ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

Bu prosedürün genel amacı, basit bir fenotipik nörolojik skorlama sistemi kullanarak arka bacak fonksiyonlarının günlük olarak değerlendirilmesi ile SOD one G 93 a farelerinin nöromüsküler fonksiyonunu hızlı ve güvenilir bir şekilde değerlendirmektir. Bu, önce farelerin arka bacaklarını gözlemleyerek ve onları kuyruktan asarken gerçekleştirilir. İkinci adım, farelerin yürüyüşlerini gözlemlerken yürümelerine izin vermektir.

Daha sonra, yazma refleksinin varlığını veya yokluğunu test etmek için fareler yanlarına yerleştirilir. Son adım, fare kohortlarının nörolojik skor verilerini sıralı bir lojistik regresyon modeline uydurarak veri analizini gerçekleştirmektir. Sonuç olarak, fenotipik nörolojik skorlama sistemimiz, terapötik müdahalelerin etkinliğini ayırt etmek amacıyla bir LS'nin fare modeli olan SOD one G 93'te hastalık ilerlemesini değerlendirmek için kullanılır.

Bu yöntemin mevcut diğer tüm tekniklere göre en büyük avantajı, fareler için hızlı, basit, güvenilir ve minimum stresli olmasıdır. Bu yöntemin etkileri, neotropik lateral skleroz veya bir LS tedavisine kadar uzanır, çünkü hastalığın en yaygın fare modelinde terapötik müdahalelerin hızlı bir şekilde değerlendirilmesine izin verir. Nörolojik skorlama yönteminin öğrenilmesi zor olduğu için görsel gösterim kritiktir, çünkü nörolojik farklılıklar ince olabilir.

Erkek SOD bir G 93 A fareyi barındırarak başlayın, böylece kafes evi başına bir fare, dişi SOD bir G 93 A fare, kafes başına iki fareye kadar olur. Fareler için plastik kulübeler şeklinde çevresel zenginleştirme sağlayın. Farelere Lido kaydında yiyecek ve su sağlayın.

Tüm fareler ve çalışmalar için aynı anda vücut ağırlıkları. Günlük vücut ağırlığı, hastalığın ilerlemesinin ve kronik ilaç tedavisinden kaynaklanabilecek herhangi bir rahatsızlığın hassas bir göstergesidir. Çalışma sırasında, sırayla gerçekleştirilen üç testten oluşan bir rejim ile her farenin nörolojik skorunu günlük olarak değerlendirin.

İlk testte fenotipik geçiş noktalarında puanları tanımlamak çok zor olduğu için dikkatlice izleyin. Kuyruk süspansiyon testi, fareyi kuyruğun tabanından yaklaşık 1,5 inç uzakta, ev kafesinin tel üst kısmı üzerinde tutun. Arka bacakların işlevini bir ila iki saniyelik bir süre boyunca gözlemleyin ve testi üç kez tekrarlayın.

Yürüme testi için. Fareyi, biraz çekiş sağlayan ve en az 25 santimetre yürüme mesafesine sahip temiz bir yüzeye yerleştirin. Ga'sını gözlemlerken farenin 75 santimetreye kadar yürümesine izin verin.

Yazma refleksi testi için, fareyi yan yatırın ve her iki taraftan da yardım almadan kendini yazmak için geçen süreyi ölçmek için bir kronometre kullanın. Bu testin sadece bir denemesi gereklidir. Üç fenotipik gözlem testinin toplu sonucuna dayalı olarak her bir arka uzuvu, sıfırdan dörde kadar bir ölçekte bağımsız olarak sola veya sağa puanlayın.

Farenin presemptomatik olduğunu gösteren sıfır sinüs skoru. Süspansiyon testi sırasında, arka bacaklar yanal orta hattan tamamen uzar ve iki saniye veya daha uzun süre bu pozisyonda kalır. Ayrıca yürüme testi sırasında normal bir yürüyüş gözlenir.

İlk semptomların görünümünü gösteren bir puan atayın. Süspansiyon testi sırasında, arka bacak ya yanal orta hatta doğru çökmüş, kısmen yanal orta hatta doğru titreyerek çökmüş ya da başka bir şekilde anormal şekilde yayılmışsa. Az önce gösterilen süspansiyon testi semptomlarına ek olarak, bir puan alması gereken bir farenin yürüyüşü hala normal veya biraz daha düşük görünmelidir.

Parsis'in başlangıcını gösteren iki puan atayın. Süspansiyon testi sırasında arka bacak kısmen veya tamamen çökerse ve buna ek olarak yürüme testi sırasında arka bacaklar ileri hareket için kullanılır. Bununla birlikte, ayak parmakları 75 santimetrelik bir yürüyüş sırasında ya en az iki kez aşağı doğru kıvrılır ya da ayağın herhangi bir kısmı iki puan almak için sürüklenir.

Fare, 10 saniye içinde her iki tarafına da yerleştirildikten sonra yine de kendini yazabilmelidir. Felci gösteren üç sinüs skoru. Süspansiyon testi sırasında fare arka bacakta sert felç gösterirse veya minimum eklem hareketine sahipse, fare yürüme testi sırasında yine de ileri hareket gösterebilir, ancak arka bacaklarını kullanarak değil.

Üç sinüs puanına ek olarak, farenin 10 saniye içinde her iki tarafına da yerleştirildikten sonra hala kendini yazabilmesi gerekir. Son olarak, fare süspansiyon sırasında sert felç gösterdiğinde insancıl son noktayı tanımlayan dört puanlık bir puan. Test, arka bacakları kullanarak yürüme testi sırasında ileri hareket göstermez ve ayrıca her iki tarafa yerleştirildikten sonra 10 saniye içinde kendini yazamaz.

Erkek fareler tipik olarak dişi farelerden daha agresif bir hastalık ilerlemesine sahiptir, çünkü yaşam sürelerinin daha büyük bir bölümünün dişilere kıyasla bir nörolojik skorla sınıflandırılabilen semptomlar göstermesiyle kanıtlanmıştır. Semptomlar iki veya üç nörolojik skor aralığına yükseldikçe, her skorda geçirilen gün sayısı cinsiyetler arasında sıklık olarak eşittir. Burada, az önce açıklanan nöroko protokolü kullanılarak oluşturulan sıralı lojistik, istatistiksel analiz grafikleri gösterilmektedir.

Bu veriler, test bileşiği TDI 1: 73'ü alan bir farede SOD bir G 93 kohortunun, araç alan bir fare kohortu ile karşılaştırıldığı bir ilaç etkinliği farmakoloji çalışmasından alınmıştır. Cinsiyetler ayrı ayrı incelendiğinde istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlenmedi, ancak cinsiyetler birleştirildiğinde istatistiksel anlamlılığa ulaşıldı. Benzer eğilimler göstermesine rağmen, Kaplan Meyer'in sağkalım analizi, cinsiyetler birleştiğinde bile önemli farklılıkları ortaya çıkaracak kadar hassas değildi.

Bir kez ustalaştıktan sonra, puanlama sistemi, düzgün bir şekilde gerçekleştirilirse, fare başına bir dakikadan daha kısa sürede uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, Neuroco sistemini kullanarak bir LS'nin fare modeli olan SOD one G 93'te hastalığın ilerlemesini nasıl değerlendireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.