Name: Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Öğrenin, stereotaktik alet kullanmadan farelerde intraserebroventriküler Amyloid beta enjeksiyonu yöntemiyle Alzheimer benzeri davranış bozukluklarını akut olarak nasıl tetikleyebilirsiniz. Bu teknik, nörobiyoloji ve ilaç keşfi araştırmaları için hızlı bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu araştırma Kore Sağlık ve Refah Bakanlığı, Cumhuriyet (: H14C04660000 hibe sayısı) tarafından finanse Kore Sağlık Sanayi Geliştirme Enstitüsü (KHIDI) aracılığıyla Kore Sağlık Teknoloji Ar-Ge Projesi hibe ile desteklenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri (1978 revize NIH Yayınları No. 8023) Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi National Institutes göre yürütülen ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi ile yapıldı KIST (Seul, Kore). 1. Hayvan hazırlanması <ol><li> 7 haftalık erkek ICR farelere (veya C57BL / 6) bir grup hazırlayın. </li><li> Fareler homeostazı geri taşıma sonra 3-7 gün boyunca aklimasyonundan sürecinde gidelim. Genel olarak, her bir kafeste 4-5 fareden oluşan bir gruba yer ve 12/12 saat ışık / karanlık döngüsü ile, 22-23 ° C ve% 40 nemde onları korumak. Su ve gıda ad libitum sağlamak. aklimasyonundan sürecinin yeni konut, gıda, su nakliye ve adaptasyon stres kurtarma izin için kritik öneme sahiptir ve yeni bir kafes ve ışık döngüsü yanı sıra koku Not:. Bu deneyde, fareler, Spe bulunan tek tek havalandırma kafesler (IVCs) yerleştirildireli Patojen Free (SPF) filtreler içten tesisi </li><li> Her fare tartılır ve kimin ağırlığı ortalama ±% 10 sapma konuları hariç. </li><li> iki gruba konu bölün: araca uygulanan grup (Aβ (-)) ve Aβ-uygulanan grup (Aβ (+)). Deney, belirli bir ilaç adayı etkinliğini test etmek için ise, dört gruba fareler bölme (1) Aβ (-) / ilaç (-), (2) Aβ (-) / ilaç, (+) (3) Aβ (+) / ilaç (-), ve (4) Aβ (+) / ilaç (+). </li></ol> 2. Aβ Peptid hazırlanması <ol><li> Önceden soğutulmuş 1,1,1,3,3,3-heksafluoro-2-propanol (HFIP) herhangi bir agrega çözülür ve 6 homojen peptidler yapmak için olan kimyasal sentez 5 üzerinden ya da ticari kaynaklardan elde edilen Aβ peptidi, tedavi . <ol><li> (Oda sıcaklığında), 5 dakika, yavaşça girdap için bir su banyosu sonikatör Aβ / HFIP çözeltisi sonikasyon ve oda sıcaklığında 30 dakika boyunca çözeltiden inkübe edin. Tamamen azot ile buharlaştırma yoluyla HFIP kaldırve kullanılana kadar -80 ° C&#39;de homojen Aβ saklayın. </li></ol></li><li> Aβ monomerler hazırlayın: (. 100 uM Aβ,% 10 DMSO,% 90 PBS) 1 mM Aβ dimetilsülfoksit (DMSO) stok yapmak ve seyreltik 10 kat fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) içinde </li><li> Aβ oligomerleri hazırlayın. <ol><li> sırasıyla, 3 veya 7 gün süre ile 37 ° C &#39;de (aşama 2.2.) (Aβ (1-42) ya da Aβ (1-40) ihtiva eder) Aβ monomer çözeltisi inkübe edin. </li><li> Kuluçka süresi boyunca suyun buharlaşmasını önlemek için nemlendirilmiş bir ortam sağlamak için, bir ıslak kağıt havlu ihtiva eden bir fermuarlı torba içinde sızdırmaz kılınmış bir tüp içinde Aβ çözeltisi yerleştirin. </li></ol></li><li> Modifiye edilmemiş proteinlerin 6 foto indüklemeli çapraz bağlantıları olan sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile hazırlanan Aβ oligomerleri teyit edin. </li><li> Araç ICV enjeksiyonundan 10% DMSO içeren kontrol PBS çözeltisi hazırlayın. </li></ol> 3. Şırınga Hazırlama </p&gt; <ol><li> ICV enjeksiyon için 26 G, paslanmaz çelik bir iğne ile mikroenjektör hazırlayın. </li><li> cerrahi işlem için kullanılacak olan tüm diğer aparatı ile otoklav içinde şırınga sterilize edin. Otoklav sonra 20 dakika boyunca UV ışığı altında aparatı yerleştirin. </li><li> Beyin (Şekil 1A) içine enjeksiyon derinliği maksimum doğruluk sağlamak için 3.8 mm, uzunluğunu ayarlamak Parafilm ile mikroşırınga iğne sarın. (B6 fareler için 3.6 mm şırınga iğnesi ayarlayın). Not: Parafilm Sıkıştırma 3,6 mm ventral aşan enjeksiyon derinliği yol açacaktır. İğne yerleştirme sırasında sıkıştırılmış olmaktan Parafilm önlemek için, yoğun iğne birden çok kez sarın. </li><li> iki kez% 70 etanol ile şırınganın iç alanı yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında 30 dakika için bir su banyosu sonikatör şırınga ve iğne sonikasyon. </li><li> iki kez% 70 etanol ile şırınganın iç alanı yıkayın. </li><li> şırıngayı çalkalayınDamıtılmış su ve daha uzun bir süre, 30 dakika boyunca bir çeker ocak içinde tamamen kurutun. Aβ enjeksiyon başlamadan önce 20 dakika boyunca UV ışığı altında temiz bir şırınga bırakın. </li></ol> 4. Aβ enjekte Fare Modeli Hazırlama Not: steril koşullar korumak ve% 70 etanol ve UV maruziyeti ile ICV enjeksiyon için tüm cerrahi aletler sterilize etmek için bir dezenfektan ile çalışma alanını temizleyin. <ol><li> ksilazin (20 mg / kg) ve tiletamin bir karışımın peritoneal içi enjekte ile fare anestezisi HCI / zolazepam · ICV enjeksiyonundan önce, HCI (80 mg / kg). anestezi sırasında vücut ısısını korumak ve ayak tutam tepkisini değerlendirerek yeterli anestezi onaylamak için sıcak bir minder üzerinde fare yerleştirin. </li><li> Uygulama, steril PBS prosedür (Şekil 1B) içinde kornea kurumasını önlemek için her iki göze düşer. </li><li> difficu durumunda yüzeylerinde birden düz dikey çizgiler çizerek iki aynalar hazırlayınlty dik şırınga enjekte. </li><li> hemen yanındaki fare gövdesine ve diğer (M2) başın önünde bir ayna (M1) yerleştirin. Farenin iki göz arasındaki hayali orta hatta M1 paralel tutun ve iki uçak 90 ° açı (Şekil 1C) oluşturmak, böylece M1 dik M2 düzenlemek. Araştırmacı sağ elini ise farenin sol tarafındaki M1 yerleştirin. Araştırmacı solak ise farenin sağ tarafında M1 yerleştirin. </li><li> Farenin alnının ortasına üzerine% 70 etanol sprey ve kuru pamuklu ovalayın. alkolün buharlaşması için vücut ısısının düşürülmesi önlemek için alnına bir alanda çok büyük ıslatmayın. </li><li> Temiz bir pamuklu çubuklarla kullanarak% 2 klorheksidin solüsyonu ile alnına aynı alanı silin. üç kez, her biri toplam alkol ve kloroheksidinler tekrarlayın scrubbings. Gerekirse Possi en aza indirmek için fare alnına saç tıraş Not:kirlenme lük </li><li> bregma bulun. <ol><li> başparmak ve işaret parmağı kullanarak, sıkı, alnın cilt basılı doğrudan her iki gözde çıkıntı dereceye kadar iki gözü üstünde. gergin alnını yapmak ve deri altında kafatası hareketlerini en aza indirmek için geri cilt sürükleyin. </li><li> Üç köşe atayarak görünmez bir üçgen oluşturur: farenin iki gözü ve nokta nerede başparmak ve işaret parmağı buluştuğu, Bregma. (Şekil 1B, Kırmızı ok: Bregma) </li></ol></li><li> Bregma -1.0 ± 0.06 mm posterior derinlemesine sagital sütür yanal ± 0.1 mm 1.8 ve 2.4 mm (Şekil 1D, mavi yıldız: enjeksiyon noktaları her yarımkürede) ölçüm bandı ile enjeksiyon noktası bulun. (B6 fareler için: -0.9 mm arka derinlemesine 1.7 mm lateral ve 2,2 mm) </li><li> kaza ile hava enjeksiyon önlemek için fazla çözelti 10 ul Aβ çözeltisi veya araç ile şırınga doldurun. </li><li> th şırıngae enjeksiyon noktası (protokolde 4.7 anlatılmıştır). enjeksiyon noktasında düzlemine dik şırınga sağlayın. Hizala sabit bir bakış açısı (Şekil 1C) den aynalar çizilen çizgilerle hem aynalarda şırınganın görüntüleri yansıtıyordu. </li><li> parafilm sarma cildi ulaşıncaya kadar iğneyi batırmak başlayın. </li><li> elinizle tutarak şırınga tutun ve duraklamadan yavaşça sn üzerinde 5, Aβ solüsyonu veya aracın 5 ul enjekte etmek için diğer elinizi kullanın. Şırınga boyunca dik olduğundan emin olun. enjeksiyon tamamladıktan sonra, difüzyon için şırıngayı çıkarmadan önce 3 sn 5 bekleyin. </li><li> Orijinal üçgen görev üstlenen herhangi bir gereksiz hareketlerden kafatası korumak için orta baskı. eğmeden şırıngayı çıkartın. </li><li> kurtarma için sıcak yastığı Aβ enjekte fare koyun ve sternum yatma korumak. o bilinç kavuşur kadar sahipsiz fare bırakmayın ve m dönüş yokTamamen iyileşene kadar cerrahi olmayan fareler içeren bir kafes ouse. </li><li> adım 3.3-3.6 göre olan şırınga yıkayın. </li><li> Ameliyat sonrası dönemde farelerin hareketliliğini izlemek ve 5-7 gün farelerde enfeksiyon veya hastalık herhangi bir işaret olup olmadığını kontrol edin. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53308/53308fig1.jpg" /> ICV bölgeye Şekil 1. Aβ enjeksiyon (A) değiştirilmemiş bir şırınga iğnesi ile karşılaştırıldığında Parafilm sarılmış şırınga iğnesi.; (B) PBS kuruluğunu önlemek için gözlerin üzerine düşer; başparmak, işaret parmağı ile fare alnına oluşan üçgen ve farenin iki gözü yanı sıra her bir gözün eşit uzaklıkta hayali orta hat; (C) şırınga iğnesi enjekte dik yardımcı olmak için yüzeylere çizilen birden dikey çizgilerle iki ayna (M1 ve M2); (D) enjeksiyon noktaları ile üçgen, indicated mavi yıldız (bregmadan -1.0 ± 0.06 mm ve sagittally 1.8 ± 0.1 mm) fare her yarımkürede; Yeşil ok: parafilm, Kırmızı ok: Bregma <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53308/53308fig1large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Y-labirent ve Beyin Analiz tarafından Aβ Enjeksiyonu 5. Onay <ol><li> Y-labirent testlerinde 3,7,8 tarafından Aβ-enjekte edilen farelerin çalışma belleği değerlendirmek <ol><li> Bellek açıklarının başlangıcı için enjeksiyondan sonra 3 gün bekleyin. </li><li> üç özdeş silah ile bir siyah plastik labirent kullanılarak Y-labirent testleri gerçekleştirmek etiketli A, B, ve C, her labirentin merkezine 120 ° açıyla hangi dalları dışında (genişlik x uzunluk x yükseklik, 10 cm x 40 cm x 12 cm). </li><li> başlangıç ​​kolu (kol A) bir fare koyun ve konu serbestçe 8 dakika labirent keşfetmek için izin verir. </li><li> Her kolun içine girişlerinin sayısını ölçmek ve Altern hesaplamakher konunun 3,9 arasında tirme oranı. </li></ol></li><li> Doğrudan enjeksiyon uygun ICV bölgesini hedef olmadığını kontrol etmek için postmortem beyin inceleyin. <ol><li> Bölüm 4.1&#39;de tarif edilen aynı prosedür ile fare anestezisi. Sonra servikal dislokasyon ile fare kurban. </li><li> fare başını kesmek ve cerrahi makas kullanarak kafatası açığa cilt kaldırmak. Kafatası dokuları ve kasları çıkarın. </li><li> Beyni zarar vermeden (parietal ve interparietal kemikler arasında) sutura lambdoidea&#39;nın üzerinde kesim yapmak. oksipital ve interparietal kemikleri, daha sonra parietal ve frontal kemiklerin çıkarın. forseps kullanarak kranial kemik çıkarın ve meninksler kaldırarak kafatası beyin izole eder. </li><li> Soğutulmuş steril tuzlu su içinde beyin yıkayıp cerrahi bıçak (Şekil 2), koronal yönde beyin ICV bölge kesin. </li><li> İğne ekleme izi dayalı enjeksiyon bölgesini onaylamakBeyin dokusu (Şekil 2). İğne iz ventriküllerin biri ulaşmıştır olmadığını kontrol edin. iğne izi karşılamak veya ventriküllerin geçmez ise, deney sonuçlarının analizi o kişinin verileri hariç. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Kam, T. I., Gwon, Y., Jung, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+receptors+responsible+for+neurotoxicity+and+cellular+defects+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta receptors responsible for neurotoxicity and cellular defects in Alzheimer's disease.</a> Cell Mol Life Sci. 71, 4803-4813 (2014).</li>
<li>Elder, G. A., Gama Sosa, M. A., De Gasperi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mouse+models+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mt+Sinai+J+Med%22%5BJournal%5D)">Transgenic mouse models of Alzheimer's disease.</a> Mt Sinai J Med. 77, 69-81 (2010).</li>
<li>Bryan, K. J., Lee, H., Perry, G., Smith, M. A., Casadesus, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBryan%2C+KJ+%22Methods+of+Behavior+Analysis+in+Neuroscience+Frontiers+in+Neuroscience%22">Methods of Behavior Analysis in Neuroscience Frontiers in Neuroscience</a>. Buccafusco, J. J. , (2009).</li>
<li>Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+drug+discovery+pipeline+for+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models in the drug discovery pipeline for Alzheimer's disease.</a> Br J Pharmacol. 164, 1285-1300 (2011).</li>
<li>Choi, J. W., Kim, H. Y., Jeon, M., Kim, D. J., Kim, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+access+to+highly+pure+beta-amyloid+peptide+by+optimized+solid-phase+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">Efficient access to highly pure beta-amyloid peptide by optimized solid-phase synthesis.</a> Amyloid. 19, 133-137 (2012).</li>
<li>Rahimi, F., Maiti, P., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photo-induced+cross-linking+of+unmodified+proteins+%28PICUP%29+applied+to+amyloidogenic+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Photo-induced cross-linking of unmodified proteins (PICUP) applied to amyloidogenic peptides.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>Kim, H. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+Alzheimer%27s+disease+by+neuroprotective+effect+of+sulforaphane+in+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">Amelioration of Alzheimer's disease by neuroprotective effect of sulforaphane in animal model.</a> Amyloid. 20, 7-12 (2013).</li>
<li>Jackson, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VTE+on+an+elevated+T-maze%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Psychol%22%5BJournal%5D)">VTE on an elevated T-maze.</a> J Comp Psychol. 36, 9(1943).</li>
<li>Kim, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taurine+in+drinking+water+recovers+learning+and+memory+in+the+adult+APP%2FPS1+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Taurine in drinking water recovers learning and memory in the adult APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease.</a> Sci Rep. 4, 7467(2014).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates.+2nd+edn%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. 2nd edn</a>. , Academic Press. (2001).</li>
<li>Ledo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-beta+oligomers+link+depressive-like+behavior+and+cognitive+deficits+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Amyloid-beta oligomers link depressive-like behavior and cognitive deficits in mice.</a> Mol Psychiatry. 18, 1053-1054 (2013).</li>
<li>Laursen, S. E., Belknap, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebroventricular+injections+in+mice.+Some+methodological+refinements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Methods%22%5BJournal%5D)">Intracerebroventricular injections in mice. Some methodological refinements.</a> J Pharmacol Methods. 16, 355-357 (1986).</li>
<li>Bromley-Brits, K., Deng, Y., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morris+water+maze+test+for+learning+and+memory+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+model+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Morris water maze test for learning and memory deficits in Alzheimer's disease model mice.</a> J Vis Exp. , (2011).</li>
<li>Figueiredo, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memantine+rescues+transient+cognitive+impairment+caused+by+high-molecular-weight+abeta+oligomers+but+not+the+persistent+impairment+induced+by+low-molecular-weight+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Memantine rescues transient cognitive impairment caused by high-molecular-weight abeta oligomers but not the persistent impairment induced by low-molecular-weight oligomers.</a> J Neurosci. 33, 9626-9634 (2013).</li>
<li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol+Chemother%22%5BJournal%5D)">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> Br J Pharmacol Chemother. 12, 12-15 (1957).</li>
<li>Harkany, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+approaches+in+experimental+models+of+beta-amyloid+neurotoxicity%3A+relevance+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neuropsychopharmacol+Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective approaches in experimental models of beta-amyloid neurotoxicity: relevance to Alzheimer's disease.</a> Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 23, 963-1008 (1999).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+allosteric+potentiation+of+nicotinic+acetylcholine+receptors+by+galantamine+ameliorates+the+cognitive+dysfunction+in+beta+amyloid25-35+i.c.v.-injected+mice%3A+involvement+of+dopaminergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">The allosteric potentiation of nicotinic acetylcholine receptors by galantamine ameliorates the cognitive dysfunction in beta amyloid25-35 i.c.v.-injected mice: involvement of dopaminergic systems.</a> Neuropsychopharmacology. 32, 1261-1271 (2007).</li>
<li>Yamada, K., Nabeshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+Alzheimer%27s+disease+and+evaluation+of+anti-dementia+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of Alzheimer's disease and evaluation of anti-dementia drugs.</a> Pharmacol Ther. 88, 93-113 (2000).</li>
<li>Cho, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlations+of+amyloid-beta+concentrations+between+CSF+and+plasma+in+acute+Alzheimer+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Correlations of amyloid-beta concentrations between CSF and plasma in acute Alzheimer mouse model.</a> Sci Rep. 4, 6777(2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu protokolde en önemli adım Aβ ve ICV enjeksiyonu olduğunu. Bu protokol, stereotaktik araçlar 11,12 olmayan farelerin ICV bölgesine Aβ enjekte etmek için dizayn edilmiştir. Bir deney başlamadan önce, yerine Aβ bir mavi boya ile uygulama enjeksiyonu ön sürenin yeterli maharet elde etmek için yer almalıdır. Enjeksiyondan hemen sonra, pigment enjeksiyonu düzgün gerçekleştirildi olup olmadığını kontrol etmek gerekir. Dikkatle beyin çıkarmak ve uygun bölge mavi boyalı olup olmadığını kontrol edin. pigmentli hattı...

Alzheimer hastalığı (AD) &#39;in bir patolojik özelliğidir amiloid-P (Aβ) göz önüne alındığında, AD, hayvan modellerinin geliştirilmesi Aβ nöral aşırı ekspresyonu üzerinde odaklanmıştır. Amiloid öncü proteinin (APP) veya presenilin (PS) mutasyonlar Aβ denge bozulmasına ve sonuçta ailesel AD 1 patogenezinde yol, çünkü APP veya PS gen mutasyonlarını içeren fare modelleri genel olarak kabul edilmiştir. Transgenik farelerin geniş arasında prototip fare modelleri şunlardır: TG2576, PDAPP APP / PS1 ve APP23. Beyinde, bu fareler, genellikle Aβ agregasyonu ve sonunda senil plaklar gösterirler; plak oluşumu, öğrenme ve bellek davranış testleri düşük performans gösteren, bu önemli bir bilişsel bozulma takip eder. doğal insan AD patoloji taklit transgenik fareler kullanılarak nesil böylece di ilerlemesini izlemek için bize izin AD araştırma topluma katkıda bulunmuşturolgunun hastalığı. Bu Aβ plaklar geliştirmek için fareler ay sürer ve daha uzun Aβ kaynaklı sinaptik ve ruhsal bozukluk 2,3 göstermek Ancak, transgenik fareler kullanılarak ekonomik değildir ve zaman alıcıdır. Başlangıçta transgenik fare modellerinin eksikliklerin üstesinden gelmek için alternatif olarak geliştirilen, transgenik olmayan modelleri de yaygın olarak farklı avantajlar nedeniyle kullanılır. AD gibi bilişsel bozukluklar, diğer kimyasal ve fiziksel tetiklenebilir ise patojen kaynaklı AD modeller vasıtasıyla-örneğin skopolamin olarak nörotoksik bileşiklerin enjeksiyonundan lezyonların indüksiyonu gibi, beyin içine Aβ direkt enjeksiyonu ile üretilebilir böyle hipokampus, ya da kortikal hasar 4 ile biliş ilgili alanlarda. Ancak, kognitif bozukluk olmayan patojenik indüksiyon doğru AD temel patofizyoloji yansıtmamaktadır; bunun yerine, sadece semptomatik sonuçlarını taklit eder. Buna karşılık, bir patojen kaynaklı AD modeli,46; -injected fare modeli, AD-benzeri davranış anormallikleri gösterebilir kalmayıp Aβ patoloji, ailesel ve sporadik AD tarafından paylaşılan ortak özelliği gösterebilir. Beyin dokusunda Aβ plaklar görselleştirmek için zorluk rağmen, AD soruşturma için cazip kılan Aβ enjekte modelin en büyük avantajı kontrol edilebilirliği olduğunu. Araştırmacılar uyuşturucuyla ilgili çalışmalarda hatalı verilere yol açabilir fare modellerinde bireysel farklılıkları ayıklamak yapabilirsiniz. Zamanında ilaç tedavisi aday ilacın mekanizmasına bağlı olarak etkindir; hazırlamak için, Aβ agregasyon inhibitörü Aβ enjeksiyonundan önce uygulanabilir. Ayrıca, araştırmacılar diğer faktörler sıkıca bireysel farklılıklar da dahil olmak üzere, kontrol edilir, çünkü Aβ enjeksiyonundan sonra ortaya çıkan patojenik dönüşüm Aβ maruz türetilmiştir varsayabiliriz. h Bu protokol, canlı açıklamakumaşla sunulmuştur stereotaktik enstrümanların olmadan Aβ intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyon yoluyla normal farelerde bir AD-benzeri fenotipi teşvik. Beyin dokusu ekleme-provoke hasarı en aza indirmek yapısal hasar ve lezyon kaynaklı inflamasyon olasılığını önlemek için şarttır. fare kullanımı tecrübeli eksikliği beklenmedik bir nöronal yaralanmaya yol açar. Ayrıca, enjeksiyon sırasında elde edilecek uygun açı ve derinlik sağlayacak teknikleri sık sık hatalar aşmak için özellikle önemlidir. ICV enjeksiyonundan ayrıntılı, canlı bir açıklama ile birlikte, aşağıdaki protokol ile üretilen modelin güvenilirliği, aşağıdaki bölümlerde açıklanmaktadır. Aşağıdaki protokol böylece sonuçta AD toplum için anlamlı bir keşif yol açabilecek bir Steppingstone sağlayarak, AD araştırmaya katkıda güvenilir ve kolay anlaşılır bir araç olabilir.

<table><tbody><tr><td>ICR fare</td><td>Orientbio</td><td></td><td>erkek, 6-8 hafta, 27-29 g vücut ağırlığı</td></tr><tr><td>C57BL / 6 fare</td><td>Orientbio</td><td></td><td>erkek, 6-8 hafta, 21-23 g vücut ağırlığı</td></tr><tr><td>Amiloid-beta1-42</td><td>ev sentezinde</td><td></td><td>stok konsantrasyonu: 1 mM / DMSO, enjekte edilen konsantrasyon: 100 &mu; M/%10 DMSO ve %90 PBS</td></tr><tr><td>ICV enjeksiyon şırıngası (26s gauge)</td><td>Hamilton</td><td>80308</td><td></td></tr><tr><td>Evans mavi boya (EBD)</td><td>abcamBIochemicals</td><td>ab120869</td> PBS DMSO Sigma D2650'de <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> %1 EBD <tr><td>gibco</td><td>10010-023</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gradi-GelTM II Gradyan PAGE Analiz Kiti</td><td>ELPiS Biotech</td><td>EBS-1056</td><td>%15 Jel</td></tr><tr><td>Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standartları</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0377</td><td></td></tr><tr><td>Gümüş Boyama Kiti</td><td>GE-Healthcare</td><td>17-1150-01</td><td></td></tr><tr><td>LabDiet</td><td>Orientbio</td><td>5053</td><td></td></tr></tbody></table>

normal farelerde amiloid-β peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon akut alzheimer gibi bilişsel açıkları tetikleyebilecek

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Amiloid-β (Aβ) hem ailesel hem de sporadik Alzheimer hastalığının (AD) önemli bir patolojik mediatörüdür. Alzheimer hastalarının beyinlerinde, Aβ oligomerlerinin ve plaklarının ilerleyici birikimi gözlenir. Bu tür Aβ anormalliklerinin uzun süreli güçlenmeyi engellediğine, sinaptik işlevi bozduğuna ve bilişsel eksikliklere neden olduğuna inanılmaktadır. Klinik ve deneysel kanıtlar, beyindeki Aβ seviyelerinin akut artışının Alzheimer benzeri fenotiplerin gelişmesine izin verdiğini ortaya koymuştur. Bu nedenle, birçok durumda intraserebroventriküler (ICV) Aβ enjeksiyonu yoluyla bir AD fare modelinin akut olarak nasıl oluşturulacağını açıklayan ayrıntılı bir protokol gereklidir. Bu protokolde, peptitlerin hazırlanmasından davranışsal anormalliklerin test edilmesine kadar Aβ enjekte edilmiş bir fare ile yapılan deneyin adımları dahil edilmiştir. Enjeksiyondan önce aletlerin ve hayvan deneklerin hazırlanması, Aβ'nın ICV enjeksiyonu yoluyla fare beynine enjekte edilmesi ve bilişsel bozulma derecesinin değerlendirilmesi süreci, Aβ'nın etkili ICV enjeksiyonu için ipuçlarına vurgu yapılarak protokol boyunca kolayca açıklanmaktadır. Araştırmacılar, AD'nin belirli yönlerini belirlenmiş bir Aβ enjeksiyonu ile taklit ederek yaşlanma sürecini atlayabilir ve Aβ anormalliklerinin aşağı akış patolojisine odaklanabilirler.

Bu bölüm, Aβ agregasyon ve hafıza noksanlıkları Y-labirenti değerlendirme teyidi elde edilebilir sonuçlarının örneklerini göstermektedir. Tam uzunlukta Aβ kullanılarak 42 amino asit, Aβ monomerler, oligomerler karışımı ve fibrillerinin (Şekil 3) (1-42) peptidi üretilmiştir. HFIP kaynaklı monomerization adım sayesinde nispeten homojen monomerler (Lane B) ürün elde edilmiştir. 7 gün kuluçkalamadan sonra, Aβ agrega (hat c), çeşitli boyutlarda geliştirilmiştir. Trimerler ve ...

Amiloid-β (Aβ) hayvan modeli tanımlanmış bir miktar ve Aβ parçalarının türlerinin yönetimini sağlayan ve her çalışma grubu içinde bireysel farklılıkları azaltır -injected. Bu protokol, normal farelerde Alzheimer-benzeri davranış bozukluğu üretimini sağlayan, stereotaktik araçlar olmaksızın Aβ intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonu anlatılmaktadır.

Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Bu cerrahi prosedürün genel amacı, stereotaktik aletler kullanmadan Amyloid beta'nın intraserebroventriküler enjeksiyonunu gerçekleştirmek ve normal farelerde akut olarak Alzheimer benzeri davranış bozuklukları oluşturmaktır. Bu yöntem, Alzheimer Hastalığı için ilaç keşfi gibi nörobiyoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, farelerin intraserebroventrikül bölgesine A beta'nın doğrudan enjeksiyonunu stereotaktik aletlerin yardımı olmadan gerçekleştirebilmemiz ve yaşlanma sürecini beklemeden farelerde Alzheimer benzeri davranış bozukluklarını taklit etmemize olanak tanımasıdır.Bu tekniğin etkileri, Amyloid beta'nın downstream patolojisini incelemek ve ilaç adaylarını taramak için kullanılabildiği için Alzheimer Hastalığının tedavisine veya teşhisine kadar uzanmaktadır. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, hayvan kafatasında bregma'nın tam konumunu bulmak zor olabileceği için zorlanacaktır. Bu prosedüre başlamak için, DMSO ile bir millimolar A-beta hazırlayın.Ardından, bunu PBS içerisinde on kat seyreltin. Sonrasında, ICV enjeksiyonu için taşıyıcı olarak %10 DMSO içeren PBS çözeltisi hazırlayın. Bundan sonra, derinlik kontr

intracerebroventricular-injection-amyloid-peptides-normal-mice-to

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

(Tg) AD transgenik fare modelleri, nasıl ve neden Aβ veya tau düzeyleri BOS değişikliği insan hastalarda hastalık ilerledikçe araştırmak için mükemmel bir fırsat sağlar. Burada, fare seri BOS örnekleme için rafine bir sisterna magna ponksiyonu tekniği göstermektedir.

Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

Bu video, amiloid-beta (Aβ) peptide özgü antikorların bir sıçanın hipokampusuna sürekli infüzyonu için bir tekniği göstermektedir. Çalışma, oligomerler ve antikorlar arasındaki etkileşimleri incelemek için sıçan hipokampüsüne çözünür Aβ oligomerlerinin (Aβo) infüzyonu ile birlikte Aβ peptide özgü antikorların kontrollü bir infüzyonu için iki taraflı bir kanül sisteminin implante edilmesini kullanır.

Aβ Peptit Spesifik Antikorların ve Aβ Oligomerlerinin Sıçan Hipokampusuna Kontrollü İnfüzyonu

Bu video, hipokampus bölgesinde toplu olarak toksik amiloid plak oluşumuna yardımcı olan amiloid-beta peptitleri, alüminyum klorür ve bir nöroinflamatuar büyüme faktörü enjekte etme prosedürünü göstermektedir. Bu, Alzheimer hastalığının karakteristiği olan sıçanlarda hafıza bozukluğuna neden olur.

Amiloid-Beta Peptit Enjeksiyonu ile Alzheimer Hastalığı Sıçan Modelinin Oluşturulması

Bu video, Alzheimer hastalığının bir fare modelini oluşturmak için amiloid beta'nın dentat girusa kesin stereotaksik infüzyonunu göstermektedir. Amiloid beta proteinlerinin doğru koordinat tayini ve kontrollü iletimi, nöronal bozulmaya neden olur, hafıza işlemeyi bozar ve Alzheimer hastalığının gelişimine katkıda bulunur.

Bir Alzheimer Hastalığı Modeli için Amiloid-Beta Proteinlerinin Doğrudan Stereotaksik Beyin İnfüzyonu

Kaynak: Arango-Lievano, M. et. al., Serebrovasküler Sistemin Uzunlamasına İn Vivo Görüntülemesi: CNS Hastalıklarıyla İlgisi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, floresan etiketli amiloid plaklarını ve serebral vaskülatürü görselleştirmek için in vivo iki fotonlu görüntülemeyi göstermektedir. Mavi floresan plakları işaretlerken, yeşil floresan serebral kan damarlarını vurgular. İlgilenilen bölgenin 3 boyutlu haritası ve yüksek çözünürlüklü mozaik görüntüleme, amiloid plaklarının beyin damarları ile...

Alzheimer Hastalığı Fare Modelinde Serebral Damarların ve Amiloid Plaklarının İn Vivo Görüntülenmesi

Burada, amiloid-beta'nın doğrudan stereotaksik beyin infüzyonu için bir protokol sunuyoruz. Bu metodoloji, amiloid-beta'nın beyin nöronları üzerindeki kısa vadeli etkilerini ele almak için alternatif bir in vivo fare modeli sağlar.

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

Aβo'nun etkilerini in vivo olarak incelemek için, Aβo'nun nörotoksik etkisine karşı koymak için ozmotik pompalar kullanarak hipokampusta sürekli Aβo antikoru (6E10) infüzyonu ile birlikte çözünür Aβo'nun tekrarlanan hipokampal infüzyonlarına dayanan bir model geliştirdik.

Kronik Amiloid beta Oligomer İnfüzyon bir hayvan Modelinde Nörodejenerasyon Osmotik Pompalar ile Antikor Tedavisi infüzyon ile giderilir

Bu iletişim kuralı sentezi, karakterizasyonu ve monomeric amiloid-β42 peptidler amiloid toksisite histolojik analizler ve tespiti takip bir Alzheimer hastalığı modeli kurmak için yetişkin Zebra balığı üretme için enjeksiyon açıklar toplamalardan.

Amiloid β42 toksisite ve ateş yetişkin Zebra balığı beyinde modelleme

Bu Alzheimer hastalığı Rat mekansal hafıza bozukluğu, nöronal patolojik değişiklikler, nöronal amiloid beta protein (Aβ) yük değerlendirilmesi tarafından taklit etmek için bir protokol ve neurofibrillary tangles toplama, Aβ25-35 iğne ile indüklenen kombine Alüminyum trichloride ve rekombinant insan büyüme faktörü-β1 dönüştürme.

Alzheimer hastalığı Composited amiloid Beta protein Intracerebroventricular enjeksiyonla sıçan hayvan modelinde değerli bir taklit kurulması

Bu protokolü açıklanan farelerde intraserebral kanama otolog kan enjeksiyonu modeli, iğne izi kadar kan reflü, pompa sistemi hiçbir antikoagülanlar riskini en aza indirmek için çift enjeksiyon tekniği kullanır ve sistemdeki tüm ölü boşluk ve genişletilebilir boru ortadan kaldırır.

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

Öğrenin, stereotaktik alet kullanmadan farelerde intraserebroventriküler Amyloid beta enjeksiyonu yöntemiyle Alzheimer benzeri davranış bozukluklarını akut olarak nasıl tetikleyebilirsiniz. Bu teknik, nörobiyoloji ve ilaç keşfi araştırmaları için hızlı bir model sunar.

Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Daha fazla video keşfet