Name: Biyomoleküllerin Geçici olarak Kontrollü Release için Yüzey Polielektrolit Elyaf Kompozit Yapı iskeleleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: Keşfedin yüzey polielektrolit kompleksasyon lifleri kullanarak kontrollü biyomolekül salınımı sağlayan doku mühendisliği iskeleleri oluşturmayı. Bu yöntem hücre nişini taklit eder ve sürdürülebilir biyokimyasal salınım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Mükemmeliyet onun Araştırma Merkezleri, mechanobiology Enstitüsü, Singapur biri tarafından yönetilen Singapur Ulusal Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir. MFAC 1122703037. BKKT mechanobiology Enstitüsü tarafından desteklenen Araştırma Bilim, Teknoloji ve Araştırma Ajansı (Singapur) ve Ulusal Ajans (Fransa) projesi numarası altında ortak program tarafından desteklenmektedir. Biz kanıt okuma video yapımında yardımcı olmak için el yazması ve Bayan Şafak JH Neo Sayın Daniel HC Wong teşekkür ederiz.

Polielektrolit Çözümleri 1. Hazırlanması <ol><li> Liao ve ark ayrıntılı olarak, kitosan saflaştırılır. Kısaca, bir% 1 oluşturmak% 2 çitosan solüsyonu (w / v) (hacim / hacim) asetik asit ve vakum filtre notu 93 filtre kağıdı kullanılarak. PH 10 dakika boyunca 1.200 xg&#39;de 7. Santrifüj çöktürülmüş kitosan stabilize kadar 5M NaOH kullanılarak süzüntü nötralize eder. Süpernatant boşaltacaktır ve kitosan yıkamak için deiyonize su ilave edilir. Santrifujleme ve yıkama adım iki kez daha tekrarlayın. Saflaştırılmış biçimini elde etmek üzere -80 ° C ve liyofilize edilir, O / N oranında çöktürüldü kitosan dondurun. Bir nemi kabine saflaştırılmış kitosan saklayın. </li><li> Steril doku kültürü kabına saflaştırılmış kitosan 1 gr tartılır. Biyolojik güvenlik kabinine UV lambası mümkün olduğu kadar yakın bir doku kültürü çanağı içinde kitosan yerleştirin ve 15 dakika boyunca UV ışığına maruz kalmaktadır. Steril forseps kullanılarak bir cam kap içine steril kitosan yerleştirin. Çözündürün çitosan 0 süzüldü kullanılarak.% 0.5 ve% 1 arasında bir nihai konsantrasyona kadar 15M asetik asit (a / h). </li><li> Alginik asit, sodyum tuzu 0.1 g tartılır ve (ağırlık / hacim) çözeltisi bir% 1 elde etmek üzere iyondan arındırılmış (DDI), su damıtılmış, 10 ml içinde çözülür. Tam çözünmeyi temin etmek amacıyla vorteks karıştırıcıda, en azından 2 saat boyunca alginik asit sodyum tuzu karıştırın. 0.2 mikron bir şırınga filtreden geçirilmiştir aljinat çözeltisi filtre. 4 ° C &#39;de aljinat çözeltisi saklayın. </li><li> Üretici tarafından tavsiye edilen şekilde, sinir büyüme faktörü (NGF), - örneğin vasküler endoteliyal büyüme faktörü (VEGF) veya beta insan rekombinant büyüme faktörleri sulandırın. </li></ol> IPC Elyaf 2. Çizim <ol><li> Benzer bir net yüke sahip polielektrolit çözeltisi 10-20 ul kısım halinde proteinleri, büyüme faktörleri veya diğer biyomoleküllerin karıştırın. Net bir negatif yük (örneğin bovin serum albümini [BSA]) ile Biyolojik moleküller aljinat çözeltisi ile karıştırılır. Net pozitif şarj (örn VEGF) ile Biyolojik moleküller ile karıştırılmalıdırçitosan solüsyonu. </li><li> Parafilm ile kaplı olan bir sabit ve düz bir yüzey üzerinde çitosan ve aljinat az miktar (10-20 ul) yerleştirin. çitosan ve aljinat damlacıkları yakın yerleştirilir fakat birbiri ile temas halinde olmalıdır. </li><li> Hafifçe kitosan ve aljinat damlacıklar halinde forseps bir çift her ucu batırın. Birlikte forseps kısma polielektrolitlerin damlacıklar getirin. Damlacıklarının birbirleriyle temas olduğunda, yavaş yavaş iki damlacıkları (Şekil 1A) arabiriminden IPC fiber çekmek için yukarı dikey forseps çekin. </li><li> Dikkatli bir şekilde dönen mandrel üzerine yapıştırılmış düz bir polimerik iskele olarak bir koleksiyoncu, forseps üzerine çizilen IPC fiberin ucunu yerleştirin (bkz bölüm 3 ve 4). Üniform ve IPC elyaf beadless oluşumuna izin vermek için 10 mm / sn arasında sabit bir hızda mandrel döndürün. Dahil bir patlama salınımına neden olur boncuk oluşturacak IPC lifleri çekme hızını artırmakbiyokimyasal ve erken fiber sonlandırma. 10 </li><li> Dahil etkinliğini belirlemek için, geri kalan tüm sıvılar 1X fosfat tamponlu salin içinde 500 ul (PBS) ile sulandırarak parafilm sol toplar. BCA (BSA) deneyi (VEGF ve NGF için) ELISA veya dahil biyomolekülün tespit etmek için uygun bir tahlil ile artığında protein ya da büyüme faktörü içeriğini ölçmek. </li></ol> Kompozit Hidrojel Pullulan-Dextran&#39;ın İskele (PD) Polisakkarit ve IPC Elyaf 3. Fabrikasyon <ol><li> IPC elyaf toplama gözden çıkarılabilir pullulan çerçeve Fabricating <ol><li> Pullulan polisakarit tartılır ve (ağ / hac), sulu çözelti% 20 oluşturmak için damıtılmış iyonu giderilmiş (DDI), su ile karıştırılır. Homojenliği sağlamak için pullulan çözüm O / N karıştırın. </li><li> 10 cm çaplı doku kültür polistiren (TCPS) çanak içine pullulan çözeltisi 15 g Cast. 37 ° C&#39;de pullulan çözeltisi O / N kurutun. 7 içine pullulan filmleri kesinmm 7 mm kare kare x. </li></ol></li><li> Pullulan-dekstran polisakarit çözeltisi hazırlanması <ol><li> Bir% 30 oluşturmak polisakaritlerin çözeltisi pullulan ve dekstran (w / v): DDI su (3: 1 oran). Polisakarit çözeltisi homojenliği sağlamak için O / N karıştırın. Yavaş yavaş% 20 bir son konsantrasyon elde etmek için polisakarit çözeltisine sodyum bikarbonat eklemek (a / h). Çözeltinin homojenliği sağlamak için O / N karıştırın. 4 ° C&#39;de polisakarit çözeltisi saklayın. </li></ol></li><li> Pullulan çerçeve üzerinde IPC lifleri Toplama <ol><li> Bir timsah klibi kullanarak kurban pullulan çerçevesi (bölüm 3.1) yapıştırın. Plastik kaplamalı yapışkan bant kullanılarak döner mandrel ucunda timsah klibi ve pullulan çerçeveyi yapıştırın. 10 mm / sn arasında sabit bir hızda yapıştırılmış çerçeve ile mandrel döndürün. pullulan çerçevesi istenilen yönlerde dönen mandrel üzerine yapıştırılmış olabilir. </li></ol></li><li> Bir forseps çifti (bölüm 1) ve ATTAC kullanarak IPC lifleri Beraberlikh dönen pullulan çerçeve üzerine IPC liflerinin çizilmiş sonu. Sabit bir hızda IPC lifleri çizin. IPC fiber terminal sonuna ulaştıktan sonra, N oda sıcaklığında / fiberler-on-frame yapısı O kurulayın. </li><li> PD hidrojel iskele içine IPC lifleri gömülmesi </li><li> . (W / v) sodyum sulu çözeltisi ve 100 ul 10M sodyum hidroksit trimetafosfat% 11, 100 ul, pullulan-dekstran çözeltisinin, her gram çapraz bağlanması 7 1-2 dakika boyunca, bir stirplate kullanılarak 60 rpm&#39;de çözelti karıştırın. Sodyum trimetafosfat ve sodyum hidroksit ilave edildikten sonra, polisakarit çözeltisi hemen çapraz olacaktır. IPC lifleri tamamen gömmek için lifler-on-frame yapı üzerine viskoz polisakkarit solüsyonu dökün. Kimyasal olarak çapraz bağlanmış kompozit iskeleleri (Şekil 1B) oluşturmak için 30 dakika boyunca 60 ° C de bir araya pullulan-dekstran-IPC lifler (PD-IPC) inkübe edin. </li><li> DİKKAT: davlumbaz adım 3.3.2 uygulayın ve uygun koruyucu equi kullanınasetik asit gibi pment aşındırıcı ve yanıcı bir olduğunu. </li><li> PD-IPC iskele gözenek oluşumunu teşvik etmek için, 20 dakika boyunca% 20 (ağırlık / hacim) asetik asit bütün iskele daldırın. </li><li> 100 rpm ile çalkalanarak bir 5 dakika boyunca 1X PBS içinde yıkama PD-IPC iskeleler, reaksiyona girmemiş reaktifleri çıkarın. Bu adımı 2 kez tekrarlayın. </li><li> Aşırı PBS çıkarın ve hemen -80 ° CO / N de PD-IPC iskeleleri dondurma. Iskeleleri herhangi kontrollü salım veya biyoaktivite tahlillerinde kullanımdan önce en az 24 saat liyofilize. </li></ol> PCL ve IPC Elyaf Kompozit Scaffold 4. Fabrikasyon DİKKAT: Diklorometan tehlikeli bir malzemedir. Diklorometan işlerken davlumbaz ve kişisel koruyucu ekipman kullanın. <ol><li> Bozulmamış ve desenli PDMS yüzeylerde oluşturma <ol><li> Yumuşak litografi süreci kullanılarak istenilen boyut TCP&#39;lerin bir parça kullanarak bir bozulmamış polidimetilsiloksan (PDMS) Elastomerik tabaka oluşturun. Patte oluşturİstenilen topografya ile şablonları poli (metil metakrilat) standart yumuşak litografi yöntemleri kullanarak rned PDMS substratlar. 12 </li></ol></li><li> IPC elyaf toplama gözden çıkarılabilir PCL çerçeve Fabricating <ol><li> PCL tartılır ve (ağırlık / hacim) çözeltisi bir% 0.9 oluşturmak için diklorometan içinde çözülür. PDMS alt-tabakanın her 1 cm2 bir alan için,% 0.9 PCL çözeltisi 500 ul bırakın. Tam ile duman davlumbazında buharlaşmaya diklorometan çözücü tüm izin verir. Istenilen kalınlıkta filmi kalınlaşmasına% 0.9 PCL döküm işlemi tekrarlayın. PDMS substrat kurutulmuş PCL filmi çıkarın. Bir uygun boyutlu zımba kullanılarak PCL çerçeve içinde bir delik oluşturur. 2 </li></ol></li><li> PCL çerçeve üzerinde IPC lifleri Toplama <ol><li> Bir timsah klibi (4.2.1 itibaren) delik ile kurbanlık PCL çerçeveyi yapıştırın. Plastik kaplamalı yapışkan bant kullanılarak dönen mandrel üzerine timsah klibi yapıştırın. PCL Fram üzerine IPC fiber çekilmiş ucunu10 mm / sn (bölüm 2) sabit bir hızda dönme başlamadan önce ör. IPC elyaf çekme sona ermesinden sonra, fiber üzerinde çerçeve yapısı göre O / N 4 ° C&#39;de kurutun. </li></ol></li><li> Fiber-on-frame desenli PCL alt tabaka içine inşa gömülmesi <ol><li> Gerektiği gibi, tertemiz bir ya da desenli PCL tabanı oluşturmak için PDMS substrat üzerine% 0.9 PCL çözeltisi 500 ul bırakın. İstenilen kalınlıkta bir iskele elde etmek için% 0.9 PCL çözümünün çoklu katmanlar Cast. Tam ile duman davlumbazında buharlaşmaya diklorometan çözücü tüm izin verir. </li><li> PCL tabanı üzerine elyaf üzerinde çerçeve yapısı (bölüm 4.3.1) yerleştirin. İstenilen kalınlık elde etmek için fiber-on-frame inşa birden çok kez% 0.9 PCL çözüm ekleyin ve tamamen PCL-IPC kompozit iskele (Şekil 1C) imalatı, IPC lifleri gömün. </li></ol></li></ol> Kompozit IPC Yapı iskeleleri Biyolojik Ajanlar Yayın 5. Ölçüm <ol><li> Yeri kompozit PD-IPC veyaPCL-IPC iskeleleri ve stand-alone IPC lifler ayrı bir 24 plaka. </li><li> Iskele daldırın ve stand-alone IPC lifleri 1X PBS 500 ul. 37 ° C&#39;de inkübe edin. Çeşitli zaman noktalarında (salım ortamı) PBS toplayın ve 1X 500 ul PBS ile değiştirin. </li><li> Dahil biyomolekülün kümülatif salım profilini hesaplamak için bir BCA tahlili (BSA), ELISA (VEGF ve NGF) ya da diğer uygun bir deney kullanılarak salım ortamı protein ya da büyüme faktörü miktarını ölçün. </li></ol> Kompozit IPC iskelelerinin üzerinde Hücreleri 6. Tohum Çıkış Biyolojik Ajanlar biyoaktivitesini Test <ol><li> En az 20 dakika süreyle biyolojik güvenlik kabini UV ışık kullanılarak liyofilize PD-IPC veya PCL-IPC kompozit iskeleleri sterilize edin. </li><li> 200 ul büyüme ortamı içinde 2 x 10 5 hücre, bir hücre süspansiyonu elde etmek için, standart hücre kültürü teknikleri kullanarak. Kompozit iskeleleri üzerine konsantre hücre süspansiyonu Tohum. After 20 dakika, tam iskeleler batırmak için büyüme ortamı kontör hacmi. </li><li> Böyle Alamar mavisi metabolik aktivite deneyi, PC12 neurite akıbet tahlil ya immünofloresan gibi standart teknikler yoluyla hücre aktivitesini ölçmek. </li></ol>

<ol><li>Annabi, N., Tamayol, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((25th+Anniversary+Article%3A+Rational+design+and+applications+of+hydrogels+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">25th Anniversary Article: Rational design and applications of hydrogels in regenerative medicine.</a> Adv. Mater. 26 (1), 85-124 (2014).</li>
<li>Teo, B. K. K., Tan, G. D. S., Yim, E. K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synergistic+effect+of+nanotopography+and+sustained+dual+release+of+hydrophobic+and+hydrophilic+neurotrophic+factors+on+human+mesenchymal+stem+cell+neuronal+lineage+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">The synergistic effect of nanotopography and sustained dual release of hydrophobic and hydrophilic neurotrophic factors on human mesenchymal stem cell neuronal lineage commitment.</a> Tissue Eng. Part A. 20 (15-16), 2151-2161 (2014).</li>
<li>Lee, K., Silva, E. A., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factor+delivery-based+tissue+engineering%3A+general+approaches+and+a+review+of+recent+developments%5BTitle%5D)+AND+%22J.+R.+Soc.+Interface%22%5BJournal%5D)">Growth factor delivery-based tissue engineering: general approaches and a review of recent developments.</a> J. R. Soc. Interface. 8 (55), 153-170 (2011).</li>
<li>Sun, Q., Chen, R. R., Shen, Y., Mooney, D. J., Rajagopalan, S., Grossman, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+vascular+endothelial+growth+factor+delivery+enhances+angiogenesis+and+perfusion+in+ischemic+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Sustained vascular endothelial growth factor delivery enhances angiogenesis and perfusion in ischemic hind limb.</a> Pharm. Res. 22 (7), 1110-1116 (2005).</li>
<li>Rui, J., Dadsetan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+release+of+vascular+endothelial+growth+factor+using+poly-lactic-co-glycolic+acid+microspheres%3A+in+vitro+characterization+and+application+in+polycaprolactone+fumarate+nerve+conduits%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Controlled release of vascular endothelial growth factor using poly-lactic-co-glycolic acid microspheres: in vitro characterization and application in polycaprolactone fumarate nerve conduits.</a> Acta Biomater. 8 (2), 511-518 (2012).</li>
<li>King, T. W., Patrick, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vitro+characterization+of+vascular+endothelial+growth+factor+%28VEGF%29-loaded+poly%28DL-lactic-co-glycolic+acid%29%2Fpoly%28ethylene+glycol%29+microspheres+using+a+solid+encapsulation%2Fsingle+emulsion%2Fsolvent+extraction+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res%22%5BJournal%5D)">Development and in vitro characterization of vascular endothelial growth factor (VEGF)-loaded poly(DL-lactic-co-glycolic acid)/poly(ethylene glycol) microspheres using a solid encapsulation/single emulsion/solvent extraction technique.</a> J. Biomed. Mater. Res. 51 (3), 383-390 (2000).</li>
<li>Cutiongco, M. F. A., Tan, M. H., Ng, M. Y. K., Le Visage, C., Yim, E. K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+pullulan-dextran+polysaccharide+scaffold+with+interfacial+polyelectrolyte+complexation+fibers%3A+A+platform+with+enhanced+cell+interaction+and+spatial+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Composite pullulan-dextran polysaccharide scaffold with interfacial polyelectrolyte complexation fibers: A platform with enhanced cell interaction and spatial distribution.</a> Acta Biomater. 10 (10), 4410-4418 (2014).</li>
<li>Yow, S. Z., Quek, C. H., Yim, E. K. F., Lim, C. T., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-based+fibrous+scaffold+for+spatial+organization+of+encapsulated+and+seeded+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Collagen-based fibrous scaffold for spatial organization of encapsulated and seeded human mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 30 (6), 1133-1142 (2009).</li>
<li>Yim, E. K. F., Wan, A. C. A., Le Visage, C., Liao, I. C., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+and+differentiation+of+human+mesenchymal+stem+cell+encapsulated+in+polyelectrolyte+complexation+fibrous+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cell encapsulated in polyelectrolyte complexation fibrous scaffold.</a> Biomaterials. 27 (36), 6111-6122 (2006).</li>
<li>Liao, I. C., Wan, A. C., Yim, E. K. F., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+release+from+fibers+of+polyelectrolyte+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Controlled release from fibers of polyelectrolyte complexes.</a> J. Control. Release. 104 (2), 347-358 (2005).</li>
<li>Wan, A. C. A., Liao, I. C., Yim, E. K. F., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+fiber+formation+by+interfacial+polyelectrolyte+complexation%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Mechanism of fiber formation by interfacial polyelectrolyte complexation.</a> Macromolecules. 37 (18), 7019-7025 (2004).</li>
<li>Yim, E. K. F., Reano, R., Pang, S., Yee, A., Chen, C., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanopattern-induced+changes+in+morphology+and+motility+of+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Nanopattern-induced changes in morphology and motility of smooth muscle cells.</a> Biomaterials. 26 (26), 5405-5413 (2005).</li>
<li>Sun, H., Xu, F., Guo, D., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+evaluation+of+NGF-microsphere+conduits+for+regeneration+of+defective+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol.+Res%22%5BJournal%5D)">Preparation and evaluation of NGF-microsphere conduits for regeneration of defective nerves.</a> Neurol. Res. 34 (5), 491-497 (2012).</li>
<li>Simón-Yarza, T., Formiga, F. R., Tamayo, E., Pelacho, B., Prosper, F., Blanco-Prieto, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEGylated-PLGA+microparticles+containing+VEGF+for+long+term+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Pharm%22%5BJournal%5D)">PEGylated-PLGA microparticles containing VEGF for long term drug delivery.</a> Int. J. Pharm. 440 (1), 13-18 (2013).</li>
<li>Patel, Z. S., Ueda, H., Yamamoto, M., Tabata, Y., Mikos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+release+of+vascular+endothelial+growth+factor+from+gelatin+microparticles+and+biodegradable+composite+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo release of vascular endothelial growth factor from gelatin microparticles and biodegradable composite scaffolds.</a> Pharm. Res. 25 (10), 2370-2378 (2008).</li>
<li>Sun, H., Xu, F., Guo, D., Liu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+the+effects+of+various+additives+and+polymers+on+nerve+growth+factor+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Dev.+Int.+Pharm%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of the effects of various additives and polymers on nerve growth factor microspheres.</a> Drug Dev. Int. Pharm. 40 (4), 452-457 (2014).</li>
<li>Lee, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+drug+release+from+hydrogel+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Kinetics of drug release from hydrogel matrices.</a> J. Control. Release. 2, 277-288 (1985).</li>
<li>Cutiongco, M. F. A., Choo, R. K. T., Shen, N. J. X., Chua, B. M. X., Sju, E., Choo, A. W. L., Le Visage, C., Yim, E. K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+scaffold+of+poly%28vinyl+alcohol%29+and+interfacial+polyelectrolyte+complexation+fibers+for+controlled+biomolecule+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Bioeng.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Composite scaffold of poly(vinyl alcohol) and interfacial polyelectrolyte complexation fibers for controlled biomolecule delivery.</a> Front. Bioeng. Biotechnol. 3 (3), 1-12 (2015).</li>
<li>Yow, S. Z., Lim, T. H., Yim, E. K. F., Lim, C. T., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3D+Electroactive+Polypyrrole-Collagen+Fibrous+Scaffold+for+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Polymers%22%5BJournal%5D)">A 3D Electroactive Polypyrrole-Collagen Fibrous Scaffold for Tissue Engineering.</a> Polymers. 3 (1), 527-544 (2011).</li>
<li>Leong, M. F., Toh, J. K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterned+prevascularised+tissue+constructs+by+assembly+of+polyelectrolyte+hydrogel+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Patterned prevascularised tissue constructs by assembly of polyelectrolyte hydrogel fibres.</a> Nat. Commun. 4, 2353(2013).</li>
<li>Di Benedetto, F., Biasco, A., Pisignano, D., Cingolani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+polyacrylamide+hydrogels+by+soft+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Patterning polyacrylamide hydrogels by soft lithography.</a> Nanotechnology. 16 (5), S165(2005).</li>
<li>Revzin, A., Russell, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+poly%28ethylene+glycol%29+hydrogel+microstructures+using+photolithography%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Fabrication of poly(ethylene glycol) hydrogel microstructures using photolithography.</a> Langmuir. 17 (18), 5440-5447 (2001).</li>
<li>Yim, E. K. F., Liao, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+compatibility+of+interfacial+polyelectrolyte+complexation+fibrous+scaffold%3A+evaluation+of+blood+compatibility+and+biocompatibility%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Tissue compatibility of interfacial polyelectrolyte complexation fibrous scaffold: evaluation of blood compatibility and biocompatibility.</a> Tissue Eng. Part A. 13 (2), 423-433 (2007).</li>
<li>Chaouat, M., Le Visage, C., Autissier, A., Chaubet, F., Letourneur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evaluation+of+a+small-diameter+polysaccharide-based+arterial+graft+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The evaluation of a small-diameter polysaccharide-based arterial graft in rats.</a> Biomaterials. 27, 5546-5553 (2006).</li>
<li>Eshraghi, S., Das, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+microstructural+properties+of+polycaprolactone+scaffolds+with+one-dimensional%2C+two+dimensional%2C+and+three-dimensional+orthogonally+oriented+porous+architectures+produced+by+selective+laser+sintering%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Mechanical and microstructural properties of polycaprolactone scaffolds with one-dimensional, two dimensional, and three-dimensional orthogonally oriented porous architectures produced by selective laser sintering.</a> Acta Biomater. 6, 2467-2476 (2010).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

IPC lifler, iki bir birbirine zıt yüklü polielektrolitlerin etkileşimi ile oluşturulmaktadır. işlem stabil lif oluşumu için bir kendi kendine-montaj işlemi kolaylaştırmak polielektrolitlerin arayüzünden kompleksinin çıkarma kullanmaktadır. IPC elyaf formasyonu mekanizması, benzer yüklü polielektrolit kompleks işlemi sırasında dahil edilebilir herhangi bir biyomolekül ilave sağlar. 10,11 Bunun aksine, bir birbirine zıt yüklü polielektrolit bir biyo-molekülün eklenmesi anında çökelti oluşturmasına neden olur. I...

Hücre dışı matris, hücre davranışlarını yönlendiren doğal biyokimyasal ve biyofiziksel ipuçlarına sahiptir. Bu fizyolojik üç boyutlu (3D) mikro ortamı taklit etmek, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği uygulamaları için geniş çapta araştırılmış bir stratejidir. Örneğin, hem doğal olarak türetilmiş hem de sentetik substratlar, biyofiziksel hücresel ortamı taklit etmenin bir yolu olarak topografik ipuçlarıyla modifiye edilmiştir. 1 Örneğin, polikaprolakton (PCL) iskeleleri, desenli PDMS alt tabakaları üzerine dökülerek kolayca desenlenebilir. 2 Bununla birlikte, çoğu sentetik iskele, kontrollü biyokimyasal ortamı in vivo olarak yetersiz bir şekilde özetlemektedir.Sentetik malzemelerin toplu veya yüzey modifikasyonu, yalnızca hücre bağlanması için biyokimyasal ipuçları sunar, ancak yine de biyokimyasal dağıtımın zamansal düzenlemesinden yoksundur. 3 Bu nedenle, hücre dışı matrisin zamansal olarak düzenlenmiş biyokimyasal dağıtım sistemini taklit edebilen optimal iskelelere ihtiyaç vardır. 
Mikroküreler gibi biyokimyasal dağıtım sistemleri, çok aşamalı sentez sürecinin ciddiyeti ve karmaşıklığı nedeniyle biyoaktivite kaybı ve düşük birleştirme verimliliği sorunlarıyla boğuşmaktadır. 4-6 Tek adımlı bir fabrikasyon ve birleştirme yöntemi kullanan alternatif yöntemlerin, dahil etmede verimsizlik ve biyoaktivite kaybı olmaksızın uygun bir biyokimyasal mikro çevre yaratma konusunda mükemmel bir potansiyele sahip olduğu kanıtlanmıştır. Uygulanabilir bir çözüm, biyolojik ajanları iletmek ve korumak için arayüzey polielektrolit kompleksleştirme (IPC) liflerinin kullanılmasıdır. İki zıt yüklü polielektrolit sulu çözelti bir araya getirildiğinde, IPC lifleri arayüzden çekilebilir. Sulu çözelti içindeki hemen hemen her tür hidrofilik biyomolekül, negatif veya pozitif yüklü polielektrolit çözeltisine eklenebilir, böylece kompleksleştirme işlemi sırasında yararlı biyomoleküllerin IPC elyafına dahil edilmesini kolaylaştırır. Ayrıca, bu işlem sadece sulu ve ortam koşulları gerektirir, böylece biyoaktivite kaybı riskini azaltır. Bu yöntem kullanılarak, aktif büyüme faktörleri2,7 hatta hücreler8,9 başarıyla verilmiştir. Ek olarak, IPC lifleri oluşturmanın basit yöntemi, herhangi bir şekle veya yöne kalıplamaya izin verir. Bu tür liflerin stabilitesi, kompozit iskeleler oluşturmak için hem hidrofobik2 hem de hidrofilik polimerlere7 dahil edilmesinde avantajlı olmuştur. IPC lifli bu kompozit iskeleler, hücreler için fiziksel ankraj sağlarken fizyolojik olarak ilgili bir biyokimyasal ortam oluşturmak için faydalıdır. 
Bu çalışmada, aktif biyomoleküllerin kontrollü salınımı için IPC liflerini topografyaya sahip hidrofilik ve hidrofobik bir iskeleye dahil etmek için bir yöntem gösteriyoruz. Kavram kanıtı olarak, kitosan ve aljinattan yapılmış IPC liflerini biyouyumlu, immünojenik olmayan ve antijenik olmayan pullulan-dekstran hidrofilik hidrojele veya biyouyumlu polikaprolakton hidrofobik iskeleye dahil ediyoruz.

<table><tbody><tr><td>Pullulan&nbsp;</td><td>Hayashibara Inc Okayama Japonya</td><td></td><td>Molekül ağırlığı (MW) 200 kDa. Bu malzeme, pullulan çerçeveleri ve PD-IPC iskeleleri yapmak için kullanılan farmasötik sınıf pullulandır.</td></tr><tr><td>Dekstran</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D1037</td><td>MW 500 kDa. Bu malzeme artık Sigma Aldrich tarafından üretilmiyor. Önerilen alternatif katalog numarası 31392'dir (Sigma Aldrich). Bu malzeme PD-IPC iskeleleri yapmak için kullanılır.</td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5761</td><td>Sodyum bikarbonat, pullulan-dekstran polisakkarit çözeltisine yavaşça eklenmelidir. Hızlı sodyum bikarbonat ilavesi çökelmeye neden olur.</td></tr><tr><td>Sodyum Trimetafosfat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T5508</td><td>Bu kimyasal higroskopiktir ve nem alma kabininde saklanmalıdır. Sulu sodyum trimetafosfat çözeltisi her zaman taze yapılmalıdır.</td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Bu malzeme tehlikelidir ve nitril eldiven gibi uygun koruyucu ekipmanla kullanılmalıdır.</td></tr><tr><td>Kitosan</td><td>Sigma Aldrich</td><td>448877</td><td>MW 190-310 kDa. Asetilasyon derecesi% 75 ila% 85. Kararlı IPC lifleri oluşturmak için kitosanın saflaştırılması gerekir.</td></tr><tr><td>Asetik Asit</td><td>Merck</td><td></td><td>Bu, başka bir marka türü ile değiştirilebilir. Bu malzeme aşındırıcı ve yanıcıdır. Bu kimyasalı çeker ocakta tutarken yüz siperi, nitril eldiven, laboratuvar önlüğü ve galoş gibi koruyucu ekipmanlar giyilmelidir.</td></tr><tr><td>Kahverengi alglerden elde edilen aljinik asit sodyum tuzu, düşük viskoziteli</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2158</td><td>Gece boyunca suda çözünür. Steril 0.2&nbsp ile süzün; &mikro; Kullanmadan önce m şırınga filtresi. 4 ° C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td></td><td>Steril PBS'de çözün ve 0.2 & mikro kullanarak süzün; kullanmadan önce m şırınga filtresi.</td></tr><tr><td>BCA test kiti</td><td>Pierce</td><td>23225</td><td>Bu kit, PD-IPC iskelelerinden BSA salınımını ölçmek için kullanılmıştır.</td></tr><tr><td>İnsan Rekombinant Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü</td><td>R& D sistemleri</td><td>293-VE</td><td>Büyüme faktörünü% 0.2 heparin çözeltisi içinde 5&nbsp'lik bir nihai konsantrasyona çözün; mg/ml'dir.</td></tr><tr>Porcine <td>Sigma Aldrich</td><td>H3393'ten</td> <td>Heparin Sodyum Tuzu</td><td>Bu, başka bir marka türü ile değiştirilebilir. Heparin tuzunu steril suda% 1'lik bir nihai konsantrasyonda çözün ve 0.2 & mikrodan süzün; kullanmadan önce m şırınga filtresi.</td></tr><tr><td>İnsan Umbilikal Ven Endotel Hücreleri (HUVEC)</td><td>Lonza</td><td>C2517A</td><td>Bu birincil hücre tipi, PD-IPC iskelelerinden salındıktan sonra VEGF biyoaktivitesini belirlemek için testte kullanıldı.</td></tr><tr><td>Alamar mavisi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>DAL1025</td><td>Bu, hücre metabolik aktivitesini ölçmek için kullanılır. Alamar mavisini hücrelerle inkübe edin ve standart hücre kültürü koşullarında 2 ila 4 saat koruyun. Hücre aktivitesi ile ilişkili olan Alamar mavisi yüzde azalmasını belirlemek için 570 nm'de absorbansı ölçün.</td></tr><tr><td>ScanVac Coolsafe Liyofilizatör</td><td>Labogene</td><td>7.001.200.060</td><td>Bu, -105 ila -110 ° C'de çalışan, programlanamayan bir dondurarak kurutucudur; &deg;C. Bu, diğer standart laboratuvar liyofilizatörleri ile değiştirilebilir.</td></tr><tr><td>Polikaprolakton (PCL)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>181609</td><td>MW 65 kDa. Bu artık Sigma Aldrich tarafından üretilmiyor. Bu, Sigma Aldrich katalog numarası 704105 ile değiştirilebilir.</td></tr><tr><td>Diklorometan</td><td>Sigma Aldrich</td><td>V800151</td><td>Bu, başka bir marka türü ile değiştirilebilir. Bu malzeme tehlikelidir ve çeker ocakta kullanılmalıdır. Bu kimyasalla çalışırken her zaman koruyucu ekipman giyilmelidir.</td></tr><tr><td>Polidimetilsiloksan (PDMS; 184 Silikon Elastomer Kiti)</td><td>Dow Corning</td><td>(240)4019862</td><td>Elastomer kiti, polimer baz ve çapraz bağlayıcı ile birlikte gelir. Polimer bazının ve çapraz bağlayıcının farklı oranlarda karıştırılması, PDMS'nin farklı sertliğine neden olacaktır.</td></tr><tr><td>İnsan Rekombinant Beta-Sinir Büyüme Faktörü (NGF)</td><td>R& D sistemleri</td><td>256-GF</td><td>Steril DI suda 100 > nihai konsantrasyona kadar sulandırılmıştır; &mikro; g&#8288;/&#8288;ml. Aliquot ve -20 &°C'de mağaza; Kullanana kadar C.</td></tr><tr><td>İnsan Mezenkimal Kök Hücreleri (hMSC)</td><td>Cambrex</td><td></td><td>Bu hücre tipi, NGF ve nanotopografinin sinerjik etkisini belirlemek için testte kullanıldı.</td></tr><tr><td>Sıçan PC12 Feokromasitoma Hücreleri&nbsp;</td><td>ATCC</td><td></td><td>: Bu hücre tipi, NGF'nin biyoaktivitesini belirlemek için nörit büyüme testinde kullanıldı. NGF ile salınan ortama maruz kaldıktan sonra, nörit uzantılı hücre sayısını ölçün ve toplam hücre sayısını normalleştirin.</td></tr><tr><td>93. sınıf filtre kağıdı</td><td>Whatman</td><td>Z699675</td><td>Bu, pH & nbsp; 7'de sodyum hidroksit ile çökeltildikten sonra kitosanın saflaştırılması için kullanılır.</td></tr><tr><td>Salıncak kovalı santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td>Kitosanın 1.200 x g hız kullanılarak saflaştırılması sırasında kullanılır.</td></tr><tr><td>Sabit hızda dönen mandrelli motor</td><td>Rhymebus</td><td>RM5E</td><td>Motor, pullulan veya PCL çerçevesi üzerinde IPC liflerinin imalatı için kullanılır.</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>FirstBase</td><td></td><td>Filtrasyon yoluyla sterilize edin (0.2 & m filtre) ve otoklav.&nbsp;</td></tr><tr><td>10 mm çapında Doku Kültürü Polistiren Kabı (TCPS)</td><td>Greiner</td><td></td><td>TCPS kabı, pullulan çerçevenin dökümü için kullanılır.</td></tr><tr><td>İnsan VEGF ELISA kiti</td><td>Ar-Ge D sistemleri</td><td>DVE00</td><td>ELISA kiti, salım ortamında VEGF'nin tespiti için kullanılır.</td></tr><tr><td>İnsan NGF ELISA kiti</td><td>R& D sistemleri</td><td>DY256</td><td>ELISA kiti, salım ortamındaki NGF'yi tespit etmek için kullanılır.</td></tr><tr><td>Plastik Kaplı Yapışkan Bant</td><td>Bel-Art</td><td>9040336</td><td>Yapışkan bant, timsah klipsini dönen mandrele güvenli bir şekilde yapıştırmak için kullanılır</td></tr></tbody></table>

biyomoleküllerin geçici olarak kontrollü release için yüzey polielektrolit elyaf kompozit yapı iskeleleri

Composite Scaffolds of Interfacial Polyelectrolyte Fibers for Temporally Controlled Release of Biomolecules

Doku mühendisliğinde kullanılan çeşitli iskeleler, fizyolojik hücre nişini taklit etmek için kontrollü bir biyokimyasal ortam gerektirir. Arayüzey polielektrolit kompleksleştirme (IPC) lifleri, küçük moleküllü ilaçlar, hücreler, proteinler ve büyüme faktörleri gibi çeşitli biyolojik ajanların kontrollü bir şekilde verilmesi için kullanılabilir. IPC liflerinin yapımındaki metodolojinin basitliği, kontrollü biyomolekül dağıtımı için uygulamasında esneklik sağlar. Burada, çok bileşenli bir kompozit iskele oluşturmak için IPC liflerini hidrofilik polisakkarit ve hidrofobik polikaprolakton olmak üzere iki farklı polimerik iskeleye dahil etme yöntemini açıklıyoruz. IPC liflerinin bu polimerik yapılara kolayca gömülebileceğini, biyomoleküllerin sürekli salınım ve daha iyi korunma kabiliyetini artırdığını gösterdik. Ayrıca, hücre davranışı üzerinde sinerjik etkilere sahip olabilecek topografik ipuçları ve sürekli biyokimyasal salınım ile kompozit polimerik bir iskele oluşturduk. IPC lifli kompozit polimerik iskeleler, hücresel nişi yeniden yaratmanın yeni ve basit bir yöntemini temsil eder.

Bu makalede, çeşitli biyomoleküllerin sürekli salınması için IPC lifleri ile kompozit iskeleleri yaratmaya çalıştı. Bu çalışmada kullanılan ve biyomoleküllerin özellikleri Tablo 1 &#39;de görülmektedir. IPC lifler önce bir PD-IPC kompozit iskeleti (Şekil 1B) oluşturmak için bir hidrofilik PD hidrojel içine yerleştirilmiştir. Model molekülü BSA ilk kontrollü biyomolekülün serbest bırakılması için bir kompozit iskele kullanarak fizibilitesini belirlemek için test edilmiştir. BSA 45 ± 0.97...

Doku mühendisliği için iskeleler, hücresel nişin karmaşık biyokimyasal ve biyofiziksel mikro çevresini özetlemelidir. Burada, sürekli biyokimyasal salınımlı kompozit, çok bileşenli polimerik iskeleler oluşturmak için bir platform olarak arayüzey polielektrolit kompleksleştirme liflerinin kullanımını gösteriyoruz.

Biyomoleküllerin Geçici olarak Kontrollü Release için Yüzey Polielektrolit Elyaf Kompozit Yapı iskeleleri

Various scaffolds used in tissue engineering require a controlled biochemical environment to mimic the physiological cell niche. Interfacial ...

Bu prosedürün genel amacı, hidrofilik veya hidrofobik polimerik kompozit iskeleler aracılığıyla hücresel nişi taklit etmek için mekansal kontrole sahip, kontrollü biyomolekül salınımı sağlamaktır. Bu, öncelikle biyomolekül salan ve ara yüzey polielektrolit veya IPC fiberleri olarak adlandırılan fiberlerin mekansal düzenlemesini sağlamak amacıyla istenen polimerlerden oluşan feda edilebilir bir çerçeve oluşturularak gerçekleştirilir. İkinci adım ise, hedeflenen hidrofilik biyomolekülü içeren IPC fiberlerinin feda edilebilir bir çerçeveye entegre edilmesidir.Ardından, çerçeve konstrüktleri üzerindeki IPC lifleri, substrat üzerinde topografik ipuçları barındıran bir döküm kalıbı olarak kullanılan mikro desenli bir substrat yardımıyla daha büyük bir iskelete gömülür. Son adım, çerçeve üzerindeki liflerin ve konstrüktün tamamen asimile olmasına ve desenli veya mikro desenli substratlar oluşturmak için polimerlerin katılaşmasına izin vermektir. Nihayetinde, hedef moleküllerin salınım profillerini ve biyolojik aktivitelerini göstermek için standart analizler kullanılabilir.Bu tekniğin mikroenkapsülasyon gibi mevcut diğer yöntemlere sunduğu temel avantaj, hidrofilik biyomoleküllerin geniş bir hidrofilik veya hidrofobik polimer iskeleye dahil edilmesinin artık basit bir entegrasyon ve üretim süreciyle gerçekleştirilebilir olmasıdır. Bu yöntem; çoklu düzenlenmiş biyokimyasal salınım, biyokimyasal gradyan ve topografik ipuçları ile sürdürülebilir biyokimyasal salınımın hücre davranışı üzerindeki sinerjik etkisi dahil olmak üzere, ilaç taşıyıcı sistemler alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Adımların öğrenilmesinin zor olması nedeniyle, polielektrolit fiber oluşumunun görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir.Polielektrolit çözeltisinin hız konsantrasyonu ve saflığı, IPC fiberlerinin stabil oluşumu için kritik öneme sahiptir. Başlangıç olarak, ekteki metin protokolünde açıklandığı gibi, proteinleri, büyüme faktörlerini veya ilgilenilen diğer biyomolekülleri 10 ila 20 µL'lik polielektrolit çözeltisi alikotlarına karıştırın. Ardından, parafilm ile kaplanmış stabil ve düz bir yüzeye 10 ila 20 µL'lik küçük kitosan ve aljinat damlacıkları yerleştirin. Kitosan ve aljinat damlacıkları birbirine yakın konuma getirilmeli, ancak birbirleriyle temas etmemelidir.Bir pensetin bir ucunu hafifçe kit sand damlacığına, diğer ucunu ise alginat damlacığına daldırın. Ardından, penseti sıkarak polielektrolit damlacıklarını bir araya getirin. Damlacıklar birbirine temas ettiğinde, iki damlacığın arayüzünden, IPC fiberi olarak bilinen arayüzey polielektrolit kompleksleşme fiberini çekmek için penseti yavaşça dikey olarak yukarı çekin.Çekilmiş IPC fiberin ucunu, dönen bir mandala sabitlenmiş düz polimerik bir iskeleden oluşan bir toplayıcıya dikkatlice yerleştirin. Tekdüze ve boncuksuz IPC fiberlerin oluşmasını sağlamak için mandalı saniyede 10 milimetre sabit hızda döndürün. IPC fiberlerin çekilme hızının artırılması, bünyeye katılan biyokimyasalın aniden salınmasına ve fiberin erken sonlanmasına neden olacak boncuklar oluşturacaktır.Liao ve ark. ile KO ve ark. tarafından yapılan gözlemlerle uyumlu olarak, fiber sonlandığında kalan sıvıyı 500 µL PBS ile seyreltin ve kalıntıdaki protein veya büyüme faktörü içeriğinin konsantrasyonunu ölçün. Biyomoleküllerin inklüzyon verimliliğini belirlemek için, üç gram polland polisakkaridini tartın ve 15 mL distile deiyonize suya ekleyin.%20'lik sulu bir çözelti oluşturmak için, ertesi gün homojenliği sağlamak amacıyla Poland çözeltisini gece boyunca karıştırın. Poland çözeltisinden 15 mililitreyi 10 santimetre çapındaki bir doku kültürü polistiren kabına dökün. Çözeltiyi 37 °C'de gece boyunca kurutun; kuruma tamamlandığında, filmleri yedi milimetreye yedi milimetre boyutlarında kare şeklinde feda edilebilir Poland çerçeveler şeklinde kesin.Ardından, distile deiyonize su içerisinde %30'luk polosan ve dekstrin polisakkarit çözeltisini üçte bir oranında hazırlayın. Homojenliği sağlamak için gece boyunca karıştırın; nihai konsantrasyon %20 olacak şekilde polisakkarit çözeltisine yavaşça sodyum bikarbonat ekleyin. Çözeltiyi gece boyunca karıştırın ve nihai polisakkarit çözeltisini ihtiyaç duyulana kadar 4 °C'de saklayın. Fedai polosan çerçeveyi, bir timsah klips ve plastik kaplı yapışkan bant kullanarak döner mandrana istenen yönde sabitleyin.Sabitlenmiş çerçeveye sahip mandreni saniyede 10 milimetre sabit hızla döndürün. Ardından, önceki bölümde gösterildiği gibi IPC fiberlerini çekmeye başlayın. Ancak bu sefer, çekilen IPC fiberlerinin ucunu dönen Poland çerçevesine tutturun.Ardından, IPC fiber çekim işleminin sona ermesini bekleyin. Fiberleri çerçeve yapısı üzerinde oda sıcaklığında gece boyunca kurutun. Daha sonra, timsah klipsinden çıkararak yapıyı döner mandrellen serbest bırakın.Konstrüktü bir mikro santrifüj tüpü kapağına yerleştirin. Ardından, beş gram Poland Dekstrin çözeltisini bir behere koyun ve 60 RPM hızında karıştırmaya başlayın. Bir manyetik karıştırıcı kullanarak, 500 µL %11 sodyum trim fosfat çözeltisi ve 500 µL 10 M sodyum hidroksit ekleyin.Çözeltiyi çapraz bağlamak için, çözeltiyi bir ila iki dakika daha karıştırmaya devam edin ve ardından viskoz polisakkarit çözeltisini, IPC liflerini tamamen gömmek için çerçeve konstrüksiyonundaki liflerin üzerine dökün. Kompozit iskelede gözenek oluşumunu sağlamak amacıyla, kimyasal olarak çapraz bağlı bir kompozit iskele oluşturmak için konstrüksiyonu 60 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin.Tüm iskeleyi %20'lik asetik asit çözeltisine 20 dakika boyunca batırın. Ardından iskeleyi, 100 RPM'de çalkalayarak beş dakika boyunca üç kez PBS ile yıkayın. Kalan reaktif olmayan maddeleri uzaklaştırmak için fazla PBS'yi alın ve kompozit iskeleleri derhal eksi 80 °C'de gece boyunca dondurun.Ardından, herhangi bir kontrollü salım veya biyolojik aktivite analizinde kullanılmadan önce iskefeleleri en az 24 saat boyunca liyofilize edin. Standart yumuşak litografik yöntemlerini kullanarak, istenen topografyaya sahip, temiz ve desenli bir PDMS substrat oluşturarak başlayın. Daha sonra, önce %0,9 PCL'yi diklorometan içinde çözerek hem IPC fiber toplama işlemi için PCL'den oluşan feda edilebilir çerçeveyi hem de desenli PCL tabanını hazırlayın.PDMS film döküm kalıbının her bir santimetrekarelik alanı için kalıba 500 µL %0,9 PCL çözeltisi damlatın. Çözücünün çeker ocak içerisinde tamamen buharlaşmasını bekleyin ve ardından filmi kalınlaştırmak için %0,9 PCL döküm işlemini tekrarlayın. Daha sonra, ayrı bir temiz PDMS altlığa her seferinde 500 µL %0,9 PCL çözeltisi yerleştirerek feda edilecek çerçeveyi hazırlayın.Saf bir PCL tabanı oluşturmak için, istenen kalınlıkta bir iskele elde edene kadar birden fazla PCL katmanı dökün. İstenen kalınlığa ulaşıldığında, tüm klorometan çözücünün çeker ocak içinde tamamen buharlaşmasını bekleyin. Kurumuş PCL filmini saf PDMS substrattan ayırın ve PSAP boyutunda bir delgeç kullanarak PCL çerçeveye bir delik açın.Ardından, PCL çerçeveyi toplama miline monte edin ve daha önce açıklandığı gibi IPC fiberini çerçeve üzerine çekmeye başlayın. IPC fiber çekimi sona erdiğinde, çerçeve üzerindeki fiber yapısını çıkarın ve 25 °C'de gece boyunca kurumaya bırakın. Çerçeve üzerindeki fiber yapısını desenli PCL tabanının üzerine yerleştirin ve istenen kalınlığı elde etmek ve IPC fiberlerinin tamamen gömülmesini sağlamak için %0,9 PCL çözeltisini çerçeve üzerindeki fiber yapısının üzerine birden fazla kez ekleyin.Poland dekstrin IPD kompozitinden salınan sığır serum albümini veya BSA, başlangıçta zayıflatılmış bir ani salınımı takip eden eşzamanlı bir kararlı durum ile yaklaşık lineer kinetik göstermiştir. İki ay sonra BSA, %97 oranında toplam salınım gerçekleştirmiştir. Buna karşılık, tek başına IPC lifleri, dört saat içinde BSA'nın %80'inin hızlı bir şekilde salındığını göstermiştir. Aynı kompozit kullanılarak, test platformu olarak insan göbek kordonu ven endotel hücreleri kullanıldığında, vasküler büyüme faktörünün de liflerden sürdürülebilir bir şekilde salınması sağlanabilmiştir.Salınan büyüme faktörünün, her zaman noktasındaki salınımı sonrası biyoaktif olduğu belirlenmiştir. Bu örnekte, sinir büyüme faktörü 18 gün boyunca fiberlere yüklenmiştir. Yüklenen sinir büyüme faktörünün yaklaşık %80'i, bir PC 12 nörit büyüme analizi kullanılarak P-C-L-I-P-C kompozitinden sürdürülebilir doğrusal bir salınımla salınmıştır.İskeleden ortama her zaman noktasında salınan biyoaktif sinir büyüme faktörü miktarı, nörit uzaması üzerinde, sade ortama mililitre başına 30 nanogram sinir büyüme faktörü eklenmesiyle benzer bir etki göstermiştir. Hem topografya hem de kontrollü sinir büyüme faktörü salınımı içeren P-C-L-I-P-C kompozit iskeleler, hücresel davranış üzerinde sinerjik bir etkiye sahip olabilir. Nano desenli kompozit iskelelerde büyütülen insan mezenkimal kök hücreleri, yalnızca topografyaya veya yalnızca büyüme faktörüne maruz kalan hücrelere kıyasla daha yüksek düzeyde nöronal diferansiyasyon göstermiştir.Bu prosedürü uygularken, istenen hidrofilik molekülü liflere dahil etmek için aynı net yüke sahip polielektrolit çözeltisiyle karıştırmayı hatırlamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, bar moleküllerinin kontrollü salınımı kapasitesine sahip kompozit polimer iskelelerin nasıl oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu videodaki temel kazanım; büyüme faktörlerinin sürekli salınımı, birden fazla büyüme faktörünün salınımı kapasitesine sahip pulmoner iskeleler oluşturmanıza ve fizyolojik nişi yeniden canlandıracak biyokimyasal ipuçlarından oluşan bir gradyan yaratmanıza olanak sağlamalıdır.Asetik asit, sodyum hidroksit ve klorometan ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedür uygulanırken kişisel koruyucu ekipman kullanımı ve çeker ocak kullanımı gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

composite-scaffolds-interfacial-polyelectrolyte-fibers-for-temporally

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Polimerlerin doku mühendisliği ve hücre kültürü için elektrospinning süreci, bu makalede ele alınmaktadır. Özellikle multi-polimer elektrospinning photopatterning ve ek işleme yetenekleri ile photoreactive macromers elektrospinning açıklanmıştır.

Doku Mühendisliği ve Hücre Kültürü için Lifli Polimer Yapı iskeleleri elektrospinning

Elektrospinning iskelelerinin doku mühendisliği uygulamaları için post prodüksiyon işlenebilir. Burada kısırlık (aseptik üretim veya sterilizasyon post prodüksiyon) ulaşmak için ve uygun biyomekanik özellikleri elde etmek için, daha kalın iskeleleri (çoklu katman ısı kullanarak veya buhar tavlama ile) yapmak için, karmaşık iskeleleri (ardışık eğirme) eğirme yöntemleri açıklanmaktadır.

Doku Mühendisliği için elektrospinning Liflerin Postprodüksiyon İşleme

Burada doku mühendisliği için farklı katmanları arasında sürekli arabirimleri ile biyouyumlu, katmanlı matrisler oluşturmak için benzersiz bir strateji belirlemelidir. Böyle bir iskele çeşitli biyolojik, kimyasal ya da mekanik yardımlar yaparak hücre davranışı modüle ideal özelleştirilebilir ortamı...

Yoğunluk Gradient Katmanlı Polimerizasyonu (DGMP): Multi-bölmesi oluşturma için A Novel Tekniği, Doku Mühendisliği için Özelleştirilebilir İskelesi

Bu videoda, onların işlevselliğini artırmak ve hücre göçü kontrol etmek için gözenekli metalik implantlar için modifikasyon tekniklerini gösterecektir. Teknikleri 3D ve bazal membran üretimi 2-B hücre hareketini kontrol etmek için taklit hücre hareketini kontrol etmek için gözenek geçişlerini geliştirilmesi yer alıyor. Ayrıca, kan proteinlerinin analizi ile in-vivo olarak izlenmesi implant entegrasyonu için bir HPLC-tabanlı bir yöntem tarif edilmektedir.

Gözenek Gradiyentler Polielektrolitler ve Bunların Dolaylı İzleme ile Metalik İmplant Çok Ölçekli Modifikasyon<em&gt; In vivo</em

Bu protokol, nöronları yönlendirmek için doku mühendisliği iskeleleri geliştirmek için elektrospinning ve mikroküreleri birleştirir. Sinir büyüme faktörü PLGA mikroküreleri içinde kapsüllendi ve Hyaluronik Asit (HA) fibröz iskelelere elektrospre edildi.  Protein biyoaktivitesi, iskelelerin birincil civciv Dorsal Kök Gangliyonları ile tohumlanması ve 4-6 gün boyunca kültürlenmesi ile test edildi.

Lifli iskelelerinin içine Microspheres ibra Elektroeğirme Büyüme Faktörü

Burada, biz liflerin Basamaklandırılmış organizasyonu ile electrospun nanolif iskeleleri imal ve hücre morfolojisi / yönünü düzenleyen kendi uygulamalarını keşfetmek için bir protokol mevcut. Nanolif iskelelerinin fiziksel ve kimyasal özellikleri açısından Degrade'ler biyomedikal alanındaki uygulamalar geniş bir yelpazede sunuyoruz.

Fiber Teşkilatı geçişleri ile electrospun Nanolif iskeleleri

Osteoiletkenlik ve biyoaktivite sergilerken kraniyo-maksillofasiyal (CMF) kemik defektlerine sığabilen iskeleler ilgi çekicidir. Bu protokol, erimiş bir tuz şablonu ve bir biyoaktif polidopamin kaplamasının uygulanması kullanan bir solvent döküm partikül liçi (SCPL) yöntemi kullanılarak polikaprolakton diakrilat (PCL-DA) bazlı bir şekil hafızalı iskelenin hazırlanmasını açıklar.

Bir Biyoaktif, PCL-temelli &quot;Kendinden uydurma&quot; Shape Memory Polymer İskele imalatı

İki ve üç boyutlu süperhidrofobik polimerik malzemeler, benzer bileşime sahip daha düşük yüzey enerjili bir polimer ile harmanlanmış, biyolojik olarak parçalanabilen polimerlerin elektrospinning veya elektro püskürtme ile hazırlanır.

Biyomedikal Uygulamalar için Süperhidrofobik Polimer Malzemeler imalatı

Bu çalışmada, eriyik karıştırma ve seçici liç kombinasyonu kullanılarak poli(laktik asit)/polietilen glikol (PLA/PEG) iskeleleri hazırlanmıştır. Burada tartışılan yöntem, hem gözenekliliği hem de gözenek boyutunu yüksek oranda kontrol ederek üç katmanlı iskelelerin geliştirilmesine izin verdi. Mekanik özellikler ayrıca fizyolojik bir ortamda da değerlendirildi.

Bir Facile ve çevre dostu Rota Kademeli Gözenek Boyutu Poli (Laktik Asit) iskeleleri imal etmek için

Bu makalede, bir üç-boyut (3D) iskele üzerinden depressurization süperkritiğe CO2 sıvı içine bir geleneksel, iki-boyut (2D) electrospun nanofiber mat genişletme tekniği gösterilir. Bu artar iskele 3D, yakından kopyalama hücresel nanotopographic yardımlar, vardır ve biyolojik moleküllerin nanofibers içinde kapsüllenmiş işlevlerini korumak.

İki boyut Electrospun Nanofiber paspaslar genişleme içine üç-boyut iskele

Tamamlayıcı reaktif gruplara sahip mikrojel çubuklar, sulu çözeltide birbirine bağlanma kabiliyetine sahip mikroakışkanlar yoluyla üretilir. Anizometrik mikrojeller, küresel tabanlı sistemlere kıyasla daha büyük gözeneklere sahip kararlı yapılara sıkışır ve birbirine bağlanır. GRGDS-PC ile modifiye edilmiş mikrojeller, hücre kültürü için kullanılabilecek makrogözenekli 3D yapılar oluşturur.

Mikrojel Çubuklardan Birbirine Bağlı Makrogözenekli 3D İskeleler

Keşfedin yüzey polielektrolit kompleksasyon lifleri kullanarak kontrollü biyomolekül salınımı sağlayan doku mühendisliği iskeleleri oluşturmayı. Bu yöntem hücre nişini taklit eder ve sürdürülebilir biyokimyasal salınım sunar.

Biyomoleküllerin Geçici olarak Kontrollü Release için Yüzey Polielektrolit Elyaf Kompozit Yapı iskeleleri

Daha fazla video keşfet