Name: Görüntüleme İmmünoloji Synapse Dynamics için bir Endotel Hücre Modeli Düzlemsel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Keşfedin, endotel hücrelerini düzlemsel antijen sunan hücre modeli olarak kullanarak immünolojik sinaps dinamiklerini ve T hücre aktivasyon mekanizmalarını yüksek çözünürlüklü görüntüleme ile inceleme yöntemini.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bazı temsili görüntülerin oluşturulmasındaki yardımı için Dr. Peter T. Sage'e teşekkür ederiz. Bu çalışma, C.V.C.'ye (HL104006) verilen bir NIH R01 hibesi ile desteklenmiştir.

<ol><li>von Andrian, U. H., Mackay, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+function+and+migration.+Two+sides+of+the+same+coin%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">T-cell function and migration. Two sides of the same coin.</a> N. Engl. J. Med. 343 (14), 1020-1034 (2000).</li>
<li>Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion+receptors+of+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adhesion receptors of the immune system.</a> Nature. 346 (6283), 425-434 (1990).</li>
<li>Shaw, A. S., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+the+T+cell+receptor+go+the+distance%3A+a+topological+view+of+T+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Making the T cell receptor go the distance: a topological view of T cell activation.</a> Immunity. 6 (4), 361-369 (1997).</li>
<li>Monks, C. R., Freiberg, B. A., Kupfer, H., Sciaky, N., Kupfer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+segregation+of+supramolecular+activation+clusters+in+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional segregation of supramolecular activation clusters in T cells.</a> Nature. 395 (6697), 82-86 (1998).</li>
<li>Delon, J., Stoll, S., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+T-cell+interactions+with+antigen+presenting+cells+in+culture+and+in+intact+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Imaging of T-cell interactions with antigen presenting cells in culture and in intact lymphoid tissue.</a> Immunol Rev. 189, 51-63 (2002).</li>
<li>Brossard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifocal+structure+of+the+T+cell+-+dendritic+cell+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Multifocal structure of the T cell - dendritic cell synapse.</a> Eur J Immunol. 35 (6), 1741-1753 (2005).</li>
<li>Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+context+of+T+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The cellular context of T cell signaling.</a> Immunity. 30 (4), 482-492 (2009).</li>
<li>Balagopalan, L., Sherman, E., Barr, V. A., Samelson, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+techniques+for+assaying+lymphocyte+activation+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Imaging techniques for assaying lymphocyte activation in action.</a> Nat Rev Immunol. 11 (1), 21-33 (2011).</li>
<li>Cebecauer, M., Spitaler, M., Serge, A., Magee, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signalling+complexes+and+clusters%3A+functional+advantages+and+methodological+hurdles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Signalling complexes and clusters: functional advantages and methodological hurdles.</a> J Cell Sci. 123, 309-320 (2010).</li>
<li>Oddos, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-speed+high-resolution+imaging+of+intercellular+immune+synapses+using+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">High-speed high-resolution imaging of intercellular immune synapses using optical tweezers.</a> Biophys J. 95 (10), L66-L68 (2008).</li>
<li>Grakoui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunological+synapse%3A+a+molecular+machine+controlling+T+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The immunological synapse: a molecular machine controlling T cell activation.</a> Science. 285 (5425), 221-227 (1999).</li>
<li>Bunnell, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+receptor+ligation+induces+the+formation+of+dynamically+regulated+signaling+assemblies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">T cell receptor ligation induces the formation of dynamically regulated signaling assemblies.</a> J Cell Biol. 158 (7), 1263-1275 (2002).</li>
<li>Yokosuka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newly+generated+T+cell+receptor+microclusters+initiate+and+sustain+T+cell+activation+by+recruitment+of+Zap70+and+SLP-76%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Newly generated T cell receptor microclusters initiate and sustain T cell activation by recruitment of Zap70 and SLP-76.</a> Nat Immunol. 6 (12), 1253-1262 (2005).</li>
<li>Seminario, M. C., Bunnell, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+initiation+in+T-cell+receptor+microclusters%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Signal initiation in T-cell receptor microclusters.</a> Immunol Rev. 221, 90-106 (2008).</li>
<li>Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supported+bilayers+at+the+vanguard+of+immune+cell+activation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Supported bilayers at the vanguard of immune cell activation studies.</a> J Struct Biol. 168 (1), 152-160 (2009).</li>
<li>Martinelli, R., Carman, C. V. Lymphocyte Endothelilal Interactions. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMartinelli%2C+R+%22Encyclopedia+of+Cell+Biology%22">Encyclopedia of Cell Biology</a>. Bradshaw, R. A., Stahl, P. , Elsevier. London. (2015).</li>
<li>Choi, J., Enis, D. R., Koh, K. P., Shiao, S. L., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+lymphocyte-endothelial+cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">T lymphocyte-endothelial cell interactions.</a> Annu Rev Immunol. 22, 683-709 (2004).</li>
<li>Marelli-Berg, F. M., Jarmin, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+presentation+by+the+endothelium%3A+a+green+light+for+antigen-specific+T+cell+trafficking%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Lett%22%5BJournal%5D)">Antigen presentation by the endothelium: a green light for antigen-specific T cell trafficking?</a> Immunol Lett. 93 (2-3), 109-113 (2004).</li>
<li>Sage, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+recognition+is+facilitated+by+invadosome-like+protrusions+formed+by+memory%2Feffector+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen recognition is facilitated by invadosome-like protrusions formed by memory/effector T cells.</a> J Immunol. 188 (8), 3686-3699 (2012).</li>
<li>Kumari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+foci+facilitate+activation+of+the+phospholipase+C-gama+in+primary+T+lymphocytes+via+the+WASP+pathway+%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Actin foci facilitate activation of the phospholipase C-gama in primary T lymphocytes via the WASP pathway .</a> eLife. , (2015).</li>
<li>Marelli-Berg, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+histocompatibility+complex+class+II-expressing+endothelial+cells+induce+allospecific+nonresponsiveness+in+naive+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Major histocompatibility complex class II-expressing endothelial cells induce allospecific nonresponsiveness in naive T cells.</a> J Exp Med. 183 (4), 1603-1612 (1996).</li>
<li>Ma, W., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+endothelial+cells+effectively+costimulate+cytokine+production+by%2C+but+not+differentiation+of%2C+naive+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human endothelial cells effectively costimulate cytokine production by, but not differentiation of, naive CD4+ T cells.</a> J Immunol. 161 (5), 2158-2167 (1998).</li>
<li>Perez, V. L., Henault, L., Lichtman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+antigen+presentation%3A+stimulation+of+previously+activated+but+not+naive+TCR-transgenic+mouse+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">Endothelial antigen presentation: stimulation of previously activated but not naive TCR-transgenic mouse T cells.</a> Cell Immunol. 189 (1), 31-40 (1998).</li>
<li>Epperson, D. E., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-presenting+function+of+human+endothelial+cells.+Direct+activation+of+resting+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen-presenting function of human endothelial cells. Direct activation of resting CD8 T cells.</a> J Immunol. 153 (12), 5402-5412 (1994).</li>
<li>Shiao, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+effector+memory+CD4%2B+T+cells+directly+recognize+allogeneic+endothelial+cells+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human effector memory CD4+ T cells directly recognize allogeneic endothelial cells in vitro and in vivo.</a> J Immunol. 179 (7), 4397-4404 (2007).</li>
<li>Marelli-Berg, F. M., Okkenhaug, K., Mirenda, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+two-signal+model+for+T+cell+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">A two-signal model for T cell trafficking.</a> Trends Immunol. 28 (6), 267-273 (2007).</li>
<li>Carman, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcellular+diapedesis+is+initiated+by+invasive+podosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Transcellular diapedesis is initiated by invasive podosomes.</a> Immunity. 26 (6), 784-797 (2007).</li>
<li>Carman, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+for+transcellular+diapedesis%3A+probing+and+pathfinding+by+%27invadosome-like+protrusions%27%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms for transcellular diapedesis: probing and pathfinding by 'invadosome-like protrusions'.</a> J Cell Sci. 122 ((Pt 17)), 3025-3035 (2009).</li>
<li>Dustin, M. L., Tseng, S. Y., Varma, R., Campi, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell-dendritic+cell+immunological+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">T cell-dendritic cell immunological synapses.</a> Curr Opin Immunol. 18 (4), 512-516 (2006).</li>
<li>Saito, T., Yokosuka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+synapse+and+microclusters%3A+the+site+for+recognition+and+activation+of+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological synapse and microclusters: the site for recognition and activation of T cells.</a> Curr Opin Immunol. 18 (3), 305-313 (2006).</li>
<li>Gomez, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HS1+functions+as+an+essential+actin-regulatory+adaptor+protein+at+the+immune+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">HS1 functions as an essential actin-regulatory adaptor protein at the immune synapse.</a> Immunity. 24 (6), 741-752 (2006).</li>
<li>Burbach, B. J., Medeiros, R. B., Mueller, K. L., Shimizu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+receptor+signaling+to+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">T-cell receptor signaling to integrins.</a> Immunol Rev. 218, 65-81 (2007).</li>
<li>Vicente-Manzanares, M., Sanchez-Madrid, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+cytoskeleton+during+leukocyte+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Role of the cytoskeleton during leukocyte responses.</a> Nat Rev Immunol. 4 (2), 110-122 (2004).</li>
<li>Ma, Z., Janmey, P. A., Finkel, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+receptor+deformation+model+of+TCR+triggering%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">The receptor deformation model of TCR triggering.</a> Faseb J. 22 (4), 1002-1008 (2008).</li>
<li>Ma, Z., Sharp, K. A., Janmey, P. A., Finkel, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface-anchored+monomeric+agonist+pMHCs+alone+trigger+TCR+with+high+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Surface-anchored monomeric agonist pMHCs alone trigger TCR with high sensitivity.</a> PLoS Biol. 6 (2), e43(2008).</li>
<li>Groves, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bending+mechanics+and+molecular+organization+in+biological+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phys+Chem%22%5BJournal%5D)">Bending mechanics and molecular organization in biological membranes.</a> Annu Rev Phys Chem. 58, 697-717 (2007).</li>
<li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+T+cell+receptor+activation+by+dynamic+membrane+binding+of+the+CD3epsilon+cytoplasmic+tyrosine-based+motif%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Regulation of T cell receptor activation by dynamic membrane binding of the CD3epsilon cytoplasmic tyrosine-based motif.</a> Cell. 135 (4), 702-713 (2008).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Genel olarak, bu protokol i) understudied fizyolojik APC&#39;ler olarak endotel hücreleri soruşturma yöntemleri açıklar ve ii) &#39;düzlemsel hücresel APC modeli&#39; yeni bir türü olarak. Eski ile ilgili olarak, giderek adaptif immün yanıtları 16-18 şekillenmesinde (hematopoetik APC&#39;lerin karşılaştırıldığında, yani), periferal olmayan hematopoetik (ya da &#39;stromal&#39;) APC&#39;Ier kritik olmayan gereksiz roller oynadığı takdir haline gelmiştir. Böyle &#39;yarı profesyonel&#39; APC &#39;, vas...

T lenfositleri majör histokompatibilite kompleksi (MHC) bağlı verimli peptit antijeni (Ag) tanıma yeteneği ile karakterize adaptif bağışıklık sisteminin bir dalı vardır, T hücre reseptörlerinin (TCR&#39;ler) 1 ile molekülleri. Naif lenfositler kurucu göç ve profesyonel Ag sunan hücreler &#39;(ZPT; örneğin, dendritik hücreler) tarama bellek / efektör T hücreleri etkin bir periferik dokularda APC&#39; ve potansiyel hedef hücrelerin son derece geniş bir yelpazede anket gerekir iken, lenf düğümleri içinde. Bir APC üzerindeki soydaş Ag ilk muhasebeleştirilmesi aşağıdaki min, bunların göç tutuklama ve özel bir samimi hücre-hücre arayüzü olarak adlandırılan &#39;immünolojik sinaps&#39; oluşmaya başlar lenfosit (IS). Sürekli (yani 30-60 dk) temas yükseltmek ve 2-7 sinyalizasyon sürdürmek için gerekli olan IS. Gelişmekte olan çalışmalar IS içinde, sürekli oluşumu ve hızlı r olduğunu tespitgücü ve immün yanıtları 2-7 sonuçlanan kalitesini belirlemek (örneğin, MHC / Ag-TCR, F-aktin, yapışma ve sinyal molekülleri içeren) ayrık alt hücresel sinyal mikro-kümelerin emodeling. Ancak, bu sürecin dinamik detaylar ve düzenleyici mekanizma tam olarak 8,9 anlaşılmaktadır. Bu son derece gerekli zamanmekansal görüntüleme sınırı APC yüzeylerin düzensiz topolojileri ve hücre-hücre etkileşimi uçakları kötü kontrollü yönlendirme, sorunları ile ilgili teknik zorlukları büyük ölçüde kaynaklanmaktadır 8-10 (Figure1A) yaklaşır. <img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/53288/53288fig1.jpg" /> Görüntüleme İmmünoloji Synapse Dynamics Şekil 1. Fizyolojik Planar hücre APC Modeli. Şematik bir T hücresi ve professio arasındaki immünolojik sinaps geleneksel görüntüleme göstermektedir<html> nal APC (A) ve T hücresi ve bu yeni endotel düzlemsel APC modelinde (C) ile karşılaştırıldığında, geleneksel bir düzlemsel lipid iki katmanlı APC modeli (B). , Dramatik, yani mekansal (z görüntüleme düzey çözünürlük ~ 1 mikron) ve temporal (ödün; Profesyonel ZPT fizyolojik immünolojik sinaps sağlar, ancak (çözünürlük ~ 0.2 mikron Optimum xy görüntüleme düzlemine göre yani) kötü amaçlı hücre-hücre arabirimi sunar ihtiyacı nedeniyle defalarca görüntüleme çözünürlüğü) tüm z görüntüleme uçakları ile tarayın. Iki tabakalı modelleri Optimal zamanmekansal görüntüleme çözünürlüğü sağlar düzlemsel topoloji var, ama aynı zamanda son derece, fizyolojik olmayan ve sert basitleştirilmiştir. Bu endotel hücre modeli fizyolojik bir ortamda optimum mekansal ve zamansal görüntüleme çözünürlüğü sağlamak için klasik bir APC fizyolojik substrat ile lipit bilayers düzlemsel topolojisini birleştirir.m / files / ftp_upload / 53288 / 53288fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. Önceki çalışma kısmen uygun xy görüntüleme paralel olan tek bir planına T hücresi aktivasyonu aracılığı ile yüzey sabitleme örneğin, uygun uzaysal çözünürlük (sağlar geliştirmek düzlemsel alt-tabaka bir model (yani, lipid çift tabakaları ve antikor-kaplı yüzeyler), bu engeller etrafından olan düzlem) 11-15 (Şekil 1B). Bu modeller, dinamik aktin / TCR sinyalizasyon mikro kümelerin 7,11-14 keşif dahil olmak üzere T hücrelerinin antijenik sinyalizasyon, kontrol moleküler / hücre içi dinamikleri önemli bilgiler kolaylaştırmıştır. Bununla birlikte, bu modeller doğal basitleştirilmiş edilir, yanı sıra, katı (Şekil 1B) (3-boyutlu bir topolojik özelliklerin geliştirilmesi / çalışma engelleyen). Bu nedenle, phy böyle bulguları ilişkilendirmek nasıl belirsizdirsiologic hücre-hücre immün gözetim. Hala understudied rağmen, damar ve lenfatik endotel hücreleri büyük olarak ortaya çıkmaktadır (yani ~ 1000 kat tüm profesyonel APC&#39;lerce daha numaraları, daha fazla) &#39;yarı profesyonel&#39; APC &#39;16-18 periferik bölmesi. (Örneğin, CD40, LFA3, ICOSL, 4-1BB, OX40L, TL1A, PD-L1; fakat CD80 ve CD86) Bu hücreler, MHC-I-, MHC-II-ve ko-stimülatör moleküllerin çok sayıda dile ve stratejik olarak Onlar özel nöbetçi işlevleri 16-18 hizmet kan doku arayüzünde konumlandırılmış. Daha önceki çalışmalar, endotel hücrelerinin etkili bir efektör / bellek ama saf olmayan, T hücrelerini 19-25 yeniden stimüle edebilirler. Bu nedenle, endotelyal hücreler gibi T hücresi aktivasyonu, farklılaşması, hafıza ve tolerans 16,17,26 yerel etkisi gibi periferik dokular içinde adaptif bağışıklık tepkilerinin, efektör aşamasında özel APC rol oynaması olasıdır. Criin vitro yetiştirilen ola- rak, endotel hücreleri neredeyse düzlemsel hücre yüzeylerine formu (floresan protein muhabir olan, örneğin) kolayca transfekte bulunmaktadır. Bu özellikler, hücre-hücre etkileşimleri 19,27 sırasında topolojik dinamiklerin yüksek uzaysal çözünürlüklü görüntüleme için idealdir. Böylece endotel hücreleri tepkileri (Şekil 1C) 19,20 antijen tanıma sürücü ve düzenleyen moleküler / hücre içi biçimlenme mekanizmalarının çalışma için belirgin uygun bir fizyolojik &#39;düzlemsel hücresel APC&#39; model olarak hizmet olabilir. Daha önce yapışma ve transendoteliyal göç 27 sırasında lökosit-endotel etkileşimi detaylarını incelemek için (plazma zarı ve sitoplazmada floresan protein üreticileri ile endotelin hücrelerin transfeksiyonu dahil) tamamlayıcı görüntüleme tekniklerini kurulan lökositler aktif, dinamik tarafından endotel yüzeyine soruşturma olduğunu gösterdi Ekleme birmikronaltı ölçek d retraksiyonu, aktin-zengin silindirik çıkıntılar (~ çap ve derinlikte 200-1,000 nm) invadosome benzeri çıkıntılar (yani, &#39;ILPS&#39;) 27,28 olarak nitelendirdi. Bu görüntüleme yaklaşımları daha da bildirilen 19,20 olarak T hücre-endotelyal immünolojik sinaps yüksek uzaysal çözünürlüklü görüntüleme için ilk yöntemler geliştirmek endotel APC fonksiyonunun yararlanmak ve ayrıca burada açıklamak için protokollerin oluşturulması ile birlikte genişletilmiştir. Bu yeni düzlemsel hücresel APC modelinden elde edilen bir merkez bulgu T hücresi ILPS ilk Ag algılama teşvik ve sonraki sinyalizasyon sürdürülmesi hem işlev olmasıdır. Nitekim, (stabilize ve kalsiyum akı başlangıç ​​yanıt tahakkuk eden) TCR ve aktif sinyal gibi PKC-Q, ZAP-70, fosfotirosinin ve HS1 düşündüren moleküllerde gösteri zenginleştirme birden ILPS&#39;nin diziler. Bu nedenle, ILPS TCR-sinyal mikro üç boyutlu fizyolojik eşdeğer temsil etmek gibi görünüyordüzlemsel iki tabakalı modellerinde görülen kümeler. Bu yaklaşım, bu nedenle, hassas ortaya / raporlar, moleküler ve mimari (ve biyomekanik zımni) dinamikleri aksi saptanabilir değil. Burada açıklanan yöntem adaptif bağışıklık tepkilerinin temel mekanizmaları sorgulamak için yeteneğimizi geliştirmek amacıyla profesyonel APC ve yapay APC substrat modelleri arasında köprü için yararlı olacaktır. Burada odaklama CD4 + efektör Th1-tipi / hafıza hücresinin aktivasyonuna iken, aşağıda ele alındığı gibi, bu temel yaklaşım, hali hazırda, T hücre türleri ve Ag&#39;lerin geniş bir çalışma için modifiye edilebilir.

<table><tbody><tr><td>BD Vacutainer streç lateks içermeyen turnike</td><td>BD Biosciences</td><td>367203</td><td></td></tr><tr><td>BD alkollü bezler</td><td>BD Biosciences</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutainer Safety-Lok</td><td>BD Biosciences</td><td>367861</td><td>K2 EDTA</td></tr><tr><td>BD Vacutainer Buton Kan Alma Seti</td><td>BD Biosciences</td><td>367335</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8758-1L</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GE17-1440-02</td><td>Kullanmadan önce RT'ye getirin</td></tr><tr><td>FCS-Optima</td><td>Atlanta Biologics</td><td>s12450</td><td>Isı ile etkisiz hale getirilmiş</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4458-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td></td></tr><tr><td>stafilokokal enterotoksin B</td><td>Toksin Teknolojisi</td><td>BT202RED</td><td>PBS</td></tr><tr><td>toksik şok sendromu toksini 1</td><td>Toksin Teknolojisi</td><td>TT606RED</td><td>Stok çözeltisi PBS</td></tr><tr><td>insan IL-15</td><td>R& D Systems</td><td>247-IL-025</td><td>PBS PBS Life Technologies'de stok çözeltisi 50ug/ml</td></tr><tr><td></td><td></td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>33016-015</td> H20 HMVEC-d Ad-Dermal MV Endo Hücreleri <td>Lonza</td></tr><tr><td></td><td></td><td>CC-2543</td> içinde stok çözelti 1mg / ml Diğer <td>İnsan Mikrovasküler EC'leri kullanılabilir, yani HLMVEC'ler</td></tr><tr><td>EGM-2 MV mermi kiti</td><td>Lonza</td><td>CC-3202</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-4174</td><td>Stok çözeltisi 10x, PBS</td></tr><tr><td>amaxa-HMVEC-L Nükleofektör Kiti</td><td>Lonza</td><td>vpb1003</td> Adım <td>4 için Gerekli Kit</td></tr><tr><td>IFN-g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3265</td> H20 <td></td></tr><tr><td>TNF-alfa 10ug</td> içinde stok çözeltisi 1mg/ml, insan <td>Yaşam Teknolojileri</td><td>PHC3015</td><td>H20 fenol içinde 1 mg / ml Stok çözeltisi</td></tr><tr><td>Kırmızı içermeyen HBSS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>14175-103</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP299-100</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016-100G</td><td>H20 içinde stok çözelti 1M</td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>208337</td><td>H20</td></tr><tr><td>İnsan Serumu albümininde</td> stok çözeltisi <td>1M Sigma-Aldrich</td><td>A6909-10ml</td><td></td></tr><tr><td>Immersol 518 F floresan içermeyen Daldırma yağı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-624-66A</td><td></td></tr><tr><td>Fura-2 20x50ug</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>F1221</td> DMSO pEYFP-Mem'de <td>stok çözeltisi 1mM</td></tr><tr><td>(Mem-YFP)</td><td>Clontech</td><td>6917-1</td><td></td></tr><tr><td>pDsRed-Monomer (Çözünür Sitoplazmik DsRed)</td><td>Clontech</td><td>632466</td><td></td></tr><tr><td>pDsRed-Monomer Membran (Mem-DsRed)</td><td>Clontech</td><td>632512</td><td></td></tr><tr><td>pEGFP-Actin</td><td>Clontech</td><td>6116-1</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td><td>Life Technologies</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehit çözeltisi %37</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BP531-500</td><td>Toksik, davlumbaz</td></tr><tr><td>kullanın Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-5ML</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Falcon 15mL Konik Santrifüj Tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-70C</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50mL Konik Santrifüj Tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Doku Kültürü İşlem Görmüş Şişeler T25</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-126-9</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Falcon Doku Kültürü İşlem Görmüş Şişeler T75</td><td>Fisher Scientific</td><td>&nbsp; 13-680-65</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Corning Hücre Kültürü Tedavi Edilmiş T175</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-126-61&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cam lameller&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>12-545-85&nbsp;</td><td>12 mm çap</td></tr><tr><td>&nbsp; Falcon Doku Kültürü Plakaları 24 kuyulu</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1</td><td></td></tr><tr><td>Delta-T plakaları</td><td>Bioptechs</td><td>04200415B</td><td></td></tr><tr><td>Wheaton Tek Kullanımlık Pastör Pipetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-8D</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Eppendorf tüpü ve nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>05-402-25</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; ICAM1 fare anti-insan</td><td>BD Biosciences</td><td>555509</td><td></td></tr><tr><td>HS1 fare anti-insan</td><td>BD Biosciences</td><td>610541</td><td></td></tr><tr><td>Anti-İnsan CD11a (LFA-1alpha) Saflaştırılmış</td><td>ebioscience</td><td>BMS102</td><td></td></tr><tr><td>Anti-İnsan CD3 Alexa Fluor&reg; 488</td><td>ebioscience</td><td>53-0037-41</td><td></td></tr><tr><td>Anti-MHC Sınıf II antikor&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab55152</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Talin 1 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab71333</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PKC teta antikoru&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab109481</td><td></td></tr><tr><td>fosfotirozin (4G10 Platin)</td><td>Millipore</td><td>50-171-463</td><td></td></tr><tr><td>Nükleofektör II</td><td>Amaxa Biosystems</td><td></td><td>Adım 4 için gerekli elektroporatör</td></tr><tr><td>Zeiss Axiovert</td><td>Carl Zeiss MicroImaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM510&nbsp;</td><td>Carl Zeiss MicroImaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axiovison Yazılımı</td><td>Carl Zeiss MicroImaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NU-425 (Seri 60) Biyolojik Güvenlik Kabini</td><td>NuAIRE</td><td>Nu-425-600</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Forma STRCYCLE 37 & derece; C,% 5 CO2 Hücre kültürü İnkübatörü</td><td>Fisher Scientific</td><td>202370</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj 5810</td><td>Eppendorf</td><td>EW-02570-02</td><td></td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; Z359629</td><td>Parlak Çizgili Hemositometre</td></tr><tr><td>Isotemp Su banyosu model 202</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-2</td><td></td></tr></tbody></table>

görüntüleme İmmünoloji synapse dynamics için bir endotel hücre modeli düzlemsel

An Endothelial Planar Cell Model for Imaging Immunological Synapse Dynamics

Adaptif bağışıklık, T hücreleri ve antijen sunan hücreler (&quot;APC &#39;ler&#39;) arasındaki dinamik etkileşimler ile düzenlenir &#39;immünolojik sinaps&quot; olarak adlandırılır. Bu samimi hücre-hücre arayüzleri içinde MHC / Ag-TCR, F-aktin, yapışma ayrık alt hücresel kümeleri ve sinyal molekülleri oluşturur ve hızla pişmanlık. Bu dinamikler, kritik verimlilik ve geliştirmek bağışıklık tepkilerinin kalitesi hem belirleyicileri ve dolayısıyla patolojik bağışıklık karşı koruyucu olması düşünülmektedir. Fizyolojik APC &#39;ile immünolojik sinaps mevcut anlayış elde görüntüleme çözünürlüğü yetersizliği ile sınırlıdır. Yapay alt tabaka modelleri (örneğin, düzlemsel lipid bilayers) mükemmel çözünürlük sunan ve son derece değerli araçlar olmuştur rağmen, doğal olmayan fizyolojik ve oversimplified bulunmaktadır. Vasküler ve lenfatik endotel hücreleri &#39;yarı mesleğinin önemli bir çevresel doku (veya stroma) bölmesi olarak ortaya çıkmıştırEl APC&#39;ler &#39;. (Profesyonel APC &#39;moleküler makinelerin çoğu ifade) Bu APC&#39;Ier neredeyse düzlemsel hücre yüzeyini oluşturan benzersiz özelliğe sahiptir ve (floresan protein gazetecilere, gibi) kolayca transfectable vardır. Burada temel bir yaklaşım tarif edilecektir yeni ve geliştirilmiş bir görüntüleme ve temel antijenik sinyal süreçlerinin sorgulanmak üzere fizyolojik &#39;düzlemsel hücresel APC modeli&#39; olarak endotel hücreleri uygulamak.

Endotel hücreleri kullanılarak ve fizyolojik karmaşıklığı ve profesyonel APC&#39;lerin deformabilitesi ile düzlemsel lipid bilayers modelin çözünürlüğü avantajlarını birleştiren bir roman görüntüleme yaklaşımı (Şekil 1) geliştirilmiştir. 2 ile bu gözlenen tipik göç, kalsiyum akı ve topolojik dinamikleri örnekleri sağlar Şekil yaklaşım. Endotel üzerindeki sarkma yokluğunda, SAG-spesifik CD4 + Th1 lenfositler hızla polarize, yay...

Adaptif bağışıklık, T hücreleri ile antijen sunan hücreler arasında oluşan dinamik 'immünolojik sinapslar' tarafından kontrol edilir. Bu protokol, endotel hücrelerinin hem az çalışılmış fizyolojik APC'ler hem de yeni bir 'düzlemsel hücresel APC modeli' türü olarak araştırılması için yöntemleri tanımlar.

Görüntüleme İmmünoloji Synapse Dynamics için bir Endotel Hücre Modeli Düzlemsel

Adaptive immunity is regulated by dynamic interactions between T cells and antigen presenting cells (&#39;APCs&#39;) referred to as &#39;immunological ...

Bu tekniğin genel amacı, temel antijenik sinyalizasyon süreçlerini araştırmak için endotel hücrelerini yeni bir düzlemsel antijen sunan hücre model tipi olarak kullanmaktır. Bu yöntem, alt hücresel ve moleküler yeniden şekillenme dinamiklerinin immünolojik sinaps içinde mekansal ve zamansal olarak nasıl koordine edildiği gibi, adaptif bağışıklık alanındaki temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, endotelyumun neredeyse düzlemsel bir APC yüzeyi oluşturmasıdır.Bu durum, fizyolojik olarak karmaşık ve şekillendirilebilir bir hücre yüzeyi bağlamında, optimal uzaysal-zamansal çözünürlükle görüntüleme yapılmasına olanak tanır. Bu yöntem CD4 pozitif TH1 efektör bellek hücresi aktivasyonuna odaklanmış olsa da, çeşitli T-hücresi tiplerinin antijen ve sinyalizasyon süreçlerinin incelenmesi için de uygulanabilir. Bugün, Chris ve ben size ikinci aşamayı nasıl gerçekleştireceğinizi göstereceğiz. İlk olarak, primer insan akciğer veya dermal mikrovasküler endotel hücrelerini, nükleer transfection yoluyla membran YFP ve çözünür DS-red ile kodla transfekte ederek başlayın ve transfekte edilen hücreleri canlı hücre görüntüleme kültür plaklarına ekin.Ertesi gün, endotel hücrelerde MHC II ekspresyonunu indüklemek için hücre kültür ortamını interferon gamma ile takviye edilmiş taze ortamla değiştirin; ardından üç. günün 24 saat sonrasında hücreleri 20 ng/mL TNF alpha ile 30 ila 60 dakika boyunca stimüle edin. Deneye başlamadan önce, endotel dokusunu 37 °C'de her biri 1 µg/mL konsantrasyonda olan bakteriyel süperantijenler stafilokokal enterotoksin B ve toksik şok sendromu toksini 1 ile inkübe edin. İnkübasyon sırasında, ilgili lenfosit kültüründeki canlı hücre sayısını belirleyin ve 2 × 10⁶ hücreyi 15 mL'lik konik bir tüpe aktarın.Ardından, hücreleri santrifüjleyin ve hücre kümeleri kalmayacak şekilde peleti iki mililitre taze hazırlanmış tampon A içerisinde yeniden süspanse edin. Daha sonra T-hücresi örneğine iki mikromolar RA ekleyin, tüpün kapağını kapatın ve boyanın hücre süspansiyonuna homojen şekilde dağılması için tüpü hemen tersyüz edin.37 °C'de 30 dakikalık bir inkübasyonun ardından, etiketlenmiş lenfositleri santrifüjle çöktürün ve hücreleri canlı görüntüleme için 20 ila 40 µL taze tampon A içerisinde nazikçe ancak tamamen resüspande edin; hücreleri mikroskop sistemine yerleştirin ve uygun görüntü yakalama yazılımını açın. Otomatik çok kanallı time-lapse görüntüleme için uygun parametreleri, ayrıca 10 ila 30 saniyelik bir görüntüleme aralığını ve yaklaşık 20 ila 60 dakikalık bir toplam süreyi ayarlayın. Ardından, objektife taze yağ ekleyin.0,5 milliliters tampon A içeren bir mikroskop kabını ısıtma tablası adaptörüne yerleştirin ve daha önceden 37 degrees Celsius'ye ayarlanmış olan adaptörü hemen açın. İki ila üç dakikalık dengeleme süresinin ardından, 20 microliter pipet kullanarak dinlenmiş RA iki yüklü lenfositleri yerleştirilmiş mikroskop kabı haznesine ekleyin ve parlak alan görüntülemeyi açın. Işık yolunu okülerlere yönlendirin ve objektifi mikroskop kabının tabanıyla temas ettirmek için kaba odaklama düğmesini kullanın.Ardından, kabın dibine çökmüş T hücrelerini bulmak için okülerü ve ince odaklama düğmesini kullanın ve uygun hücreler bulunduğunda, XY tabla kontrollerini kullanarak en az 10 hücre içeren bir alan seçin. Aydınlık alan modundan floresan ışık kaynağına ve IP görüntülemeden CCD kameraya geçiş yapın. Görüntüleme parametrelerini optimize edin ve ardından dinlenme halindeki Fira 2 3 40 ve FIRA 2 3 80 görüntülerini elde edin.Başarılı sonuçlar elde etmenin temel adımlarından biri, yeterli sinyal toplandığından ve FIRA 2 durumunda bazal 343/80 oranının bire yakın olduğundan emin olarak floresans elde etme parametrelerinin dikkatle optimize edilmesidir. FIRA 2 pozlama süreleri ayarlandığında, T hücreleri içeren kabı, tek kullanımlık bir transfer pipeti kullanarak endotelyal hücrelerin bulunduğu bir mikroskop kabıyla değiştirin; medyumu hızla uzaklaştırın ve hücreleri bir kez 1 mL önceden ısıtılmış Tampon A ile yıkayın, ardından yıkama sıvısını 0,5 mL taze Tampon A ile değiştirin. Objektifi kullanarak, parlak floresan veren endotelyal hücrelerin sağlıklı göründüğü alanları belirleyin. Daha sonra, tıpkı FIRA 2 için gösterildiği gibi, membran YFP ve DS RED için elde etme parametrelerini ayarlayın.Her bir kanaldaki ortalama floresan sinyal yoğunluğunun, detektörün dinamik aralığının %25 ile %75'i arasında kaldığından emin olun. Canlı hücre görüntüleme deneyini gerçekleştirmeden önce, otomatik yazılımla bir baz hattı oluşturmak için yalnızca endotel hücrelerin birkaç aralıkta görüntülerini yakalayın. Ardından, küçük hacimli bir pipet ucunu objektifin merkezine yakın bir noktada medyanın içine yerleştirin.Konsantre fira ve yüklü iki lenfositin beş mikrolitrini mikroskop kabının görüntüleme alanının merkezine yavaşça aktarın. Lenfositler çökerken, T hücresi endotel hücre ara yüzeylerinin odak düzleminde kaldığından emin olmak için odaklamada ince ayarlar yapın. 40x ve 63x objektiflerle, alan başına 10 ila 20 hücre optimaldir.İstenen gözlem aralığından sonra görüntülemeye devam edin ve maksimum kalsiyum akışı başlatmak için CIN'i doğrudan mikroskop kabına iki mikromolar son konsantrasyona ulaşacak şekilde pipetleyin. Hücrelere uygulamalar yaparken, immün sinaps yeniden şekillenmesinin optimal çözünürlüğünü sağlamak için endotelyumun apikal membran YFP etiketli yüzeyinde keskin odaklamayı korumaya dikkat edin.Endotel üzerinde süperantijen yokluğunda, süperantijene özgü CD4 pozitif TH1 lenfositleri hızla yayılır, polarize olur ve endotel hücreleri üzerinden lateral olarak göç eder. Bu süreçte lenfositler, endotel yüzeyine doğru kısa ömürlü çıkıntılar veya ILP'ler uzatır; bunlar süperantijen varlığındaki ayak izlerine benzer şekilde, membran YFP floresan halkaları olarak belirginleşir. ILP'lerin tetiklediği yakın hücre-hücre temasları, immünolojik sinaps içerisinde stabilize olmuş ILP'lerin birikimine yol açan bir kalsiyum akışının başlatılmasıyla ilişkilidir. Bu tür ILP dizilimleri, sürdürülen kalsiyum sinyallemesi ile bağlantılıdır.T-hücresi ve endotel hücresi etkileşimleri sırasında oluşan membran floresans halkaları, bu halkaların yer değiştirmiş ve dışlanmış sitoplazma bölgeleriyle mekansal ve kinetik olarak korele olduğunun gösterilmesiyle onaylandığı üzere, endotel hücrelerde belirgin invajinasyon noktalarını tetikleyen T-hücresi çıkıntılarına karşılık gelir. Endotel ve T-hücrelerinin süperantijen varlığında birlikte inkübe edilmesinden sonraki dakikalar içinde, adhezyon ve antijenik sinyalleşme ile ilişkili sinyal molekülleri, immünolojik sinapsın pota izleri ve ILP'leri içinde birlikte zenginleşir. Gerçekten de, T-hücresi endotel immünolojik sinapsı, antijen tanıma moleküler mekanizmasının zenginleştiği ve antijen sunan hücre yüzeyine doğru uzanan T-hücresi ILP'leri ile noktalanmış, belirgin bir üç boyutlu mimari sergiler.Bu yaklaşımla, mevcut PC modellerindeki temel engeller aşılabilir; böylece aksi takdirde tespit edilemeyen 3D hücre altı mimarisinin ve fizyolojik T-hücresi PC arayüzlerinin hızlı yeniden şekillenmesinin gözlemlenmesi mümkün olur. Bu durum, antijenik sinyalizasyon süreçlerinin anlaşılmasında yeni seviyeler için potansiyel sunmaktadır.

an-endothelial-planar-cell-model-for-imaging-immunological-synapse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Desteklenen düzlemsel bilayers immünolojik sinaps moleküler etkileşimleri modellemek için kullanılabilir güçlü araçlardır. Burada, lipid bilyer üst broşür sinaps oluşumunu modüle ve sinaps oluşumu TIRF mikroskobu kullanarak görselleştirmek için bilinen hücre adezyon proteinleri demirleme için yöntemler göstermektedir.

İmmünolojik Sinapslar ve Kinapse Eğitim Oluşumu için desteklenen Düzlemsel Bilayers

Bu makale toplam iç yansıma floresans (TIRF) mikroskop camı desteklenen düzlemsel bilayers bir HIV-1 zarf kaynaklı virolojik sinaps oluşumu görselleştirmek için bir yöntem açıklanır. Yöntem ayrıca, HIV-1 zarfı ile endüklenen virolojik sinaps oluşumu sırasında meydana gelen sinyal molekülleri aktivasyonu ve dağıtılması algılamak için immünfloresans boyama yöntemi ile kombine edilebilir.

Görüntülemede HIV-1 Zarf bağlı Virolojik Synapse ve Sentetik Lipid Bilayers üzerine Sinyal

Bu video, T lenfositleri ile floresan antijenleri taşıyan epitel hücreleri arasındaki etkileşimleri araştıran immünolojik sinaps topolojisinin canlı hücre görüntülemesini göstermektedir. Floresan mikroskobu, endotel hücrelerinde kırmızı sitoplazma yer değiştirmesini ve sarı zar halkalarını ortaya çıkarır ve bu da immünolojik sinapsların oluşumunu gösterir.

Canlı Hücre Görüntüleme ile İmmünolojik Sinaps Topolojisinin Değerlendirilmesi

Kaynak: Ing-Esteves, S. &amp; Lefebvre, J. L. Genetik Olarak Hedeflenmiş Retinal Hücre Popülasyonlarının Seyrek Adeno-İlişkili Virüs Etiketlemesini Kullanarak Nöronal Arborizasyonun Hızlandırılmış Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2021)Bu video, canlı fare retinal eksplantlarında dendritik dinamikleri görselleştirmek için konfokal mikroskopi kullanımını göstermektedir. Retinayı konfokal bir mikroskop altında stabilize etmek, yıldız patlaması amakrin internöronlarını görselleştirmek için epifloresan...

Fare Retinal Eksplantlarında Nöronal Dendritik Dinamiklerin Hızlandırılmış Konfokal Görüntülenmesi

Burada, immünolojik sinapslar oluşturmak için cam destekli lipid çift katmanlı tekniğin, uyarılmış emisyon tükenmesi (STED) mikroskobunun süper çözünürlüklü görüntüleme tekniği ile bir kombinasyonunu açıklıyoruz. Bu protokolün amacı, kullanıcılara bu iki tekniği başarılı bir şekilde uygulamak için gerekli talimatları sağlamaktır.

Bir Cam destekli Planar çift katlı lipid Doğal Öldürücü Hücre İmmünoloji Synapse Süper çözünürlüklü Görüntüleme

Işık mikroskobu teknikleri, biyokimyasal tahlillerle birleştiğinde, netrin bağımlı akson dallanmasında SNARE aracılı ekzositozun katılımını aydınlatmaktadır. Bu tekniklerin kombinasyonu, akson dallanmasını ve hücre şekli değişikliğini kontrol eden moleküler mekanizmaların tanımlanmasına izin verir.

Kombine Metodolojileri kullanan Akson Dallanman ve Nöronal Morfogenez sırasında Plazma Membran Teslimat Rolü tanımlayın

Burada, biz birincil insan T hücreleri ve antijen sunan hücreler arasındaki bağışıklık sinapslarda nitel ve nicel analizi için tam bir iş akışı tanımlamak. Yöntem alma ve nispeten kısa bir süre içinde birkaç bin hücre görüntülerin değerlendirme sağlar görüntüleme akış sitometresi temel alır.

Akış Sitometresi Imaging kullanılarak insan sisteminde bağışıklık Synapse nitel ve nicel analiz

Bu protokol hem immünolojik sinaps oluşumunu hem de sonraki polarize salgı trafiğini immünolojik sinapsa doğru görüntüler. Hücresel konjugates bir süperantijen-darbeli Raji hücre (bir antijen sunan hücre olarak hareket) ve Jurkat klonu (bir efektör yardımcı T lenfosit olarak hareket) arasında kuruldu.

İnsan İmmünolojik Sinaps Görüntüleme

Bu protokol, nöro-glio-vasküler yapıların uzunlamasına görüntülemesi, hem sağlıklı hem de hastalıklı koşullarda fonksiyon ve fonksiyon için kullanılabilecek kronik bir kafatası pencere implantasyon tekniğini açıklamaktadır. Genellikle tercih edilirken bazı kritik sınırlamalara sahip olan transkraniyal görüntüleme yaklaşımına tamamlayıcı bir alternatif olarak hizmet vermektedir.

Farelerde Nöro-İmmün Dinamiğin Vivo Görüntülemesinde Tekrarlayan Performans için Hassas Beyin Haritalaması

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

Bu makale, retinadaki postsinaptik nokta ve mikroglia hareketliliğini görselleştirme ve nicelleştirme yöntemini spinning disk konfokal mikroskopisi kullanarak göstermektedir.

Hasta Sare Retinasında Mikroglia Dinamikleri ve Sinapslarla Etkileşimlerin Canlı Görüntülemesi ve Karakterizasyonu

Keşfedin, endotel hücrelerini düzlemsel antijen sunan hücre modeli olarak kullanarak immünolojik sinaps dinamiklerini ve T hücre aktivasyon mekanizmalarını yüksek çözünürlüklü görüntüleme ile inceleme yöntemini.

Görüntüleme İmmünoloji Synapse Dynamics için bir Endotel Hücre Modeli Düzlemsel

Daha fazla video keşfet