Name: Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Öğrenin, domuzlardan burun mendili ile influenza A virüsü izolasyonu ve algılama yöntemini. Bu düşük stresli teknik, veteriner virolojide etkili sürveyans ve dolaşan suşların incelenmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, kısmen Grip Araştırma ve Sürveyans Mükemmeliyet Merkezleri (CEIRS), Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri, Sağlık ve İnsan Hizmetleri Departmanı'ndan Sözleşme No. kapsamında federal fonlarla finanse edilmiştir. HHSN272201400006C.

Aşağıdaki veri toplanmasında kullanılan tüm domuz Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu koruma altına alınmıştır (hayvan kullanım protokol numarası 2009A0134-R1). 1. Viral Transport Orta Hazırlanması ve Numune Toplama Flakon <ol><li> Saf su 900 ml beyin kalp infüzyon 37 g eklenir ve ısıtma 70 ° C, tamamen tozu çözmek için ise, bir karıştırma çubuğu ve manyetik bir karıştırıcı ile iyice karıştırın. </li><li> 15 dakika boyunca 121 ° C&#39;de suyu otoklava. Suyu kadar tezgah üstünde Serin oda sıcaklığını ulaşır. 4 ° C &#39;de bir gece buzdolabında gerekirse. </li><li> Bir manyetik karıştırma çubuğu, Penisilin G Sodyum tuzu 6,02 g, oda sıcaklığında saflaştırılmış su içinde 50 ml streptomisin sülfat, 10 g ile karıştırılarak, eritin. 100 ml toplam hacmi getirmek için ilave saf su ekleyin. Steril şişe içine 0,22 um polietersülfon zarından solüsyonu filtre. </li><li> Aseptik soğutmalı Beyin Kalp İnfüzyon Broth içine süzülmüş penisilin ve streptomisin çözüm ekleyin ve viral taşıma ortamı yapmak için iyice (karıştırma çubuğu ya da elle girdap şişesi) karıştırınız. </li><li> Aseptik viral taşıma ortamı pH testi; Gerekirse, HCI veya NaOH kullanılarak 7.4 ± 0.2 pH ayarlamak. </li><li> Zhang ve Harmon tarafından anlatıldığı gibi, RRT-PCR ile influenza A virüs matriks protein test ederek viral taşıma ortamında kalite güvence testleri gerçekleştirin. 22 </li><li> 8 ml kapasiteli steril, yüksek yoğunluklu polietilen şişeler içine viral taşıma ortamının 5 ml koyun. Alanında kullanım için şişeleri etiketleyin. </li><li> Numune toplama kadar -20 ° C&#39;de standart bir kriyo-kutularda hazır kullanım şişeleri saklayın. </li></ol> Domuz adlı Burun Mendil 2. Koleksiyonu <ol><li> Toplama örnek hemen önce şişeleri uygun sayıda çözülme; tek şişe örneklenmiş domuz başına ihtiyaç duyulacaktır. Odasında çözündüktensıcaklığı yaklaşık 30-45 dakika sürer. Çözülmüş şişeleri kullanılana kadar buz paketleri üzerinde serin tutun. </li><li> Don uygun kişisel koruyucu ekipman durumdan tarafından dikte (örn tulumlar, çizme kapakları, solunum, kulak tıkacı,) olarak. </li><li> Hayvan alanını girin. Gerekirse, küçük bir alana domuz sınırlandırmak ama dizginlemek hayır yoktur. Hayvanları dinlenme canlandırmak etmeyin. </li><li> Tek kullanımlık sınav bir çift eldiven giyin. Dokunmadan domuz, insanlar, ya da cansız nesneler tarafından eldiven kontamine etmemeye dikkat edin. </li><li> (2 ile. Büyük × 2.) 5.08 cm x 5.08 cm steril kaldırmak için bir eldivenli elinizi kullanın pamuklu gazlı bez ambalajından. Steril gazlı bez, mümkün kullanılmalıdır. Bireysel sarılı gazlı bez paket başına iki gazlı bez ile sarılmış olanlar daha kullanmak daha uygundur. </li><li> Bir elin parmak uçları örnekleme için mümkün olduğunca ped kadar açığa pamuk gazlı bez tutun. </li><li> Alarak, domuz burnu genelinde gazlı bez silinMümkünse ekstra bakım harici burun deliğine girmek için. Aynı gazlı bezle görünür burun salgıları (yaklaşık 1 ml) toplayın. </li><li> Aynı eli kullanarak, viral transport medium içeren flakon yerleştirilmesini kolaylaştırmak için kendi üzerine gazlı bez katlayın. </li><li> Diğer elinizi kullanarak, şişenin kapağını kaldırın ve şişenin içine katlanmış gazlı bez yerleştirin. Şişeyi tekrarlamak ve gazlı bezle ve viral taşıma ortamı karışmasını sağlamak için şişeyi sallayın. </li><li> Uygun bir kabın içinde eldiven ve yer çıkarın. Her domuz arasındaki eldiven değiştirin. </li><li> Şişe tanımlayıcı doğrulayın. Kayıt domuz kimlik numarası, yaş, cinsiyet, klinik bulgular ve araştırmacı tarafından gerekli görülen diğer notlar. </li><li> Toplandıktan hemen sonra numuneleri Chill. Birden donma-çözülme döngüleri önlemek için dondurmadan önce örnek hacimde yapma düşünün. En kısa sürede toplandıktan sonra mümkün olduğunca, laboratuara taşınması için kuru buz üzerinde örnekleri yerleştirin. Şişeleri de saklayın -80Test başlayana kadar ° C. </li></ol> 3. Tespit Gribi A Virüsü Nükleik Asit <ol><li> 5 dakika boyunca 37 ° C kuru boncuk banyosunda örnekleri çözülme ve daha sonra 20-30 dakika için oda sıcaklığında, bir tezgah üstünde örnekleri çözülme tamamlanır. Boncuklara birkaç flakon eş-zamanlı ilavesinin banyosu ısıya neden olur; dikkatli şişeleri ısınmasına değil gibi olunmalıdır. </li><li> RNA ekstraksiyonu için viral taşıma ortamının 100 ul çıkarın. <ol><li> Örneklerin çok sayıda RNA çıkarmak için yüksek verim (96 oyuklu plaka formatı) manyetik boncuk platformu kullanın. 31 </li></ol></li><li> Hızlı algılama influenza A virüs için gerçek zamanlı ters transkriptaz PCR deneyleri kullanın. 31 </li></ol> Grip 4. İzolasyon Burun Mendil A Virüsü <ol><li> Bölüm 3.1&#39;de tarif edildiği gibi numuneler çözülme </li><li> (1000 gentamisin sülfat ile çözülmüş örnekleri tedavi| ig / ml), amfoterisin B (22.5 ug / ml) ve kanamisin sülfat (325 ug / ml). </li><li> Madin-Darby Köpek Böbrek içine inoküle (MDCK), daha önce tarif edildiği gibi epitel hücreleri. 32 </li></ol>

<ol><li>Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+as+a+mixing+vessel+for+influenza+viruses%3A+Human+and+veterinary+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Genet.+Med%22%5BJournal%5D)">The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications.</a> J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).</li>
<li>Nelson, M. I., Vincent, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+zoonosis+of+influenza+to+swine%3A+new+perspectives+on+the+human-animal+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Reverse zoonosis of influenza to swine: new perspectives on the human-animal interface.</a> Trends Microbiol. 23, (2015).</li>
<li>Zhou, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+reassortment+of+avian%2C+swine%2C+and+human+influenza+A+viruses+in+American+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Genetic reassortment of avian, swine, and human influenza A viruses in American pigs.</a> J. Virol. 73 (10), 8851-8856 (1999).</li>
<li>Webby, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+swine+H3N2+influenza+viruses+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Evolution of swine H3N2 influenza viruses in the United States.</a> J. Virol. 74 (18), 8243-8251 (2000).</li>
<li>Vincent, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+influenza+A+virus+in+swine+worldwide%3A+a+call+for+increased+surveillance+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22Zoonoses+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Review of influenza A virus in swine worldwide: a call for increased surveillance and research.</a> Zoonoses Public Health. 61 (1), 4-17 (2014).</li>
<li>Karasin, A. I., Olsen, C. W., Anderson, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+characterization+of+an+H1N2+influenza+virus+isolated+from+a+pig+in+Indiana%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Genetic characterization of an H1N2 influenza virus isolated from a pig in Indiana.</a> J. Clin. Microbiol. 38 (6), 2453-2456 (2000).</li>
<li>Zhou, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+H3N2+reassortant+influenza+A+viruses+in+North+American+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emergence of H3N2 reassortant influenza A viruses in North American pigs.</a> Vet. Microbiol. 74 (1-2), 47-58 (2000).</li>
<li>Corzo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+Surveillance+for+Influenza+A+Virus+among+Swine%2C+Midwestern+United+States%2C+2009-2011%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Active Surveillance for Influenza A Virus among Swine, Midwestern United States, 2009-2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 19 (6), 954-960 (2013).</li>
<li>Lorusso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+antigenic+characterization+of+H1+influenza+viruses+from+United+States+swine+from+2008%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Genetic and antigenic characterization of H1 influenza viruses from United States swine from 2008.</a> J. Gen. Virol. 92 (Pt 4), 919-930 (2011).</li>
<li>Loving, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+in+pigs+of+inactivated+and+live+attenuated+influenza+virus+vaccines+against+infection+and+transmission+of+an+emerging+H3N2+similar+to+the+2011-2012+H3N2v%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Efficacy in pigs of inactivated and live attenuated influenza virus vaccines against infection and transmission of an emerging H3N2 similar to the 2011-2012 H3N2v.</a> J. Virol. 87 (17), 9895-9903 (2013).</li>
<li>Vincent, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+inactivated+swine+influenza+virus+vaccines+against+the+2009+A%2FH1N1+influenza+virus+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of inactivated swine influenza virus vaccines against the 2009 A/H1N1 influenza virus in pigs.</a> Vaccine. 28 (15), 2782-2787 (2010).</li>
<li>Smith, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+evolutionary+genomics+of+the+2009+swine-origin+H1N1+influenza+A+epidemic%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic.</a> Nature. 459 (7250), 1122-1125 (2009).</li>
<li>Vijaykrishna, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassortment+of+Pandemic+H1N1%2F2009+Influenza+A+Virus+in+Swine%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Reassortment of Pandemic H1N1/2009 Influenza A Virus in Swine.</a> Science. 328 (5985), 1529(2010).</li>
<li>Ducatez, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Reassortment+between+Pandemic+%28H1N1%29+2009+and+Endemic+Influenza+Viruses+in+Pigs%2C+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Multiple Reassortment between Pandemic (H1N1) 2009 and Endemic Influenza Viruses in Pigs, United States.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (9), 1624-1629 (2011).</li>
<li>Jhung, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outbreak+of+variant+influenza+A%28H3N2%29+virus+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Outbreak of variant influenza A(H3N2) virus in the United States.</a> Clin. Infect. Dis. 57 (12), 1703-1712 (2013).</li>
<li>Vincent, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+an+influenza+A+virus+isolated+from+pigs+during+an+outbreak+of+respiratory+disease+in+swine+and+people+during+a+county+fair+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of an influenza A virus isolated from pigs during an outbreak of respiratory disease in swine and people during a county fair in the United States.</a> Vet. Microbiol. 137 (1-2), 51-59 (2009).</li>
<li>Killian, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Infection+of+Pigs+and+People+with+Triple-Reassortant+Swine+Influenza+Virus+H1N1+at+a+U.S.+County+Fair%5BTitle%5D)+AND+%22Zoonoses+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Infection of Pigs and People with Triple-Reassortant Swine Influenza Virus H1N1 at a U.S. County Fair.</a> Zoonoses Public Health. 60 (3), 196-201 (2013).</li>
<li>Wong, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outbreak+of+influenza+A+%28H3N2%29+variant+virus+infection+among+attendees+of+an+agricultural+fair%2C+Pennsylvania%2C+USA%2C+2011%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Outbreak of influenza A (H3N2) variant virus infection among attendees of an agricultural fair, Pennsylvania, USA, 2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1937-1944 (2011).</li>
<li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+evidence+for+interspecies+transmission+of+H3N2pM%2FH3N2v+influenza+A+viruses+at+an+Ohio+agricultural+fair%2C+July+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Microbes.+Infect%22%5BJournal%5D)">Molecular evidence for interspecies transmission of H3N2pM/H3N2v influenza A viruses at an Ohio agricultural fair, July 2012.</a> Emerg. Microbes. Infect. 1 (10), e33(2012).</li>
<li>Wells, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+influenza+virus+infections.+Transmission+from+ill+pigs+to+humans+at+a+Wisconsin+agricultural+fair+and+subsequent+probable+person-to-person+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Swine influenza virus infections. Transmission from ill pigs to humans at a Wisconsin agricultural fair and subsequent probable person-to-person transmission.</a> JAMA. 265 (4), 478-481 (1991).</li>
<li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine-to-human+transmission+of+influenza+A%28H3N2%29+virus+at+agricultural+fairs%2C+Ohio%2C+USA%2C+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Swine-to-human transmission of influenza A(H3N2) virus at agricultural fairs, Ohio, USA, 2012.</a> Emerg. Infect. Dis. 20 (9), 1472-1480 (2012).</li>
<li>Bowman, A. S., Nolting, J. M., Nelson, S. W., Slemons, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subclinical+influenza+virus+A+infections+in+pigs+exhibited+at+agricultural+fairs%2C+Ohio%2C+USA%2C+2009-2011%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Subclinical influenza virus A infections in pigs exhibited at agricultural fairs, Ohio, USA, 2009-2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1945-1950 (2012).</li>
<li>Gray, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A%28H1N1%29pdm09+Virus+among+Healthy+Show+Pigs%2C+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza A(H1N1)pdm09 Virus among Healthy Show Pigs, United States.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (9), 1519-1521 (2012).</li>
<li>Van Reeth, K., Brown, I. H., Olsen, C. W. Ch. 40, Influenza virus. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVan+Reeth%2C+K+%22Diseases+of+Swine%22">Diseases of Swine</a>. Zimmerman, J. J. , Wiley-Blackwell. 557-571 (2012).</li>
<li>Culhane, M. R., Detmer, S. E. Ch. 21, Sample types, collection, and transport for influenza A viruses of swine. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCulhane%2C+MR+%22Methods+in+Molecular+Biology%22">Methods in Molecular Biology</a>. Spackman, E. Animal Influenza Virus, Methods in Molecular Biology; 1161. 259-263 (2014).</li>
<li>Sheldon, C. C., Sonsthagen, T., Topel, J. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSheldon%2C+CC+%22Animal+Restraint+for+Veterinary+Professionals%22">Animal Restraint for Veterinary Professionals</a>. , Mosby. (2006).</li>
<li>Detmer, S. E., Patnayak, D. P., Jiang, Y., Gramer, M. R., Goyal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Influenza+A+virus+in+porcine+oral+fluid+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Diagn.+Invest%22%5BJournal%5D)">Detection of Influenza A virus in porcine oral fluid samples.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 23 (2), 241-247 (2011).</li>
<li>Goodell, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probability+of+detecting+influenza+A+virus+subtypes+H1N1+and+H3N2+in+individual+pig+nasal+swabs+and+pen-based+oral+fluid+specimens+over+time%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Probability of detecting influenza A virus subtypes H1N1 and H3N2 in individual pig nasal swabs and pen-based oral fluid specimens over time.</a> Vet. Microbiol. 166 (3-4), 3-4 (2013).</li>
<li>Romagosa, A., Gramer, M., Joo, H. S., Torremorell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+of+oral+fluids+for+detecting+influenza+A+virus+in+populations+of+vaccinated+and+non-vaccinated+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Influenza+Other+Respir.+Viruses%22%5BJournal%5D)">Sensitivity of oral fluids for detecting influenza A virus in populations of vaccinated and non-vaccinated pigs.</a> Influenza Other Respir. Viruses. 6 (2), 110-118 (2012).</li>
<li>Edwards, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+snout+wipe+samples+for+influenza+A+virus+surveillance+in+exhibition+swine+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Influenza+Other+Respir.+Viruses%22%5BJournal%5D)">Utility of snout wipe samples for influenza A virus surveillance in exhibition swine populations.</a> Influenza Other Respir. Viruses. 8 (5), 574-579 (2014).</li>
<li>Zhang, J., Harmon, K. M. Ch. 23, RNA extraction from swine samples and detection of influenza A virus in swine by real-time RT-PCR. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+J+%22Animal+Influenza+Virus%22">Animal Influenza Virus</a>. Spackman, E. , Methods in Molecular Biology; 1161. 277-293 (2014).</li>
<li>Zhang, J., Gauger, P. C. Ch. 22, Isolation of swine influenza virus in cell cultures and embryonated chicken eggs. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+J+%22Animal+Influenza+Virus%22">Animal Influenza Virus</a>. Spackman, E. , Methods in Molecular Biology; 1161. 265-276 (2014).</li>
<li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Inability+to+Screen+Exhibition+Swine+for+Influenza+A+Virus+Using+Body+Temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Zoonoses+Public+Health%22%5BJournal%5D)">The Inability to Screen Exhibition Swine for Influenza A Virus Using Body Temperature.</a> Zoonoses Public Health. , (2015).</li>
<li>Prickett, J. R., Kim, W., Simer, R., Yoon, K. J., Zimmerman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral-fluid+samples+for+surveillance+of+commercial+growing+pigs+for+porcine+reproductive+and+respiratory+syndrome+virus+and+porcine+circovirus+type+2+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Swine+Health+Prod%22%5BJournal%5D)">Oral-fluid samples for surveillance of commercial growing pigs for porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine circovirus type 2 infections.</a> J. Swine Health Prod. 16 (2), 86-91 (2008).</li>
<li>Prickett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Porcine+reproductive+and+respiratory+syndrome+virus+infection+in+porcine+oral+fluid+samples%3A+a+longitudinal+study+under+experimental+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Diagn.+Invest%22%5BJournal%5D)">Detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in porcine oral fluid samples: a longitudinal study under experimental conditions.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 20 (2), 156-163 (2008).</li>
<li>Pepin, B., Liu, F. F., Main, R., Ramirez, A., Zimmerman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collection+of+oral+fluid+from+individually+housed+sows%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Swine+Health+Prod%22%5BJournal%5D)">Collection of oral fluid from individually housed sows.</a> J. Swine Health Prod. 23 (1), 35-37 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Polyester uçlu nasal swapları ile domuz örnekleri toplanması IAV gözetim yürütülmesi yararlı olduğu kanıtlanmıştır; Ancak, nazal sürüntü prosedürünün kullanılması kısıtlama için tuzak gerekli kullanımı nedeniyle gözetim çabalarını engellemektedir. Burun mendil numune toplama sırasında insanlar ve domuzlar üzerinde stresi en aza indirmek için mevcut domuz örnekleme teknikleri bir arıtma temsil etmektedir. Yöntem için geliştirilen ve sergi domuz ayarlarında valide edilmiş olsa da domuzlarda IAV ve ölüm öncesi algılama ger...

<html> Grip A virüsleri (IAV) evcil kuşlar, domuz ve insan da dahil olmak üzere pek çok türde, solunum hastalıklarına neden olur. Nedeniyle oluşabilir parçalı IAV genom hızlı viral evrim reassortment ve yeni IAV suşları sık sık ortaya çıkar. Domuz yaygın Kuzey Amerika domuz (H1N1, H1N2, H3N2) arasında dolaşan IAV üç ana alt tipi bulunmamaktadır. 1 birden çok ana türden iAVS yeniden yapılanması için bir karıştırma kabı olarak hizmet edebilen bir türün, ancak insan çoklu IAV tanıtımlar sahip Bu alt tipleri içinde yaygın IAV çeşitliliğe yol açtı. domuz bulaşmasını iAVS 2 Hızlı evrimi, insan, kuş ve domuz virüslerinin gen segmentleri içeren üçlü reassortant IAV 3 ABD&#39;de domuzlar arasında yaygınlaşan 1998 yılından beri belirgin olmuştur. 4 dahili gen Bu üçlü reassortant IAV gelen segmentleri şu anda domuz bulaşmasını iAVS arasında oldukça yaygın kalır. 5 &quot;&gt; Dünya, IAV tipik klinik bulgular ateş, iştahsızlık, uyuşukluk, öksürük dahil olduğu domuz solunum hastalığı önemli bir nedenidir, burun akıntısı ve kilo alımının yetersiz hapşırma, nefes darlığı. IAV nerede üreme çiftlikleri ekmek özellikle pahalıya mal olabilir nedeniyle IAV kaynaklı ateş ve zayıf doğumlu domuz yavrusu başarısızlık belgelenmiştir. 6,7 Amerika Birleşik Devletleri içinde IAV yaygın ticari domuz sürüleri ve IAV bulaşmasını domuz arasında yaygın antijenik ve genomik çeşitlilik ve sürekli evrim tespit edildiğinde, bu kontrol engel olan Virüs. 8-11 Üçlü reassortant Kuzey Amerika domuz soy ve Avrasya kuş-benzeri domuz soyundan gelen gen segmentleri içeren bir domuz-soy IAV dünya çapında bir salgın nedeniyle zaman 2009 yılında gerçekleşmiştir domuzlarda reassortment kaynaklanan bir salgın IAV soyunun ortaya çıkışı hakkında halk sağlığı kaygıları İnsanlarda. 12 pandemik virüs (A (H1N1) pdm09) beri varendemik domuz ile reassorted IAV 13,14 suşları ve bu yeni reassorted suşların bazı insanlara geri ahiren paylaşılmıştır. 15 reassorment olaylar ve pandemi potansiyeli olan yeni IAV suşlarının ortaya çıkması domuz zorunlu olarak IAV virüs dolaşımdaki aktif sürveyans yapar sıklığı, özellikle domuz-insan arayüzünde. Domuz-insan arayüzü IAV çift yönlü türler arası iletimi için önemlidir. Insan-to-domuz ticari domuz üretiminde ortaya çıkan iletim domuz popülasyonda anda mevcut IAV çeşitlilik büyük miktarda sorumludur. Tarım fuarları ABD&#39;de insanların domuz comingling için büyük ayarları ve bir varyant H3N2 IAV salgını sırasında, IAV zoonotik iletimi için siteler. 2012 yılında 15-21 bilinmektedir, vakaların% 93 katılımın bildirdi günlerde bir tarım fuarı hastalığın başlangıcında önce. 15 Genomik analizzoonotik iletim doğruladı insan izolatlar ile karşılaştırıldığında sergi domuzların viral izolatların. IAV ile enfekte 21 Sergi domuz genellikle doğrudan tanısal testler için ihtiyaç gösteren hastalık, 21-23 klinik belirtilerini göstermez. Gözle görülür hasta domuz Örnekleme yalnız başarıyla domuzlarda IAV yaygınlığını tespit olmaz ve domuz arasında çıkan IAV yeni suşları belirlemek için dayanıyordu olamaz. Aktif sürveyans IAV ortaya çıkan suşlar domuzlarda ve domuz ve halk sağlığı hem de kendi tehdidi değerlendirmek tespiti için kesinlikle gereklidir. Çoğu IAV gözetim faaliyetleri gönüllü ve bu nedenle minimal yıkıcı yöntemlere ihtiyaç vardır vardır. IAV domuz bulaştırdıkları için üç önemli ölüm öncesi numune toplama prosedürleri vardır: Burun bezlerden, sözlü sıvılar ve burun mendil. IAV listesine sentetik elyaf sokulmasını algılamak için bireysel domuz örnekleme için akım tavsiyeler tercih edilen yöntem olarak burun deliklerine bezlerden uçluburun salgıları ve epitel hücreleri toplamak için. 24,25 domuz ya elle ya da bir tuzak hayvanın büyüklüğüne bağlı olan domuz dizginlemek gerekir bu prosedürü, eğitimli personel bir ekip önlemek için deneyebilirsiniz çünkü. 26 emniyet süreci için zahmetli personel ve domuzlar için stresli. Bir yarışma hayvan eklenen stres algısı gözetim çabalarına sahipleri dirençli yapabilirsiniz Ayrıca, sergi domuz genellikle fuarda birden yarışmalarda katılıyor. 80-100 den% IAV enfekte sürüler arasında değişen IAV algılama olasılıkları ile sözlü sıvılar domuzların popülasyonlarında IAV moleküler tespiti için bezlerden burun popüler bir alternatif haline gelmiştir. 27,28 Ayrıca, ağız sıvıları daha geniş bir pencere sağlayabilir İlk enfeksiyonu takiben nazal bezlerden daha IAV algılama. Ancak, ağız sıvılardan IAV izolasyon virus izolasyonu girişimleri sadece% 50&#39;si IA ile sonuçlanan sorunlu olmuşturV kurtarma. 29 Domuzlarda IAV gözetim sırasında burun bezlerden yerine burun mendil kullanarak yukarıda açıklanan sınırlamalarının üstesinden gelir. Nazal mendiller bir yasaklama tuzak kullanımını gerektirmeyen ve prosedürün hayvan veya tanıkları zorlamadan yapılabilir. Minimal teknik eğitim gözetim örnekleri toplamak için, domuz sahipleri de dahil olmak üzere sivil veteriner profesyonelleri, izin verir burun mendil, toplamak için gereklidir. Burun silme bezleri, daha önce A virüsü 30 ve örnekleme bu invazif olmayan bir yöntem için ayrıntılı bir protokol, aşağıda tarif edilmiştir algılama ve grip izolasyonu için burun bezlerinde karşılaştırılmıştır.

<table><tbody><tr><td>BBL Beyin Kalp İnfüzyonu</td><td>Becton, Dickinson ve Şirketi</td><td>211059</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin G Sodyum Tuzu</td><td>MP Biyomedikal, LLC</td><td>021194537</td><td>1500 u / mg</td></tr><tr><td>Streptomisin Sülfat</td><td>AMRESCO LLC</td><td>0382</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin Çözeltisi</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>30-005-CR</td><td>50 mg/ml</td></tr><tr><td>Amfoterisin B Çözeltisi</td><td>Fisher</td><td>S 24 25</td><td>250 ug/ml</td></tr><tr><td>Kanamisin Sülfat</td><td>Teknova</td><td>K2105</td><td>5000 ug/ml</td></tr><tr><td>TPP Hızlı Filtermax Sistemi</td><td>TPP Tekno Plastik Ürünler AG&nbsp;</td><td>99150</td><td></td></tr><tr><td>Nalgen Tanı Şişeleri</td><td>Thermo Scientific</td><td>342002-9025</td><td>HDPE, beyaz PP kapaklı</td></tr><tr><td>Dermacea Gazlı Bez Sünger, 8 katlı</td><td>Covidien</td><td>441211</td><td>5,08 cm ve kez; 5,08 cm (2 inç ve kez; 2 inç)&nbsp;</td></tr><tr><td>Nitril Muayene Eldivenleri</td><td>Emniyet Seçimi</td><td>19-170-010 (AD)</td><td></td></tr></tbody></table>

domuz influenza a virüs algılama ve İzolasyonu için burun mendil

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Influenza A virüs hızla domuz toplumlarda gelişir ve yeni suşlar ortaya çıkmaya devam ediyor, çünkü domuz influenza A virüsleri için Gözetleme insan ve hayvan sağlığına için çok önemlidir. Domuz onlara çıkması ve yeni influenza A virüsünün bakımı suşları için önemli ana yapım influenza A virüsünün farklı soy tarafından enfekte edilmesi mümkün bulunmaktadır. Böyle ticari domuz çiftlikleri, tarım fuarları ve canlı hayvan pazarlarında gibi çeşitli ortamlarda domuz Örnekleme halen IAV suşları dolaşan kapsamlı bir görünüm sağlamak için önemlidir. Bu domuzların fiziksel kısıtlama gerektirdiğinden güncel altın standart ante-mortem örnekleme tekniği (burun bezlerden yani toplama) emek yoğundur. Burun mendiller hayvanın hiçbir kısıtlama minimal ile domuz burnu genelinde kumaş parçasını ovuşturarak barındırır. Burun prosedürü gerçekleştirmek için basit ve profesyonel veteriner veya hayvan taşıma eğitimi ile personel gerektirmez silin. Wnazal bezlerden biraz daha az duyarlı hile, virüs algılama ve izolasyon oranları nazal düşük stres örnekleme yöntemleri gerektiğinde bireysel domuz örnekleme için bir alternatif mendil yapmak için yeterli. Işlem protokolü uygulanabilir bir nazal toplamak için gerekli adımlar tek bir domuz silin özetliyor.

Bu yöntemin başarılı kullanımı RRT-PCR herhangi bir çevresel enkaz numune alma sırasında aldı RNA ekstraksiyonu ve RRT-PCR sırasında iç kontrolün kullanımı ile birlikte, gösteri örnekleri PCR inhibitörleri içermiyordu, bu sonuçlar verir. Örnek aşılamadan sonra, virüs izolasyon kuyuları örnekten görülebilir çevre enkaz arındırılmış olmalıdır. PCR viral nükleik asit, ille canlı virüs tespit, çünkü PCR genellikle virüs izolasyonu daha yüksek IAV pozitif oranı getirir anlayışı ile RRT-PCR sonuçları ve virüs izolasyonu sonuç...

Yazarlar, influenza A virüslerini tespit etmek ve izole etmek için domuz burun mendillerini toplamak için bir protokol sunuyor.

Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Bu prosedürün genel amacı, nazal sürüntülere düşük stresli bir alternatif sunarak, influenza A virüsü sürveyansı için domuzlardan nazal silme örnekleri toplamaktır. Uygulaması basit olduğu ve uzmanlık eğitimi gerektirmediği için bu yöntem, sürveyansı geliştirebilir ve domuzlar arasında dolaşan influenza A virüsü suşları hakkında bilgiler sağlayabilir.Bu tekniğin temel avantajı, tanısal testler için numunelerin, hayvanlar minimum düzeyde kısıtlanarak bireysel olarak toplanabilmesidir. Stres düzeyi düşük bir yöntemin domuz sahipleri için daha cazip olması nedeniyle, bu tekniğin etkileri influenza A virüsü sürveyans programlarına katılımın artırılmasına kadar uzanmaktadır. Bu yöntem başlangıçta sergi domuzlarında kullanılmak üzere geliştirilmiş olsa da, virüs sürveyansı, ticari domuz çiftlikleri, tarımsal işler ve canlı hayvan pazarları için uygulanabilir.Başlamak için öncelikle 37 gram beyin kalp infüzyonu veya BHI tozunu 900 mililitre saflaştırılmış su içinde çözün. Tozu çözmek için solüsyonu 70 °C'de karıştırın, besiyerini sıvı döngüsünde 15 dakika boyunca tamamen otoklavlayın ve ardından soğumaya bırakın. Daha sonra, çeker ocak içerisinde, oda sıcaklığında 100 mililitre saflaştırı

nasal-wipes-for-influenza-a-virus-detection-and-isolation-from-swine

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu yöntem, yüksek hassasiyet enfekte olmuş fareler bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısında H1N1 tespiti için Kızılötesi boya temelli görüntüleme sisteminin kullanımı açıklanmaktadır. Bu metodoloji, bir 96 veya plaka 384-iyi, test malzemesi &lt;10 ul hacmi gerektirir ve birden fazla patojenlerin eşzamanlı tarama için bir potansiyele sahiptir.

Gribi için yüksek verimlilik Tespit Yöntemi

Kaynak: Lenhard, A. ve diğerleri. Streptococcus pneumoniae'nin viral eş-enfeksiyon sonrası kolonizerden patojene geçişi için fare modeli, yaşa bağlı hastalığı özetliyor. J. Vis. Exp. (2022)Bu video, grip virüsünün Streptococcus pneumoniae'nin kolonizatordan patojene geçişini tetiklediği bir fare ortak enfeksiyon modelini gösteriyor. Bakteriyel kolonizasyon, viral enfeksiyon ve hastalık ilerlemesiyle ilgili adımları özetler.

Viral Ortak Enfeksiyon Sonrası Streptococcus pneumoniae'nin Patojenik Geçişini İnceleyen Fare Modeli

Source: Wang, M., et al, Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates intranasal infection of a mouse with a pathogenic influenza virus to establish a respiratory tract infection. The procedure outlines the administration of the virus into the nasal cavity. The virus enters host cells, replicates, and activates the immune system.

Intranasal Infection of a Mouse with a Pathogenic Influenza Virus

Video, influenza virüsleri A ve B'yi ölçmek için bir testi göstermektedir. Bu test, influenzaya özgü primerler ile çentikli endonükleaz amplifikasyonunu ve moleküler işaret probları kullanılarak hedef tespitini kullanır.

İnfluenza A ve B Virüslerini Ölçmek için Moleküler Bazlı Bir Test

Biz moleküler temelli İnfluenza A, hızlı ve B tahlil açıklar. Grip deneyi moleküler işaret probları ile hedef tespiti ve ardından influenzaya spesifik primerler ile izotermal amplifikasyon kullanılarak 15 dakika içinde her bir hedef tespit eder. Grip A ve B tahlil kullanıcı dostu ve gerçekleştirmek için en az eller-zaman gerekli.

Hızlı moleküler algılama ve Nezle Virüsleri A ve B farklılaşması

Nano ölçekli PCR ile DNA ve RNA bazlı patojenlerin yüksek verimlilik testi bir sendromik köpek ve at solunum PCR panelini kullanarak tarif edilir.

Nano PCR ile Hayvan Örnekler Solunum Patojenler yüksek verimlilik Algılama

Bu çalışma, bir açıklar   görüntüleme bazlı mikro-nötralizasyon deneyi virüsler arasında antijenik ilişkileri analiz etmek. protokol düz yataklı tarayıcı kullanır ve titrasyon, titrasyon kantitatif, nötralizasyon ve nötralizasyon kantitatif olmak üzere dört adım vardır. Tahlil akımı dolaşan grip A (H1N1) pdm09, A (H3N2) ve B virüsleri ile iyi çalışır.

Bir Kantitatif Mikro-nötralizasyon Testi optimizasyonu

Grip A virüs (IAVs) önemli insan solunum patojenler vardır. İnsan fizyolojisi taklit hayvan modelleri IAVs patojenitesi anlamak ve preklinik roman aşı yaklaşımlar sınamasını gerçekleştirmek için gereklidir. Burada, biz IAV Patogenez, humoral yanıt ve enfeksiyon bir fare modeli kullanarak aşı etkinliğini değerlendirmek için teknikler açıklanmaktadır.

Grip A virüs enfeksiyonu bir fare modeli çalışmalarda

Mevcut protokol, murin nazal lavaj sıvısında (NLF) kan kontaminasyonunu önlemek için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, kan kontaminasyonu olmadan NLF toplanmasını sağladığından, immünolojik bileşenlerin ve çeşitli solunum yolu patojenlerinin daha doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar.

Kan Kirliliği Olmadan Murine Nazal Lavaj Sıvısı Toplama

Bu protokol, IAV'nin intranazal uygulaması ve fare akciğer hasarının aşağı akış analizi ve akciğer hücre tiplerinde ilişkili transkripsiyonel değişiklikler için talimatlar sağlar.

İnfluenza Enfeksiyonu Sonrası Displastik ve Fonksiyonel Akciğer Alveoler Onarımının Modellenmesi

Öğrenin, domuzlardan burun mendili ile influenza A virüsü izolasyonu ve algılama yöntemini. Bu düşük stresli teknik, veteriner virolojide etkili sürveyans ve dolaşan suşların incelenmesini sağlar.

Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil

Daha fazla video keşfet