Name: Farelerde Kardiyak inotropiyi Soruşturma İzole papiller Kaslar kontraktilite Ölçümleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Öğrenin farelerde izole papiller kas kontraktilite ölçümleriyle kardiyak inotropiyi incelemeyi. Bu yöntem, kardiyak fizyoloji ve farmakoloji araştırmalarında kalp kası fonksiyonunu doğrudan değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Deutsche Forschungsgemeinschaft (KFO 196 &quot;Signaltransduktion bei adaptativen und maladaptiven kardialen Remodeling-Prozessen&quot;, 1638 / 1-2 FR) tarafından Kalp ve Damar Araştırma, Sağlık Araştırma Merkezleri Alman bir kısmı için DZHK (Almanca Merkezi tarafından desteklenen Bir BMBF (Eğitim ve Araştırma Alman Bakanlığı) girişimi) olan.

Not: izolasyon prosedürü temel adımları Şekil 1 &#39;de belirtilen etaplar aşağıdaki protokolde ayrıntılı olarak tarif edilmiştir.. Papiller kas izolasyonu, organ banyosu odasında montaj, toplama ve analiz ardışık ve zorunlu zaman ölçeğini yapılır. Tüm hayvan deneyleri hayvanların korunması Alman mevzuatına göre yapılmış ve Heidelberg Üniversitesi Etik Değerlendirme Kurulu tarafından onaylanmıştır. Enstrümantasyon hazırlanması 1. <ol><li> Kontraktilite için ölçümler multichambered organ banyosu kurulumu kullanın. Bir ex vivo kontraktilite organ banyosu kurulum bileşenleri, Şekil 2 de gösterilmiştir. NOT: papiller kas hazırlanması ve deney protokolünde başlangıcı arasındaki süreyi kurmak ekipman en aza indirmek ve deneysel tissue.This toplama provid için tamponlar önce hazırlamak içinDoku deneyler için canlı kalır zaman büyük miktarda es. </li><li> Bilgisayar ve veri toplama ekipmanı başlatın. Organ banyosu ısı (önceden ayarlanmış 32 ° C) açın ve önceden sıcaklığa birimleri izin verir. </li><li> Edinim ekipmanı hazırlayın. Yazılım kılavuzunda belirtildiği gibi verileri kaydetmeye başlayın. </li><li> Giriş ve her kanalda (gerekirse) kalibrasyonu yapmak ve sertifikalı ağırlıkça verilen bir 2-g kuvvetine (yani, kanal ile ilişkili) karşılıklı kuvvet dönüştürücü temin elektrik sinyali standardize etmek için tüm kanallar sıfır. </li><li> Organ banyosu odalarına gaz temini (% 95 O 2 /% 5 CO 2) açın. Sürekli tüm protokol ölçümleri sırasında tüm odaları gaz. </li></ol> Tamponlar ve Fizyolojik Çözümler 2. Hazırlık <ol><li> 119 mM NaCI nihai konsantrasyonlar elde etmek için Krebs-Henseleit tampon çözeltisi hazırlayın; 25 mM NaHCO 3; 4,6 mM KCI; 11mm glukoz; 1 mM Na-pyruvate; 1,5 mM CaCl2; 1.64 mM 4 MgSO; 1.18 mM KH 2 PO 4 ve (Tablo 1 Fizyolojik çözüm bakınız) 7.4 pH ayarlamak. </li><li> Ek 30 mM 2,3-Butandion monoxime (BDM) ve 50 IE Heparin / ml ile adım 2.1 &#39;de açıklandığı gibi izolasyonu sırasında kullanmak üzere ayrı Krebs-Henseleit tampon çözeltisi hazırlayın. 4 ° C (Tablo 1 Hazırlama çözeltisi bakınız) soğutun çözeltisi. Tablo 1 de tarif edildiği gibi işemi simülasyonu için, iskemi-solüsyon hazırlanır. </li><li> Ca 2 + protokolü için - bağımlı kontraktilite, istenen nihai konsantrasyona Krebs-Henseleit tampon çözeltisine Ca 2+ ekleyin. NOT: doğrudan kullanmadan önce bu çözümleri hazırlamak ve Calciumcarbonate çökmesini önlemek için karbojen ile Gass. Kullanmadan önce 32 ° C&#39;ye kadar ön ısıtılması çözeltisi. </li></ol> Papiller Eksizyon Prosedür sırasında kullanılan Gazlı Tüp ve Diseksiyon Dish 3. Hazırlık <ol><li> Yumuşak bir gaz bağlayınuzman çalışma ile gaz bağlantısı (% 100 oksijen, alternatif karbojen) tüp (dış çapı 2-4 mm) şarkı. </li><li> Diseksiyon çanak içine uydurma gazlama tüpün kapalı halka oluşturun. Gazlama tüpü sürekli köpürme güvence birkaç kez delinme. Bu gazlaştırma içi tüpü birkaç kez kullanılabilir. </li><li> Pimleri içine sıkışmış, böylece altta (0.5 cm kalınlığında) bir silikon elastomer diseksiyon çanak hazırlayın. Bu yemek birkaç kez kullanılabilir. </li></ol> Fareler ile Sol Ön Papiller kas 4. İzolasyonu NOT: papiller kas izolasyonu başlamadan önce, gaz hatları tıkanmalar açık olup olmadığını kontrol edin. <ol><li> Papiller kas hazırlık başlamadan önce protokol bölümünde 1-3 bahsedildiği gibi organ banyosu kurulumu hazırlayın. Deney günü tüm çözümleri hazırlayın. </li><li> Servikal dislokasyon accordi tarafından (yaklaşık 8-12 haftalık) fare Kurbanuzman çalışma ve kurumsal kurallarına ng. </li><li> Forepaws sabitleyerek dorsal pozisyonda hayvan düzeltmek ve bir diseksiyon gemide arka pençeleri, keskin kemik makasla kaburga ile keserek her iki tarafta toraks yanal açın, daha sonra bir çapraz kesim ile diyafram kesti. Perikard çıkarın. Şimdi kalp ve aort erişilebilir. </li><li> Kalbine yakın damar trunkustan üzerinde künt forseps ile kalbi düzeltmek ve akciğerlerden makas ve çevresindeki doku ile hızlı bir şekilde kalbi ayırın. </li><li> Oksijen (adım 2.2) ile gaz verilerek soğutulmuş hazırlık solüsyonu ile dolu bir Petri kabı kalpte aktarın. Kalp yendi ve forseps ile kardiyak apeks dokunmadan yoluyla usulca kalp kasılmalarını uyarmak için izin verin. </li><li> En kısa sürede kalbi tamamen kansızdırlar olduğunu O 2 ile soğutulan hazırlık solüsyonu (adım 2.2) ile doldurulur ve gazlı diseksiyon çanak aktarın. Kullanımı konusunda bu aşamada bir stereomikroskopta itibaren. </li><li> Hea FixKalp (sağ ventrikül operatörün görünümü sağ tarafta yer alan) dorsal görüldüğü şekilde sağ ventrikül ile küçük bir iğne ile rt. </li><li> Kullanımı mikrocerrahi makas ventriküllerin doku bağlayan atriyoventriküler düzeyde hem atriyumları kesmek ayırmak ve atın. Herhangi bir mekanik basınç kaçınarak kalbin apeks AV-valf-seviyesinden ventrikül duvarından bir kesim yapın. </li><li> Ventrikül açın ve dolayısıyla sol ventrikül papiller kas hem bakmak zorunda, forseps ile sol taraflı serbest duvarı sabitleyin. </li><li> Biraz papiller kas hazırlama kapak yelken bir kısmını koruyarak sol ön papiller kas her iki tarafında ventrikül doku yanal kesip ve dokunaklı önlemek veya mümkün olduğunca papiller kas germe. Papiller kas kalan ventrikül duvar dokusu teşrih. </li><li> Papiller kas hazırlık her iki tarafında takın ipek ipler (7/0, metrik 0.5)preparasyonu, kapak yelken biri ve kas parçası üzerinde tek. Sıcaklık 32 ° C olduğu ileri sürülmektedir, organ banyosu çözeltisi ile doldurulur ve karbojen gazı verilmiş organ banyosu odası içinde hazırlanmasını sabitleyin. </li></ol> Papiller kas 5. Dengeleme ve Uyarım <ol><li> Hemen organ banyosunda fiksasyon sonra 1 Hz stimülasyon frekansında dikdörtgen darbeler (2 ms süresi ve 100 mA akım) ile papiller kas hazırlık Canlandıracak. </li><li> Sürekli değişim ya da kullanılan organ banyosu Çeşidi kurulum göre sık manuel değişim (her 5 dk) yoluyla, organ banyosu çözeltisi sık değişiklik sağlayın. </li><li> Ulaştı giderek maksimal seğirme kuvveti kadar gösteriş artırın. Gösteriş artış seğirme yürürlükte bir başka güçlendirme tarafından takip değilken maksimal seğirme gücü ulaşılır. </li><li> Dengeleme 45-60 dakika sonra, deneysel protokol başlatın. </li></ol> NOT: Aşağıda belirtilen deneysel protokol fizyolojik ve patofizyolojik koşullarda kalp kasılmasını karakterize standart manevraları içermektedir. Temsili bölümde de temsili sonuçları gösteren ayrıntılı olarak bu protokolleri tanımlar (ayrıca bkz Tablo 2). <ol><li> Kayıt ve deneysel protokollerinin analizi <ol><li> Kayıt için yeterli temporal çözünürlük (satın alma oranı ≥ 1kHz) uygun bir yazılımı kullanın. </li><li> Seğirme kuvvet genliği (yükseklik), gerginlik (TTP) ve (örnek olarak bakınız Şekil 4, ADInstruments ve 5.5 Grafik) yazılım programında belirtildiği gibi yarım maksimal gevşeme zamanı (R 50 sırasıyla / TFall) zirve zaman gibi parametreleri analiz edin. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Endoh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+Ca2%2B+signaling+and+Ca2%2B+sensitizers%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+J%22%5BJournal%5D)">Cardiac Ca2+ signaling and Ca2+ sensitizers.</a> Circ J. 12 (12), 1915-1925 (2008).</li>
<li>Bers, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+cycling+and+signaling+in+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium cycling and signaling in cardiac myocytes.</a> Annu Rev Physiol. 70, 23-49 (2008).</li>
<li>Bers, D., Despa, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%2FK-ATPase%E2%80%94an+integral+player+in+the+adrenergic+fight-or+flight+response%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Na/K-ATPase—an integral player in the adrenergic fight-or flight response.</a> Trends Cardiovasc Med. 19, 111-118 (2009).</li>
<li>Bers, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+excitation%E2%80%93contraction+coupling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cardiac excitation–contraction coupling.</a> Nature. 415, 198-205 (2002).</li>
<li>Pieske, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((al.+Ca%282%2B%29-dependent+and+Ca%282%2B%29-independent+regulation+of+contractility+in+isolated+human+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">al. Ca(2+)-dependent and Ca(2+)-independent regulation of contractility in isolated human myocardium.</a> Basic Res Cardiol. 92, Suppl 1. 75-86 (1997).</li>
<li>Corbin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sildenafilcitrate+does+not+affect+cardiac+contractility+in+human+or+dog+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Med+ResOpin%22%5BJournal%5D)">Sildenafilcitrate does not affect cardiac contractility in human or dog heart.</a> Curr Med ResOpin. 19 (8), 747-752 (2003).</li>
<li>Romero-Vecchione, E., Vasquez, J., Rosa, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+negative+inotropic+effect+of+cocaine+in+rat+ventricle+strip%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cient+Venez%22%5BJournal%5D)">Direct negative inotropic effect of cocaine in rat ventricle strip.</a> Acta Cient Venez. 47 (1), 17-23 (1996).</li>
<li>Näbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+inotropic+effects+in+isolated+ventricular+myocardium+from+nonfailing+and+terminally+failing+human+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Positive inotropic effects in isolated ventricular myocardium from nonfailing and terminally failing human hearts.</a> Eur J Clin Invest. 18 (6), 600-606 (1988).</li>
<li>Gao, W. D., Perez, N. G., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+cycling+and+contractile+activation+in+intact+mouse+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium cycling and contractile activation in intact mouse cardiac muscle.</a> J Physiol. 507, 175-184 (1998).</li>
<li>Bluhm, W. F., Kranias, E. G., Dillmann, W. H., Meyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholamban%3A+a+major+determinant+of+the+cardiac+force-frequency+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Phospholamban: a major determinant of the cardiac force-frequency relationship.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 278 (1), H249-H255 (2000).</li>
<li>Redel, A., Baumgartner, W., Golenhofen, K., Drenckhahn, D., Golenhofen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+activity+and+force-frequency+relationship+of+isolated+mouse+papillary+muscle%3A+effects+of+extracellular+calcium+concentration%2C+temperature+and+contraction+type%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Mechanical activity and force-frequency relationship of isolated mouse papillary muscle: effects of extracellular calcium concentration, temperature and contraction type.</a> Pflugers Arch. 445 (2), 297-304 (2002).</li>
<li>Uhl, S., Mathar, I., Vennekens, R., Freichel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenylyl+cyclase-mediated+effects+contribute+to+increased+Isoprenaline-induced+cardiac+contractility+in+TRPM4+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22JMCC%22%5BJournal%5D)">Adenylyl cyclase-mediated effects contribute to increased Isoprenaline-induced cardiac contractility in TRPM4 deficient mice.</a> JMCC. 74, 307-317 (2014).</li>
<li>Allen, D. G., Jewell, B. R., Wood, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+contractility+of+mammalian+myocardium+at+low+rates+of+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Studies of the contractility of mammalian myocardium at low rates of stimulation.</a> J Physiol. 254 (1), 1-17 (1976).</li>
<li>Pieske, B., Maier, L. S., Schmidt-Schweda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sarcoplasmic+reticulum+Ca2%2B+load+in+human+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Sarcoplasmic reticulum Ca2+ load in human heart failure.</a> Basic Res Cardiol. 97, Suppl 1. 163-171 (2002).</li>
<li>Koch-Weser, J., Blinks, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+the+Interval+between+Beats+on+Myocardial+Contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">The Influence of the Interval between Beats on Myocardial Contractility.</a> Pharmacol Rev. 15, 601-652 (1963).</li>
<li>Bocalini, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+remodeling+after+large+infarcts+in+rat+converts+post+rest-potentiation+in+force+decay%5BTitle%5D)+AND+%22Arq+Bras+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Myocardial remodeling after large infarcts in rat converts post rest-potentiation in force decay.</a> Arq Bras Cardiol. 98 (3), 243-251 (2012).</li>
<li>Juggi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ischemia-reperfusion+on+the+post-rest+inotropy+of+isolated+perfused+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of ischemia-reperfusion on the post-rest inotropy of isolated perfused rat heart.</a> J Cell Mol Med. 6 (4), 621-630 (2002).</li>
<li>Lakatta, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+Bowditch%3A+the+convergence+of+cardiac+chronotropy+and+inotropy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Beyond Bowditch: the convergence of cardiac chronotropy and inotropy.</a> Cell Calcium. 35 (6), 629-624 (2004).</li>
<li>Taylor, D. G., Parilak, L. D., LeWinter, M. M., Knot, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+rat+left+ventricle+force+and+Ca2%2B+-frequency+relationships%3A+similarities+to+dog+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Quantification of the rat left ventricle force and Ca2+ -frequency relationships: similarities to dog and human.</a> Cardiovasc Res. 61 (1), 77-86 (2004).</li>
<li>Schmidt, U., Hajjar, R. J., Gwathmey, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+force-interval+relationship+in+human+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">The force-interval relationship in human myocardium.</a> J Card Fail. 1 (4), 311-321 (1995).</li>
<li>Rossman, E. I., Petre, R. E., Chaudhary, K. W., Piacentino, V. 3rd, Janssen, P. M., Gaughan, J. P., Houser, S. R., Margulies, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+frequency-dependentresponses+represent+the+pathophysiologic+signature+of+contractile+failure+inhuman+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22JMCC%22%5BJournal%5D)">Abnormal frequency-dependentresponses represent the pathophysiologic signature of contractile failure inhuman myocardium.</a> JMCC. 36 (1), 33-42 (2004).</li>
<li>Moran, A. E., Forouzanfar, M. H., Roth, G. A., Mensah, G. A., Ezzati, M., Murray, C. J., Naghavi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+trends+in+ischemic+heart+disease+mortality+in+21+world+regions%2C+1980+to+2010%3A+the+Global+Burden+of+Disease+2010+stud%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Temporal trends in ischemic heart disease mortality in 21 world regions, 1980 to 2010: the Global Burden of Disease 2010 stud.</a> Circulation. 129 (14), 1483-1492 (1980).</li>
<li>Lee, J. A., Allen, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+intracellular+free+calcium+concentration+during+long+exposures+to+simulated+ischemia+in+isolated+mammalian+ventricular+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in intracellular free calcium concentration during long exposures to simulated ischemia in isolated mammalian ventricular muscle.</a> Circ Res. 71 (1), 58-69 (1992).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını var olduğunu beyan ederiz.

Bu yazıda farelerde kalp fizyolojisi ve patoloji ile ilişkili çok sayıda bilimsel sorulara cevap olarak transgenik hatların analizi ve yeni farmasötik yaklaşımların keşfedilmesi desteklemek için kullanılabilir in vitro fare papiller kas kontraktilitesini araştırmak için bir yöntem açıklanmaktadır Kalp bozuklukları tedavi etmek için. Biz kalp kası kasılma, fizyolojik, patolojik ve farmakolojik özelliklerini değerlendirmek için bu yöntemin kullanımını göstermektedir (Şekil 3&#39;e bakın). Ek uygu...

Kalp kasılmasında için rollerini atıfta iyon kanalları gibi proteinlerin incelenmesi, farklı patomekanizmaların keşfetmek ve iskemi ve kalp yetmezliği gibi kalp hastalıkları için yeni tedavi stratejilerinin oluşturulması esastır. Memeli kardiyomiyositlerde Kontraktil fonksiyonu çeşitli iyon kanalları, taşıyıcılar ve diğer proteinler ile modüle edilmesi bilinmektedir. Aksiyon potansiyeli 2+ kanalları dışı alandan Ca 2 + akını yol açar ve daha sonra Ca 2 + hücresel daralma 2. tetikler Ca 2 + salınımını (YÜÇAM) 1, -kaynaklı Ca voltaj bağımlı sarkolemmal L-tipi aktivasyonunu uyarılmış. Fizyolojik veya patolojik stres kalp kontraktilite ve adaptasyon merkezi bir rol oynar -signaling Ca 2 +. Katekolaminler böylece cAMP&#39;yi sentezler adenilil siklaz (AC) uyarıcı, kalp β-adrenerjik reseptörleri aktive. Aktif hale, protein,n Ca 2 + transientler ve kardiyak kontraktilite 1,3,4 modifikasyonu ile sonuçlanan L-tipi Ca 2 + kanalları, fosfolamban&#39;ın ve ryanodin reseptörleri gibi farklı hücre içi ve zar bağlı proteinleri fosforile A (PKA) kinaz. cAMP fosfodiesteraz (PDE) tarafından parçalanır. Β-adrenoseptörleri dışında Gs-bağlanmış reseptörlerin aktivasyonu, aynı zamanda, cAMP birikmesine yol açar. Izole ventriküler kas şeritlerinde kontraktilite ölçümleri tekniği de daha memeli türler 5-8 için kurulmuştur. Genin olasılığı farelerde hedef dayanarak fare kalp fizyolojisi analiz yöntemleri kurmak önemlidir. Ancak, farelerde izole kas hazırlıkları fizyolojik özellikleri hakkında varolan verileri deneysel koşullara 9-12 bağlı olarak değişiklik gösterir. Anlatılan yöntem sol ventrikül papiller kas öncesi kardiyak kontraktilite analiz etmek için kullanılırin vitro parations. Kardiyak kontraktilite incelenmesi kan basıncı, nörohümoral stimülasyonu ve fiziksel veya metabolik stres gibi in vivo olarak kardiyak kontraktiliteyi, modifiye etkilerin yokluğunda gerçekleştirilir. Müteahhitlik kas hazırlık dayak oranı titizlikle tanımlanmış ve keyfi değiştirilebilir. Seğirme kuvvet belirli kalsiyum konsantrasyonu gibi uyaranlara, frekans veya sıcaklık yenerek bağlamında analiz edilebilir. Buna ek olarak, bu yöntem, farklı sinyal geçiş yolu bileşenlerinin veya araştırmak ve yukarıda belirtilen deney koşullarının kontrol edilmesi suretiyle genetik olarak modifiye edilmiş fare modellerinde kalp performansını karşılaştırmak için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9434 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5280 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat heptahidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230391</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P 5655</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Bütandion monoksim</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>3-İzobutil-1-metilksantin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5879</td><td>Tehlike ifadesi H 302, DMSO'da çözün</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>İzoprenalin hidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5627</td><td>Tehlike ifadesi H 315-H319-H335</td></tr><tr><td>Sodyum Heparin 250.000 IE / 10 ml</td><td>ratiopharm</td><td>PZN 3874685</td><td></td></tr><tr><td>Histamin dihidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7250</td><td>Tehlike ifadesi H 315-H 317-H319- H334-H335</td></tr></tbody></table> Serisi

farelerde kardiyak inotropiyi soruşturma İzole papiller kaslar kontraktilite Ölçümleri

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

Yetişkin fare kalpleri izole papiller kas farklı fizyolojik / patolojik koşullar kardiyak kontraktiliteyi incelemek için kullanılabilir. Kasılma özellikleri bağımsız gibi damar tonusunu veya nörohumoral durumu gibi dış etkilerden değerlendirilebilir. Bu izole kardiyak miyositler tek hücreli ölçümler arasında ve ekokardiyografi gibi in vivo çalışmalarda bilimsel bir yaklaşım gösteriyor. Mükemmel bir model kalp fizyolojisi / patofizyolojisini ve farmakolojik maddeler ile modülasyon ve transgenik hayvan modelleri keşfi gibi araştırmalar için kullanılabilir Dolayısıyla, papiller kas preparasyonlar vermektedir. Burada, bir organ banyosu kurulumunda kardiyak kontraktilite araştırmak için fare sol ön papiller kas izole bir yöntem açıklanmaktadır. Ventriküler duvara izole edilmiş bir kas şerit hazırlanmasında aksine, papiller kas, kas tissu zarar vermeden toto hazırlanabilirciddi e. Organ banyosu kurulumun birkaç ısı kontrollü, gazlanmış ve elektrot donatılmış organ banyosu daireden oluşur. İzole papiller kas organ banyosu odasında sabit ve elektriksel uyarılır. Uyarılmış seğirme gücü gibi kuvvet genliği seğirme ve kinetik analiz edilir seğirme gibi basınç dönüştürücü ve parametreler kullanılarak kaydedilir. Farklı deney protokolleri, katekolaminlerin ya da diğer ilaç olarak kontraktil ajanlar, kalsiyum ve frekansa bağlı kasılma yanı sıra doz-tepki eğrileri araştırmak için gerçekleştirilebilir. Ayrıca, akut iskemi gibi patolojik durumlar simüle edilebilir.

İzole fare papiller kas hazırlıkları kontraktilite ölçümleri için bu yazının protokol fizyolojik koşullar altında tekrarlanabilir deneysel sonuçlar elde etmek için optimum koşullara ayarlanmıştır. Optimal deneysel koşullar tanımlamak için biz organ banyosu sıcaklığı ve hücre dışı kalsiyum konsantrasyonu (ayrıca 12 bakınız) değişen Pilot deneyleri yaptık. Burada açıklanan protokol 1,5 mM hücre dışı kalsiyum konsantrasyonu ile 32 ° C arasındaki bir sıcaklıkta gerçekleştirildi. Bazal...

Murin sol ventrikül papiller kas in vitro kardiyak kontraktiliteyi araştırmak için kullanılabilir. Bu makalede ayrıntılı olarak izolasyon ve deneysel protokoller kalp kasılma özelliklerini incelemek için açıklar.

Farelerde Kardiyak inotropiyi Soruşturma İzole papiller Kaslar kontraktilite Ölçümleri

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerde in vitro kardiyak kontraktil fonksiyonun incelenmesi için sağlıklı ve bütün papiller kasları izole etmektir. Bu işlem, önce kalbin izole edilmesi ve ardından iskemik hasarı önlemek amacıyla kardiyoplejik bir solüsyona daldırılarak kasılmaların durdurulmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, bütün sol ventriküler anterior papiller kas izole edilir ve tespit sütürleri ile donatılır.Kas daha sonra kuvvet transduserine monte edilir ve organ banyosu haznesine aktarılır. Son adımda, in vitro ortamda papiller kas kasılmalarını başlatmak için papiller kas alan elektrik impulsları ile stimüle edilir. Sonuç olarak, çeşitli fizyolojik ve patolojik durumların kalp kasının kontraktilitesi üzerindeki etkileri kuvvet transduserine iletilebilir ve kaydedilebilir.Bu yöntem, nörohümoral ve vasküler etkilerin yokluğunda, sol ventrikül papiller kaslarının in vitro kalp kontraktilitesini analiz etmek ve ilgilenilen kardiyak kontraktil özelliklerin doğrudan değerlendirilmesini sağlamak için kullanılabilir. Papiller kas preparatları, farmakolojik ajanların kalp kontraktilitesi üzerindeki etkilerinin araştırılmasına olanak tanıyarak, kalp fizyolojisi ve patofizyolojisinin incelenmesi için mükemmel modeller oluşturur.Bu yöntemle ilgili ilk fikrimiz, kalsiyumla aktive olan seçici olmayan bir iyon kanalının eksik olduğu farelerde kardiyovasküler bir fenotip bulmamızla ortaya çıktı ve bu durum, beta AIC sinyal yolundaki spesifik inotropik değişikliklerin keşfine yol açtı. İşleme, sekiz ile 12 haftalık bir fareyi diseksiyon tahtasına sırtüstü pozisyonda yerleştirerek başlayın. Ardından, keskin kemik makası kullanarak göğüs kafesini her iki taraftan lateral olarak açın ve diyaframı kesin.Ardından küt uçlu pens ile vasküler kısımlardan kalbi tutun ve makas kullanarak kalbi akciğerlerden ve çevre dokulardan hızlıca ayırın. Atan kalbi, oksijenle gazlanmış ve soğutulmuş hazırlama çözeltisiyle dolu bir Petri kabına aktarın ve kalp kasılmalarını uyarmak için kardiyak apexe pens ile hafifçe dokunun. Kalp tamamen kansız kaldığında, kalbi diseksiyon kabına aktarın ve kalbi dorsal pozisyonda sabitlemek için sağ ventrikülden küçük bir iğne geçirin.Şimdi, kabı bir stereo mikroskobun altına yerleştirin ve her iki atriyumu atriyoventriküler seviyeden ayırmak için mikrosirürji makası kullanın. Kalbi yaklaşık 180 derece döndürün ve atriyoventriküler kapak seviyesinden kalbin apeksine kadar sol ventrikül duvarı boyunca bir kesi yapın. Kalbe herhangi bir mekanik basınç uygulamamaya dikkat edin.Ardından kalbi eski konumuna getirin. Sonra sol ventrikülü açın ve her iki sol ventriküler papiller kası açığa çıkaracak şekilde sol taraftaki serbest duvarı forsepsle sabitleyin. Sol anterior papiller kasın her iki yanındaki ventrikül dokusunu lateralden dikkatlice kesin.Papiller kas preparatındaki valvüler SA'nın bir kısmını korumaya özen gösterin. Ardından, kalan ventriküler duvar dokusunu papiller kastan ayırın ve kaslı kısma iki düğümle bir ipek iplik, papiller kasın valvüler yelkenine ise bir düğümle bir ipek iplik bağlayın. Tek düğümlü preparat.Hazırlığı, önceden hazırlanmış bir organ banyosu haznesine sabitleyin. Ardından fiksasyonun hemen ardından, dokuyu 100 mA akım ve 1 Hz stimülasyon frekansında, iki milisaniyelik dikdörtgen darbelerle uyarın. Ve kaydı başlatın.Kullanılan organ banyosu tipine göre çözeltiyi uygun şekilde değiştirin. Mekanik ön gerilimi, ön gerilimdeki artışın ardından seğirme kuvvetinde daha fazla bir artış görülmeyene kadar 45 ila 60 dakikalık bir süre boyunca kademeli olarak artırın ve ardından istenen alt deneysel analizi başlatın. Kardiyak kontraktilite; seğirme kuvveti, zirveye ulaşma süresi ve yarı maksimum gevşeme süresi dahil olmak üzere çeşitli parametrelerle karakterize edilebilir.Atım hızı ile seğirme kuvveti arasındaki korelasyon, kuvvet-frekans ilişkisi ile hesaplanır. Örneğin, bu deneyde stimülasyon frekansı 0.1'den beş hertz'e kademeli olarak artırılmış ve bu durum kardiyak kontraktilitede değişikliklere yol açmıştır. Dinlenme sonrası potansiyasyon protokolü, önceki bir stimülasyonu takip eden belirli süreli bir dinlenme döneminden sonra gözlemlenen seğirme kuvveti genliğindeki değişimleri göstermektedir.Organ banyosundaki fizyolojik solüsyonun kalsiyum konsantrasyonu değiştirilerek, beta reseptörlerin aktivasyonuyla aracılık edilen inotropik etkileri değerlendirmek için kontraktil aparatın kalsiyum duyarlılığı incelenebilir. İzole papiller kas, iskemiyi simüle etmek amacıyla bu temsili deneyde gösterildiği gibi izopren ile de işleme tabi tutulabilir. In vitro ortamda kaslar, %95 azot ve %5 karbondioksit ile havalandırılan glukoz ve piruvat içermeyen hücre dışı solüsyona maruz bırakılır; bu durum, grafikte gösterildiği üzere kasılma kuvvetinde azalmaya ve iskemik kontraktür gelişmesine yol açar.Bir örneğin diseksiyonu ve dengelenmesi konusunda uzmanlaşıldıktan sonra, mekanik veya metabolik hasar oluşturmadan hazırlığın dikkatlice izole edilmesi ve monte edilmesi için zaman ayrılsa dahi, kas preparatının hazırlanması yaklaşık 19 dakikada tamamlanabilir. Bu prosedürün ardından, ek soruları yanıtlamak amacıyla keskin elektrot ölçümleri, enzim bağlantılı immünosorbent assay'ler ve western blot analizi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu teknik, kardiyak fizyoloji ve farmakoloji araştırmaları ile çeşitli transgenik kemirgen modellerinde kardiyak fenotip incelemeleri için kritik bir yaklaşımdır.

contractility-measurements-on-isolated-papillary-muscles-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Transgenik farelerin genleriyle fizyolojik fonksiyonu atfedilmesi de son derece yararlı olmuştur. Genel olarak böyle, araştırma ve hava yolunun fonksiyonel çalışmalar gibi, özellikle, sıçan modellerinde doğru dikkate değer bir değişim geçirmiş. Burada protokolleri...

Fare kullanarak Trakeal Konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise

Yabani tip ve mutant farelerden alınan bireysel kardiyomiyositler, kasılmalarını ve kalsiyum geçişlerini incelemek için kalpten izole edilebilir. Bu, hücresel disfonksiyonun herhangi bir nedenden dolayı kalp disfonksiyonuna katkısının karakterizasyonuna izin verir.

Fare kardiyomiyositlerde İzolasyon ve Fizyolojik Analizi

Bu makale, farklı kalp atış hızlarında basınç/hacim analizi yoluyla murin sol ventrikül fonksiyonunun ölçümünü açıklamaktadır.

Bowditch Efekt incelenmesi: Basınç Hacim İlişkisi Tedbir Fare Kardiyak Kateterizasyon

Bu makale, sıçan kalbinden izole edilen kardiyak miyositlerde kasılma sırasında miyofilament Ca2+ duyarlılığındaki değişiklikleri değerlendiren bir protokolü açıklamaktadır. Kardiyak elektrofizyoloji, sistolik/diyastolik sitozol Ca2+ seviyeleri ve kasılma/gevşeme ile birlikte bu ölçüm, sağlıklı ve hastalıklı kalplerde kardiyak uyarılma-kasılma eşleşmesine aracılık eden mekanizmaların desteklenmesinde zorunludur.

Myofilament Ca Değerlendirilmesi<sup&gt; 2+</sup&gt; Duyarlılık temelinde Kardiyak Uyarma-kasılma Kaplin

Bu protokol, farelerde kalp ve kalp kapakçığı fonksiyonunun kapsamlı fenotiplemesi için ekokardiyografik yaklaşımın ayrıntılı bir tanımını sağlar.

Farelerde Kalp Kapak Hastalıkları Kapsamlı Fenotipik Karakterizasyonu için ekokardiyografik Yaklaşımlar ve Protokoller

Murine miyositlerin izolasyonu ve aynı anda gerilim veya kalsiyum izlerinin nasıl elde edilecegini, eşzamanlı dijital hücre geometrisi ölçümleri ile floresan fotometri kullanarak sarcomere kısaltma izleriyle birlikte saglamak için metodolojiyi savuruyoruz.

İzole Murine Ventriküler Miyositlerin Optik Görüntülemesi

Burada, septal arter kanüle edildiği ve basınçlandırıldığı için kılcal yataklar ve perisitler de dahil olmak üzere damar ağacı bileşenlerinin yanı sıra basıncı koruyan arteriyel perfüzyon basıncının ve akışının eks vivo izlenmesi ile canlı murine kalp dokusundaki koroner mikrositülasyonu incelemek için bir protokol sunulmaktadır.

Fare Kalbinde Kılcal Damarlar, Arterioles ve Perisitlerin Dinamik Ölçümü ve Görüntülenmesi

İzole sıçan miyositlerinde kalsiyum (Ca2+) geçici ölçümü ile birlikte sarkomer uzunluğu tespiti yoluyla kontraktil fonksiyonun ölçümünü tanımlayan bir dizi protokol sunulmaktadır. Bu yaklaşımın kalp yetmezliğinin hayvan modellerindeki çalışmalar için uygulanması da dahil edilmiştir.

Kemirgen Miyositlerde Kardiyak Kasılma Disfonksiyonu ve Ca2+ Geçicilerinin Analizi

Bu protokol, klinik öncesi gelişim sırasında ilaca bağlı kontraktilitedeki değişiklikleri değerlendirmek için güvenilir bir platform olan MyoBLAZER sistemi ile donör kalplerinden alınan yetişkin insan primer kardiyomiyositlerinde kontraktilitenin nasıl ölçüleceğini açıklar.

İzole Yetişkin İnsan Primer Kardiyomiyositlerinde Kalp Kontraktilitesinin Ölçülmesi

Hızlı miyokard ve kardiyak gevşeme normal fizyoloji için gereklidir. Mekanik gevşeme mekanizmalarının artık gerinim oranına bağlı olduğu bilinmektedir. Bu protokol, gevşemenin mekanik kontrolünü daha fazla incelemek için deneylerin edinilmesi ve analizine genel bir bakış sağlar.

Sağlam Kardiyak Trabeküller Kullanılarak Gevşemenin Mekanik Kontrolü

Öğrenin farelerde izole papiller kas kontraktilite ölçümleriyle kardiyak inotropiyi incelemeyi. Bu yöntem, kardiyak fizyoloji ve farmakoloji araştırmalarında kalp kası fonksiyonunu doğrudan değerlendirmeyi sağlar.

Farelerde Kardiyak inotropiyi Soruşturma İzole papiller Kaslar kontraktilite Ölçümleri

Daha fazla video keşfet