Name: Yenidoğan Anneden Ayrılma Fare Modelinde perigenital Duyarlılık ve Prostat Mast Hücre aktivasyonu Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Öğrenin, erken yaş stresinin ürogenital sistem üzerindeki etkilerini C57BL/6 farelerinde perigenital mekanik duyarlılık ve prostat mast hücre aktivasyonu ölçerek değerlendirmeyi. Bu yöntem kronik pelvik ağrı sendromu modelleri için önemli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar teknik yardım için Janelle Ryals, Rachel Supple ve Frank Wang'a teşekkür eder. Bu çalışma, NIH hibeleri R03 DK080182 (JAC), R01 DK099611 (JAC), R01 DK103872 (JAC), Biyomedikal Araştırma Mükemmeliyet Merkezi (COBRE) hibesi P20 GM104936 (JAC), başlangıç fonları ve Kansas Kurumsal Gelişim Ödülü (IDeA) P20 GM103418'nden temel destek, Kansas IDDRC P30 HD002528'nden çekirdek destek ve Madison ve Lila Öz Burs Programı (ANP).

Bu protokol açıklanan tüm deneyler Kansas Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu Üniversitesi tarafından belirlenen esaslara uygun olarak NIH kurallarına uygundur. 1. Yenidoğan Anne Ayırma (NMS) <ol><li> Çöp doğum günlük hamile baraj izleyin. Not: doğar çöp P0 kabul edilir bir gün. </li><li> P1, ev kafes baraj kaldırmak ve temiz bir kap içine koyun ikincil. </li><li> Evde kafes kokusunu korumak için temiz eldivenli elleri arasına yatak bir avuç ovun. </li><li> Uygun 2 L cam beher etiketli, temiz içine ev kafes yatak 2 cm - 1 derinliğe ekleyin. Cam beher, ev kafes içinde mevcut olan herhangi bir ek zenginleşme yatak malzeme, örneğin, nestlet, kırışık kağıt yaklaşık yarısını ekleyin. </li><li> Yavaşça aynı beher, bireysel, tek bir çöp gelen yavruların hepsi koyun. </li><li> Hemen yerbir kuluçka makinesi içinde beher 180 dakika süreyle 33 o C ve% 50 nemlilikte tutulmaktadır. </li><li> İkincil kaptan baraj çıkarın ve ev kafesine onu iade edin. Vivaryum içinde kendine uygun konut konumu ev kafes dönün. </li><li> , NMS geçiren her çöp / baraj temiz eldiven ve ikincil kapları kullanarak her çöp için bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Bunlar çıkarıldı olarak 180 dakika ayırma sürenin sonunda, aynı sırada kendi kafeslerine ibrelerin döndürür. </li><li> Günün erken ayrıldı ilk çöp ev kafes alın. Ev kafesinden baraj çıkarın ve temiz bir kap içine koyun ikincil. </li><li> Inkübatör ilk beher çıkarın ve yavrular işlerken evde kafes kokusunu korumak için temiz eldivenli elleri arasına yatak bir avuç ovalayın. </li><li> Yavaşça ev kafesine kaptan ayrı ayrı, yavruların taşıyın. </li><li> Için beher kalan zenginleşme ve yatak dönev kafes. </li><li> Ev kafesine ikincil kaptan baraj İade ve vivaryum içinde kendine uygun konut konumuna geri döndürebilir. </li><li> Su ile durulayın ve beher inkübatör geri. Ayırma işlem boyunca her çöp için aynı beher kullanın. </li><li> Onlar inkübatör yerleştirildi aynı sırayla NMS geçiren her çöp için bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Her çöp Yapılıyor NMS P21 ile her gün için tüm bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Yiyecek ve su ile tam temiz kafeslerde birlikte aynı cinsiyetten yavruları koyarak P22 üzerinde NMS ve naif yavrular vazgeçirmek. Naif yavru doğdu ve NMS fareler ile aynı koşullar altında muhafaza fakat normal hayvancılık görevleri dışında başka bir işleme tabi tutulabilir olmalıdır. </li></ol> 2. perigenital Mekanik Hassasiyet <ol><li> von Frey tertibat Ayar <ol><li> Test odasına fareler getirin ve onları için 30 gelmesini bekleyindk evlerinde kafeslerde kalan süre. </li><li> Araştırmacı fareler, yüksekliği yaklaşık 55 cm şaşırtıcı olmadan alt gelen yaklaşmasına izin için yeterli alan sağlar yükseltilmiş bir tel örgü-üst tablo (79 cm x 28 cm) altında bir emici underpad koyarak test alanını hazırlayın. </li><li> Şeffaf, delikli plastik odaları altında, ayrı ayrı, 12 fareye tel örgü tablosunun üstündeki (11 cm x 5 cm x 3,5 cm) kadar yerleştirin. Kaçan fareler önlemek için odaların üstünde ağır bir nesne yerleştirmeyin. </li><li> Geri çekme eşiği değerlendirmesine önceki ekrana ek bir 30 dakika boyunca fareler alıştırıldı. </li></ol></li><li> Perigenital Mekanik Hassasiyet Değerlendirme <ol><li> Kademeli von Frey monofillerin 43 standart seti kullanarak yukarı-aşağı yöntemi uygulayın. Aşağıdaki monofilamanlar kullanın: 1.65 g, 2.36 g, 2.83 g, 3.22 g, 3.61 g, 4.08 g, 4.31 g, ve 4.74 g. <ol><li> 3.22 g monofilament tabanını tutun ve geri çekilmiş mono maruzFilament. Not: Bazı modellerde bir geri çekilme monofilament olmayabilir. </li><li> Monofilament dikey odaklı böylece sonda yerleştirmek ve fare, uyarı hareketsiz ve onun vücut ağırlığı arka pençelerinin arasında eşit olarak dağıtılır zaman hafif bir kadar orta hat kaçınarak, skrotum sol veya sağ tarafına ya uygulamak eğme filament görülmektedir. </li><li> 10 sn veya hayvan olumlu bir yanıt gösterene kadar yerinde monofilament tutun. Not: bir pozitif tepki monofilin uygulama ya da yalama ya da monofilament yönelik ısırma davranışları karşılık olarak bir canlı pislik ya da atlama olarak kabul edilir. Bu davranışları görüntülemeden 10 sn monofilament uygulama sırasında fare hareket, monofilament asgari 1 dakika süren dinlenme dönemi izleyen tekrar test edilmesi gerekir. Bir fare ne hamle de 10 sn monofilament uygulama sırasında listelenen davranışların üzerinde herhangi sergilerse, bu olumsuz bir yanıt olarak kabul edilir. </li><html><li> Bir laboratuar dizüstü veya dizüstü bilgisayar, olumlu veya olumsuz, bir yanıt kaydedin ve 3.22 g monofilament kullanılarak, kalan farelerin tüm bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Daha sonraki uygun monofilament kullanan farelerin hepsi sınayın. Not: Fare 3.22 g monofilament olumsuz yanıt sergiledi ise, aynı şekilde 3.61 g monofilament uygulamak ve yanıtı kaydedin. Fare 3.22 g monofilament olumlu yanıt sergiledi ise, 2.83 g monofilaman uygulamak ve yanıtı kaydedin. </li></ol></li><li> İlk olumlu cevap görülmektedir sonra ek bir 4 uygulamalar için, uygun şekilde, bir sonraki daha büyük veya daha küçük monofilament kullanarak her fare test devam edin. </li><li> Ev kafeslere fareler dönün. </li><li> Chaplan ve arkadaşları. 43&#39;de tarif edildiği gibi% 50 gr geri çekme eşiğinin için günlük birimlerinin deneme dizisi uygulanan son von Frey monofilin değerini kullanın. </li></ol></li></ol>başlığı &quot;&gt; 3. Acidified Toluidine Mavi Mast Hücre Boyama <ol><li> Doku İşleme <ol><li> Intrakardiyak buz soğukluğunda% 4 paraformaldehit ile perfüze 45 olan farelerden prostat dokusu 44 teşrih. Postfix&#39;i oda sıcaklığında 1 saat süreyle% 4&#39;lük paraformaldehit doku ve daha sonra 4 ° CO / N 1x PBS içinde% 30 sukroz içinde cryoprotect. </li><li> Heptan küçük bir (30 mi) bir banyo hazırlayın ve kuru buz üzerine yerleştirin. </li><li> 1x PBS prostat dokusunu durulayın ve bir hafif yük silin kullanarak kurutun. </li><li> Dondurulmuş kadar soğuk heptan içine prostat dokusunu yerleştirin. </li><li> Donmuş kadar hemen kuru buz üzerinde montaj medya ve yeri içeren bir cryomold dondurulmuş prostat dokusunu yerleştirin. </li><li> Mağaza -20 ° C &#39;de cryomolds. </li><li> Enine bir Kriyostat kullanarak 7 mikron kalınlığında cryosections halinde prostat dokusunu kesti. </li><li> Pozitif yüklü mikroskop lamı üzerine, doku uzunluğu kapsayan 12 olmayan seri cryosections - 8 koyun. </li><li> Mağaza fazla işlem kadar -20 ° C&#39;de slaytlar tamamladı. </li></ol></li><li> Acidified Toluidin Blue Hazırlama <ol><li> % 1 &#39;lik bir stok çözeltisi hazırlamak üzere çözelti içinde kadar, 100 ml% 70 etanol ve vorteks Toluidin Mavi O 1 g ekleyin. stok çözeltisi en fazla üç hafta boyunca oda sıcaklığında saklanabilir. </li><li> Bir karıştırıcı plaka üzerine yerleştirilmiş bir çanak içinde 100 ml su, 1 g NaCI ekleyin. </li><li> 1.0 elde edilir - 0.5 arasında bir pH aralığı kadar 12 M HCI kullanılarak NaCl çözeltisi pH ayarlayın. </li><li> Toluidin Mavi stok çözeltisi 8 ml ve% 1 NaCl çözeltisi 32 ml birleştirerek% 0.25 Toluidin Mavi çalışma çözeltisi hazırlayın. Toluidin Mavi stok solüsyonu toplam birleşme sağlamak ve bir girdap kullanarak karıştırmak için aşağı yukarı pipet ve. çalışma çözeltisi taze yapılmış ve kullandıktan sonra atılmalıdır. </li></ol></li><li> Prostat cryosections Boyama <ol><li> Dondurucu işlenecek slaytları çıkarın ve yaklaşık 30 m oda sıcaklığına gelmesini sağlayınıziçinde. </li><li> Bireysel slayt monte doku bölümleri tamamen sular altında olacak emin olmak için 1x PBS yeterli bir hacmi içeren 50 ml&#39;lik konik tüp içine yaklaşık 1 saniye boyunca slaytlar batırarak doku bölümleri yıkayın. Slaytlar bir kağıt havlu üzerinde kuru hava için izin ver. </li><li> Yeterince% 0.25 çalışan Toluidine Mavi çözeltisi içeren bir cam boyama kavanoza yerleştirin slaytlar slayt monte doku bölümleri tamamen sular altında olacak emin ve 10 inkübe - süre 15 rpm&#39;de ayarlanmış bir platformdur rocker 15 dakika. </li><li> Yaklaşık 1 saniye 1x PBS Dip slaytlar aşırı Toluidine Mavi yıkayın. </li><li> Slaytlar, drenajı mümkün kılması için kendi tarafta olduğu şekilde bir slayt kutusu ya da rafa slaytlar yerleştirin. </li><li> 2 saat oda sıcaklığında veya O / N, en az 37 ° C sıcaklıkta bir fırın içinde slaytlar kurutun. </li><li> Alkol maruziyet arasındaki slaytlar tamamen kuru izin hızla alkol kullanarak slaytlar dehydrate. Bir kağıt havlu a üzerinde drenaj kuru slaytlarnd hafif görev ile silinerek arkaları ve kenarları silin. <ol><li> Yaklaşık 1 saniye% 95 EtOH slaytlar daldırın ve tamamen kuru izin verin. Doku mor daha mavi kuruyana kadar 10 kez - Bu işlemi 1 tekrarlayın. </li><li> Yaklaşık 1 saniye% 100 EtOH slaytlar daldırın ve tamamen kuru bekleyin. Doku ve orta mavi karanlık, ama mor olmayana kadar 10 kez - Bu işlemi 1 tekrarlayın. </li></ol></li><li> 3 dakika boyunca% 100 ksilen slaytlar inkübe edilerek leke sabitleyin. Kurumasını bekleyin. </li><li> Gliserol, PBS, ya da ksilen bazlı kalıcı montaj medya ile slaytlar lamel. Oda sıcaklığında aşırı medya ve mağaza boşaltın. </li></ol></li><li> Ükler Mast Hücreleri <ol><li> 20X büyütme ışık mikroskobu kullanılarak (Şekil 2) toluidin blue-lekeli doku bölümleri gözünüzde canlandırın. </li><li> Görüntülenmiştir alanı içinde bulunan mast hücrelerinin toplam sayısını ve olmayan degranüle ve degranüle mast hücreleri arasında ayrım. 40X Magnificatiyon bazı mast hücrelerindeki granülasyon durumunu onaylamak için gerekli olabilir. Not: Non-degranüle mast hücreleri ya da hiç soluk nükleer anahat ve / veya hücre çevresinde hiçbir granül ekstrüzyon ile yoğun metakromazi gösterirler. Degranüle mast hücreleri daha az yoğun metakromazi sergileyen ve sitoplazma içinde ve hücre sınırın dışında çekirdek ve / veya serbest granül bariz bir açık anahat var. </li><li> Mevcut doku kesitinin bütünüyle olmayan degranüle ve granüle mast hücrelerinin toplam sayısını değerlendirmek için devam edin. Uzunluğu, her dokuyu kapsayan, en az 7 ek ayrı bölümlerde bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Aşağıdaki denkleme göre her bir doku / fare için toplam mast hücreleri için granüle (DG) yüzdesini hesaplayın: (DG mast hücreleri / Toplam mast hücreleri) x 100. </li></ol></li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu protokol, yetişkin erkek farelerde CP / KAPS gösterge semptomolojisini indükleme NMS şeklinde neonatal stres kullanmak için bir yöntem sağlar. Yetişkinler olarak NMS fareler önemli düzeyde perigenital mekanik alodinya, hem de prostat dokusu mast hücre degranülasyonunu kanıt gösterir. NMS kullanımı olarak, genellikle kronik pelvik ağrı 12-14 olan hastalar tarafından bildirilen erken yaşam stresi, çoğaltır CP / KPAS bir klinik öncesi bir model geliştirilmesi yanı sıra non-invaziv indüksiyon birleşmeyle için ...

Kronik pelvik ağrı başlı başına bir hastalık değildir, daha ziyade irritabl barsak sendromu (IBS) tanısı hastalar tarafından devam eden spontan ve / veya uyarılmış ağrı, interstisyel sistit / ağrılı mesane sendromu (IC / PBS), vulvodini ile ilgili bir terim, veya kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu (CP / CPPS). Bu sendromlar genellikle bağışıklık sistemi, merkezi sinir sistemi ve periferal sinir sistemi içinde işlev bozuklukları bu bozukluklara 1 bakım ve ilerlemesine katkıda gösterilmiştir, ancak bunlar, herhangi bir ilişkili patolojisini veya tespit altta yatan nedeni olduğu birçok özelliklere eşlik eden ve paylaşan -3. Kronik pelvik ağrısı olan hastalar semptomları ile ortaya olasılığı daha yüksektir ek olmayan pelvik ilgili hipotalamik değişmiş işleyişi ile ilişkili bulunmuştur anksiyete, depresyon ve panik bozukluk 4-6 da dahil olmak üzere fonksiyonel ağrı bozuklukları ve duygudurum bozuklukları, hipofizadrenal (HPA) eksen 7-10. Erken yaşam stres veya travma Pozlama HPA anormallikleri ve ilişkili kronik ağrı sendromları 10,11 ve gibi geliştirmek için önemli bir risk faktörüdür, fonksiyonel pelvik ağrı bozukluğu olan hastaların önemli bir alt kümesi gibi istismar veya ihmal gibi olumsuz çocukluk olayları deneyimli rapor 12-14. Sütten kesim öncesi dönemde zaman belirli bir süre için kendi baraj yavrular kaldırmayı içerir neonatal anne ayrılık (NMS), kemirgen modelleri, erken yaşam stresi sonuçlarını incelemek için son iki yıldır kullanılmaktadır. Genel olarak, NMS doğrudan hipotalamus içinde gen ekspresyonunu etkileyebilen yanı sıra, limbik yapılarda 15-18 aşağı akış düzenleme bozulmasıyla, HPA eksen aktivasyonu ve elde edilen anksiyete benzeri davranışları geliştirmek için gösterilmiştir. Doğru HPA ekseninin işleyişinin bozulması artan kolorektal 19-22 katkıda gösterilmiştir </sup&gt; Ve vajinal 16 duyarlılık kemirgen NMS modelleri tarafından görüntülenen, ancak doğum sonrası mesane iltihabı 23-25 ​​uzun vadeli etkisi geniş karakterizasyonu rağmen, erken yaşam stresinin etkisi büyük ölçüde ürogenital organlarda unstudied gitti. Bu nedenle, aşağıdaki çalışma farelerde NMS gerçekleştirmek ve daha sonra CP / KPAS için bir preklinik model olarak erkek NMS farelerin kullanımını doğrulamak için prostat perigenital mekanik duyarlılık ve mast hücre infiltrasyonu / aktivasyonunu değerlendirmek için nasıl anlatacağız. Tanısı kronik pelvik ağrı bozukluklarının tüm CP / CPPS bel ağrısı ya da romatoid o iki belki de yaklaşık% 14 26 yaşam boyu yaygınlığı ve 4.400 $ (tahmini yıllık hasta maliyetlerinin olmasına rağmen en az iyi tanınan ve karakterize sendrom olduğunu artrit 27). Perine, rektum, prostat, penis, testisler ve / veya karın 28, hi deneyim CP / CPPS raporu ağrısı olan hastalarGher kontrol hastalara 29 den psikolojik stres derecesi, ve ya semptomları ile yaygın mevcut komorbid kronik pelvik ağrı ya da duygudurum bozuklukları 5,29-31 ile tanı konur. Tekrarlayan enfeksiyonu, sızan epiteli, nörojenik enflamasyon ve otoimmünite tüm potansiyel yatan / CPPS 2,32,33 CP nedenleri olarak mast hücresi aktivasyonu ve degranülasyonunu 34 olarak tahmin etti edilmiştir. Ayrıca artmıştır, mast hücresi aktivasyonu bir belirteç CP / KPAS&#39;li erkeklerden ifade prostat salgıları mast hücre triptaz ve sinir büyüme faktörü (NGF) seviyeleri 34 artmış ve bir sonraki çalışma triptazın doğruladı ve A (CPA3) carboxypeptidase CP / CPPS hastalarının 35 idrar. başlangıç ​​ve CP / KAPS bakım mast hücreleri için potansiyel rolü bugüne kadar bu sendromun hayvan araştırmalarının önemli bir odak noktası olmuştur. En sık kullanılan kemirgen modeli CP incelemek için kullanılan / CPPS deneysel otoimmün prostatit ise (DAP) modeli gen34,36-39 kullanılan türler ve suşu ile ilgili olarak, prostat iltihabı, çeşitli derecelerde sonuçlanan Tam Freund katkı maddesi, prostat antijeni deri altına enjeksiyon tutulmasıyla oluşturulmuştur. Mast hücresi infiltrasyonu ve aktivasyon / degranülasyon DAP 34,35,40 aşağıdaki indüksiyonu geliştirmek için gösterilmiştir. Mast hücreleri 34 veya triptaz reseptörü PAR2 35 ya eksik transgenik fareler vahşi tipli DAP fareler aksine DAP aşağıdaki prostat taktik duyarlılık geliştirmek yok. Bu preklinik model, insan CP / KPAS özelliklerinin birçoğu çoğaltır ederken, indüksiyon protokolü doğrudan inflamasyon, enfeksiyon ya da prostat yaralanma içermeyen, genellikle farklı etyolojisi vardır ve insan koşulu, göstergesi değildir. İnsanlarda CP / KPAS gelişimine erken yaşam stresinin etkisi büyük ölçüde soruşturulmadan uğramış; Ancak, Hu ve ark. 41 tarafından yapılan bir çalışmada, bana gösterdin çocukluk fiziksel, duygusal öyküsü bildirdi ve / veya cinsel istismar CP / KPAS düşündüren belirtileri yaşamaya anlamlı olarak daha fazlaydı kim. Dahası, onlar acı ve idrar skorları hem fiziksel hem de duygusal istismar öyküsü olan hastalarda artmış olduğunu gösterdi. Biz daha önce dişi C57BL / 6 farelerinde aynı NMS paradigma vajinal hipersensitiviteye ve anormal gen ifadesini ürettiğini göstermiştir hem vajina ve işlevsiz HPA ekseninin çıkışı 16 düşündüren mesane. Daha net erken yaşam strese maruz kalma 12-14 ile bağlantılı olduğu gösterilmiştir IC / PBS ve duygudurum bozuklukları gibi diğer komorbiditeler 42, ile başvuran CP / CPPS hastalarının yüksek prevalans ile birlikte bu delil, bir kullanma gerekçelerini sağlar NMS modeli farelerde CP / KPAS araştırmak.

<table><tbody><tr><td>Gebe C57BL / 6 dişi fare&nbsp;</td><td>Charles River</td><td>027</td><td>Zamanlanmış veya zamansız hamile kadınlar, evde doğum için günlük olarak izlenmelidir.</td></tr><tr><td>2 L cam beher(ler)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS10002L</td><td>Her NMS çöpü, 21 günlük ayırma süresi boyunca aynı beherde tutulacaktır.</td></tr><tr><td>VWR Cebri Hava İnkübatörü, Temel</td><td>VWR International</td><td>414005-124</td><td>Kuluçka makinesi 33 ° C'de tutulmalıdır; C ve% 50 nem.</td></tr><tr><td>Dokunma Testi Duyusal Değerlendirici, 20'li Kit (Dokunma değerlendirmesi için Semmes-Weinstein Von Frey Anesteziyometresi)</td><td>Stoelting</td><td>58011</td><td>Perigenital duyarlılık değerlendirmesi için aşağıdaki monofilamentler kullanılmalıdır: 1.65 g, 2.36 g, 2.83 g, 3.22 g, 3.61 g, 4.08 g, 4.31 g ve 4.74 g.</td></tr><tr><td>Hayvan Muhafazası (12 fare 6 sıçan)</td><td>IITC</td><td>435</td><td>Farelerin kaçmasını önlemek için akrilik hayvan muhafazalarının üzerine ağır bir nesne koyduğunuzdan emin olun.</td></tr><tr><td>Fareler ve sıçanlar için Mesh Standı (12 fare, 6 sıçan)</td><td>IITC</td><td>410</td><td>Rahat erişim için standı sabit bir masa üstüne yerleştirin.</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5493</td><td>10x PBS stoğunu 1x PBS'ye seyreltin.</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Mast hücre boyamaya hazırlanırken fareleri intrakardiyal olarak perfüze etmek ve dokuyu sabitlemek için %4'lük bir paraformaldehit çözeltisine ihtiyaç vardır.</td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5016</td><td>Cryoprotect sabit doku, 4 ° C'de% 30 sükroz çözeltisi içinde; C bir gecede.</td></tr><tr><td>Heptan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>246654</td><td>Dokuyu dondurmak için heptanı kuru buz üzerinde soğutun.</td></tr><tr><td>Standart Cryomold&nbsp;</td><td>VWR International</td><td>4557</td><td>Kriyostat kesitinden önce prostat dokusunun dondurulmasına yardımcı olmak için</td></tr><tr><td>: Tissue-Tek OCT Bileşiği</td><td>Sakura</td><td>4583</td>, <td>12 x 125 ml</td></tr><tr><td>VWR Superfrost Plus Micro Slide</td>, <td>VWR International</td><td>48311-703</td>, <td>75 x 25 x 1 mm</td></tr>, <tr><td>Toluidin Mavisi O</td><td>, Sigma-Aldrich</td><td>198161</td><td>Biyolojik Leke Komisyonu tarafından onaylanmıştır. Mast hücreleri için metakromatik bir boya olarak kullanıma uygundur.</td></tr><tr><td>Etanol, Mutlak (200 Kanıt)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı, Fisher Biyoreaktifleri; Mast hücresi görselleştirmesinden önce lekeli kriyoseksiyonları dehidre etmek için %95 ve %100 solüsyonlara ihtiyaç duyulacaktır.</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>Asitlendirilmiş NaCl çözeltisi, kriyokesitler boyanmadan önce taze hale getirilmelidir.</td></tr><tr><td>GeneMate Steril 50 ml Santrifüj Tüpleri&nbsp;</td><td>BioExpress</td><td>C-3394</td><td>Toulidin mavisi elementleri karıştırmak veya slaytları 1xPBS'ye daldırmak için kullanılan tek kullanımlık tüpler.</td></tr><tr><td>10 slayt için Coplin boyama kabı, buzlu cam kapaklı</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-815</td><td>10 standart 3 x 1 inç'e kadar tutun. (75 x 25mm) arka arkaya kayar. Toluidin Blue çalışma solüsyonu, %95 EtOH, %100 EtOH ve ksilen için ayrı kaplar kullanın.</td></tr><tr><td>Ksilenler (Histolojik)</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P</td><td>Susuz kaldıktan sonra doku ksilen ile temizlenir.</td></tr><tr><td>Mikroskop Slayt Kutuları, 100'lü</td><td>VWR International</td><td>82003</td><td>Kutuları, slaytların depolanması ve taşınması için kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Fisherbrand Mikroskop Slayt</td><td>Kutusu Fisher Scientific</td><td>22-363-400</td><td>Bu slayt kutuları tipik olarak bir kriyostatın içine sığacak kadar küçüktür.</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td>Gliserol geleneksel bir montaj ortamıdır.</td></tr><tr><td>Montaj Ortamı, Richard-Allan Scientific</td><td>VWR International</td><td>4111</td><td>Montaj ortamı, lamel lamel kızağa sıkıca yapışır.</td></tr><tr><td>Mikro Kapak Camları, Dikdörtgen, No. 1</td><td>VWR International</td><td>48393-106</td><td>Numuneyi korumak için susuz kalmış ve temizlenmiş dokunun üzerine bir lamel yerleştirilir.</td></tr><tr><td>Işık Mikroskobu</td><td>Nikon</td><td></td><td>Laboratuvarımız tarafından kullanılan Gelişmiş Otomatik Araştırma Mikroskobu Eclipse 90i'nin üretimi durdurulmuş ve Eclipse Ni-E'nin yerini almıştır. &nbsp;</td></tr></tbody></table>

yenidoğan anneden ayrılma fare modelinde perigenital duyarlılık ve prostat mast hücre aktivasyonu değerlendirilmesi

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

Kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu (CP / CPPS)% 14 yaşam boyu yaygınlığı vardır ve 50 yaşın altındaki erkeklerde en sık ürolojik tanı, henüz en az anlaşılan ve çalışılan kronik pelvik ağrı bir hastalıktır. Kronik pelvik ağrı raporu ile hastaların önemli bir alt kümesi belirgin hipotalamus-hipofiz-adrenal (HPA) eksen işleyişi ve düzenlenmesini etkileyen erken yaşam stresi ya da kötüye, deneyimli. Gösterilmiştir mast hücresi aktivasyonu, kısmen HPA ekseninin alt aktivasyonu ile düzenlenir, her iki idrar artmış ve CP / CPPS hastanın prostat salgıları ifade edilmesi. Yenidoğan anne ayırma (NMS) HPA eksenin ve visseral duyarlılık değişiklikleri de dahil olmak üzere, kemirgen modellerinde erken yaşam stresi sonuçlarını incelemek için iki yıldan uzun bir süredir kullanılmaktadır. Burada erkek C57BL / 6 farelerinde CP / KAPS preklinik model olarak NMS kullanılarak ayrıntılı protokol sağlar. Biz metodoloji tarifperigenital mekanik allodini ve mast hücresi aktivasyonu histolojik kanıtları değerlendirirken, NMS gerçekleştirmek için. Biz de erken psikolojik stres farelerde erkek ürogenital sistem üzerinde uzun süreli etkilere sahip olduğuna dair kanıt sağlamaktadır.

NMS geçiren fareler CP / KPAS göstergesidir davranışsal kanıt gösterdi. Von Frey monofiller, 8 haftalık fareler NMS kademeli bir dizi ile test edildiği zaman (n = 4) saf karşılıkları ile karşılaştırıldığında perigenital mekanik alodinya gösterilmiştir (n = 5, Şekil 2). Monofilament yönelik monofilin uygulama ya da yalama ve ısırma davranışları yanıt olarak canlı bir pislik ya da atlama olarak kaydedilir, pozitif bir davranış yanıtı ortaya çıkardı, mekanik geri çekme eşiği, bu önemli bir azalmaya (Studen...

Kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu bir klinik öncesi modelini teşvik etmek amacıyla yenidoğan anne ayrılık, - Biz bir erken yaşam stresi paradigmasını uygulanan erkek C57BL / 6 farelerin prostat perigenital mekanik duyarlılık ve mast hücre aktivasyonunu ölçüyorlar.

Yenidoğan Anneden Ayrılma Fare Modelinde perigenital Duyarlılık ve Prostat Mast Hücre aktivasyonu Değerlendirilmesi

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, neonatal maternal ayrılmaya maruz kalan erkek C 57 black six farelerde peri genital mekanik hassasiyeti ve prostat içindeki mast hücresi aktivasyonunu ölçerek, erken yaşam stresinin ürogenital sistem üzerindeki etkisini belirlemektir. Bu işlem, öncelikle erken yaşam stresini tetiklemek amacıyla C 57 black six fare yavrularından oluşan batınlara 20 gün boyunca ardışık olarak neonatal maternal ayrılma uygulanarak gerçekleştirilir. İkinci adım ise peri genital bölgeye bir dizi Von Fre monofilamanı uygulanarak peri genital mekanik hassasiyetin ölçülmesidir.Ardından, mast hücre aktivasyonunu nicelendirmek amacıyla fare prostatlarının kriyostat kesitlerine asitlendirilmiş toluidine blue boyaması uygulanır. Davranışsal ve histolojik analizlerimize dayanarak sonuçlar, neonatal maternal ayrılığın perigenital mekanik hassasiyeti ve prostatik mast hücre aktivasyonunu artırdığını göstermektedir.Bu tekniğin, deneysel otoimmün prostatit gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, kronik prostatitli hastalarda gözlemlenene benzer şekilde, yaşamın ileriki dönemlerinde semptomların ortaya çıkmasını tetikleyen erken gelişim dönemindeki stres maruziyetini içermesidir. B

assessment-perigenital-sensitivity-prostatic-mast-cell-activation

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Prostat enfeksiyonu kronik prostatit pelvik ağrı arabuluculuk katkıda bulunan bir faktör olabilir. Biz standardize edilmiş bakteriyel inokulum, zamanla farelerde dokunsal allodini ölçmek için erkek farelerde ve metodoloji üretra içine bakteri instilasyon hazırlama prosedürü açıklanmaktadır.

Bakteriyel Prostatit bir fare modelinde Dokunsal allodini Ölçümü

Elektronik von Frey ölçümleri, enflamatuar bir olaydan önce ve sonra sürekli olarak uygulanan basınç uyaranlarına kemirgen mekanik çekilme eşiklerindeki değişikliklerin hızlı ve hassas bir şekilde ölçülmesine izin verdiği için klasik von Frey filamentlerine etkili ve geliştirilmiş bir alternatiftir.

Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Bu makalede, yenidoğan faresinde tekrarlanabilir omurilik kompresyon yaralanması (SCI) oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Model, spontan fonksiyonel iyileşmenin altında yatan adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek için avantajlı bir platform sağlar.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Bu iletişim kuralı kurmak ve 7 günlük eski farelerde neonatal sepsis değerlendirmek için gerekli adımları sağlar.

Yenidoğan Polymicrobial Sepsis için kontrollü fare modeli

FEMI'nin yavruların bağırsak sisteminin gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için canlı organizmaların komplikasyonları olmadan anne iltihabına (FEMI) fetal maruziyeti simüle etmek için bir chorioamnionitis modeli geliştirdik. Bu, chorioamnionitis'i takiben bağırsak hasarı gelişimi için mekanistik nedenlerin incelenmesine izin verir.

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Kronik psikososyal stres (CGS) paradigması, annelerin ve bebeklerin psikiyatrik bozukluklarını modellemek için farelerde hamilelik sırasında klinik olarak ilgili stresörler kullanmaktadır. Burada, bu modeli doğrulamak için CGS paradigmasını ve aşağı akış değerlendirmelerini uygulamak için adım adım bir prosedür sunuyoruz.

Anne ve Bebeklerde Psikiyatrik Bozukluklar İçin Çevirisel olarak İlgili Bir Paradigma Olarak Gebelikte Psikososyal Stresin Murine Modelini Kullanmak

Maternal enfeksiyon nörogelişimsel bozukluklar için bir risk faktörüdür. Maternal immün aktivasyonun (MIA) fare modelleri, enfeksiyonun beyin gelişimi ve fonksiyonu üzerindeki etkisini açıklığa kavuşturabilir. Burada, MIA'ya maruz kalan güvenilir esnek ve duyarlı yavrular üretmek için genel kılavuzlar ve bir prosedür sağlanmıştır.

Yavrularda Duyarlılık ve Esnekliği Incelemek için Poli (I: C) Kullanarak Orta Gebelik Maternal İmmün Aktivasyonun Yeniden Üretilebilir Bir Modelinin Oluşturulması

Burada, erken postnatal ağrı yönetimi ile ilgili araştırmaları kolaylaştıran bir preterm sıçan modeli oluşturmak için kısa bir protokol sunuyoruz. Yöntem, beklenen doğumdan üç gün önce sezaryen yapılmasını, erken doğmuş sıçan yavrularının histerektomi yoluyla çıkarılmasını ve bunların bir vekil barajın biyolojik yavruları ile entegre edilmesini içerir.

Ağrı Çalışmaları için Preterm Sıçan Modeli

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Bu protokol, doğum sonrası erken dönemde yoksul bir çevre ve öngörülemeyen anne bakımının neden olduğu erken yaşam sıkıntılarının beyin gelişimini ve gelecekteki zihinsel bozukluk riskini nasıl etkilediğini incelemek için bir hayvan modelini açıklamaktadır.

Farelerde Erken Yaşam Sıkıntısı için Bir Model Olarak Sınırlı Yatak Takımı ve Yuvalama

Makale, erken gebeliksel iltihabın nörogelişim üzerindeki etkilerini incelemek için kapsamlı bir protokol sunar; bu model, güvenilirlik ve tekrarlanabilirliği sağlamak için temel metrikleri içerir.

Nörogelişim üzerindeki prenatal iltihabı değerlendirmek için erken gebeliksel anne immün aktivasyon fare modelinin oluşturulması

Öğrenin, erken yaş stresinin ürogenital sistem üzerindeki etkilerini C57BL/6 farelerinde perigenital mekanik duyarlılık ve prostat mast hücre aktivasyonu ölçerek değerlendirmeyi. Bu yöntem kronik pelvik ağrı sendromu modelleri için önemli bilgiler sunar.

Yenidoğan Anneden Ayrılma Fare Modelinde perigenital Duyarlılık ve Prostat Mast Hücre aktivasyonu Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet