Name: Kemirgenler Akrilik Reçine Kalıp Esaslı Başkanı Fixation Tekniği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: Öğrenin, kemirgenlerde davranışsal çalışmalar için akrilik reçine tabanlı çerçevesiz kafa sabitleme tekniğini. Bu yöntem, metal bileşenler olmadan beyne erişimi kolaylaştırır ve çeşitli laboratuvarlarda uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Milli Eğitim, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı (2010-0022362) ve (2012R1A2A2A02046812) tarafından finanse edilen NRF aracılığıyla Temel Bilim Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir.

Etik Beyanı: Bu deney Kyungpook Ulusal Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylandı ve Bakımı ve Kullanımı Laboratuvar Hayvanları (Ulusal Sağlık Enstitüsü, 1996) Kılavuzu göre yapıldı. Deneyden sonra, karbon dioksit ötenazi altında kurban edilmiştir. Sıçanlar için başlıklar tespit Bar 1. Tasarım NOT: Bu adım, bir tespit çubuğu tasarımı için genel bir kılavuzdur. Boyut ve malzeme ile ilgili herhangi bir değişiklik hayvanlar veya implantlar bağlı mümkündür. CAD yazılımı kullanarak bir kafa sabitleme çubuğunu Tasarımı önerilir, ancak gerekli değildir. <ol><li> Bir tespit çubuğu tasarlamak için CAD yazılımı kullanın. <ol><li> Bir dikdörtgen şeklinde (123 × 35 × 6 mm) (Şekil 1A) bir tespit çubuğu tasarlayın. Tespit çubuğunun ortasında, dikdörtgen bir çentik (port 16 × 20 mm) emin olun. Yamaçlarında ya da girintileri ekle yüklenebileceğinih (Şekil 1B -arrows Şekil 1A-) liman sınırları üzerinde kılavuz rayı olarak hizmet vermektedir. NOT: limanın alan kraniotomi yoluyla beyin bölgelerinin çoğunda bir stereotaksik manipülatör kullanarak dikey erişimlerini sağlamak için beynin üzerine sıçan kafatası tahmini dikdörtgen kapsar emin olun. </li><li> Sabitleme çubuğunun her iki tarafta iki uzatılmış sabitleme delikleri (50 x 20 x 6 mm) plakaları takın. Bu delikler 6 mm çaplı (Şekil 1A-d) vidalarını geçmesi emin olun. Bir kilitleme kancası (Şekil 1A-B) bağlantı noktasının önünde çapı 3 mm bir delik açın. </li><li> Bir kutu bir zemin (135 x 305 mm) ve yan duvarları (305 x 76 mm) sahip olun. Şekil 1A (ek) &#39;de gösterildiği gibi, iki 6 mm çaplı delik delin. Sabitleme bar (Şekil 1A-e) destek duvarları ekleyin. </li></ol></li><li> Tasarlanmış bir bar imalatı ve kutu gibi siyanoakrilat kullanılarak her biri bir arayaŞekil 1A (ek) gösterilmiştir. 6 mm çapında vidalar kullanılarak kutusunu çubuğu birleştirin. Ergonomik kafa sabitleme (Şekil 1A-ek) için çubuğun vidalı pozisyonunu ayarlayarak eğimi uygulayın. NOT: Fare için, sabitleme çubuğunun boyutu (2 mm kalınlığında akrilik paneller iki katmandan oluşan), 60 x 20 x 4 mm &#39;dir. Port 8 mm genişliğinde (üst) ve Şekil 1C &#39;de gösterildiği gibi 9 x 10 mm (alt) kare olduğunu. Ankraj plakaları fareler &#39;aynı boyuttadır. Kutu plaka ve yan duvarlar sırasıyla 100 × 72 mm ve 100 × 50 mm, vardır. </li></ol> İmplantasyon Cerrahisi sırasında 2. Başkanı Mounter İnşaat DİKKAT: Diş akrilik reçine ile uğraşırken dikkatli olun. Sıvı cilt tahrişine neden olabilir. Bir maske koyun ve eldiven giyin. Iyi havalandırılan bir alanda çalışın. <ol><li> Ameliyattan önce hazırlık <ol><li> Sıkıca tespit çubuğu kullanarak ap limanı sınır sarınbara uygulanan akrilik reçine yapışmasını önlemek için araffin film (Şekil 1B ve Şekil 2A &#39;ya bakınız). Kat akrilik reçine ince bir tabaka ile parafin film kaplı portun yatılı. </li><li> Sterilize cerrahi aletler kullanın. İyice stereotaksik çerçeve dezenfekte ve onun% 70 etil alkol kullanarak çevredeki. </li></ol></li><li> Stereotaksik implantasyon ameliyatı <ol><li> Intraperitonal ketamin 10 ml kokteyl karışımının enjeksiyonu (2 ml / kg) (50 mg / ml), ksilazin hidroklorür 1.5 ml (23.32 mg / ml) ve tuzlu su 2.5 mi, bir hayvan anestezisi. Hayvan tamamen uyuşturulduktan ve kuyruk ve ayak tutam yanıt vermiyor emin olun. Gerektiğinde, ameliyat sırasında, 1 ml / kg bir kokteyl karışımı enjekte edilir. </li><li> Stereotaksik aparat hayvan sabitleyin. Ameliyat sırasında kuruluğunu önlemek için gözleri oftalmik merhem sürün. Tıraş ve% 70 etanol ile kafa derisi temizleyin. % 2 lidokain subkutan enjeksiyon vermek ve SCA insizyonKafatasının orta hat boyunca lp. Tamamen periost kazıyın. Tuzlu birkaç kez durulayın. </li><li> Kafatasının kenarına yakın Burr-hole sondaj yapın. İmplant vidaları kafatası yüzeyinden 4-5 tur (1 mm kadar derinlik) dura mater ihlal önlemek için. Vida implantasyon sonrası kafatası yüzeyinde CSF ve kan emin hiçbir sızıntı olun. Tuzlu su ile durulayın ve özellikle vida etrafında, hava puf kullanarak kafatası yüzeyi kurulayın. </li><li> &quot;Dental yapıştırıcı (Süper Bond C &amp; B)&quot; ince bir tabaka ile kaplayın kafatası yüzeyi. Tamamen ek elektrot implantasyonu planlanan eğer bregma dahil kafatasının yüzeyini örtmeyin. Kraniyotomi koordinatları işaretleme için bregma kullanın. İmplant elektrotlar ve / veya Microdrive ve çevresinde akrilik reçine uygulayarak kafatası sabitleyin. </li><li> Diş çimentosu en ek akrilik reçine uygulanır. Bar kaplı reçine arasında yeterli dolgu-out boşluk bırakmak için akrilik reçine uygun miktarda kullanınd İlk montaj reçine vida ve / veya elektrotların (Şekil 2A) sabitleme zaman. </li></ol></li><li> Baş-sabitleme çubuğunu kafatası yüzeyi üzerinde 5 mm veya daha fazla koyun ve merkezi (Şekil 2A -Sol) hizalayın. </li><li> Kafa tabanı ve ilk montaj reçineler arasındaki boşluğa akrilik reçine uygulayın. (Şekil 2A -Center). Sert olmak reçine kadar bekleyin. </li><li> Kulak-bar çıkarın ve sabitleme çubuğu liman dışında kalıp Mounter çekin. (Şekil 2A -Sağ). Dikkatle kalıplanmış mounter gerektiğinde kenar rayları etrafında ek bir akrilik reçine uygulanır. </li><li> Steril serum fizyolojik ile kafa derisi yara yüzeyini durulayın. Ameliyattan hemen sonra bir antibiyotik (enrofloksasin, 5 mg / kg sc) ve bir analjezik (butorfanol tartrat, 2 mg / kg sc) enjekte edilir. Tek bir kafeste tek hayvan barındıracak. </li></ol> 3. alıştırmak Hayvanlar Baş-tespit etmek Not: Bu adım DEYazarların ampirik başarılı değerlendirmelere dayalı alışkanlık programları scribes. Baş-sabitleme için alışkanlık prosedürünün genel bir bakış için, Schwartz&#39;ın 10 veya Guo&#39;nun 11 iş görmek. <ol><li> Hayvanlara yeterli iyileşme süresini (bir hafta veya daha fazla) verin. Gün 1, sık sık bölünmüş kısa oturumlarında hayvanları taşıyınız. </li><li> Ertesi gün (Gün 2) üzerinde sabitleme ortamı (kutu) hayvan maruz bırakmaktadır. Tespit çubuğunun portuna onların baş Mounter takmayın. Çevreye alışması için hayvanları bırakın. Güvenli 1 ila 2 saniye elinizi kullanarak kafa Mounter kapmak ve hemen bırakın. El-kapmak birkaç kez kısa süreli fiksasyon tekrarlayın. </li><li> Gün 3, baş-tespitin hayvanları alıştırarak. <ol><li> Ev kafeslerden hayvanları getirin ve sabitleme çubuğu limanına doğru başlarını yönetmenlik kutuya yerleşmek. Baş Mounter tut ve tespit çubuğunun bağlantı noktasına takın. </li><li> Hayvan en (Mounter Bindbir lastik bant kullanarak tespit çubuğunun kilitleme kancasına baş). 5 dakika bekleyin. NOT: gıcırtı ve hayvanın strese artan mücadele hayvan açar tespit sonrasında hayvanın gövde veya kuyruk dokunmayın. Hayvan fazla 1 dk mücadele devam ederse, bırakın ve daha sonra tekrar deneyin. Tespit kafa maruz ancak bu yavaş yavaş alışkanlık ilerledikçe azaltılmış olur zaman bu adımı itibaren, hayvanlar idrar ve dışkı atılımı göstermektedir. </li><li> Kilitleme lastik bant alın ve liman dışında Mounter çıkarın. Eve kafesine hayvan koyun ve tahıl bir parça veya bir ödül olarak ev kafesin içine bir ayçiçeği tohumu sağlamaktadır. Bir sonraki duruşma 30 dakika başlar. Bir gün içinde 3.4.1 beş 3.4.4 ya da daha fazla tekrarlayın. </li></ol></li><li> 7 Gün 4, Protokolün 3.4 anlatıldığı gibi tespit kafa hayvan maruz. Yavaş yavaş (10 dk, 20 dk, 30 dk, ve alışkanlık ilerledikçe 50 dakika) baş sabitleme süresini artırır. NOT: Hayvanlar yaparsanız hiçbirt stres düzeyi yüksek bir işareti olabilir, gıda ödül yem. Fiksasyon süresini artırmak etmeyin. Hayvanlar davranışı mücadele tekrarlanan göstermek ise, daha uzun bir süre onları alıştırmak. </li><li> Günlük hayvanın vücut ağırlığını kontrol edin. Vücut ağırlığı azalıyor başarısız alışkanlık düşünün. Başarılı alışkanlık sonra baş sabitleme ile davranışsal görevlere devam edin. NOT: Başarılı alışkanlık sonraki davranış eğitimi (Şekil 3E ve F) kolaylaştırır. </li></ol>

<ol><li>Mayrhofer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+two-alternative+forced+choice+paradigm+for+bilateral+vibrotactile+whisker+frequency+discrimination+in+head-fixed+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Novel two-alternative forced choice paradigm for bilateral vibrotactile whisker frequency discrimination in head-fixed mice and rats.</a> J Neurophysiol. 109, 273-284 (2013).</li>
<li>Bryant, J. L., Roy, S., Heck, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+stereotaxic+recordings+of+neuronal+activity+in+awake%2C+head-restrained+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A technique for stereotaxic recordings of neuronal activity in awake, head-restrained mice.</a> J Neurosci Methods. 178, 75-79 (2009).</li>
<li>Ollerenshaw, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+tactile+inputs+in+the+rat+vibrissa+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Detection of tactile inputs in the rat vibrissa pathway.</a> J Neurophysiol. 108, 479-490 (2012).</li>
<li>Lee, M. G., Manns, I. D., Alonso, A., Jones, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep-wake+related+discharge+properties+of+basal+forebrain+neurons+recorded+with+micropipettes+in+head-fixed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Sleep-wake related discharge properties of basal forebrain neurons recorded with micropipettes in head-fixed rats.</a> J Neurophysiol. 92, 1182-1198 (2004).</li>
<li>Lutcke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+recording+of+neuronal+activity+with+a+genetically-encoded+calcium+indicator+in+anesthetized+and+freely+moving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Optical recording of neuronal activity with a genetically-encoded calcium indicator in anesthetized and freely moving mice.</a> Front Neural Circuits. 4, 9(2010).</li>
<li>Dombeck, D. A., Khabbaz, A. N., Collman, F., Adelman, T. L., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+large-scale+neural+activity+with+cellular+resolution+in+awake%2C+mobile+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging large-scale neural activity with cellular resolution in awake, mobile mice.</a> Neuron. 56, 43-57 (2007).</li>
<li>Kimura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinforcing+operandum%3A+rapid+and+reliable+learning+of+skilled+forelimb+movements+by+head-fixed+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Reinforcing operandum: rapid and reliable learning of skilled forelimb movements by head-fixed rodents.</a> Journal of neurophysiology. 108, 1781-1792 (2012).</li>
<li>Hadlock, T., Kowaleski, J., Mackinnon, S., Heaton, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+of+head+fixation+for+the+study+of+rodent+facial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">A novel method of head fixation for the study of rodent facial function.</a> Experimental neurology. 205, 279-282 (2007).</li>
<li>Roh, M., Jang, I. S., Lee, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Push-in+Head+Restraining+Apparatus+for+Intracranial+Self+Stimulation+Tasks+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Push-in Head Restraining Apparatus for Intracranial Self Stimulation Tasks in Rats.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 18, 103-108 (2014).</li>
<li>Schwarz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+head-fixed+behaving+rat--procedures+and+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+%26+motor+research%22%5BJournal%5D)">The head-fixed behaving rat--procedures and pitfalls.</a> Somatosensory & motor research. 27, 131-148 (2010).</li>
<li>Guo, Z. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedures+for+Behavioral+Experiments+in+Head-Fixed+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Procedures for Behavioral Experiments in Head-Fixed Mice.</a> PLoS ONE. 9, (2014).</li>
<li>Osborne, J. E., Dudman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RIVETS%3A+a+mechanical+system+for+in+vivo+and+in+vitro+electrophysiology+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">RIVETS: a mechanical system for in vivo and in vitro electrophysiology and imaging.</a> PLoS One. 9, e89007(2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu protokol, eldeki malzemeleri kullanarak basit ve kullanışlı bir kafa sabitleme yöntemini göstermektedir. Fiziksel olarak başarılı bir kafa sabitlemesi için, ameliyat sırasındaki ilk kritik adımlar, diş yapıştırıcı reçine simanını uygulamadan önce kafatası yüzeyini net bir şekilde durulamak ve kurutmaktır. İkincisi, bu yöntem temporal kasların altına implante edilen vidaları kullanmaz ve sadece kafatasındaki vidalara bağlıdır, bunların kafatası kenarının yüzeyine dik implantasyonu çok önemlidir10. Bu, özelli...

Kafa tespit veya kafa kısıtlama sert sıkma için kafatası üzerinde bir çerçeve ya da plaka takarak hayvanın başını hareketsizleştirir bir tekniktir. Teknik, hassas duyusal stimülasyon, ya da uyanık hayvanlarda 1-3 nöral kayıt olmadan ve uyku-uyanıklık döngüsü 4 sırasında juxtacellular etiketleme için davranışsal algılama için kabul edilmiştir. Aynı zamanda, in vivo beyin görüntüleme 5,6 kullanılır. Şimdi kafa sabitleme tekniği nörobilim ve davranışsal araştırmalarda yaygın olarak kullanılan bir araçtır. Temelde, geleneksel kafa sabitleme kafatası 6-8 üstündeki metal baş mesajların cerrahi eki gerektirir. Ek parça daha sonra baş immobilizasyonu ile sonuçlanan sabit bir platforma kenetlenir. Böyle nöral ve / veya optik kayıt, beyin devreleri müdahale olarak uyanık hayvanlarda nörofizyolojik araştırma, beyin görüntüleme diş akrilik kullanarak implantasyon cerrahisi eşlik ediyor. Bu nedenle,o deneysel gerektiğinde bu laboratuvarlarda kafa tespiti uygulamak için basit bir görev gibi görünüyor. Çerçeve evlerinde kafeslerde hayvanın doğal davranışlarını rahatsız değil, hafif ve yeterince küçük olması dizayn edilmelidir. Sabit platforma kenetlenmiş zaman da mekanik sertlik sağlar. Ayrıca deneysel amaçlarla bağlı biyouyumluluk vardır. Bu nedenle, tasarım ve genel laboratuar ekipmanları gibi baş mesajları imal etmek teknik olarak zordur. Bu çalışmada, yeni bir baş tespit yöntemi, metal kafa Mesajları kullanmadan uygun sıkıştırma yoluyla mekanik sertlik sağlarken, tarif edilmektedir. Yöntemi kullanarak, kafa sabitleme implantasyonu genellikle beyin çalışma için kemirgenlerde gerçekleştirilen genel laboratuar koşulları altında yapılabilir. Metal baş mesajlar implan sırasında yapılan bir ısmarlama kafa sabitleme çubuğu ve kalıplama işlemi kısmen kalıplı akrilik reçine çimento ile değiştirilirtation cerrahisi. Sabitleme çubuğu gibi nöral kayıt sondaları, stimülasyon elektrotları gibi diğer implantlar, yüksek uzaysal uyumluluk sağlar. Ayrıca vidalı bağlama kaldırarak sabitleme platformunda hayvanın kafasını sıkma adımlarını kolaylaştırır. Biz önceki davranışsal çalışmada bu yöntem kullanılır ve bu yöntem pratik deneyler 9 uygulamak kolay ve rahat olduğu sonucuna varıldı.

<table><tbody><tr><td>Dental akrilik reçine</td><td>Lang Dental Manufacturing</td><td>Ortho-Jet</td><td>kalıplı montaj yapmak için</td></tr><tr><td>Parafin filmi</td><td>Bemis</td><td>Parafilm</td><td>akrilik reçinenin çubuğa yapışmasını önlemek için</td></tr><tr><td>Diş yapıştırıcısı</td><td>Sun Medical</td><td>Super-Bond C& B</td><td>, akrilik reçine ve kafatası arasında bağ kurmak için</td></tr>, <tr><td>sabitleme çubuğu ve kutu platformu yapmak için pleksglas</td><td>veya diğer akrilik plaka</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>Akrilik plakaları yapıştırmak için</td> <td>siyanoakrilat</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

kemirgenler akrilik reçine kalıp esaslı başkanı fixation tekniği

Acrylic Resin Molding Based Head Fixation Technique in Rodents

Kafa fiksasyonu, sert kenetleme için kafatasına bir kafa direği takarak hayvanın kafasını hareketsiz hale getirme tekniğidir. Geleneksel kafa fiksasyonu, metalik çerçevelerin kafatasına cerrahi olarak bağlanmasını gerektirir. Takılan çerçeveler daha sonra sabit bir platforma kenetlenir ve bu da kafanın hareketsiz hale gelmesine neden olur. Bununla birlikte, kafa sabitlemesi için metalik çerçevelerin tasarlanması ve genel laboratuvar ortamında uygulanması teknik olarak zor olmuştur. Bu çalışmada yeni bir kafa tespit yöntemi sunuyoruz. İmplantasyon cerrahisi sırasında özel yapım bir kafa sabitleme çubuğu kullanılarak kafa montaj makinesi yapılır. Elektrotlar ve kanül gibi implantların kafatasına yapıştırılması için akrilik reçine uygulandıktan sonra, sabitleme çubuğunun portuna uygun bir kalıp oluşturmak için bunun üzerine ek reçineler uygulanır. Kalıplanmış kafa montaj aparatı bir kılavuz ray görevi görür, araştırmacılar, kafa montaj aparatını sabitleme çubuğunun portuna yerleştirerek hayvanın kafasını uygun şekilde sabitler. Bu yöntem, diş akrilikleri kullanılarak implantasyon cerrahisi gerekliyse kolayca uygulanabilir ve CNC ile işlenmiş metal kafa direklerini kolayca imal edemeyen laboratuvarlar için yararlı olabilir.

Bu kafa sabitleme yöntemi, farelerde ve sıçanlarda da uygulanabilir. Toplam sekiz sıçan medyal ön beyin demetine uyarıcı elektrot bilateral implante aldı. Bunların dördünde için özelleştirilmiş tungsten tel elektrotlar (Microdrives) ek M1 ön ayakları alanına (Şekil 2C) implante edildi. Fareler (n = 2), dört adet paslanmaz çelik tel elektrot frontal / Oksipital kortikal alanlara implante edildi. Ameliyattan çıktıktan sonra Protokol bölümünde 2. tarif olarak Ameliyat sırasında, baş Montajcıları, sıçan ve ...

Geleneksel kafa sabitleme teknikleri, kafa sabitleme aparatı için bir arayüz olarak kafatasına tutturulmuş metalik çerçeveler kullanmıştır. Bu protokol, kemirgenlerde davranışsal görevler için çerçevesiz, akrilik reçine kalıplama esaslı bir kafa sabitleme tekniğini göstermektedir.

Kemirgenler Akrilik Reçine Kalıp Esaslı Başkanı Fixation Tekniği

Head fixation is a technique of immobilizing animal's head by attaching a head-post on the skull for rigid clamping. Traditional head fixation requires ...

Bu prosedürün genel amacı, kemirgenlerde implantasyon cerrahisi gerçekleştiren laboratuvarlarda yaygın olarak bulunan dental akrilik kullanılarak yeni bir kafa sabitleme tekniği sunmaktır. Bu yöntem, beyin ve davranış araştırmaları alanındaki temel sorulara yanıt verebilir. Bu tekniğin temel avantajı, metal kafa destekleri veya plakalar kullanmamasıdır; bu nedenle CNC ile işlenmiş kafa desteklerini kolayca üretemeyen laboratuvarlar tarafından kullanılabilir.CAD yazılımı kullanarak 123 x 35 x 6 mm boyutlarında, merkezinde 16 x 20 mm ölçülerinde dikdörtgen bir port bulunan dikdörtgen bir tespit barı tasarlayın. Bu port beyne erişim sağlamak için kullanılır, bu nedenle boyutu ihtiyaca göre değiştirilmelidir. Portun kenarları boyunca kılavuz ray görevi görecek eğimler veya girintiler ekleyin. Tespit barının her iki yanına, uzatılmış sabitleme delikleri aracılığıyla takılacak plakalar hazırlayın.Delikler 6 mm'lik bir vidanın geçebileceği boyutta olmalıdır; ayrıca portun önüne, kilitleme kancasının yerleşebilmesi için 3 mm çapında bir delik ekleyin. Ardından, 135 x 305 x 76 mm boyutlarında bir küpün duvarlarını ve tabanını tasarlayın. Daha geniş olan yan duvarlar, barı desteklemek için kullanılır.Bu amaçla 6 milimetrelik deliklere ihtiyaç vardır. Tüm parçalar akrilikten işlendikten sonra, kutuyu ve çubuğu siyanoakrilat kullanarak birleştirin. Ardından çubuğu, 6 milimetrelik vidalar yardımıyla kutunun destek duvarlarına sabitleyin.Son olarak, vidanın konumunu ayarlayarak bağlantı aparatının eğimini bir sıçanın kafasına uygun hale getirin. Fareler için aynı tasarımı, daha küçük boyutlu bir bar, aynı sabitleme plakaları ve daha küçük bir kutu ile kullanın. İşleme barı hazırlayarak başlayın.Öncelikle, portu parafin film ile sarın. Ardından, parafinin kenarlarını ince bir akrilik reçine tabakasıyla kaplayın. Sonrasında, çerçeveyi %70 ethanol kullanarak kapsamlı bir temizlikle dezenfekte edin.Sıçanı anestezi altına aldıktan sonra, ayak parmağı sıkma yöntemiyle anestezi durumunu doğrulayın. Anesteziyi sürdürmek için gerektiğinde ilaç kokteylinden yarım dozlar uygulayın. Sıçanı stereotaksik çerçeveye sabitledikten sonra oftalmik pomad uygulayın ve kafatası üzerindeki tüyleri tıraş edin.Ardından, insizyon bölgesine %2 lidokain ile subkütan enjeksiyon yapın. Şimdi kafa derisini orta hat boyunca insize etme ve periostu tamamen sıyırma zamanıdır. Kafatasının temiz bir bölgesini açığa çıkarmak için birkaç kez salin ile durulama işlemini gerçekleştirin.Ardından, kafatasının kenarına yakın bölgelerde vidalar için tremor delikleri açın. Vidaları kafatasına dik olacak şekilde implante edin. İmplante edilen vidalardan herhangi bir sıvı sızıntısı olmamalıdır.İmplant bölgelerinin çevresini durulayın ve hazırlığı hava ile kurutun. Ardından, kafatasının yüzeyinin büyük bir kısmını ince bir diş yapıştırıcı tabakasıyla kaplayın. Ancak koordinat navigasyonu için bregma bölgesini açık bırakın.Diğer elektrot veya hiperdrive implantasyonlarını gerçekleştirin. Ardından, implantları dental siman tabakasının üzerindeki akrilik reçine ile sabitleyin. Bunu yaparken, barın kafatasına yapıştırılabilmesi için montaj reçinesi üzerinde yeterli alan bırakın.Şimdi, baş sabitleme çubuğunu kafatasının yaklaşık 5 milimetre üzerine hizalayın. Kafatası ile çubuk üzerindeki reçineler arasına biraz daha reçine uygulayın. Reçineler sertleştikten sonra kulak çubuğunu çıkarın ve kalıp ile monte ünitesini sabitleme çubuğu portundan çekip çıkarın.Prosedürü tamamlamak için hayvana antibiyotik ve bir analjezik enjekte edin. Ardından hayvanı bir iyileşme kafesine aktarın ve sternal rekumbensi (göğüs üzeri yatış) yeniden kazandığında bireysel olarak barındırın. Hayvanı baş sabitlemeye alıştırmadan önce en az bir hafta boyunca iyileşmeye bırakın.Alıştırmanın birinci gününde hayvanları kısa oturumlar halinde sık sık tutun. İkinci günde fiksasyon kutusunu tanıtın. Hayvanların çevreyi serbestçe keşfetmelerine izin verin.Keşif süresi boyunca birkaç kez, baş sabitleyiciyi bir veya iki saniyeliğine kısa süreliğine tutun. Üçüncü günde baş sabitleme deneyimini başlatın. Hayvanı kutuya yerleştirin ve başını baş sabitleme çubuğundaki porta yönlendirin.Ardından baş sabitleyiciyi alın ve tespit çubuğuna yerleştirin. Başı, kilitleme kancası ve bir lastik bant ile bağlayın. Daha sonra, hayvanın dokunulmadan beş dakika boyunca beklemesine izin verin; dokunmak, hayvanın daha fazla çırpınmasına neden olacaktır.Boşaltım ve dışkılama beklenir ve fiksasyona daha fazla maruz kaldıkça kademeli olarak azalacaktır. Beş dakika sonra lastik bandı çıkarın ve sabitleme çubuğunu dışarı itin. Ardından hayvanı kendi kafesine geri koyun ve ödül olarak mısır gevreği veya bir ayçiçek çekirdeği verin.Yarım saat sonra işlemi tekrarlayın. Fiksasyonun bu ilk gününde hayvanı beş kez fikse edin. Dördüncü günde, fiksasyon maruziyet sayısını yediye çıkarın.Bundan sonra, fiksasyon süresini kademeli olarak beş dakikadan on dakikaya, ardından 20 dakikaya, yarım saate ve son olarak 50 dakikaya kadar uzatın. Herhangi bir noktada bir hayvan ödülü kabul etmeyi bırakırsa, bu yüksek stresin bir işareti olduğundan fiksasyon süresini daha fazla artırmayın. Alıştırma süreci boyunca hayvanları günlük olarak tartın.Süreç sırasında bir hayvanın vücut ağırlığı azalırsa, bu hayvan çalışma için kullanılmamalıdır. Sekiz sıçanın kullanıldığı bir deneyde, bilateral stimülasyon elektrotları medial ön beyin demetine yerleştirilmiştir. M1 ön kol alanında sıçanlar, mikro sürücüler ve tungsten tel elektrotlarla donatılmıştır.Alıştırma süreci tamamlandıktan sonra sıçanlar, kafa sabitleme sırasında 40 ila 60 dakika süren davranışsal görevleri yerine getirdiler. Kalıplanmış tüm kafa aparatları, deneyin tüm 40 günü boyunca hayvanlara takılı kaldı. Deneyde hayvanlara, stimülasyon ödülleri almak için manivelaları çekmeleri öğretildi.Dört elektrot implante edilmiş farelerle yapılan bir deneyde, kafa aparatı 80 gün boyunca takılı kalmıştır. Fareler bu 80 gün boyunca günlük 20 ila 40 dakika süreyle kafa sabitleme işlemine tabi tutulmuştur. Bu videoyu izledikten sonra, bir kafa sabitleme çubuğunun nasıl tasarlanacağı ve sabitlenmiş hayvanların bakımının nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız.Pratikle birlikte, akrilik baş sabitleyicinin yerleştirilmesi birkaç dakika içinde tamamlanabilir. Daha sonra, vida veya klempler gerektirmediği için baş fiksasyonu hızlı ve kolaydır. Dental akrilik reçine ile çalışmanın cilt tahrişine yol açabileceğini unutmayın.Bu prosedür uygulanırken maske ve eldiven takmak ve iyi havalandırılan bir alanda çalışmak gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

acrylic-resin-molding-based-head-fixation-technique-in-rodents

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz milimetre yayılan ve beyin iltihabı olmadan ay dayanır farenin kafatasında bir görüntüleme penceresi oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem de iki foton mikroskopi kullanılarak kan akımı, hücresel dinamiği ve hücre / vasküler yapının uzunlamasına çalışmalar için uygundur.

Fare Beyin Uzun vadeli Görüntüleme için Parlak ve Takviyeli inceltilmiş-kafatası Pencere

Bu video, murin modelinde bir kafa direği implantasyon ameliyatını göstermektedir. Baş direği, yalnızca deney sırasında fareyi kafayla sabitlemek ve dolayısıyla dizginlemek için değil, aynı zamanda serbestçe hareket eden hayvanlara bir kafa cihazını güvenli bir şekilde takmak için de kullanılır.

Fare Headpost İmplantasyonu: Kemirgenlerde Kafa Fiksasyonu İçin Bir Yöntem

Kaynak: Lee, H. et. al., Serbestçe Davranan Farenin Amigdalasında Başa Monte Minyatür Mikroskopla Başarılı İn vivo Kalsiyum Görüntüleme. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, gradyan kırılma indisi veya GRIN lens ve minyatür bir mikroskop kullanılarak bir farede in vivo kalsiyum görüntülemeyi göstermektedir. Kurulum, sürtünmesiz bir mobil kafes sistemi içinde kafa sabitlemesini birleştirir, nöronları uyarır ve kalsiyum iyonu akışını tetikler. GRIN lens, beyindeki kalsiyum sinyalini yakalayarak nöronal...

Serbestçe Hareket Eden Bir Farede Gerçek Zamanlı Mikroendoskopik Kalsiyum Görüntüleme

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

Bu eser bir optogenetic tek-unit güvenilir özel yapım cam optrode kullanarak uyanık bir fareden kayıt gerçekleştirmek için bir yöntem sunar.

Bir cam Optrode uyanık farelerde nöronal türüyle Optogenetics tanımlaması

Sunulan Protokolü kalıcı duyu çakışma uzun vadeli öğrenme eğitim amaçlı deneyler için üretir. Kalıcı olarak sabit bir aygıt başlarına giyerek, fareler sürekli ev kafeslerde serbestçe taşırken görsel ve Vestibüler girdiler arasında duyusal bir uyumsuzluk maruz kalır.

Fareler serbestçe davranıyor uzun vadeli duyusal çatışma

Belirli nöronal popülasyonların veya beyin bölgelerinin optogenetik manipülasyonu ile, davranış serbestçe hareket eden hayvanlarda yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile değiştirilebilir. Kronik implante optik lifler ile birlikte farklı optogenetik araçlar kullanılarak, nöronal modülasyonlar ve davranışsal testler çeşitli yapılabilir.

SerbestÇe Hareket Eden Farelerde Davranışı Modüle Etmek Için Nöronal Aktivitenin Optogenetik Manipülasyonu

In vivo mikroendoskopik kalsiyum görüntüleme, özgürce davranan hayvanlarda nöronal aktivitelerin gerçek zamanlı izlenmesini sağlayan paha biçilmez bir araçtır. Ancak bu tekniği amigdalaya uygulamak zor olmuştur. Bu protokol, farelerde minyatürleştirilmiş bir mikroskopla amigdala hücrelerini başarıyla hedeflemek için yararlı bir kılavuz sağlamayı amaçlamaktadır.

Özgürce Davranan Farenin Amigdalasında Kafaya Monte Minyatür Mikroskop ile Başarılı In vivo Kalsiyum Görüntüleme

Uyanık, kafası sabitlenmiş sıçanların fonksiyonel görüntülemesi için ayrıntılı yeni bir prosedür tanımlanmıştır.

Uyanık, Kafaya Sabitlenmiş Sıçanların Nörogörüntülemesi için Kafa İmplantları

Burada, kemirgenlerde kronik elektrofizyoloji için kullanım kolaylığı, prob geri kazanımı, deneysel çok yönlülük ve davranışla uyumluluk için optimize edilmiş hafif, uygun maliyetli bir prob implant sistemi sunuyoruz.

DREAM implant: Başa sabitlenmiş ve serbest hareket eden farelerde kronik elektrofizyoloji için hafif, modüler ve uygun maliyetli bir implant sistemi

Makale, farelerde yaygın olarak kullanılan doğrusal iz sanal gerçeklik (VR) paradigması için deneysel prosedürlerin yanı sıra, Y şeklinde bir sinyal ayırt etme görevini test ederek karmaşık VR görevlerini çalıştırmanın fizibilitesini belirlemektedir.

Farelerde Kafaya Sabit Sanal Gerçeklik için Davranışsal Eğitim Prosedürleri

Öğrenin, kemirgenlerde davranışsal çalışmalar için akrilik reçine tabanlı çerçevesiz kafa sabitleme tekniğini. Bu yöntem, metal bileşenler olmadan beyne erişimi kolaylaştırır ve çeşitli laboratuvarlarda uygulanabilir.

Kemirgenler Akrilik Reçine Kalıp Esaslı Başkanı Fixation Tekniği

Daha fazla video keşfet