Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Bu prosedürün genel amacı, in vivo inflamasyon sırasında lökosit, endotel hücresi ve trombosit lökosit etkileşimlerini araştırmaktır. Bu, ilk önce ön işlem, ilgilenilen maddelerle bir fare ve kan hücrelerinin bir ileum halkası olarak etiketlenmesiyle gerçekleştirilir ve eşlik eden mezsenter damarlar daha sonra dışlanır ve seçilen bir mezsenter ven içinde meydana gelen STO hücre etkileşimleri intra vital mikroskopi ile görüntülenir. Sonuç olarak, lökositler ve trombositler arasındaki etkileşimler endotel veya birbirleriyle analiz edilebilir.

Bu yöntem, farklı inflamasyon modelleri sırasında veya ilgilenilen farklı ön tedavilerden sonra in vivo olarak ne tür lökosit endotel veya trombosit lökosit etkileşimlerinin meydana geldiği gibi inflamasyon alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. İntra vital görüntülemeden dört saat önce, sahte bakteriyel enflamatuar yanıtı indüklemek için 16 ila 20 gramlık, dört ila altı haftalık bir erkek fareye kilogram LPS IP başına 20 miligram enjekte edin. Bu sırada plastik hazneyi ve mezsenter dokuyu nemlendirmek için 37 santigrat derece su banyosunda% 0.9'luk bir tuzlu su çözeltisini önceden ısıtın.

Daha sonra, LPS ile tedavi edilen farede ayak parmağı çimdiklemeye yanıt vermeyerek uygun anestezi derinliğini onaylayın ve daha sonra hayvan boyutuna merhem sürün, karnı bir tıraş makinesiyle temizleyin, gevşek tüyleri %70 etanole batırılmış gazlı bezle çıkarın. Daha sonra karnı açmak, epigastrik damarları tanımlamak ve damarları korumak için lineer alba bölgesindeki peritonu açmak için küçük bir kavisli forseps ve makas kullanın. Dokuyu nemli tutmak için karın boşluğuna birkaç damla ön ısıtılmış salin uygulayın, ardından dolaşımdaki kan hücrelerini etiketlemek için 50 mikrolitre çubuk Domine six G'nin retroorbital enjeksiyonu yapın.

Daha sonra fareyi 10 santimetrelik bir Petri kabına yerleştirin, bir illium halkasını dışlayın ve dokuyu nemli tutmak için her iki dakikada bir ön ısıtma salinini uygulayın. İntravital mikroskopi ile enflamatuar yanıtı görselleştirmek için, fareyi mikroskobun altına yerleştirin ve 200 ila 300 mikrometre çapında ve mümkün olduğunca az görünür çevredeki yağı görüş alanına getiren bir mezsenter damar getirin. Uygun mikroskop yazılımını kullanarak.

Kan hücresi endotel etkileşimlerini fare başına dört farklı damarda bir dakika boyunca kaydedin. Daha sonra, stabil olduğunu doğrulamak ve bireysel kan akış koşullarını girmek için hücreden hücreye tepkileri analiz etmek. Yuvarlanan lökositlerin sayısını ölçmek için, damar boyunca dikey bir çizgi çizin ve bu çizgiyi bir dakika içinde geçen tüm lökositleri manuel olarak sayın.

Yuvarlanma hızını belirlemek için, damar boyunca 50 mikrometre aralıklarla iki dikey çizgi çizin ve endotel üzerinde stabil bir şekilde yuvarlanırken tek bir lökositin çizgiler arasında geçmesi için geçen süreyi ölçün. Lökosit yapışmasını ölçmek için damarda 200 x 200 mikrometre kare çizin. Ardından, kare içinde 30 saniye boyunca görünür bir hareket göstermeyen sıkıca yapışan lökositleri manuel olarak sayın.

Son olarak, trombosit lökosit etkileşimlerini ölçmek için, bir lökosit'e bağlı trombosit sayısını manuel olarak sayın. Prosedürün kendisi nedeniyle tedavi edilmemiş hayvanlarda belirli bir derecede aktivasyon olmasına rağmen, tedavi edilmemiş lökositlerin neredeyse hiç yavaş yuvarlanması veya sıkı bir şekilde yapışması yoktur. Gerçekten de, LPS'ye meydan okunan farelerde dolaşımdaki kan hücrelerinin yuvarlanma hızında bir azalma ile daha yüksek sayıda yuvarlanma ve yapışma lökosit gözlenir.

Bu deneyde, fluoksetin ile akut intraperitoneal tedaviden hemen sonra daha fazla LPS zorluğu olmadan intravital mikroskopi gerçekleştirildi. Fluoksetin ile tedavi edilen hayvanlarda sıkıca yapışan lökositlerin daha yüksek sayıları ve daha düşük yuvarlanma hızlarının, akut fluoksetin tedavisinin lökosit endotel etkileşimleri üzerindeki etkisini gösterdiğine dikkat edin. Ayrıca, LPS'nin neden olduğu peritonit sırasında bir mezenterik ven ile trombosit lökosit etkileşimlerinin bu temsili görüntüsünde gözlemlendiği gibi, lökositlerin etrafındaki trombositlerin bir tingi ve bu komplekslerin damar duvarı ile etkileşimleri gözlemlenebilir.

Bu videoyu izledikten sonra, lökosit endotel ve trombosit lökosit etkileşimlerini araştırmak için inal mikroskopinin nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız.