelliklerinin stabilitesini onaylamak için hidrofonu osiloskop girişine bağlayın ve net bir sinüs dalgasının varlığını doğrulayın; çünkü anormal dalgalar sistemin frekansını değiştirebilir.Hücreleri sonikasyona hazırlamak için öncelikle, taze hazırlanmış besiyeri kullanarak 25 cm²'lik bir flaska mililitre başına 4 x 10⁴ hücre olacak şekilde ekim yapın. Trypan mavi dışlama yöntemiyle canlı hücre sayısını belirledikten sonra, kültür istenen konsantrasasyona ulaşana kadar 37 °C ve %5 CO₂ ortamında inkübe edin. Hücreler sonikasyon için hazır olduğunda, belirli bir hacimdeki deiyonize distile suyu gazdan arındırmak için vakum ve Büchner flaskı kullanın.Ardından, kap boynuzunu üst kısmın 15 milimetre üzerine kadar doldurmak için suyu kullanın. Sistemi Degas suyu ile yaklaşık yedi dakika boyunca çalıştırın. Daha sonra, üç mililitre hücreyi 20 mililitrelik cam bir sintilasyon şişesine aktarın ve şişeyi tutucuya sabitleyin.Ardından, tutucu düzeneği kap boynuzunun üst kısmına takın ve sürgülü mekanizmayı kullanarak tutucu düzeneği, su yüzeyindeki boynuzun üst kısmından 15 milimetre yüksekliğe ayarlayın. Şimdi hücreleri, %33 ve %50 genlikte, her bir nabız arasında bir saniyelik boşluk olacak şekilde üç adet bir saniyelik ultrason nabzı kullanarak sonike edin ve sonikasyon sonrası hücre canlılığını tripan mavisi dışlama yöntemiyle değerlendirin. Hücre hasarını değerlendirmek için, bir Z2 partikül analizörünün açıklığını izotonik salin ile en az iki kez yıkayın.Ardından, sonike edilmiş hücrelerden 100 µL'yi 20 mL izotonik saline içerisine ekleyin ve hücre örneğini sayıcı tutucuya aktarın. Daha sonra platformu açıklığa kadar kaldırın ve hücre hasarını, canlılığını ve döküntüleri üretici talimatlarına göre analiz edin. Sonike edilmiş hücrelerin canlılığını XTT testi ile değerlendirmek için, hücreleri bir ile üç arasında bir aralık kullanarak sonike edin.XTT kitinin değerlendirebileceği bir hasar yelpazesi oluşturmak için bir saniye aralıklı bir saniyelik darbeler uygulayın, ardından hücreleri santrifüjleyin ve peletleri taze hazırlanmış büyüme ortamında mililitre başına 1 × 10⁵ hücre olacak şekilde yeniden süspande edin. Daha sonra, her bir kuyuya 100 µL hücre gelecek şekilde düz tabanlı 96 kuyucuklu mikrotitrasyon plakalarına ekim yapın; boş absorbans okumaları için sadece 100 µL tam büyüme ortamı içeren üç kontrol kuyucuğu dahil olmak üzere üç tekrarlı (triplikkat) olarak hazırlayın.Hücreleri analiz sabahı 24 saat boyunca inkübe edin; 37 °C'ye ısıtılmış XTT ve aktivasyon reaktiflerini, çözeltiler berraklaşana kadar hafifçe çalkalayarak karıştırın. Ardından, 5 mL'lik bir XTT reaktifi miktarına 0,1 mL aktivasyon reaktifi ekleyin. Sonrasında, aktive edilmiş XTT çözeltisinden 50 µL'yi U 9 37 ve THP 1 ekilmiş plakaların her bir kuyucuğuna ekleyin ve hücreleri hücre kültürü inkübatörüne geri yerleştirin.İki saat sonra, pozitif kuyucuklardaki turuncu boyayı eşit şekilde dağıtmak için plakaları hafifçe sallayın ve bir mikroplaka okuyucu ile 450 ve 500 nanometre arasında absorbansı ölçün. Son olarak, tüm assay kuyucuklarının absorbansını 630 ve 690 nanometre arasında tekrar ölçün. Beklendiği üzere, %50 genlikte sonike edilen hücre popülasyonunda, %33 genliğe kıyasla daha kapsamlı hücre hasarı gözlemlenir.Ancak %33 genlik, ajanlar uygulandığında daha fazla hasarın tespit edilmesine olanak tanır. Kolesterol tüketen ajan metil beta siklodekstrinin doz bağımlı etkilerinin, U 9 37 hücrelerinin ultrasonik hassasiyetini artırma üzerindeki etkilerinin değerlendirildiği bu deneyde olduğu gibi.Metil beta siklodekstrin ile işlem görmemiş hücrelerin canlılığı, işlem görmemiş kontrol hücreleriyle benzer olsa da, birer saniyelik üç puls halinde 40 kHz ultrason uygulandıktan sonra canlılık belirgin şekilde düşmüştür. Ayrıca, sonikasyondan sonraki canlılık azalmasının doz bağımlı olduğu görülmektedir; XTT analizi ile değerlendirildiğinde, kolesterol tüketen ajanın 5 mM konsantrasyonu hücre sayısında en büyük düşüşü sağlamış, bunu metil beta siklodekstrinin 1 mM ve 0,5 mM'lık işlemleri izlemiştir. THP-1 hücreleri U937 hücrelerine göre sonikasyona karşı biraz daha dirençli görünse de, her iki insan lösemi hücre hattı da doz bağımlı bir şekilde zarar görmüştür.Ek olarak, yüksek konsantrasyonlardaki metil beta siklodekstrinin daha fazla sayıda ultrason darbesiyle birleştirilmesi, hem U 9 37 hem de THP one hücreleri için XTT'nin çözünür, parlak turuncu renkli bir türeve indirgenmesini en düşük seviyeye indirmiş olup, bu durum her iki hücre hattı için daha düşük hücre canlılığı ve mitokondriyal aktiviteye karşılık gelmektedir. Bu prosedürün ardından, hücre iskeletini hedefleyen veya reaktif oksijen türleri üreten ajanlar gibi diğer sonik duyarlaştırıcı ajanların, sonik duyarlılığı artırma potansiyelleri değerlendirilebilir ve böylece preklinik etkinliği araştırılabilecek yeni terapötik yaklaşımlar geliştirilebilir. Bu prosedür uygulanırken, TC ve Z iki sayaçlarından elde edilen SON verilerinin uygun şekilde düzenlenmesi önemlidir; çünkü bu veriler, kaybolabilecek tedavi protokolü etkinliğine dair ayrıntılı bilgiler sağlamaktadır.Herhangi bir lojistik şema kullanılmadığında, bu videoyu izledikten sonra, potansiyel terapötik faydalarını değerlendirmek amacıyla preklinik in vitro modellerde düşük frekanslı ultrasonun potansiyel ano sensitizerlar ile birlikte nasıl kullanılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

generation-quantitative-analysis-pulsed-low-frequency-ultrasound-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Mikro kabarcık Insonation azaltılmış zaman-ortalamalı akustik güçler tümör ablasyonu için umut vaat eden bir strateji yanı sıra, hedeflenen terapötik teslimat için. Bu çalışmanın amacı non-termal mikrovasküler ablasyon subkutan C6 gliomlar ve yükü teslim maksimize etmek için düşük görev döngüsü ultrason darbeli stratejileri ve nanocarriers geliştirmek.

Kontrast Ultrason Gliomlar, Tedavi Hedeflenen İlaç-Rulman Nanopartikül Teslimat ve Mikrovasküler Ablasyon ile Fare

Bu protokol, fokal adezyon oluşumu ve transmembran reseptör matrisi, syndecan-4 nişan taklit ederek Rac1 aktivasyon sürücüler düşük yoğunlukta kesikli ultrason ile kültüre fibroblast stimülasyonu açıklar. Bu yaklaşım, böylece tedavinin arıtma için fırsatlar sağlayarak, hücresel düzeyde başarılı bir klinik tekniğin soruşturma sağlar.

Düşük yoğunluklu Ultrason Kullanımı Yapışma bağımlı Sinyalleri indüksiyonu

Bu video, düşük frekanslı ultrason kullanarak insan lösemi hücrelerinin seçici hasarını açıklamaktadır. Düşük frekanslı ultrasonun klinik öncesi in vitro bir durumda bu uygulaması, sonikasyonun lösemi ve normal hücreler üzerindeki etkilerini incelemek ve karşılaştırmak için hücre yıkımının elde edilebileceğini göstermektedir.

Düşük Frekanslı Ultrason Uygulaması: Sonikasyonun İnsan Lösemi Hücreleri Üzerindeki Etkisini Belirlemek İçin Bir Yöntem

Bu makale, hücre canlılığını ve mitokondriyal aktiviteyi değerlendirmek için kolorimetrik bir test olan XTT testi protokolünü açıklar.

XTT Testi: Hücre Canlılığını ve Mitokondriyal Aktiviteyi Değerlendirmek için Kolorimetrik Bir Test

Bu protokol, görüntüleme fare servikal lenf düğümleri için yüksek frekanslı ultrason (HFUS) uygulanmasını tarif etmektedir. Bu teknik, görselleştirme ve servikal lenf nodu morfolojisi, hacim ve kan akışının ölçümü optimize eder. Servikal lenf nodları ve histolojik değerlendirme için lenf dokusunun işleme görüntü kılavuzluğunda biyopsi de gösterilmiştir.

Fare Servikal lenf nodu Yüksek frekanslı Ultrasonik Görüntüleme

Tümör Muamele Alanları (TTFields), düşük yoğunluklu, ara frekanslı, alternasyonlu elektrik alanlarının kesintisiz, noninvaziv uygulamasıyla verilen etkili bir anti-tümör tedavi modudur. TT, bir TTFields in vitro uygulama sistemi kullanarak hücre dizilerine uygulama yapmayı, hücre sayımlarında en fazla düşüşe yol açan en uygun frekansın saptanmasına izin verir.

Fields Tedavisi Tümör kullanma Kanserli Hücreleri için optimum inhibitör Frekans (TTFields) Belirlenmesi

Burada biz fetusa farelerde vivo çözümlenmesi için yüksek frekans ultrason tekniği tarif. Bu yöntem, fetusa takibi ve plasental parametreleri hem de gebelik boyunca maternal ve fetal kan akışı analizi sağlar.

Yüksek frekans ultrason Fetal ve plasental geliştirme Vivo içinde analizi için

Düşük yoğunluklu Geniş puls ultrason stimülasyon (LIPUS) yüksek uzamsal ve zamansal çözünürlük ile endojen veya mühendislik hücrelerinin non-invaziv mekanik uyarılması için bir yöntemi var. Bu makalede nasıl bir epi-floresan mikroskop LIPUS uygulanacağı ve akustik empedans uyuşmazlığı istenmeyen mekanik eserler önlemek için ultrason yol boyunca en aza indirmek nasıl açıklanır.

Çoğullama ultrason stimülasyon floresans mikroskobu ile odaklı

Kan-beyin bariyeri (BBB) mikrobubble aracılı odaklanmış ultrason (FUS) ile geçici olarak bozulabilir. Burada, ultrason olmayan uzmanlar için erişilebilen modüler bir FUS sistemi kullanarak yüksek verimli BBB açma in vivo için adım adım bir protokol açıklıyoruz.

Kemirgenlerde Kan-Beyin Bariyeri Açıklığı için Yüksek Verimli Görüntü Destekli Stereotaktik Nöronavigasyon ve Odaklanmış Ultrason Sistemi

Sunulan deneysel protokol, başarılı ilaç dağıtımı ve/veya diğer biyoeffeksler için gerekli koşulların araştırılmasını sağlamak amacıyla bir hücre kültürü cihazında kavitasyon aktivitesinin gerçek zamanlı ölçümlerini yapmak için kullanılabilir.

Kavitasyon Gelişmiş Tedavi Çalışma

Melanom, hızla diğer organlara yayılan çok agresif bir hastalıktır. Bu protokol, metastatik melanomun Braf / Pten fare modelindeki inguinal lenf düğümlerinin hacmini izlemek için 3D render ile birlikte ultra yüksek frekanslı ultrason görüntülemenin uygulanmasını açıklamaktadır.

Braf/Pten Genetiği Mühendisliğiyle Tasarlanmış Melanom Fare Modelinde Ultra Yüksek Frekanslı Ultrason Görüntüleme ile Lenf Düğümü Hacminin Analizi

Öğrenin düşük frekanslı ultrason ile insan lösemi hücrelerinde kolesterol tüketim ajanının etkisini artırarak neoplastik hücre hasarını değerlendirmeyi. Bu yöntem onkolojide yeni tedavi stratejileri sunar.

Üretim ve Darbeli Düşük Frekanslı Ultrason Kantitatif Analiz neoplastik Hücreler Tedavi edilmeyen Sonic Duyarlılık belirleyin ve Tedavi için (Video) | JoVE Journal

Üretim ve Darbeli Düşük Frekanslı Ultrason Kantitatif Analiz neoplastik Hücreler Tedavi edilmeyen Sonic Duyarlılık belirleyin ve Tedavi için

Daha fazla video keşfet