Yenidoğan Anneden Ayrılma Fare Modelinde perigenital Duyarlılık ve Prostat Mast Hücre aktivasyonu Değerlendirilmesi

Aşağıdaki deneyin genel amacı, neonatal maternal ayrılma uygulanan erkek C 57 siyah altı farede prostat içindeki peri genital mekanik duyarlılığı ve mast hücre aktivasyonunu ölçerek erken yaşam stresinin ürogenital sistem üzerindeki etkisini belirlemektir. Bu, art arda 20 gün boyunca erken yaşam stresini indüklemek için ilk olarak C 57 siyah altı fare yavrularının yavruları üzerinde yenidoğan anne ayrımı yapılarak elde edilir. İkinci adım, peri genital bölgeye bir dizi Von Fre monofilament uygulanarak peri genital mekanik duyarlılığın ölçülmesidir.

Daha sonra fare prostatlarının kriyostat bölümlerinde asitlenmiş toluidin mavisi boyama yapılır. Mast hücre aktivasyonunu ölçmek için. Sonuçlar, davranışsal ve histolojik analizlerimize dayanarak neonatal maternal ayrılmanın peri genital mekanik duyarlılığı ve protez mast hücre aktivasyonunu artırdığını göstermektedir.

Bu tekniğin deneysel otoimmün prostatit gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, kronik prostatitli hastalarda gözlenene benzer şekilde, yaşamın ilerleyen dönemlerinde semptomolojiyi hızlandıran erken gelişim sırasında strese maruz kalmayı içermesidir. Bu yöntem, erken yaşam stresinin davranış üzerindeki etkisi gibi kronik pelvik ağrı alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir ve değişmiş ağrı durumlarının histolojik kanıtlarını sağlayabilir. Bu yöntem kronik prostatit hakkında bilgi sağlayabilse de, interstisyel sistit, ağrılı mesane sendromu, vulvodini, fibromiyalji veya migren gibi diğer fonksiyonel ağrı sendromlarına da uygulanabilir.

Anksiyete ve depresyon gibi diğer yaygın psikolojik komorbiditelere bile uygulanabilir Doğumdan sonraki gün, barajı ev kafesinden çıkarın ve onu temiz bir ikincil kaba koyun. Ev kafesinin kokusunu korumak için temiz eldivenli eller arasına bir avuç yatak takımı sürün ve ardından ev kafesi yatağının bir ila iki santimetrelik derinliğini temiz, uygun şekilde etiketlenmiş iki litrelik bir cam hoparlöre aktarın. Ek olarak, ev kafesinde bulunan yuvalar veya kırışık kağıt gibi ek zenginleştirme yatak malzemelerinin yaklaşık yarısında, bir sonraki cam hoparlöre ayrı ayrı, tek bir çöpteki tüm yavruları hazırlanan behere yerleştirin ve beheri hemen 180 dakika boyunca 33 santigrat derece ve %50 nemde yerleştirin.

Ayrılan kuluçka süresi boyunca, barajı ikincil kaptan çıkarın ve onu ev kafesine geri koyun. Ev kafesini vivaryum içindeki uygun muhafaza konumuna geri koyun. Ayırma süresinin sonunda, ev kafesini geri alın ve barajı çıkarın, onu temiz bir ikincil kaba koyun.

Daha sonra beheri kuluçka makinesinden çıkarın ve yavruları tutarken ev kafesinin kokusunu korumak için temiz eldivenli ellerin arasına bir avuç yatak takımı bırakın. Yavruları beherden ev kafesine ayrı ayrı nazikçe hareket ettirin ve beherde kalan zenginleştirme ve yatak takımlarını ev kafesine geri koyun. Tüm yavrular geri döndükten sonra, barajı ikincil kaptan ev kafesine taşıyın ve vivaryum içindeki uygun barınma yerine geri koyun.

Yenidoğan anne ayrımına uğrayan her çöp için bu prosedürün tamamını her gün doğum sonrası 21. güne kadar tekrarlayın. Daha sonra yavruları sütten kesin ve deney süresi boyunca kontrol fareleriyle aynı koşullarda barındırın. 55 santimetre yüksekliğinde yükseltilmiş bir tel örgü üst tablanın altına emici bir alt ped yerleştirerek test alanını hazırlayın.

Masa, araştırmacının fareleri ürkütmeden alttan yaklaşmasına izin vermek için yeterli alan sağlamalıdır. Tel örgü masanın üstündeki şeffaf delikli plastik odaların altına 12 adede kadar sekiz haftalık fareyi ayrı ayrı yerleştirin. Farelerin kaçmasını önlemek için odaların üzerine ağır bir nesne yerleştirin.

Üç noktalı 22 gramlık von çerçeve monofilamentinin tabanını tutun ve geri çekilmiş monofilamenti ortaya çıkarın. Probu, monofilament dikey olarak yönlendirilecek şekilde yerleştirin. Fare uyanık olduğunda, hareketsiz ve vücut ağırlığı arka pençeler arasında eşit olarak dağıtılır.

Filamentte hafif bir bükülme gözlenene kadar orta hattan kaçınarak skrotumun sol veya sağ tarafına uygulayın. Monofilamenti 10 saniye boyunca veya hayvan monofilamente yönelik hızlı bir sarsıntı veya sıçrama veya yalama veya ısırma davranışı gibi olumlu bir tepki gösterene kadar yerinde tutun. Bir fare on saniyelik monofilament uygulaması sırasında hareket etmiyorsa veya herhangi bir olumlu yanıt göstermiyorsa, aynı boyutta filament kullanarak tüm fareleri test etmek için bir negatif yanıt kaydedin ve ardından bir sonraki uygun monofilamente geçin.

Ek dört uygulama için uygun olan bir sonraki daha büyük veya daha küçük monofilamenti kullanarak her fareyi test etmeye devam edin. İlk pozitif yanıt gözlendikten sonra, diseksiyon ve ardından kriyo bölümü, dokuz haftalık farelerden alınan prostat dokusunu yedi mikron kalınlığındaki kriyo bölümlerine sabitledi. Daha sonra, 100 mililitre% 70 etanole bir gram toluidin mavisi O ekleyerek% 1'lik bir toluidin mavisi stok çözeltisi hazırlayın ve karışımı çözeltiye girene kadar girdaplayın.

Stok çözeltisini oda sıcaklığında üç haftaya kadar saklayın. Başka bir beherde, bir karıştırma plakasının üzerine yerleştirilmiş 100 mililitre suya bir gram sodyum klorür ekleyin. 0,5 ila 1,0 pH aralığı elde edilene kadar 12 molar hidroklorik asit kullanarak tuz çözeltisinin pH'ını ayarlayın.

Daha sonra, sekiz mililitre Udine mavisi stok Çözeltisi ve 32 mililitre asidik% 1 sodyum klorür çözeltisini birleştirerek% 0.25 asitlendirilmiş toine mavisi çalışma çözeltisi hazırlayın. Odin mavisi Stok Çözeltisinin tamamen dahil edilmesini sağlamak için yukarı ve aşağı sıkın ve karıştırın Bir girdap kullanarak, çalışma solüsyonunu her slayt partisi için taze olarak hazırlayın. Dokuyu tamamen batırmak için yeterli hacimde PBS içeren 50 mililitrelik konik bir tüpe slaytları yaklaşık bir saniye boyunca ayrı ayrı daldırarak doku bölümlerini yıkayın.

Slaytların bir kağıt havlu üzerinde kurumasına izin verin. Daha sonra, doku bölümlerinin tamamen suya batırılmasını sağlamak için slaytları% 0.25 toluidin mavisi çalışma solüsyonundan yeterli miktarda içeren bir cam ayakta duran kavanoza yerleştirin. 10 RPM'de ayarlanmış bir platform rocker'ındayken slaytları 15 ila 15 dakika inkübe edin.

Ardından, fazla uzun udin mavisini yıkamak için slaytları yaklaşık bir saniye PBS'ye batırın ve slaytları, slaytlar yanlarında olacak şekilde bir slayt kutusuna yerleştirin. Drenaja izin vermek için. Slaytları 37 derecelik bir fırında en az iki saat veya gece boyunca oda sıcaklığında kurutun.

Kuruduktan sonra slaytları yaklaşık bir saniye %95 etanole batırın ve ardından bölümün tamamen kurumasını bekleyin. Doku mordan daha mavi kuruyana kadar bu işlemi bir ila 10 kez tekrarlayın. Ardından, slaytları yaklaşık bir saniye boyunca %100 etanole batırın ve bölümün tamamen kurumasını bekleyin.

Doku koyu ila orta mavi olana kadar ancak mor olmayana kadar bu işlemi bir ila 10 kez tekrarlayın. Son olarak, slaytları üç dakika boyunca %100 ksilen içinde inkübe ederek lekeyi düzeltin. Kurumasını bekleyin ve ardından slaytları gliserol PPS veya ksilen bazlı kalıcı bir montaj ortamı ile örtün, kaydırın.

Fazla ortamı boşaltın ve tamamlanan slaytları oda sıcaklığında saklayın. Sekiz haftalık yenidoğan anne ayrımı olan kademeli bir dizi Von Frame Monofilament ile test edildiğinde, fareler naif muadillerine kıyasla peri genital mekanik allodini gösterdi. Bu, olumlu bir davranışsal tepki ortaya çıkaran mekanik geri çekilme eşiğinde önemli bir azalma olarak kanıtlanmıştır.

Kronik prostatit kronik pelvik ağrı sendromunun ek kanıtları histolojik olarak görülebilir, burada mast hücreleri içinde yer alan triptaz granüllerini gözlemlemek için asitlenmiş o toluidin mavisi ile boyanmış prostat dokularının kriyostat bölümleri gösterilmiştir. Yenidoğan ayırma farelerinden alınan prostat kesitlerinde önemli ölçüde daha yüksek bir de granüle mast hücresi yüzdesi gözlenmiştir. Saf farelerle karşılaştırıldığında Yenidoğan anne ayrımı yaparken, yavruların baraj tarafından reddedilmesini önlemek için ev kafesinin kokusunu korumayı unutmamak önemlidir.

Komorbid duygudurum bozuklukları için davranışsal kanıtları değerlendirmek için açık alan testi veya iki seçenekli sıvı tercihi gibi diğer yöntemler kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, neonatal maternal ayrılmayı takiben kronik prostatit ve farelerin davranışsal ve histolojik kanıtı olarak peri genital mekanik duyarlılığı ve prostat mast hücresi aktivasyonunu nasıl değerlendireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.