Kokain kaynaklı Davranış HASSASİYET ve Fare koşullu yer tercihi Değerlendirilmesi

Bu davranışsal görevlerin genel amacı, araştırmacıların ödül ve duyarlılaşma gibi ilaçla ilişkili davranışları değerlendirmelerine olanak sağlamaktır. Bu yöntemler, ilaçla tetiklenen plastisiteye hangi moleküllerin veya yolakların katkıda bulunduğu gibi ilaç bağımlılığı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajı, yüksek verimli olmaları ve hem ev yapımı hem de satın alınmış ekipmanlar kullanılarak gerçekleştirilebilmeleridir. Farklı ilaç dozları kullanılarak koşullu yer tercihi deneyleri yaptığımızda, bu yaklaşım değişmiş ilaç duyarlılığından kaynaklanan farkları ortaya çıkarabilir ve bulgularınıza ek güven sağlayabilir. Bu deney, otomatik veri toplama için foto-ışınlar ile donatılmış üç odacıklı CPP kutuları kullanır. Elinizde dört veya daha fazla kutu bulundurun. Bu aparat, farelerin bir kapak aracılığıyla içine girebildiği A ve B şeklinde iki büyük odacığa sahiptir. Her odacığın içinde kısılabilir bir ışık kaynağı bulunur. A ve B odacıkları görsel olarak belirgin (örneğin beyaz ve siyah) ve aynı zamanda farklı zemin dokuları ile dokunsal olarak belirgin hale getirilir. İki büyük odacığın arasında, sürgülü kapılarla erişilebilen daha küçük, birbirine bağlayan nötr bir odacık veya C odacığı bulunur. Dengeli bir tasarımın nasıl kurulacağına dair önemli bilgiler de dahil olmak üzere CPP kutuları hakkında daha fazla ayrıntı için metin protokolüne bakın. Bu deneyler için, değişken hayvan tutmanın sonuçlar üzerindeki etkisini en aza indirmek amacıyla düzenli olarak tutulmuş fareler kullanın. Test odasını hazırlayın, CPP kutularını iyice temizleyin. Ekipmanları açın ve oda ışıklarını kısın. Ardından, denemeden 60 ila 90 dakika önce fareleri test alanına taşıyın. İlk test gününde bir ön test gerçekleştirin. Odalar arası kapıları açarak odacıkları hazırlayın. Ardından bilgisayar programını açın. Test programını yükleyin. Burada hayvan kimliklerini (ID) girin ve başlat komutunu verin. Hazır olduğunda, her fareyi nazikçe atandıkları aparatın orta odacığına yerleştirin. Ön denemelerden sonra fareleri ev kafeslerine geri götürün ve verileri dışa aktarın. Ön test sonuçlarından, her hayvanın A ve B odacıkları için tercihini belirleyin. Her birinde geçirilen süreyi diğerinden çıkarın ve farkı bir indeks olarak kullanın. Metin protokolünde açıklandığı üzere, burada kırmızıyla gösterilen güçlü ön test tercihlerine sahip hayvanlara özel önem verin. Bu sonuca göre her fare için ilaçla eşleşen odacığı seçin. Her test grubu için indeks puanlarının toplamı eşdeğer ve sıfıra yakın olmalıdır. Diğer bir ifadeyle, farelerin yaklaşık yarısı için tercih edilen tarafı seçin. Ayrıca, her grup içindeki hayvanları A ve B odacıklarına eşit olarak dağıtın. Birden fazla grubu eş zamanlı olarak koşullandırmak istenirse, aynı aparatı kullanan hayvanların zıt odacıklara atanmasına çalışın. Daha fazla ayrıntı için metin protokolüne bakın. Dengeli bir tasarım kullanırken koşullu yer tercihinde kritik bir adım, ön test puanlarının tüm test grupları için neredeyse eşit ve mümkün olduğunca sıfıra veya tercihsizliğe yakın olması için ilaçla eşleşen odacıkların atanmasıdır. Başlamak için, koşullandırma aşamasından önce her zaman her fareyi tartın. İlk koşullandırma gününde, her hayvanın vücut ağırlığına göre kokain veya seçilen test ilacı içeren şırıngaları hazırlayın. Dönüşümlü günlerde, serum fizyolojik veya başka bir uygun taşıyıcı içeren şırıngaları hazırlayın. Odalar arası kapıları kapatarak kutuları hazırlayın. Bilgisayarda koşullandırma programını yükleyin, kimlikleri girin ve programı başlatın. Ardından, hayvanlara ilaç veya taşıyıcı boluslarını enjekte edin ve onları atanan kutularına yerleştirin. Her gün, her fare için koşullandırmanın atandığı şekilde doğru A veya B odacıklarında gerçekleştiğinden emin olmak kritiktir; çünkü bu adımdaki hatalar hayvanların çalışmadan çıkarılmasını gerektirebilir. En fazla 30 dakikalık koşullandırmanın ardından fareleri ev kafeslerine geri götürün. Tüm denemeler tamamlandığında, verileri dışa aktarın ve fareleri koloniye geri gönderin. Bu analiz, 20 inç x 11,5 inç boyutlarında dört sekizlik foto-ışın dizileri kullanır. Elinizde dört ile 16 arasında dizi bulundurun. Her diziyi üstü açık siyah Pleksiglas bir odacığa yerleştirin. Test odasında, odacıkları aydınlatmak için bir kırmızı ışık hazırlayın. Yazılımda, günlük alıştırma ve enjeksiyon denemeleri için program oturumlarını hazırlayın. İlk olarak, alıştırma denemesi süresini 30 ila 60 dakika olarak ayarlayın. Bir saat iyi bir başlangıç noktasıdır. Işın kesilmelerinin beş dakikalık veya daha kısa aralıklarla kaydedilmesini sağlayın. İkinci olarak, her odacıktaki deneme süresinin, deneme bir başlatma sinyali ile başlatıldıktan sonra ilk foto-ışın tetiklendiğinde başlayacak şekilde ayarlanması gerekir. Üçüncü olarak, enjeksiyon denemesi süresini 60 ila 120 dakika olarak ayarlayın. Mümkünse, enjeksiyon denemeleri için başlatma sinyallerini hep birlikte değil, foto-ışın dizilerinden tek tek başlatmayı seçin. Lokomotor duyarlılaşma, 10 veya 11 ardışık günlük bir başlangıç test süreci gerektirir. Her gün, fareleri testten 30 ila 60 dakika önce davranışsal bekleme odasına getirin. Şimdi, her odacığa taze, yarı saydam bir fare kafesi yerleştirin. Foto-ışınların her kafesin uzun ekseninde ortalandığından emin olun. Hazır olduğunda, fareleri rastgele sırayla ev kafeslerinden çıkarın. Önce ense derilerini tutup tartın. Ardından her birini alıştırma denemesi için atanan lokomotor test kafesine yerleştirin ve kapakla kapatın. Her gün, enjeksiyonsuz bir alıştırma denemesi ve ardından bir enjeksiyon denemesi içerir. Alıştırma denemesi sırasında, her farenin mevcut vücut ağırlığına göre şırıngaları hazırlayın. Tüm alıştırma denemeleri sona erdikten sonra, enjeksiyon denemesi programını yükleyin ve test odasına sessizce girin. Bir fareye enjeksiyon yaptıktan sonra, yazılımdaki kafes başlatma sinyalini hızla verin ve ardından o fareyi test kafesine geri koyun. İlk üç ila dört test günü boyunca serum fizyolojik veya başka bir uygun taşıyıcı uygulayın. Sonraki yedi gün boyunca kokain veya seçilen test ilacını uygulayın. Tüm enjeksiyon denemeleri sona erdikten sonra fareleri barınma odasına geri götürün. CPP analizinde, yabanıl tip C57 black 6n fareleri yalnızca serum fizyolojik veya iki farklı konsantrasyonda kokain ile koşullandırılmıştır. Sadece serum fizyolojik grubu, beklendiği gibi koşullandırmadan sonra tercihte hiçbir değişiklik göstermezken, kokain ile tedavi edilen gruplarda artan tercihler gözlemlenmiştir. Test öncesi ve sonrası farklı odacıklarda geçirilen süre, kokain ile tedavi edilen farelerin, diğer odacıklardan ziyade kokainle eşleşen odacıkta daha fazla zaman geçirdiğini göstermiştir. Sadece serum fizyolojik alan fareler, beklendiği gibi odacık tercihinde belirgin bir fark göstermemiştir. Ardından, C67 black 6n fareleri üzerinde lokomotor analiz gerçekleştirilmiştir. Üç ila dört gün boyunca serum fizyolojik enjeksiyonları yapılmış, ardından yedi gün boyunca dört farklı dozda kokain enjeksiyonları uygulanmıştır. Beklendiği gibi, kokain dozları arttıkça davranışta daha belirgin değişiklikler gözlemlenmiştir. Bir zorlama testi için, bir ila iki haftalık yoksunluk süresinden sonra, her gruba orijinal kokain dozu verilmiştir. Daha sonra değişken yoksunluk süreleri ve dozları ile ek zorlamalar uygulanmıştır. Bu video, bu teknikleri ticari olarak satın alınmış ekipmanlar kullanarak göstermiş olsa da, birçok laboratuvar bunları ev yapımı cihazlar kullanarak başarıyla uygulamaktadır. Bu prosedürleri denerken, stresi, hataları ve deneyler arası değişkenliği azaltmak için tüm hayvanların eşit muamele görmesini sağlamak önemlidir. Dikkate alınması gereken değişkenler arasında tutma süresi ile test odasında ve odacıkta geçirilen süre yer alır. CPP için sönme ve yeniden başlatma, lokomotor duyarlılaşma için ise uzun süreli veya çapraz duyarlılaşma zorlamalarını içeren bu analizlerin genişletilmesi arzu edilebilir. Ek olarak, ilaç kullanmamış farelerin kullanılması önemlidir