MiRNA Beyin Özgül demonte için Stereotaktik Injection Basit Alternatif

Burada, farelerin beynindeki mikro RNA'yı spesifik olarak parçalamak için modifiye edilmiş bir antisens oligonükleotid ile hücreye nüfuz eden bir peptitin kullanımını gösteriyoruz. Bu, 29 Mayıs'a karşı bir panzehir tasarlanarak başarıldı. Bu çalışmada, mikroRNA'ların kilitli nükleik asit modifikasyonlarını hedeflemek için antigo erkekleri kullandık.

Yani, LNA modifikasyonları beş farklı pozisyonda dahil edildi. Bunda, LNA modifikasyonlarının dahil edilmesi, mikro RNA'ya bağlanma afinitesini arttırır. Ayrıca, çekirdek direnci verir ve bu nedenle mikroRNA hedefleme verimliliğini artırır.

ANTIGO MAR'ın peptit ile kompleksleri in vitro olarak hazırlandı ve kuyruk damarı yoluyla farelere enjekte edildi. Mikro RNA'nın yıkılması, bu mikroRNA'nın ataksiye dahil olduğunu düşündüren davranış değişikliklerine neden oldu, tedaviden sonra yürüyüşte gözle görülür bir değişikliğe neden olmak için art arda üç enjeksiyon yeterliydi, beyin dokusu toplandı ve mikroRNA'nın yıkılması doğrulandı. CPP'ler veya kendi kendine nüfuz eden peptitler, son zamanlarda nükleik asit iletimi için çekici taşıyıcılar olarak ortaya çıkmıştır.

Burada, sistemik dolaşıma uygulandıktan sonra, bu durumda nöronal hücreler olan belirlenmiş hedef bölgesine ulaşacak ve LNA'nın bu hücrelere uygun şekilde salınmasını sağlayacak olan LNA ile yüke dayalı kompleksleşmeye uğrayabilen, arginin açısından zengin bir nörotropik peptit kullandık. ME 29 ailesi üyelerinin sekansları mease'den alındı ve 16 MER antisensi, kompleksleri hazırlamak için eşit aralıklı beş pozisyonda kilit nükleik asit modifikasyonları ile sentezlendi. Uygun konsantrasyonlardaki peptit ve antigo çözeltileri steril %10'luk glukoz içinde ayrı ayrı hazırlandı.

Aseptik koşullar altında. Antigo çözeltisi, hafifçe karıştırılarak peptit çözeltisine yavaş yavaş damla ilave edildi. Yavaş ekleme ve hafif karıştırma, boyutu trik ölçekte olan mono dağılmış komplekslerin oluşumu için kritik öneme sahiptir.

Antigo, her seferinde üç eşit parçaya ilave edildi, karıştırma için bir dakika izin verildi, ardından karıştırmadan bir dakika inkübasyon yapıldı. Hızlı ilave, komplekslerin toplanmasına ve çökelmeye yol açabilir. Antigo kompleksi artık enjeksiyona hazırdır.

Kompleks, bir kuyruk veni enjeksiyonu yoluyla uygulandı. Fareler aynı kafese geri gönderildi. Ataksi için davranışsal deneyler, enjeksiyondan üç saat sonra günlük olarak gerçekleştirildi.

Fare kuyruğundan tutuldu ve çevredeki herhangi bir nesneye dokunmasına izin vermedi. Arka bacakların 10 saniye boyunca nasıl yayıldığına dikkat edin. Çıkıntı testinde, farelerin kafesin ince çıkıntısı boyunca yürümeleri istendi.

Fareler ince bir kanaldan geçerler, sadece arka ayakları olan kalın emici kağıt mürekkepli bir şerit üzerinde mürekkepli ayaklarla ayak izleri bırakırlar. Kafa karıştırıcı verileri önlemek için Dört uzuvdan, görelim Antigo tedavisinin etkisi. Beyni ve diğer dokuları tedavi edilen ve kontrol edilen farelerden izole ettik.

R VG peptidinin, özellikle beyne floresan etiketli bir siRNA ilettiğini, ancak karaciğer gibi diğer dokulara vermediğini bulduk. Nörotropik olmayan bir kontrol peptidi olan RVM, siRNA'yı karaciğere iletti. ANTIER 29 ile tedavi edilen fareler arka bacakta kusurlar gösterdi.

Sıkıştırılmış bir anme ile tedavi edilen Kenetlenme Kontrollü Fareler, çıkıntıyı müzakere edebilir, ancak MARE 29'a karşı anme ile tedaviden sonra, fareler bu tahlilde hafif kusurlar gösterdi. Ayak izi Tahlilinde, tedavi edilen farelerde adım uzunluğunda çarpıcı bir kısalma vardı. Ek olarak, mikro NNA bazlı terapötiklerin geliştirilmesi için orta 29 A ve orta 29 B seviyelerinin aşağı regüle edildiğini QR tpcr aracılığıyla doğruladık.

Anti mikroRNA'ların beyne spesifik olarak verilmesi, kan beyin bariyeri nedeniyle bir zorluktur. Burada sunulan tekniği kullanarak, anti mikroRNA'ların beyne geleneksel iletim yönteminden kaçınabiliriz. Bu yöntem, mikroRNA'ların yıkılmasını teknik olarak mümkün kılar ve doku özgüllüğünü artırır.