Name: Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Öğrenin farelerde mesenterik damarlarda intravital mikroskopi ile lökosit-endotelyal ve trombosit-lökosit etkileşimlerini canlı görüntülemeyi. Bu yöntem inflamasyon süreçlerini gerçek zamanlı analiz etmenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1) tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri Alman hayvan koruma kanunu (TierSchG) uygun olarak yapılmıştır. FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php) ve ulusal hayvan refahı vücut GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html) tarafından tanımlanan fareler ev sahipliği ve iyi hayvan uygulamalarına uygun olarak ele alındı. Freiburg Üniversitesi hayvan refahı komitesi yanı sıra yerel yönetimler (Regierungspräsidium Freiburg) tüm hayvan deneyleri onayladı. 1. Hayvan Taşıma, hazırlanması ve Enflamasyon indüksiyonu <ol><li> 20 g - 16 ağırlık aralığı ile 6 haftalık erkek fareler - 4 kullanın. Not: fareler eski veya daha ağır olmaları durumunda, mikroskobik gözlem sınırlayan, damar etrafındaki aşırı yağ sunuyoruz. </li><li> Ameliyat öncesinde tüm araçları ve mikroskop tablosunu sterilize edin. </li><li> Enjekte 20 mg / kg LPS (lipopolisakarit) intraperitonal olarak 4 bakteriyel Inflamm uyarılması için bir oturma fare içine mikroskop önce saattirme. </li><li> Plastik odası ve mezenterik doku nemlendirmek için 37 ° C sıcaklıkta bir su banyosu içinde bir% 0.9 tuzlu su çözeltisi Prewarm. </li><li> Sağ mikroskopi işlem öncesi intraperitonal ketamin enjekte (100 mg / kg) ve ksilazin (5 mg / kg) ile fare anestezisi. Alternatif anestezi, örneğin,% 2 izofluran teneffüs kullanılabilir. Refleks uyarım (firma basınç ayak veya kuyruk tutam) yanıt kaybı ile doğru anesthetization onaylayın. </li><li> Bir tıraş makinesi kullanarak karın atmaktadır ve etanol% 70 doymuş gazlı bez ile gevşek saç çıkarın. </li><li> Anestezi altında iken, kuruluk önlemek için fare gözleri veteriner merhem sürün. </li></ol> 2. Cerrahi <ol><li> % 70 etanol kullanılarak karın sterilize edin. Bu yöntem, steril bir yöntem değildir, deney sonunda öldürücü olabilir. </li><li> Median laparotomi gerçekleştirin: küçük, kavisli bir forseps ve küçük bir makas kullanarak karın cildi açın. Epi tanımlayıngastrical gemiler damarları korumak için, linea alba bölgesinde periton açın ve. </li><li> Nemli doku tutmak için karın boşluğuna önceden ısıtılmış tuzlu su bir kaç damla uygulanır. </li><li> Floresan 50 ul rodamin 6G 9,10 daha önce tanımlandığı gibi, retro-orbital (1 mg / mi) enjekte edilmesiyle Etiket lökositlerin ve trombositlerin. </li><li> 10 cm çapında bir petri içinde ileumand yerinde bunun bir döngü exteriorize ve 37 ° C uygulayarak nemli doku tutmak için emin olun tuzlu su çözeltisi (% 0.9) her dakika önceden ısıtılmış. </li></ol> 3. Intravital Mikroskopi <ol><li> Mikroskop altına Fare yerleştirin ve 200 çapında mezenter ven getirmek - görünümünde merkezinde 300 um. Hiçbir görünür yağ çevresi ile bir gemi seçin. </li><li> Böylece endotel uyarılmasını önlemek mezenter damarlarını dokunmayın. Dikkatli ileum döngü Kolu. </li><li> Kan hücresi endotel etkileşimlerini görselleştirinBir ters çevrilmiş veya dik bir mikroskop ve mikroskop yazılımı kullanarak bir kamera ile. Tutanak kan fare başına 4 farklı damarlarda 1 dakika için hücre-endotelyal etkileşimleri. </li><li> Görüntüleme Deneylerin tamamlanmasından sonra, servikal dislokasyon ile fare öldürülür. </li></ol> 4. Analiz <ol><li> Analiz çevrimdışı yürütmek ve tüm parametreler için kör. Herhangi bir uygun yazılım programı kullanarak analiz gerçekleştirin. </li><li> Intraluminal kan hücresi akımı odaklanmış yüksek zaman çözünürlüklü sine-klipleri istikrarlı ve interindividually karşılaştırılabilir kan akımı koşulları (maksimal kare hızı) onaylayın. </li><li> Haddeleme lökosit sayısını ölçmek. Bunun damar yoluyla dikey bir çizgi çizin ve 1 dakika içinde bu çizgiyi tüm lökositlerin sayısı. </li><li> Tek lökosit stabil endotel üzerinde yuvarlanma sırasında 50 mikron mesafe geçmek gerekiyor zamanı ölçerek haddeleme hızı belirleyin. Bunu yapmak için, 50 um t mesafede iki dikey çizgi çizinven hrough. <ol><li> Temsili bir lökosit gerekli zaman (mm / s) üzerinden 50 mikron bölerek other.Calculate bir hattan lökositlerin hız almak için gereken süreyi ölçün. </li></ol></li><li> 0.04 mm&#39;lik bir 2 alanda lökosit adezyonu ölçün. Bunu yapmak için, damara 200 mikron yan uzunluğunda bir kare çizin. <ol><li> Bu kare içinde 30 saniye boyunca hiçbir görünür hareket olarak tanımlanan firma yapışık lökositler, Kont. </li></ol></li><li> Platelet lökosit etkileşimlerini ölçmek için tek lökosit bağlı trombositlerin sayısını. </li></ol>

<ol><li>Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+fluorescence+microscopy+for+the+study+of+leukocyte+interaction+with+platelets+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+enzymology%22%5BJournal%5D)">Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells.</a> Methods in enzymology. 300, 462-481 (1999).</li>
<li>Atherton, A., Born, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+investigations+of+the+adhesiveness+of+circulating+polymorphonuclear+leucocytes+to+blood+vessel+walls%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphonuclear leucocytes to blood vessel walls.</a> The Journal of physiology. 222, 447-474 (1972).</li>
<li>Duerschmied, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+stimulates+platelet+receptor+shedding+by+tumor+necrosis+factor-alpha-converting+enzyme+%28ADAM17%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+thrombosis+and+haemostasis+%3A+JTH%22%5BJournal%5D)">Serotonin stimulates platelet receptor shedding by tumor necrosis factor-alpha-converting enzyme (ADAM17).</a> Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. 7, 1163-1171 (2009).</li>
<li>Chauhan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAMTS13%3A+a+new+link+between+thrombosis+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">ADAMTS13: a new link between thrombosis and inflammation.</a> The Journal of experimental medicine. 205, 2065-2074 (1084).</li>
<li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+research%22%5BJournal%5D)">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvascular research. 5, 384-394 (1973).</li>
<li>Leister, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peritoneal+cavity+chamber+for+intravital+microscopy+of+the+liver+under+conditions+of+pneumoperitoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+endoscopy%22%5BJournal%5D)">A peritoneal cavity chamber for intravital microscopy of the liver under conditions of pneumoperitoneum.</a> Surgical endoscopy. 17, 939-942 (2003).</li>
<li>Duerschmied, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+serotonin+promotes+the+recruitment+of+neutrophils+to+sites+of+acute+inflammation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Platelet serotonin promotes the recruitment of neutrophils to sites of acute inflammation in mice.</a> Blood. 121, 1008-1015 (2013).</li>
<li>Herr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+fluoxetine+treatment+induces+slow+rolling+of+leukocytes+on+endothelium+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Acute fluoxetine treatment induces slow rolling of leukocytes on endothelium in mice.</a> PloS one. 9, e88316(2014).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab animal. 40, 155-160 (2011).</li>
<li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+routes+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab animal. 37, 26-32 (2008).</li>
<li>Duerschmied, D., Bode, C., Ahrens, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+functions+of+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+haemostasis%22%5BJournal%5D)">Immune functions of platelets.</a> Thrombosis and haemostasis. 112, 678-691 (2014).</li>
<li>Wagner, D. D., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vessel+wall+and+its+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The vessel wall and its interactions.</a> Blood. 111, 5271-5281 (2008).</li>
<li>Gawaz, M., Fateh-Moghadam, S., Pilz, G., Gurland, H. J., Werdan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+activation+and+interaction+with+leucocytes+in+patients+with+sepsis+or+multiple+organ+failure%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Platelet activation and interaction with leucocytes in patients with sepsis or multiple organ failure.</a> European journal of clinical investigation. 25, 843-851 (1995).</li>
<li>Sarma, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+platelet+binding+to+circulating+monocytes+in+acute+coronary+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Increased platelet binding to circulating monocytes in acute coronary syndromes.</a> Circulation. 105, 2166-2171 (2002).</li>
<li>Sumagin, R., Sarelius, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-alpha+activation+of+arterioles+and+venules+alters+distribution+and+levels+of+ICAM-1+and+affects+leukocyte-endothelial+cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Heart+and+circulatory+physiology%22%5BJournal%5D)">TNF-alpha activation of arterioles and venules alters distribution and levels of ICAM-1 and affects leukocyte-endothelial cell interactions.</a> American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 291, H2116-H2125 (2006).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu yazıda hazırlık ve in vivo farelerin mezenter damarlarının intravital mikroskopi performansını açıklamak. Bu yöntem bize canlı organizmada doğrudan lökosit-endotel ve trombosit endotel etkileşimleri 11 gözlemleme fırsatı veriyor. Endotel inflamasyon için erken yanıt olarak aktive olur ve haddeleme, yapışma ve göçüne 12 sonuçlanan lökositler ve trombositler ile etkileşime girer. Ancak lökositler de trombosit sözde şekillendirme ile etkileşim, platelet lökosit...

Bu protokolün amacı, inflamatuvar koşullarda lökosit-endotel ve lökosit-trombosit etkileşimleri doğrudan gözlem için fareler yaşayan mezenter damarların intravital mikroskopi basitleştirilmiş tekniği tanımlamaktır. Intravital mikroskopi inflamatuar lökosit işe alma ve işlevini anlamak için önemsiz ama önemli değil enflamatuvar durumlarda 1,2 altında in vivo lökosit-endotel etkileşimleri incelemek için geliştirilmiştir. Bu protokolde biz tarif yöntemi daha önce yayınlanan yayınlara göre geliştirilmiştir. Yayımlanmıştır ne büyüyen trombüs 3 ve paralel olarak trombosit birleşmesini görselleştirmek benzer daha erken 4, bir batın mezenterik ven iletilen ışık mikroskobu ile incelenir. Bu tür sıçanlarda 5 veya fare karaciğer ve sıçanların 6 cremaster kas gibi içi hayati mikroskobu çeşitli modelleri vardır. Mezenter ven intravital mikroskopi geliştirilmiş ve birçok grup ile daha önceki çalışmalarda uygulanmıştır. / - - Kimin trombosit serotonin farmakolojik uzun vadeli tarafından tükenmiş farelere bulgular nöronal olmayan serotonin eksikliği ve karşılaştırılmıştır olan fareler, vahşi tip fareler ve triptofan hydroxylase1 (TPH1) arasında lökosit işe farklılıkları gözlemlemek için bu tekniği kullandık Uygulama, bir seçici serotonin tekrar-yükselme inhibitörü, fluoksetin 7. Biz de akut fluoksetin tedavisinin 8. sonrası lökosit-endotel etkileşimleri incelenmiştir. Bu model, hızla gerçekleştirilen ve lökosit-endotel ve trombosit lökosit etkileşimleri geçerli ölçümleri sağlar, çünkü bu protokolde, mezenter damarların intravital mikroskopi odaklanmak. Bu çok daha zor ve zaman alıcı kemik, karaciğer, deri, ya da cremaster kas gibi diğer organlara, intravital mikroskobiyle bulunmaktadır. kipBurada tarif edilen L, lipopolisakarit intraperitoneal enjeksiyonu gibi bir enflamatuar uyarıcı, ile challengeing sonrası inflamatuar hücre-hücre etkileşim tekrarlanabilir değerlendirilmesi için idealdir.

<table><tbody><tr><td>Rhodamine 6G</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; 989-38-8</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli'den lipopolisakkaritler 055: B5</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2637 &nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde mesenteriumda damarlardaki intravital mikroskopi lökosit-endotelyal ve trombosit-lökosit etkileşimleri

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

Intravital mikroskopi yaşayan hayvanlarda farklı farklı bölgelerde süreçleri ve damarları araştırmak için kullanılabilecek bir yöntemdir. Bu protokol, biz mezenter damarların intravital mikroskobu açıklar. Bu, in vivo olarak, lökosit-endoteliyal etkileşimleri gösteren tekrarlanabilir sonuçlar ile kısa bir süre içinde gerçekleştirilebilir. Biz endotel LPS mücadeleden sonra inflamatuar bir ayarı açıklamak. Ancak bu modelde biri bakteriyel kimyasal veya biyolojik gibi iltihaplı durumların birçok farklı türde uygulamak ve ilaçların yönetimini ve yaşam hayvan üzerindeki doğrudan etkileri ve lökosit işe üzerindeki etkisini araştırmak yapabilirsiniz. Bu protokol, farelerde ve damarlarda inflamatuar yanıt üzerindeki etkileri farklı tedaviler için başarılı bir şekilde uygulanmıştır. Burada, floresan rodamin 6G bu etiketleme yoluyla lökosit ve trombosit görselleştirme açıklar. Buna ek olarak, herhangi bir görüntüleme pe olabilirhedeflenen floresan etiketli moleküller kullanılarak rformed.

Bu protokolde tarif edilen deneysel ortamda bir genel görünüşü Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. Bu intravital mikroskobiyle gözlenebilir bir batın ileum-döngü ve kaplar, bir fare göstermektedir. Şekil 2 nedeniyle işlem görmemiş hayvanlarda aktivasyon belli ölçüde göstermektedir prosedür kendisi. Fakat hemen hemen hiç yavaş haddeleme ya LPS ile tedavi edilen farelere kıyasla, lökositlerin Sıkı yapışma vardır. Ayrıca, vahşi tipli fare ya içme suyu ya da tedavi edilmemiş farelerde 3 hafta iç...

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Bu prosedürün genel amacı, in vivo inflamasyon sırasında lökosit, endotel hücre ve trombosit lökosit etkileşimlerini incelemektir. Bu işlem, öncelikle bir farenin ilgili maddelerle ön işlemden geçirilmesi ve kan hücrelerinin işaretlenmesiyle gerçekleştirilir; ardından bir ileum loopu ve beraberindeki mezenterik damarlar eksternalize edilir ve seçilen bir mezenterik ven içerisinde meydana gelen STO hücre etkileşimleri intravital mikroskopi ile görüntülenir. Sonuç olarak, lökositler ve trombositlerin endotel hücrelerle veya birbirleriyle olan etkileşimleri analiz edilebilir.Bu yöntem, enflamasyon alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir; örneğin, farklı enflamasyon modelleri sırasında veya ilgi duyulan farklı ön tedavilerden sonra in vivo ortamda ne tür lökosit-endotelyal veya trombosit-lökosit etkileşimlerinin meydana geldiği gibi. Sahte bakteriyel enflamatuar yanıtı indüklemek için, intravital görüntülemeden dört saat önce, 16 ila 20 gram ağırlığında, dört ila altı haftalık erkek bir fareye IP yoluyla kilogram başına 20 miligram LPS enjekte edin. Bu sırada, plastik hazneyi ve mezanter dokusunu nemlendirmek için %0,9'luk salin çözeltisini 37 °C'lik bir su banyosunda önceden ısıtın.Ardından, LPS ile tedavi edilen farede ayak parmağı sıkıştırmasına yanıt verilmediğini gözlemleyerek anestezi derinliğinin uygun olduğunu doğrulayın ve ardından hayvanın boyutuna uygun şekilde pomad uygulayın, karnı bir tıraş makinesiyle temizleyin ve gevşek tüyleri %70 ethanol emdirilmiş gazlı bezle alın. Daha sonra, karnı açmak için küçük kavisli bir pens ve makas kullanın, epigastrik damarları tanımlayın ve damarları korumak için linea alba bölgesinde peritonu açın. Dokuyu nemli tutmak için abdominal kaviteye birkaç damla önceden ısıtılmış salin uygulayın ve ardından dolaşımdaki kan hücrelerini işaretlemek için retroorbital yolla 50 microliters rhodamine 6G enjekte edin.Ardından fareyi 10 santimetrelik bir Petri kabına yerleştirin, bir ileum halkasını dışarı çıkarın ve dokuyu nemli tutmak için her iki dakikada bir önceden ısıtılmış salin uygulayın. İntravital mikroskopi ile inflamatuar yanıtı gözlemlemek için fareyi mikroskobun altına yerleştirin ve çapı 200 ila 300 mikrometre olan, çevresinde mümkün olduğunca az yağ bulunan bir mezenterik veni görüş alanına getirin. Uygun mikroskop yazılımını kullanarak.Fare başına dört farklı venden bir dakika boyunca kan hücresi endotel etkileşimlerini kaydedin. Ardından, stabil ve bireysel kan akış koşullarını doğrulamak için hücreden hücreye yanıtları analiz edin. Yuvarlanan lökosit sayısını belirlemek için, ven boyunca dikey bir çizgi çizin ve bir dakika içinde bu çizgiyi geçen tüm lökositleri manuel olarak sayın.Yuvarlanma hızını belirlemek için, ven boyunca aralarında 50 µm mesafe olacak şekilde iki dikey çizgi çizin ve endotelyum üzerinde stabil şekilde yuvarlanan tek bir lökositin bu çizgiler arasından geçme süresini ölçün. Lökosit adezyonunu ölçmek için, ven içerisinde 200 x 200 µm boyutlarında bir kare çizin. Ardından, kare içerisinde 30 saniye boyunca görünür bir hareket sergilemeyen, sıkıca yapışmış lökositleri manuel olarak sayın.Son olarak, trombosit lökosit etkileşimlerini nicelleştirmek için bir lökosite bağlanmış trombosit sayısını manuel olarak sayın. Prosedürün kendisinden dolayı tedavi edilmemiş hayvanlarda belirli bir düzeyde aktivasyon olsa da, tedavi edilmemiş lökositlerde neredeyse hiç yavaş yuvarlanma veya sıkı adezyon görülmez. Nitekim, LPS uygulanan farelerde, dolaşımdaki kan hücrelerinin yuvarlanma hızında bir azalma ile birlikte daha yüksek sayıda yuvarlanan ve adere olan lökositler gözlemlenir.Bu deneyde, akut intraperitoneal fluoksetin uygulamasının hemen ardından, ek bir LPS uygulaması yapılmaksızın intravital mikroskopi gerçekleştirilmiştir. Fluoksetin ile tedavi edilen hayvanlarda, sıkıca yapışmış lökosit sayısının daha yüksek ve yuvarlanma hızlarının daha düşük olması, akut fluoksetin tedavisinin lökosit-endotel etkileşimleri üzerindeki etkisine işaret etmektedir. Ayrıca, LPS ile indüklenen peritonit sırasında bir mezenterik vende gerçekleşen trombosit-lökosit etkileşimlerini gösteren bu temsilci görüntüde gözlemlendiği üzere, lökositlerin etrafında trombositlerin kümelendiği ve bu komplekslerin damar duvarı ile etkileşimleri görülebilmektedir.Bu videoyu izledikten sonra, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini incelemek için intravital mikroskopinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız.

intravital-microscopy-leukocyte-endothelial-platelet-leukocyte

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Bu videoda, intraperitoneal olarak lipopolisakkarit enjekte edilen bir fare modelinin mezenterial damarlarındaki kan hücresi-endotel etkileşimlerinin gerçek zamanlı görselleştirmesini gösteriyoruz.

Bir Enflamasyon Fare Modelinde Kan Hücresi-Endotel Etkileşimlerini Analiz Etmek için İntravital Mikroskopi

Burada vasküler inflamasyon ve canlı farelerde trombüs oluşumu sırasında aktive endotel üzerindeki heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri görselleştirmek için floresan intravital mikroskobu deneysel bir tekniktir rapor. Bu mikroskobik teknoloji vasküler hastalığın moleküler mekanizmasını incelemek ve patofizyolojik durumlardaki farmakolojik ajanları test için değerli olacaktır.

Canlı Fare Damar İltihabı ve trombüs oluşumu sırasında Activated Endotel üzerinde heterotypic Trombosit nötrofil Etkileşimleri Gerçek zamanlı Görüntüleme

Anestezi uygulanmış farelerde intravital konfokal mikroskopi kullanarak kararlı durum ve enflamatuar koşullar altında mezenterik venlerdeki nötrofillerin ve monositlerin davranışını izlemek için bir protokolü detaylandırıyoruz.

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Monosit arteriogenesis periferik arter hastalığı bağlamında önemli arabulucu vardır. Bu iletişim kuralı bir membran benzeri matris ve intravital mikroskobu kullanarak, monosit enjeksiyon femoral arter ligasyonu fare modeli sonra monosit izleme ve tümör ile ilgili angiogenez inceler.

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

Burada, fare cremaster kasının post-kılcal venüzlerinde intravital mikroskopinin nasıl yapılacağını gösteriyoruz. Yaygın olarak farklı inflamasyon ve sepsis modellerine, özellikle kemokinler ve sitokinler tarafından indüklenenlere uygulanan, abartılı kas lökosit infiltrasyonu içeren muscolopatilerin çalışmasında önemini vurguluyoruz.

İntravital Mikroskopi Ile Değerlendirilen Farelerde Cremaster Kasın Lökosit İnfiltrasyonu

Lökosit ve trombositlerin işe alınması, arteriyogenez sırasında kollateral arterlerin etkili büyümesi için gerekli olan önemli bir bileşeni oluşturur. Multifoton mikroskopisi, arteriyogenez sırasında lökosit alımını ve ekstravazasyonunu incelemek için in vivo yüksek uzay-zamansal çözünürlüğe ve daha az foto-toksisiteye sahip hücre dinamiklerini izlemek için etkili bir araçtır.

Bir Murin Arka Bacak Modelinde Arteriyogenez Sırasında Lökosit Alımını İzlemek için Multifoton İntravital Görüntüleme

Bu protokol, mezenterik iskemi-reperfüzyon hasarını indüklemek ve mezenterik venüllerde nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) intravital mikroskopi kullanarak görüntülemek için bir yöntem sunar. Superior mezenterik arterdeki kan akışı 1 saat boyunca kısıtlandı, ardından reperfüzyon yapıldı ve lökosit yapışması ve NETosis'in doğrudan ölçülmesine izin verildi.

Mezenterik İskemi-Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Mezenterik Venüllerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İntravital Mikroskopi ile Görüntülenmesi

Inguinal lenf nodu (LN) intravital mikroskopi gerçekleştirmek için bir teknik özetlenmiştir. Böyle bir tekniği, gerçek zamanlı sağlar.

Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi

Biz aydınlık intravital mikroskopi, in vivo olarak nötrofil kemoatraktan kaynak yanıt nötrofil göçünü sırasında dinamik nötrofil-endotel hücre etkileşimleri ölçmek için bir protokol tanımlamaktadır. Nötrofil intraluminal tarama, fare Cremaster'ın kas dokusu transendoteliyal göç ve kemotaksis zaman lapsed video ImageJ ile fotoğraf ve takip ile görüntülendi.

Takip Nötrofil Lumen Crawling, intravital video Mikroskopi Doku transendoteliyal Göç ve Kemotaksis

Öğrenin farelerde mesenterik damarlarda intravital mikroskopi ile lökosit-endotelyal ve trombosit-lökosit etkileşimlerini canlı görüntülemeyi. Bu yöntem inflamasyon süreçlerini gerçek zamanlı analiz etmenizi sağlar.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Daha fazla video keşfet