Name: ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Öğrenin, ALS SOD1-G93A fare modelinde hastalık ilerlemesini değerlendirmek için hızlı fenotipik nörolojik puanlama sistemini. Bu yöntem, arka bacak fonksiyonunun günlük değerlendirmesiyle nöromusküler fonksiyonu güvenilir şekilde ölçer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

El yazmasını eleştirel bir şekilde gözden geçirdikleri için Beth Levine'e, genotipleme protokolünü geliştirdiği için Valerie Tassinari'ye ve olağanüstü hayvan bakımları için Matt Ferola ve Carlos Maya'ya teşekkür ederiz.

Tüm deneyler Hayvanların Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından açıklanan protokollere uygun olarak yürütülmektedir ve ALS TDI kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1. Hayvanlar, Konut ve Araştırma Tasarımı Not:. SOD1-G93A fare koloni başlangıçta Gumey ve diğerleri 7 tarafından üretilen yüksek kopya B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur suşundan elde edilmiştir. Koloni şu anda vahşi tip C57BL / 6-SJL F1 dişilerle transgenik C57BL / 6-SJL erkek kapısı tarafından muhafaza ediliyor. F1 hayvanlar B6 dişilerle SJL erkek geçerek üretilir. Fareler yaş 35-45 günde ALS TDI haftalık sevk edilir. <ol><li> Farenin en az bir hafta bir çalışmaya vermeden önce (18-23 ° C ve% 40-60 nem arasındaki bir sıcaklıkta 12 saat ışık / karanlık döngüsü) hayvan tesisine alıştırıldı izin verir. </li><li> Ev erkek SOD1-G93A mikrofongrup erkek savaşmak eğilimi ev sahipliği beri kafes başına e bir fare. Kafes başına iki adede kadar Evi dişi SOD1-G93A fareler. Plastik kulübe şeklinde çevresel zenginleştirme sağlar. Fareler su / gıda, içme ilaç yönetimini gerektiren bir çalışmanın parçası olmadıkça, yiyecek ve su ad libitum sağlayın. Bu gibi durumlarda, oranı ve kayıt gıda ve su. </li><li> Yaş gününde 50 civarında bir ilaç etkinlik çalışmaya başlamak ve 64 çöp eşleştirilmiş cinsiyet dengeli fareler (kohort başına 32) içerir. Son olarak, çalışmalar yürüten araştırmacılar deneysel koşullara kör olduğundan emin olun. Not: Bu tipik bir ilaç etkinlik çalışması ancak önce ya da sonra çalışmaya başlamak için tercih olabilir terapötik müdahale türüne göre yaş gününde 50 başlar önerilir. Not: kohort başına 32 fare cinsiyete özgü ilaç etkilerini tespit etmek güç olan bir çalışma. Cinsiyete özgü karşılaştırmalar gerekiyorsa, kohort başına 24 fare, genel ilaç etkisini tespit etmek için yeterli olacaktır.</li></ol> 2. Vücut Ağırlığı <ol><li> Günlük gram onda biri bir hassasiyetle çalışmalarda tüm fareler için rekor vücut ağırlıkları. Not: Vücut ağırlığı hastalığın ilerlemesi ve kronik ilaç tedavisinin doğabilecek halsizlik hassas bir göstergesidir. </li><li> Fare vücut ağırlıkları dolayısıyla, sabahları daha yüksek olması, bir gün süresince önemli ölçüde değişebilir, her gün aynı zamanda etrafında onları kaydedin. </li></ol> 3. Nörolojik Puanlama Sistemi (NeuroScore) <ol><li> Günlük olarak, aşağıdaki üç koşullar altında fare gözlemleyerek her bir fare için değerlendirilmesi nörolojik puanları (NS) bir sekans dahilinde gerçekleştirilebilir: b) fare) yürümeye bırakıldı ve parezi c başlamasından sonra a), fare kuyruk tarafından askıya Fare yan yerleştirilir. <ol><li> Kuyruk süspansiyon testi için, gıda havzası uzak, 1-2 sn evlerine kafes tel üstünden kuyruk tabanından fareyi yaklaşık 1.5 &quot;tutun atıl ikenarka ayaklarında Erving. Süspansiyon testi 3 kez tekrarlayın ve en tutarlı sonucu kaydedin. </li><li> Yürüme testi, bazı çekiş ve 25 cm yürüme mesafesi sağlayan temiz bir yüzeye üzerinde fare koyun (örn., Bir kağıt havlu kaymasını önlemek için aşağı bantlanmış). Onun yürüyüşü izlerken fare 75 cm toplam (kağıt havlu 3X uzunluğu) yürümek için izin verin. </li><li> &quot;Doğrulma refleksi&quot; test için sol veya sağ tarafına fare koyun ve bir kronometreler her iki taraftan yardımsız kendini yukarı sağa süresini ölçmek kullanarak. Not: Bu testin sadece bir deneme gereklidir. </li></ol></li><li> 0&#39;dan 4. Not bağımsız bir ölçekte (sol veya sağ) Her hindlimb of NS belirleyin: Sağ hindlimb NS 1 iken Örneğin 0 puan, 1, sol hindlimb NS 0 olduğunu gösterir. </li><li> (Tablo 1&#39;de verilmiştir özet) gözlem aşağıdaki kümesine karşılık gelen nörolojik puanları (0-4) atayın:<ol><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 0 (Ön-semptomatik) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb normal yayvan yani sunar, tam uzakta yanal orta hatta uzanan ve 2 saniye bu pozisyonda kalır veya uzun. Fare yürümeye izin, normal yürüyüş görülmektedir. </li><li> Fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb anormal yayvan, yani sunar, bu çökmüş veya kısmen yanal orta hatta doğru çöktü YA o kuyruk süspansiyon sırasında titreyen VEYA o geri çekilir edilir: gözlenmektedir aşağıdaki eğer NS 1 (İlk semptomlar) atama / sıktı. Fare yürümeye izin verildiğinde normal VEYA biraz yavaş yürüme görülmektedir. </li><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 2 (parezi başlangıcı) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb çok uzanan değil, kısmen ya da tamamen yıkılmış olduğunu. (Hala ortak hareket olabilir). Fare yürümeye izin verildiğinde, hindlimb ileri mot için kullanılıriyon ancak ayak 90 cm yürüyüş sırasında en az iki kez aşağı doğru kıvrılıp VEYA ayak herhangi bir parçası kafes alt / masa boyunca sürükleyerek. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş olduğunda, İKİ taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor. </li><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 3 (Felç) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb VEYA minimal eklem hareket içinde sert felç var. Fare yürümeye izin verildiğinde öne Ancak hindlimb ileri hareket için kullanılan DEĞİLDİR hareket vardır. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş olduğunda, İKİ taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor. Not: Nadiren, felç başlangıcından sonra, idrar nem arka ayaklarında görünebilir. Tedavi edilmeyen idrar nem idrar &quot;yanık&quot; ve deri lezyonları neden olabilir. Saç kırpma yoluyla idrar nem davranın, ılık su idrar çıkarmak ıslatırken uygulamak ve yavaşça kuru kurulayın. Cilt lezyonları varsa Antibiyotik uygulanırtic merhem. </li><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 4 (İnsanca son nokta) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, arka ayaklarında sert felç var. Fare yürümeye izin verildiğinde, hiçbir ileri hareket yoktur. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş edildiğinde, YA taraftan 10 saniye içinde kendini sağa mümkün değildir. Yani, refleksi yokluğu. </li></ol></li></ol> 4. Veri Girişi ve Analizi <ol><li> Bir ilaç etkinlik çalışması sırasında, bir Laboratuar Bilgi Yönetim Sistemi (LIMS) her bir fare için veya ticari olarak satılan elektronik tablo yazılımı içine toplanan verileri girin. Not: ALS TDI geliştirilen LIMS yazılım dahili çalışmalardan toplanan tüm veriler için merkezi bir depo, ALS TDI müfettişler için zamanla bu veriler elverişli erişilebilir hale getirmek. LIMS, tüm çalışma günlerinde geri soyu, vücut ağırlığı veya nörolojik skoru, eşsiz kimliği ile, herhangi bir bireysel fare izlerve ömrü boyunca kaydetti başka gözlemleriniz içerir. LIMS sonuçta daha sonraki analizler için kullanılan bir elektronik tablo oluşturur. </li><li> Bir ilaç etkinlik çalışmasında, yani tüm fareler insancıl uç noktasına ulaştığında, kullanım tablosu programı (Malzeme Tabloya bakınız) Sol ve sağ hindlimb NS ortalamasını alarak her gün için, her bir fare için kombine NS hesaplamak tamamlanmasının ardından . Sonra, her fare ve her bir fare, belirli bir NS geçirdiği gün sayısı her NS ortanca yaşı hesaplamak. </li><li> İstatistiksel yazılımı elektronik tablo yazılımı veri alma yoluyla zaman içinde NS genel değişimleri analiz (Malzeme Tablo). Regresyon etkileri gibi medyan NS yaşı ve uyuşturucu tedavi ile, beklenen NS tahmin sıralı lojistik regresyon modeli kullanılarak bu verileri takınız. Log-rank ki-kare testi kullanılarak etkisi olabilirlik olasılığını tahmin ve NS ilerlemesi üzerine uyuşturucu tedavi etkisi istatistiksel olup olmadığını belirlemekly anlamlı (adım-adım talimatlar için İletişim Kod Dosyası bakınız). Not: Bir p-değeri &lt;0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmektedir. Not: İstatistiksel analiz yöntemi NS veri ve bireysel fareler için NS yörüngeleri değişken doğası sıralı doğasını saygılıdır. Bireysel NS yörüngeleri yeterli NS tepkilerin yansıtıcı olmayan NS zaman ilişkili grup ortalamaları sonuçlanan belirgin farklı olabilir, çünkü tercih edilir. Buna ek olarak, bazı durumlarda, NS özellikle sıfır-bir aralığında değişebilir. </li><li> Son olarak, kullanım grafik yazılımı ilaç ile tedavi edilen ve kontrol hayvanları için grafikler &quot;Ordinal NS Medyan Yaş vs NS Beklenen&quot; oluşturmak için (Malzeme Tabloya bakınız) (Şekil 2; Yan Kod adım adım talimatlar için Dosya bakınız). Uygun y-ekseninden hastalığın başlangıcından (i ortalama yaşı enterpolasyonlayarak ilaç ile tedavi edilen ve kontrol grupları arasında vardiya tahmin etmek bu grafikleri kullanabilirsiniz.e., x-ekseninde NS 2). Not: İki grup arasında ortalama yaş farkı ilaca bağlı değişimi temsil ve etkinin büyüklüğü pratik bir önlem olarak kabul edilir. Not: Semptomatik hastalığın ilerlemesini yavaşlattı göstermektedir beklenen NS vs ortanca yaş eğrisi sağa kaymalar. Tersine, beklenen NS vs ortanca yaş eğrisi sola kaymalar semptomatik hastalığın ilerlemesini hızlandırılmış göstermektedir. </li></ol>

<ol><li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Rosen, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+gene+are+associated+with+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nature. 362 (6415), 59-62 (1993).</li>
<li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+transgenic+mouse+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+in+preclinical+drug+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci.+152%2C+Suppl%22%5BJournal%5D)">The use of transgenic mouse models of amyotrophic lateral sclerosis in preclinical drug studies.</a> J Neurol Sci. 152, Suppl. 1 (6415), (1997).</li>
<li>Scott, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design%2C+power%2C+and+interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Design, power, and interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Hegedus, J., Putman, C. T., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+preferential+motor+unit+loss+in+the+SOD1+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Time course of preferential motor unit loss in the SOD1 G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurobiol. Dis. 28 (2), 154-164 (2007).</li>
<li>Gordon, T., Ly, V., Hegedus, J., Tyreman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+denervated+muscle+fibers+in+hindlimb+muscles+after+sciatic+nerve+transection+in+wild+type+mice+and+in+the+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol.+Res%22%5BJournal%5D)">Early detection of denervated muscle fibers in hindlimb muscles after sciatic nerve transection in wild type mice and in the G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurol. Res. 31 (1), 28-42 (2009).</li>
<li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Kim, K., Moore, D. H., Makriyannis, A., Abood, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AM1241%2C+a+cannabinoid+CB2+receptor+selective+compound%2C+delays+disease+progression+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">AM1241, a cannabinoid CB2 receptor selective compound, delays disease progression in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Eur. J. Pharmacol. 542 (1-3), 1-3 (2006).</li>
<li>Weydt, P., Hong, S. Y., Kliot, M., Moller, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Azari, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+and+anatomical+effects+of+systemically+administered+leukemia+inhibitory+factor+in+the+SOD1%28G93A+G1H%29+mouse+model+of+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioural and anatomical effects of systemically administered leukemia inhibitory factor in the SOD1(G93A G1H) mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain Res. 982 (1), 92-97 (2003).</li>
<li>Guan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiazolidinediones+expand+body+fluid+volume+through+PPARgamma+stimulation+of+ENaC-mediated+renal+salt+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Thiazolidinediones expand body fluid volume through PPARgamma stimulation of ENaC-mediated renal salt absorption.</a> Nat. Med. 11 (8), 861-866 (2005).</li>
<li>Savcheniuk, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+probiotic+therapy+on+development+of+experimental+obesity+in+rats+caused+by+monosodium+glutamate%5BTitle%5D)+AND+%22Fiziol.+Zh%22%5BJournal%5D)">The effect of probiotic therapy on development of experimental obesity in rats caused by monosodium glutamate.</a> Fiziol. Zh. 60 (2), 63-69 (2014).</li>
<li>Smittkamp, S. E., Brown, J. W., Stanford, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-course+and+characterization+of+orolingual+motor+deficits+in+B6SJL-Tg%28SOD1-G93A%291Gur%2FJ+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time-course and characterization of orolingual motor deficits in B6SJL-Tg(SOD1-G93A)1Gur/J mice.</a> Neuroscience. 151 (2), 613-621 (2008).</li>
<li>C, M., Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+low+expressor+line+of+transgenic+mice+carrying+a+mutant+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+%28SOD1%29+gene+develops+pathological+changes+that+most+closely+resemble+those+in+human+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">A low expressor line of transgenic mice carrying a mutant human Cu,Zn superoxide dismutase (SOD1) gene develops pathological changes that most closely resemble those in human amyotrophic lateral sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 93 (6), 537-550 (1997).</li>
<li>Wegorzewska, I., Baloh, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TDP-43-based+animal+models+of+neurodegeneration%3A+new+insights+into+ALS+pathology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurodegener.+Dis%22%5BJournal%5D)">TDP-43-based animal models of neurodegeneration: new insights into ALS pathology and pathophysiology.</a> Neurodegener. Dis. 8 (4), 262-274 (2011).</li>
<li>Hatzipetros, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C57BL%2F6J+congenic+Prp-TDP43A315T+mice+develop+progressive+neurodegeneration+in+the+myenteric+plexus+of+the+colon+without+exhibiting+key+features+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">C57BL/6J congenic Prp-TDP43A315T mice develop progressive neurodegeneration in the myenteric plexus of the colon without exhibiting key features of ALS.</a> Brain Res. 1584, 59-72 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu yazıda, doğru uygulandığı takdirde, güvenilir SOD1-G93A farelerde hastalığın ilerlemesini değerlendirmek ve ilaca bağlı değişikliklerin belirlenmesi yeteneğine sahip, hızlı ve basit bir video protokol açıklar. Farklı gruplar SOD1-G93A farelerin 8-10 için fenotipik skorlama sistemleri geliştirdiler ederken, sık sık prosedürü hakkında yeterli bilgi sağlamak ve replikasyon için yetersiz kalmaktadır yok. Sonuç olarak, skorlama sistemleri nadiren onları geliştiren belirli bir grup dışında kullanılmaktadır. Bu r...

1990&#39;ların ortalarında, kalkınma SOD1-G93A transgenik fare modeli Amyotrofik lateral skleroz (ALS) 1 en yaygın olarak kullanılan hayvan modeli olmuştur beri. Bu transjenik fare modeli, genetik olarak amino asit 93 (G93A) alanin mutasyona ALS ilişkili glisin barındıran insan Cu / Zn süperoksit dismutaz 1 (SOD1) geni, bir mutant formu aşın ifade etmek üzere geliştirilmiş. G93A mutasyonu topluca makyaj ailesel ALS vakalarının 2 yaklaşık beşte biri SOD1 genindeki mutasyonlar biridir. SOD1-G93A modeli, bu nihai birlikte, bu tür motor nöron kaybı, ilerleyici kas güçsüzlüğü ve atrofi gibi insanlarda ALS patolojik özellikleri birçok özetlediği çünkü ALS onun bariz genetik bağlantıya ek olarak ALS ilaç geliştirme araştırma beygir haline gelmiştir felç ve ölüm 3. Genellikle transjenik hayvan modellerinde olduğu gibi olsa da, doğal bir iki oradaSOD1-G93A fareler ile bağlantılı rahatsızlık derecesinde değişkenliğin. Scott ve ark. En az 24 çöp eşleştirilmiş cinsiyet dengeli farelerin Kusaklara 4 biyolojik değişkenlik yarattığı gürültüyü aşmak için uyuşturucu etkinlik çalışması tasarımlarda gerekli olduğunu tespit ettik. Agresif hastalığın ilerlemesi ve günlük izleme ihtiyacı ile birlikte bu çalışmalarda gerekli hayvanların çok sayıda nöromusküler gücünü ve işlevini ölçmek için mükellef, zaman alıcı ve potansiyel stresli tekniklerin kullanılmasını yasaklayan (örneğin, elektromiyografi, kavrama kuvveti, rotorod , vs.). Bunun yerine, güvenilir hızlı bir şekilde SOD1-G93A farelerin kas fonksiyonunu değerlendirir in vivo tarama aracı ihtiyacını vurgulamaktadır. ALS TDI bir protokol ortalama fare başına en az 30 sn SOD1-G93A farelerin kas fonksiyonlarının değerlendirilmesi güvenilir sağlar geliştirildi. Bu protokol, encompabasında ve video Bu raporda açıklanan basit bir nörolojik skorlama sistemi (NeuroScore) kullanarak hindlimb fonksiyonun günlük değerlendirmesini de kapsar. Hindlimb açıkları erken SOD1-G93A farelerin 5,6 hastalığın nörolojik belirtisi bildirdi çünkü NeuroScore hindlimb fonksiyonu odaklanmıştır. Dahası, ALS TDI tarafından geliştirilen protokol parezi (hafif veya kısmi felç), ilerlemesi ve felç şiddetinin başlangıç ​​tarafsız bir değerlendirme sağlar ve hastalığın ilerlemesinde ilaca bağlı değişiklikleri belirlemek için yeterli hassastır.

<table><tbody><tr><td>B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur suşu</td><td>Jackson Laboratuvarı, Bar Harbor, ME</td><td>002726</td><td>Bu çalışmada kullanılan farelerin türü</td></tr><tr><td>Breeders</td><td>Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA</td><td></td><td>Koloni bakım</td></tr><tr><td>ölçeği</td><td>Navigator OHAUS, Parsippany, NJ</td><td>Model N14120</td><td>Fareleri tartmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Nutra-GelH</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td></td>#S4798 <td>Islak mama hasta farelere sağlanan</td></tr><tr><td>Işınlanmış Laboratuvar Hayvanı Diyeti</td><td>Harlan, Indianapolis, IN</td><td>2918-111914M</td><td>Chow diyeti</td></tr><tr><td>Laboratuvar sınıfı Sani-cips</td><td>Harlan Teklad, Indianapolis, IN</td><td>7090</td><td>Yatak</td></tr><tr><td>JMPH&nbsp;</td><td>SAS Enstitüsü, Inc., SAS Kampüs Sürücüsü, Cary, NC</td><td>&nbsp; v10.0.2</td><td>İstatistik yazılımı</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA</td><td>Excel 2013 (v 15.0)</td><td>Elektronik tablo yazılımı</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 5</td><td>GraphPad software Inc., La Jolla, CA</td><td>v5.4</td><td>Grafik yazılımı</td></tr><tr><td>Mouse Huts</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>K3272</td><td>Çevresel zenginleştirme için</td></tr></tbody></table>

als sod1-g93a fare modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için hızlı fenotipik nörolojik puanlama sistemi

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

SOD1-G93A transgenik fare, amyotrofik lateral sklerozun (ALS) en yaygın kullanılan hayvan modelidir. ALS TDI'da, SOD1-G93A farelerinin nöromüsküler fonksiyonunu hızlı bir şekilde güvenilir bir şekilde değerlendiren, buradaki videoda gösterilen fenotipik bir tarama protokolü geliştirdik. Bu protokol, arka bacak fonksiyonunu değerlendirmek için tasarlanmış basit bir nörolojik skorlama sistemini (NeuroScore) kapsar. NeuroScore, arka bacak fonksiyonuna odaklanır, çünkü arka bacak eksiklikleri SOD1-G93A farelerinde bildirilen en erken nörolojik hastalık belirtisidir. ALS TDI tarafından geliştirilen protokol, parezi başlangıcının (hafif veya kısmi felç), felcin ilerlemesi ve şiddetinin tarafsız bir değerlendirmesini sağlar ve hastalığın ilerlemesinde ilaca bağlı değişiklikleri tanımlayacak kadar hassastır. Bu raporda, ayrıntılı bir makalenin video ile kombinasyonu, puanlama belirsizliklerini ve deneyciler arası değişkenliği en aza indirgeyerek protokolün diğer laboratuvarlar tarafından benimsenmesine ve farklı ortamlarda gerçekleşen çalışmalar arasında karşılaştırmalara olanak tanır. Bu video protokolünün mevcut ve gelecekteki ALS araştırmacıları için mükemmel bir eğitim aracı olarak hizmet edebileceğine inanıyoruz.

2014 değerlendirildi sırasında 90 erkek ve 94 dişi olmayan tedavi SOD1-G93A fareler için nörolojik puanı verileri ALS TDI okudu. Sonuçlar kadınlara oranla NS 1 de yaşamlarının büyük bir oranda kanıtladığı gibi erkek fareler genellikle, dişi farelere göre daha agresif bir hastalık ilerlemesini sahip olduğunu göstermektedir. NS 2 ve NS 3 cinsiyetler arasında neredeyse eşit sıklıkta görülür. O &quot;normal&quot; bir fenotip olarak kabul edilir, çünkü NS 0 analize dahil edilmiştir. NS 4 de sadece bir SOD1-G93A farenin ömrü ...

Bu video protokolü, amyotrofik lateral sklerozun transgenik fare modelindeki nöromüsküler eksiklikleri değerlendirmek için hassas, güvenilir ve hızlı bir yöntemi tanımlar.

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

Bu prosedürün genel amacı, basit bir fenotipik nörolojik skorlama sistemi kullanarak arka ekstremite fonksiyonlarının günlük değerlendirmesiyle, SOD1-G93A farelerinin nöromüsküler fonksiyonlarını hızlı ve güvenilir bir şekilde analiz etmektir. Bu işlem, öncelikle fareler kuyruklarından askıya alınmışken arka ekstremitelerinin gözlemlenmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise farelerin yürütülmesi ve yürüyüşlerinin gözlemlenmesidir.Ardından, yazma refleksinin varlığını veya yokluğunu test etmek için fareler yan tarafları üzerine yatırılır. Son adım, fare kohortlarının nörolojik skor verilerini bir ordinal lojistik regresyon modeline sığdırarak veri analizini gerçekleştirmektir. Nihayetinde, fenotipik nörolojik skorlama sistemimiz, terapötik müdahalelerin etkinliğini belirlemek amacıyla, bir ALS fare modeli olan SOD one G 93'te hastalık ilerlemesini değerlendirmek için kullanılır.Bu yöntemin mevcut diğer tüm tekniklere göre temel avantajı; hızlı, basit, güvenilir olması ve fareler için minimum düzeyde stres yaratmasıdır. Bu yöntemin etkileri, hastalığın en yaygın fare modelinde terapötik müdahalelerin hızlıca değerlendirilmesine olanak tanıdığı için amyotrofik lateral skleroz veya ALS tedavisine kadar uzanmaktadır. Nörolojik farklılıklar belirgin olmayabileceği için nörolojik skorlama yöntemini öğrenmek zordur, bu nedenle görsel gösterim kritik öneme sahiptir.İşe erkek SOD1 G93A farelerini her kafeste bir fare olacak şekilde, dişi SOD1 G93A farelerini ise her kafeste en fazla iki fare olacak şekilde yerleştirerek başlayın. Farelere plastik kulübeler şeklinde çevresel zenginleştirme sağlayın. Farelere ad libitum olarak yiyecek ve su sağlayın.Tüm farelerin vücut ağırlıkları aynı zamanda ve her çalışma için kaydedilir. Günlük vücut ağırlığı, hastalık seyri ve kronik ilaç tedavisinden kaynaklanabilecek herhangi bir rahatsızlığın hassas bir göstergesidir. Çalışma boyunca, her farenin nörolojik skorunu, ardışık olarak uygulanan üç testten oluşan bir düzenle günlük olarak değerlendirin.İlk testte, fenotipik geçiş noktalarında skorların belirlenmesi çok zor olduğundan dikkatle izleyin. Kuyruk askılama testinde, fareyi kuyruğunun tabanından yaklaşık 1.5 inç uzaklıktan tutarak ev kafesinin tel üst kısmına asın. Arka üyelerin fonksiyonunu bir ila iki saniye boyunca gözlemleyin ve testi üç kez tekrarlayın.Yürüme testi için. Fareyi, bir miktar tutuş sağlayan ve en az 25 santimetre yürüme mesafesine sahip temiz bir yüzeye yerleştirin. Farenin yürüyüşünü gözlemleyerek 75 santimetreye kadar yürümesine izin verin.Yazma refleksi testi için fareyi yan tarafına yatırın ve her iki yanından destek almadan kendini yazma süresini ölçmek için bir kronometre kullanın. Bu testin yalnızca bir denemesi gereklidir. Üç fenotipik gözlem testinin toplam sonucuna dayanarak, her bir arka ekstremiteyi (sol veya sağ) sıfırdan dörde kadar olan bir ölçekte bağımsız olarak puanlayın.Sıfır sinüs skoru, farenin semptom öncesi dönemde olduğunu gösterir. Askı testi sırasında arka ekstremiteler lateral orta hattan tamamen uzaklaşmış şekilde uzanır ve bu pozisyonda iki saniye veya daha uzun süre kalır. Ayrıca, yürüyüş testi sırasında normal bir yürüyüş gözlemlenir.İlk semptomların ortaya çıktığını belirten bir puan olarak bir puan atayın. Süspansiyon testi sırasında arka ekstremite ya lateral orta hatta doğru çökmüşse, kısmen lateral orta hatta doğru çökmüşse, titriyorsa veya başka bir şekilde anormal olarak açılmışsa bu durum geçerlidir. Az önce gösterilen süspansiyon testi semptomlarına ek olarak, bir puan alması gereken bir farenin yürüyüşü hala normal veya hafifçe düşük görünmelidir.Parsis başlangıcını belirten iki puanlık bir skor atayın. Eğer süspansiyon testi sırasında arka ekstremite kısmen veya tamamen çökerse ve ek olarak yürüme testi sırasında arka ekstremiteler ileriye doğru hareket için kullanılırsa; ancak, 75 santimetrelik bir yürüyüş sırasında ayak parmakları en az iki kez aşağıya doğru kıvrılırsa veya ayağın herhangi bir kısmı yerde sürüklenirse iki puan verilir.Fare, her iki yanına yatırıldıktan sonra 10 saniye içinde tekrar kendi başına doğrulabilmelidir. Üç puanlık bir sinus skoru felç olduğunu gösterir. Süspansiyon testi sırasında fare arka ekstremitede rijit paralizi gösterirse veya eklem hareketi minimal düzeyde kalırsa, yürüme testi sırasında hâlâ ileriye doğru hareket gösterebilir, ancak bu hareket arka ekstremitelerini kullanarak gerçekleşmez.Üç olan sinus skoruna ek olarak, fare her iki yanına yatırıldıktan sonra 10 saniye içinde kendi başına doğrulabilmelidir. Son olarak, farenin süspansiyon sırasında rigid paralizi göstermesi durumunda insani son noktayı tanımlayan dört puanlık bir skor belirlenir. Test, arka ekstremitelerin kullanıldığı yürüme testi sırasında ileriye doğru hareket olmadığını gösterir ve fare, her iki yanına yatırıldıktan sonra 10 saniye içinde kendi başına doğrulamaz.Dişilerle karşılaştırıldığında, erkek farelerin yaşam sürelerinin daha büyük bir kısmında bir nörolojik skor ile sınıflandırılabilecek semptomlar göstermesi, erkek farelerin genellikle daha agresif bir hastalık seyrine sahip olduğunu kanıtlamaktadır. Semptomlar iki veya üç nörolojik skor aralığına yükseldiğinde, her bir skorda geçirilen gün sayısı cinsiyetler arasında eşit sıklıktadır. Burada, az önce açıklanan neuroco protokolü kullanılarak oluşturulan ordinal lojistik istatistiksel analiz grafikleri gösterilmektedir.Bu veriler, TDI 1 73 test bileşiği alan SOD one G 93 a fare kohortunun, vehicle alan fare kohortu ile karşılaştırıldığı bir ilaç etkinliği farmakoloji çalışmasından elde edilmiştir. Cinsiyetler ayrı ayrı analiz edildiğinde istatistiksel olarak anlamlı farklar gözlenmemiş, ancak cinsiyetler birleştirildiğinde istatistiksel anlamlılığa ulaşılmıştır. Benzer eğilimler göstermesine rağmen, sağkalım üzerine yapılan Kaplan Meyer analizi, cinsiyetler birleştirildiğinde bile anlamlı farkları ortaya çıkaracak kadar hassas değildi.Doğru şekilde uygulandığında, puanlama sistemi fare başına bir dakikadan kısa sürede tamamlanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, Neuroco sistemini kullanarak bir ALS fare modeli olan SOD one G 93'te hastalık progresyonunun nasıl değerlendirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

a-quick-phenotypic-neurological-scoring-system-for-evaluating-disease

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz serebellar ataksi fare modelleri, hastalık şiddeti, hızlı ve hassas ölçümü için bir protokol tanımlamaktadır. Önlemler arka bacak clasping, çıkıntı testi, yürüme ve kifoz içerir. Bu protokol, etkili bir şekilde etkilenen ve etkilenmeyen bireyler arasında ayrımcılık ve zamanla etkilenen bireylerin ilerlemesi algılar.

Serebellar Ataksi Fare Modelleri Değerlendirme Basit Kompozit Fenotip Puanlama Sistemi

Amiyotrofik lateral skleroz (ALS) için bir fare modelinde klinik ve davranışsal incelenmiştir. Beraberindeki immünohistolojik analizi için bir önkoşul olarak omurilik hazırlanmasında detaylı bir şekilde anlatılır.

Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Bu yazıda, TMEV ile enfekte farelerde ilerleyici nörolojik sakatlığı ölçmek için kullanılan Rotarod performans testi için optimize edilmiş bir test protokolü sunulmuştur.

Multipl Skleroz Fare Modeli Progressive Nörolojik Engellilik Ölçümü

Burada, β-amiloidoz ve tauopatinin transgenik fare modellerinde bilişsel ve fonksiyonel motor davranışlarda in vivo etkinlik gösteren bileşiklerin taranması için kullanılabilen aşamalı, davranışsal tarama yaklaşımı anlatılmaktadır. Bu yöntemler, bileşikleri kısa süreli ve hafızadaki işlerde etkinlik açısından taramak için optimize edilmiştir.

Amiloid-β ve Tau Nöropatolojisinin Transgenik Fare Modellerinde Spontan Dalgalanmanın Değerlendirilmesi, Yeni Nesne Tanıma ve Limb Klapması

Bu çalışma, bir implante telemetri cihazı ile tüm vücut pletismografisi ve elektromiyografi ile hastalığın ilerlemesi boyunca serbestçe davranıyor amiyotrofık ​​lateral skleroz (ALS), fare modelinde havalandırma ve solunum kası etkinliği tekrarlanan ölçümler için bir yöntem sağlar.

Nöromusküler Hastalığının Fare Modelinde Solunum Kas Aktivitesi ve Havalandırma tekrarlanan ölçüm

Sinir iletim ölçümü ateş fare modelleri değerlendirmek için yararlı bir araçtır ama sık sık öyle yalnızca hindlimbs siyatik sinir uyarmak için geçerlidir. Burada, bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) vivo brakiyal pleksus tarafından innervated fare forelimb kaslarda ölçmek için bir teknik açıklayın.

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), multipl sklerozun bir hayvan modeli olarak hizmet eder. Bu makalede EAE'de spinal kord inflamasyonu, demiyelinizasyon ve aksonal yaralanmayı skorlamaya yönelik bir yaklaşım anlatılmaktadır. Ek olarak, canlı farelerde aksonal hasarın değerlendirilmesini kolaylaştıran, fare serumundaki çözünür nörofilament ışık seviyelerini ölçmek için bir yöntem sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit, multipl sklerozun en yaygın kullanılan murin modellerinden biridir. Mevcut protokolde, her iki cinsiyetten C57BL / 6J fareleri, miyelin oligodendrosit glikoprotein peptidi ile aşılanır ve bu da esas olarak kuyruk ve uzuvların artan parezi ile sonuçlanır. Burada EAE indüksiyonu ve değerlendirme protokolünü tartışıyoruz.

İki Cinsiyette Multipl Sklerozun Modellenmesi: MOG35-55 ile İndüklenen Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit

Bu makale, büyük stroklu farelerde yüksek oranda ötelemeye dayalı ve bağımsız olarak kanıtlanmış fare Vuruş Birimi (mSU) kavramını yürütmek için bir protokol sunar. Ayrıca, farelerde fokal deneysel inme ölçeğinin yürütülmesi için standart bir protokol sağlar, bu da uzun vadede bile tespit edilen inme fokal eksikliklerini değerlendirir.

Translasyonel Fare İnme Çalışmaları için Standartlaştırılmış Nörolojik Skorlama ile Fare Vuruşu Birimi Protokolü

Bu makale, yetişkin farelerde CNS hedefli tedaviler için intratekal teslimat yöntemlerini detaylandırır; protokol hassasiyetine odaklanır ve tekrar enjeksiyonu mümkün kılar. Makale, antisens oligonukleotidlerin SOD1-ALS model farelerinde mutant SOD1 ekspresyonunu azalttığı bir doğrulama çalışmasından elde edilen bulguları içeriyor ve bu yaklaşımın nörodejeneratif hastalıklar üzerine preklinik araştırmalarda faydasını desteklemektedir.

İnsan SOD1-G93A ALS farelerinde hassas CNS hedefleme ve öngörücü etkinlik için SOD1-ASO'ların bel intratekal enjeksiyonu

Öğrenin, ALS SOD1-G93A fare modelinde hastalık ilerlemesini değerlendirmek için hızlı fenotipik nörolojik puanlama sistemini. Bu yöntem, arka bacak fonksiyonunun günlük değerlendirmesiyle nöromusküler fonksiyonu güvenilir şekilde ölçer.

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

Daha fazla video keşfet