Name: Manyetik Alan (GMF) ve Bitki Gelişimi: GMF İptalleri Etkileri üzerine Araştırılması Arabidopsis thaliana Geliştirme ve Gen İfadesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-30T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 4 s
Description: Keşfedin manyetik alan tersine çevirme yöntemini Arabidopsis thaliana gelişimi ve gen ifadesi üzerindeki etkilerini incelemek için. Helmholtz bobinleri kullanarak bitki morfolojisindeki değişiklikleri ve evrimsel adaptasyonları araştırın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, İtalya'daki Torino Üniversitesi Yaşam Bilimleri ve Sistem Biyolojisi Bölümü'nden MEM'e verilen bir hibe ile desteklenmiştir. Yazarlar, bazı deneyler sırasında teknik yardım için G. Gnavi'ye teşekkür eder. TO, Wellcome Trust ve Royal Society tarafından finanse edilmektedir (Hibe Numarası 098436/Z/12/Z).

Üç Eksenli Rulo 1. Ayar NOT: Şekil 1 GMF ters kullanılan üç eksenli bobinler gösterir. <ol><li> Kimin sonda üç eksenli bobinler eklenir üç eksenli manyetometre, açın. </li><li> Veri üç eksenli magnetometer toplanan sağlar magnetometre yazılım bilgisayarınızı açın ve başlatın. </li><li> GMF büyüklüğünü hesaplamak için manyetometresi tarafından bildirilen bileşen değerleri kullanın. Manyetometre değerleri ile Mesela,: Bx = 6,39 μT, tarafından = 36,08 μT, Bz = 20,40 μT aşağıdaki eşitlik kullanılarak 41,94 μT bir alan gücünü hesaplar: A, B = B GMF + B ek burada B, ek = (Bx 2 + 2 + Bz 2) tarafından ½ (yani, örneğin 41.9 μT). </li><li> Üç DC güç kaynakları (dual aralığı: 0-8V / 5A ve 0-20V / 2.5A, 50W) çevirin üç coupl bağlı her biriHelmholtz bobinleri es ve bir GPIB bağlantısı (Şekil 1B) üzerinden bir bilgisayara bağlı. </li><li> Güç kaynakları kümesi gerilimler ters bir manyetik alan vektörü ile istenen manyetik alan üretir. Yeni bir bileşke B üretmek amacıyla, örneğin, adım 1.3 ve burada açıklanan enstrümantasyon bobin boyutu ile gibi B GMF ile V. voltaj set x = 0,00 V, V y = 30.52 V, V z = 0.00 V = B + B GMF üç eksenli bobinleri = (6.38, -36,08, 20.39) μT. yani aynı B GMF olarak büyüklüğü, ancak farklı bir yöne işaret ile yeni bir alan. </li><li> 1.3 anlatılan prosedürü kullanarak magnetometre yazılımı ile yeni bir alan doğrulayın. </li><li> Hem normal bitkileri Açığa ve bölüm 2&#39;de tarif edildiği gibi Petri plakaları kullanılarak GMF koşulları ters. </li><li> Eşit alanın büyüklüğünü tutarak sahte maruziyet deneyler | B GMF | ve tutmaGMF o ama eşit alanın düşey bileşeni alanı ters durumuna göre üç eksenli bobinler eşit akımlarla alan yatay bileşeni yönünü (yani, &quot;Kuzey, Doğu ya da Batı&quot;) değiştirilmesi. 1.5 açıklandığı gibi bobinlerin gerilim değiştirerek bunu yapın. Not: Bu sahte poz potansiyel ince ısıtma veya iki bobinler titreşim etkilerini kendileri veya bobinleri kontrol etmek için kullanılan elektronik dışarı yönetir. </li><li> Veri deneyler kalanını gerçekleştirmek ve / veya sözlü personelinden kör alan koşulları uygulayarak çift kör deneyler çalıştırın. </li></ol> Bitki Materyalleri ve Bitki Büyüme Şartlar 2. Hazırlık <ol><li> Arabidopsis thaliana&#39;nın tohumları kullanarak, ekotip Columbia 0 (Col 0), bir 1.5 ml tüp içine daha sonra yer ve yüzey, bir% 5 ile işlenerek sterilize edin (ağırlık / hacim), kalsiyum hipoklorit çözeltisi ve% 0.02 (hac / hac) Triton X-Sürekli çalkalanarak 25-28 ° C&#39;de 10-12 dakika boyunca% 80 etanol (EtOH), 100. Daha sonra% 100 EtOH ile yıkayın,% 80 EtOH ile iki kez yıkayın ve son olarak da steril damıtılmış su ile yıkayın. </li><li> Ekleyerek orta modifiye Murashige ve Skoog 22 (MS) 1 L hazırlayın: MS 2,297 g (0.5 x MS temel tuz karışımı), 10 g sükroz, 1 L, KOH ile ayarlanmış pH 5.8-6.0 kadar deiyonize su kadar. 20 dakikada, 120 ° C, agar ve otoklav 16 g ekleyin. </li><li> Katılaşma önce, her (120 x 120 mm 2) kare Petri kapları içine orta 80 ml ​​dökün. Mumsu film ile plakaları mühür sonra plaka üzerinde otuz steril tohumlarını ekmeye ve. </li><li> Hızlandırabilir ve çimlenme senkronize ve sonra ya normal Petri plakaları maruz veya GMF ters 2 gün boyunca 4 ° C&#39;de karanlıkta yatay plakaları Vernalize. </li><li> Üç eksenli bobin içinde ve üç eksenli bobin dışındaki paralel deneylerde dikey konumda 22 ° C&#39;da bir iklim kontrollü bir ortamda tohumları açığaSodyum buharlı lambalar kullanılarak 8 saat karanlık ve 16 saat ışık fotoperiyod takvimi altında (220 x 10 -6 E m -2 s -1). Lambaların kırmızı bileşeni azaltmak için spot için mavi jelatin filmi kullanın. </li><li> Normal (kontrol) hem RNA ekstraksiyon ve ters (tedavi) GMF koşulları önce 10 gün süreyle bitki Açığa. </li><li> Maruz kaldıktan sonra, Petri fotoğraflarını çekmek. </li><li> Kök uzunluğu ve yaprak alanlarını hesaplamak için ImageJ yazılımı kullanın. <ol><li> Kısaca, daha sonra Petri plaka ve tam plaka yan haçlar bir çizgi çizmek için &quot;düz&quot; çizgi seçeneğini kullanarak görüntüyü açmak, Petri plakasının tarafını ölçmek. </li><li> &quot;Analiz&quot; menüsünde &quot;set ölçek&quot; seçin ve &quot;bilinen mesafe&quot; kutusuna (örneğin, 120 mm), daha sonra uzunluğu (mm) birimini takın gerçek mesafeyi eklemek; nihayet tüm ölçümler için ayarları yapmak &quot;küresel&quot; seçeneğini tıklayın. </li><li> Roo içint uzunluğu, serbest aracını kullanarak dikkatlice kök şeklini izleyin. &quot;Analiz&quot; menüsünden &quot;ölçü&quot; seçeneğini kullanarak uzunluğunu ölçün. Resimde tüm kökleri ölçmek ve ileri istatistiksel analizler için dosyayı kaydetmek için devam edin. </li><li> Yaprak alanı için, &quot;image&quot; menüsünden seçeneğini ve ardından &quot;renkli eşiği&quot; ayarlamak kullanın. Tek yaprak seçin ve &quot;analiz&quot; menüsünden &quot;parçacıklar analiz&quot; i seçin. Istatistiksel analizler için bireysel ölçümler kaydedin. </li></ol></li></ol> 3. Arabidopsis Toplam RNA Ekstraksiyon, Kantitatif Real Time PCR (qPCR) Reaksiyon Koşulları ve Arabidopsis için astarlar <ol><li> Ayrı ayrı 30 sürgünler ve 30 kökleri toplayın ve hemen sıvı nitrojen içinde dondurarak. Daha sonra havanda sıvı azot içinde öğütün. </li><li> Üretici kullanarak bir saflaştırma seti ve RNase-barındırmayan DNase işleme kiti kullanılarak toplam RNA izole edilirer talimatları. </li><li> Üreticinin talimatlarına uygun olarak bir RNA nano kiti ve kapiler jel elektroforezi kullanarak örnek kalitesini ve miktarını kontrol edin. Spektrofotometrik RNA ölçümü onaylayın. </li><li> Toplam RNA, üreticinin tavsiyelerine uygun olarak, birinci kol cDNA&#39;ları elde etmek için bir cDNA Ters Transkripsiyon Kit kullanılarak rastgele primerler 2 ug kullanın. </li><li> Bir iç yükleme standart olarak ROX ile SYBR yeşil I ile bir Real-Time Sisteminde tüm deneyler. </li><li> 2x SYBR Green qPCR Master Mix 12,5 ul cDNA 0,5 ul ve 100 nM primer oluşan karışımın 25 ul reaksiyon gerçekleştirin. Tablo 1&#39;de listelenen primerleri kullanarak. Kontrollerde (genomik DNA kontaminasyonu izlemek için ters transkripsiyon total RNA kullanılarak) non-RT kontrol ve şablon olmayan kontroller (yerine su şablonu) ekleyin. </li><li> Standart kullanan tüm primerler çifti astar verimi olarak hesaplanıreğri yöntemi 23. </li><li> CRU3, COTP1, RRTF1: Aşağıdaki PCR koşulları kullanarak. 95 ° C de 10 dakika, 95 ° C, 58 ° C &#39;de 30 saniye ve 72 ° C&#39;de 30 saniyede 15 saniye 40 döngü, UBP6, eEF1Balpha2, ACT1, GAPC2, CAT3 TAPX, APX1, RbohD, FeSOD1 10 en az 95 ° C &#39;de, 95 ° C, 57 ° C&#39; de 20 saniye ve 72 ° C&#39;de 30 saniyede 15 saniye 40 döngü. </li><li> Her tavlama ve uzatma fazında aşağıdaki floresan okuyunuz. Tüm koşular için, termal profilinde ayrışma segmenti dahil ederek 55 ° C 95 bir erime eğrisi analizi gerçekleştirmek. Ayrışma profili (sıcaklığın bir fonksiyonu olarak floresan arsa) görmek için sonuç sekmesi aracılığıyla erişilen ayrışma eğrisi ekranını kullanın. Deney ayrışma kesimi sırasında toplanan veri kümesi Analiz / Kurulum ekranını kullanarak analiz için seçili olduğundan emin olun. </li><li> L belirleyinÜç kez tekrarlanmış, teknik 24,25 analiz üç bağımsız RNA ekstraksiyonlardan cDNA kullanılarak on kat inceltilmiş serileri (1-kat 3 ile 10 arasında) gerçekleştirerek eşik döngüsü değeri (Ct değeri) şablon konsantrasyonunun linear aralığı. </li><li> Ct değerlerini elde etmek için Real-Time PCR cihazı yazılımı ile tüm amplifikasyon araziler analiz edin. Kalibre ve aşağıdaki gibi en iyi temizlik genlerin düzeyi ile göreli RNA düzeylerini normalleştirmek: 3.11.1) Sonuçları sekmesinden Arsalar ekranında Amplifikasyon yapın, veri analizi Seçimi / Kurulum ekranını kullanarak analiz edilmelidir hangi rampa veya plato seçin ve sonra komut panelinde Floresan menüden DRN (taban düzeltilmiş normalize floresan) seçin. Örneklenmiş kuyuları için Ct değerleri görüntülemek için Sonuçlar sekmesinden örnek Değerleri ekranı Plate erişin. </li><li> Dört farklı referans genleri için [örneğin, sitoplazmik gliseraldehid-3-fosfat dehidrojenaz, (GAPC2), ubikitin specific proteaz 6 (UBP6), Actin1 (ACT1) ve uzama faktörü 1B alfa-alt birimi 2 (eEF1Balpha2)] gerçek zamanlı PCR sonuçları normalleştirmek için. Bir analiz yazılımı 26 kullanılarak gen sırada üst seçiniz; ve normalleşmesi için en stabil gen kullanın. <ol><li> Kısaca, örnek adlarını içeren gen isimleri ve ilk satırı içeren birinci sütun ile bir Excel sayfasında girdi verileri düzenlemek. Sonra menü çubuğundan analiz yazılımı seçin. Giriş verileri seçmek için iletişim kutusunu kullanın. </li><li> Sonra, alanları örnek isimler, gen adlarını ve basit çıktı sadece kontrol ediniz. Analizi gerçekleştirmek için Git düğmesine tıklayın. En stabil dile aday gen olarak (küçük stabilite değerine sahip olan) üst sıradaki geni seçin. </li></ol></li><li> Sürgünler ve kökler hem de farklı kat değişimi ifadesini göstererek arsa verileri. </li></ol> 4. Statistik analizler <ol><li> Standart hata ± ortalama değerler olarak verileri ifade eder. Co karşılaştırınntrol ve varyans (ANOVA) ve Bonferroni ve Dunn-Sidak Düzeltilmiş Olasılık testi (% 0.95 güven) ile Tukey testi analizi yaparak tedavi grupları. </li></ol>

<ol><li>Maffei, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+field+effects+on+plant+growth%2C+development%2C+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Magnetic field effects on plant growth, development, and evolution.</a> Front. Plant Sci. 5, (2014).</li>
<li>Occhipinti, A., De Santis, A., Maffei, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetoreception%3A+an+unavoidable+step+for+plant+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Magnetoreception: an unavoidable step for plant evolution.</a> Trends Plant Sci. 19 (1), 1-4 (2014).</li>
<li>Harris, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+magnetic+fields+on+cryptochrome-dependent+responses+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Royal+Soc.+Interf%22%5BJournal%5D)">Effect of magnetic fields on cryptochrome-dependent responses in Arabidopsis thaliana.</a> J. Royal Soc. Interf. 6 (41), 1193-1205 (2009).</li>
<li>Phirke, P. S., Kubde, A. B., Umbarkar, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+magnetic+field+on+plant+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Seed+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">The influence of magnetic field on plant growth.</a> Seed Sci. Technol. 24 (2), 375-392 (1996).</li>
<li>Abe, K., Fujii, N., Mogi, I., Motokawa, M., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+high+magnetic+field+on+plant%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Sci.+Space%22%5BJournal%5D)">Effect of a high magnetic field on plant.</a> Biol. Sci. Space. 11, 240-247 (1997).</li>
<li>Volpe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+zero-frequency+and+oscillating+magnetic+fields+with+biostructures+and+biosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem.+Photobiol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Interactions of zero-frequency and oscillating magnetic fields with biostructures and biosystems.</a> Photochem. Photobiol. Sci. 2 (6), 637-648 (2003).</li>
<li>Belyavskaya, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+effects+due+to+weak+magnetic+field+on+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Space.+Res%22%5BJournal%5D)">Biological effects due to weak magnetic field on plants.</a> Adv. Space. Res. 34 (7), 1566-1574 (2004).</li>
<li>Weber Bittl, R., S, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+radical+pairs+studied+by+time-resolved+EPR%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta-+Bioenerg%22%5BJournal%5D)">Transient radical pairs studied by time-resolved EPR.</a> Biochim. Biophys. Acta- Bioenerg. 1707 (1), 117-126 (2005).</li>
<li>Pazur Galland, P., A, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetoreception+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Plant+Res%22%5BJournal%5D)">Magnetoreception in plants.</a> J. Plant Res. 118 (6), 371-389 (2005).</li>
<li>Minorsky, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+geomagnetic+variations+affect+plant+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Atm.+Solar-Terrestr.+Phys%22%5BJournal%5D)">Do geomagnetic variations affect plant function.</a> J. Atm. Solar-Terrestr. Phys. 69 (14), 1770-1774 (2007).</li>
<li>Burda Vanderstraeten, J., H, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+magnetoreception+mediate+biological+effects+of+power-frequency+magnetic+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Tot.+Environ%22%5BJournal%5D)">Does magnetoreception mediate biological effects of power-frequency magnetic fields.</a> Sci. Tot. Environ. 417, 299-304 (2012).</li>
<li>Job, C., Rajjou, L., Lovigny, Y., Belghazi, M., Job, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+protein+oxidation+in+Arabidopsis+seeds+and+during+germination%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Patterns of protein oxidation in Arabidopsis seeds and during germination.</a> Plant Physiol. 138 (2), 790-802 (2005).</li>
<li>Wan, L. L., Ross, A. R. S., Yang, J. Y., Hegedus, D. D., Kermode, A. R. Phosphorylation of the 12 S globulin cruciferin in wild-type and abi1-1 mutant Arabidopsis thaliana (thalecress) seeds.. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWan%2C+LL+%22Biochem+J%22">Biochem J</a>. 404, 247-256 (2007).</li>
<li>Sancenon, V., Puig, S., Mira, H., Thiele, D. J., Penarrubia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+copper+transporter+family+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a copper transporter family in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Mol. Biol. 51 (4), 577-587 (2003).</li>
<li>Foyer, C. H., Karpinska, B., Krupinska, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functions+of+Whirly1+and+Redox-Responsive+Transcription+Factor+1+in+cross+tolerance+responses+in+plants%3A+A+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.Trans.Royal+Soc.B-Biol.Sci%22%5BJournal%5D)">The functions of Whirly1 and Redox-Responsive Transcription Factor 1 in cross tolerance responses in plants: A hypothesis.</a> Philos.Trans.Royal Soc.B-Biol.Sci. 369 (1640), 20130226(2014).</li>
<li>Myouga, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+heterocomplex+of+iron+superoxide+dismutases+defends+chloroplast+nucleoids+against+oxidative+stress+and+is+essential+for+chloroplast+development+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">A heterocomplex of iron superoxide dismutases defends chloroplast nucleoids against oxidative stress and is essential for chloroplast development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 20 (11), 3148-3162 (2008).</li>
<li>Mhamdi, A., Queval, G., Chaouch, S., Vanderauwera, S., Van Breusegem, F., Noctor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catalase+function+in+plants%3A+a+focus+on+Arabidopsis+mutants+as+stress-mimic+models%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exper.+Bot%22%5BJournal%5D)">Catalase function in plants: a focus on Arabidopsis mutants as stress-mimic models.</a> J. Exper. Bot. 61 (15), 4197-4220 (2010).</li>
<li>Bassham Contento, A. L., C, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+catalase-3+activity+as+a+response+to+use+of+alternative+catabolic+substrates+during+sucrose+starvation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Increase in catalase-3 activity as a response to use of alternative catabolic substrates during sucrose starvation.</a> Plant Physiol. Biochem. 48 (4), 232-238 (2010).</li>
<li>Kangasjarvi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+roles+for+chloroplast+stromal+and+thylakoid-bound+ascorbate+peroxidases+in+plant+stress+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+J%22%5BJournal%5D)">Diverse roles for chloroplast stromal and thylakoid-bound ascorbate peroxidases in plant stress responses.</a> Biochem. J. 412, 275-285 (2008).</li>
<li>Begara-Morales, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+regulation+of+cytosolic+ascorbate+peroxidase+%28APX%29+by+tyrosine+nitration+and+S-nitrosylation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exper.+Bot%22%5BJournal%5D)">Dual regulation of cytosolic ascorbate peroxidase (APX) by tyrosine nitration and S-nitrosylation.</a> J. Exper. Bot. 65 (2), 527-538 (2014).</li>
<li>Li, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AtrbohD+and+AtrbohF+negatively+regulate+lateral+root+development+by+changing+the+localized+accumulation+of+superoxide+in+primary+roots+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">AtrbohD and AtrbohF negatively regulate lateral root development by changing the localized accumulation of superoxide in primary roots of Arabidopsis.</a> Planta. 241 (3), 591-602 (2014).</li>
<li>Skoog Murashige, T., F, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revised+medium+for+rapid+growth+and+bioassays+with+tobacco+tissue+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Plant%22%5BJournal%5D)">A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures.</a> Physiol. Plant. 15, 473-497 (1962).</li>
<li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc.+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nuc. Acids Res. 29 (9), (2001).</li>
<li>Bustin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MIQE+Guidelines%3A+Minimum+Information+for+Publication+of+Quantitative+Real-Time+PCR+Experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments.</a> Clin. Chem. 55 (4), 611-622 (2009).</li>
<li>Phillips, M. A., D'Auria, J. C., Luck, K., Gershenzon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+candidate+reference+genes+for+real-time+quantitative+PCR+of+plant+samples+using+purified+cDNA+as+template%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol.+Biol.+Rep%22%5BJournal%5D)">Evaluation of candidate reference genes for real-time quantitative PCR of plant samples using purified cDNA as template.</a> Plant Mol. Biol. Rep. 27 (3), 407-416 (2009).</li>
<li>Andersen, C. L., Jensen, J. L., Orntoft, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+of+real-time+quantitative+reverse+transcription-PCR+data%3A+A+model-based+variance+estimation+approach+to+identify+genes+suited+for+normalization%2C+applied+to+bladder+and+colon+cancer+data+sets%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Normalization of real-time quantitative reverse transcription-PCR data: A model-based variance estimation approach to identify genes suited for normalization, applied to bladder and colon cancer data sets.</a> Cancer Res. 64 (15), 5245-5250 (2004).</li>
<li>Tsukaya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+genetics+of+leaf+morphogenesis+in+dicotyledonous+plants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Plant+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental genetics of leaf morphogenesis in dicotyledonous plants.</a> J. Plant Res. 108 (1092), 407-416 (1995).</li>
<li>Szymanowska-Pulka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+matters%3A+morphological+aspects+of+lateral+root+development%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Bot%22%5BJournal%5D)">Form matters: morphological aspects of lateral root development.</a> Ann. Bot. 112 (9), 1643-1654 (2013).</li>
<li>Black Bewley, J. D., Seeds, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBlack+Bewley%2C+JD+%22Physiology+of+development+and+germination%22">Physiology of development and germination</a>. , Plenum Press. New York. (1994).</li>
<li>Kato-Noguchi, H., Ota, K., Kujime, H., Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+momilactone+on+the+protein+expression+in+Arabidopsis+germination%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Biol.+Manage%22%5BJournal%5D)">Effects of momilactone on the protein expression in Arabidopsis germination.</a> Weed Biol. Manage. 13 (1), (2013).</li>
<li>Khandelwal, A., Elvitigala, T., Ghosh, B., Quatrano, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+transcriptome+reveals+control+circuits+regulating+redox+homeostasis+and+the+role+of+an+AP2+transcription+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis transcriptome reveals control circuits regulating redox homeostasis and the role of an AP2 transcription factor.</a> Plant Physiol. 148 (4), 2050-2058 (2008).</li>
<li>Haddad, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen-sensing+mechanisms+and+the+regulation+of+redox-responsive+transcription+factors+in+development+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Respirat.+Res%22%5BJournal%5D)">Oxygen-sensing mechanisms and the regulation of redox-responsive transcription factors in development and pathophysiology.</a> Respirat. Res. 3 (1), (2002).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz son zamanlarda inanılmaz bir korelasyon GMF ters ve ailesel Angiosperm soyları çoğunun derivasyon 2 oluştu zaman arasında var olduğunu gösterdi. Ancak, GMF ters kendisi bitki gen ifadesi ve morfoloji önemli değişiklikler neden olabilir uyarıcı hipotezler ve çeşitli GMF şiddetlerinde etkisi üzerine yapılan çalışmaların bolluğu, varsayım rağmen gösterilmiştir olmamıştı. Burada, ilk kez için, laboratuarda GMF tersine çevirmek için üç eksenli sekizgen Helmholtz bobini kullanan ve çevre manyetik alanın tersine fenotipik değişiklik ve bitkilerde gen ekspresyonunun modüle edilmesine neden olduğu bir yöntem göstermektedir. Bitki büyüme deneylerinde (2 x 2 x 2 m 3) için yeterli bir hacmi üzerinde GMF ters (veya değiştirilmesi) elde etmek için, biz sekizgen Helmholtz bobin sistemi kurdu. Bu sistem (genellikle Helmholtz bobinleri halka şeklinde ve daha küçük olan) ticari olarak mevcut değildirve inşaat maliyetleri önemli idi. Önemlisi, bu sistem değiştirilmiş manyetik alanlarda olağanüstü zaman istikrar ve homojenlik ile sağlam alan değişikliği sağlıyor. Sistem normal şartlarda bir binde GMF değerini azaltmak veya manyetik alanın üç boyutlu herhangi tersine tasarlanmış ve inşa edilmiştir. Ancak, ruloların tasarımı, yüksek bir manyetik alan gücünden oluşturmak için izin vermez. Bu nedenle, bu biçimde, bu cihaz ya da diğer organizmalar bitkiler yüksek manyetik alan gücü etkisini değerlendirmek için tasarlanmıştır deneyler için uygun değildir. Laboratuarda, bu yöntemde tarif edilenlere benzer GMF değiştirilmesi manyetik alan sapma ve metal kendi içinde onları konsantre yüksek manyetik geçirgenliğe sahip ferromanyetik metal levhalar, deneysel bölgeyi çevreleyen tarafından koruyucu dahil olmak üzere farklı yöntemlerle elde edilmiştir. ThHelmholtz bobinleri kullanılarak e avantajı, sistemin bu nedenle sadece in vitro çalışmalar için (Petri kaplarının kullanımı ile ilgili olarak) doğru değil, aynı zamanda yapım bitkiler daha doğal koşullar (ışık, hava dolaşımı, vs.) maruz kalmasına olanak sağlamasıdır in vivo bitki büyüme ve gelişme deneyler için. Sistemimizde boyutları, böylece birkaç Petri plakaları veya bazı küçük ev sahibi için izin (Şekil 1A bakınız) 25 x 25 x 25 cm3 küresel bir hacim boyunca doğal GMF &lt;1 / 1000. a kadar bastırma izin veren bir boşluk oluşturmak bitki büyümesi için tencere. Burada sunulan yöntem, bitki biyolojisi çalışmaları uygulanmıştır; Bununla birlikte, sistem viroloji, mikrobiyoloji içeren deney geniş bir yelpazede izin verir, hem de nematodlara (örneğin Caenorhabditis elegans), böcek ve (fareler ve sıçanlar da dahil olmak üzere), küçük hayvanlar üzerinde çalışmaları. Bu nedenle, hipotez testleri GMF bu ters yapabiliyormorfolojik ve transkripsiyonel değişiklikler de belki sonuçta hatta insan hücrelerine, diğer pek çok canlı sistemler için uzun olabilir ikna etmek. GMF sürekli değişen ve dalgalanıyor. Bu nedenle, deneylerde bir meydan okuma istenen yeni GMF değerlerini elde etmek için GMF sabit bir telafi sağlamaktır. Bu yalnızca manyetometre değerleri ve gerilim telafisi okunması üzerinden manyetik alan değerleri sürekli bir kontrolü ile elde edilebilir. Bu nedenle, sistem GMF yavaş yavaş değişen bir bölümünü telafi edebilirsiniz ama yüksek frekans dalgalanmaları için hiçbir şey yapmaz. Sonuç olarak, vektör GMF ters üç eksenli bobinlerinin kullanımı GMF vektörünün bu bitki ters morfolojik değişiklikler ve farklı gen ekspresyonunu başlatmak için mümkün olduğunu göstermek için etkili oldu. Sunulan yöntem ile elde edilen sonuçlar hipotezi GMF yeniden destekleyen bir zorlayıcı kanıtevrenselleri jeolojik zaman ölçekleri üzerinde 2 bitki gelişimi için itici güçlerden biri olabilirdi.

Dünya&#39;nın manyetik alanı (veya eşdeğer jeomanyetik alan, GMF) bitkiler de dahil olmak üzere gezegende yaşayan tüm canlılar için kaçınılmaz bir çevresel faktör olduğunu. GMF her zaman Dünya&#39;nın doğal özelliği olmuştur, bu yüzden evrim sırasında, bütün canlı organizmalar eylemini yaşadı. Kanıtlar giderek artan vücut GMF birçok biyolojik süreçleri 1 etkilemek mümkün olduğunu göstermektedir. GMF üniforma değildir ve Dünya&#39;nın yüzeyinde, büyüklüğü ve yönü önemli yerel farklılıklar vardır. Dünya&#39;nın yüzeyinde GMF az 30 μT neredeyse 70 μT arasında değişen, büyüklükleri geniş bir yelpazede gösterir. GMF magnetosphere 2 aracılığıyla yüklü parçacıkların çoğu saptırma ile güneş rüzgarının öldürücü etkilerinden Dünyayı ve biyosfer korur. Bitkiler çevresel uyaranlara cevap; ve ışık ve yerçekimi gibi abiyotik faktörlere klasik tepkiler t olmuşturhoroughly adlandırılan phototropic ve gravitropic yanıtları tanımlayarak tarif. Çok az ya da hiçbir şey bu konuda yayınlanmış ve son zamanlarda 1 yorum kağıtları bolluk rağmen, algı ve manyetik alanlar bitki yanıtların mekanizmaları üzerine bilinmektedir. Yerçekimi alanı aksine, GMF böylece son zamanlarda çeşitlendirilmesi ve türleşme 2 bitki katkıda sonunda potansiyel itici güç olarak kabul edilmiştir önemli bir stres faktörü temsil eden abiyotik bitki evrimi sırasında sürekli değişti. Jeomanyetik ters (veya geziler) GMF kutupluluğunda değişikliklerdir. Dünya&#39;nın yaşam tarihi boyunca, GMF ters birkaç kez oluştu. Bunlar her polarite geçişi sırasında azalmış GMF gücü dönemlere gezegeni maruz. Düşük GMF gücü bu geçişler dönemleri böylece bir uyarıcı, yeryüzüne ulaşması güneş rüzgardan iyonizan radyasyon izin olabileceğini Bazı yazarlar hipotez varevrimi 2 bitki lider sonunda gen değişiklikleri ikna etmek için yeterince güçlü olabilirdi canlı organizmalar için tutarlı stres. Bitkiler üzerinde manyetik alanların etkilerini anlatan deneylerin ayrıntılı bir analiz makul biyofizik etkileşim mekanizmalarının bir eksiklik ile karakterize çatışan raporlar, çok sayıda gösterir. Diğerleri sonuçta 3 inandırıcılıktan uzak olan, bir denenebilir hipotezini eksikliği ve süre birçok deney, sadece gerçekçi değildir. Son yıllarda, bitki manyetik alanların etkisi ilerleme ve araştırma statüsü 2,4-11 gözden geçirilmiştir. Son zamanlarda, hem düşük hem de yüksek manyetik alan etkisi iyice bitki evrimi 2 GMF ters olayların katılımı özel bir odaklanma ile, 1 tartışılmıştır. En doğrudan aracı GMF ters bitki evrimi bir GMF sentezlenmesi etkileyecek hipotezini kanıtlamak içinNormal ve ters manyetik alan koşullarına bitkilerin tepkisini test ederek laboratuvar ters. Hipotezi test etmek için, biz bu nedenle doğru, normal GMF koşulları tersine için güçlü bir üç eksenli sekizgen Helmholtz bobin-çiftleri manyetik alan kompanzasyon sistemi (üç eksenli bobinler), inşa. Biz bir model bitki olarak, Arabidopsis thaliana kullanılır ve bazı önemli genlerin gen ifadesi üzerinde ters GMF etkisi test edilmiştir: CRUCIFERIN 3 (CRU3), Trosin-fosforilat olan ve fosforilasyon durumu karşılık olarak modüle edilen bir 12S tohum depolama proteini kodlayan Arabidopsis thaliana tohumları 12,13 yılında ABA için; Toprak Cu edinimi ve polen gelişimi 14 baskın fonksiyonu ile bir ağır metal taşıma / detoksifikasyon süperailesi proteinini kodlayan Bakır Ulaşım Protein1 (COTP1); ve Redoks Responsive Transkripsiyon faktörüne 1 (RRTF1),Bu EAF (etilen tepki faktörü) alt familyası B-3 gen sentezleme yollarının sinerjistik eş aktivasyonunu kolaylaştırır ve abiyotik çapraz tolerans ve biyotik 15 gerilmeler bir AP2 alanını ihtiva EAF / AP2 transkripsiyon faktörü ailesinin bir üyesi kodlar. Ayrıca biz de oksidatif stres tepkileri ile bağlantılı olan beş genleri analiz: enzimatik ve hızlı bir süperoksit anyonu dönüştüren bir sitoplazmik enzimi kodlayan Fe Süperoksit Dismutase1 (FSD1), (O 2 -) ve su (H2O) hidrojen peroksit (H su ve oksijene 17,18 H nin parçalanmasını 2 O 2 katalize Catalase3 (diğer bir deyişle kodladığını CAT3) ve enzim,, 2 O 2) ve moleküler oksijen (O 2) 16 Thylakoidal askorbat peroksidaz (TAPX) bir kodlayan H 2 O scavenges kloroplastik tilakoit peroksidaz2 19, H2O 2 temizler ve NO türetilen moleküller 20 tarafından aracılık edilen translasyon sonrası modifikasyonların potansiyel hedefler birini temsil sitozolik peroksidazı kodlayan Askorbat Peroxidase1 (APX1); ve O 2 üreten bir enzimi kodlayan NADPH- Solunum patlama oksidaz protein D (RbohD) - ve Arabidopsis 21 büyüme, gelişme ve stres yanıtları düzenlenmesinde önemli rol oynar. Bizim alan ters metodolojisi GMF ters A. morfolojisi ve gen ifadesinde önemli bir değişiklik uyarabilir ilk kanıt sağlar thaliana kökler ve sürgünler. Bu protokol ro tartışma bitki morfolojisi ve gen ifadesi üzerinde GMF bozma etkisini değerlendirmek için ve bitki davranışının diğer yönlerini GMF bozma potansiyeli etkisini değerlendirmek için kullanılabilir ve böylece rehberlik yenilikçi bir yol sağlarBitki evrimi GMF bozma le.

<table><tbody><tr><td>Üç eksenli manyetometre</td><td>Bartington&nbsp;</td><td>Mag-03MC</td><td>üç eksenli fluxgate manyetometre</td></tr><tr><td>Manyetometre güç kaynağı</td><td>Bartington ve nbsp;</td><td>Mag-03PSU</td><td>üç eksenli fluxgate manyetometre</td></tr><tr><td>Manyetometre yazılımı</td><td>Bartington&nbsp;</td><td>Mag03DAM</td><td>üç eksenli fluxgate manyetometre</td></tr><tr><td>DC güç kaynağı&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>E3642A</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum hipoklorit&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>211389</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>X100&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Etanol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>2860</td><td></td></tr><tr><td>GroLux Sodyum buharlı lambalar&nbsp;</td><td>OSRAM Sylvania</td><td>600W</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Bitki RNA kiti&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>74903</td><td></td></tr><tr><td>RNaz İçermeyen DNase&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>Agilent 2100 Biyoanalizör</td><td>Agilent Technologies</td><td>G2938B</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000 ve nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>Yüksek Kapasiteli cDNA Ters Transkripsiyon Kiti&nbsp;</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4368813</td><td></td></tr><tr><td>Mx3000P</td><td>Agilent Technologies</td><td>401512</td><td></td></tr><tr><td>2x MaximaTM SYBR Green qPCR Master Mix&nbsp;</td><td>Fermentas International, Inc</td><td>K0221</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma</td><td>P7793-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Murashige ve Skoog Bazal Orta</td><td>Sigma</td><td>M5519 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı kare (120 x120 mm2)</td><td>Sigma</td><td>Z692344&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

manyetik alan (gmf) ve bitki gelişimi: gmf İptalleri etkileri üzerine araştırılması<em&gt; arabidopsis thaliana</em&gt; geliştirme ve gen İfadesi

Geomagnetic Field (Gmf) and Plant Evolution: Investigating the Effects of Gmf Reversal on Arabidopsis thaliana Development and Gene Expression

Bitkilerin evrimi en uyarıcı gözlemlerden biri jeomanyetik alanın oluşumu (GMF) ters (veya geziler) ve Angiospermlerin radyasyon anı arasında bir ilişki olduğunu. Bu GMF polariteli değişiklikler, bitki gelişiminde rol oynayabilir hipotezine yol açmıştır. Burada, biz yapay GMF koşulları tersine için Arabidopsis thaliana&#39;yı teşhir ederek, bu hipotezi sınamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu üç eksenli bir manyetometre ve toplanan veriler GMF büyüklüğünü hesaplamak için kullanıldı. Üç DC güç kaynakları üç Helmholtz bobin çiftleri bağlandı ve GMF şartlarını değiştirmek için bir bilgisayar tarafından kontrol altına alındı. Petri kapları yetiştirilen bitkiler hem normal maruz kalan ve GMF koşulları tersine döndü. Sham uyarı deneyleri de gerçekleştirildi. Exposed bitkiler deney sırasında fotoğraflandı ve görüntüleri kök uzunluğu ve yaprak alanlarını hesaplamak için analiz edildi. Arabidopsis toplam RNA, ekstre edilmiş ve nicel edildiGerçek zamanlı PCR (qPCR) CRUCIFERIN 3 (CRU3), bakır taşıma protein1 (COTP1), Redox Duyarlı Transkripsiyon faktörüne 1 (RRTF1), Fe Süperoksit dismutaz 1 (FSD1), Catalase3 (CAT3), Thylakoidal gen ekspresyonu üzerindeki analizleri yapılmıştır Askorbat peroksidaz (TAPX), sitozolik Askorbat Peroxidase1 (APX1) ve NADPH / solunum patlaması oksidaz protein D (RbohD). Dört farklı referans genleri qPCR sonuçları normalleştirmek için analiz edildi. Dört genin en seçildi ve normalleşmesi için en kararlı gen kullanıldı. Bizim verilerimiz üç eksenli bobinleri kullanarak GMF kutuplarını ters bitki büyüme ve gen ifadesi üzerinde önemli etkileri olduğu ilk kez gösteriyor. Bu sonuçta p giden, daha yüksek bir seçici baskı haklı olabilir GMF ters bitki gelişiminde değişiklikleri uyaran katkıda hipotezini desteklemektedirlant evrim.

Bu protokolün amacı, set GMF ters kullanılan Şekil 1A gösterildiği gibi jeomanyetik alanın (GMF) ters bitki gelişimi ve Arabidopsis thaliana ekotip Col 0. Üç eksenli bobinlerin gen ifadesini etkileyebilir olmadığını değerlendirmek için bir yöntem sağlamaktır Protokolde aşama 1,5 de tarif edildiği gibi uygun bir tahrik gerilimleri (Şekil 1B), elde edilmiştir. Üç eksenli bobin boyutları ~ birkaç Petri plakaları barındırmak için ters GMF koşulları yeterli boşluk izin 2 x 2 x 2 m 3. Kontroller, aynı çevre koşullarında, normal GMF değerleri büyütülmüştür. GMF koşulları normale maruz 10 gün sonra ve ters, bitkilerin fenotipi belirgin morfolojik değişiklikler göstermiştir. Şekil 2 de gösterildiği gibi, (normal GMF koşullarında yetiştirilen yani,) kontrol bitkileri belirgin bir şekilde (Dunn-Bonferroni Sidak ve Arındırılmış Prob &lt;0,001 kök uzunlukları göstermiştir;Ters GMF maruz bitkilere göre (17.53 mm N = 32);; Student t = 10.68, df = 31) yüksek değerler (29.41 mm; SEM = 1.04 SEM = 0.58; N = 36). GMF-ters bitkilerde sürgün morfolojisi de yaprak genişlemesinin indirgenmiş gelişme göstererek değiştirilmiştir. Öğrencinin t = 31.32, df normal koşullara maruz kalan bitkiler 4.95 mm 2 (SEM 0.025, N = 54), ters GMF koşullarına maruz kalan bitkiler anlamlı gösterdi oysa (Dunn-Sidak ve Bonferroni Düzeltilmiş Prob = &lt;0.001 ortalama yaprak alanı gösterdi = 53) daha düşük yaprak alanı değerleri (3.71 mm 2, SEM = 0.032; N = 54). Bu nedenle, ters GMF koşulları Arabidopsis maruz kök uzunluğu ve yaprak alanı hem de bir azalmaya neden. Yaprak genişlemesi ve kök gelişiminin bölünmesi ve hücreler 27 uzama hem de bağlıdır. Bu nedenle, bitki gelişimi, verimlilik ve genel uygunluk &lt;optimal atış ve kök-sistem mimarisine bağlıdırsup&gt; 28. Ters GMF koşullarına maruz kalan bitkiler, indirgenmiş kök uzunluğu ve yaprak boyutu manyetik alan yoğunluğu değişimleri algılamak sadece bir sensör sisteminin varlığı mümkün olduğunu hem de gravite ile karşılaştırıldığında manyetik alan &quot;yönünde&quot; değişikliklere cevap vermek. GMF ters bitki büyümesini etkileyebilir hipotez GMF ters koşulları önemli ölçüde bitki gelişimini etkileyebilir olduğunu göstermektedir deneyler, zorlayıcı kanıtlar bulur. Morfolojik değişiklikler aynı zamanda gen ekspresyonunda değişmeler ile eşlik edilmiştir. Temizlik genler arasında, en kararlı gen uzama faktörü 1B alfa alt birim 2 idi. Genin (CRU3, COTP1, RRTF1) ilk grubu gen ekspresyonunda belirgin bir değişiklik (Şekil 3). Üç genin ekspresyonu anlamlı rezerv maruz bitkilerde yaklaşık 2.5 misli (p &lt;0,05) artmıştır Sürgünd GMF koşulları. CRU3 kök ekspresyonu normal GMF koşullara maruz kalan bitkiler köklerinin yukarı regüle ancak (P &lt;0.05) ters GMF koşulları olarak azaldı belirgin oldu. Ters (Şekil 3), normal koşullarda olarak azaldı ve GMF ters mevcudiyetinde yukarı regüle edilmiştir ve COTP1 RRTF1 için bulunmuştur. Krusiferin (12 S globulin) A&#39;nın tohumlarda en çok görülen bir depolama proteinidir thaliana ve diğer turpgillerin, ve kaba endoplazmik retikulum içinde bir ön işaret olarak sentezlenir. Daha sonra, protein, depolama vaküol 13 nakledilir. Çimlenme Fide azot bir başlangıç ​​kaynağı olarak kullanılmaktadır krusiferin, parçalanmasını gerektirir. Yük Atma bozulması krusiferin hücre yapılarını ya da hücre bileşenleri geliştirme 29,30 bozarak embriyoların gelişimi azaltır. Sonuçlarımız CRU3 üst ayarlanması ile ilişkili olduğunu göstermektedirböylece aşırı ekspresyonu GMF ters ve bu hassas, bu gen, bitki gelişiminin azalmaya neden olabilecek belirten bir alt kanat genişlemesi ve daha düşük bir kök uzunluğu. Ayrıca, GMF ters azaltılmış kök uzunluğu ile ilişkilidir köklerinde CRU3 önemli bir down-regüle, uyarmaktadır. Bakır bitkilerde önemli süreçler için temel kofaktör, ancak aşırı zararlı etkiler; Böylece, bakır taşıma fazla sentezleyen bitki büyümesini taviz. GMF bozma etkisi dolayısıyla azaltılmış bitki gelişimini açıklayan sürgün ve kökleri hem COTP1 önemli bir aşın oldu. İyon stres sıkıca hücrenin redoks durumuna bağlıdır kloroplast metabolizması, bozar. Arabidopsis olarak transkripsiyon faktörü RRTF1 31 değişikliği redoks ayarlamak yeteneği ilişkili genlerin ekspresyonu için önemlidir. Bu nedenle, ne zaman bitkiler fizyolojik ve gelişimini değiştirmek mümkün dış uyaranlara maruzal programları bu önemli transkripsiyon faktörünün bir aşın bekleniyor. GMF iptali böylece ters GMF koşulları bitkilerin yüksek oksidatif stres tepkileri gösteren sürgünler ve kökler hem RRTF1 önemli bir aşın kaynaklı. Ilginç sonuçlar oksidatif stresi dahil beş genleri analiz edilerek elde edilmiştir. Genel olarak, sürgünler çıkarılan ve analiz tüm genlerin bitkiler normal yetişen veya GMF koşulları (Şekil 4 ve Şekil 5) tersine dönmüş önemli farklılıklar (P&gt; 0.05) yoktu. Bununla birlikte, önemli bir aşağı-regülasyon, her zaman ters GMF koşullarına maruz kalan bitkilerin kökleri gözlenmiştir. Özellikle, CAT3 (Şekil 5), APX1, FSD1, RBOHD ve TAPX (Şekil 4) ile aşağı doğru düzenleme sırasına ardından yüksek down-regüle göstermiştir. Bir Çapraz toleransbiyotik ve biyotik stres biyokimyasal yollarla ilgili farklı genlerin aktivasyonu ile sağlanır. RRTF1 transkripsiyon faktörü, bu yolların 15,31 gen ekspresyonunun sinerjistik eş aktivasyonunu kolaylaştırır, ve potansiyel olarak oksidatif stres 32 dahil edilebilir. Oksijen tutucu azalır, bu nedenle, RRTF1 yukarı-regülasyonunun beklenmektedir. Kök kirleticilerin alınmasına yönelik enzim baskılanması artan oksidatif strese tepki olarak hareket eden RRTF1 yukarı regülasyonu ile ilişkilidir. CAT3, APX1 ve TAPX dramatik kök downregülasyonu FSD1 azalma ile süperoksit anyon dismutate yeteneğinde azalma eşlik eder H 2 O 2, temizlemek için kök hücreleri azalır yeteneğini gösterir. Oksidatif stres yanıtları ters GMF algı ana site gibi görünen kökleri, daha yüksektir. Şekil 1. jeomanyetik alan Tazminat sistemi. (Üç dikey eksenin her biri için sekizgen bir çift bobini içerir) (A) üç eksenli rulolar yer manyetik alanın vektör tersine çevirmek için kullanılabilir. (B) bir bilgisayar kontrollü güç kaynağı Helmholtz bobinleri her bir çiftine bağlanmıştır. (Bu rakamlar Gerilimler keyfi) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53286/53286fig2.jpg" /> Şekil Arabidopsis morfolojisi jeomanyetik alan bozma 2. Etkileri. Pozlama, kontrol bitkilerinin on gün sonra (normal GMF koşullara maruz kalanlar, yani) anlamlı olarak daha fazla kök uzunluğu ve daha Expan göstermekded bildiriler ters GMF koşullarına maruz kalan bitkiler ile karşılaştırıldığında. Metrik bar = 18 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53286/53286fig3.jpg" /> Şekil Arabidopsis gen ifadesi üzerinde jeomanyetik alan bozma 3. Etkileri. Maruz kalma on gün sonra, kontrol ve tedavi edilen bitkilerin toplam RNA ekstrakte edildi ve ekspresyon analizi için gerçek zamanlı PCR ile analiz edildi. . COTP1, Bakır Taşıma Protein1;, RRTF1, Redoks Duyarlı Transkripsiyon faktörüne 1 GMF tersine etkisi CRU3, krusiferin 3, test edilen tüm genlerin gen ifadesi ciddi bir değişikliğe neden oldu. Barlar standart hata gösterir; yıldızlarla pl arasında anlamlı (p &lt;0.05) farklılıklar gösterirters ve normal GMF şartlara maruz karıncalar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53286/53286fig4.jpg" /> Şekil Arabidopsis antioksidan ilgili gen ifadesinin üzerinde jeomanyetik alan bozma 4. Etkileri. Maruz kalma on gün sonra, kontrol ve tedavi edilen bitkilerin toplam RNA izole edildi ve Gerçek Zamanlı PCR kullanılarak gen ekspresyon analizi için kullanılmıştır. GMF tersine etkisi sürgün gen ifadesinde anlamlı değişikliklere neden oldu; Bununla birlikte, ciddi bir aşağı doğru düzenleme ters GMF koşullar altında yetiştirilen bitkilerin kök gen ekspresyonu gözlenmiştir TAPX, Thylakoidal Askorbat Peroksidaz;. APX1, Askorbat Peroxidase1; FSD1, Fe Süperoksit Dismutase1; RbohD, NA. DPH / Solunum patlama oksidaz protein D Barlar standart hata gösterir; yıldız ters ve normal GMF şartlara maruz bitkiler arasında önemli (P &lt;0.05) farklılıklar gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/53286/53286fig5.jpg" /> Şekil Arabidopsis Katalaz 3 (CAT3) gen ifadesi üzerinde jeomanyetik alan bozma 5. Etkileri. Maruz kalma on gün sonra, kontrol ve tedavi edilen bitkilerin toplam RNA izole edildi ve Gerçek Zamanlı PCR kullanılarak gen ekspresyon analizi için kullanılmıştır. GMF tersine etkisi sürgün gen ifadesinde anlamlı değişikliklere neden oldu; Bununla birlikte, ciddi bir aşağı doğru düzenleme ters GMF koşullar altında yetiştirilen bitkilerin kök gen ekspresyonu gözlenmiştir. Barlar standart Erro gösterirr; yıldız ters ve normal GMF şartlara maruz bitkiler arasında önemli (P &lt;0.05) farklılıklar gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Bu protokol, etkili jeomanyetik alanın (GMF) tersine çevrilmesinin diferansiyel gen ekspresyonunu indüklediği ve Arabidopsis thaliana'nın morfolojisini değiştirdiği hipotezini test etmek için bir yöntemi açıklar. Bitki büyüme odasında yapay olarak ters GMF koşulları oluşturmak için üç eksenli sekizgen bir Helmholtz bobin çifti sistemi kullanıldı.

Manyetik Alan (GMF) ve Bitki Gelişimi: GMF İptalleri Etkileri üzerine Araştırılması<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Geliştirme ve Gen İfadesi

One of the most stimulating observations in plant evolution is a correlation between the occurrence of geomagnetic field (GMF) reversals (or excursions) ...

Bu prosedürün genel amacı, bir güç kaynağı ile kontrol edilen Helmholtz bobinlerini kullanarak yer manyetik alanının (YMA) ters çevrilmesini sağlamaktır. Sonuç olarak, YMA tersine çevrilmesinin bitkilerin morfolojisini ve gen ifadesini etkilediği gösterilmektedir. Bu yöntem, dünya manyetik alanının tersine dönmesinin bitki evrimi ve adaptasyonunda bir rol oynayıp oynamadığı gibi bitki evrimi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Bu tekniğin temel avantajı, birçok tekrarla ve tamamı hassas bir şekilde kontrol edilen koşullar altında yetiştirilebilen basit bir model organizmada, zayıf manyetik alanların potansiyel biyolojik etkilerini test etmek için kullanılabilmesidir. Bu prosedürü, laboratuvarımdan Alberto Bocco ve onun rehberliğindeki bir öğrenci ile laboratuvarımda doktora öğrencisi olan Kiara aa ve grubumda doçent olan CIA Bertea gösterecekler.Başlamak için, üç çift Helmholtz Bobini çiftine bağlı olan üç DC güç kaynağını ve probu üç eksenli bobinlerin içine yerleştirilmiş olan üç eksenli manyetometreyi açın. Bilgisayarı açın ve üç eksenli manyetometreden veri toplanmasını sağlayan manyetometre yazılımını başlatın. Güç kaynakları, kontrol amacıyla A-G-P-I-B bağlantısı üzerinden bir bilgisayara da bağlıdır.Güç kaynaklarının voltajlarını, metin protokolünde açıklandığı şekilde, ters yönlü bir manyetik alan vektörü ile istenen manyetik alanı oluşturacak şekilde ayarlayın. Kalsiyum hipoklorit çözeltisi ile 25 ila 28 °C'de, sürekli çalkalama altında 10 ila 12 dakika boyunca işlemle sterilize edilmiş 1,5 mL'lik bir tüp yüzeyine Arabidopsis Aliana ekotipi Columbia, zero tohumlarını yerleştirin. Ardından tohumları iki kez %80 etanol ile durulayın ve ardından %100 etanol ile yıkayın.Ve son olarak, steril distile su ile durulama yapın. Katılaşmadan önce, metin protokolünde açıklandığı şekilde bir litre Murrah Shiga ve SCOG modifiye besiyeri hazırlayın. Her kare Petri plağına 80 mililitre besiyeri dökün, böylece bir plakta 30 steril tohum olacaktır.Ardından plakaları balmumu benzeri bir filmle mühürleyin. Çimlenmeyi güçlendirmek ve senkronize etmek için plakaları iki gün boyunca dört derece Celsius'ta, karanlıkta ve yatay konumda vernalize edin. Vernalizasyonun ardından, lambaların kırmızı bileşenini azaltmak için spot ışığını mavi bir jelatin filmle kaplayarak sodyum buharlı lambaları hazırlayın.Petri plaklarını normal veya tersine çevrilmiş GMF'ye maruz bırakmak için hazırlayın. Tohumları, iklim kontrollü bir ortamda 22 °C'de dikey konumda maruz bırakın. Paralel deneyleri hem triaksiyel bobinlerin dışında hem de triaksiyel bobinlerin içinde gerçekleştirin.Sekiz saat karanlık ve 16 saat ışıkten oluşan bir fotoperiyot programı altında. Maruziyetten sonra, kök uzunluğunu ve yaprak alanlarını hesaplamak için Petri kaplarının fotoğraflarını çekin. İlk olarak, Petri plağının kenarını ölçün.Ardından, Petri kabının görüntüsünü ImageJ yazılımında açın ve kabın kenarını tam olarak kesecek bir çizgi çizmek için düz çizgi seçeneğini kullanın. Analyze menüsünden set scale seçeneğini belirleyin ve bilinen mesafe kutusuna gerçek mesafeyi girin. Daha sonra uzunluk birimini girin.Ve son olarak, ayarları kök uzunluğuyla ilgili tüm ölçümler için geçerli kılmak amacıyla genel seçeneğe tıklayın. Serbest çizim aracını kullanarak kökün şeklini dikkatlice takip edin. Analiz menüsündeki ölçüm seçeneğini kullanarak uzunluğu ölçün.Resimdeki tüm kökleri ölçmeye devam edin ve dosyayı daha sonraki istatistiksel analizler için kaydedin. Görüntü menüsünden yaprak alanı için önce "adjust" seçeneğini, ardından "color threshold" seçeneğini kullanın, tekil yaprağı seçin ve analiz menüsünden "analyze particles" seçeneğini belirleyerek istatistiksel analizler için tekil ölçümleri kaydedin. 30 sürgün ve 30 kökü ayrı ayrı toplayıp hemen sıvı azot içinde dondurun.Ardından, metin protokolünde açıklandığı şekilde toplam RNA'yı izole etmeden önce bir havan ve eliyle sıvı azot içinde öğütün; tüm deneyleri, iç yükleme standardı olarak ROX içeren cyber green one ile bir gerçek zamanlı sistemde gerçekleştirin ve reaksiyonu 25 microliter karışımla yürütün. Metin protokolünde listelenen primerleri kullanarak, genomik DNA kontaminasyonunu izlemek için ters transkripsiyon yapılmamış kontrollerin yanı sıra kalıp içermeyen kontroller ekleyin. Her denatürasyon ve uzama aşamasını takiben floresansı okuyun.İki büyüteç, dizlenme ve disosiyasyon eğrileri dahil olmak üzere toplanan verileri temsil eder. Analiz ve kurulum ekranına gidin ve deneyin disosiyasyon segmenti sırasında toplanan veri setinin seçili olduğundan emin olun. Tüm çalışmaların analizi için, termal profile disosiyasyon segmentini dahil ederek 55 ile 95 derece Celsius arasında bir erime eğrisi analizi gerçekleştirin.Disosiyasyon profilini görüntülemek için sonuçlar sekmesinden erişilen disosiyasyon eğrisi ekranını kullanın. Tüm amplifikasyon grafiklerini gerçek zamanlı PCR cihazı yazılımı ile analiz edin.CT değerlerini elde etmek için, bağıl RNA seviyelerini en uygun housekeeping genlerinin seviyeleriyle kalibre edin ve normalize edin. Sonuçlar sekmesi üzerinden amplifikasyon grafikleri ekranına erişin. Analiz, seçim ve kurulum ekranını kullanarak verilerin analiz edileceği ramp veya platoyu seçin.Ardından, komut panelindeki floresans menüsünden baz çizgisi düzeltilmiş normalize edilmiş floresansı seçin. Örneklenen kuyucukların CT değerlerini görüntülemek için sonuçlar sekmesi üzerinden plaka örnek değer ekranına erişin.Real-time PCR sonuçlarını normalize etmek için dört farklı referans gen kullanın. Analiz yazılımını kullanarak en üst sırada yer alan geni seçin ve normalizasyon için en stabil geni kullanın. Giriş verilerini, ilk sütunun gen isimlerini ve ilk satırın örnek isimlerini içerdiği bir Excel sayfasında kısaca düzenleyin.Ardından menü çubuğundan analiz yazılımını seçin. Giriş verilerini seçmek için iletişim kutusunu kullanın. Daha sonra alan örnek isimleri, gen isimleri ve yalnızca basit çıktı seçeneklerini işaretleyin.Analizi gerçekleştirmek için "go" düğmesine tıklayın; en yüksek sıralamaya sahip geni, en stabil eksprese edilen aday gen olarak seçin. 10 günlük maruziyetin ardından, kontrol bitkileri, 10 günlük maruziyet sonrası tersine çevrilmiş GMF koşullarına maruz kalan bitkilere kıyasla anlamlı derecede daha büyük kök uzunluğu ve daha geniş yaprakçıklar göstermektedir. GMF'nin tersine çevrilmesinin etkisi; crucifer in three copper transport protein one ve redox responsive transcription factor one dahil olmak üzere, test edilen tüm genlerin gen ekspresyonunda meydana gelen drastik bir değişiklikti; çubuklar standart hatayı, yıldızlar ise tersine çevrilmiş ve normal GMF koşullarına maruz kalan bitkiler arasındaki anlamlı farklılıkları belirtmektedir.GMF tersine çevrilmesinin etkisi, sürgün gen ekspresyonunda anlamlı bir değişikliğe yol açmamıştır. Ancak, yetiştirilen bitkilerin kök gen ekspresyonunda ciddi bir aşağı düzenleme (downregulation) gözlemlenmiştir. Ters GMF koşulları altında bu genler arasında thal, bir peroksidaz, bir peroksidaz, bir demir süperoksit dismutaz, bir N-A-D-P-H, respiratuar patlama oksidaz proteini ve katalaz üç yer almaktadır.Bu teknik bir kez kavrandığında, doğru şekilde uygulandığı takdirde gereken deneye bağlı olarak dakikalar içinde veya günlerce sürecek şekilde gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, jeomanyetik alanı nasıl tersine çevireceğiniz veya değiştireceğiniz ve maruz kalan bitkiler üzerinde nasıl morfolojik ve genetik çalışmalar yapacağınız konusunda iyi bir fikre sahip olmalısınız. Bu prosedürü uygularken, kask bobinleriyle çevrili bölgeden tüm manyetik alan kaynaklarının uzaklaştırılması önemlidir.Kask bobinlerinin ve bunların jeneratörlerinin ısı veya titreşim üretmemesi önemlidir. Araştırmacı, final verileri kaydedilene kadar manyetik alan maruziyet durumu hakkında körlenmiş olmalıdır. Bu teknik, manyetik resepsiyon alanındaki araştırmacıların; manyetik alanların bitki evrimi, hayvan davranışı ve navigasyonu ile insan hücre hatları üzerindeki etkilerini incelemesine olanak sağlamıştır.Gelecekte, manyetik alan değişikliğinin uzay koşullarında bitki büyümesi üzerindeki etkisini değerlendirmek amacıyla mikro yerçekiminde benzer çalışmalar yapmayı umuyoruz. Zayıf manyetik alanlar üreten sistemlerle çalışmanın tehlikeli olduğu düşünülmemektedir. Bununla birlikte, normal önlemleri almalı ve Helmholtz bobin çiftleri için güç kaynakları gibi ekipmanlarla çalışmadan önce yetkin bir elektrikçinin tavsiyesine başvurmalısınız.

geomagnetic-field-gmf-plant-evolution-investigating-effects-gmf

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Mekansal özel Fitokrom yanıtlar moleküler temeli, doku ve organ spesifik Fitokrom eksiklikleri gösteren transgenik bitkiler kullanılarak araştırılmaktadır. Belirli hücrelerin izolasyonu mikroarray analizleri takip Sıralama mekansal özel Fitokrom yanıtları yer genleri tanımlamak için kullanılmaktadır Floresan-Aktif Hücre tarafından uyarılan Fitokrom kromofor tükenmesi sergiliyor.

Hücre tipi Özgül gösterilmeden FACS yardımlı kullanarak Doku ve Organ spesifik Fitokrom Yanıtları incelenmesi Arabidopsis thaliana</em

Hücre biyolojisinde temel bir arayış ökaryotik hücrelerin yapmak organellerin kimliği altında yatan mekanizmaları belirlemektir. Burada floresan mikroskobu ve yeni nesil dizileme araçlarını kullanarak bitki organel morfolojik ve fonksiyonel bütünlüğü sorumlu genleri tanımlamak için bir yöntem öneriyoruz.

Floresans-mikroskopi Tarama ve nesil Sekanslama: organel Bütünlüğü ile ilgilendim Genlerin belirlenmesi için Faydalı Araçlar

Biz stoma farklılaşma belgeleyen, gelişme birkaç gün içinde epidermis konfokal görüntüleme için bitki kotiledon hareketsiz odası slaytlar ve medya kullanarak bir protokol açıklar. Fluorofor etiketli proteinlerin hücre bölünmesi ve hücre tipi farklılaşması esnasında olası rollerini anlamayı arttırıyor, ifade ve hücre içi lokalizasyonu dinamik izlenebilir.

Uzun süreli, yüksek çözünürlüklü Konfokal Time Lapse Görüntüleme<em&gt; Arabidopsis Kotiledon</emÇimlenme sırasında&gt; Epidermis

Biz Arabidopsis thaliana tohum tohum kat yatak tahlili (SCBA) monte prosedürü sunuyoruz. SCBA genetik ve in vitro keşfetmek için güçlü bir araç olduğu gösterilmiştir nasıl uyuyan tohum ve hafif uyaranlara yanıt olarak endosperm kontrolleri tohum çimlenme. SCBA endosperm embriyonik büyümeyi etkilemek için şüphelenilen her durumda altında uygulanabilir prensip olarak.

Genetiği keşfedin A Tohum Kabuğunun Yatak Deneyi<em&gt; In Vitro</em&gt; Nasıl Endosperminde Denetimler Çimlenme içinde<em&gt; Arabidopsis thaliana</em

Kromatin immüno-çökeltmesi DNA in vivo olarak Arabidopsis proteinlerin bağlanma yerlerinin tanımlanması için güçlü bir tekniktir. Bu prosedür, kromatin çapraz bağlama ve parçalanma, ilgi konusu proteine ​​karşı seçici antikorlar ile immünopresipitasyon ve bağlı DNA qPCR analizini içermektedir. Biz, Arabidopsis bitkiler için optimize edilmiş basit ChIP tahlili tarif eder.

Arabidopsis Protein-DNA Etkileşimleri Tespiti için Kromatin Immunoprecipitation Deneyi<em&gt; İn Vivo</em

Bu protokolün amacı, dışarıdan enerji almadan statik manyetik alanlar uygulayarak bitkilerin ilk büyüme hızının hızlanmasını göstermektir.

Statik Manyetik Alanlar Kullanılarak Tarımsal İşletmelerin İlk Büyüme Oranı Geliştirme

Bu iletişim kuralı Arabidopsis içinde embriyogenez embriyo Desen oluşumu bir mikroskop altında incelenmesi ve ardından ovule izni ile gözlemlemek için bir yöntem özetliyor.

Embriyogenez Arabidopsis olarak karakterize bir yöntem

Bu iletişim kuralı hemipteran böcekler, yaprak bitleri gibi besleme tarafından üretilen bitkilerde kalsiyum sinyalleri analiz etmek için basit bir yöntem özetliyor. GFP kalsiyum Biyoalgılayıcı GCaMP3 ile dönüştürülmüş Arabidopsis thaliana kalsiyum dinamiği yüksek zamansal ve mekansal çözünürlüğü ile gerçek zamanlı vivo içinde görüntüleme için izin verir.

Floresan Biyoalgılayıcı kullanarak böcek besleme sırasında gerçek zamanlı Vivo kayıt Arabidopsis kalsiyum sinyallerin

Giberellin algı sensör 1 (GPS1) Giberellin etki kronolojik zamanmekansal yüksek çözünürlüğe hücresel düzeyde ölçmek için ilk Förster rezonans enerji transferi tabanlı biyoalgılayıcı olduğunu. Bu iletişim kuralı yöntemi görselleştirmek ve genetik olarak kodlanmış nlsGPS1 biyoalgılayıcı Arabidopsis hypocotyls ve kök ipuçlarını kullanarak hücresel Giberellin düzeyleri ölçmek için raporlar.

NlsGPS1 Förster rezonans enerji kullanarak görüntülenmesi hücresel Giberellin düzeyleri (FRET) biyoalgılayıcı aktarma

Nazik bir dokunma kuvveti yükleme makinesi insan saç fırçaları, robotik kollar ve bir kumandanın inşa edilmiştir. Saç fırçaları makineye monte edilen robotik kollar tarafından tahrik edilir ve bitkiler üzerinde dokunmatik kuvvet uygulamak için periyodik olarak hareket ederler. Makine odaklı saç dokunuşlarının gücü, manuel olarak uygulanan dokunuşlarla karşılaştırılabilir.

Bir model tesisi Arabidopsis thaliana Thigmomorphogenesis çalışması Için bir işgücü tasarrufu ve tekrarlanabilen dokunma-Force sinyalizasyon mutant ekran Protokolü

Hücre dışı glutamat tetiklenen sistemik kalsiyum sinyali, bitkilerde mekanik yaralama ve otobur saldırısına karşı bitki savunma yanıtlarının indüksiyonu için kritik öneme sahiptir. Bu makalede, kalsiyum ve glutamaca duyarlı floresan biyosensörleri ifade eden Arabidopsis thaliana bitkilerini kullanarak her iki faktörün de mekansal ve zamansal dinamiklerini görselleştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Arabidopsis'te Lokal ve Sistemik Yara Sinyallerinin Geniş Alan, Gerçek Zamanlı Görüntülenmesi

Keşfedin manyetik alan tersine çevirme yöntemini Arabidopsis thaliana gelişimi ve gen ifadesi üzerindeki etkilerini incelemek için. Helmholtz bobinleri kullanarak bitki morfolojisindeki değişiklikleri ve evrimsel adaptasyonları araştırın.

Manyetik Alan (GMF) ve Bitki Gelişimi: GMF İptalleri Etkileri üzerine Araştırılması Arabidopsis thaliana Geliştirme ve Gen İfadesi (Video) | JoVE Journal

Manyetik Alan (GMF) ve Bitki Gelişimi: GMF İptalleri Etkileri üzerine Araştırılması

Daha fazla video keşfet