Name: Altın nanorods İçeren Hücresel Araçların Hazırlama ve foto akustik Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 46 s
Description: Keşfedin, altın nanorodlarla yüklenmiş makrofaj hücrelerini kullanarak tümörlere plazmonik parçacık teslimi için fotoakustik görüntüleme yöntemini. Bu protokol, kanser tanısında görüntüleme ajanlarının stabilitesini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen ERANET + Projeleri LUS BUBBLE ve BI-TRE çerçevesinde Regione Toscana ve Avrupa Topluluğu tarafından desteklenmiştir.

Not: Altın nanoçubuklar tüm konsantrasyonlar, nominal Au molarite cinsinden ifade edilmiştir. diğer eserlerle karşılaştırma için, 1 M Au kabaca bizim durumumuzda, 20 uM altın nanoçubuklar karşılık unutmayın. Katyonik altın nanorods hazırlanması 1. Not:.. Metodu ratto diğ 26 uyarınca Nikoobakht ve arkadaşları 25 tarafından ortaya uyarlanmış protokole göre, askorbik asit HAuCl 4 otokatalitik azaltılması ile setrimonyum bromür (CTAB) -kapaklı altın nanoçubuklar sentezi ile başlar. Daha sonra, bu altın nanorods polietilen glikol kombinasyonu ile, plazma membran daha fazla biyo-uyumluluk ve afinite elde etmek için modifiye edilmiş olan, 10, 11, 27, 28 iplik ve dörtlü amonyum bileşikleri, 22. <ol><li> Bir concentratio 24 mi CTAB-başlıklı altın nanorods saflaştırmakİki santrifüj devir (12.000 xg, 30 dakika) ve boşaltma ile 450 uM Au n. İlk hacmine ölü hacim oranı bu protokoldeki tüm santrifüj adımları için yaklaşık 1/200 veya daha düşük olduğundan emin olun. çamaşır çözeltisi olarak 500 uM, sulu CTAB kullanımı ve son olarak, 500 uM CTAB ve% 0.005 (h / h) polisorbat 20 ihtiva eden, pH 5 ve 6 ml 100 mM asetat tampon içine partiküller aktarırlar. </li><li> 30 ul 10 mM sulu a-metoksi-omega-merkapto-poli (etilen glikol) (MW ~ 5000) ekleyin ve 37 ° C sıcaklıkta 30 dakika boyunca tepkimeye bırakın. </li><li> Dimetil sülfoksit, N, N, N-trimetilamonyum bromür ve 37 ° C&#39;de 24 saat süre ile geri kalanı bırakın - 30 ul 100 mM (11 Mercaptoundecyl) ekleyin. </li><li> Daha sonra, dört adet santrifüj devir (12.000 xg, 30 dakika) ve boşaltma ile bu parçacıkları su içinde 18 mL% 0.005 (h / h) polisorbat 20 ilave edilmesi ve saflaştırılması. Yıkama solüsyonu olarak suda% 0.005 (h / h) polisorbat 20 kullanımı ve son olarak pH 2.4 ml steril PBS içine partikülleri transferi7.4. altın nihai nominal konsantrasyonu 4.5 mM&#39;dir. </li></ol> Altın nanorods ile Fare Makrofagların 2. Yükleme <ol><li> J774a.1 DMEM,% 10 fetal sığır serumu, 1 mM glutamin, 100 birim / ml penisilin ve 100 ug / ml streptomisin gibi kültür ortamı ile takviye edilmiş monosit / makrofajik hücre çizgisi kullanarak. Levha 5 x 10 5 60 mm çapında dört Petri çanağında hücreleri ve ayrılma sırasında alt konfluent edilecek şekilde bunları 24 saat boyunca büyümeye izin (adım 2.2). <ol><li> Protokol boyunca, standart kültür koşulları (37 ° C,% 5 CO2,% 95 hava ve% 100 görece nem) altında hücreleri korumak. hücreleri manipüle etmek için bir laminer akış kabini ve uygun kişisel koruyucu donanımları kullanın. </li></ol></li><li> 24 saat sonra, kitosan filmlerin içine gömülü katyonik altın nanoçubuklar hücreleri yük ve onları hazırlamak: <ol><li> partiküller hücreler tarafından alınır izin vermek üzere, 4.5 bir kısım ilaveHer bir Petri kabı içine PBS mM Au katyonik altın nanorods, 100 uM Au bir son konsantrasyon elde edecek şekilde. 24 saat inkübasyondan petri tabaklara bırakın. </li><li> Sonra, onların iyi koşullar ve yükleme onaylamak için bir optik mikroskop altında hücreleri gözlemlemek. Hücreler, normal morfoloji ve koyu hücre içi veziküller bir dizi sergilemesi gerekir. Aşağıdaki adımlardan (en az 2 x 10 6 hücre) için bir hücre, uygun bir miktarda elde etmek için, iki Petri tabaklarına gelenler birleştirme bir kazıyıcı hücreleri ayırın ve bir ortadan kaldırmak için bunların (120 xg, 6 dakika) santrifüj katyonik altın nanoçubuklar fazlalığı. Hücresel pelet neredeyse siyah bakmak gerekir. </li><li> 2 ml PBS içinde pelet askıya alma ve bir Bürker odasının kullanılmasıyla hücreleri sayın. Santrifüj 2 x 10 6 hücre (120 xg, 6 dakika) ve oda sıcaklığında on dakika süreyle PBS içinde formaldehid (w / v), 2 ml% 3.6 içindeki pelet tamir ihtiva eden bir süspansiyon. Son olarak, centrifugat bu pelet üç kez yıkayınİyon fiksatif çıkarmak için (120 xg, 6 dakika). yıkama çözeltisi olarak PBS kullanın. </li></ol></li></ol> Kitosan Films içine Makrofagların 3. yerleştirilmesinin Not: kitosan 26, 27, 28 kendine özgü özellikleri, 29 katyonik altın nanoçubuklar ile boyanmış makrofajlar içeren biomimetic hayaletleri üretmek için istismar edilmiştir. Örneğin agaroz gibi hidrojeller ile ilgili olarak, kitosan PA mikroskopi 6 için kritik olan daha kuvvetli ve daha ince olan filmler, sağlar. Bu fantomların imalat mi protokolleri 29, 30, aşağıda belirtilen 30 belirtilen bazı değişikliklerle, 31 uygun olarak gerçekleştirilir. <ol><li> Bir asidifiye (asetik asit ilave edilerek elde edilen pH değeri 4.5) ve yapışkan% 3 Hazırlama düşük molekül ağırlıklı çitosan (w / v) (ortalama MW 120 kDa) çözeltisi, iyice karıştırın ve40 ° C&#39;de 24 saat boyunca homojenize edilmiştir. </li><li> Daha sonra, çitosan solüsyonu 500 ul olan katyonik altın nanorods (2 x 10 6 hücre) içeren fare makrofajları karıştırın. </li><li> , ~ 50 mikron kalınlığında hayaletleri elde 1.91 cm2 polistiren kalıplara karışımından 250 mg dökün ve 24 saat süre ile bir azot akımı altında bırakmak için. Daha sonra, çapraz bağlama uyarmak için, 500 ul 1 M NaOH ile, bu örnekler tedavi ve ultra saf su ve 10 ml ile yıkayın. </li></ol> Foto akustik Dönüşüm stabilitesi 4. Test Not: PA dönüşüm stabilitesi ref 6&#39;da anlatılan ev yapımı kurulum PA deneyler vasıtasıyla incelenmiştir. <ol><li> plaka tabanından ~ 5 mm mesafe tutacak şekilde, bir Petri kutusu içine daldırılmış bir plastik tutucu kullanılması ile, örneğin DI su içinde makrofajlar içeren kitosan film askıya alınması. mikrometrik XY sahneye bu tabak koyduÖrnek pozisyonunu kontrol etmek için. </li><li> 2500 - 400 dalga boyu aralığında YAG lazer: Q-anahtarlı Nd üçüncü harmonik tarafından pompalanan bir optik parametrik osilatörden, örneğin altın nanoçubuklar (uzunlamasına plasmonik bant ile rezonans içinde ~ 5 NSEC darbe süresi ile lazer ışını Odak bir ~ 300 mikron nokta çapı film yüzeyine dik 5 nsaniye nm ve darbe süresi). <ol><li> Ayarlamak için lazer fluens lazer çıkış önünde bir zayıflatıcı yerleştirin ve akıcılık dalgalanmalarını bir enerji metre (örneğin, bir pyroelektrik dedektör) lazer ışınının bölümünü odaklanmak ve izlemek için bir ışın ayırıcı kullanabilirsiniz. Hizalama sırasında mJ / puls başına cm 2 1 ~ altında optik dozu koruyun. Lazer açık olduğunda uygun lazer güvenlik gözlük kullanın. </li></ol></li><li> film yüzeyinin kapalı Petri kabı ~ 2 mm içine ve mikrometrik çeviriler kullanarak kendi konumunu ayarlamak - bir ultrason transdüser (20 MHz 1 frekans aralığını) Dipve dönme aşamaları filmden yayılan PA sinyali maksimize etmek. </li><li> Örnek 6 zarar vermez bir prob fluens F LO belirleyin: <ol><li> 1 mJ / en az 500 atım için puls başına cm 2 civarında bir akıcılığa numunenin rastgele nokta ışın tedavisi. Her darbe, bir osiloskop ile enerji metre ultrason dönüştürücü ve lazer akıcılığa karşılık gelen PA sinyalini kazanır. F LO deneme olarak ortalama dozu adlandırın. </li><li> Darbe sayısının bir fonksiyonu olarak tepe-tepe genlik olarak PA sinyalin şiddetini hesaplayın. Lazer yoğunluk iniş-çıkışlarını dengelemek için amacıyla, K LO deneme kendi akıcılığa oranı için her bir PA sinyalinin genliğini normalleştirmek. nabız sayısının bir fonksiyonu olarak normalize PA yoğunluğunun eğilimi analiz ve zamanla istikrarı doğrulayın. </li><li> Kararsızlığı durumunda tekrar F LO düşük bir değere sahip 4.4.3 4.4.1 adımları <s&gt; deneme kadar. Stabilite kaybı ortaya kadar denge durumunda, yüksek ~% 10 F LO deneme bir değerle tekrarlayın. Istikrarı sağlayan F LO davasının ikinci en yüksek değer olarak prob akıcılık F LO ayarlayın. </li></ol></li><li> Bir şekillendirme eşik fluens ölçün: <ol><li> Numunenin başka bir rasgele nokta seçin ve F LO 500 atım üzerinde bir ortalama PA yoğunluğunu (I LO a) prob. </li><li> F LO daha yüksek bir nominal dozu ayarlamak ve 50 darbe teslim. F exc olarak ortalama dozu adlandırın. </li><li> Bir kez daha F LO 500 atım üzerinde bir ortalama PA yoğunluğunu (I LO b) prob. Oranı R = I LO b / I LO hesaplayın. birlik altında R değeri numunenin optik özelliklerinin geri dönüşü olmayan bir değişim kanıtlar verir. </li><li> filmi taşımak için mikrometrik XY sahne kullanın ve poin değiştirmekrastgele numune t. Tekrarlayın ve çevresinde birlik üstünde, altında R birkaç değerlerini almak üzere, F exc farklı değerlerle 4.5.4 için 4.5.1 adımları. 15 puan makul. </li><li> F exc bir fonksiyonu olarak arsa R ve R istatistiksel belirsizlik ötesinde birinden farklı başladığında değer olarak inci yeniden şekillendirilmesi eşik akıcılık F tespit. 6 </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ratto, F., Matteini, P., Centi, S., Rossi, F., Pini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanorods+as+new+nanochromophores+for+photothermal+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Gold nanorods as new nanochromophores for photothermal therapies.</a> J. Biophotonics. (1-2), 4-41 (2011).</li>
<li>Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+golden+age%3A+gold+nanoparticles+for+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">The golden age: gold nanoparticles for biomedicine.</a> Chem. Soc. Rev. 41, 2740-2779 (2012).</li>
<li>Hahn, M. A., Singh, A. K., Sharma, P., Brown, S. C., Moudgil, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+as+Contrast+Agents+for+in-Vivo+Bioimaging%3A+Current+Status+and+Future+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles as Contrast Agents for in-Vivo Bioimaging: Current Status and Future Perspectives.</a> Anal. Bioanal. Chem. 399 (1), 3-27 (2011).</li>
<li>Dreaden, E. C., Austin, L. A., Mackey, M. A., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+matters%3A+gold+nanoparticles+in+targeted+cancer+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Ther.+Deliv%22%5BJournal%5D)">Size matters: gold nanoparticles in targeted cancer drug delivery.</a> Ther. Deliv. 3 (4), 457-478 (2012).</li>
<li>Manohar, S., Ungureanu, C., Van Leeuwen, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanorods+as+molecular+contrast+agents+in+photoacoustic+imaging%3A+The+promises+and+the+caveats%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Gold nanorods as molecular contrast agents in photoacoustic imaging: The promises and the caveats.</a> Contrast Media Mol. Imaging. 6 (5), 389-400 (2011).</li>
<li>Cavigli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+Affects+the+Stability+of+the+Photoacoustic+Conversion+of+Gold+Nanorods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+C%22%5BJournal%5D)">Size Affects the Stability of the Photoacoustic Conversion of Gold Nanorods.</a> J. Phys. Chem. C. 118 (29), 16140-16146 (2014).</li>
<li>Chen, L. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+photoacoustic+stability+of+gold+nanorods+by+silica+matrix+confinement%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Enhanced photoacoustic stability of gold nanorods by silica matrix confinement.</a> J. Biomed. Opt. 15 (1), 016010(2010).</li>
<li>Ratto, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CW+laser-induced+photothermal+conversion+and+shape+transformation+of+gold+nanodogbones+in+hydrated+chitosan+films%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nanopart.+Res%22%5BJournal%5D)">CW laser-induced photothermal conversion and shape transformation of gold nanodogbones in hydrated chitosan films.</a> J. Nanopart. Res. 13, 4337-4348 (2011).</li>
<li>Mercatelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+readout+of+optically+encoded+gold+nanorods+using+an+ordinary+dark-field+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Quantitative readout of optically encoded gold nanorods using an ordinary dark-field microscope.</a> Nanoscale. 5 (20), 9645-9650 (2013).</li>
<li>Von Maltzahn, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computationally+guided+photothermal+tumor+therapy+using+long-circulating+gold+nanorod+antennas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Computationally guided photothermal tumor therapy using long-circulating gold nanorod antennas.</a> Cancer Res. 69 (9), 3892-3900 (2009).</li>
<li>Jokerst, J. V., Cole, A. J., Van De Sompel, D., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanorods+for+ovarian+cancer+detection+with+photoacoustic+imaging+and+resection+guidance+via+Raman+imaging+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Gold nanorods for ovarian cancer detection with photoacoustic imaging and resection guidance via Raman imaging in living mice.</a> ACS Nano. 6 (11), 10366-10377 (2012).</li>
<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reexamination+of+active+and+passive+tumor+targeting+by+using+rod-shaped+gold+nanocrystals+and+covalently+conjugated+peptide+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">A reexamination of active and passive tumor targeting by using rod-shaped gold nanocrystals and covalently conjugated peptide ligands.</a> ACS Nano. 4 (10), 5887-5896 (2010).</li>
<li>Alkilany, A. M., Thompson, L. B., Boulos, S. P., Sisco, P. N., Murphy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanorods%3A+Their+potential+for+photothermal+therapeutics+and+drug+delivery%2C+tempered+by+the+complexity+of+their+biological+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Gold nanorods: Their potential for photothermal therapeutics and drug delivery, tempered by the complexity of their biological interactions.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 64, 190-199 (2012).</li>
<li>Centi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+assessment+of+antibody-conjugated+gold+nanorods+for+systemic+injections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">In vitro assessment of antibody-conjugated gold nanorods for systemic injections.</a> J. Nanobiotechnology. 12, 55(2014).</li>
<li>Jain, P. K., Eustis, S., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmon+coupling+in+nanorod+assemblies%3A+Optical+absorption%2C+discrete+dipole+approximation+simulation%2C+and+exciton-coupling+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Plasmon coupling in nanorod assemblies: Optical absorption, discrete dipole approximation simulation, and exciton-coupling model.</a> J. Phys. Chem. B. 110 (37), 18243-18253 (2006).</li>
<li>Funston, A. M., Novo, C., Davis, T. J., Mulvaney, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmon+coupling+of+gold+nanorods+at+short+distances+and+in+different+geometries%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Plasmon coupling of gold nanorods at short distances and in different geometries.</a> Nano Lett. 9 (4), 1651-1658 (2009).</li>
<li>Mazzoni, M., Ratto, F., Fortunato, C., Centi, S., Tatini, F., Pini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+Decoupling+in+Aggregates+of+Silanized+Gold+Nanorods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+C%22%5BJournal%5D)">Partial Decoupling in Aggregates of Silanized Gold Nanorods.</a> J. Phys. Chem. C. 118 (34), 20018-20025 (2014).</li>
<li>Lapotko, D. O., Lukianova, E., Oraevsky, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+laser+nano-thermolysis+of+human+leukemia+cells+with+microbubbles+generated+around+clusters+of+gold+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Selective laser nano-thermolysis of human leukemia cells with microbubbles generated around clusters of gold nanoparticles.</a> Lasers Surg. Med. 38 (6), 631-642 (2006).</li>
<li>Choi, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+trojan+horse+for+delivery+of+therapeutic+nanoparticles+into+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">A cellular trojan horse for delivery of therapeutic nanoparticles into tumors.</a> Nano Letters. 7 (12), 3759-3765 (2007).</li>
<li>Dreaden, E. C., Mwakwari, S. C., La Austin,, Kieffer, M. J., Oyelere, A. K., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule-gold+nanorod+conjugates+selectively+target+and+induce+macrophage+cytotoxicity+towards+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Small molecule-gold nanorod conjugates selectively target and induce macrophage cytotoxicity towards breast cancer cells.</a> Small. 8 (18), 2819-2822 (2012).</li>
<li>Yang, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+phase-contrast+imaging+of+photothermal+treatment+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+an+in+vitro+study+of+macrophages+as+a+vector+for+the+delivery+of+gold+nanoshells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Real-time phase-contrast imaging of photothermal treatment of head and neck squamous cell carcinoma: an in vitro study of macrophages as a vector for the delivery of gold nanoshells.</a> J. Biomed. Opt. 17 (12), 128003(2012).</li>
<li>Vigderman, L., Manna, P., Zubarev, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Replacement+of+Cetyl+Trimethylammonium+Bromide+by+Cationic+Thiol+Ligands+on+the+Surface+of+Gold+Nanorods+and+Their+Extremely+Large+Uptake+by+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+%28English%29%22%5BJournal%5D)">Quantitative Replacement of Cetyl Trimethylammonium Bromide by Cationic Thiol Ligands on the Surface of Gold Nanorods and Their Extremely Large Uptake by Cancer Cells.</a> Angew. Chem. Int. Ed. (English). 51 (3), 636-641 (2012).</li>
<li>Richard, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-penetrating+peptides%3A+A+reevaluation+of+the+mechanism+of+cellular+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Cell-penetrating peptides: A reevaluation of the mechanism of cellular uptake.</a> J. Biol. Chem. 278 (1), 585-590 (2003).</li>
<li>Delehanty, J. B., Boeneman, K., Bradburne, C. E., Robertson, K., Bongard, J. E., Medintz, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptides+for+specific+intracellular+delivery+and+targeting+of+nanoparticles%3A+implications+for+developing+nanoparticle-mediated+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Ther.+Deliv%22%5BJournal%5D)">Peptides for specific intracellular delivery and targeting of nanoparticles: implications for developing nanoparticle-mediated drug delivery.</a> Ther. Deliv. 1, 411-433 (2010).</li>
<li>Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+growth+mechanism+of+gold+nanorods+%28NRs%29+using+seed-mediated+growth+method%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Mater%22%5BJournal%5D)">Preparation and growth mechanism of gold nanorods (NRs) using seed-mediated growth method.</a> Chem. Mater. 15 (10), 1957-1962 (2003).</li>
<li>Ratto, F., Matteini, P., Rossi, F., Pini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+and+shape+control+in+the+overgrowth+of+gold+nanorods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nanopart.+Res%22%5BJournal%5D)">Size and shape control in the overgrowth of gold nanorods.</a> J. Nanopart. Res. 12 (6), 2029-2036 (2009).</li>
<li>Niidome, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEG-modified+gold+nanorods+with+a+stealth+character+for+in+vivo+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">PEG-modified gold nanorods with a stealth character for in vivo applications.</a> J. Control. Release. 114 (3), 343-347 (2006).</li>
<li>Tatini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+dependent+biological+profiles+of+PEGylated+gold+nanorods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Size dependent biological profiles of PEGylated gold nanorods.</a> J. Mater. Chem. B. 2, 6072-6080 (2014).</li>
<li>Matteini, P., Ratto, F., Rossi, F., Centi, S., Dei, L., Pini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitosan+films+doped+with+gold+nanorods+as+laser-activatable+hybrid+bioadhesives%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Chitosan films doped with gold nanorods as laser-activatable hybrid bioadhesives.</a> Adv. Mater. 22 (38), 4313-4316 (2010).</li>
<li>Matteini, P., Ratto, F., Rossi, F., de Angelis, M., Cavigli, L., Pini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+nanocomposite+films+for+laser-activated+tissue+bonding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Hybrid nanocomposite films for laser-activated tissue bonding.</a> J. Biophotonics. 5 (11-12), 868-877 (2012).</li>
<li>Matteini, P., Tatini, F., Cavigli, L., Ottaviano, S., Ghini, G., Pini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graphene+as+a+photothermal+switch+for+controlled+drug+release%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Graphene as a photothermal switch for controlled drug release.</a> Nanoscale. 6, 7947-7953 (2014).</li>
<li>Ratto, F., Witort, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmonic+Particles+that+Hit+Hypoxic+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Funct.+Mater%22%5BJournal%5D)">Plasmonic Particles that Hit Hypoxic Cells.</a> Adv. Funct. Mater. 25 (2), 316-323 (2015).</li>
<li>Chithrani, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+uptake%2C+transport%2C+and+processing+of+gold+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Molec.+Membrane+Biol%22%5BJournal%5D)">Intracellular uptake, transport, and processing of gold nanostructures.</a> Molec. Membrane Biol. 27 (7), 299-311 (2010).</li>
<li>Mitchem, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+tumor-infiltrating+macrophages+decreases+tumor-initiating+cells%2C+relieves+immunosuppression%2C+and+improves+chemotherapeutic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting tumor-infiltrating macrophages decreases tumor-initiating cells, relieves immunosuppression, and improves chemotherapeutic responses.</a> Cancer Res. 73 (3), 1128-1141 (2013).</li>
<li>Mantovani, A., Allavena, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+of+anticancer+therapies+with+tumor-associated+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">The interaction of anticancer therapies with tumor-associated macrophages.</a> J. Exp. Med. 212 (4), 435-445 (2015).</li>
<li>Panni, R. Z., Linehan, D. C., DeNardo, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+tumor-infiltrating+macrophages+to+combat+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Targeting tumor-infiltrating macrophages to combat cancer.</a> Immunotherapy. 5 (10), 1075-1087 (2013).</li>
<li>Oh, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+uptake+and+fate+of+PEGylated+gold+nanoparticles+is+dependent+on+both+cell-penetration+peptides+and+particle+size%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Cellular uptake and fate of PEGylated gold nanoparticles is dependent on both cell-penetration peptides and particle size.</a> ACS Nano. 5 (8), 6434-6448 (2011).</li>
<li>Yuan, H., Fales, A. M., Vo-Dinh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TAT+peptide-functionalized+gold+nanostars%3A+Enhanced+intracellular+delivery+and+efficient+NIR+photothermal+therapy+using+ultralow+irradiance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">TAT peptide-functionalized gold nanostars: Enhanced intracellular delivery and efficient NIR photothermal therapy using ultralow irradiance.</a> J. Am. Chem. Soc. 134 (28), 11358-11361 (2012).</li>
<li>Ladest, S., Fales, A. M., Domard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-membrane+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Multi-membrane hydrogels.</a> Nature. 452, 76-79 (2008).</li>
<li>Matteini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photothermally+activated+hybrid+films+for+quantitative+confined+release+of+chemical+species%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+%28English%29%22%5BJournal%5D)">Photothermally activated hybrid films for quantitative confined release of chemical species.</a> Angew. Chem. Int. Ed. (English). 52, 5956-5960 (2013).</li>
<li>Khor, E., Lim, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantable+applications+of+chitin+and+chitosan%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Implantable applications of chitin and chitosan.</a> Biomaterials. 24 (13), 2339-2349 (2003).</li>
<li>Kennedy, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+enhance+gold+nanoparticle+delivery+to+tumors+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Res.+Lett%22%5BJournal%5D)">T cells enhance gold nanoparticle delivery to tumors in vivo.</a> Nanoscale Res. Lett. 6 (1), 283(2011).</li>
<li>Pissuwan, D., Valenzuela, S. M., Killingsworth, M. C., Xu, X., Cortie, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+destruction+of+murine+macrophage+cells+with+bioconjugated+gold+nanorods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nanopart.+Res%22%5BJournal%5D)">Targeted destruction of murine macrophage cells with bioconjugated gold nanorods.</a> J. Nanopart. Res. 9 (6), 1109-1124 (2007).</li>
<li>Jokerst, J. V., Thangaraj, M., Kempen, P. J., Sinclair, R., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoacoustic+imaging+of+mesenchymal+stem+cells+in+living+mice+via+silica-coated+gold+nanorods%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Photoacoustic imaging of mesenchymal stem cells in living mice via silica-coated gold nanorods.</a> ACS Nano. 6 (7), 5920-5930 (2012).</li>
<li>Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanorods+coated+with+multilayer+polyelectrolyte+as+contrast+agents+for+multimodal+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+C%22%5BJournal%5D)">Gold nanorods coated with multilayer polyelectrolyte as contrast agents for multimodal imaging.</a> J. Phys. Chem. C. 111 (34), 12552-12557 (2007).</li>
<li>Esposito, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((et+al.+In+vivo+laser+assisted+microvascular+repair+and+end-to-end+anastomosis+by+means+of+indocyanine+green-infused+chitosan+patches%3A+A+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">et al. In vivo laser assisted microvascular repair and end-to-end anastomosis by means of indocyanine green-infused chitosan patches: A pilot study.</a> Lasers Surg. Med. 45 (5), 318-325 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Tümör ilişkili makrofajlar hedef kavramı kanseri 34, 35, 36 mücadelede güçlü bir kavram olarak ortaya çıkmaktadır. Burada, bunun yerine kendi imha, bu hücreler kendi tropizm sömürü ile, bir tümör içine altın nanorods getirmek için hücresel araçlar olarak alınırlar. Bu perspektif parçacıkların düşünceli tasarım, hücreler ve karakterizasyonu onların entegrasyonunu gerektirir. Katyonik altın nanoçubuklar yüklü fare makrofaj fotostabilitesi bunların plasmonik birleştirm...

Geçtiğimiz on yıl içinde, bu tür altın nanoçubuklar, nanoshells ve nanocages gibi çeşitli plasmonik parçacıklar, biyomedikal optik 1, 2, 3, 4 uygulamaları için önemli bir ilgi görmüştür. Standart altın nanokürecikler uymayacak, bu yeni parçacıklar vücuda derin optik penetrasyon ve endojen bileşenler üzerinde 1 yüksek optik kontrast sağlar yakın kızılötesi (NIR) penceresinde yankı. Bu özellik, foto akustik (PA) görüntüleme ve kanser fototermal ablasyonu gibi yenilikçi uygulamalar için ilgi uyandırdı. Ancak, çeşitli konularda bu parçacıkların klinik nüfuz dizginlemek. Örneğin, optik aktivasyonu, 8 aşırı ısınma indükleme ve foto-5, 6, 7 sürücüler daha küresel profilleri karşı işlevsel şekilleri değiştirme eğilimi </sup&gt;, 9. Bilimsel tartışma hakim bir başka konu tümörlerinde sistemik teslim olduğunu. Özellikle, altın nanorods gelişmiş geçirgenliği ve tutma ve malign belirteçlerinin spesifik problar ile konjugasyon kolaylığı göstermek tümörleri yayılmak için ideal boyutları birleştirir. Bu nedenle, kan akışına direkt enjeksiyon için bunların hazırlanması uygun bir şema 10, 11, 12, 13 olarak görülmektedir. Partiküllerin en mononükleer fagosit sisteminin 10, 11, 12 tarafından yakalanan olma ile Bununla birlikte, bu yol, bir problem teşkil etmektedir. Buna ek olarak, başka bir sorun gövdesi 14 boyunca dolaşım sonra parçacıkların, optik ve biyokimyasal stabilitesidir. Parçacıklar kolloidal kararlılık ve agrega kaybetmek, onların plasmonik özellikleri ve ısı transferi dinamikleri plasmonik kavrama 15 muzdarip olabilir, </s&gt; 16, 17 ve yukarı 18 çapraz aşırı ısınma. Daha yakın zamanlarda, tümör ile ilişkili makrofaj tropizminin yararlanmaya kavramı akıllı alternatif 19, 20, 21 olarak ortaya çıkmıştır. Bu hücreler tespit etmek ve yüksek özgüllük ile tümörlerin yayılmak için doğuştan gelen bir yetenek tutun. Bu nedenle, bir perspektif, bir hastadan alınan bu hücreleri izole in vitro altın nanoçubuklar ile onlara yük ve daha sonra teslim sorumlu hücresel araçlar olarak kullanmak amacı ile, hastaya geri enjekte etmek olabilir. Diğer bir avantajı biyolojik arayüz in vitro inşa edilecek, çünkü parçacıkların optik ve biyokimyasal istikrar üzerinde daha fazla kontrol sahibi olacaktır. Yine, optik kontrast ajanları olarak bu hücresel araçların performansları kritik bir ihtiyaç analizi. Bu çalışmada, hazırlık ve cellul kritik sorunlar anlatılmaktadırkanser PA görüntüleme altın nanorods AR içeren araçlar. PEG&#39;lenmiş altın nanorods plazma membranları 23, 24 ile etkileşimi teşvik etmek için beklenen bir katyonik profilini elde etmek için, dördüncü derece amonyum bileşikleri 22 ile modifiye edilmiştir. Bu parçacıklar, umarım onların biyolojik fonksiyonları ile çok engel olmadan, en hücresel türlü verimli ve belirsiz alımını tabi. Murin makrofajlar kadar sıkı endositik veziküller içinde sınırlı hale hücre başına kadar 000, 200 gibi katyonik altın nanoçubuklar e yüklenir. Bu yapılandırma nedeniyle bu veziküller içinde plasmonik bağlantı ve çapraz aşırı ısınma tehdidi, endişe ortaya olmalıdır. Bu nedenle, makrofajlar parçacıkların PA dönüşüm stabilitesi en endositik vesiküller büyüme ortamından transfer muhafaza olduğunu doğrulamak için, biyolojik dokuların taklit biyopolimer hidrojeller gömülür. effective ölçüm kriterleri PA görüntüleme için acil ilgi koşullarında PA dönüşüm istikrarı ölçmek amacıyla dışarı işlenmiştir. Şekillendirme eşiği 10 Hz tipik tekrarlama oranı 50 lazer puls dizileri sonra optik instabilite ait başlangıç ​​ayarlanır. Biz bu sonuçları tümörlere plasmonik parçacıklar sunmak için yeni stratejilerin geliştirilmesi için ivme sağlayabilir eminiz.

<table><tbody><tr><td>Hekzadesiltrimetilamonyum bromür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6269</td><td>Altın nanoçubukları sentezlemek için</td></tr><tr><td>Altın (III) klorür trihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>520918</td><td>Altın nanoçubukları sentezlemek için</td></tr><tr><td>Gümüş nitrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6506</td><td>Altın nanoçubukları sentezlemek için</td></tr><tr><td>L-askorbik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5960</td><td>Altın nanoçubukları sentezlemek için</td></tr><tr><td>Sodyum borohidrür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>Altın nanotohumları sentezlemek için</td></tr><tr><td>MeO-PEG-SH</td><td>Iris Biotech</td><td>PEG1171</td><td>Altın nanoçubukları PEGilelate etmek için. Molekül ağırlığı yaklaşık 5.000 Da.</td></tr><tr><td>Asetik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320099</td><td>Altın nanoçubukları PEGile etmek ve kitosanı çözündürmek için</td></tr><tr><td>Sodyum asetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8750</td><td>Altın nanoçubukları</td></tr> <tr><td>(11-Merkaptoundesil) - N, N, N-trimetilamonyum bromür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>733305</td><td>Altın nanoçubukları kuaterner amonyum bileşikleri ile modifiye etmek için</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>276855</td><td>(11-merkaptoundesil)-N, N, N-trimetilamonyum bromür</td></tr><tr><td>Polisorbat 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2287'yi</td><td>çözündürmek için PEGile altın nanoçubukları santrifüjlemek için</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Lonza</td><td>BE17-516F</td><td>Hücrelerle inkübasyondan önce altın nanoçubukları askıya almak ve hücre peletlerini tedavi etmek</td></tr><tr><td>için J774a.1</td><td>ATCC</td><td>TIB-67</td><td>Monosit / makrofaj murin hücre hattı</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12-707F</td><td>Hücre kültürü ortamı</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza</td><td>DE14-801F</td><td>Hücre kültürü ortamına eklenecek</td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Lonza</td><td>BE17-605E</td><td>Hücre kültürü ortamına eklenecek</td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin</td><td>Lonza</td><td>DE17-602E</td><td>Hücre kültürü ortamına eklenecek</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>NEST</td><td>705001</td><td>Hücre kültürü çanak</td></tr><tr><td>Hücre sıyırıcı</td><td>EuroClone</td><td>ES7018</td><td>Hücreleri ayırmak için</td></tr><tr><td>Formaldehit</td><td>Fluka</td><td>47630</td><td>Hücreleri sabitlemek için</td></tr><tr><td>Kitosan , düşük moleküler ağırlıklı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>448869</td><td>%75-85 deasetillenmiş. Molekül ağırlığı yaklaşık 120.000 Da.</td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>306576</td><td>Kitosanı çözünmez hale getirmek ve hidrojel oluşturmak için</td></tr><tr><td>Polistiren hücre kültürü plakaları</td><td>NEST</td><td>702011</td><td>Kitosan hidrojelleri imal etmek için kalıp olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Q-anahtarlı Nd:YAG lazerin üçüncü harmoniği tarafından pompalanan optik parametrik osilatör</td><td>Continuum, Santa Clara, ABD</td><td>Fotoakustik testler için Sürelit OPO plus</td><td>optik uyarma kaynağı</td></tr><tr><td>Piroelektrik dedektör & nbsp;</td><td>Gentec, Quebec, Kanada</td><td>QE8SP</td><td>Fotoakustik testler için optik akıcılığı izlemek için</td></tr><tr><td>Önceden güçlendirilmiş iğne hidrofonu</td><td>Hassas Akustik, Dorset, Birleşik Krallık</td><td>1 mm sensör çapına ve 1-20 MHz frekans aralığına sahip model</td><td>Fotoakustik sinyalleri ölçmek için</td></tr></tbody></table>

altın nanorods İçeren hücresel araçların hazırlama ve foto akustik analizi

Preparation and Photoacoustic Analysis of Cellular Vehicles Containing Gold Nanorods

Altın nanorods, tümörlere eve yakın kızıl ötesi pencere, düşük sitotoksisite ve potansiyeline yönelik yoğun optik absorbans sayesinde bu tür fototermal ablasyon ve kanser foto akustik görüntüleme gibi biyomedikal uygulamalarda, bir dizi için caziptir. Ancak, tümörlere onların teslim hala bir sorun olmaya devam etmektedir. Yenilikçi bir yaklaşım, in vitro olarak, altın nanoçubuklar ile yüklenebilir tümörle ilişkili makrofaj tropizm yararlanılmasının oluşur. Burada, hazırlık ve altın nanorods içeren hücresel araçların foto akustik muayene açıklar. PEG&#39;lenmiş altın nanorods bir katyonik profilini elde etmek için, dördüncü derece amonyum bileşikleri ile modifiye edilir. Sıradan Petri tabaklarında sıçangil makrofaj ile temas, bu parçacıklar endositik vezikülleri içine büyük alımını uğradıkları bulunmuştur. Daha sonra, bu hücreler, doğrulamak için kullanılır biyopolimer hidrojeller, gömülü olduğu foto akustik dönüşüm stabilitesiparçacıkların hücre araç içine dahil edilmesi de muhafaza edilir. Biz bu sonuçları tümörlere plasmonik parçacıklar sunmak için yeni stratejilerin geliştirilmesi için yeni ilham sağlayabilir eminiz.

Burada, kanser PA görüntüleme için altın nanorods içeren hücresel araçların fizibilite protokolü tipik sonuçları ile birlikte gösterilmiştir. Şekil 1 &#39;de TEM resim 2. adımda parçacıkların ve TEM görüntüleme için hücrelerin hazırlanması başka 17 anlatılan sonra, adım 1 sonra parçacıkların ve hücresel araç normal görünümünü gösterir. Katyonik altın nanorods normal morfoloji korumak makrofajlarda b...

Kanserin fotoakustik görüntülemesi için altın nanoçubuklar içeren hücresel araçların hazırlanmasını gösteriyor ve fizibilitesini ele alıyoruz.

Altın nanorods İçeren Hücresel Araçların Hazırlama ve foto akustik Analizi

Gold nanorods are attractive for a range of biomedical applications, such as the photothermal ablation and the photoacoustic imaging of cancer, thanks to ...

Bu protokolün genel amacı, plazmonik partiküllerin tümörlere iletimi için altın nanorodlar içeren hücresel araçların yenilikçi bir strateji olarak kullanılmasıdır. Protokolümüz, eksojen kontrast ajanların kullanımıyla kanseri görüntülemek ve tedavi etmek için fotoakustik ve fototermal yaklaşımların geliştirilmesine yönelik temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntem, plazmonik partiküllerin tümörlere iletimi için tümörle ilişkili mikrofazların tropizmine dayanmaktadır.Buradaki fikir, bu hücreleri bir hastadan izole etmek, in vitro ortamda plazmonik parçacıklarla yüklemek ve ardından östrojen taşıyıcıları olarak kullanmak amacıyla tekrar konakçıya enjekte etmektir. Bu yaklaşımın avantajlarından biri, biyolojik arayüzleri tamamen in vitro ortamda oluşturulduğu için parçacıkların optik ve biyokimyasal stabilitesi üzerinde daha fazla kontrol sahibi olma imkanıdır. Başlangıç olarak, iki kez santrifüjleme, ardından süzme ve 500 µM sulu setrimonyum bromür ile yıkama işlemlerini kullanarak, 450 µM altın konsantrasyonuna sahip altı mililitre setrimonyum kaplı altın nanorodu saflaştırın.Ardından, altın partikül peletini içeren kaba, cetrimonyum bromür ve polisorbat 20 içeren 1,5 mililitre 100 milimolar asetat tamponu ekleyin. Sonra, suda çözünmüş 7,5 mikrolitre 10 milimolar alfa-Metoksi-omega-merkapto polietilen glikol ekleyin ve 37 °C'de 30 dakika boyunca reaksiyona bırakın. Ardından, dimetil sülfoksitte çözünmüş 7,5 mikrolitre 100 milimolar merkapto-undesil trimetil amonyum bromür ekleyin.Ardından, reaksiyonu 37 °C'de 24 saat boyunca dinlenmeye bırakın. 24 saat sonra, su içerisinde %0,005'lik 4,5 mL polisorbat 20 ekleyin. Şimdi, bu hafif polisorbat 20 çözeltisini kullanarak, partikülleri dört döngülük santrifüjleme ve dekantasyon ile saflaştırın.Son olarak, partikülleri 600 µL steril fosfat tamponlu saline aktarın. Altının nominal konsantrasyonu şu an 4.5 mM olmalıdır. Hücreleri hazırlamak için, iki adet 60 mm'lik tabağa, takviye edilmiş Dulbecco's Modified Eagle Medium içerisinde yarım milyon monosit makrofajik hücre ekleyin ve bunları 24 saat boyunca büyütün.24 saat sonra, hücre besiyerini, her bir Petri kabında 100 µM altın nihai konsantrasyonu sağlayacak şekilde hazırlanan katyonik altın nanorodlar ile desteklenmiş taze besiyeri ile değiştirin. Ardından inkübasyona 24 saat daha devam edin. Ertesi gün, hücreleri mikroskop altında kontrol edin.Hücreler normal morfolojiye ve çok sayıda koyu renkli hücre içi veziküle sahip olmalıdır. Hücrelerin durumu iyiyse, onları taze besiyeri ile yıkayın, bir sıyırıcı (scraper) kullanarak ayırın ve tek bir toplama kabında en az iki milyon hücre elde etmek için iki kaptaki hücreleri birleştirin. Şimdi, fazla katyonik altın nanorodları uzaklaştırmak için toplanan hücreleri 120 Gs'de 6 dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatantları atın. Hücre peletleri neredeyse siyah görünmelidir. Peletleri iki mililitre fosfat tamponlu salin içinde süspanse edin ve Neubauer kamarası kullanarak hücreleri sayın.Ardından, iki milyon hücre içeren süspansiyonları karıştırın ve 120 Gs hızında altı dakika boyunca santrifüjleyin. Peletleri iki mililitre %3,6 formaldehyde ve fosfat tamponlu salin içerisinde yeniden süspande edin ve hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika boyunca fiksasyon işlemine bırakın. Son olarak, üç kez fosfat tamponlu salin ile yıkayarak fiksatifi uzaklaştırın.Bu prosedüre başlamadan bir gün önce, %3 ağırlık/hacim oranında, düşük moleküler ağırlıklı, asitlendirilmiş 500 µL kitosan çözeltisi hazırlayın. Asetik asit ekleyerek pH değerini 4.5'e getirin. Çözeltinin tamamen karışması için 40 °C'de 24 saat boyunca homojenleşmeye bırakın.Ertesi gün, altın nanorodlarla hazırlanmış fare makrofajlarını, kitosan çözeltisinin tüm 500 microliters kısmıyla karıştırın. 50 micron kalınlığında fantomlar elde etmek için, karışımın 250 milligrams kısmını 1.9 square centimeter polistiren kalıplara doldurun. Numuneleri bir çeker ocak altında 24 saat boyunca dinlendirin.Ertesi gün, çapraz bağlanmayı tetiklemek amacıyla örnekleri 500 µL 1 M sulu sodyum hidroksit ile işleyin ve 10 mL ultra saf su ile durulayın. Bir optik parametrik osilatör, optik akıyı ayarlamak için bir atenüatör ve bir ultrason dönüştürücü içeren özelleştirilmiş bir fotoakustik mikroskop kullanarak fotoakustik dönüşümün stabilitesini analiz edin. İşleme, makrofajlar içeren kitosan filmi, bir su tankına daldırılmış plastik bir tutucu kullanılarak deiyonize su içerisinde süspanse edilerek başlanmalıdır.Numuneye zarar vermeyen ve yeterli sinyal-gürültü oranına sahip bir fotoakustik emisyon sağlayan bir prob akısı belirleyin. Bir deneme akısı ve veri toplama parametreleri ayarlayın. Lazerden gelen her bir darbe için, ultrason transduserinden karşılık gelen fotoakustik sinyali toplayın.Her bir darbe için fotoakustik yoğunluğun lazer akısına oranını hesaplayın. Bu oranın darbe sayısına bağlı değişim trendini analiz edin ve zaman içindeki stabilitesini doğrulayın. Kararsızlık durumunda, bu ölçümü daha düşük bir deneme akısı ile tekrarlayın.Stabilite durumunda, fotoakustik emisyonu uygun bir sinyal-gürültü oranı sergilediği sürece, deneme akısı bir prob akısı olarak kullanılabilir. Ardından, bir yeniden şekillenme eşik akısı ölçün. Numuneden rastgele bir nokta seçin, lazeri prob akısına ayarlayın ve 500 puls üzerinden ortalama bir fotoakustik yoğunluk, A, ölçün.Ardından, nominal fluensi prob fluensinin üzerine çıkarın ve 50 pals uygulayın. Bunların ortalama fluensini F uyarım olarak adlandırın. Lazeri prob fluensinde sıfırlayın ve 500 pals boyunca ortalama fotoakustik şiddet B'yi alarak ölçümü tekrarlayın.Şimdi, B'nin A'ya oranını (R) hesaplayın. Bir'in altındaki bir R değeri, numunenin optik özelliklerinde geri dönüşümsüz bir değişikliğin meydana geldiğini gösterir. Ardından, numunenin ölçüm noktasını rastgele değiştirmek için mikrometrik sahneyi kullanarak filmi hareket ettirin. Daha sonra, bir civarında ve altında birkaç R değeri elde etmek için farklı F uyarım değerleri için R ölçümünü tekrarlayın.Yaklaşık 15 R noktası, makul bir veri koleksiyonudur. Ardından, R'yi F eksitasyonunun bir fonksiyonu olarak grafiğe dökün ve yeniden şekillenme eşiğini, R'nin belirsizlik olmaksızın birlikten ayrıldığı fluans olarak tanımlayın. Tipik olarak, katyonik altın nanorodlar, normal morfolojilerini koruyan makrofajlarda yoğun bir birikime uğrarlar.Partiküllerin dar endositik veziküller içine hapsedildiği görülmüştür. Sürecin ilerleyen aşamalarında, kitosan hidrojel içine dahil edilmenin hücresel morfolojiyi etkilemediği görülmektedir. Mikrografla incelendiğinde, hücrelerin örnek boyunca iyi dağıldığı görülmektedir.Hücre içermeyen, altın nanoramitli kitosan film kontrolleri homojendir. Altın nanoramitlerin plazmonik bantları, hücresel taşıyıcıları içinde korunmuştur. Plazmonik etkileşim veya farklı boyut ve şekillere sahip partiküllerin farklı alınma oranları gibi etkiler, bu protokollerde önemli bir rol oynamamıştır.Veriler toplandıktan sonra, F uyarımıyla değişen R trendi, veriler ve F eşiğini belirlemek için gereken analiz hakkında bir fikir verir. Burada, F eşiğinin santimetrekare başına yaklaşık 11 millijoule olduğu bulunmuştur. Fotoakustik ölçümler, 500 darbe üzerinden 20'den büyük bir sinyal-gürültü oranı ile oldukça doğru sonuçlar vermiştir.Protokolümüz, partiküllerin tasarımı ve fotostabilitelerinin incelenmesi açısından mevcut yöntemlere göre yenilikçidir. Pegillenmiş altın nanorodların kuaterner amonyum katyonları ile modifikasyonu, kolloidal stabiliteyi korurken yüksek hücresel alım verimliliği sağlar. Yeniden şekillenme eşiğinin tanımlanmasıyla fotoakustik dönüşüm stabilitesinin ölçümü, kantitatif ve tekrarlanabilirdir.Bu partiküllerle fotoakustik görüntüleme için kontrast ajanlar olarak tasarlanmış olduğundan, fonksiyonel özelliklerini test etmek için bir fotoakustik prob idealdir. Plazmonik partikülleri taşıyan hücresel araçlar, fotoakustik görüntülemede kontrast ajanlar olarak görünürler. Fotostabiliteleri, serbest plazmonik partiküllerinkle aynıdır.Mevcut çalışmamızın odağı, özellikle canlılıkları ve kemotaktik aktivitelerine dikkat çekerek bu hücrelerin fizyolojisi üzerinedir.

preparation-photoacoustic-analysis-cellular-vehicles-containing-gold

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz yıldız biçimli altın Nanostars gümüş tohum aracılı büyüme yöntemi kullanılarak sentezlendi. Nanostars çapı 200 ila 300 nm arasında değişir ve ipuçları sayısı 7 ila 10 arasında değişmektedir. Nanopartiküller, yakın kızılötesi merkezli geniş bir yüzey plazmon rezonans modu var.

Gümüş Tohum aracılığı Büyüme Yöntemi ile Altın Nanostar Sentezi

Bu videoda, plazmonik altın nanoçubukların ilgilenilen belirli bir hücre hattının hücre zarı ile etkileşimini izlemek için tek parçacık izleme (SPT) analizi ile birleştirilmiş karanlık alan mikroskobu (DFM) tekniğini açıklıyoruz. Kombine DFM ve SPT analizi, nanoçubuk hareketinin hücre zarı boyunca yüksek uzay-zamansal çözünürlükle görselleştirilmesini sağlar.

Hücre Zarı Üzerindeki Nanoçubukların Difüzyon Dinamiğini Görselleştirmek için Darkfield Mikroskobu

Biz şablon baskı ve fotolitografi, hem de microfabricated desenleri kültür hücreleri yöntemleri ile micropattern nano altın ince filmler için teknikler hakkında rapor. Buna ek olarak, malzeme ve taramalı elektron ve floresan mikroskobu teknikleri kullanılarak kültürlenmiş hücrelerin morfolojisi karakterize etmek için görüntü analiz yöntemleri açıklanmaktadır.

Hücre-malzeme Etkileşim Araştırmalar Nanogözenekli Altın Patterns mikroimalat

Bu protokol, nöronal hücrelerde farklılaşmayı ve hücre içi kalsiyum aktivitesini uyarmak için altın nanoçubukların optik absorpsiyonu ile ilişkili geçici ısınmanın nasıl kullanılacağını ana hatlarıyla belirtir. Bu sonuçlar potansiyel olarak nöral protezlerde ve nörobilimdeki temel çalışmalarda yeni uygulamalar açmaktadır.

Altın Nöronal Hücrelerde optik Uyarım Nanorod destekli

Bu, sodyum tiyosiyanat (NaSCN) ile chloroauric asit indirgenmesi (HAuCl 4) üzerinden, altın nanopartiküllerinin oldukça dengeli bir oligomerik kümeleri üretilmesi için basit bir yöntem tarif eder. oligoclusters Dar bir büyüklük dağılımına sahip ve boyutları ve yüzey kat, geniş bir yelpazesi ile üretilebilir.

Ortam Koşullarında Altın Nanopartiküller Kararlı Oligomerik Kümeleri Boyut Kontrollü Sentezi için Basit Bir Yöntem

Bu protokol piyasada mevcut malzemeler ile foto-duyarlı lipozomlar entegre altın nanopartikülüne için basit bir hazırlık yöntem açıklanır. Aynı zamanda darbeli lazer tedavisi üzerine sentezlenen lipozom mikro-kabarcık kavitasyon sürecini ölçmek için nasıl gösterir.

Darbe Lazer Tahrik olma üzerine Altın Nanopartikül Entegre Fotoğraf duyarlı lipozomlar ve Bunların Mikro-kabarcık Kavitasyon Ölçülmesi Sentezi

Bu çalışma, indirgeyici ajan olarak hidrokinon kullanımına göre altın nanoçubuklar sentezi için bir protokol, artı boyutlarını ve en boy oranının kontrol edilmesi için farklı mekanizmaları tarif eder.

Altın nanorods hidrokinon Esaslı Sentezi

Poli etilen glikol kaplama yüzeyine tarafından functionalized Biyouyumlu 10 nm altın nano tanecikleri, sentezleme yöntemi açıklanmaktadır. Bu parçacıklar kullanılan vitro olabilir ve tedavi için Nano hücresel ve hücre dışı alanlarda teslim etmek için in vivo geleneksel nanopartikül boyutları ile erişim için zor.

Endotel hedefleme için Functionalized 10-nm polimer kaplı altın parçacıkları ve ilaç dağıtım sentezi

Plazmonik altın nanorods sıvılar içinde sıkışıp ve dairesel yayın polarize Optik cımbız kullanarak kHz frekanslarda döndürülmüş. Brown dinamiği Analizi ve hafif scatteringspectroscopy ilgili araçlar tanıtımı araştırma ve bilim çok sayıda alanlarda uygulama güçlü bir sistemi yol açar.

İnşaat ve ışık tahrik altın Nanorod Rotary Motor sistemi

İşlevselleştirilebilir, yakın kızılötesi yayan fotolüminesan altın nanokümelerin hazırlanması ve bunların hela hücrelerinin içinde akış sitometrisi ve konfokal lazer tarama mikroskopisi ile doğrudan saptanması için güvenilir ve kolay tekrarlanabilir bir yöntem tanımlanmıştır.

Biyolojik Uygulamalar için Yakın Kızılötesi Yayan Altın Nanokümelerin Sentezi

Burada, hücre zarındaki altın nanorodların (AuNR) dinamiklerini izlemek için geleneksel karanlık alan mikroskopisinin kullanımını gösteriyoruz. Tek AuNR'lerin konumu ve yönü ImageJ ve MATLAB kullanılarak algılanır ve AuNR'lerin difüzif durumları tek parçacık izleme analizi ile karakterize edilir.

Tek Nanopartikül Darkfield Mikroskopisi Kullanarak Hücre Zarında Altın Nanorodların Difüzyonel Dinamiklerini Görselleştirme

Keşfedin, altın nanorodlarla yüklenmiş makrofaj hücrelerini kullanarak tümörlere plazmonik parçacık teslimi için fotoakustik görüntüleme yöntemini. Bu protokol, kanser tanısında görüntüleme ajanlarının stabilitesini artırır.

Altın nanorods İçeren Hücresel Araçların Hazırlama ve foto akustik Analizi

Daha fazla video keşfet