Name: Bir FOTOTROMBOTİK Tekniği sınırlı Kapsül Enfarktüs Modelleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Keşfedin fototrombotik teknik kullanarak sınırlı kapsül enfarktüs modelleme yöntemini. Bu yöntem, sıçanlarda kalıcı motor bozukluk oluşturarak nörolojik araştırmalarda kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Sağlık Sistemleri Mühendisliği Enstitüsü (IMSE) GIST gelen GIST-Caltech İşbirlikçi Fonu (K04592) bir hibe ile ve Bilim, bilgi ve iletişim teknolojileri ve gelecek Planlama Bakanlığı tarafından finanse Kore NMK vasıtasıyla Temel Bilimler Araştırma Programı tarafından desteklenen (NRF-2013R1A2A2A01067890).

Tüm işlemler Bilim ve Teknoloji (GIST) Gwangju Enstitüsü kurumsal kurallarına göre yapılmıştır ve tüm işlemler GIST Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından kabul edildi. 1. Ön lezyon Adımlar <ol><li> İç Kapsül içinde ön ayakları Alan tanımlanması AAV-GFP kullanarak <ol><li> kurumsal ve ulusal kurallara uygun olarak - (13 hafta ~ 400 gr, 11) Ev Sprague Dawley sıçanları işlemek ve. </li><li> Uygun bir sterilizatör (Buhar veya Plazma sterilizatör) kullanarak tüm cerrahi aletleri ve elektrotları sterilize edin. Sterilizasyon, 30 dakika, kuru 30 dakika ayarı olarak 121 ° C &#39;de buharlı sterilizatör kullanımı. </li><li> kas içi enjeksiyon yoluyla ketamin hidroklorür (100 mg / kg) ve ksilazin (7 mg / kg) karışımı ile hayvan anestezisi. pençe sıkıştırarak anestezi derinliğini kontrol edin. Bir ısıtma pedi altında aracılığıyla 37.5 ± 0.5 ° C vücut ısısını korumakhayvanın vücut. </li><li> bir kulak çubuğu ve ağız tutucu kullanarak bir stereotaktik çerçeve içinde hayvan yerleştirin. </li><li> Temiz ve% 70 alkol ve povidon iyot çözeltisi ile cerrahi siteyi dezenfekte edin. intraoperatif ağrıyı azaltmak amacıyla kafatası kesi bölgesinde kafa derisi altında% 2 lidokain hidroklorür Infiltrate. </li><li> gözlerin kurumasını önlemek için veteriner oftalmik merhem sürün. operatif sitelere hayvan üzerinde bir steril örtüyü yerleştirin. Steril şartlarda tüm işlemleri koruyun. </li><li> Bir neşter kullanılarak 2 cm&#39;lik bir orta hat kafatası kesi gerçekleştirmek ve tel Toplayıcılı bilateral cilt geri çekin. pamuklu ve% 30 hidrojen peroksit ile kafatası kurulayın. </li><li> motor korteksin ön ayakları alanı üzerinde bir el parça matkap kullanarak bir delik açın ve virüs enjeksiyon mikro currette ile yolu temizlemek (AP: +2.5 bregmadan, ML orta hattan 2.5 ±). </li><li> Buz ve yük 1 ul üzerinde AAV-GFP (2 x 10 12 virüs molekülleri / ml) Çözülme10 ul şırınga virüs. stereotaktik çerçeve üzerinde şırınga yerleştirin. </li><li> önceden yapılmış delik iğne taşımak ve dura derinliklerine iğne 1 mm indirin. </li><li> virüs yavaş (0.1 ul / dakika) yüksek hassasiyetli mikropompayı kullanılarak enjekte edilir ve virüsün yayılmasına izin vermek için 10 dakika daha iğneyi yerinde bırakın. </li><li> tuzlu sulama ile ameliyat yerinin temizlendikten sonra, 3-0 naylon sütür ile yara sabitleyin; stereotaktik çerçeveden sıçan bırakın ve bir kurtarma odasına transfer. Ameliyat sonrası ağrı kontrolü için kas içi enjeksiyon yoluyla ketoprofen (2 mg / kg) uygulayınız. </li><li> ısıtma pedi ile vücut sıcaklığına (37 ° C) muhafaza etmek ve gerekirse deri altına enjeksiyon yoluyla bir intramüsküler enjeksiyon ve% 2 lidokain hidroklorid ile (% 0.1, 1 mi), ikinci jenerasyon cephems sınıf antibiyotiği. onu korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayınsternum yatma. Tek bir ev tam iyileşme kadar hayvan. </li><li> 2 aşağıdakı - 3 haftalık iyileşme, derin kaputu kas içi enjeksiyon yoluyla ketamin hidroklorür (300 mg / kg) aşırı dozda sıçan anestezisi. ayak kısma yanıt, nabız ve solunum yetersizliği hayvanın ölümüne onaylayın. kaputu sıçan sırtüstü yerleştirin. </li><li> göğüs boşluğunu açmak için bir &#39;Y&#39;şeklinde kesi yoluyla karın boşluğuna açın. Sıkıca bir hemostatla inen aorta kelepçe ve kan drenajı için sıçan kalbin sağ atrium rüptürü. 30 dakika (10 ml / dakika)% 4 paraformaldehid, ardından 5 dakika (10 ml / dak) soğuk% 1 paraformaldehit ile kalbin sol ventrikül içine perfüzyon başlatın. </li><li> bir makas kullanarak karkas sıçan kafasını çıkarın. burun boyun orta hat kesi yapmak ve kafatası maruz böylece makas veya rongeur kullanarak boyun kasları kaldırın. Yavaşça beyin kafatası kemikleri ve Duras teşrih. </li><li>beyin ekstresi ve gece boyunca% 4 paraformaldehit ile dolu bir 50 ml&#39;lik konik bir tüp içinde, sıçan beyin yerleştirin. Ertesi gün, 1 x PBS ile 3 kez beyin yıkama ve% 30 sukroz çözeltisi içine koyun. </li><li> Beyin tamamen% 30 sukroz çözeltisi dibine batar sonra kriyotom -20 ° C&#39;de OCT bileşiği ile cryomold beyin yerleştirin. 40 um kalınlığa ve 200 um arasında bir aralıkta koronal düzlemde beyin dilim. </li><li> Slayt yöntemi 14 kullanarak GFP immünohistokimyasal boyama yapın. Birincil antikor uygulayın (1: Anti-Yeşil Floresan Protein, tavşan IgG fraksiyonu 200), beyin dilimlerine gece boyunca 4 ° C &#39;de. 2. günde, Tween-20 (PBST) çözeltisi ile% 1 Fosfat 3 kez yıkama ve ikincil antikor (1: Keçi anti-tavşan IgG, 500 (H + L)) uygulanır, 1 saat. % 1 PBST ile 3 kez slayt durulayın. beyin dilim üzerinde cam kapak yerleştirin. </li><li> floresan mikroskop kullanılarak (emisyon dalga boyu470 nm, emisyon dalga boyu 525 nm, büyütme 5X), internal kapsül AAV-GFP transduced aksonlar gözlemlemek. Transduced akson stereotaktik koordinatlarını belirlemek için Rat Beyin Atlas 15 transduced akson yerleri karşılaştırın </li></ol></li><li> Kapsül Enfarktüs Modelleme Uygun Işık Şiddeti Ayarı Ön lezyon <ol><li> Optik Sinir Arayüz İnşaatı <ol><li> Bir kesim matkap kullanarak içinde bir stile ile 27 gauge spinal iğne uygun bir uzunluğa (4 cm) kesin. NOT: Kesme sıkıştırmak ve spinal iğne ucu ezmek olabilir; stile kaldırmak ve spinal iğne ezilmiş kısmını çıkarmak ve spinal iğnenin iç kalibreli korumak için spinal iğne ucu lehçe. </li><li> bir tarafı patch kablosu (62.5 um&#39;lik çekirdek ile 125 um) optik elyafın ceketin uygun bir uzunluğu (10 cm) bir şerit. </li><li> unjacked optik fi takınBER metal boru (dış çapı 17 mm: 3.8 mm, iç çap: 3.3 mm, uzunluk) olarak daha sonra elyafın yaklaşık sıkıştırılır. metal boru fiber optik ve spinal iğne göbek arasındaki boşluğu doldurmak için yararlıdır. iki kez ayağı ile metal borunun 1/2 alt kelepçe. </li><li> fiber optik ısı-kurutmalı epoksi uygulayın ve spinal iğne içine fiber optik yerleştirin. hub boş alana ek bir epoksi uygulayın. stabil tespit için 100 ° C de 20 dakika boyunca epoksi Cure. </li><li> Spinal iğne dışarı çıkıntı fiber optik tutunmaya ve elmas alıştırma (parlatma) sayfaları kullanarak spinal iğnenin ucunda fiber optik lehçe. </li><li> yeşil lazer sisteminin kuplöre yama kablosu FC / PC bağlantı parçası bağlayın ve dijital optik güç ve enerji metre kullanarak fiber optik ucundan ışık yoğunluğunu ölçmek. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. Photothromİç Kapsül içinde robotik Enfarktüs hasarının <ol><li> Uygun bir sterilizatör (Buhar veya Plazma sterilizatör) kullanarak tüm cerrahi aletleri ve elektrotları sterilize edin. Sterilizasyon, 30 dakika, kuru 30 dakika ayarı olarak 121 ° C &#39;de buharlı sterilizatör kullanımı. </li><li> hayvan anestezisi (~ 400 g, 11-13 hafta) kas içi enjeksiyon yoluyla ketamin hidroklorür (100 mg / kg) ve ksilazin (7 mg / kg) karışımı ile. pençe sıkıştırarak anestezi derinliğini kontrol edin. hayvanın bünyesinde bir ısıtma pedi vasıtasıyla 37.5 ± 0.5 ° C vücut ısısını korumak. </li><li> bir kulak çubuğu ve ağız tutucu kullanarak bir stereotaktik çerçeve içinde hayvan yerleştirin. </li><li> Temiz ve% 70 alkol ve povidon iyot çözeltisi ile cerrahi siteyi dezenfekte edin. intraoperatif ağrıyı azaltmak amacıyla kafatası kesi bölgesinde kafa derisi altında% 2 lidokain hidroklorür Infiltrate. gözlerin kurumasını önlemek için veteriner oftalmik merhem sürün. </li><li> bir aşırı steril örtüyü uygulaminimal- ve operatif siteleri maruz kalmaktadır. Steril şartlarda tüm işlemleri koruyun. </li><li> 2 cm orta hat kafatası kesi gerçekleştirmek ve tel Toplayıcılı bilateral cilt geri çekin. Pamuk swapları ve hidrojen peroksit ile kafatası kurulayın. </li><li> Bregma ve lambda aynı düzeyde hizaya kadar burun kelepçe yüksekliğini ayarlayın. KRİTİK ADIM: Bu hizalama doğru da ana deneyde, iç kapsül içinde bir enfarktüs lezyon performans gibi, daha derin bir yapı yaklaşım için çok önemlidir. </li><li> bir delik yapın (çapı: 2 mm; AP: bregmadan -2.04; ML: orta hattan 3.0 ±) Fototromboz ikna etmek için bir matkap kullanarak. </li><li> Polonyalı ve optik arayüz fiber optik ucunu temizleyin. bükmeden stereotaksik çerçeveye Oni sabitleyin. Oni ucu kontrol öncesi ve optik arayüz yerleştirilmesinden sonra açıkça silin. </li><li> optika sokulmasından önce, fiber optiğin ucu lazer yoğunluğu ölçmekSıçan beyni hedef siteye l arayüz. Optik fiberin ucunda öncesi ameliyat adımlarla doğrulandığı gibi, 3.5 mW lazer yoğunluğunu ayarlayın. </li><li> internal kapsül hedef bölgeye matkap deliğinden (pre-cerrahi aşamasından doğruladı -7.8 mm) Oni yerleştirin. </li><li> Fototromboz sırasında 37.5 ± 0.5 ° C&#39;de vücut ısısını korumak. Düşük vücut ısısı infarktüsü beklenen ölçüde üretmek olmayabilir. kuyruk damarlarının içerisinden doğru Rose Bengal (2 ml / kg) enjekte edilir. </li><li> Rose Bengal enjeksiyonundan sonra 90 saniye 1 dakika boyunca 532 nm yeşil lazer açın. Işık verilmesinden sonra yavaşça beyinden Oni çıkarın. ameliyat yerinin temizledikten sonra, yara 3-0 naylon sütür ile yara emniyete sabitleyin; stereotaktik çerçeveden sıçan bırakın ve bir kurtarma odasına transfer. </li><li> Yalancı operasyon grubuna (SOG), yerine Gül-Bengal salin enjeksiyonu (0.2 ml / 100 gr) hariç, aynı lezyon yapma yordamı gerçekleştirin. </li><li>Ameliyat sonrası ısıtma pedi ile vücut ısısını (37 ° C) muhafaza ve kas içi enjeksiyon yoluyla antibiyotik (ikinci jenerasyon sefalosporin,% 0.1, 1 ml) yönetmek. sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar sahipsiz hayvan bırakmayın. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanlar tarafından işgal kafesine ameliyat sonrası hayvanların iade etmeyin. Not: Ön Deney 5 mW 1 mW olan en iyi ışık yoğunluğunu bulmak için aynı prosedür gerçekleştirildi ve prosedür, farklı durumda lezyonun tatminkar ölçüde elde etmek için gerekli olabilir. </li></ol> Kapsül Enfarktüs hasarının 3. Değerlendirme <ol><li> Davranış Testi ve Hayvan Gruplandırılması <ol><li> Whishaw ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi görevleri ulaşan bir pelet gerçekleştirin. 14 strok modelleme sonra 1 hafta boyunca her gün ön ayakları motor açık değerlendirmek. Tek bir pelet ulaşan görevi gerçekleştirmek1 cm genişliğinde bir yarık ve ön duvarının ortasında önünde bir gıda raf net Pleksiglas (30 x 15 x 35 cm) kullanan gıda kısıtlamalı hayvanlarda (SPRT) (kontrol vücut ağırlığının% 90). </li><li> Tercih ön ayakları eğik kontralateral gıda rafta pelet yerleştirin. 3 hafta seans başına 20 pelet yönetin. NOT: Sprts başarılı bir sayıda hayvan gıda pelet kavrar ve onu düşürmeden ağzına koyar bir ulaşılabilecek olarak tanımlanır. </li><li> aşağıdaki formül ile tanımlanır başarılı ulaştığı bir yüzdesi olarak bir puan hesaplanır <img alt="Equation1" src="/files/ftp_upload/53281/53281equation1.jpg" /> NOT: Biz 3 gruba hayvanlar bölmek: Sham grubu (SOG), ılımlı toparlanma grubu (MRG) ve kötü kurtarma grubu (PRG). Eğer bir inme sonrası SPRT skoru&gt;% 50, biz önemli bir lezyon varlığını gösterir MRG gibi sıçan sınıflandırmak, ama ta değil tamamen yokrYer. İnme sonrası SPRT puanı öncesi inme SPRT puanı ile karşılaştırıldığında% 50 &lt;ise, biz hedefe tam lezyonu gösterir PRG olarak grup, sınıflandırır. </li></ol></li><li> Enfarktüs hasarının Neurohistological Onayı <ol><li> Daha önce tarif edildiği gibi% 4 paraformaldehit ile kardiyak perfüzyonun gerçekleştirin. Beyin tamamen% 30 sukroz çözeltisi içinde dibe çökmesinden sonra, 10 um kalınlığa ve mikrotom ya kriyotom 4 ile 200 um arasında bir aralıkta koronal bölümlendirilmeleri gerçekleştirin. </li><li> H &amp; E, Nissl, Luxol hızlı mavi-PAS, sinir lifi proteini-L veya Glial fibriler asit protein boyama ve histolojik bulguları gözlemlemek ile Leke boyama gözlemlemek hedef alan internal kapsül tüm genişliği anlatabileceğiniz optimum ışık yoğunluğunu belirlemek için 4,17. </li><li> ImageJ yazılımı kullanarak, beyin slaytlar üzerinde internal kapsül Fototrombotik enfarktüs alanının hacmini ölçmek.<ol><li> infarkt alanının hacmini ölçmek için, &#39;ImageJ&#39; yazılımı başlatmak. Dosyaları açmak için, &#39;Stacks Image&#39; ( &#39;Resim&#39; → &#39;Stacks&#39; → &#39;Stacks Image&#39;) üst üste olmak. Düzenleme dosya adı seçin ve ölçek düzenlemek için (→ &quot;Ölçeği ayarla &#39;Analiz&#39; &#39;) Ölçeği ayarla&#39;. </li><li> &#39;Eklentileri&#39; ı seçin görüntülerin hacmi veya alanı hesaplamak için &#39;Yığınları ölçün&#39;. &#39;Dilim Aralığı&#39; içine 2 görüntülerin mesafe aralığını yerleştirin. Tüm resimlerin ROI bir çizim (İlgilenilen Bölge) yapın ve &#39;Tedbir&#39; tıklayın. NOT: Yazılım &#39;ImageJ&#39; otomatik alanı ve her bir görüntünün hacmi ve bunların toplam hacmi hesaplar. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2012+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2012 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 125, 2-220 (2012).</li>
<li>Debette, S., Markus, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+importance+of+white+matter+hyperintensities+on+brain+magnetic+resonance+imaging%3A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Bmj%22%5BJournal%5D)">The clinical importance of white matter hyperintensities on brain magnetic resonance imaging: systematic review and meta-analysis.</a> Bmj. 341, 3666(2010).</li>
<li>Zhang, K., Sejnowski, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+universal+scaling+law+between+gray+matter+and+white+matter+of+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">A universal scaling law between gray matter and white matter of cerebral cortex.</a> PNAS. 97 (10), 5621-5626 (2000).</li>
<li>Kim, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+photothrombotic+capsular+infarct+with+a+marked+motor+deficit%3A+a+behavioral%2C+histologic%2C+and+microPET+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">A rat model of photothrombotic capsular infarct with a marked motor deficit: a behavioral, histologic, and microPET study.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (4), 683-689 (2014).</li>
<li>Kleim, J. A., Boychuk, J. A., Adkins, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+models+of+upper+extremity+impairment+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Rat models of upper extremity impairment in stroke.</a> ILAR J. 48 (4), 374-384 (2007).</li>
<li>Frost, S. B., Barbay, S., Mumert, M. L., Stowe, A. M., Nudo, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+animal+model+of+capsular+infarct%3A+endothelin-1+injections+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">An animal model of capsular infarct: endothelin-1 injections in the rat.</a> Behav Brain Res. 169 (2), 206-211 (2006).</li>
<li>He, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definition+of+the+anterior+choroidal+artery+territory+in+rats+using+intraluminal+occluding+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Definition of the anterior choroidal artery territory in rats using intraluminal occluding technique.</a> J Neurol Sci. 182 (1), 16-28 (2000).</li>
<li>Tanaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+model+of+lacunar+infarction+in+the+gyrencephalic+brain+of+the+miniature+pig%3A+neurological+assessment+and+histological%2C+immunohistochemical%2C+and+physiological+evaluation+of+dynamic+corticospinal+tract+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental model of lacunar infarction in the gyrencephalic brain of the miniature pig: neurological assessment and histological, immunohistochemical, and physiological evaluation of dynamic corticospinal tract deformation.</a> Stroke. 39 (1), 205-212 (2008).</li>
<li>Shibata, M., Ohtani, R., Ihara, M., Tomimoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White+matter+lesions+and+glial+activation+in+a+novel+mouse+model+of+chronic+cerebral+hypoperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">White matter lesions and glial activation in a novel mouse model of chronic cerebral hypoperfusion.</a> Stroke. 35 (11), 2598-2603 (2004).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Ann Neurol. 17 (5), 497-504 (1985).</li>
<li>Kuroiwa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+model+of+photothrombotic+ischemia+and+infarction+within+the+caudoputamen%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Development of a rat model of photothrombotic ischemia and infarction within the caudoputamen.</a> Stroke. 40 (1), 248-253 (2009).</li>
<li>Bashkatov, A. N., Genina, E. A., Tuchin, V. V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBashkatov%2C+AN+%22Handbook+of+biomedical+optics%22">Handbook of biomedical optics</a>. 83, CRC Press. Boca Raton, Fl. (2011).</li>
<li>Yizhar, O., Fenno, L. E., Davidson, T. J., Mogri, M., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetics+in+neural+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Optogenetics in neural systems.</a> Neuron. 71 (1), 9-34 (2011).</li>
<li>Whishaw, I. Q., Whishaw, P., Gorny, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+skilled+forelimb+reaching+in+the+rat%3A+a+movement+rating+scale%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The structure of skilled forelimb reaching in the rat: a movement rating scale.</a> J Vis Exp. (18), e816(2008).</li>
<li>Jang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+corticospinal+tract+location+at+corona+radiata+and+posterior+limb+of+the+internal+capsule+in+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRehabilitation%22%5BJournal%5D)">A review of corticospinal tract location at corona radiata and posterior limb of the internal capsule in human brain.</a> NeuroRehabilitation. 24 (3), 279-283 (2009).</li>
<li>Kim, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+changes+in+resting-state+brain+activity+in+a+capsular+infarct+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Longitudinal changes in resting-state brain activity in a capsular infarct model.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 35 (1), 11-119 (2014).</li>
<li>Blasi, F., Whalen, M. J., Ayata, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lasting+pure-motor+deficits+after+focal+posterior+internal+capsule+white-matter+infarcts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Lasting pure-motor deficits after focal posterior internal capsule white-matter infarcts in rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 35 (6), 977-984 (2015).</li>
<li>Metz, G. A., Antonow-Schlorke, I., Witte, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+improvements+after+focal+cortical+ischemia+in+adult+rats+are+mediated+by+compensatory+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Motor improvements after focal cortical ischemia in adult rats are mediated by compensatory mechanisms.</a> Behavioural brain research. 162 (1), 71-82 (2005).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada sunulan kapsül infarkt modeli ön ayakları işlevlerinde belirgin ve kalıcı motor yetersizliği ile hedeflenen lezyona göstermektedir. Subkortikal kapsül inme Önceki Modeller motor bozukluk ve hızlı bir iyileşme süreci 6,8,9 yetersiz derecede göstermiştir. Bu anlamda, bu model uzun dönem fonksiyonel bozukluğu sergileyen klinik kapsül infarkt olgusu benzer. Bir sınırlı kapsül enfarktüs modelinin geliştirilmesi en kritik adımlar şunlardır: 1) doğru internal kapsül içinde işlevin...

Yakın zamana kadar, &quot;gri madde inme (GMS) modeller&quot; münhasıran inme patofizyolojisi anlamak ve yeni tedavilerin geliştirilmesine rehberlik etmek için kullanılmıştır. Tüm inmelerin 1,2% 25&#39;ini - Ancak, 15 oluşturan yaşlı bireylerde, subkortikal beyaz cevher etkileyen inme giderek artan yaygınlık olmuştur. Çeşitli çalışmalar beyaz cevher inme (WMS) modelleri kullandık az sayıda çalışma vardır oysa GMS modellerini kullanarak ilgili inme yapılmıştır. kemirgenlerde beyaz cevher insan veya primatlarda beyaz cevher daha azdır. Sonuç olarak, seçici bir şekilde beyaz bir madde 3 hedef bölge ulaşmak ve yok etmek için daha zordur. Ayrıca, hiçbir etkin araçları seçici hedeflenen beyaz cevher planlanan ölçüde yok etmek için bugüne kadar geliştirilmiştir. Bu nedenle, beyaz madde vuruş çalışma için uygun modellerin eksikliği vardır. hayvan stRoke modelleri genellikle yeni iyileştirici ve tedavi yöntemlerinin geliştirilmesi için motor iyileşme ilerlemesini izlemek için kullanılır. İnsan inme 4,5 gösterdiği anatomik değişiklikler ile uyumlu uzun vadeli nörolojik açığı sergileyen bir hayvan modeli kullanmak için idealdir. Bu bağlamda, motorlu açığı ve beyin aşağıdaki enfarktüs lezyon geniş katılımı hızlı iyileşme inme araştırma peşinde gerçekçi olmayabilir. Önceki kapsül infarkt modelleri internal kapsül 6-9 içine endotelin-1 (ET-1) internal karotid veya anterior koroidal arterler ve difüzyon tıkanması ile yapılmıştır. Bununla birlikte, arter tıkanıklığı arterlerin dikkatli diseksiyon gerektirir, ancak kalıcı davranış açıkları olmadan, internal kapsül dahil enfarktüs lezyonun geniş bir alanı üretir. Ayrıca, ET-1 tamamen internal kapsül posterior bacağı yok etmek dağınık ve dolayısıyla daha az belirgin veya beh kalıcı değildiavioral açığı. Bir Fototrombotik enfarktüs modeli genel olarak korteks infarkt lezyonlarında ve subkortikal yapılar 10 çeşitli oluşturmak için kullanılmıştır. Teknik enfarktüs lezyonlar 10 trombosit küçük damarlarda toplama ve oluşumuna yol açan odak aydınlatma, ardından intravenöz uygulamayı içermektedir. Nadiren WMS lezyonlar 5,11 oluşturmak için kullanılır olmuştur oysa FOTOTROMBOTİK teknik yaygın, GMS lezyonlar oluşturmak için kullanılır olmuştur. Bu teknik için, Rose Bengal, boya ve hafif ışınlama bir kombinasyonu işlev bozukluklarını mukabil yol hedef yapının yok yararlı olduğu gösterilmiştir. o enfarktüs lezyonların boyutunu belirler çünkü Fototrombotik tekniğin kilit unsur, ışık ışınlama olduğunu. gri madde ve beyaz madde üzerinde farklı etkileri ışık ışınlama sonuçları, ışık saçılması beyaz ma fazla 4 kat daha fazladır çünkügri madde 12 ile karşılaştırıldığında tter; Işık yoğunluğu, yeterince düşük bir ışık etkisi (&lt;1.140 mW / mm2) Buna göre, eğer bir Fototrombotik lezyondan beyaz bir madde ölçüde etkilediği olan uzatma sınırı (yani. Iç kapsül). Örneğin, yüksek enerji ışık hem gri hem de beyaz cevher infarktları uyarabilir, henüz düşük enerji ışığı sadece beyaz cevher Fototromboz neden olabilir. Bundan başka, ışık enerjisi penetrasyon çok sınırlıydı. Işık enerjisinin yaklaşık% 99 ışık 13 kaynağından 1 mm ötesinde kayboldu. Bu nedenle, doğru hedef olması beklenmektedir, düşük enerji ışık sadece komşu gri cevher az tecavüz beyaz cevherde Fototromboz neden olur. Burada, kemirgenler, iç kapsülün ön ayakları alanında infarkt lezyonlar oluşturmak için yeni bir metot açıklamaktadır. Biz iç ca ön ayakları alanının belirlenmesi yöntemi tarifpsule, uyum ve ışık teslimat ve bir enfarktüs lezyonun nesil de dahil olmak üzere ışık ışınlama, teknoloji. Biz de kapsül modelleme tamlığını değerlendirmek için kullanılan davranışsal test açıklar.

<table><tbody><tr><td>DC Sıcaklık kontrolörü</td><td>WORLD PRECISION INSTRUMENTS, INC.</td><td></td><td></td>ATC1000</tr><tr><td>Dijital Stereotaksik Aletler</td><td>STOELTING CO.</td><td>51900</td><td></td></tr><tr><td>Elektrik Stimülatörü</td><td>CyberMedic Corp.</td><td>EMGFES 2000</td><td></td></tr><tr><td>Epoksi&nbsp;</td><td>Hassas Elyaf Ürünleri, INC.</td><td>PFP-353ND1</td><td>Karışım Oranı: 10 (A): 1 (B-sertleştirici) ağırlıkça&nbsp; Kürleme Programı: 1 dk @150 &derece; C 2 ~ 5 dk @120 &derece; C 5 ~ 10 dk @100 &derece; C 15 ~ 30 dk @80 &derece; C</td></tr><tr><td>Fiber Optik Yazıcı&nbsp;</td><td>THORLABS, INC</td><td>S90R</td><td></td></tr><tr><td>Fiber patch kablo</td><td>KORE OPTRON Corp.</td><td></td><td>Dış çap: 3 mm & Oslash; 200 ve mikro; m 0.39 NA FC/PC-FC/PC 1 m</td></tr><tr><td>Lazer Güç Kaynağı</td><td>CHANGCHUN YENİ ENDÜSTRİLER OPTOELEKTRONİK TEKNOLOJİSİ CO., LTD.</td><td>MGL-FN-532nm-200mW-14010196</td><td></td></tr><tr><td>Sıkma halkası ve nbsp;</td><td>DAWOOTECH CO., LTD.</td><td></td><td>Uzunluk: 19 mm İç çap: 3 mm Dış çap: 3,8 mm Malzeme: SUS</td></tr><tr><td>Micro4-mikro şırınga pompası kontrolörü</td><td>WORLD PRECISION INSTRUMENTS, INC</td><td>95100</td><td></td></tr><tr><td>Optik Güç Ölçer</td><td>THOLABS, INC</td><td>PM100D</td><td></td></tr><tr><td>Elmas alıştırma (parlatma) levhası</td><td>THORLABS, INC</td><td>LF3D</td><td>Kum: 3 ve mikro; m</td></tr><tr><td>Elmas alıştırma (parlatma) levhası</td><td>THORLABS, INC</td><td>LF6D</td><td>Grit: 6 & m</td></tr><tr><td>Gül Bengal</td><td>SIGMA-ALDRICH CO., LLC.</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>Kalem uçlu spinal anestezi iğnesi (Spinal iğne)&nbsp;</td><td>B.BRAUN MELSUNGEN AG&nbsp;</td><td>4502027</td><td>Boyut: 27 G Uzunluk: 88 mm İğne: 0,40 mm</td></tr><tr><td>Su geçirmez zımpara kağıdı&nbsp;</td><td>DEERFOS CO., LTD</td><td>CC261</td><td>Kum: 1.000 ve mikro; m</td></tr><tr><td>Nanofil 10&nbsp; &mikro; l şırınga</td><td>DÜNYA HASSAS ALETLER, INC</td><td>NANOFIL</td><td></td></tr><tr><td>Nanofil 33 & nbsp; G BVLD iğnesi</td><td>WORLD PRECISION INSTRUMENTS, INC</td><td>NF33BV-2</td><td></td></tr><tr><td>AAV-GFP virüsü</td><td>UNC Vektör Çekirdeği</td><td>AAV2-CamKIIa-eYFP</td><td>2 x 1012 virüs molekülleri/ml</td></tr><tr><td>Anti-Yeşil Floresan Protein, Tavşan IgG fraksiyonu</td><td>Life Technologies, INC</td><td>A11122</td><td>birincil antikoru (1:200)</td></tr><tr><td>Keçi Anti-Tavşan IgG (H + L)</td><td>Life Technologies, INC</td><td>A11034</td><td>ikincil antikor (1:500)</td></tr><tr><td>Ceftezole</td><td>GUJU Pharma CO.,LTD.</td><td>A27802741</td><td>% 0.1, 1 ml</td></tr><tr><td>Lidokain hidroklorür enjeksiyonu</td><td>JEIL PHARMACEUTICAL CO., LTD.</td><td>A04900271</td><td>%2, 1 ml</td></tr><tr><td>El Aleti Matkap</td><td>Seshin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dijital optik güç ve enerji ölçer</td><td>THORLABS, INC</td><td>PM100D</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>UNIBIOTech</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir fototrombotİk tekniği sınırlı kapsül enfarktüs modelleme

Circumscribed Capsular Infarct Modeling Using a Photothrombotic Technique

Beyaz cevher inme prevalansındaki son artış, bu alanda özel araştırmalar yapılmasını gerektirmektedir. Bununla birlikte, beyaz cevher inmesi için uygun bir hayvan modelinin olmaması, araştırma araştırmalarını engellemiştir. Burada, komşu gri madde yapılarına verilen zararı en aza indiren sınırlı bir kapsül enfarktüsü oluşturmak için yeni bir yöntem açıklıyoruz. İç kapsül içindeki ön ekstremite alanının somatotopik organizasyonunu belirlemek için adeno ilişkili virüs-yeşil floresan proteini (AAV-GFP) ile ameliyat öncesi nöral izleme kullandık. Gri ve beyaz maddenin farklı optik özelliklerine dayalı olarak ışık yoğunluğunun ayarlanması, gri maddenin nispi korunması ile beyaz maddenin seçici olarak yok edilmesine katkıda bulunur. Optik-nöral arayüzün doğru konumlandırılması, iç kapsüldeki tüm ön ayak alanının tahrip edilmesini sağlar, bu da belirgin ve kalıcı bir motor açığa yol açar. Bu nedenle, bu teknik, kalıcı bir motor defisit ile yüksek oranda tekrarlanabilir kapsüler enfarktüs lezyonları üretir. Model, yalnızca davranışsal, devre ve hücresel düzeylerde beyaz cevher inmesini (WMS) incelemek için değil, aynı zamanda yeni terapötik ve rehabilite edici müdahalelerin geliştirilmesi için kullanışlılığını değerlendirmek için de yardımcı olacaktır.

Burada sunulan yöntem kalıcı bir motorlu açığı olan bir sınırlı kapsül infarktı oluşturmak için tasarlanmıştır. Nedenle, doğru bir şekilde, operasyon öncesi aşamada, iç kapsül içinde hedef belirlemek için önemlidir. internal kapsül piramidal liflerin somatotopik haritalama bugüne kadar yerleşmiş edilmemiştir. Doğru iç kapsül içinde hedef belirlemek için, ön ayakları alanı tasvir edilmelidir. Motor korteks ön ayakları alanına AAV-GFP bir enjeksiyon, iç kapsül (Şekil 1) pi...

Bu el yazması kapsül enfarktüs bir modelleme tekniği anlatılmaktadır. Burada ön ameliyat hedef haritalama sonra ışık düşük yoğunluğu ile modifiye Fototrombotik tekniği kullanılmıştır. Bu tekniği kullanarak, biz kalıcı motorlu bozukluğu olan bir sınırlı kapsül infarkt modeli yarattı.

Bir FOTOTROMBOTİK Tekniği sınırlı Kapsül Enfarktüs Modelleme

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for ...

Bu tekniğin genel amacı, fototrombotik yöntem kullanarak kalıcı motor bozukluğun olduğu, sınırlanmış bir kapsüler enfarkt modeli oluşturmaktır. Kapsüler enfarktı oluşturmadan önce, motor korteksin ön kol bölgesine GFP eksprese eden bir adeno-ilişkili virüs verilerek internal kapsüldeki ön kol alanının belirlenmesi gerekir. İşleme, anestezi uygulanmış bir sıçanı stereotaksik çerçeveye yerleştirerek başlayın.Ardından sıçanın kafasını tıraş edin ve saç derisini %70 alkol ve povidon iyot çözeltisi kullanarak sterilize edin. Operasyon sırasında oluşacak ağrıyı azaltmak için planlanan insizyon bölgesindeki saç derisinin altına %2 lidokain hidroklorür enjekte edin. Gözlerin kurumasını önlemek için oftalmik pomad uygulayın.Ardından hayvanın üzerine steril bir örtü serin. Kafa derisinde iki santimetrelik bir orta hat insizyonu yaptıktan sonra, stereotaksik koordinatlara göre motor korteksin ön kol bölgesini belirlemek için stereotaksik kolu konumlandırın. Bu konumda bir giriş deliği açın.İğneyi açılan deliğe getirin ve iğneyi dura boyunca bir milimetre aşağıya, motor korteksin içine doğru indirin. Bir mikrolitre virüsü yavaşça enjekte etmek için yüksek hassasiyetli bir mikropump kullanın. İ

circumscribed-capsular-infarct-modeling-using-photothrombotic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, ışığa duyarlı boya uygulandıktan sonra sağlam bir kafatasının lazerle aydınlatılmasıyla bir fare modelinde fototrombotik vuruş oluşturma prosedürünü göstermektedir.

Fare Modelinde Fototrombotik İnmenin Modellenmesi: Fototrombozu İndüklemek İçin Işığa Duyarlı Boya Uygulamasını Takiben Fare Kafatasından Bir Lazer Aydınlatma Tekniği

Fototromboz son derece tekrarlanabilir bir şekilde ilgi alanları küçük ve iyi ayrılmış enfarktüsü uyaran için hızlı, minimal invaziv bir tekniktir. Bu transgenik farelerde beyin plastisitesi oluşturan hücresel ve moleküler okuyan cevapları için özellikle uygundur.

Photothrombotic İskemi: Fare İnme Araştırmalar bir Minimal İnvaziv ve tekrarlanabilir fotokimyasal Kortikal Lezyon Model

Burada, in vivo olarak bir farenin somatosensoriyel korteksinde bir Rose Bengal fototrombotik pıhtısının indüksiyonu için yarı invaziv bir optik mikroskopi yaklaşımını açıklıyoruz.  Görüntüleme prosedürünün teknik yönleri, fototrombotik bir olayın indüksiyonundan uygulama ve veri toplamaya kadar açıklanmaktadır.

Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz<em&gt; In Vivo</em&gt;: Tek Gemi İnme Bir Model

Fototromboz, omurilikte fokal iskemiyi indüklemek için minimal invaziv ve yüksek oranda tekrarlanabilir bir prosedürdür ve farelerde omurilik yaralanması modeli olarak hizmet eder.

Farelerde Omurilik Yaralanma Modeli Olarak Odak iskemisi Fototromboz kaynaklı

Bu protokol serebral emboli görselleştirmek için kombine yakın kızılötesi floresan (NIRF) görüntüleme ve mikro-bilgisayarlı tomografi (mikroBT) uygulanmasını açıklar. Bu teknik trombüs yükü ve evrim ölçümü sağlar. MikroBT'lerin tekniği altın nanopartiküller kullanarak canlı hayvan içinde trombüs görüntüler ise NIRF görüntüleme tekniği floresan, eksize beyinde trombüs etiketli görselleştirir.

Doğrudan Serebral emboli görselleştirme için Kombine Yakın kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro bilgisayarlı Tomografi

İnme, minimal tedavi seçenekleri olan ve kaybedilen beyin dokusunu yenilemek için mevcut klinik tedavinin olmadığı küresel bir sorundur. Burada kemirgenlerin motor korteksinde hassas fototropotik inme oluşturma yöntemlerini ve daha sonra inmeden sonra doku yenilenmesi üzerindeki etkilerini incelemek için hidrojel biyomalzemelerin enjeksiyonunu açıklıyoruz.

İnme Sonrası Beyne Hidrojel Biyomalzeme İskelelerinin Enjeksiyonu

Geleneksel fototrombotik inme (PTS) modelleri esas olarak doku plazminojen aktivatörü (tPA) litik tedavisine karşı yüksek dirençli yoğun trombosit agregatlarını indükler. Burada, fotoaktivasyon için trombin ve ışığa duyarlı boyanın birlikte enjekte edilmesiyle modifiye edilmiş bir murin PTS modeli tanıtıldı. Trombin ile zenginleştirilmiş PTS modeli, karışık trombosit:fibrin pıhtıları üretir ve tPA-trombolizine karşı oldukça hassastır.

Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı fototrombotik inme modeli

Burada açıklanan fototrombotik inme modeli, bir inmenin, ışığa duyarlı bir boyanın kullanılmasından sonra lazer aydınlatma kullanılarak kalıcı mikrovasküler tıkanıklık indüklenerek sağlam kafatasından üretildiği yerdir.

Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar

Tamamen optik bir yaklaşım kullanılarak, uyanık, davranan bir farenin ortaya çıkan inme çekirdeğinde ortaya çıkan bir floresan biyosensör kullanılarak nöronalCa2+ aktivitesi aynı anda kaydedilirken iskemik inme indüklenir.

Davranan farelerde iskemik inmeyi indüklemek ve izlemek için eşzamanlı fototromboz ve lif fotometrisi

Bu protokol, viral teslimat, optrod implantasyonu, fototrombotik indüksiyon, astrosit ve nöron aktivitesinin eşzamanlı kaydı ve astrositlerin optogenetik uyarılmasını içeren entegre bir yöntem sağlar. Bu entegre yöntem, iskemik incinin akut ve kronik evreleri arasında astrosit-nöron ilişkisinin eşzamanlı incelenmesini sağlamayı amaçlamaktadır.

Fototrombotik İnme Modelleme ve Davranış Eden Farelerde Nöronal ve Astrositik Aktivitenin In Vivo Optrode Kaydı İçin Entegre Bir Yöntem

Keşfedin fototrombotik teknik kullanarak sınırlı kapsül enfarktüs modelleme yöntemini. Bu yöntem, sıçanlarda kalıcı motor bozukluk oluşturarak nörolojik araştırmalarda kullanılabilir.

Bir FOTOTROMBOTİK Tekniği sınırlı Kapsül Enfarktüs Modelleme

Daha fazla video keşfet