Name: İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: Öğrenin, periton içi yumurtalık kanseri metastaz yükünü fare modelinde RFP etiketli hücrelerle görüntüleyip ölçmeyi. Otofloresansı ortadan kaldırarak tedavi etkinliğini izlemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri/Ulusal Kanser Enstitüsü tarafından MSS'ye RO1CA109545 ve RO1CA086984 araştırma hibeleri ve Leo ve Ann Albert Charitable Trust'tan (MSS'ye) bir ödülle desteklenmiştir.

Bütün in vitro çalışmalar, Notre Dame Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi Üniversitesi tarafından onaylanan ve dişi C57 / BL6J fareler kullanıldı. 1. Fare Yumurtalık Kanseri Hücre Kültürü <ol><li> şöyle ID8 murin yumurtalık kanseri hücre kültürü kullanım sağlar:% 4 fetal sığır serumu (FBS),% 1 Penisilin / Streptomisin, 5 ug / ml insülin, 5 mg / ml transferrin ile takviye edilmiş Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 1 L ve 5 ng / mL sodyum selenit. </li><li> RFP ve bir seçim işaretleyici (geni blasticidin) ifade ticari olarak temin lentiviral parçacıklar kullanılarak kırmızı flöresanlı proteinin (RFP) ifade etmek için ID8 fare yumurtalık kanseri hücreleri 13 transdüksiyonu. Yeşil floresan proteini, ancak daha zayıf bir flüoresans sinyali sağlanır unutmayın. <ol><li> Hemen önce transdüksiyon için, kültür hücreleri 50 -% 70 Final 1 ml polybrene (5 mg / ml içeren izdiham ve (penisilin / streptomisin olmadan) taze orta ekleyinkonsantrasyon). </li><li> Yavaşça pipet RFP-lentivirüs (20 ul) kabına damla damla ve 72 saat süreyle 37 o C&#39;de inkübe edin. Ortamı çıkarın ve 24 saat boyunca taze ortam ile inkübe edilir. Kültür ortamında (5 ug / ml) blastisidin eklenerek kalıt aktarımlı hücrelerin seçimi başlayın ve floresan mikroskobu (Şekil 1) kullanılarak, kırmızı hücreler için izler. </li></ol></li><li> Kültür bir doku kültürü çanak içine yaklaşık 10 6 hücre tohumlama ve hücre tek tabaka konfluent kadar bir ışık mikroskobu kullanarak günlük görselleştirerek ID8 ortamında RFP-etiketli hücreler. </li><li> Konfluent, tripsin (% 0.25, 3 dk) kullanarak hücrelerin hasat ve hücreler müstakil kadar 37 o C inkübatör şişeyi geri döndüğünüzde. </li><li> serum içeren kültür ortamı ID8 6 ml tripsin nötralize. yukarı pipet ve çanak alt karşı aşağı, sonra 15 ml konik tüp transfer. 2 dakika boyunca 1.200 rpm&#39;de santrifüj, ardından GL kullanılarak ortam aspireeşek pipet. </li><li> hafifçe sıcak PBS 6 ml yeniden süspanse yukarıda 1.5 gibi santrifüjleme ile fosfat tamponlu tuz (PBS) hücreleri yıkayın. 5 x 10 6 hücre / ml&#39;lik bir son konsantrasyona PBS içinde yeniden askıya. Enjeksiyona kadar ılık hücreleri (37 ° C) saklayın. </li></ol> 2. içi periton ID8 Hücrelerinin Enjeksiyon ve in vivo Imaging <ol><li> Intra-peritoneal (ip) enjeksiyon yoluyla 10.000.000 hücre toplam sıcak ID8-PBS çözeltisi 2 mL her fare enjekte edilir. Tümör hücreleri haftada canlı görüntüleme yaklaşık 10 hafta boyunca in vivo olarak büyümeye olanak sağlar. </li><li> Hemen (0.5 L / dk O 2 akışında% 2,5 debisi) isofluorane kullanarak her fare uyutmak sonra fareler tartmak ve bundan sonra enjeksiyon ve her hafta takip. Not: farelere olmayan tümör yükünün kantitatif ölçüm değil, çalışma boyunca bir fare, fiziksel ilerlemesi daha genel bir tedbir olarak, tartılmıştır. fareler tartmakts kendi önceki ağırlık değerleri ile karşılaştırıldı. <ol><li> Bir isofluorane odasında koyarak fareler anestezi. işlem boyunca% 2.5 debisi isofluorane maruz kalma burun-koni fare kafasını konumlandırarak tarama sırasında sabit anestezi koruyun. </li></ol></li><li> siyah saçlı floresan sinyal zayıflamasını neden olacağından, her fare gövde ve karın saç kaldırmak için tüy dökücü krem ​​kullanın. Fareler tüy dökücü krem ​​uygulamasından sonra ılık su ile yıkanmış ve RT kağıt havlu ile kurutulur. </li><li> anestezi ederken, küçük bir hayvan optik görüntüleme sistemi kullanılarak her bir farenin tüm vücudu tarar. Her bir zaman noktasında bir grupta tüm fareleri tarayın. Aşağıdaki iki adımlı protokolü (Şekil 2A) kullanın: <ol><li> 1. Adımda, floresan etiketli (RFP) tümör hücrelerini gözlemlemek 440 nm, 460 nm, 4 uyarma filtreler kullanılarak 5 görüntülerin toplam toplamak için çok bantlı satın yürütmek80 nm, 520 nm ve 540 nm ve 600 nm&#39;lik bir emisyon filtresi. 15 saniyelik bir standart pozlama, 2 x 2 binning, 160 mm FOV ve 1.1 f durağı: Aşağıdaki toplama parametrelerini kullanın. </li><li> 2. Adımda, bütün hayvan gözlemlemek açık uyarma filtresi (beyaz ışık), bir açık emisyon filtresi, 2 x 2 binning ile 0.2 sn standart pozlama ve 16 cm FOV kullanarak bir yansıma görüntü elde etmek. Not: Gerçek görüntüleme süresi ~ 1 dk. </li></ol></li></ol> 3. Fare Diseksiyon ve Image Acquisition <ol><li> Canlı görüntüleme (karın şişliği ile kanıtlandığı gibi) asitli geniş intra-peritoneal hastalık ya da hayvan sergi birikimi, kayıp veya vücut ağırlığının% 20&#39;den fazla, uyuşukluk ya da sıkıntı diğer belirtileri kazanç varlığını gösterdiğinde, CO 2 kullanarak her fare euthanize anestezi servikal dislokasyon. </li><li> sivri dissectio kullanarak, fare ventral orta hat boyunca öne deri kesmen makas, göğüs kafesinin alt uyluk üst. Sadece deri tabakasının (Şekil 2BI) kesmek için aşırı özen gösterin. Yavaşça periton duvar delmeyin için emin olmak, periton dokusu cilt ayırmak. </li><li> Derinin iki flep oluşturmak için göğüs kafesinin alt ve uyluk üst kısmında hem yanal kesilmiş sivri diseksiyon makas kullanılarak (Şekil 2B ii, iii). </li><li> Açık cilt flepleri ile ventral tarafta her fare (periton boşluğu aşağı bakacak) çekti yerleştirin ve küçük hayvan optik görüntüleme sistemi kullanılarak yerinde onun organları ile her fare tarama (Şekil 3A, B). <ol><li> 2.4.1.-2.4.2 tarif edildiği gibi aynı görüntü tedarik parametreleri kullanarak. </li></ol></li><li> karaciğer, omentum / pankreas, mide, diyafram, ince bağırsak, kalın bağırsak, sol ve sağ periton, yumurtalıklar, kidne içeren bireysel periton organları çıkartarak fare diseksiyon devam edinys, mezenter ve yağ yastığı. <ol><li> , Gözlemlemek numaralandırmak ve her organ üzerinde görünür tümör kaydedin. Her tümörün çapı ölçmek için bir kumpas kullanın. </li><li> Ortam olarak 2 ve 5 mm kadar büyük daha büyük 5 mm arasında, küçük bir çap olarak 2 mm&#39;den daha az tümör belirtin. </li></ol></li><li> Organ tarama şablonuna her organ için önceden belirlenmiş bir konumunu tanımlar (Şekil 4) üzerine organları yerleştirin. nemli organları tutmak için PBS kullanın. </li><li> Küçük hayvan optik görüntüleme sistemi (Şekil 3C, D) ile organların her sayfayı tarayın. <ol><li> Adım 2.4 açıklandığı gibi aynı görüntü elde etme parametrelerini kullanın. </li></ol></li><li> Taramadan sonra,% 10 formaldehit yer organları histoloji için sonraki işlem sağlamaktır. </li></ol> th Tümör Yükü 4. sayısallaştırılmasıe Floresan Görüntüleri <ol><li> Her bir çok bantlı taramada otomatik floresans miktarının azaltılması amacıyla, ilk küçük hayvan görüntüleme sistemi ile uygun yazılımı kullanarak dosyaları unmix. <ol><li> Vivo spektral dosyasında, Autofluor ardından: İlk RFP yükleyin Karışmamış Görüntüler penceresinde Vivo Kırmızı dosyasında ve Unmix seçin. </li></ol></li><li> 16 bit .tiff (ölçeklenmemiş) biçimi olarak .bip dosyaları aktarın. </li><li> (In situ organları ile ex vivo organ ve ardından tam fare gövdesini) ImageJ yazılımı kullanın. <ol><li> ImageJ organ tarama şablon dosyalarını 16 bit .tiff dosyalarını açmak için&gt; Dosya Aç kullanın. </li><li> Görüntü&gt; Ayarlama altında&gt; Parlaklık / Kontrast, Minimum değeri 0 görüntülenen ve Maksimum +35353 değer gösterilir ve daha sonra altında yer alan tercihGörüntü&gt; Arama Tabloları, Red Hot seçin. Not: Çeşitli hayvan modelleri, farklı parlaklık seviyeleri gerektirir, ancak belirli bir çalışma boyunca tutarlı parlaklık tutmak önemlidir. </li><li> Serbest Seçim aracını kullanarak, her organın etrafında faiz seçimi (ROI) serbest biçimli bir bölgesini çizmek ve her organın yüzey alanını hesaplamak için Ölçü aracını (CTRL + M) kullanın; Bir e-tablodaki her bir organın yüzey alanı kaydedin. </li><li> Her organın etrafında çizilen ROI ile, sağ ROI içinde tıklayın ve sadece organı dahil etmek için Çoğalt seçeneğini seçin. </li><li> Eşik&gt; Ayarla&gt; Görüntü altında, bireysel organa bakarken, onl seçmek için + 1200 Alt Eşik Düzeyi ve + 1700 Üst Eşik Seviyesi görüntünün eşiğini ayarlayın tercihy en parlak fluoresan bölgeler ve Karanlık Arka Plan seçmek için kontrol edin; Tamam seçeneğini seçin. Not: Daha önce parlak alanlar analiz aşaması için seçilen böylece yukarıda gösterildiği gibi görüntüler, ImageJ eşik sürgü elle manipülasyon gerektirebilir. Farklı hastalık modelleri farklı eşik kısıtlamaları gerektirir, ancak belirli bir çalışma boyunca tutarlı eşik seviyesini düşük tutmak için önemlidir. </li><li> Analiz altında&gt; değiştirmek Boyutu, Parçacıklar Analiz (piksel ^ 2) 10-Infinity, Show tercih: Anahat, sadece &quot;sonuçlarını görüntüle&quot; seçeneğini ve alanları ve bu aydınlık bölgelerin ham entegre yoğunluğu hem ölçmek için Tamam &#39;ı kontrol, sayılır tümörler. </li><li> Yüzey Alanı değerlerini ve görüntülenen her tümör seçimi Ham Entegre Yoğunluk kaydedin <strong&gt; Organ yüzey alanları içeren aynı e-tabloda Sonuçları tablo. </li><li> Analiz altında&gt; Araçlar&gt; Kalibrasyon Bar, organların görüntülere bir kalibrasyon ölçek çubuğu ekleyin. Not: Bu örnekte, bu Üst Hakkı, Siyah Dolgu Rengi, Beyaz Etiket Renk, 5&#39;e Etiketler sayısı, 0 Ondalık, 12 Yazı Boyutu ve Zoom Yer değiştirerek yapıldı 4.0 faktör ve Kalın Metin sağlayan. </li><li> Dosya altında&gt; Farklı Kaydet ... Bir .TIFF ve .jpeg olarak montaj kaydedin. </li><li> .jpeg Organların dosya ve sonra Ekle altında&gt; Metin Kutusunu açmak için&gt; Dosya Aç kullanın </strong&gt;, organların üç sıra her aşağıda bir metin kutusu oluşturarak, organ etiketleri ekleyin. </li><li> Fare sayısının sırasına ImageJ tam vücut taramalarının 16 bit tiff dosyaların her biri açmak için&gt; Dosya Aç kullanın. </li><li> Değeri 0 gösterilir ve Maksimum + 35353 değerini görüntülenen ve ardından Görüntü altında&gt; Arama Tabloları, Red Hot seçin Görüntü altında&gt;&gt; Parlaklık / Kontrast ayarlama Minimum Set seçin. </li><li> Dosya altında&gt; Farklı Kaydet ..., a. TIFF ve .jpeg olarak montaj kaydedin. </li></ol></li></ol> 5. Veri Analizi <ol><li> her bir farenin Her organ için sırasıyla tümörün Seçim alanları ve ham entegre yoğunlukları ekleyin ve her bir fare için toplam organı tümör alanı kaydedilir. </li><li> Kaydedilen alanı ve ham bütünleşik Normaleİlgili Organ yüzey alanı (Tablo 1) toplam tümör alanı ve toplam ham entegre yoğunluk değerleri bölerek her organın boyutu için ed yoğunluk değerleri. </li><li> Hesaplamak ve normalize tümör yüzey alanları ve normalize ham entegre yoğunluk değerleri, her iki ortalamasını arsa (Şekil 5a, b). </li><li> görsel metastatik lezyonlar her organın denetim sırasında çıplak gözle görülebilen tümörlerin sayarak elde edilen bu ortalama değerleri karşılaştırın. </li></ol>

<ol><li>American Cancer Society. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cancer.org/cancer/ovariancancer/overviewguide/ovarian-cancer-overview-key-statistics">http://www.cancer.org/cancer/ovariancancer/overviewguide/ovarian-cancer-overview-key-statistics</a> (2015).</li>
<li>Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer+development+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer development and metastasis.</a> American Journal of Pathology. 177 (3), 1053-1064 (2010).</li>
<li>Halkia, E., Spiliotis, J., Sugarbaker, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+peritoneal+metastases+from+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology+Research+and+Practice%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of peritoneal metastases from ovarian cancer.</a> Gastroenterology Research and Practice. 2012, 541842-541854 (2012).</li>
<li>Barbolina, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+ovarian+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of ovarian cancer metastasis.</a> Cancer Treatment and Research. 149, 319-334 (2009).</li>
<li>Lengyel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+ovarian+cancer+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Epithelial ovarian cancer experimental models.</a> Oncogene. 33 (28), 3619-3633 (2014).</li>
<li>Harter, P., duBois, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+surgery+in+ovarian+cancer+with+special+emphasis+on+cytoreductive+surgery+for+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">The role of surgery in ovarian cancer with special emphasis on cytoreductive surgery for recurrence.</a> Current Opinion in Oncology. 17 (5), 505-514 (2005).</li>
<li>Bristow, R. E., Puri, I., Chi, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoreductive+surgery+for+recurrent+ovarian+cancer%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Cytoreductive surgery for recurrent ovarian cancer: a meta-analysis.</a> Gynecologic Oncology. 112 (1), 265-274 (2009).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+metastatic+cancer+with+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of metastatic cancer with fluorescent proteins.</a> Cell Death and Differentiation. 9, 786-789 (2002).</li>
<li>Sweeney, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+kinetics+of+tumor-cell+clearance+in+living+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+USA%22%5BJournal%5D)">Visualizing the kinetics of tumor-cell clearance in living animals.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 96, 12044-12049 (1999).</li>
<li>Chishima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+invasion+and+micrometastasis+visualized+in+live+tissue+by+green+fluorescent+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer invasion and micrometastasis visualized in live tissue by green fluorescent protein expression.</a> Cancer Research. 57, 2042-2047 (1997).</li>
<li>Bouvet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Research. 62, 1534-1540 (2002).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multiples+Uses+of+Fluorescent+Proteins+to+Visualize+Cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%22%5BJournal%5D)">The Multiples Uses of Fluorescent Proteins to Visualize Cancer in vivo.</a> Nature Reviews. 5, 796-806 (2005).</li>
<li>Roby, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+syngeneic+mouse+model+for+events+related+to+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Development of a syngeneic mouse model for events related to ovarian cancer.</a> Carcinogenesis. 21 (4), 585-591 (2000).</li>
<li>Rampurwala, M., Ravoori, M. K., Wei, W., Johnson, V. E., Vikram, R., Kundra, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+quantification+of+intraperitoneal+tumors+by+in+vivo+computed+tomography+using+negative+contrast+enhancement+strategy+in+a+mouse+model+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">Visualization and quantification of intraperitoneal tumors by in vivo computed tomography using negative contrast enhancement strategy in a mouse model of ovarian cancer.</a> Translational Oncology. 2 (2), 96-106 (2009).</li>
<li>Kim, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+and+antivascular+effects+of+AVE8062+in+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Antitumor and antivascular effects of AVE8062 in ovarian carcinoma.</a> Cancer Research. 67, 9337-9345 (2007).</li>
<li>Picchio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+ovarian+carcinoma%3A+usefulness+of+%5B%2818%29F%5DFDG-PET+in+combination+with+CT+for+lesion+detection+after+primary+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Advanced ovarian carcinoma: usefulness of [(18)F]FDG-PET in combination with CT for lesion detection after primary treatment.</a> Quarterly Journal of Nuclear Medicine. 47, 77-84 (2003).</li>
</ol>

Bu makale Bruker BioSpin sponsorluğunda Multimodal Klinik Öncesi Görüntüleme üzerinde bir özel sayısında, bir parçasıdır.

bağışıklık yetersizliği olan farelerde yapılmalıdır insan yumurtalık kanser hücrelerinin kullanan çalışmaların tersine, protokol, yukarıda tarif edilen imünokompetan C57 / BL6 fareleri ve genetik olarak özdeş fare yumurtalık kanseri hücreleri kullanır. Bu tümör büyümesi ve metastazı bağışıklık infiltrasyonların potansiyel rolünün değerlendirilmesi sağlarken, karın yüzeyinde siyah saçlı varlığı görüntüleme az duyarlı hale getirir. tüy dökücü kullanımı görüntüleme öncesinde saç görüntü toplama artırır kaldırmak, ancak zam...

Epitelyal over kanseri (EOC) 2015 yılında ABD&#39;de tahminen 21.290 yeni tanı ve tahminen 14.180 ölüm 1 ile jinekolojik malignite gelen ölümlerin en sık nedenidir. Kadınların büyük çoğunluğu (&gt;% 75) geç evre hastalığı tanısı (evre III veya IV) yaygın-içi periton metastazı ve kötü prognoz ile karakterizedir. Birinci basamak kemoterapi sonrası periton boşluğuna Hastalık nüks da yaygındır ve mortalite 2,3 önemli bir nedenini oluşturmaktadır. EOC doğrudan komşu periton organların birincil tümörden hem de ayrışma ile uzantı veya tek hücre ya da çok hücreli agregatlar halinde primer tümör yüzeyinden hücre dökülmesi her ikisinin de dahil benzersiz bir mekanizma ile metastaz. Onlar dekolmanı kaynaklı apoptoz 4 direnmek burada Hücreler, periton boşluğuna dökülür. döken tümör hücreleri periton lenfatik drenajı ve t blok olarak periton asit birikimi, yaygınumors vasküler geçirgenliğini değiştirerek büyüme faktörlerini üretir. Onlar çapa ve birden çok yaygın ikincil lezyonlar 3,5 üretmek için çoğalırlar bunun üzerine döken tümör hücrelerinin bir kısmı, bağırsak, karaciğer, omentum ve mezenter dahil periton organ ve yapıların yüzeyine tutunur. Hematojen metastaz nadirdir. Böylece, klinik yönetimi yaygın (kadar küçük olursa olsun) tüm görünür tümör rezeksiyonu olarak tanımlanan &quot;Optimal bir sitoredüksiyon sonrası&quot; olmak üzere sitoredüktif cerrahi oluşur. Komple sitoredüksiyon genel sağkalım 6,7 belirgin bir artış ile ilişkilidir ve tanımlanması ve lezyonların çıkarılması &lt;0.5 cm meydan okuma ile ilişkilidir. Küçük hayvan modelleri prognostik biyolojik ve yeni kemoterapi veya kombine tedavi yaklaşımları test belirlenmesi yanı hastalığın ilerlemesi anlayışımızı geliştirmeye yumurtalık kanseri araştırmalarında yarar kanıtlanmıştır. birincil olarakyumurtalık kanseri insidansı ve metastaz yeri periton boşluğu, EOC metastaz ortotopik modelleri intraperitoneal hastalığın analizi ve karakterizasyonu dahil olduğunu. Görüntü tümör hücrelerine yeteneği son gelişmeler olmasına rağmen, hatta tek hücre düzeyinde, hala EOC metastatik tümör yükü miktarının önemli zorlukları da bulunmaktadır. Bu sorunlar nedeniyle sayısı, büyüklüğü ve metastatik lezyonların anatomik konuma ortaya çıkar. Ayrıca, normal konakçı hücrelerden ayırmak için etiket kanser hücreleri için bir ihtiyaç söz konusudur. Daha önceki çalışmalar, antikor bazlı etiketleme protokolleri ya da lusiferaz 8,9 tümör hücrelerinin transfeksiyonu kullanmışlardır. Kanser hücrelerinin direkt floresan etiketleme ilk olarak 1997 yılında 10 Chishima ve arkadaşları tarafından rapor edilmiştir. Floresan etiketleri kanser metastazı 11,12 izlemek için eksojen substratın ilave edilmesini gerektirebilir ve zarif tümör hücre özgüllük sağlamak, daha etkin bir araç temin yok </sus&gt;. Bu yazıda fare ID8 yumurtalık kanseri hücreleri 13 ve bağışıklık yetkili C57 / BL6 farelerinde kırmızı floresan proteini (RFP) oluşan bir singeneik ortotopik ksenograft modeli kullanılarak metastatik hastalık kantitatif analizi için bir optik görüntüleme yöntemi etiketli açıklanmaktadır. Göreceli tümör yükü ölçümü için yeni bir yöntem, doku otomatik floresans kaldırılması ile in vivo ve ex vivo görüntüleme birleştirerek göstermektedir. Bu yaklaşım yumurtalık kanseri organa özgü metastaz belirli genetik, epigenetik veya mikro-çevre değişiklik ve / veya tedavi yöntemlerinin etkisini değerlendirmek için tasarlanmış çalışmalarda potansiyel yarar vardır.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium</td><td>Corning</td><td>10-014-CM</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>penisilin / streptomisin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsülin-transferrin-sodyum selenit medya takviyesi</td><td>Sigma</td><td>I-1884</td><td></td></tr><tr><td>Bruker Xtreme küçük hayvan görüntüleme sistemi</td><td>Bruker Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bruker Multispektral yazılım</td><td>Bruker Corp</td><td></td><td></td></tr><tr><td>lentiviral parçacıklar ile Kırmızı floresan protein</td><td>GenTarget, Inc.</td>Hücre kültürü için <td>LVP023</td><td></td></tr><tr><td>tripsin</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CM</td><td></td></tr><tr><td>tüy dökücü krem (Nair Saç Çıkarıcı Losyon gibi)</td> <td>eczaneden satın alımlar&nbsp;</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı&nbsp;</td><td>http://imagej.nih.gov/ij/&nbsp;</td><td></td><td>ücretsiz indir</td></tr><tr><td>diseksiyon araçları (forseps)</td><td>Roboz Cerrahi Aleti</td><td>&nbsp; RS 5130</td><td></td></tr><tr><td>diseksiyon aletleri (Makas)</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS 5910</td><td></td></tr></tbody></table>

İçi periton yumurtalık kanseri metastaz kantitasyonu

Quantitation of Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metastasis

Epitelyal over kanseri (EOC), Amerika Birleşik Devletleri'nde jinekolojik maligniteden ölümlerin önde gelen nedenidir. Mortalite, metastaz zaten mevcut olduğunda, geç evre hastalığı olan kadınların% 75'inin tanısından kaynaklanmaktadır. EOC, yaygın ve yaygın olarak yayılmış intraperitoneal metastaz ile karakterizedir. Hücreler, periton boşluğunu kaplayan mezotelyumdaki ve omentumdaki primer tümör ankrajından dökülür ve genellikle peritoneal asit varlığında multifokal metastaz ile sonuçlanır. Laboratuvarımızdaki çalışmalar, EOC metastatik başarısını düzenleyen faktörlerin daha ayrıntılı bir şekilde anlaşılmasına yöneliktir. Bununla birlikte, metastatik tümör yükünün ölçülmesi, lezyonların periton boyunca büyük sayıda, küçük boyutta ve geniş dağılımı nedeniyle önemli bir teknik zorluk teşkil eder. Burada, in vivo multispektral görüntüleme ile birleştirilmiş kırmızı floresan proteini (RFP) ile etiketlenmiş hücreleri kullanarak EOC metastazı analizi için bir yöntem açıklıyoruz. RFP işaretli tümör hücrelerinin intraperitoneal enjeksiyonunu takiben, fareler kurban zamanına kadar haftalık olarak görüntülenir. Bu sırada, periton boşluğu cerrahi olarak açığa çıkarılır ve organlar yerinde görüntülenir. Diseke edilen organlar daha sonra etiketli şeffaf bir şablona yerleştirilir ve ex vivo olarak görüntülenir. Multispektral karıştırma işlemi kullanılarak görüntü işleme sırasında doku oto-floresansının çıkarılması, göreceli tümör yükünün doğru bir şekilde ölçülmesini sağlar. Bu yöntem, metastazı inhibe edebilecek ve böylece genel sağkalımı iyileştirebilecek bileşikleri değerlendirmek için terapötik çalışmalar da dahil olmak üzere çeşitli uygulamalarda faydalıdır.

yumurtalık kanseri, metastatik bir mekanizma çok küçük (&lt;2 mm) lezyonlar da dahil olmak üzere, farklı büyüklüklerde, çok sayıda lezyon arasında oluşan yüksek yaygın intra-peritoneal metastaz ile karakterize edilir. Bu nedenle, RFP etiketli tümör hücrelerinin kullanımı (Şekil 1) ve optik görüntüleme kılavuzu sayım ve lezyon boyutu ölçümü için alternatif bir yöntem sağlar. Zamanla tümör yükünün gelişmesi haftada asit potansiyel varlığı ölçmek için fare ve karın çevresi ...

Over kanseri metastazı, tümör yükünün doğru görsel kantitasyonunun zor olduğu çok sayıda yaygın intraperitoneal lezyon ile karakterizedir. Burada, kırmızı floresan protein (RFP) etiketli tümör hücreleri ve optik görüntüleme kullanarak metastatik tümör yükünün in situ ve ex vivo kantitasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır.

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...

Bu deneyin genel amacı, syngeneic ortotopik ksenogreft fare modelinde intra-peritoneal over kanseri metastazının göreceli tümör yükünü belirlemektir. Göreceli tümör yükünü görüntülemek ve nicelleştirmek için kullanılan bu yeni yöntem, over kanseri metastazının düzenlenmesine ilişkin temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, floresan spektrumların ayrıştırılmasıyla doku otofloresansının görüntülerden temizlenmesi ve böylece standardize edilmiş, göreceli tümör yükünün ölçülmesine olanak tanımasıdır.Bu teknik, terapötiklerin etkinliğinin izlenmesine yönelik çıkarımlarla birlikte, insan yumurtalık kanseri metastazı hakkında bilgiler sunmaktadır. Bu yöntemin görsel gösterimi kritiktir çünkü görüntülerden kantitatif veriler elde etmek için güçlü bir görüntüleme tekniğini analitik bir prosedürle birleştiriyoruz. Prosedürü bugün, Stack Lab laboratuvar Program Yöneticisi Yueying Liu gösterecek.10 haftalık tümör hücresi büyümesinin ardından, anestezi uygulanmış her farenin gövdesini tek tek küçük hayvan optik görüntüleme sistemine yerleştirin. Her zaman noktasında kohorttaki tüm fareleri tarayın. Floresanla işaretlenmiş tümör hücrelerini gözlemlemek için, to

quantitation-of-intra-peritoneal-ovarian-cancer-metastasis

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Burada anlatılan mezotel klirensi tayini floresan ile işaretlenmiş hücreler ve zaman atlamalı video mikroskopi görselleştirmek ve kantitatif yumurtalık kanseri çok hücreli sferoidler ve mezotel hücre tek katmanlarının etkileşimleri ölçmek için yararlanır. Bu test yumurtalık kanseri metastaz erken adımları modeller.

In vitro Mezotelyal Gümrükleme Assay o Yumurtalık Kanseri Metastaz Erken Adımlar modeller

Bu videoda, periton boşluğunun astarının in vitro üç boyutlu bir modelinin geliştirilmesini gösteriyoruz. Bu organotipik kültür, yumurtalık kanseri hücresi adezyonunu, invazyonunu ve proliferasyonunu araştırmaya yardımcı olabilir.

Periton Boşluğu Astarında Yumurtalık Kanseri Metastazının Modellenmesi: Periton Astarının İn Vitro 3D Modelini Oluşturmak İçin Bir Yöntem

Periton mezotel zarının içine yumurtalık kanseri hücre işgali zamanla dinamik bir süreçtir. Gerçek zamanlı analiz kullanarak, bir küremsi-mezotel hücresi eş-kültür modelinde, yumurtalık kanseri hücrelerinin invaziv kapasitesi metastatik işlemini düzenleyen faktörleri bakış açıları sağlayan, uzun süreler boyunca ölçülebilir.

Real Time Mezotelyal Hücrelerinin Yumurtalık Kanseri Sferoid Ek ve Invasion Değerlendirilmesi

Yumurtalık kanseri büyümesinin ve nüksünün tespitine, ölçülmesine ve izlenmesine olanak tanıyan non-invaziv bir hayvan görüntüleme platformunu tanımlıyoruz. Bu intraperitoneal ksenogreft modeli, yumurtalık kanserli hastaların klinik profilini taklit eder.

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Peritoneal yağ dokularının, özellikle omentumun yumurtalık kanseri kolonizasyonunu incelemek için hem in vivo hem de ex vivo yaklaşımları uygulayan bir protokolün ana hatlarını çiziyoruz. Ayrıca, peritoneal yağ metastazlarını teşvik eden ve sütlü lekeler olarak bilinen omentumdaki bağışıklık hücresi yapılarını ölçmek ve analiz etmek için bir protokol sunuyoruz.

Vivo ve Ex Vivo Periton yağ içinde Samanyolu Nokta Yapıların Yumurtalık Kanseri Metastatik Kolonizasyon Eğitim Yaklaşımlar içinde

Burada, yumurtalık kanseri hücresi adezyonunu, invazyonunu ve proliferasyonunu araştırmak için bir araç olarak, birincil insan mezotelyal hücreleri ve hücre dışı matris ile katmanlanmış fibroblastlardan oluşan periton boşluğunun astarının üç boyutlu bir in vitro modelini oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

İnsan periton boşluğuna bir Organotipik Kültür Yumurtalık Kanseri Yaygınlaştırılması Erken Adımlar Modelleme

over kanseri periton yayılması çok adımlı süreci açıklamak için, mevcut çalışma bu tümör hücreleri ile ortotopik aşılamadan yoluyla orijinal tümör gelişimi ve periton metastazı bir fare deneysel modeli sunar.

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Yumurtalık kanseri metastaz peritoneal kavite oluşturur. Burada, biz yapmak için bir iletişim kuralı mevcut ve kullanım folat reseptör yüzey gelişmiş rezonans yüksek özgüllük ile ratiometric görüntüleme ile bu lezyonlar ortaya Raman saçılması Nano sondaları hedef. Nano-sondalar intraperitoneally yaşayan fareler için yönetilen ve türetilmiş görüntüleri de Histoloji ile aralarındaki ilişkileri belirlemektir.

Yüzey gelişmiş rezonans Raman nanoprobe Ratiometry mikroskobik yumurtalık kanseri folat reseptör via algılamak için saçılma hedefleme

Bu protokol, kanser hücresi-omentum etkileşiminin üç boyutlu (3D) ex vivo modelinin kurulmasını açıklar. Model, yağ nişi içindeki pro-tümör mekanizmalarını aydınlatmak ve yeni tedavileri test etmek için bir platform sağlar.

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

Burada, intraperitoneal ve intrabursal tümör modellerini oluşturmak için adım adım bir protokol sunuyoruz; bu protokol yumurtalık kanseri kanserinin ilerlemesi, metasatsi ve terapötik yanıt incelenmesidir. Ayrıca, bu modellerde tümör ilerlemesini izlemek için lusiferaz bazlı, invaziv olmayan in vivo görüntülemenin nasıl kullanılacağını açıklıyoruz.

Metastatik Yumurtalık Kanseri ve Fare Terapötik Yanıtını İncelemek İçin Klinik Olarak İlgili Nakil Tümör Modelleri

Öğrenin, periton içi yumurtalık kanseri metastaz yükünü fare modelinde RFP etiketli hücrelerle görüntüleyip ölçmeyi. Otofloresansı ortadan kaldırarak tedavi etkinliğini izlemeye yardımcı olur.

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu

Daha fazla video keşfet