Name: Translational Kanser Araştırma İnsan Doku ile Çalışma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Öğrenin, insan doku örneklerinden yüksek kaliteli veri elde etmek için optimize edilmiş doku işleme yöntemlerini. Bu teknik, tek bir cerrahi rezeksiyondan mutasyonlar, aktive yolaklar ve immün hücre alt tipleri hakkında kapsamlı bilgi toplamanızı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, John G. ve Marie Stella Kenedy Memorial Vakfı (Hibe # 0727033) ve Melanom Araştırma İttifak hayırsever katkıları ile desteklenmiştir. Yazarlar Dr. Ignacio Wistuba, Dr. Victor Prieto, MD Anderson Kanser Merkezi Dairesi yanı sıra, doku dağıtımı, toplanması koordine ve translasyonel araştırma kolaylaştırmak için Texas MD Anderson Kanser Merkezi Kurumsal Doku Bankası (ITB) University of teşekkür etmek istiyorum Patoloji ve Melanom Ay Shot Programı. Son olarak, yazarlar melanom etkilenen tüm hastalara ve ailelerine teşekkür etmek istiyoruz.

Etik bildirimi: Bu protokol Texas MD Anderson Kanser Merkezinde Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Numune Alımı <ol><li> Artı tümör ve ilgili normal dokudan 10-12 araştırma doku örneklerini toplayın. Islak buz üzerinde saklayın örnekleri otolitik önlemek için. </li><li> Patolojik tanı kolaylaştırmak amacıyla tüm dokuları, tıbbi cihazlar ve gerekli inceleme için Patoloji Anabilim bir cerrahi prosedür sırasında çıkarılan yabancı cisimlerin gönder. </li><li> Uygulanabilir araştırma ve doku bankacılığı politikaları ve prosedürlerine uygun olarak araştırma için ayrılan doku anlaştım. NOT: Biospecimen toplama patologlar koordinasyonunu gerektirir, patologlar &#39;yardımcıları, histotechnologists ve doku alım uzmanları. </li></ol> 2. Patoloji Kalite Güvencesi (QA) <ol><li> Tamamlayın ve erken QA önlem olarak hasta kayıtlarını doğrulamak ve teşhis pa gözden geçirmek için bir patolog danışmaktient kayıtları (patoloji raporları, doku slaytlar, vb) ve doku örnekleri. Böyle Bu biorepository en iyi uygulamalar 10-12 uyarınca vs tümör yüzdesi, nekroz, doku tümör arayüzü, gibi ilgi morfolojik özelliklerine Yargıç doku örnekleri. </li><li> İlk inceleme sonrasında, biospecimen kalış tüm uzunluğu boyunca biorepository verileri ve araştırma örneklerinin periyodik gözden yürütürler. </li><li> Numunelere histopatolojik ve diğer incelemelerden Bağlantı sonuçları ve açıklamalar ve özel bir biorepository yazılım sistemi aracılığıyla araştırmacılara bu veri sağlar. NOT: QA süreçleri biorepository operasyonların klinik ve teknik yönlerini hem de bütünlüğünü sağlamak. </li><li> Doğrulamak ve klinik kullanım için numune karakterize genetik ve moleküler testleri gerçekleştirin. </li><li> Toplayın ve laboratuar deneyleri için örnekler kullanıyorum araştırmacıların görüşlerine dayalı verileri analiz. ParçaBarkod teknolojisi kullanılarak örnekler. Bu elektronik izleme sistemi de biorespository en iyi uygulamalar 10-12 yılında savunulmaktadır. </li></ol> 3. Örnek / Doku İşleme <ol><li> Daima kendi doğal ortamından doku örneğinin çıkarılması tarafından uyarılan değişiklikleri sınırlamak amacıyla, mümkün olduğunca çabuk taze doku ıslak buz üzerinde örneklerin ve süreç saklayın. Süreç, normal tümör eşleşti ve tümör dokusu örnekleri ayrı ayrı çapraz bulaşmayı önlemek için. Not: Araştırma iletişim kurallarına göre, biospecimen işleme ortamının bir veya daha fazla tipte örneklerin toplanması içerebilir. </li><li> Işlemine başlamadan önce, steril Petri kültür çanak, bir neşter gibi doku işleme için bir iğne veya forseps hazırlamak. Borular, hazırlanan etiketli ve örnek işleme (Şekil 2) süresini sınırlamak amacıyla düzenlendiği emin olun. </li><li> Böyle hasta adı, numarası, tedavi, tarihi olarak tüm ilgili doku bilgileri,cerrahi, ve çalışma için uygun olabilecek diğer ilgili bilgileri, kurumsal bir doku veritabanında kolayca erişilebilir hale getirilmelidir. Sınırlı hasta bilgileri kağıt veya elektronik tablo şeklinde laboratuvarda yapılmalıdır. NOT:. Sadece araştırma viz doğası ile ilgili biospecimen bilgi toplamak, hastalığa özgü bilgiler için vb temel biyomedikal araştırmalar, klinik araştırmalar, translasyonel araştırma, biorepository personel için literatürde gerekli gördüğü bilgi ve yöneten organizasyonlar toplamak gerekir doğru tanı ve anlamlı araştırma sağlamak. Bu içerir, ancak tümör notları ve kanser evreleme bilgilerle sınırlı değildir. </li><li> Analiz, her tür, hem de oluk bezeme konumu için gerekli olan doku bölümleri büyüklüğüne karar verirse, tüm istenen sonraki deneyler planı. Imkansız olmasına rağmen İdeal olarak, tüm analizler doku heterogenei hesaba katmak amacıyla, tüm doku bölümünde temsilcisi olmalıdırty ve alt analizlerin sınırı önyargı. Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi önceden gerekli tüm öğeleri yatırın. </li><li> Yüzeyine düz açık Petri kültür çanak doku örneği, yerleştirin. NOT: Sadece belirlenen örneklerin ele ve belirlenen sağlık verilerini yorumlayan biorepository personel yetkili izin ver. Müfettişler IRB tarafından düzenlenen imzalanan bilgilendirilmiş onayı ile izin verilen ve sadece bu hasta tanımlayıcılar erişebilirsiniz gerekir. Tüm örnekler yeterince etiketli olmalı ve en az bir benzersiz doku kimlik numarası ve doku tipi de içermelidir. HIPAA düzenlemelerine uygun olarak, etiketler herhangi bir PHI içermez. </li><li> Yapısı ve boyutları daha iyi anlamak için, tüm açılardan örneği inceleyin. Iğne ile çanak alt numuneyi Pin ve onun en büyük ve en iyi temsil eden eksen boyunca doku iki eşit parçaya böler geçin. </li><li> Doku küçük bir parça kesip ve steril bir 1.5 ml MICR yerleştirinRNA-stabilize edici çözeltinin 1ml içeren ocentrifuge tüpü. Bu örnek, işlemin geri kalan kısmı için buz üzerine yerleştirilmiş ve gerekli olana kadar, 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir. NOT: RNA ile çalışırken, eldiven daima giyilmelidir ve RNAse ücretsiz filtre ipuçları bozulması ve RNA kirlenme ihtimalini sınırlamak için kullanılmalıdır. </li><li> Petri kültür çanak kapağı açık ve önceden etiketlenmiş biyopsi kasetini yatıyordu. 5 mm 3&#39;ten hiçbir kalın bir doku dilim kesip kaset aktarmak. 72 saat en az% 10 kaseti nötr tamponlu formalin (NBF) koyun. Parafin katıştırma önce uzun süreli depolama için% 70 etanol içinde kaset aktarın. Not: kasetlerin Etiketleme kalem ya da başka etiket silecektir işleme sırasında ksilen kullanımı önerilen belirteçler ile yapılmalıdır. </li><li> Doku parçası kesip bir doku kalıp yerleştirin. Optimal kesme sıcaklığı (OCT) bileşik doku bölümünü kapsayacak ve hemen dondurmakcryosectioning -20 ° C &#39;de. Bu doku kesiti cryosectioning için hazır olana kadar -20 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> Bir kesip veya dokuya birçok parçalar ve MACS tamponu ihtiva eden 50 ml&#39;lik bir tüp (1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS),% 0.5 fetal sığır serumu (FBS), 2 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA)) sitometri analizi daha sonra akış aktarmak . Flow sitometri için gerektiğinde hücreler tümör disassociation, hücre fiksasyon ve permeabilization sırasında kaybolmuş olabilir gibi büyük numuneler tercih edilebilir. Genel olarak, bu bölüm sonunda alınabilir, bir kez tüm diğer parçaları işlenmiştir. Kalan temsili tümör örneği akış sitometrisi için kullanılabilmektedir. İsteğe bağlı olarak, bu tüp, 4 ° C&#39;de saklandı CO / H ya da bir hücre süspansiyonu (Adım: 4 - Akım Sitometrisi boyanması) içerisine akış sitometrik boyama hemen sonra sindirim için de kullanılabilir. </li><li> 0,5 mm x 0,5 mm maksimum boyutundan daha büyük parçalar hiçbir içine doku geri kalanını kesin ve Kriogen aktarabilirsinizSıvı azot içinde hızlı dondurulması şişeler. Gelecek analizleri ve işbirlikçi amaçlı bu çırpıda dondurulmuş numuneler kullanılabilir. NOT: Doğrudan temas ciddi yaralanmalara yol açabilir gibi sıvı azot ile çalışırken ekstra dikkatli olunmalıdır. Gözler Yan siperleri olan veya yüz kalkanı ile koruyucu gözlüklerle korunmalıdır. Dondurucu eldiven de sıçramasına ve doğrudan temas sonucu sıvı azot yanıklardan korumak için giyilmelidir. Eldivenler düzgün uygun ama bunların içine hızla gerektiği sıvı azot sıçrama kaldırılacak kadar gevşek olmalıdır. </li></ol> 4. Akış Sitometrik Boyama <ol><li> Doku Homojenizasyon <ol><li> DMEM (40 mi), DNase I (50 U / ml) ve kollajenaz l (2 mg / ml) ile sindirim orta hazırlayın. Petri kabı kapağı MACS tamponu taze veya O / N-depolanan tümör yerleştirin ve sindirim ortamı ile daldırın. NOT:. Farklı sindirim yöntemleri, mevcut avantajları ile her (yani, hücre yüzey proteini expression, canlılığı). İstediğiniz alt uygulama için uygun bir yöntem olduğundan emin olun. </li><li> Tümör macun benzeri bir dokuya sahiptir kadar dışarıdan bir iğne ile çanak alt ve kesim Pin tümörü, bir neşter ile merkezi. Sızıntıları önlemek için bir plastik torba içinde bir 50 ml tüp, mühür ve yere tümör karışımı aktarın. Bir kuluçka tüp aktarın ve 225 rpm, 37 ° C, 1 saat sonra döner. </li><li> Bir 70μm hücre süzgecinden tümör hücre süspansiyonu Filtre. 250 xg, 4 ° C&#39;de, 5 dakika santrifüjleyin hücre süspansiyonu. 1 ml FACS tamponu (500 ml PBS, 1 mi 0,5 M stok EDTA, 10 mi FCS ya FBS) yeniden süspanse hücre topağı. </li><li> Bir hemasitometre kullanarak hücreleri sayın ve 1x10 7 hücre / ml &#39;lik bir konsantrasyonda yeniden askıya. Aktarım boyama için bir 96 yuvalı yuvarlak tabanlı plaka içinde çukur başına 100 ul (10 6 hücre). </li></ol></li><li> Canlılık ve Antikor Boyama <ol><li> Her bir canlılık leke çözeltisi 200 ul de ilave et ve karıştır. IncuKaranlıkta 4 ° C&#39;da 30 dakika, için kesmek. 250 xg, 4 ° C&#39;de 5 dakika ve aspire süpernatant hücreleri aşağı doğru döndürün. </li><li> FACS tampon 200 ul yüzey antijenleri için (üretici göre) tarafından önerilen / titre konsantrasyonda antikor karışımı ekleyin. Karanlıkta 4 ° C&#39;de, 30 dakika hücreleri inkübe edin. 250 xg, 4 ° C&#39;de 5 dakika ve aspire süpernatant hücreleri aşağı doğru döndürün. </li><li> , FACS tampon 200 ul ile yıkayınız 250 xg, 4 ° C&#39;de 5 dakika ve aspire süpernatant hücreleri aşağı doğru döndürün. FACS tampon 200 ul hücre yeniden süspanse edin ve alımı ve analizi için akış sitometresi geçin. NOT: Hücre içi akış sitometri boyama gerçekleştirmek durumunda adımlarla 4.2.2 ile 4.2.3 arasında tespit ve permeabilization adımları ve hücre içi boyama gerçekleştirin. Sitokin boyama gerçekleştirmek için, hücreler, tavsiye edildiği gibi ön-aktifleştirilmiş önceki boyama olmalıdır, ve bu da monensin hücre içi protein taşıma ve salgılama inhibitörü aktivasyon sırasında kullanılan gerekençözünür faktörlerin tutulmasını sağlamak. Sabit hücreler bir akış sitometresi üzerinde koyu önce ediniminde 4 ° C&#39;de kısa vadeli (bir hafta) saklanabilir. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Biology.+Fixing+problems+with+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell Biology. Fixing problems with cell lines.</a> Science. 346, 1452-1453 (2014).</li>
<li>van der Worp, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+animal+models+of+disease+reliably+inform+human+studies%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Can animal models of disease reliably inform human studies.</a> , PLoS Med. 7, e1000245 (2010).</li>
<li>McCabe, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Animal models of disease.</a> Physiol. Behav. 68, 501-507 (2000).</li>
<li>Woolf, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+meaning+of+translational+research+and+why+it+matters%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The meaning of translational research and why it matters.</a> JAMA. 299, 211-213 (2008).</li>
<li>Brockbank, K. G., Taylor, M. J. Tissue Preservation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBrockbank%2C+KG+%22Advances+in+Biopreservation%22">Advances in Biopreservation</a>. , 157-159 (2006).</li>
<li>Bulmer, M. The ethics of social research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBulmer%2C+M+%22Researching+social+life%22">Researching social life</a>. Gilbert, N. , Sage. London. 45-57 (2001).</li>
<li>Penslar, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPenslar%2C+RL+%22IRB+guidebook%22">IRB guidebook</a>. , US Government Printing Office. (1993).</li>
<li>Protection of human subjects. CFR Title 21 Section 50.25. , Food and Drug Administration. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfcfr/CFRSearch.cfm?FR=50.25">http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfcfr/CFRSearch.cfm?FR=50.25</a> (2011).</li>
<li>HIPAA privacy rule and public health. Guidance from CDC and the US Department of Health and Human Services. , Centers for Disease Control and Prevention. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/su5201a1.htm">http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/su5201a1.htm</a> (2003).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22MD+Anderson+Cancer+Center+Institutional+Tissue+Bank+Standard+Operating+Procedures%22">MD Anderson Cancer Center Institutional Tissue Bank Standard Operating Procedures</a>. 3, Institutional Tissue Bank. (2009).</li>
<li>Collection, Storage, Retrieval and Distribution of Biological Materials for Research. , 3rd ed., International Society for Biological and Environmental Repositories. Available from:
 <a target="_blank" href="http://biorepository.uic.edu/Contact_Us_files/ISBERBestPractices3rdedition.pdf">http://biorepository.uic.edu/Contact_Us_files/ISBERBestPractices3rdedition.pdf</a> (2011).</li>
<li>NCI Best Practices for Biospecimen Resources. , 2nd ed., Office of Biorepositories and Biospecimen Research. Available from:
 <a target="_blank" href="http://biospecimens.cancer.gov/bestpractices/2011-NCIbestpractices.pdf">http://biospecimens.cancer.gov/bestpractices/2011-NCIbestpractices.pdf</a> (2011).</li>
<li>Ruffell, B., et al. Leukocyte composition of human breast cancer. Proc. of the Ntnl. Aca. of Sci. 109, 2796-2801 (2012).</li>
<li>Shapiro, H. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShapiro%2C+HM+%22Practical+flow+cytometry%22">Practical flow cytometry</a>. , John Wiley & Sons. (2005).</li>
<li>Baker, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+phosphoprotein+as+a+biological+marker+of+tumor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Stability of phosphoprotein as a biological marker of tumor signaling.</a> Clin. Cancer Res. 11, 4338-4340 (2005).</li>
<li>Jacobs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sample+processing+considerations+for+detecting+copy+number+changes+in+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+protocols%22%5BJournal%5D)">Sample processing considerations for detecting copy number changes in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2012, 1195-1202 (2012).</li>
<li>Chung, J. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+in+tissue+handling+and+processing+that+impact+RNA+obtained+from+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Factors in tissue handling and processing that impact RNA obtained from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> J. Histochem. Cytochem. 56, 1033-1042 (2008).</li>
<li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+procedure+for+protein+extraction+from+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues+for+reverse+phase+protein+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Proteome+Sci%22%5BJournal%5D)">An efficient procedure for protein extraction from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues for reverse phase protein arrays.</a> Proteome Sci. 10, 1477-5956 (2012).</li>
<li>Feldman, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+mRNA+amplification+for+microarray+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Advantages of mRNA amplification for microarray analysis.</a> Biotechniques. 33, 906-914 (2002).</li>
<li>Francino, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+real-time+PCR+assay+for+diagnosis+and+monitoring+of+canine+leishmaniosis%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Advantages of real-time PCR assay for diagnosis and monitoring of canine leishmaniosis.</a> Vet Parasitol. 137, 214-221 (2006).</li>
<li>Grunberg-Manago, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Messenger+RNA+stability+and+its+role+in+control+of+gene+expression+in+bacteria+and+phages%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Messenger RNA stability and its role in control of gene expression in bacteria and phages.</a> Annu. Rev. Genet. 33, 193-227 (1999).</li>
<li>Lesnik, E. A., Freier, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+thermodynamic+stability+of+DNA%2C+RNA%2C+and+DNA%3ARNA+hybrid+duplexes%3A+relationship+with+base+composition+and+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Relative thermodynamic stability of DNA, RNA, and DNA:RNA hybrid duplexes: relationship with base composition and structure.</a> Biochemistry. 34, 10807-10815 (1995).</li>
<li>MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+microarrays+and+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Protein microarrays and proteomics.</a> Nat Genet. 32, 526-532 (2002).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Sonuçta, işleme yöntemleri, istenen hipotez tarafından dikte ve (Şekil 1) yapılacak teknik testlerin tahmin edilmelidir. Aşağıdaki bölüm, doku kesitlerinde gerçekleştirilebilir potansiyel tahlilleri açıklamak için özet olarak hizmet vermektedir. Hiçbir ayrıntılı bir bakış anlamına gelir, ama teknikleri anlatan ve onların güçlü ve zayıf yönlerini listeleyerek kılavuz örnek işleme yöntemleri ve alt testlerin seçimi yardımcı olmak için tasarlanmıştır gereğidir. Boyama Flow cyto...

Tıbbi araştırma, insan hücre hatları ve hayvan modellerinde hem çalışma son derece yararlanmıştır. Hücre çizgileri iyi bir sistem elemanlarının kontrolü, hem de uygun organizmadan hücrelerin kullanımı için izin verir. Hücre hatları yanıtları 1 etkileyebilecek diğer hücrelerin, stromal bileşenleri ve organların etkisini özetlemek değil, çünkü daha fazla temsilcisi olurken, sağlık ve hastalık sorumlu olabilir mekanizmalarının büyük ölçüde basitleştirilmiş anlık sunar, insan hücreleri ile çalışma. Öte yandan, hayvan modelleri, insan hastalığını ve genetik heterojenite üreyen tamamen doğru olmasa da, çoğu modelde 2,3 bütün hayvan sistemlerinin giriş için izin vererek daha fazla fikir sunar. Eksiklikleri bir yana, her iki yöntemin de yararları var ve tamamlayıcı niteliktedir. Ancak, ana hedefi bir tam vücut, çoklu organ sisteminde insan hücreleri ve organları, çalışma devam etmektedir. Bu duruma göre, geleneksel araştırma tak sahipDaha iyi mekanizmaları altta yatan hastalığın kavramak için, insan organları ve hastaların çıkarılan dokuların çalışma kolaylaştırmada büyük adımlar tr. Translational araştırma ve böylece, tüm vücutta ve uygun hücrelerde tedavileri ve hastalıkların sonuçlarını okuyan hücre ve hayvan çalışmaları 4 arasında iki dünyanın en iyi sağlama avantajı sunuyor. Translational araştırma kusurları olmadan da değil. Insan hastalardan hasat edilen örnekler, ana bilgisayardan uzaklaştırılması üzerine hemen iskemi ve başka bir şekilde korunacak olan, diğer dış faktörlerle tabi tutulur. Bu stres kaynaklı moleküler ve genetik değişikliklere neden olur ve daha sonraki çalışmalarda önyargı neden olabilir. Bu nedenle, çok çaba en aşağı çalışmalar için 5 organ ve hücre bütünlüğünü korumak için sıkı yöntemlerle dokuların çıkarılması ve işlenmesi girmiştir. Yöntemleri o seçerken önemlisi, gelecekteki uygulamalar yakından ele alınmalıdırf belli yöntemler hücresel bileşenleri için zararlı olabileceğinden, insan örnekleri işleme ve diğerleri tutumlu sırasında sinyal yolları. İnsan dokuları içeren herhangi araştırma, düzenleyici konular ele alınmalıdır. Tuskegee ve Belmont raporlar sonrasında, biyomedikal araştırma doğasında riskler genellikle kaçınılmaz etik ikilemler 6 sonuçlanan ile ilişkili olduğu gerçeğini büyüyen bir kabul vardı. Ulusal standartlara ihtiyaç tanındı ve federal hükümet Belmont Raporu ilkelerine uyulması (kişiler, Yararlılık, Adalet için saygı) için bir araç olarak Kurumsal Gözden Kurulları (IRBs) oluşturuldu. Herhangi bir kurumun IRB araştırma katılımcılarının korumakla yükümlüdür doktorlar, araştırmacılar ve topluluk üyeleri bir kuruldur. Gönüllü rıza biyomedikal araştırma çalışmalarının tüm katılımcıların elde gerektirir ve bu rıza bir aydınlatılmış onam fo belgelenmiş olması<html> rm. Bilgilendirilmiş onam süreci bilinçli bir karar çalışmaya kayıt veya katılım devam edip etmemeye yapılabilir böylece, bir katılımcının yeterli bilgi vermeyi amaçlamaktadır. Bu bağlamda, bilgilendirilmiş onam belge iyi okunabilirliği olmalı ve kolayca hedef nüfusun (6 th 8 inci sınıf okuma seviyesi) anlayabileceği dilde yazılmış olmalıdır. Baskı veya uygunsuz etkiden olasılığı minimize edilmelidir, ve konu katılımını dikkate için yeterli zaman verilmelidir. Katılımcı da ceza olmadan çalışmanın seyri sırasında herhangi bir aşamada onayı geri alma hakkını kullanmasına izin verilmelidir. Gönüllü bilgilendirilmiş onam araştırma gönüllünün katılımı için zorunlu ön koşulu ve aynı zamanda 7 hukuken etkilidir. Insan korunması için yönetmelik gereğince konular 21 CFR 50,25 (/45cfr46.html&quot;&gt;http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8), çalışmaya katılanların araştırma amacı haberdar edilmelidir, araştırmaya katılan prosedürleri, katılım alternatifleri, topluma ve muhtemelen tek araştırma tüm öngörülebilir riskler ve rahatsızlıkları (sadece fiziksel yaralanma, aynı zamanda mümkün psikolojik, sosyal ya da ekonomik zarar, rahatsızlık ya da rahatsızlık dahil), faydaları, konu katılması bekleniyor zamanın uzunluğu, kişi katılım gönüllü olduğunu belirten açıklamada, soruların ya da araştırma ile ilgili yaralanma ya da acil durumlarda cevaplar için iletişim ve katılmak için bu reddin, düzenli klinik bakım bir uzlaşma olarak herhangi bir sonuç veya faydalar herhangi kaybına neden olmaz katılımcı aksi hakkı olduğunu gizlilik ve çekilme hakkına kişinin hakkına ilişkin nihayet bir açıklama onun / onu tanı sonucu almak veherhangi sonuçları olmadan herhangi bir zamanda çalışma. Çalışmanın süresince onayı geri katılımcılardan doku örnekleri banked edilmemelidir ve hemen tükenmiş olması gerekir. Aydınlatılmış onam bir ya da daha fazla eleman feragat pratik gerekli unsurlara veya gerekli unsurlar uygulanabilir olmadığında çalışmalar için bir değişiklik olmadan yapılamaz olabilir bazı araştırma projeleri için IRB elde edilebilir. Büyük bir dikkatle veri gizliliğini sağlamak için alınmalıdır. Sağlık Sigortası Taşınabilirlik ve Sorumluluk Yasası (HIPAA) kullanarak veya katılımcıların yazılı izni olmadan &quot;Korumalı Sağlık Bilgileri&quot; (PHI) ifşa engelleyen bir federal yasa olduğunu. PHI içerir, ancak sağlık bilgileri iletilen veya muhafaza herhangi bir biçimde ya da orta ve bireysel 9 tanımlamak için kullanılabilir alanları içerir ile sınırlı değildir. Bu çalışma sayesinde, biz Tissu&#39;nun sırasında uyulması gereken protokol anahat hedefliyoruze işleme - tedarik dahil, depolama ve doku çıkarma üzerine maruz streslere bağlı olarak meydana gelebilir önyargıları en aza indirecek şekilde bu katı yönergeleri izleyerek önemini vurgulamaktadır. Okuyucular Ne tahlil (ler) en iyi onların ihtiyaçlarına uygun nitelikli bir yargıya böylece biz de aşağı tahlillerde ya da bu tür örnekler üzerinde yapılabilecek analizler (Şekil 1) kısa bir özetini sunmak için gayret.

<table><tbody><tr><td>İğneler</td><td>BD</td><td>305167</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik tek kullanımlık neşterler</td><td>Miltex</td><td>4-410</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü kabı</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Biyopsi Kasetleri</td><td>Thermo Fisher</td><td>58931</td><td></td></tr><tr><td>RNA stabilize edici çözelti</td><td>Ambion</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Eppendorf tüpleri</td><td>Phoenix</td><td>MAX-815</td><td></td></tr><tr><td>50 ml tüpler</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>%10 Nötr Tamponlu Formalin</td><td>StatLab Tıbbi Ürünler</td><td>28600-5</td><td></td></tr><tr><td>Formalin Kapları</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-032-059</td><td></td></tr><tr><td>Optimum kesme sıcaklığı çözümü (OCT)</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Kriyomold</td><td>Sakura Finetek</td><td>4557</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz I</td><td>Roche</td><td>11088793001</td><td></td></tr><tr><td>70&mu; m hücre süzgeçleri</td><td>BD Bioscience</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu yuvarlak alt plakalar</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>Canlı/Ölü leke çözümü</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>L34957</td><td></td></tr></tbody></table>

translational kanser araştırma İnsan doku ile Çalışma

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

İnsan yararına yapılan tıbbi araştırmalar, insan dokularına ve deneklere olan gereksinim nedeniyle büyük ölçüde engellenmektedir. Bununla birlikte, insan örnekleri için onay alındıktan sonra, organların, dokuların ve hücrelerin bütünlüğünü en üst düzeyde sağlamak için değerli numuneler büyük bir özenle ele alınmalıdır. Ne yazık ki, tanım gereği doku işleme, dokuların konakçıdan çıkarılmasını gerektirir, bu da büyük hücresel strese neden olabilecek ve sonraki analizler üzerinde büyük etkileri olabilecek bir değişikliktir. Bu stresler, numunenin artık alındığı bölgeyi temsil etmemesine neden olabilir. Bu nedenle, temsil edilebilirliği sağlamak için bu numuneler işlenirken katı bir protokole uyulmalıdır. Numune işleme için en uygun tekniğin kullanıldığından emin olmak için istenen tahlil(ler) de dikkate alınmalıdır. Burada, sınırlı doku örneklerinden sonraki üretimi en üst düzeye çıkarmak için işlenmiş doku üzerinde gerçekleştirilebilecek doku alımı, işleme ve çeşitli analizler için bir protokol özetlenmiştir.

<html> Aşağıda gösterilen sonuçlar işlenmiş bir melanom tümör üzerinde geniş bir immün fenotipleme için akış sitometri yolluk stratejisini betimliyor. Boyama gün, doku numunesi 225 RPM dönme altında, 37 ° C&#39;de, sindirilmiş ve kolajenaz I ve 60 dakika boyunca kuluçkalama DNase I ile homojenize edildi. Sindirme işlemini takiben, bir hücre süspansiyonu artıkları yok etmek için 70 mikron hücre süzgecinden süzüldü ve hücreler, immün hücre fenotipleme antikorlar sitometri floresan etiketli akışı ile boyandı. MACS tamponu i...

Translasyonel kanser araştırmaları insan dokularının çıkarılmasına bağlıdır. Ex vivo analiz için ekstraksiyon yöntemlerini optimize etmek için çok fazla çalışma yapılmıştır. Burada, sınırlı numunelerden maksimum veri çıktısına izin veren doku işleme yöntemlerini açıklıyoruz.

Translational Kanser Araştırma İnsan Doku ile Çalışma

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Bu prosedürün genel amacı, doku örneklerinden elde edilen verilerin kalitesini ve miktarını maksimize etmektir. Bu yöntem; hangi mutasyonların bulunduğuna, hangi yolakların aktive olduğuna ve hangi immün hücre alt tiplerinin insan tümörlerine infiltre olduğuna dair çevirisel kanser araştırmaları alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, insan dokusunun tek bir cerrahi rezeksiyonundan büyük miktarda veri üretilebilmesidir.Numune işlemeye başlamadan önceki en kritik adımlardan biri, numune kalitesinin sağlanması ve protokol metninde açıklandığı üzere patolojik değerlendirme ile canlı tümör varlığının doğrulanmasıdır. Hasta adı, numarası, tedavi ve cerrahi tarihi gibi numuneye veya dokuya ilişkin tüm ilgili bilgiler, kurumsal bir doku veri tabanında kolayca erişilebilir olmalıdır. Dokunun doğal ortamından çıkarılmasının neden olduğu değişiklikleri sınırlamak amacıyla, taze doku numuneleri her zaman ıslak buz üzerinde saklanmalı ve mümkün olan en kısa sürede işlenmelidir. Normal tümör eşleşmiş ve tümör doku numuneleri ayrı ayrı işlenmelidir.Çapraz kontaminasyonu önlemek için steril bir Petri kültür kabı, bir bistüri ile doku işleme için bir iğne veya pens hazırlayın. Örnek işleme süresini sınırlamak için, burada gösterildiği gibi tüm gerekli malzemeleri önceden düzenleyin. Doku örneğini açık Petri kültür kabının içine, yüzeye paralel olacak şekilde yerleştirin.Yapının ve boyutların daha iyi anlaşılması için örneği her açıdan inceleyin. Örneği iğne ile kabın tabanına sabitleyin ve dokuyu en geniş ve en temsilci ekseni boyunca ikiye bölün. Küçük bir doku parçası kesin ve bunu bir mililitre RNA stabilize edici solüsyon içeren steril 1,5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpüne yerleştirin.Sürecin geri kalanı boyunca bu örneği buz üzerinde tutun ve ihtiyaç duyulana kadar dört derece Celsius'ta saklayın. Açık ve önceden etiketlenmiş bir biyopsi kasetini Petri kültür kabının kapağının üzerine yerleştirin. Üç ila beş milimetreden daha kalın olmayan bir doku dilimi kesin ve bunu kasete aktarın.Kaseti en az 72 saat boyunca %10 nötr tamponlu formine yerleştirin. Oda sıcaklığında, bir doku parçası kesin ve bunu bir doku kalıbına yerleştirin. Doku kesitini optimal kesme sıcaklığı bileşiği ile kaplayın ve kriyoseksiyon için hazır olana kadar hemen -20 °C'de dondurun.Bir veya birden fazla doku parçası kesin ve max tamponu içeren 50 mililitrelik bir tüpe aktarın. Dokular, akış sitometrisi analizi için taze olarak kullanılabilir veya dört derece Celsius'ta gece boyunca saklanabilir. Dokunun geri kalanını, maksimum 0,5 milimetre x 0,5 milimetre boyutunu geçmeyecek parçalara ayırın ve kriyojenik tüplere aktarın.Uzun süreli saklama için dokuları derhal sıvı azot ile dondurun. Bu prosedüre başlamak için, DM EMD NS one ve kolajenaz içeren sindirim ortamını hazırlayın. Taze veya gece boyu max buffer içinde saklanmış tümörü bir Petri kabının kapağına yerleştirin ve sindirim ortamı ile tamamen kaplayın.Tümörü bir iğne yardımıyla kabın tabanına sabitleyin ve tümör macun kıvamına gelene kadar bir neşterle dışarıdan merkeze doğru kesin. Tümör karışımını 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve sızıntıları önlemek için tüpü kapatın. Tüpü bir inkübatöre yerleştirin ve 37 degrees Celsius'ta, bir saat boyunca 225 RPM hızda ajite edin.Bir saat sonra, tümör hücresi süspansiyonunu 70 µm'lik bir hücre süzgecinden süzün ve hücre süspansiyonunu 250 ×g'de, 4 °C'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Hücre peletini bir mililitre FACS tamponu ile yeniden süspanse edin. Hücreleri bir hemositometre kullanarak saydıktan sonra, hücreleri 1 × 10⁷ hücre/mL konsantrasyonda yeniden süspanse edin.Bir 96 kuyucuklu yuvarlak tabanlı plakadaki her bir kuyucuğa 100 µL veya 10⁶ hücre transfer edin. Her kuyucuğa 200 µL viabilite boyama çözeltisi ekleyin, karıştırın ve karanlıkta 4 °C'de 30 dakika inkübe edin. 30 dakika sonra, hücreleri 250 ×g ve 4 °C'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatantı aspire edin. Yüzey antijenleri için önerilen titrasyon konsantrasyonundaki antikor karışımını 200 µL fax tamponu içerisinde ekleyin. Hücreleri dört derece santigrat sıcaklıkta, karanlıkta 30 dakika boyunca inkübe edin.Hücreleri 250 Gs'de ve dört santigrat derecede beş dakika boyunca santrifüjleyin ve süpernatantı aspire edin; 200 µL fax tamponu ile yıkayın ve hücreleri tekrar santrifüjleyin, süpernatantı aspire edin ve hücreleri 200 µL fax tamponu içinde yeniden süspanse edin. Hücreler artık akış sitometrisi ile analiz için hazırdır. Bu temsilci sonuçlar, gösterildiği gibi işlenen ve dört santigrat derecede max tamponu içinde gece boyunca saklanan, işlenmiş bir melanoma tümör örneğinde geniş immün fenotipleme için kullanılan akış sitometrisi kapılama stratejisini betimlemekte olup oldukça sınırlı mortalite göstermektedir.Ayrıca, doku işlemenin nasıl yapılacağı gösterilmiştir. Bu teknik bir kez kavrandığında; B hücreleri, CD4 T hücreleri, CD8 T hücreleri, gama delta T hücreleri ve NK hücreleri, dendritik hücreler, makrofajlar, mast hücreleri, bazofiller, nötrofiller ve eozinofiller gibi melanomdaki immün hücre alt kümelerinin çok renkli geniş fenotiplendirmesine olanak tanır. Doğru şekilde uygulandığında bu işlem dört saat içinde tamamlanabilir.

working-with-human-tissues-for-translational-cancer-research

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Optik Projeksiyon Tomografi İnsan Meme Kanseri Örnekler ve Analiz Uzun vadeli Kültür

Test sistemleri olarak insan 3D tümör dokuları oluşturmak için yöntemler tarif edilmiştir. Bu teknolojiler, decellularized Biyolojik Vaskülarize İskele (BioVaSc), primer insan hücreleri ve bir akış biyoreaktör içinde dinamik koşullar altında hem de statik altında kültürlenebilir bir tümör hücre hattı, dayanmaktadır.

İnsan 3D Doku Mühendisliği<em&gt; In vitro</em&gt; Tümör Test Sistemi

Kanser hücresi proteomlarının derinlemesine analizleri, yeni ilaç hedeflerinin ve tanısal biyobelirteçlerin tanımlanmasını kolaylaştırır. Sıvı ve katı tümörlerden türetilen kanser hücresi alt popülasyonlarındaki (fosfo-) proteomların kantitatif analizi için deneysel bir iş akışı açıklıyoruz. Bu, hücresel zenginleştirme stratejilerinin kantitatif Super-SILAC tabanlı kütle spektrometresi ile birleştirilmesiyle elde edilir.

Sıvı ve Katı Tümörler Kaynaklanan Kanser hücre Proteomlar Kantitatif Kitle Spektrometrik Profil

Protokoller, insan kemik doku eksplantı model sisteminde göğüs kanseri hücre hareketi, çoğalması ve kolonizasyonu çalışmak için tarif edilmiştir.

Kültürleme İnsan Femur Doku Eksplantlarından yöntemleri Metastatik Niche Meme Kanseri Hücre Kolonizasyon Eğitim için

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Biyobankalar biyomedikal araştırmalar için çok önemli kaynaklardır ve Avrupa Onkoloji Enstitüsü'ndeki Translasyonel ve Dijital Tıp Birimi için Biyobanka bu alanda bir modeldir. Burada, biyobankaların farklı insan biyolojik numunelerinin yönetimi için standart çalışma prosedürlerinin ayrıntılı bir açıklamasını sunuyoruz.

Translasyonel Tıp için Biyobanka: Optimal Numune Yönetimi için Standart Çalışma Prosedürleri

Bu protokol, immüno-onkoloji çalışmaları için insan bağışıklık sistemi (HIS) farelerinin neslini özetlemektedir. Bu modelde implante edilen insan tümörleri üzerinde insan immünoterapötiklerini test etmek için bu modelin kullanımındaki talimatlar ve hususlar, insan bağışıklık sisteminin tümöre tepkisini karakterize etmeye vurgu yapılarak sunulmuştur.

İnsan Tümörleri Taşıyan İnsanlaştırılmış Bir Fare Modelinde Kanser İmmünoterapötiklerinin Test Edilmesi

Tümör organoidleri, kanser araştırmalarında ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımında devrim yarattı. Araştırmacıların klinikte tümörden bir adım önde olmalarını sağlayan klinik olarak ilgili bir tümör modelini temsil ederler. Bu protokol, taze pankreas tümör dokusu örneklerinden ve pankreas adenokarsinomu kökenli hasta kaynaklı ksenogreftlerden tümör organoidlerini oluşturur.

Taze dokudan pankreas kanseri kaynaklı tümör organoidlerinin ve fibroblastların oluşturulması

Bu protokol, yükleme, bakım ve değerlendirme prosedürlerinin bir açıklamasıyla birlikte yüksek verimli temel ve translasyonel insan kanseri araştırmaları, gelişmiş ilaç taraması, hastalık modellemesi ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımları gerçekleştirmek için fizyolojik olarak ilgili bir çip üzerinde tümör modeli sunar.

Kanser Araştırmaları için Fizyolojik İnsan Vaskülarize Mikro-Tümör Modelinin Oluşturulması

Bu protokol, tek hücreli RNA dizilimi için insan ve fare tümör örneklerini hızlı bir şekilde ayırma prosedürünü ana hatlarıyla belirtir.

Tek Hücreli RNA Dizilimi için İnsan ve Fare Tümör Dokusu Örneklerinin Ayrışması

Ağız boşluğunda kurulan ağız skuamöz hücreli karsinom tümörlerinin cerrahi olarak rezeksiyon edilmesinin benzersiz bir yöntemi burada gösterilmiştir.

Oral Skuamöz Hücreli Karsinomun Farenin Preklinik Modelleri İçin Translasyonel Olarak İlgili Tümör Rezeksiyon Modeli

Öğrenin, insan doku örneklerinden yüksek kaliteli veri elde etmek için optimize edilmiş doku işleme yöntemlerini. Bu teknik, tek bir cerrahi rezeksiyondan mutasyonlar, aktive yolaklar ve immün hücre alt tipleri hakkında kapsamlı bilgi toplamanızı sağlar.

Translational Kanser Araştırma İnsan Doku ile Çalışma

Daha fazla video keşfet