Name: Gen İfade Etkileyen Sinyal İletimi Pathways tanımak Tavuk Embriyo uzuvlar Geliştirme içine Boncuk eklenme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 48 s
Description: Öğrenin, tavuk embriyo uzuvlarında gen ifadesini etkileyen büyüme faktörleri ve inhibitörlerin etkilerini boncuk eklenme yöntemiyle nasıl değerlendireceğinizi. Bu teknik, gelişim biyolojisinde sinyal iletimi mekanizmalarını canlı ortamda doğrudan test etmenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen Nottingham Üniversitesi Erken Kariyer ödülü tarafından DS'ye verilen bir ödülle finanse edilmiştir. RM, Irak Eğitimi Geliştirme Yüksek Komitesi tarafından finanse edilmektedir.

Etik Beyanı: Bütün bu deneyler hayvan bakımı ve Nottingham Üniversitesi etik kurallara uyun. Tırnak için Heparin Boncuk 1. Hazırlık <ol><li> Kullanmadan önce PBS içinde iyice heparin boncuk yıkayın. Not: boncuk PBS içinde bir çamur olarak 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir. <ol><li> PBS, 1 ml damla bir 20 ul pipet ile stoktan bunları kaldırarak aşılama için boncuk seçin. Daha sonra 3 santimetrelik bir petri tabağına PBS 20 ul damla içine boncuk aktarmak için 2 ul ayarlanmış bir mikropipet kullanın. P2 pipet ile seçilen boncuklar transfer diseksiyon mikroskobu stereo kullanarak, boyutuna göre boncuk seçin ve; Bu yaklaşık 100 mikron çapında idealdir. </li></ol></li><li> Boncuk PBS çıkarın. 20 ul pipet ve ince bir saatçi pensesi ile kılcal hareket ile artık sıvı sıvının en çıkarın. Not: fiili büyüme yüzden mümkün olduğunca ortadan kaldırmak için önemlidirbu boncuklar ilave edildiğinde r seyreltilmez. </li><li> Boncuklar üzerine, doğrudan büyüme faktörü Pipet. FGF18 için PBS içinde% 0.1 BSA içinde 0.5 mg / ml&#39;de yeniden rekombinant FGF18 0.5 ul ekle. Buharlaşan sıvının önlemek için çanağın kenarları etrafında birkaç damla su koyun. </li><li> Oda sıcaklığında 1 saat için boncuklan inkübe edin. Pasteur pipeti ile çanak su damlalarını ve aşılama için hazır buz üzerine yerleştirin. </li><li> Onlara görselleştirmek yardımcı olmak için aşılama öncesi (saydam boncuk için) aktarım işlemlerinin% 2 fenol kırmızısı 4-5 boncuk Gerekirse. Embriyo transfer olmadan önce PBS içinde durulayın. </li></ol> Tırnak için AG 1-X2 Boncuk 2. Hazırlık <ol><li> 0,2 N formik asit ile Türevlendirilen boncuk Kullanımdan önce. <ol><li> Bu kullanım, 1.5 ml mikrosantrifüj tüp boncuk aktarmak için bir spatula yapmak için. 0,2 N formik asit 1 ml ilave edin ve 1 saat süre ile bir çalkalama platformu üzerinde yıkayın. </li><li> Sonra P1000 pipet ile formik asit çıkarın ve 1 ile değiştirinml su. 1 saat yıkayın ve formik asit kalan çıkarmak için altı kez tekrarlayın. </li><li> P1000 pipet ile kalan sıvıyı çıkarın ve 4 ° C&#39;de boncuk saklayın. Not: Bu aşamada bütün artık suyun ayrılması için gerekli değildir. </li></ol></li><li> 3 cm&#39;lik bir petri kabına küçük bir spatula kullanılarak stoktan yaklaşık 5-10 ul hacmi tanelerin küçük pelet çıkarın ve DMSO&#39;nun 1 ml ekleyin (ya da ilaç içinde çözünmekte çözücü hangisi geçerli ise). Not: Bu doğru boyutta olanlar seçmek için hangi birkaç yüz boncuk sağlamalıdır. </li><li> Sonra başka bir 3 santimetrelik bir petri tabağına bir çözücü 20 ul damla yaklaşık 100 um çapında boncuklar aktarmak için 2 ul ayarlanmış bir P2 pipet kullanın. </li><li> 20 ul pipet ve 2 ul pipet ile herhangi bir kalıntı çözücü ile çözücü çıkarın. İlacın 20 ul uygulanacak değiştirin. Not: tutarlılığı (ya da hiç çözücü kullanılır) DMSO içinde 100 uM bir konsantrasyonda ilaç çözünmesi için,Bazı küçük molekül inhibitörleri olarak -80 ° C de 20 ul ve deposuna kısım kararsızdır ve tekrarlanan donma-çözülme önlemek için en iyisidir. Gerekirse o boncuk iliklerine önce istenilen konsantrasyonda ilacın sulandırmak. Etkili konsantrasyon, her bir ilaç için ampirik olarak tespit edilmesi gerekebilir. </li><li> 1 saat süreyle inkübe edin. Bu moleküllerin çoğu ışığa duyarlı olarak ışıktan koruyun. </li><li> Suda çözünmüş% 2 fenol kırmızısı 20 ul içine 2 ul ayarlanmış bir p2 pipet ile aktarım işlemlerinin 4-5 boncuk aşılama önce. Boncuk görselleştirmek için bir stereo mikroskop kullanarak bu adımı gerçekleştirin. İnce saatçiler forseps ile tek bir boncuk veya bir tel döngü çıkarın ve embriyo aktarmadan önce PBS içinde yıkayın. Bu faaliyetin kaybına neden olabilir kullanımdan önce fazla 15 dakika 2% fenol kırmızısı boncuk bırakmayın. </li></ol> 3. Tungsten İğneleri hazırlanması <ol><li> 3-4 cm uzunlukta ince tungsten tel kesin. Ucuna tel tek parça takınBunsen beki bir cam Pasteur pipeti ve eritebilir pozisyonda sabitlemek için. Bunlar, kullanım sırasında zarar görmüş, yedek olmadığından emin olmak için 10 iğne kadar hazırlayın. </li><li> Bir blowtorch ateşe telin ucunu yerleştirin ve (2-3 dk civarında) tungsten beyaz parlıyor ve ucu keskin kadar orada tutun. Not: Kullanım sırasında iğne temizlenebilir ve gerektiğinde blowtorch yeniden bilenmiş. NOT: Bu iğneler boncuklar aktarmak için döngüler yapmak için kullanılabilir. Yavaşça tezgah iğne dokunmak ve bir döngü oluşturacak şekilde viraj olacak. </li></ol> Boncuk Greft 4. hazırlanması Embriyolar <ol><li> Istenen sahne (en uzuv tomurcuk manipülasyonları için 3-5 gün) ulaşıncaya kadar kör uç yukarı gelecek şekilde yumurta kuluçkaya yatmaktadır. Kabuğunu kırmak ve daha sonra kabuk kaldırmak ve embriyo maruz forseps kullanmak künt ucunda künt forseps musluk kullanma. Yumurta kabuğu zarı emin olun da kaldırılır. Not: PBS 1-2 ml yardımcı olmak için bir Pasteur pipeti ile eklenebilirBu zar sarısı yapışıyor eğer. Yavaşça, sarısı yüzeyine PBS pipetle sarısı zarar vermemeye özen forseps ile membran tutup, yavaşça yumurta çekin. </li><li> 10 ml şırınga ile yumurta ve 19 G iğne albümin 5 ml kadar kaldırın. Embriyo sağkalım oranları azaltabilir büyük hacimlerin çıkarılması gibi yumurta mühürlemek için kullanılan bant ile temas yapmaz embriyo sağlamak için gerekli olan tek kadar götür. </li><li> Embriyo 15 100 U penisilin içeren PBS ml ve 0.1 mg streptomisin / ml sanatçılar india mürekkep 5-6 damla görselleştirmek için. 0.5-1 enjekte ml doğrudan 1 ml şırınga ile embriyo ve 25 G iğne altında. </li><li> Dihidrat etmez embriyo sağlamak için yumurtanın içine% 1 fetal buzağı serumu ve 100 U penisilin ve 0.1 mg streptomisin / ml PBS 2-3 ml ekleyin. Bilenmiş saatçiler forseps kullanarak vitellin membran kaldırmak ve gelişmekte olan ekstremite tomurcukları üzerinde amniyon açın. Embriyo kurumaz emin olun veGerekirse, daha fazla PBS / FCS ekleyin. NOT: bacak tomurcukları açıkça embriyonun kanadında eşleştirilmiş çıkıntılar olarak görülebilir. Bu aşamalarda embriyo böyle sağ tarafı normal üst olduğunu dönecek. Sonuç olarak, doğru ayağının içine doğru geriye boncuk greft ve karşı, kontrol olarak bırakıldı olanları kullanmak için, normalde daha kolaydır. </li><li> Boncuk implante edilecek uzuv tomurcuk içine bir kesi yapmak için bir bilenmiş tungsten tel kullanın. Genç aşamalarında bu zor olmasına rağmen mümkün ekstremite tomurcuk aracılığıyla tüm yol kesme kaçının. NOT: Büyük embriyoların (HH evre 22 ve üzeri) yılında aşılama için ama uzuv kendisi küçük tomurcuk olarak bu daha zor genç aşamalarında bacak tomurcuk belirli bölgeleri seçmek mümkündür. O bacak tomurcuk, yani özellikle genç aşamalarında, boncuk proksimal ekstremite kalır aşılı boncuk geçmiş büyüyecek hatırlamak da önemlidir. </li><li> Ya ekstra ince wa kullanarak büyüme faktörü veya ilaç ya bir boncuk Pick uptchmakers forseps veya tungsten iğne yapılmış bir döngü. Boncuk DMSO veya fenol kırmızısı ya batırılmış edilmişse, embriyo başvurmadan önce PBS içinde yıkayın. Forseps / tel döngü ile embriyo boncuğu aktarın. Sonra kesi içine boncuk eklemek için bilenmiş tungsten tel kullanın. </li><li> Embriyo hidrate tutulmasını sağlamak yumurta PBS / FCS 1-2 ml ekleyin, ancak bu embriyolar zarar ve boncuk yerinden neden olabilir olarak embriyo kendisi doğrudan uygulamaktan kaçının. Bantla yumurta Seal ve inkübatör dönmek. </li></ol>

<ol><li>Davey, M. G., Tickle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chicken+as+a+model+for+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cytogenetic+Genome+Research%22%5BJournal%5D)">The chicken as a model for embryonic development.</a> Cytogenetic Genome Research. 117, 231-239 (2007).</li>
<li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nogent+Institute--50+years+of+embryology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Nogent Institute--50 years of embryology.</a> International Journal of Developmental Biology. 49, 85-103 (2005).</li>
<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+avian+embryo+as+a+model+to+study+the+development+of+the+neural+crest%3A+a+long+and+still+ongoing+story%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">The avian embryo as a model to study the development of the neural crest: a long and still ongoing story.</a> Mechanisms of Development. 121, 1089-1102 (2004).</li>
<li>Bell, E., Brickell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication-competent+retroviral+vectors+for+expressing+genes+in+avian+cells+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Replication-competent retroviral vectors for expressing genes in avian cells in vitro and in vivo.</a> Molecular Biotechnology. 7, 289-298 (1997).</li>
<li>Abu-Elmagd, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt%2FLef1+signaling+acts+via+Pitx2+to+regulate+somite+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Wnt/Lef1 signaling acts via Pitx2 to regulate somite myogenesis.</a> Developmental Biology. 337, 211-219 (2010).</li>
<li>Munsterberg, A. E., Lassar, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+signals+from+the+neural+tube%2C+floor+plate+and+notochord+induce+myogenic+bHLH+gene+expression+in+the+somite%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Combinatorial signals from the neural tube, floor plate and notochord induce myogenic bHLH gene expression in the somite.</a> Development. 121, 651-660 (1995).</li>
<li>McGrew, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+production+of+germline+transgenic+chickens+using+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Reports%22%5BJournal%5D)">Efficient production of germline transgenic chickens using lentiviral vectors.</a> EMBO Reports. 5, 728-733 (2004).</li>
<li>Valasek, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+investigations+into+the+development+of+the+pectoral+girdle%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular investigations into the development of the pectoral girdle.</a> Developmental Biology. 357, 108-116 (2011).</li>
<li>Tickle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+chicken+embryology+to+the+understanding+of+vertebrate+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">The contribution of chicken embryology to the understanding of vertebrate limb development.</a> Mechanisms of Development. 121, 1019-1029 (2004).</li>
<li>Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E., Tabin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+mediates+the+polarizing+activity+of+the+ZPA%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA.</a> Cell. 75, 1401-1416 (1993).</li>
<li>Tickle, C., Alberts, B., Wolpert, L., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+application+of+retinoic+acid+to+the+limb+bond+mimics+the+action+of+the+polarizing+region%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Local application of retinoic acid to the limb bond mimics the action of the polarizing region.</a> Nature. 296, 564-566 (1982).</li>
<li>Rosello-Diez, A., Torres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+patterning+in+limb+bud+transplants+is+induced+by+distalizing+activity+of+apical+ectodermal+ridge+signals+on+host+limb+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Regulative patterning in limb bud transplants is induced by distalizing activity of apical ectodermal ridge signals on host limb cells.</a> Developmental Dynamics. 240, 1203-1211 (2011).</li>
<li>Anakwe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signalling+regulates+myogenic+differentiation+in+the+developing+avian+wing%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Wnt signalling regulates myogenic differentiation in the developing avian wing.</a> Development. 130, 3503-3514 (2003).</li>
<li>Amthor, H., Christ, B., Weil, M., Patel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+timing+differentiation+during+limb+muscle+development%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">The importance of timing differentiation during limb muscle development.</a> Current Biology. 8, 642-652 (1998).</li>
<li>Brand-Saberi, B., Muller, T. S., Wilting, J., Christ, B., Birchmeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scatter+factor%2Fhepatocyte+growth+factor+%28SF%2FHGF%29+induces+emigration+of+myogenic+cells+at+interlimb+level+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Scatter factor/hepatocyte growth factor (SF/HGF) induces emigration of myogenic cells at interlimb level in vivo.</a> Developmental Biology. 179, 303-308 (1996).</li>
<li>Mok, G. F., Cardenas, R., Anderton, H., Campbell, K. H. S., Sweetman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+FGF18+and+retinoic+acid+regulate+differentiation+of+chick+embryo+limb+myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Interactions between FGF18 and retinoic acid regulate differentiation of chick embryo limb myoblasts.</a> Developmental Biology. 396, 214-223 (2014).</li>
<li>Abou-Elhamd, A., Cooper, O., Münsterberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Klhl31+is+associated+with+skeletal+myogenesis+and+its+expression+is+regulated+by+myogenic+signals+and+Myf-5%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Klhl31 is associated with skeletal myogenesis and its expression is regulated by myogenic signals and Myf-5.</a> Mechanisms of Development. , 126-852 (2009).</li>
<li>Schmidt, M., Tanaka, M., Munsterberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+%28beta%29-catenin+in+the+developing+chick+myotome+is+regulated+by+myogenic+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Expression of (beta)-catenin in the developing chick myotome is regulated by myogenic signals.</a> Development. 127, 4105-4113 (2000).</li>
<li>Stavridis, M. P., Lunn, J. S., Collins, B. J., Storey, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+discrete+period+of+FGF-induced+Erk1%2F2+signalling+is+required+for+vertebrate+neural+specification%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A discrete period of FGF-induced Erk1/2 signalling is required for vertebrate neural specification.</a> Development. 134, 2889-2894 (2007).</li>
<li>Martinez-Morales, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF+and+retinoic+acid+activity+gradients+control+the+timing+of+neural+crest+cell+emigration+in+the+trunk%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">FGF and retinoic acid activity gradients control the timing of neural crest cell emigration in the trunk.</a> Journal of Cell Biology. 194, 489-503 (2011).</li>
<li>Olivera-Martinez, I., Storey, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signals+provide+a+timing+mechanism+for+the+FGF-retinoid+differentiation+switch+during+vertebrate+body+axis+extension%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Wnt signals provide a timing mechanism for the FGF-retinoid differentiation switch during vertebrate body axis extension.</a> Development. 134, 2125-2135 (2007).</li>
<li>Logan, M., Simon, H. G., Tabin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+T-box+and+homeobox+transcription+factors+suggests+roles+in+controlling+chick+limb-type+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of T-box and homeobox transcription factors suggests roles in controlling chick limb-type identity.</a> Development. 125, 2825-2835 (1998).</li>
<li>Borycki, A. G., Mendham, L., Emerson, C. P. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+somite+patterning+by+Sonic+hedgehog+and+its+downstream+signal+response+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Control of somite patterning by Sonic hedgehog and its downstream signal response genes.</a> Development. 125, 777-790 (1998).</li>
<li>Sweetman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF-4+signaling+is+involved+in+mir-206+expression+in+developing+somites+of+chicken+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">FGF-4 signaling is involved in mir-206 expression in developing somites of chicken embryos.</a> Developmental Dynamics. 235, 2185-2191 (2006).</li>
<li>Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+for+chick+whole-embryo+culture+using+a+filter+paper+carrier%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier.</a> Developmental Dynamics. 220, 284-289 (2001).</li>
<li>Sweetman, D., Wagstaff, L., Cooper, O., Weijer, C., Münsterberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+migration+of+paraxial+and+lateral+plate+mesoderm+cells+emerging+from+the+late+primitive+streak+is+controlled+by+different+Wnt+signals%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The migration of paraxial and lateral plate mesoderm cells emerging from the late primitive streak is controlled by different Wnt signals.</a> BMC Developmental Biology. 8, 63(2008).</li>
<li>Scott, B. B., Lois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue-specific+transgenic+birds+with+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue-specific transgenic birds with lentiviral vectors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the U.S.A. 102, 16443-16447 (2005).</li>
<li>Seidl, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+quail+as+a+model+for+research+in+the+avian+nervous+system%3A+a+comparative+study+of+the+auditory+brainstem%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Transgenic quail as a model for research in the avian nervous system: a comparative study of the auditory brainstem.</a> Journal of Comparative Neurology. 521, 5-23 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Ovo dokuların geliştirilmesi için doğrudan uygulanabilir boncuk greft kullanımı, uygulandıkları hangi gelişim aşamasında ve pozlama süresi boyunca eşsiz kontrol vererek gelişim sırasında büyüme faktörü sinyalizasyon rolünü incelemek için güçlü bir araçtır. Molekülünün her türü için boncuk seçimi önemlidir. Her ampirik bu boncuklar üzerinde inhibitör etkinliğini test etmek için gerekli olmasına rağmen, burada anlatılan önleyicileri ve retinoik asit gibi küçük hidrofobik moleküller, genellikle...

Kuş embriyolar yıllardır 1 gelişim çalışma için güçlü bir araç sağladı. Bunların en yararlı özelliklerinden biri bunların manipüle edilmeleri nispeten kolay olmasıdır. Dış gelişimi, hücre kaderine 2,3 çalışmak için klasik bir bıldırcın piliç kimera sistemi olarak örnekler dahil olmak üzere çeşitli micromanipulations embriyo ulaşmak için yumurta açıp gerçekleştirmek mümkün kılar, geliştirme 4,5 sırasında belirli dokularda aşırı ekspresyona yönelik retrovirüslerin enjeksiyonu ve eksplant kültürü gelişimsel sinyal kaynaklarını 6 tanımlamak için. Daha yakın zamanlarda GFP ifade transgenik tavuk hattından greft ile etiketsiz bilgisayarlar arasında oluşturulan kimeralardır klasik aşılama ve genetik modifikasyon kombinasyonu gelişimi 7,8 dair önemli bilgiler sağlayabilir göstermiştir. Kuş embriyo manipüle edilebilir kolaylığı uzuv incelemek için o mükemmel bir model yapmıştırgelişimi 9. In vivo gelişmekte bacaklarda özgü büyüme faktörlerinin uygulanması bacak desenlendirme 10,11 değiştirebilir ve bu sürecin 12 içgörü sağlamaya devam faktörlerin belirlenmesinde etkili olmuştur. Bu yaklaşım aynı zamanda, kas gelişimini düzenleyen faktörleri incelemek için kullanılır olmuştur ve böyle Wnts 13, BMP 14 ve HGF 15 gibi sayısız sinyaller için roller ortaya çıkardı. Son zamanlarda bu teknik, bacak tomurcuk miyojenik gen ekspresyonunu kontrol sinyalleri araştırmak için kullanılmıştır ve FGF18 ve retinoik asit arasındaki etkileşimler MyoD ekspresyonu 16 zamanlamasını kontrol göstermiştir. Boncuklar üzerine yüklendi ve daha sonra belirlenen gelişim aşamalarında spesifik dokular doğrudan aşılanabilir büyüme faktörleri ve küçük moleküllerin bir kombinasyon kullanılarak gelişimi esnasında hemen hemen her zaman ve bölge müdahale imkanı verir. Bu inve için kullanılmıştırhücre gruplarının desenlendirme 17,18, nöral şartnamede 19, nöral krest göç 20 ve eksen uzantısı 21 dahil olmak üzere birçok süreçleri stigate. Burada tavuk bacaklarda gelişmekte olan ya da büyüme faktörleri ya da inhibitörlerin batırılmış boncuklar aşılama için bir yöntem tarif eder. Bu in situ hibridizasyon ile, kas spesifik gen ekspresyonunu analiz ederek Miyogenesis bu sinyallerin etkisini belirlemek amacıyla kullanılmıştır. Bu tür retinoik asit veya belirli bir sinyal yollarının küçük molekül inhibitörleri olarak küçük hidrofobik moleküller için büyüme faktörleri ya da AG 1-X2 boncuklar için kullanılan heparin batırılmış boncuklar, kullanılarak greft tarif eder. Bununla birlikte, diğer boncuklar da FGF&#39;ler 22 ve 23, her iki Shh teslim etmek için kullanılmıştır temin edilebilmektedir.

<table><tbody><tr><td>Heparin akrilik boncuklar</td><td>Sigma</td><td>H5263</td><td>Kullanılan akrilik-heparin boncuklar durdurulmuştur. Bununla birlikte, yedek bir ürün mevcuttur, Heparin agaroz boncukları, kedi no H6508. Bunlar şeffaftır, bu nedenle çalışmak daha zordur ancak AG 1-X2 boncuklar, AG 1-X2 boncuklar</td></tr> <tr><td></td><td>Bio-Rad</td><td>140-1231</td><td></td></tr>, <tr><td>Affi Gel mavi boncuklar</td><td>Bio-Rad</td><td>153-7301; 153-7302</td><td>Bu boncuklar, Shh ve FGF'ler dahil olmak üzere bir dizi büyüme faktörü ile kullanılmıştır ve heparin boncukları</td></tr><tr><td>FGF18</td>, <td>Peprotech</td><td>100-28'in</td> <td>yerini almak için kullanılabilir.PBS'de% 0/1 BSA ile yeniden süspanse edin, 0.5-1ul'lik tek kullanımlık alikotlar hazırlayın ve -80 ° C'de saklayın. Partiler ve tedarikçiler değişebilir, bu nedenle etkili bir doz belirlemek için farklı konsantrasyonlar test edilmelidir.</td></tr><tr><td>U0126</td><td>Hücre Sinyalizasyonu</td><td>9903</td><td>DMSO'da 20mM'ye kadar stok yapın ve -80 ° C'de tek kullanımlık alikotlarda saklayın. Işıktan koruyun.</td></tr><tr><td>BMS-493</td><td>Tocris Biosciences</td><td>3509</td><td>DMSO'da yeniden askıya alın ve -80 ° C'de tek kullanımlık alikotlarda saklayın. Işıktan koruyun.</td></tr><tr><td>Siyah Hint mürekkebi</td><td>Windsor ve Newton</td><td>5012572003384 (30 ml)</td><td>Bu ürüne alternatifler mevcut olsa da, bazı mürekkepler embriyolar için toksik olduğundan dikkatli olunmalıdır</td></tr><tr><td>Tungsten tel, 0,1 mm çap. %99,95</td> <td>Alfa Aesar</td><td>10404</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin</td><td>Sigma</td><td>P0781</td><td>PBS/mürekkep ve PBS/FCS'de 100X seyreltin</td></tr></tbody></table>

gen İfade etkileyen sinyal İletimi pathways tanımak tavuk embriyo uzuvlar geliştirme içine boncuk eklenme

Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression

Tavuk embriyo kullanarak doğrudan büyüme faktörleri ya da gen ekspresyonu ve sinyal transdüksiyon yollarının aktivasyonu ile ilgili sinyal yollarının spesifik inhibitörleri ya da etkilerini test etmek mümkündür. Bu teknik, belirli zamanlarda için kesin olarak tanımlanmış gelişim aşamalarında sinyal molekülleri teslim izin verir. Bu embriyolar, hasat edilmiştir ve gen ekspresyonu in situ melezleme ya da immün ile gözlemlenen sinyal transdüksiyon yollarının aktivasyonu, örneğin, incelenebilir sonra. U0126, bir MEK inhibitörü batırılmış bu FGF18 batırılmış bir video heparin boncuk veya AG 1-X2 boncuk, ovo ekstremite tomurcuk içine aşılı edilir. Bu FGF18 U0126 tarafından inhibe edilir MyoD ve ERK fosforilasyonu ve endojen ve FGF18 kaynaklı hem MyoD ekspresyonunu uyardığını göstermektedir. Bir retinoik asit antagonisti batırılmış Boncuk FGF18 tarafından prematüre MyoD indüksiyon potansiyalize edebilir. Bu yaklaşım bize olabilirFarklı büyüme faktörleri ve inhibitörleri ve geniş bir yelpazesi ile ed de gelişmekte olan embriyonun diğer dokularda uyarlanmıştır.

HH aşamada 21 MyoD boyama gelişmekte Somitlerin (Şekil 1A) miyotom gözüyle görülebilir, ancak bacak miyoblastlar geliştirilmesinde ifade değildir. Şekil 1B, bir FGF18 kordon greft, aşağıdaki MyoD 6 saat boyunca in situ hibridizasyon gösterir. Karşı bacak bir ifade yoktur ise MyoD boncuk yakın miyoblastların indüklenir. U0126 batırılmış bir boncuk, MEK, MyoD (Şekil 1C) bloklar FGF18 indüksiyon spesifik bir inhibitörü olan Co-aşılama. Benzer HH aşamada 21 bir U01...

Büyüme faktörlerine veya sinyal yollarının spesifik inhibitörlerine batırılmış boncukları gelişmekte olan embriyolara aşılayarak, etkilerini in vivo olarak doğrudan test etmek mümkündür. Bu protokolde, bu moleküllerin gen ekspresyonu ve sinyal iletimi üzerindeki etkilerini belirlemek için boncuklar uzuv tomurcuğuna aşılanır.

Gen İfade Etkileyen Sinyal İletimi Pathways tanımak Tavuk Embriyo uzuvlar Geliştirme içine Boncuk eklenme

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression ...

Bu prosedürün genel amacı, büyüme faktörlerinin ve inhibitörlerin, gelişmekte olan tavuk embriyosu uzuvlarının gen ekspresyonu üzerindeki etkilerinin nasıl belirleneceğini göstermektir. Bu yöntem, sinyal moleküllerinin in vivo ortamda hücrelerin büyümesini ve farklılaşmasını nasıl etkilediği gibi gelişim biyolojisindeki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, bu faktörlerin doğrudan embriyo üzerinde test edilmesi için bir yöntem sunmasıdır.Bu yöntem ekstremite gelişimi hakkında bilgi sağlayabilse de, sinir dokusu, somitler veya gastrulasyon gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Prosedürü, laboratuvarımdan lisansüstü öğrencisi Rebeea Mohammed tanıtacaktır. Başlamak için, orijinal stok çözeltiden bir mililitre boncuğu yeni bir tüpe aktarın.Boncukların çökmesini bekleyin, ardından sıvıyı uzaklaştırın ve yerine 1 mL PBS ekleyin. Bu adımı beş kez tekrarlayın ve yıkanmış boncukları PBS içinde bir süspansiyon halinde 4 °C'de saklayın. Greftleme için kullanılacak boncukları, yıkanmış stok çözeltiden 20 µL'lik bir pipet yardımıyla alarak 1 mL PBS içerisine aktararak seçin.Bir stereoskop kullanarak, çapı 100 mikron civarında olan boncuklar seçin. Seçilen boncukları, iki mikrolitre sıvı içerisinde, 20 mililitre PBS Next damlası içeren yeni bir Petri kabına aktarın ve boncukların üzerindeki PBS'yi uzaklaştırın. Önce 20 mikrolitrelik pipetle, ardından kalan sıvıyı ince bir saatçi pensi kullanarak kılcal hareketle uzaklaştırın.Büyüme faktörü boncuklara eklendiğinde seyrelmemesi için mümkün olduğunca çok sıvının uzaklaştırılması önemlidir. Büyüme faktörünü doğrudan boncukların üzerine pipetleyin. FGF18 için, %0,1 BSA içeren PBS içinde 0,5 mg/mL konsantrasyonda yeniden çözünmüş 0,5 µL rekombinant FGF18 ekleyin.Ardından, sıvının buharlaşmasını önlemek için kabın kenarlarına birkaç damla su damlatın. Hazır olduğunda, boncukları oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin. İnkübasyonun ardından, kabın içindeki su damlalarını bir Pasteur pipeti ile alın ve kabı buz üzerine yerleştirin.Boncukları türevlendirmek için öncelikle bir spatula yardımıyla boncukları 1,5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Ardından, bir mililitre 0,2 normal formik asit ekleyin ve boncukları asit içinde bir sallama platformunda bir saat boyunca inkübe edin. Sonrasında, boncukların çökmesini bekleyin, formik asidi uzaklaştırın ve yerine bir mililitre su ekleyin.Kalıntı formik asidi uzaklaştırmak için boncukları sallama platformunda bir saat boyunca yıkayın ve yıkama işlemini altı kez tekrarlayın. Son yıkamanın ardından kalan sıvıyı uzaklaştırın ve boncukları dört °C'de saklayın. Stoktan bir spatula yardımıyla yaklaşık 5 ila 10 µL hacminde küçük bir miktar boncuk alın ve boncukları 30 ml'lik bir Petri kabına yerleştirin.Ardından, bir mililitre DMSO ekleyin. Daha sonra, başka bir 30 mililitrelik Petri kabındaki 20 mikrolitrelik çözücü damlasına, çapı yaklaşık 100 mikron olan boncukları transfer etmek için iki mikrolitreye ayarlanmış bir P2 pipet kullanın. Çözücünün büyük kısmını 20 mikrolitrelik bir pipetle, kalan çözücüleri ise iki mikrolitrelik bir pipetle uzaklaştırın.Ardından, boncukların üzerini DMSO içinde çözülmüş, uygulanacak ilaçtan 20 µL ile kapatın. Boncukları ilaç çözeltisinde bir saat boyunca inkübe edin. Birçok ilaç molekülü ışığa duyarlı olduğundan, boncukları ışıktan koruyun.Boncukların görselleştirilmesine yardımcı olmak için, 2 µL sıvı içindeki dört ila beş boncuğu, suda çözünmüş %2 fenol kırmızısı içeren 20 µL çözeltiye aktarın. Hassas saatçi pensi ile tek bir boncuğu alın ve boncuğu PBS ile durulayın. Durulama işleminden önce boncukları 15 dakikadan fazla fenol kırmızısı çözeltisinde bırakmayın, çünkü bu durum aktivite kaybına neden olabilir.İnce tungsten teli üç ila dört santimetrelik parçalar halinde kesin. Ardından, tel parçalarından birini bir cam Pasteur pipetinin ucuna yerleştirin ve sabitlenmesi için Bunsen beki üzerinde eritin. Hasar görmeleri durumunda yedeklerin olması için 10 adete kadar iğne hazırlayın. Sonrasında, telin ucunu pürmüz alevine tutun ve tungsten beyaz renkte parlayıp uç sivrileşene kadar bekletin.Bu işlem yaklaşık iki ila üç dakika sürer. Mililitre başına 100 ünite Penisilin ve 0,1 miligram Streptomisin içeren 15 mililitre PBS'ye beş ila altı damla sanatçı tipi Hint mürekkebi ekleyin. Tavuk embriyolarını hazırlamak için, yumurtaları küt uçları yukarı gelecek şekilde, çoğu uzuv tomurcuğu manipülasyonu için istenen aşamaya, yani tipik olarak üç ila beş güne ulaşana kadar inkübe edin.İstenen zaman noktasına ulaşıldığında, yumurtanın küt ucuna vurarak kabuğu kırmak için küt uçlu pens kullanın. Ardından, kabuğu çıkarmak ve embriyoyu açığa çıkarmak için pensi kullanın. Yumurta hücre membranının da kaldırıldığından emin olun.Embriyoyu görselleştirmek için, bir mililitrelik şırınga ve 21 gauge iğne kullanarak, embriyonun altına birkaç damla ressam mürekkebi (India ink) ile desteklenmiş PBS enjekte edin. Ardından, embriyonun üzerindeki vitellin membran ince bir pensle uzaklaştırılabilir. Daha sonra, embriyonun susuz kalmamasını sağlamak için yumurtanın içine yüzde bir fetal calf serum, mililitre başına 100 ünite Penisilin ve mililitre başına 0,1 miligram Streptomisin içeren desteklenmiş PBS'den iki ila üç mililitre ekleyin.Sivrilmiş saatçi pensi kullanarak, gelişmekte olan ekstremite tomurcuklarının üzerindeki amniyonu açın. Bu evrelerde embriyo tipik olarak döner, böylece sağ taraf en üstte kalır. Gerektiğinde takviyeli PBS çözeltisi ekleyerek embryonun kurumasını önleyin.Embriyoyu çevreleyen amniyon, gelişmekte olan ekstremiteyi ortaya çıkarmak için ince bir tungsten iğne kullanılarak açılabilir. Ardından, boncuğun implante edileceği ekstremite tomurcuğuna insizyon yapmak için sivriltilmiş tungsten tel kullanın. Mümkün olduğunca ekstremite tomurcuğunu tamamen kesmekten kaçının.Genç evrelerde bu işlem zordur. Büyüme faktörü veya ilaç ile kaplanmış bir boncuğu, ekstra ince saatçi penseti kullanarak alın. Eğer boncuk DMSO veya fenol kırmızısına batırılmışsa, embriyoya uygulamadan önce PBS ile durulandığından emin olun.Boncuğu pens kullanarak embriyoya aktarın ve ardından, boncuğu insizyon bölgesine yerleştirmek için sivriltilmiş tungsten teli kullanın. Embriyonun nemli kalmasını sağlamak için yumurtaya ek olarak bir ila iki mililitre takviye edilmiş PBS solüsyonu ekleyin. Solüsyonu doğrudan embriyonun üzerine uygulamaktan kaçının; çünkü bu durum embriyoya zarar verebilir ve boncuğun yerinden çıkmasına neden olabilir.Ardından, yumurtayı mühürlemek için kullanılan bantla embriyonun temas etmeyeceğinden emin olacak kadar albümini çekmek için 19 gauge iğne takılmış on mililitrelik bir şırınga kullanın. İğneyi kabuğun iç yüzeyi boyunca kaydırarak sarıya zarar vermediğinden emin olun. Son olarak, yumurtayı bantla mühürleyin ve inkübatöre geri yerleştirin.FGF18'in ERK'yı fosforile etmek için MEK aracılığıyla etki edebildiğini doğrulamak amacıyla, embriyolar boncuk greftlemesinden bir saat sonra toplandı ve fosforile ERK varlığı için immün boyandı; bu durum sağdaki görüntüde greftlenen boncuğun etrafında görülebilmektedir. HH evre 21'de, gelişmekte olan ekstremite miyoblastlarında MyoD eksprese edilmez. Bununla birlikte, gelişmekte olan somitlerin miyotomunda boyama görülebilmektedir.FGF18 yüklü boncuk greftlemesinden altı saat sonra, boncuğa yakın miyoblastlarda MyoD indüksiyonu görülebilir. Kontralateral ekstremitede ise herhangi bir ekspresyon yoktur. Bu ekspresyon, U0126 gibi bir MEK inhibitörü ile kaplanmış bir boncuğun eş zamanlı greftlenmesiyle inhibe edilebilir.Benzer şekilde, HH Evre 21'de bir U0126 boncuğu greftlenmesi, işlem görmemiş karşıt uzuvla karşılaştırıldığında 24 saat sonra MyoD'nin endojen ekspresyonunu azaltır. Uzuv tomurcuklarında, HH evre 19'da FGF18, MyoD'yi indüklemez. Ancak, FGF18 ve bir retinoik asit antagonisti ile doyurulmuş boncukların birlikte greftlenmesi bu durumu aşabilir ve ektopik MyoD tespit edilir.Bu teknik düzgün bir şekilde uygulandığında, uzmanlaşıldıktan sonra üç ila dört dakika içinde tamamlanabilir. Bu tekniğin geliştirilmesi, gelişim biyolojisi alanındaki araştırmacıların embriyo gelişimindeki büyüme faktörleri sinyalizasyonunu incelemesine olanak sağlamıştır. Bu tekniği uygularken, embriyonun kurumasına izin verilmemesi gerektiğini hatırlamak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, büyüme faktörlerinin sinyal iletiminin gelişimi nasıl etkilediğini belirlemek amacıyla, gelişmekte olan embriyolara boncukların nasıl nakledileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

grafting-beads-into-developing-chicken-embryo-limbs-to-identify

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Çeşitli büyüme faktörleri ve proteinler, hücre gelişimi sırasında farklı hücre kaderi almaya ikna etmek için etkileşim. Burada E2.5 civciv embriyolarının boncuk koyarak gelişimin farklı proteinler arasındaki etkileşimleri adresine ovo hazırlanmasında kullanımı göstermektedir.

Erken Evre Tavuk Embriyolar Büyüme Faktörü-Kaplı Boncuk yerleştirme

Sinir indüksiyon beyin oluşumunda ilk adımdır. Hensen düğüm (düzenleyen), sinir kaderi kabul komşu doku talimatını hangi bir mekanizma, yani sinir sistemi yol açmaları. Bu video civciv embriyo sinir indüksiyonu için bir test göstermektedir.

Civciv Embriyo Sinir İndüksiyon için Testi

Civciv chorioallantoic membran (CAM), anjiyogenez ve tümörogenez çalışmak için eşsiz bir doğal bağışık yetmezliği olan, destekleyici bir kültür ortamı. Bu video makale piliç farklı adımları gösteriyor.

Civciv Ex ovo Kültür ve Ex ovo CAM Testi: Gerçekten Nasıl Çalışır?

Bu makale, kraniyofasiyal gelişimi sırasında sinyalizasyon ve yüzey sefalik ektoderm desenlendirme özellikleri test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği açıklar.

Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

Kaynak: Delalande, J., et.al. CivcivGFP nöral tüp greftleme ve karbosiyanin boya DiI enjeksiyonu kullanılarak tavuk embriyolarındaki nöral krest hücrelerinin ve kan damarlarının ikili olarak etiketlenmesi. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, GFP etiketli bir donör nöral tüpün, aşama uyumlu bir transgenik tavuk embriyosundan bir ila yedi somit seviyesinde bir alıcı embriyoya naklini ve ardından lipofilik bir floresan boya kullanılarak vasküler etiketlemeyi göstermektedir. Kombine yaklaşım, embriyonun...

Bir tavuk embriyosunda nöral ve vasküler ağların görselleştirilmesi

Gelişim sırasında tavuk embriyosunu görüntülemek ve ona erişmek zor olabilir. Basit, uygun maliyetli ve bir sınıfta veya araştırma ortamında kolayca kullanılabilecek bir ex ovo yöntemi geliştirdik. Bu yöntem, embriyonik gelişimin geç aşamalarına kadar embriyoya erişim sağlar (HH 40).

Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Burada damar içi DiI enjeksiyonu ile birlikte civcivGFP nöral tüp intraspsi greftleme kullanılarak nöral kret hücrelerinin ve kan damarlarının çift etiketlendiğini bildiriyoruz. Bu deneysel teknik, organogenez sırasında NCC türevi (enterik) sinir sisteminin ve vasküler sistemin gelişimini aynı anda görselleştirmemizi ve incelememizi sağlar.

ChickGFP Nöral Tüp Greftleme ve Karbosiyanine Boya DiI Enjeksiyonu Kullanılarak Tavuk Embriyoları İçinde Nöral Kret Hücrelerinin ve Kan Damarlarının Çift Etiketlenimi

Zebra balığı, genetik ve gelişimsel çalışmalar için mükemmel bir model sistemdir. Boncuk implantasyonu, lokal hücresel ortamlarda değişiklikler yaparak gelişimsel mekanizmaları sorgulamak için kullanılabilecek değerli bir doku manipülasyon tekniğidir. Bu protokol, zebra balığı embriyosunda mikroboncuk implantasyonunun nasıl gerçekleştirileceğini açıklar.

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

Ekstremite oluşumu için gerekli olan civciv embriyosunda ana gövde ekseni ve yan dokuları arasındaki indüksiyon olaylarını engellemek için geçirimsiz bariyerler kullanan protokoller anlatılmaktadır. Aday indüktif sinyallere batırılmış boncuklar, bariyer yerleşiminin etkisinin üstesinden gelmek için kullanılır ve gen ekspresyonunun analizi bunu doğrular.

Aday Faktörü Soaked Boncuk ile birlikte Geçirimsiz Engelleri Uygulama Chick Endüktif Sinyalleri Eğitim için

Rekombinant uzuvlar, hücre farklılaşma sürecini ve embriyonik sinyallerin etkisi altında kalıpların üretilmesini incelemeye izin veren güçlü bir deneysel modeldir. Bu protokol, farklı organizmalardan elde edilen diğer hücre tiplerine uyarlanabilen, tavuk ekstremite-mezodermal hücrelere sahip rekombinant uzuvlar üretmek için ayrıntılı bir yöntem sunar.

Morfogenez, Desenleme ve Hücre Farklılaşmasında Erken Adımları Anlamak için Tavuk Rekombinant Uzuvları Testi

Islatılmış boncuk testi, hücre farklılaşmasının ve morfogenezinin düzenlenmesini incelemek için herhangi bir gelişimsel zaman noktasında test reaktifinin hedeflenmiş olarak verilmesini içerir. Üç farklı tipte ıslatılmış boncuk hazırlamak ve bunları bir tavuk embriyosunun ara rakamlarına implante etmek için herhangi bir deneysel hayvan modeline uygulanabilir ayrıntılı bir protokol sunulmaktadır.

Islatılmış Boncuk Tahlili Kullanılarak Tavuk Embriyogenezi Sırasında Hücre Farklılaşması, Morfogenez ve Desenleme Analizi

Öğrenin, tavuk embriyo uzuvlarında gen ifadesini etkileyen büyüme faktörleri ve inhibitörlerin etkilerini boncuk eklenme yöntemiyle nasıl değerlendireceğinizi. Bu teknik, gelişim biyolojisinde sinyal iletimi mekanizmalarını canlı ortamda doğrudan test etmenizi sağlar.

Gen İfade Etkileyen Sinyal İletimi Pathways tanımak Tavuk Embriyo uzuvlar Geliştirme içine Boncuk eklenme

Daha fazla video keşfet