Semiokimyasallar için yatak hataların Koku Nöron Cevapları Algılama Tek Sensillum Kaydı Kullanma

Tek sensillum kaydının genel amacı, anten koku alma duyusunun çeşitli koku maddelerine karşı nöronal tepkilerini araştırmaktır. Bu yöntem, böceğin çevrelerindeki kimyasal koku maddelerini tespit edip edemeyeceği ve kimyasal koku maddelerini nasıl işledikleri gibi kimyasal ekoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, fonksiyonun tek nöron aktivitesini yansıtmaya izin vermesidir.

Nöronların kimyasal koku maddelerine duyarlılığının daha hassas bir şekilde ölçülmesini sağlar. Bu tekniğin anlamı, böcek kontrolünde cezbedici veya kovucuların geliştirilmesine doğru genişledi. Çünkü bu teknik, böcek için biyolojik olarak önemli olan büyük miktarda kimyasal madde kullanılabilir.

Bu işleme yatak böceklerini buz üzerinde iki ila üç dakika uyuşturarak başlayın. Daha sonra böcekleri, antenleri ve gövdeyi bir mikroskop kapağına sabitleyin, çift taraflı bantla kaydırın ve bacakları ince bir makasla çıkarın. Bant üzerindeki anteni nazikçe ayarlamak için küçük bir pim kullanın.

Ardından, manipülasyonu kolaylaştırmak için kapak kızağını küçük bir diş mumu topuna karşı dinlendirin ve kayıt elektrodunu yerleştirmek için 90 derecelik bir açıya ayarlayın. Sabitlendikten sonra, tahtakurusunu stereo mikroskop altına yerleştirin. Işık kaynağını açın ve anten net bir şekilde sunulana kadar aydınlatma yoğunluğunu ayarlayın.

Ardından mikroskobu, yüksek bir büyütme oranıyla tahtakurusunun antenlerinin ikinci kamçısına odaklayın. Bu adımda, ön amplifikatörü, sinyal kaydı ve görselleştirme için bilgisayara bağlı olan bir sinyal toplama denetleyicisine bağlayın. Ardından, yazılımı açın ve menü çubuğundan kaydet'i tıklayın.

Ardından dalga sinyallerini kaydetmeye başlamak için dalgayı seçin. Ön amplifikatöre bağlı hoparlörü açın anten sensillumundan gelen nöronal yanıtların tonunu sunmak için. Şimdi referans elektrodu stabilize yatak böceğinin karnına yerleştirin.

Referans elektrodu tahtakurusunun karnına bağlandıktan sonra, kayıt elektrodunu tahtakurusunun antenlerinin arka ucuna doğru hareket ettirin. Kayıt elektrodu sağ antenin ucuyla temas ettiğinde, elektrodu düşük büyütme oranına getirin. Ardından, hem elektrot hem de anten sensillumu aynı düzlemde olana ve mikroskop altında net bir şekilde görünene kadar büyütmeyi kademeli olarak artırırken kayıt elektrodunu ayarlayın.

Bundan sonra, mikro manipülatörü kullanarak kayıt elektrodunu sensillumun şaftına yerleştirin. Arka plan gürültüsü çok yüksekse daha derine indirin. Kaydedilen sensillumdan net aksiyon potansiyelleri gözlemlendiğinde, bir mikro pipeti botanik uyaranla doldurun.

Uyaranın 10 mikrolitrelik bir alikotunu bir cam macun pipeti içindeki bir filtre kağıdı şeridine bırakmak için mikro pipeti kullanın. Elektrotların sensillum'a doğru ve doğrudan kaydedilmesi, deneyin başarısının anahtarıdır. Elektrotları biraz daha derine yerleştirdikten sonra arka plan gürültüsü kısmen azaltılabilir.

Ardından, yüklü pipeti uyaran akış tüpünün çıkışına bağlayın ve pipet ucunu tüpteki antene doğru yönlendirilmiş küçük deliğe yerleştirin. Tüm bağlantılar stabilize olduğunda, sürekli nemlendirilmiş hava akımına bir uyarı vermek için uyarı kontrol cihazının ayak pedalına basın ve kayda başlayın. Kayıt işlemi, stimülasyondan bir saniye önce başlayarak 10 saniye sürecektir.

Aksiyon potansiyellerini, biri stimülasyondan önce ve diğeri stimülasyondan sonra olmak üzere iki 500 milisaniyelik periyot boyunca çevrimdışı sayın. Başka bir uyaran sunmak için, test edilecek yeni bir pipeti %001 okaliptol ile etiketleyin. Üzerine küçük bir parça filtre kağıdı yerleştirmeden önce 10 mikrolitre uyaran uygulayın.

Ardından, uyaran cam pipette tamamen buharlaşana kadar iki ila beş dakika bekleyin. Pipeti uyaran akış tüpünün çıkışına takın. Ardından, pipet ucunu tüpün antene doğru yönlendirilmiş küçük deliğine yerleştirin.

Ayak pedalına basın ve 10 saniyelik kaydı başlatın. Bundan sonra, pipeti ayırın ve% 01 okaliptol içeren başka bir pipet hazırlayın. En bağımlı yanıtları gözlemlemek için anten sensillasında geri kalan tüm okaliptol dozlarını test edin.

Bu şekilde, sinyal izi, tek bir sensillum kaydında kontrol olarak kullanılan bir koku alma duyusunun çözücüye verdiği tipik nöral tepkiyi göstermektedir. Sinyal kaydı, 0,5 saniyelik şişirme uyaranından bir saniye önce başladı. Sinyal, uyaran puff'ı başlattıktan sonra 10 saniye boyunca sürekli olarak kaydedildi.

Bu sinyal izi, bir koku alma duyusunun botanik bir uyarana %10 pozitif betapynene karşı son derece güçlü nöral tepkisini gösterir. Uyaran nefesi koku alma duyusuna iletildikten sonra, bu duyu içindeki koku alma duyu nöronları yüksek frekansla uzun süreli bir zamansal dinamiğe ateşlenir. Çünkü bu prosedürde, böceklerin güçlü nöron tepkileri olan belirli kimyasallara davranışsal tepkileri nelerdir gibi ek soruları yanıtlamak için bir böceğin davranışının gerçekleştirilebileceği mesajı vardır.

Bu videoyu izledikten sonra, kimyasal uyarana böcek koku alma nöron tepkilerini nasıl kaydedeceğinizi daha iyi anlamış olmalısınız.