İnme ile Alzheimer Hastalığının bir Transgenik Fare Modelinde Motor ve Hipokampal Bağımlı Mekansal Öğrenme ve Referans Hafıza Değerlendirme

Bu davranışsal testlerin genel amacı, Alzheimer hastalığı ve inmenin yeni bir komorbid sıçan modelinde motor fonksiyonun yanı sıra uzaysal öğrenme ve hafıza performansını değerlendirmektir. Bu yöntem, inme ve Alzheimer hastalığı patolojisinin nasıl etkileşime girdiği gibi demans alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir ve potansiyel olarak artmış motor eksiklik ve hızlandırılmış bilişsel gerileme fenotipi üretebilir. Bu tekniklerin temel avantajı, yürütülmesi kolay, uygun maliyetli ve daha sonraki zaman noktalarında tekrarlanan testler için uygun olurken bir dizi beyin fonksiyonunu test etmeleridir.

Bu tekniğin etkileri, inme sonrası demansın önlenmesine doğru uzanır, çünkü yeni önleyici bileşikler, komorid davranışsal fenotipi iyileştirme potansiyelleri açısından test edilebilir. Başlamak için, önceden monte edilmiş bir silindir aparatının altına 45 derecelik bir açıyla bir ayna yerleştirin. Ardından bir video kamerayı bir tripoda takın ve cihazdan yaklaşık 50 santimetre uzakta konumlandırın.

Aynadaki silindirik dürün tüm çapının kamerada görselleştirilebildiğini kontrol edin. Ardından, iklimlendirilmiş bir sıçan seçin ve beyaz bir tahtaya hayvanın numarasını ve ek deneme bilgilerini yazın. Bu kartı aynanın önüne yerleştirin ve ardından video kamerada kayıt düğmesine basın.

Fareyi kuyruğun tabanından alıp silindire yerleştirerek devam edin. Ardından aparatın kapağını sabitleyin ve beyaz tahtayı aynayı daha fazla engellemeyecek şekilde çıkarın. Beyaz tahta çıkarıldıktan sonra, hayvanı tek bir deneme oluşturan bir süre olan beş dakika boyunca filme almaya devam edin.

Bu sürenin sonunda kaydı durdurun, fareyi ev kafesine geri koyun ve silindiri kağıt havlu ve suyla temizleyin. Ardından, sıçan başına toplam üç deneme elde etmek için daha önce açıklanan adımları iki kez daha tekrarlayın. Tüm sıçanlar için veri toplandıktan sonra, kamera dosyalarını bir video düzenleme programına aktarın ve metin protokolünde açıklandığı gibi dört uzuv temasının sayısını ölçmeye devam edin.

İlk olarak, siyah bir duvarın önüne birbirinden yaklaşık 100 santimetre uzakta iki raf ünitesi yerleştirin. Ardından, daha önce edinilmiş bir ahşap kirişin uçlarını raflara sabitlemek için bant kullanın, böylece aralarında yaklaşık bir metre desteksiz ahşap olur. Ardından, bir standın üzerine bir video kamera yerleştirin ve kamera ışının tüm uzunluğunu yakalayacak şekilde konumlandırın.

Işın yürüyüşü eğitimi almış bir sıçan seçmeye devam edin ve numarasını ve ek deneme bilgilerini beyaz bir tahtaya kaydedin. Bitirdiğinizde, beyaz tahtayı kirişin arkasındaki duvara bantlayın. Kirişin bir ucuna, hayvanın ev kafesini ve farenin tahtayı geçtikten hemen sonra girebileceği motive edici bir kuyruk görevi gören bir çevresel zenginleştirme tüpü yerleştirerek devam edin.

Ardından video kamerada kayıt düğmesine basın. Hemen ardından, fareyi kuyruğun tabanından alın ve kafes ve tüp olmadan kirişin diğer ucuna yerleştirin. Hayvanı, denemenin sonunu işaret eden yükseltilmiş ahşabın tüm uzunluğunu başarıyla geçene kadar kaydedin.

Sıçan ışının ortasında duraklarsa, hareketi teşvik etmek için kuyruğuna hafifçe dokunun. Hayvan görevi tamamladıktan sonra, ev kafesini kirişin diğer ucuna taşıyın. Beyaz tahtadaki deneme numarasını değiştirin ve işlemi daha önce açıklandığı gibi tekrarlayın.

Hayvanın tüm denemeleri kaydedildiğinde, kamera dosyalarını bir video düzenleme programına aktarın ve ilgili adımı, uzuv kaymalarını ve düşme verilerini metin protokolünde açıklandığı gibi analiz edin. Boş, dairesel bir havuzun merkezinin üzerine bir video kamera sabitleyerek başlayın. Ardından, havuzun kenarı boyunca bant yerleştirerek tankın dört çeyreğini belirleyin ve bunları izleme yazılımı programındaki tankın ana hatlarıyla düzgün bir şekilde hizalayın.

Daha sonra, tankı 36 santimetre derinliğe kadar suyla doldurun ve ardından platformun su yüzeyinin altında görünmemesini sağlamak ve beyaz fareleri daha iyi görselleştirmek için sıvı opak olana kadar siyah, toksik olmayan boya ekleyin. Havuz hazırlandıktan sonra, boş duvar yüzeyleri ile çevreleyin. Ardından, poster panosunun farklı renklerinden dört şekil keserek uzamsal ipuçları hazırlayın.

Daha sonra, kuzey, güney, doğu ve batı havuz konumlarıyla ilişkili duvarların her birine bir şekil ekleyin. Uzamsal bir öğrenme deneyi yapmak için, havuzun güneybatı çeyreğine dairesel bir platform yerleştirerek devam edin. Ekteki bilgisayar programında, bu yapının kadranda belirlenmiş bir platform alanı ile hizalanıp hizalanmadığını kontrol edin.

Bir fareyi kuyruğunun tabanından kavrayarak ve havuz duvarı boyunca suda belirlenmiş bir başlangıç yerine nazikçe yerleştirerek devam edin. Hayvan tanka girdikten sonra, görüş alanımızı hızla hareket ettirin ve izleme yazılımını başlatması için başka bir deneyciye işaret edin. Farenin platforma yerleşene ve tırmanana kadar yüzmesine izin verin.

Bu noktada, diğer araştırmacı bilgisayardaki denemeyi durdurmalıdır. Hayvanın 30 saniye boyunca platformda kalmasına izin verin. Sıçan, ayrılan deneme süresi içinde platformu bulamazsa, burada 90 saniye, hayvanı yapıya yönlendirin ve 30 saniye orada kalmasına izin verin.

Daha sonra, fareyi kuyruğunun tabanından kaldırın ve labirentten çıkarın. Bir kolun üzerine örtülmüş bir havlunun üzerine koymak. Bu işlemi, denemeler arası 20 dakikalık bir aralıkla hayvan başına üç kez daha tekrarlayın, böylece her sıçan toplam dört denemeyi tamamlar.

Uzamsal öğrenme deneyi tamamlandıktan sonra, prob denemelerine başlamak için platformu havuzdan çıkarın. Yazılımda, güneybatı çeyreğindeki önceki platform konumunun tanımlı kaldığını kontrol edin. Sonra havuza bir sıçan sokun.

Tankın duvarı boyunca suya yerleştirmek. Daha önce olduğu gibi, hemen hayvanın görüş alanından çıkın ve başka bir deneyciye izleme yazılımını başlatması talimatını verin. 30 saniyelik sonda denemesinin sonunda, hayvanı kuyruğunun tabanından kavrayın, tanktan çıkarın ve ardından havluyla kaplı bir koldan birine yerleştirin.

Bu işlemi bir hafta sonra tekrarlayın. Tüm hayvanlar için uzamsal öğrenme ve sonda denemeleri yapıldıktan sonra, verileri metin protokolünde açıklandığı gibi analiz edin. Silindir aparatından dört ekstremite kullanım verisi, inme indüksiyonundan üç gün önce ve yedi ve 20 gün sonra APP21 transgenik sıçanlardan toplandı.

Standardize edildiğinde ve eşit dört ekstremite kullanımını temsil eden değerle karşılaştırıldığında, buradaki kırmızı çizgi, bu sonuçlar komorbid sıçanların istatistiksel olarak dört ekstremite açığı göstermediğini göstermektedir. İnme geçiren veya geçirmeyen yabani tip hayvanlar ve tek başına APP21 transgenik sıçanlar için benzer sonuçlar elde edildi. Bununla birlikte, komorbid hayvanlar hareketle ilişkili motor fonksiyonda farklılıklar gösterdi.

İnme indüksiyonundan yedi gün önce ve 21 gün sonra bu sıçanlar için toplanan ışın görevi verileri, diğer gruplarda gözlenmeyen tahtayı geçmek için gereken adımlarda önemli bir artış olduğunu ortaya koymaktadır. Morris su labirenti sonuçları, gecikme süresindeki yüzde değişimi gösteren bu grafikte kanıtlandığı gibi, komorbid hayvanlarda hafıza eksikliklerini de ortaya koymaktadır, hayvanların bir zamanlar platformun birinci ve ikinci prob denemeleri arasında olduğu havuzun çeyreğine ulaşmak için geçen süre. Burada, inme geçiren APP21 sıçanlarının hedef kadrana girmesi ikinci denemede önemli ölçüde daha uzun sürer.

Tek başına transgenik sıçanlar veya felçli vahşi tip hayvanlar tarafından gösterilmeyen bir fark. Bu, komorbid hayvanların uzun süreli hafıza eksikliğine sahip olduğunu gösterir. Bu prosedürü denerken, test oturumları boyunca ve boyunca tüm değişkenleri mümkün olduğunca tutarlı tutmak ve hayvanlar için stressiz bir ortam yaratmak önemlidir.

Bu videoyu izledikten sonra, inme sonrası demansın sıçan modellerinde motor ve bilişsel performansın nasıl değerlendirileceğini iyi anlamış olmalısınız.